一种石榴皮发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用

1.本发明属于发酵技术领域，尤其涉及一种石榴皮发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用。


背景技术：

2.石榴皮中含有丰富的生物活性成分，例如黄酮化合物、单宁化合物、萜类化合物、氨基酸、有机酸、多糖等多种活性物质，具有治疗久泻，久痢，便血，脱肛，崩漏等疾病的药用功效，还具有抗氧化功效。
3.现有技术中，有采用水提、有机溶剂(甲醇、丙酮、乙酸乙酯等)浸提等方法获取石榴皮中活性成分的相关报道，但石榴皮中活性成分的提取率不理想，当采用有机溶剂提取时，还会对操作人员的身体造成一定伤害，制得的石榴皮提取物中也会有有机溶剂残留，对皮肤有一定损害。
4.因此，本领域亟需研发一种操作简便，节约生产成本，同时还可制得活性成分含量高和美容护肤效果理想的石榴皮提取物的制备方法。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的技术问题是克服现有技术从石榴皮中提取活性成分时，提取效率低，获得的提取物中活性物质含量少；采用有机溶剂提取时，会有有机溶剂残留等缺陷，而提供一种石榴皮发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用。本发明制得的石榴皮发酵物具有理想的dpph自由基清除能力和抑制透明质酸酶活性的能力，表明本发明制得的石榴皮发酵物具备理想的抗氧化功效和抗炎功效，既可作皮肤外用剂直接使用，也可以作为添加剂或皮肤外用剂基底使用，提高了石榴皮的利用率，实现资源转废为宝，制备过程中不使用有机溶剂，实现节能环保。
6.本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：
7.本发明提供一种石榴皮发酵物的制备方法，其包括如下步骤：将酵母菌接种到发酵底物中，经发酵培养24～72h，灭菌，即可；其中，所述发酵底物包括石榴皮水提物。
8.一些实施例中，所述石榴皮水提物的制备方法可包括如下步骤：石榴皮粉末采用70～95℃的水浸提，即可。
9.其中，所述石榴皮粉末和所述水的质量比可为1：(60～120)，较佳地为1：(90～110)，更佳地为1：100。
10.其中，所述浸提的温度较佳地为70～90℃。
11.其中，所述浸提的时间可为0.5～2.5h，较佳地为1～2.5h。
12.其中，所述浸提可按照本领域常规在搅拌的条件下进行，所述搅拌的转速可为150～400prm，较佳地为240～360rpm，更佳地为300rpm。
13.一些实施例中，所述发酵底物中还可进一步包括碳源和/或氮源。
14.其中，所述碳源可包括本领域常规使用的碳源，较佳地包括葡萄糖。
15.其中，所述碳源与所述石榴皮水提物的质量比可为1：(300～1000)，较佳地为1：500。
16.其中，所述氮源可包括本领域常规使用的氮源，较佳地包括大豆肽。
17.其中，所述氮源与所述石榴皮水提物的质量比可为1：(400～1200)，较佳地为1：600。
18.一些实施例中，所述发酵底物在使用前还可进一步包括灭菌的操作。
19.其中，所述灭菌的条件和方法可为本领域该类操作常规的条件和方法，一般可为高温灭菌法。
20.当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为115～125℃，更佳地为118～121℃。
21.当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为20～40min，更佳地为25～35min，例如30min。
22.当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的压力可为本领域该类操作常规的压力，较佳地为0.1～0.15mpa，更佳地为0.1～0.13mpa。
23.其中，按照本领域常规，所述灭菌的操作后还可进一步包括冷却的操作，一般可为冷却至室温。
24.一些实施例中，所述酵母菌可包括酿酒酵母菌(saccharomyces cerevisiae)，较佳地包括购自北京市食品酿造研究所的黄酒酵母菌21392和/或保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmcc no.17452的酿酒酵母。
25.一些实施例中，所述酵母菌可按照本领域常规以酵母菌菌液的形式添加，所述酵母菌菌液中所述酵母菌的浓度可为107～109cfu/g，较佳地为108cfu/g。
26.一较佳实施例中，当所述酵母菌包括所述黄酒酵母菌时，所述黄酒酵母菌菌液的制备方法可为本领域常规，具体包括如下步骤：(1)所述黄酒酵母菌接种到ypd固体培养基中划线活化，培养，制得单菌落；(2)所述单菌落接种到ypd液体培养基中经培养，即可。
27.一更佳实施方案中，当所述酵母菌包括所述黄酒酵母菌时，所述黄酒酵母菌菌液的制备方法包括如下步骤：(1)所述黄酒酵母菌接种到ypd固体培养基中划线活化，在温度为28℃的条件下培养48h，制得单菌落；(2)所述单菌落接种到ypd液体培养基中，在转速为180rpm，温度为28℃的条件下培养36～72h，即可。
28.一些实施例中，单位体积的所述发酵底物中接种的所述酵母菌的数量可为本领域常规，较佳地为4
×
105～4
×
107cfu/ml，更佳地为4
×
106～4
×
107cfu/ml。
29.一些实施例中，所述发酵培养的条件和方法可为有氧发酵。
30.一些实施例中，所述发酵培养的条件和方法可为本领域常规，一般可在摇床上进行，所述摇床的转速可为150～300rpm，较佳地为180～220rpm。
31.一些实施例中，所述发酵培养的时间较佳地为24～60h，更佳地为48～60h。
32.一些实施例中，所述发酵培养的温度可为25～35℃，较佳地为25～30℃，例如28℃。
33.一些实施例中，所述灭菌的条件和方法可为本领域常规，一般可为高温灭菌法。
34.当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为105～125℃，更佳地为121℃。
35.当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为15～35min，更佳地为30min。
36.当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的压力可为本领域该类操作常规的压力，较佳地为0.1～0.15mpa，更佳地为0.1～0.13mpa。
37.一些实施例中，所述灭菌的操作后，还可进一步包括冷却和/或离心，收集上清液的操作。
38.其中，按照本领域常规，所述冷却可为冷却至室温。
39.其中，所述离心的转速可为本领域该类操作常规的转速，较佳地为3000～8000rpm，更佳地为4800～8000rpm。
40.其中，所述离心的半径可为本领域该类操作常规的半径，较佳地为8～15cm。
41.其中，所述离心的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为20～40min，更佳地为30～40min。
42.其中，所述离心的操作后还可进一步包括二次灭菌和/或与防腐剂混合的操作。
43.所述二次灭菌的方法可为本领域常规使用的高温灭菌法。
44.当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为105～125℃，更佳地为112～125℃。
45.当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为20～30min。
46.当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的压力可为本领域该类操作常规的压力，较佳地为0.1～0.15mpa，更佳地为0.1～0.12mpa。
47.与所述防腐剂混合的过程中，所述混合的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为65～80℃，更佳地为70～80℃。
48.与所述防腐剂混合的过程中，所述防腐剂可按照本领域常规包括对羟基苯乙酮和/或1,2-己二醇。当所述防腐剂包括所述对羟基苯乙酮和所述1,2-己二醇时，所述对羟基苯乙酮占所述离心后制得所述上清液的质量百分数可为0.1％～1％，所述1,2-己二醇占所述离心后制得所述上清液的质量百分数可为0.5％～2％；较佳地，所述对羟基苯乙酮占所述离心后制得所述上清液的质量百分数为0.5％，所述1,2-己二醇占所述离心后制得所述上清液的质量百分数为0.8％。
49.本发明还提供一种石榴皮发酵物，其由如上所述的石榴皮发酵物的制备方法制得。
50.本发明还提供一种如上所述的石榴皮发酵物直接作为产品、作为添加剂或作为基底在制备皮肤外用剂中的应用。
51.一些实施例中，所述石榴皮发酵物可作为所述皮肤外用剂中的抗氧化活性成分和/或抗炎活性成分。
52.其中，所述抗氧化活性成分可为具有dpph自由基清除作用的抗氧化活性成分。
53.其中，所述抗炎活性成分可为具有抑制透明质酸酶活性作用的抗炎活性成分。
54.本发明还提供一种皮肤外用剂，其包括如上所述的石榴皮发酵物。
55.一些实施例中，所述皮肤外用剂中还可进一步包括本领域常规使用的活性成分，一般可包括保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分、抗敏活性成分和抗氧化活性成分
中的至少一种。
56.一些实施例中，所述皮肤外用剂可按照本领域常规包括但不限于面膜、精华或爽肤水。
57.一些实施例中，所述石榴皮发酵物占所述皮肤外用剂的质量百分比可为5％～99％，较佳地为60％～99％。
58.一些实施例中，所述室温一般指15～40℃。
59.在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
60.本发明所用试剂和原料均市售可得。
61.本发明的积极进步效果在于：本发明制得的石榴皮发酵物具有理想的dpph自由基清除能力和抑制透明质酸酶活性的能力，终产品中有效活性成分含量高，表明本发明制得的石榴皮发酵物具备理想的抗氧化功效和抗炎功效，既可作皮肤外用剂直接使用，也可以作为添加剂或皮肤外用剂基底，提高了石榴皮的利用率，实现资源转废为宝，制备过程中不使用有机溶剂，实现节能环保。
附图说明
62.本公开可以通过参考下文中结合附图所给出的描述而得到更好的理解。所述附图连同下面的详细说明一起包含在本说明书中并且形成本说明书的一部分，而且用来进一步举例说明本公开的优选实施例和解释本公开的原理和优点。其中：
63.图1为实施例1～4和对比例1～3制得产品的dpph自由基清除能力对比图；
64.图2为实施例1～4和对比例1～3制得产品的总抗氧化能力对比图；
65.图3为实施例1～4和对比例1～3制得产品的透明质酸酶抑制率对比图；
66.图4为实施例1～4和对比例1～3制得产品中总糖含量对比图；
67.图5为实施例1～4和对比例1～3制得产品中总蛋白质含量对比图。
具体实施方式
68.下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
69.下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
70.下述实施例和对比例中，黄酒酵母菌为购自北京市食品酿造研究所的黄酒酵母菌21392。
71.下述实施例和对比例中，酿酒酵母保藏日期为2019年3月27日，保藏编号为cgmcc no.17452，分类命名为：酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)ywy-1，保藏单位名称为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称cgmcc)，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编为100101。
72.实施例1
73.(1)称取石榴皮粉末3g与300ml去离子水混合，90℃的热水浸提1h，浸提时搅拌转速为300rpm；浸提完成后，将浸提液全部转移至三角瓶中，在温度为121℃，压力为0.12mpa
的条件下灭菌30min，灭菌后冷却至室温，制得发酵底物；
74.(2)在发酵底物中接入黄酒酵母菌菌液，其中，黄酒酵母菌菌液中活菌数为108cfu/ml，黄酒酵母菌菌液的添加量为12ml，在28℃恒温震荡培养箱中发酵培养48h，其中，摇床的转速为180rpm；发酵培养结束后，将得到的发酵液在温度为121℃，压力为0.12mpa的灭菌锅中灭菌30min,终止发酵；灭菌后冷却至室温，再进行离心，在4800r/min条件下离心30min，得上清液，对上清液进行二次灭菌，在温度为121℃，压力为0.12mpa的灭菌锅中灭菌30min，避免离心过程中其它杂菌造成的污染，灭菌完成后冷却至室温，即得石榴皮发酵物。
75.实施例2
76.与实施例1相比，区别仅在于步骤(2)中，发酵培养的时间为24h，其他条件参数同实施例1。
77.实施例3
78.与实施例1相比，区别仅在于步骤(1)中，浸提完成后，将浸提液全部转移至三角瓶中，再与0.6g葡萄糖混合，在温度为121℃，压力为0.12mpa的条件下灭菌30min，灭菌后冷却至室温，制得发酵底物，其他条件参数同实施例1。
79.实施例4
80.与实施例1相比，区别仅在于步骤(2)中，将发酵菌种替换为等量的酿酒酵母cgmcc no.17452，其他条件参数同实施例1。
81.对比例1
82.与实施例1相比，区别仅在于不进行发酵处理，为步骤(1)制得的发酵底物。
83.对比例2
84.与实施例1相比，区别仅在于步骤(1)中不采用热水进行浸提，其他条件参数同实施例1。
85.对比例3
86.与实施例1相比，区别仅在于发酵培养的时间为96h，其他条件参数同实施例1。
87.效果实施例1
88.dpph是一种早期合成的有机自由基，常用来评估抗氧化物的供氢能力，它在有机溶剂中非常稳定，呈紫色，而且在517nm处有一个特征吸收峰，当遇到自由基清除剂时，dpph的孤对电子被配对而使其退色，也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。因此，可通过测定吸光值的变化来评价样品对dpph自由基的清除效果。
89.dpph自由基清除实验的具体实验步骤为：
90.(1)取等体积(1ml)的待测液(上述实施例1～4和对比例1～3制得的产品)与2
×
10-4
mol/l的dpph溶液混匀(a1管)；
91.(2)取等体积(1ml)的无水乙醇(待测物溶剂)与2
×
10-4
mol/l的dpph溶液混匀(a2管)；
92.(3)取等体积(1ml)的无水乙醇与待测液混匀(a3管)；
93.(4)避光反应30min后，在517nm下测a1管、a2管、a3管吸光度值；清除率计算公式为：清除率＝[(a2+a3)-a1]/a2×
100％。
[0094]
本实验对实施例1～4和对比例1～3制得的产品进行dpph自由基清除实验测试，结
果见表1和图1(图1中，***p＜0.001，与实施例1相比有极其显著性统计学差异，极显著降低)。
[0095]
表1
[0096] dpph自由基清除率(％)实施例181.14
±
2.06实施例273.09
±
1.00实施例379.31
±
0.69实施例467.17
±
0.77对比例149.54
±
2.10对比例258.36
±
0.64对比例362.07
±
3.58
[0097]
结果表明，结合表1和显著性计算分析可知，实施例1～4制得产品的dpph自由基清除能力极显著高于对比例1～3制得产品的dpph自由基清除能力。
[0098]
效果实施例2
[0099]
采用碧云天生物技术有限公司生产的货号为s0119的总抗氧化能力检测试剂盒(abts法)测试实施例1～4和对比例1～3制得产品的总抗氧化能力，结果见表2和图2(图2中，***p＜0.001，表示与实施例1相比有极其显著性统计学差异，极显著降低；
###
p＜0.001，表示与实施例1相比有极其显著性差异，极显著升高)。
[0100]
表2
[0101] teac(mm)实施例10.42
±
0.01实施例20.30
±
0.04实施例30.51
±
0.02实施例40.39
±
0.01对比例10.15
±
0.01对比例20.22
±
0.01对比例30.26
±
0.01
[0102]
结合表2数据和显著性计算分析可知，实施例1～4制得产品的总抗氧化能力极显著优于对比例1～3制得产品的总抗氧化能力。
[0103]
效果实施例3
[0104]
透明质酸酶是一种能分解多糖的溶酶体之一，能够水解透明质酸钾生成β-n-乙酰葡糖胺，该物质在碱性条件下与乙酰丙酮缩合生成生色原2-甲基-3-二乙酰吡咯衍生物，生色原与埃尔利希试剂在浓盐酸乙醇中显色。透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，是i型过敏反应的参与者，因此透明质酸酶体外抑制实验可作为快捷的抗过敏测定方法。
[0105]
试剂：透明质酸酶、透明质酸钠、无水乙醇、氢氧化钠、无水碳酸钠、浓盐酸、对-二甲氨基苯甲醛、乙酰丙酮、冰醋酸、无水氯化钙。
[0106]
设备：sunrise酶标仪的厂家为帝肯贸易有限公司；上海博讯实业有限公司医疗设备厂的数显恒温水浴锅；
[0107]
取0.1ml cacl2溶液(0.25mmol/l)和0.5ml透明质酸酶液(100u/ml)于37℃下水浴
恒温培养20min；加入受试样品液0.5ml(实施例1～4或对比例1～3制得的产品)，继续保温20min；再加入0.5ml透明质酸钠溶液(0.5mg/ml)，37℃水浴恒温培养30min后取出，在常温下放置5min；加入0.1ml naoh溶液(0.4mol/l)和0.5ml乙酰丙酮溶液(3.5ml乙酰丙酮溶于50ml的1.0mol/l碳酸钠溶液中)，于沸水浴中加热15min后立即转移至冰水水浴冷却5min；滴加1.0ml埃尔利希试剂(0.8g对-二甲基氨基苯甲醛溶于15ml浓盐酸和15ml无水乙醇中)，并用3.0ml无水乙醇稀释，室温放置20min显色，用分光光度计测定波长为540nm处吸光度值。样品对透明质酸酶抑制率的测定计算公式如下：
[0108]
透明质酸酶抑制率＝[(a-b)-(c-d)]/(a-b)
×
100％，测试结果见表3和图3(图3中，***p＜0.001，表示与实施例1相比有极其显著性统计学差异，极显著降低)；
[0109]
式中：a—对照溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替受试样品溶液)；b—对照空白溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替受试样品溶液及酶液)；c—受试样品液吸光度值；d—受试样品空白溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替酶液)；
[0110]
表3
[0111]
编号透明质酸酶抑制率(％)实施例192.73
±
1.73实施例287.49
±
1.01实施例376.47
±
0.72实施例483.17
±
0.57对比例167.43
±
2.14对比例270.68
±
1.26对比例360.06
±
1.37
[0112]
结合表3数据和显著性计算分析可知，实施例1～4制得产品的透明质酸酶抑制能力极显著优于对比例1～3制得产品的透明质酸酶抑制能力。实施例1～4制得产品的抗炎能力明显优于对比例1～3制得产品。
[0113]
效果实施例4
[0114]
采用北京索莱宝科技有限公司生产的货号为bc2715的总糖含量检测试剂盒测试实施例1～4和对比例1～3制得的产品中总糖含量；采用北京百瑞极生物科技有限公司生产的货号为bn27109的bca蛋白定量检测试剂盒测试实施例1～4和对比例1～3制得的产品中蛋白质含量，结果见表4和图4～5(图4～5中，***p＜0.001，表示与实施例1相比有极其显著性统计学差异，极显著降低；
###
p＜0.001，表示与实施例1相比有极其显著性差异，极显著升高；
##
p＜0.01，表示与实施例1相比有显著性差异，显著升高)。
[0115]
表4
[0116]
[0117][0118]
结合表4数据和显著性计算分析可知，实施例1～4制得产品中总糖含量和总蛋白质含量极显著高于对比例1～3制得产品中总糖含量和总蛋白质含量。
[0119]
最后，还需要说明的是，在本发明中术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
[0120]
尽管上面已经通过本公开的具体实施例的描述对本公开进行了披露，但是，应该理解，本领域技术人员可在所附方案的精神和范围内设计对本公开的各种修改、改进或者等同物。这些修改、改进或者等同物也应当被认为包括在本公开所要求保护的范围内。

技术特征：
1.一种石榴皮发酵物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：将酵母菌接种到发酵底物中，经发酵培养24～72h，灭菌，即可；其中，所述发酵底物包括石榴皮水提物。2.如权利要求1所述的石榴皮发酵物的制备方法，其特征在于，所述石榴皮水提物的制备方法包括如下步骤：石榴皮粉末采用70～95℃的水浸提，即可；较佳地，所述石榴皮粉末和所述水的质量比为1：(60～120)，更佳地为1：(90～110)，进一步更佳地为1：100；较佳地，所述浸提的温度为70～90℃；较佳地，所述浸提的时间为0.5～2.5h，更佳地为1～2.5h；较佳地，所述浸提在搅拌的条件下进行，所述搅拌的转速为150～400prm，更佳地为240～360rpm，进一步更佳地为300rpm。3.如权利要求1所述的石榴皮发酵物的制备方法，其特征在于，所述石榴皮发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种：所述发酵底物中还进一步包括碳源和/或氮源；较佳地，所述碳源包括葡萄糖；较佳地，所述碳源与所述石榴皮水提物的质量比为1：(300～1000)，更佳地为1：500；较佳地，所述氮源包括大豆肽；较佳地，所述氮源与所述石榴皮水提物的质量比为1：(400～1200)，更佳地为1：600；所述发酵底物在使用前还进一步包括灭菌的操作；较佳地，所述灭菌的方法为高温灭菌法；当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的温度为115～125℃，较佳地为118～121℃；当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的时间为20～40min，较佳地为25～35min，更佳地为30min；当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的压力为0.1～0.15mpa，较佳地为0.1～0.13mpa；较佳地，所述发酵底物在使用前的所述灭菌的操作后还进一步包括冷却至室温的操作。4.如权利要求1所述的石榴皮发酵物的制备方法，其特征在于，所述石榴皮发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种：所述酵母菌包括酿酒酵母菌(saccharomyces cerevisiae)，较佳地包括购自北京市食品酿造研究所的黄酒酵母菌21392和/或保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmcc no.17452的酿酒酵母；所述酵母菌以酵母菌菌液的形式添加，所述酵母菌菌液中所述酵母菌的浓度为107～109cfu/g，较佳地为108cfu/g；单位体积的所述发酵底物中接种的所述酵母菌的数量为4
×
105～4
×
107cfu/ml，较佳地为4
×
106～4
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107cfu/ml。5.如权利要求1所述的石榴皮发酵物的制备方法，其特征在于，所述石榴皮发酵物的制备方法满足下述条件中至少一种：所述发酵培养的方法为有氧发酵；所述发酵培养在摇床上进行，所述摇床的转速为150～300rpm，较佳地为180～220rpm；所述发酵培养的时间为24～60h，较佳地为48～60h；所述发酵培养的温度为25～35℃，较佳地为25～30℃，更佳地为28℃；所述灭菌的方法为高温灭菌法；当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的温度为105～125℃，较佳地为121℃；当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的
时间为15～35min，较佳地为30min；当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的压力为0.1～0.15mpa，较佳地为0.1～0.13mpa。6.如权利要求1～5中任意一项所述的石榴皮发酵物的制备方法，其特征在于，所述灭菌的操作后，还进一步包括冷却和/或离心，收集上清液的操作；较佳地，所述冷却为冷却至室温；较佳地，所述离心的转速为3000～8000rpm，更佳地为4800～8000rpm；较佳地，所述离心的半径为8～15cm；较佳地，所述离心的时间为20～40min，更佳地为30～40min。7.如权利要求6所述的石榴皮发酵物的制备方法，其特征在于，所述离心的操作后还进一步包括二次灭菌和/或与防腐剂混合的操作；较佳地，所述二次灭菌的方法为高温灭菌法；当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的温度为105～125℃，较佳地为112～125℃；当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的时间为20～30min；当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的压力为0.1～0.15mpa，较佳地为0.1～0.12mpa；较佳地，与所述防腐剂混合的过程中，所述混合的温度为65～80℃，更佳地为70～80℃；较佳地，与所述防腐剂混合的过程中，所述防腐剂包括对羟基苯乙酮和/或1,2-己二醇；当所述防腐剂包括所述对羟基苯乙酮和所述1,2-己二醇时，所述对羟基苯乙酮占所述离心后制得所述上清液的质量百分数为0.1％～1％，所述1,2-己二醇占所述离心后制得所述上清液的质量百分数为0.5％～2％；较佳地，所述对羟基苯乙酮占所述离心后制得所述上清液的质量百分数为0.5％，所述1,2-己二醇占所述离心后制得所述上清液的质量百分数为0.8％。8.一种石榴皮发酵物，其特征在于，其由如权利要求1～7中任意一项所述的石榴皮发酵物的制备方法制得。9.一种如权利要求8所述的石榴皮发酵物直接作为产品、作为添加剂或作为基底在制备皮肤外用剂中的应用；较佳地，所述石榴皮发酵物作为所述皮肤外用剂中的抗氧化活性成分和/或抗炎活性成分；更佳地，所述抗氧化活性成分为具有dpph自由基清除作用的抗氧化活性成分；更佳地，所述抗炎活性成分为具有抑制透明质酸酶活性作用的抗炎活性成分。10.一种皮肤外用剂，其特征在于，其包括如权利要求8所述的石榴皮发酵物；较佳地，所述皮肤外用剂还进一步包括保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分、抗敏活性成分和抗氧化活性成分中的至少一种；较佳地，所述皮肤外用剂包括面膜、精华或爽肤水；较佳地，所述石榴皮发酵物占所述皮肤外用剂的质量百分比为5％～99％，更佳地为60％～99％。

技术总结
本发明公开了一种石榴皮发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用。石榴皮发酵物的制备方法包括如下步骤：将酵母菌接种到发酵底物中，经发酵培养24～72h，灭菌，即可；其中，发酵底物包括石榴皮水提物。本发明制得的石榴皮发酵物具有理想的DPPH自由基清除能力、总抗氧化能力和抑制透明质酸酶活性的能力，表明本发明制得的石榴皮发酵物具备理想的抗氧化功效和抗炎功效，既可作皮肤外用剂直接使用，也可以作为添加剂或皮肤外用剂基底使用，提高了石榴皮的利用率，实现资源转废为宝，制备过程中不使用有机溶剂，实现节能环保。实现节能环保。实现节能环保。


技术研发人员：王冬冬 李萌 王昌涛 由士权 张佳婵 赵丹
受保护的技术使用者：北京工商大学
技术研发日：2022.03.01
技术公布日：2023/9/13