一种巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂的制作方法

一种巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂
技术领域
1.本发明涉及临床体外检测技术领域，具体涉及一种巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂。


背景技术：

2.人体巨细胞病毒(human cytomegalovirus)属疱疹病毒科，又称为涎病毒，是人类疱疹病毒组中最大的一种病毒。这种病毒进入细胞内以后会导致细胞增大，所以叫做巨细胞病毒。
3.巨细胞病毒是疱疹病毒家族中的重要的成员之一，可引起人体巨细胞病毒感染。在我国巨细胞病毒感染广泛流行，通常情况下，很多正常人身上都潜伏有巨细胞病毒，潜伏部位常在唾液腺、乳腺、肾脏、子宫颈、睾丸、白细胞以及其它腺体中，病毒可长期或间歇地自唾液、乳汁、尿液、精子及子宫颈分泌物中排出。但在大多数免疫正常个体呈无症状感染，而在免疫抑制个体、胎儿和婴幼儿如果感染则可出现明显病症。
4.临床中对于人体巨细胞病毒检测主要有分离培养、elisa和荧光定量pcr检测等，其中分离培养易受操作者技术影响、耗时长；elisa方法重复性差，易受干扰出现假阳性问题；而人体巨细胞病毒荧光定量pcr检测有灵敏度高、特异性强等优点，现已被广泛应用。但人体巨细胞病毒荧光定量pcr检测样本前处理繁琐、需要特定的处理仪器，鉴于此本发明提供一种巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂，该释放剂使用不需要核酸提取仪，耗时短，操作简便，核酸释放效果好，配合人体巨细胞病毒荧光定量pcr检测试剂盒使用可以取得良好检测结果。


技术实现要素：

5.本发明提供了一种巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂。本发明巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂可以有效释放待测巨细胞病毒(hcmv)样本核酸，具有操作简便，耗时短等优点。
6.为实现上述目的，本发明的巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂是通过以下技术方案实现的：
7.本发明提供一种巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂，其试剂r1和试剂r2的组成如下：
8.所述试剂r1的成分和含量如下：
[0009][0010]
所述试剂r2的成分和含量如下：
[0011][0012]
进一步的，所述缓冲液为mobs缓冲液和taps缓冲液，温度25℃，ph值为7.1-9.1。
[0013]
进一步的，所述试剂r1的成分和含量如下：
[0014][0015]
试剂r2的成分和含量如下：
[0016][0017][0018]
进一步的，所述试剂r1的成分和含量如下：
[0019]
试剂r2的成分和含量如下：
[0020][0021]
进一步的，所述试剂r1的成分和含量如下：
[0022]
试剂r2的成分和含量如下：
[0023][0024][0025]
本发明的巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂的使用方法为：
[0026]
1)取500μl巨细胞病毒样本溶液加入500μl试剂r1，涡旋混匀后，室温放置5分钟。然后，12000rpm离心20分钟，弃上清。
[0027]
2)将1)所得沉淀用45μl巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂重悬，用移液枪吸打混匀，室温放置15分钟，最终所得溶液即为待测样本。根据试剂盒要求样本用量用于巨细胞病毒(hcmv)的荧光定量pcr检测。
[0028]
本发明检测的基本原理为：
[0029]
待测样本加入试剂r1后，在试剂r1作用下巨细胞病毒得到浓缩沉淀，通过离心得到沉淀。
[0030]
然后向沉淀中加入试剂r2，在taps缓冲液提供的温和环境下，表面活性剂为蓖麻油聚氧乙烯(30)醚可以有效裂解细胞，使蛋白质变性释放出核酸；尿素和胆酸钠可以使蛋白质变性、溶解，进一步促进核酸释放；表面活性剂脂肪醇醚磺基琥珀酸酯二钠盐在氯化锂
存在下，进一步促进核酸释放和溶解。
[0031]
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0032]
1)本发明所述巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂优选的taps缓冲液提供了温和的缓冲环境，对后续pcr扩增无明显影响。
[0033]
2)采用的新型表面活性剂蓖麻油聚氧乙烯(30)醚和脂肪醇醚磺基琥珀酸酯二钠盐，可以更有效的释放巨细胞病毒核酸。
[0034]
3)优化反应体系，通过科学配比，显著提高了核酸的释放效率，有效降低了样本处理体系造成的干扰。
[0035]
4)该试剂操作简便快速，适用于巨细胞病毒(hcmv)的荧光定量pcr检测的样本处理过程。
附图说明
[0036]
图1为本发明巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂处理后的巨细胞病毒(hcmv)阳性样本扩增曲线。
具体实施方式
[0037]
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面将结合具体实施例和附图进行详细描述。
[0038]
对照组1：
[0039]
为市场常见的某核酸提取试剂盒(配套核酸提取仪使用)，试剂使用方法按照其说明书进行。
[0040]
对照组2：
[0041]
为市场常见的某核酸释放剂，使用方法按照其说明书进行。
[0042]
实施例1：
[0043]
本实施例的巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂包括试剂r1和试剂r2，其中：
[0044]
试剂r1的成分和含量如下：
[0045][0046]
试剂r2的成分和含量如下：
[0047][0048]
本实施例的检测方法：
[0049]
1)取500μl巨细胞病毒样本溶液加入500μl试剂r1，涡旋混匀后，室温放置5分钟。然后，12000rpm离心20分钟，弃上清。
[0050]
2)将1)所得沉淀用45μl巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂重悬，用移液枪吸打混匀，室温放置15分钟，最终所得溶液即为待测样本。根据试剂盒要求样本用量用于巨细胞病毒(hcmv)的荧光定量pcr检测。
[0051]
实施例2：
[0052]
本实施例的巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂包括试剂r1和试剂r2，其中：
[0053]
试剂r1的成分和含量如下：
[0054][0055]
试剂r2的成分和含量如下：
[0056][0057]
检测方法同实施例1的检测方法。
[0058]
实施例3：
[0059]
本实施例的巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂包括试剂r1和试剂r2，其中：
[0060]
试剂r1的成分和含量如下：
[0061][0062][0063]
试剂r2的成分和含量如下：
[0064][0065]
检测方法同实施例1的检测方法。
[0066]
释放效率验证试验：
[0067]
取巨细胞病毒(hcmv)参考品(巨细胞病毒培养物，理论核酸浓度40～60ng/μl)，分别按照实施例1、实施例2和实施例3的配方配制试剂，进行样本处理，通过qubit荧光计检测所释放的核酸浓度，与对照组进行对照检测，检测结果如表1所示：
[0068]
表1释放效率验证试验结果
[0069][0070]
由表1中检测结果可知，实施例1、实施例2、实施例3配方配制试剂对巨细胞病毒核酸的释放浓度与理论浓度偏差不大，与对照组1相比差异不大，并且明显高于对照组2。这说明本发明通过优化试剂反应体系，采用新型表面活性剂蓖麻油聚氧乙烯(30)醚和脂肪醇醚磺基琥珀酸酯二钠盐，显著提高了核酸的释放效率。
[0071]
巨细胞病毒阳性样本pcr扩增试验：
[0072]
取5例巨细胞病毒阳性样本，分别用实施例1、实施例2和实施例3和对照组进行样本处理，然后配合商品化巨细胞病毒(hcmv)荧光定量pcr检测试剂盒进行扩增检测，阳性样本ct值如表2所示：
[0073]
表2巨细胞病毒阳性样本pcr扩增试验结果
[0074] 实施例1实施例2实施例3对照组1对照组2样本127.928.528.928.430.3
[0075]
由表2检测结果可知，实施例1、实施例2和实施例3试剂与对照组1相比样本的ct值
差异不大，并且明显低于对照组2，表明实施例1、实施例2和实施例3试剂对巨细胞病毒有很好的释放效果，并且可以直接用于后续的荧光定量pcr检测。这表明本发明通过优化试剂反应体系，科学配比各组分，采用新型表面活性剂蓖麻油聚氧乙烯(30)醚和脂肪醇醚磺基琥珀酸酯二钠盐，显著提高了核酸的释放效率，并且对后续pcr扩增无明显干扰，扩增曲线见图1。
[0076]
综上所述，本发明的巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂使用方便快捷、核酸释放效果好，对后续pcr扩增无明显干扰。
[0077]
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂，其特征在于，包括试剂r1和试剂r2，其中：所述试剂r1的成分和含量如下：所述试剂r2的成分和含量如下：2.根据权利要求1所述的巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂，其特征在于，所述缓冲液为mobs缓冲液或taps缓冲液，温度25℃，ph值为7.1-9.1。3.根据权利要求1-2中任一所述的巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂，其特征在于，所述试剂r1的成分和含量如下：试剂r2的成分和含量如下：试剂r2的成分和含量如下：
4.根据权利要求1-2中任一所述的巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂，其特征在于，所述试剂r1的成分和含量如下：试剂r2的成分和含量如下：5.根据权利要求1-2中任一所述的巨细胞病毒(hcmv)核酸释放剂，其特征在于，所述试剂r1的成分和含量如下：试剂r2的成分和含量如下：试剂r2的成分和含量如下：

技术总结
本发明公开了一种巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂，涉及临床体外检测技术领域。所述释放剂包括试剂R1和试剂R2，其中：所述试剂R1的成分如下：缓冲液、氯化锂，PEG8000，2-Chloroacetamide；试剂R2的成分和含量如下：缓冲液，氯化锂，尿素，胆酸钠，蓖麻油聚氧乙烯(30)醚，脂肪醇醚磺基琥珀酸酯二钠盐，2-Chloroacetamide。本发明巨细胞病毒(HCMV)核酸释放剂，操作简便，耗时短，可以有效释放巨细胞病毒(HCMV)样本核酸。胞病毒(HCMV)样本核酸。胞病毒(HCMV)样本核酸。


技术研发人员：孙睿佳 李志明 胡晓飞 董雯
受保护的技术使用者：山东博弘基因科技有限公司
技术研发日：2021.11.16
技术公布日：2023/9/11