一种抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物及其应用的制作方法

1.本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种抗抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物及其应用。


背景技术：

2.幽门螺旋杆菌(hp)是世界上常见的病原菌之一，质子泵抑制剂、克拉霉素以及阿莫西林/硝基咪唑类药物是三联疗法标准的基本组成药物，在过去几十年里作为根除hp最常用的治疗方案，然而近年来传统的标准三联治疗方案对hp治疗根除率不断下降。抗生素在临床疾病治疗中的广泛及过度使用使hp的耐药率明显上升，以及在hp根除治疗过程中出现的恶心、呕吐、腹痛、腹胀、便秘等不适造成病人耐受性和依从性下降，这些因素成为hp根除失败的主要原因。
4.近年来，随着中医药抗菌实验及益生菌实验的开展，联合四联疗法治疗hp感染相关性疾病的实践基础上，人们发现了中医药和益生菌在防治hp感染中具有不可替代的优势，中医药和益生菌无副作用、不易产生耐药性且预后复发率低等优点，弥补了单纯应用三联或四联疗法所出现的问题。
5.专利cn 109609420 a公开了一种抗幽门螺旋杆菌的益生菌组合物。所述组合物包括植物乳杆菌菌粉体以及所述植物乳杆菌代谢物粉体为活性成分，所述植物乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：cctcc no：m2018268。该抗幽门螺旋杆菌的益生菌组合物，可抑制幽门螺旋杆菌，减少胃癌发生，但单菌使用效果不明显。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物及其应用。
7.一种抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物，由如下重量份数的原料制成：益生菌30-60份、槐米提取物3-5份、银耳多糖3-5份、卵磷脂3-8份、碳水化合物10-30份、粘合剂5-10份。
8.所述益生菌为约氏乳杆菌菌粉(cgmcc no.15447)和格式乳杆菌菌粉(cctcc no:m 2017162)，活菌数均为10
7-109cfu/g，质量比为(1-5)：1。
9.所述碳水化合物为淀粉、蔗糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖、麦芽三糖、糊精、环糊精中的一种或几种的组合。
10.所述粘合剂为海藻酸钠、果胶、壳聚糖、羧基甲基纤维素中的一种或几种的组合。
11.所述槐米提取物的制备方法为：将槐米晒干，磨成粉末，加4-8倍重量份数的70％的乙醇水溶液回流提取3次，合并滤液，蒸干制成。
12.所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物的制备方法，按照如下步骤进行：
13.(1)将所述益生菌、槐米提取物、银耳多糖混合均匀，再加入卵磷脂混合均匀；
14.(2)向混合物中添加加入粉末状的碳水化合物，混合均匀，再添加用水配制的粘合剂，混合，制成湿的颗粒物；所述水与粘合剂的用量质量比为(5-20)：1；
15.(3)将所得湿颗粒物干燥以使水分降至4％以下，即得。
16.一种固体饮料，包括所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物。
17.一种营养保健品，包括所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物以及用于给使用者提供营养的蛋白质源。
18.一种食品添加剂，包括所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物。
19.一种药品，包括所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物。
20.本发明的有益效果：本发明的益生菌组合物，采用约氏乳杆菌和格式乳杆菌作为主要活性成分，抗幽门螺旋杆菌效果显著，且协同增效；组分中槐米提取物和银耳多糖组合使用，能减轻胃部的炎症反应，且协同增效。
具体实施方式
21.为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
22.下述实施例中所用约氏乳杆菌菌粉购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：cgmcc no.15447；格式乳杆菌菌粉购买于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no:m 2017162。
23.实施例1
24.一种抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物，由如下重量份数的原料制成：益生菌50份、槐米提取物4份、银耳多糖4份、卵磷脂6份、蔗糖20份、海藻酸钠8份；所述益生菌为约氏乳杆菌菌粉和格式乳杆菌菌粉，活菌数均为108cfu/g，质量比为3：1。
25.所述槐米提取物的制备方法为：将槐米晒干，磨成粉末，加6倍重量份数的70％的乙醇水溶液回流提取3次，合并滤液，蒸干制成。
26.所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物的制备方法，按照如下步骤进行：
27.(1)将所述益生菌、槐米提取物、银耳多糖混合均匀，再加入卵磷脂混合均匀；
28.(2)向混合物中添加加入粉末状的碳水化合物，混合均匀，再添加用水配制的粘合剂，混合，制成湿的颗粒物；所述水与粘合剂的用量质量比为12：1；
29.(3)将所得湿颗粒物干燥以使水分降至4％以下，即得。
30.实施例2
31.一种抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物，由如下重量份数的原料制成：益生菌32份、槐米提取物3份、银耳多糖3份、卵磷脂4份、海藻糖12份、果胶5份；所述益生菌为约氏乳杆菌菌粉和格式乳杆菌菌粉，活菌数均为108cfu/g，质量比为1：1。
32.所述槐米提取物的制备方法为：将槐米晒干，磨成粉末，加5倍重量份数的70％的乙醇水溶液回流提取3次，合并滤液，蒸干制成。
33.所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物的制备方法，按照如下步骤进行：
34.(1)将所述益生菌、槐米提取物、银耳多糖混合均匀，再加入卵磷脂混合均匀；
35.(2)向混合物中添加加入粉末状的碳水化合物，混合均匀，再添加用水配制的粘合剂，混合，制成湿的颗粒物；所述水与粘合剂的用量质量比为7：1；
36.(3)将所得湿颗粒物干燥以使水分降至4％以下，即得。
37.实施例3
38.一种抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物，由如下重量份数的原料制成：益生菌60份、槐米提取物5份、银耳多糖5份、卵磷脂8份、环糊精30份、羧基甲基纤维素10份；所述益生菌为约氏乳杆菌菌粉和格式乳杆菌菌粉，活菌数均为108cfu/g，质量比为5：1。
39.所述槐米提取物的制备方法为：将槐米晒干，磨成粉末，加8倍重量份数的70％的乙醇水溶液回流提取3次，合并滤液，蒸干制成。
40.所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物的制备方法，按照如下步骤进行：
41.(1)将所述益生菌、槐米提取物、银耳多糖混合均匀，再加入卵磷脂混合均匀；
42.(2)向混合物中添加加入粉末状的碳水化合物，混合均匀，再添加用水配制的粘合剂，混合，制成湿的颗粒物；所述水与粘合剂的用量质量比为18：1；
43.(3)将所得湿颗粒物干燥以使水分降至4％以下，即得。
44.对比例1
45.一种抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物，由如下重量份数的原料制成：益生菌50份、槐米提取物8份、卵磷脂6份、蔗糖20份、海藻酸钠8份；所述益生菌为约氏乳杆菌菌粉和格式乳杆菌菌粉，活菌数均为108cfu/g，质量比为3：1。
46.所述槐米提取物的制备方法为：将槐米晒干，磨成粉末，加6倍重量份数的70％的乙醇水溶液回流提取3次，合并滤液，蒸干制成。
47.所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物的制备方法，按照如下步骤进行：
48.(1)将所述益生菌、槐米提取物混合均匀，再加入卵磷脂混合均匀；
49.(2)向混合物中添加加入粉末状的碳水化合物，混合均匀，再添加用水配制的粘合剂，混合，制成湿的颗粒物；所述水与粘合剂的用量质量比为12：1；
50.(3)将所得湿颗粒物干燥以使水分降至4％以下，即得。
51.对比例2
52.一种抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物，由如下重量份数的原料制成：益生菌50份、银耳多糖8份、卵磷脂6份、蔗糖20份、海藻酸钠8份；所述益生菌为约氏乳杆菌菌粉和格式乳杆菌菌粉，活菌数均为108cfu/g，质量比为3：1。
53.所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物的制备方法，按照如下步骤进行：
54.(1)将所述益生菌、银耳多糖混合均匀，再加入卵磷脂混合均匀；
55.(2)向混合物中添加加入粉末状的碳水化合物，混合均匀，再添加用水配制的粘合剂，混合，制成湿的颗粒物；所述水与粘合剂的用量质量比为12：1；
56.(3)将所得湿颗粒物干燥以使水分降至4％以下，即得。
57.对比例3
58.一种抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物，由如下重量份数的原料制成：益生菌50份、槐米提取物4份、银耳多糖4份、卵磷脂6份、蔗糖20份、海藻酸钠8份；所述益生菌为约氏乳杆菌菌粉，活菌数为108cfu/g。
59.所述槐米提取物的制备方法为：将槐米晒干，磨成粉末，加6倍重量份数的70％的乙醇水溶液回流提取3次，合并滤液，蒸干制成。
60.所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物的制备方法，按照如下步骤进行：
61.(1)将所述益生菌、槐米提取物、银耳多糖混合均匀，再加入卵磷脂混合均匀；
62.(2)向混合物中添加加入粉末状的碳水化合物，混合均匀，再添加用水配制的粘合
剂，混合，制成湿的颗粒物；所述水与粘合剂的用量质量比为12：1；
63.(3)将所得湿颗粒物干燥以使水分降至4％以下，即得。
64.对比例4
65.一种抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物，由如下重量份数的原料制成：益生菌50份、槐米提取物4份、银耳多糖4份、卵磷脂6份、蔗糖20份、海藻酸钠8份；所述益生菌为格式乳杆菌菌粉，活菌数为108cfu/g。
66.所述槐米提取物的制备方法为：将槐米晒干，磨成粉末，加6倍重量份数的70％的乙醇水溶液回流提取3次，合并滤液，蒸干制成。
67.所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物的制备方法，按照如下步骤进行：
68.(1)将所述益生菌、槐米提取物、银耳多糖混合均匀，再加入卵磷脂混合均匀；
69.(2)向混合物中添加加入粉末状的碳水化合物，混合均匀，再添加用水配制的粘合剂，混合，制成湿的颗粒物；所述水与粘合剂的用量质量比为12：1；
70.(3)将所得湿颗粒物干燥以使水分降至4％以下，即得。
71.实验例：
72.药物制备：四联药物成人1次量(阿莫西林1000mg、克拉霉素500mg、胶体果秘450mg、兰索拉唑50mg，共2.0g)，加100ml无菌水混匀，60℃超声溶解，浓度为20mg/ml；取实施例1-3及对比例3-4制备的益生菌组合物5.0g，加100ml无菌水混匀，37℃条件下溶解，轻轻搅拌均匀，浓度为50mg/ml。
73.hp菌液的制备：取skirrow平板，密集划线接种hp，加入培养基(bhi+5％小牛血清)，于85％n2、10％co2和5％o2的三气培养箱中37℃恒温培养60h。用磷酸缓冲溶液(pbs)重悬鉴定阳性的菌液，使用麦氏比浊仪调至0.5麦氏浓度，即每管保存液中细菌浓度为1.5
×
108cfu/ml，4℃冷藏备用。
74.打孔法测定抑菌圈直径：划线在skirrow平板上均匀涂布浓度为1
×
108cfu/ml的hp保存液100μl，待菌液稍干燥后，用内径为6mm的不锈钢打孔器在平板上等间距打孔，每个小孔分别注入配制完成的连朴饮药液和四联药物药液各50μl，对照组加入等量无菌生理盐水。操作完成后将平板置于三气培养箱中37℃恒温培养72h，以十字交叉测量抑菌圈直径，重复5次求得平均值。
75.采用spss 24.0软件进行统计学分析，计量资料结果用(均数士标准差)表示，采用kolmogorov-smirnov检验法进行数据正态性检验，对于符合正态分布数据，两组间均值差异比较采用t检验，以p《0.05为差异具有统计学意义。
76.测定结果见表1：
77.表1
[0078][0079]
注：*代表与正常对照组比较p《0.05，#代表与实施例1组比较p《0.05。
[0080]
由表1可以看出，实施例1-3结果相当，实施例1结果优于对比例3和4，说明双组分益生菌产生了协同增效的效应。
[0081]
小鼠的分组及幽门螺旋杆菌感染模型的建立：选择4-6周龄，健康的雄性昆明小鼠，所有小鼠先灌胃混合抗生素溶液(阿奇霉素10mg/ml、氨苄青霉素10mg/ml、庆大霉素1.2mg/ml)1周，每天灌胃0.1ml。将小鼠分为空白组、模型组、实施例1-3组、对比例1-2组，各10只。除准备留作空白组的小鼠灌胃1ml 0.85％(m/v)生理盐水外，其余小鼠灌胃hp(108cfu/ml)新鲜悬菌液0.5ml，隔天1次，共8次。同时模型组灌胃0.5ml 0.85％(m/v)生理盐水，实施例1-3组、对比例1-2组灌胃0.5ml益生菌组合物溶液(50mg/ml)。末次灌胃1周后，随机处死模型组小鼠2只，取胃黏膜，采用胃幽门螺旋杆菌诊断试剂盒进行判断，判为阳性，则感染模型建立成功。
[0082]
最后一次灌胃后1周将小鼠全部处死，剪取小鼠的胃组织，取胃黏膜行组织病理学特殊银染色评估幽门螺旋杆菌分布情况，he染色镜检观察胃黏膜感染分级；于小鼠眼眶静脉丛取血清，用elisa的方法检测il-1β、tnf-α的含量。
[0083]
测定结果见表2：
[0084]
表2
[0085][0086][0087]
注：*代表与空白组比较p《0.05，#代表与实施例1组比较p《0.05。
[0088]
由表2可以看出，实施例1-3结果相当，实施例1结果优于对比例1和2，说明槐米提取物和银耳多糖组合使用减轻了小鼠胃部的炎症反应，产生了协同增效的效应。
[0089]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

技术特征：
1.一种抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物，其特征在于，由如下重量份数的原料制成：益生菌30-60份、槐米提取物3-5份、银耳多糖3-5份、卵磷脂3-8份、碳水化合物10-30份、粘合剂5-10份。2.根据权利要求1所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物，其特征在于，所述益生菌为约氏乳杆菌菌粉和格式乳杆菌菌粉，活菌数均为10
7-109cfu/g，质量比为(1-5)：1。3.根据权利要求1所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物，其特征在于，所述碳水化合物为淀粉、蔗糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖、麦芽三糖、糊精、环糊精中的一种或几种的组合。4.根据权利要求1所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物，其特征在于，所述粘合剂为海藻酸钠、果胶、壳聚糖、羧基甲基纤维素中的一种或几种的组合。5.根据权利要求1所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物，其特征在于，所述槐米提取物的制备方法为：将槐米晒干，磨成粉末，加4-8倍重量份数的70％的乙醇水溶液回流提取3次，合并滤液，蒸干制成。6.权利要求1所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：(1)将所述益生菌、槐米提取物、银耳多糖混合均匀，再加入卵磷脂混合均匀；(2)向混合物中添加加入粉末状的碳水化合物，混合均匀，再添加用水配制的粘合剂，混合，制成湿的颗粒物；所述水与粘合剂的用量质量比为(5-20)：1；(3)将所得湿颗粒物干燥以使水分降至4％以下，即得。7.一种固体饮料，其特征在于，包括权利要求1所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物。8.一种营养保健品，其特征在于，包括权利要求1所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物以及用于给使用者提供营养的蛋白质源。9.一种食品添加剂，其特征在于，包括权利要求1所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物。10.一种药品，其特征在于，包括权利要求1所述抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物。

技术总结
本发明公开了一种抗幽门螺旋杆菌益生菌组合物及其应用。由如下重量份数的原料制成：益生菌30-60份、槐米提取物3-5份、银耳多糖3-5份、卵磷脂3-8份、碳水化合物10-30份、粘合剂5-10份。本发明的益生菌组合物，采用约氏乳杆菌和格式乳杆菌作为主要活性成分，抗幽门螺旋杆菌效果显著；组分中槐米提取物和银耳多糖组合使用，能减轻胃部的炎症反应。能减轻胃部的炎症反应。


技术研发人员：唐明华 陆军
受保护的技术使用者：上海依城科技有限公司
技术研发日：2023.04.21
技术公布日：2023/9/11