一种PLK1的干扰RNA及其应用的制作方法

一种plk1的干扰rna及其应用
技术领域
1.本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种plk1的干扰rna及其应用。


背景技术：

2.随着人们生活环境与生活方式的改变，由各种因素诱导的变态反应已经成为威胁人类健康的重要问题之一，严重影响人们的身心健康，为人们的生活质量和整个社会造成巨大负担。变态反应分为速发型的i型变态反应和延迟型的ii、iii、iv型变态反应，该类反应均与人体免疫调控相关。除了这些由免疫系统介导的变态反应之外，临床中还存在一种反应症状与i型变态反应相似但非免疫介导的不良反应，目前未发现该种反应机制与免疫途径相关，被称为假性变态反应(pseudoallergic reactions)，也称作非免疫性超敏反应(non-immune hypersensitivity reaction)。
3.假性变态反应与ige介导的i型变态反应不同，i型变态反应涉及到免疫途径的参与，而假性变态反应并没有涉及到免疫系统，其不会引起抗原抗体反应，而是会直接刺激肥大细胞(mast cells,mcs)脱颗粒，促使其释放组胺等炎症因子，引起过敏样症状的产生。mc是假性变态反应最为关键的效应细胞，在接受到外来刺激时，mc首先释放储存的细胞因子和炎症介质，并随着病情进展进一步分泌新合成的炎症介质，诱导mcs脱颗粒，引起过敏样症状的产生。
4.polo样激酶(plk)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在真核细胞中广泛表达，plk包括五个家族成员，即plk1(polo样激酶1)、plk2、plk3、plk4、plk5，plk家族成员的主要区别在于c端polo-box结构域(polo-box domai，pbd)的数量不同，因此表达的功能也不同，其中，plk1在调节细胞分裂、维持基因组稳定性、纺锤体组装、有丝分裂和dna损伤反应中起重要作用。目前已有多个研究证实plk1作为癌基因的作用，其在多种原发性肿瘤组织中高表达，如乳腺癌、胃癌、肝癌、前列腺癌、结直肠癌、食道癌等。但是，目前尚未有关于plk1调控假性变态反应的研究报道。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种plk1的干扰rna及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明发现敲低plk1表达水平能够明显改善假性变态反应，为探究假性变态反应的潜在机制和治疗方法提供理论基础和实验依据。
6.为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
7.本发明提供一种敲低plk1的试剂在制备防治假性变态反应药物中的应用，所述试剂包括干扰plk1基因表达的sirna。
8.进一步地，所述sirna的核苷酸序列如seq id no：5-6所示。
9.进一步地，所述sirna通过改善肥大细胞脱颗粒的形态变化，减少细胞凋亡，以及降低细胞的组胺和β-氨基己糖苷酶释放量，发挥治疗假性变态反应的作用。
10.本发明还提供一种防治假性变态反应的药物，包含干扰plk1基因表达的sirna。
11.进一步地，所述sirna的核苷酸序列如seq id no：5-6所示。
12.进一步地，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂或喷雾剂。
13.进一步地，所述药物服用方法为口服或非经肠胃形式服用。
14.本发明还提供一种plk1的干扰rna，所述干扰rna具有如seq id no：5-6所示的核苷酸序列。
15.本发明公开了以下技术效果：
16.本发明经体外细胞实验，证实敲低plk1表达水平能够改善c48/80诱导的rbl-2h3细胞脱颗粒时的形态变化，减少细胞凋亡，降低ha和β-hex释放量，对假性变态反应具有明显的改善作用。本发明证实plk1对假性变态反应具有显著的调控作用，为探究假性变态反应的潜在机制和治疗方法提供理论基础和实验依据。
附图说明
17.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
18.图1为150nm rnaoligo sirna转染荧光图(bar＝100μm)；(a)明场；(b)荧光；
19.图2为plk1定量pcr结果，与正常组比，**p《0.01；
20.图3为plk1蛋白表达结果(n＝3)；(a)western blot检测plk1敲低情况；(b)灰度分析结果，与正常组比，**p《0.01；
21.图4为敲低plk1影响rbl-2h3细胞脱颗粒的中性红染色结果(bar＝100μm)；
22.图5为敲低plk1对rbl-2h3细胞释放β-hex的影响，与正常组比，**p《0.01；与模型组比，##p《0.01；
23.图6为敲低plk1对rbl-2h3细胞释放组胺的影响，与正常组比，**p《0.01；与模型组比，##p《0.01；
24.图7为敲低plk1对rbl-2h3细胞凋亡的影响(bar＝200μm)；
25.图8为敲低plk1对rbl-2h3细胞凋亡情况统计，与正常组比，**p《0.01；与模型组比，##p《0.01。
具体实施方式
26.现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
27.应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
28.除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的
实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
29.在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
30.关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
31.肥大细胞(mast cells,mcs)表面的mrgprx2受体被发现可能成为诱发假性变态反应的重要受体，mrgprx2是一种低选择性的受体，这使得其能够与多种配体相互作用，如c48/80、阿片类药物、神经阻断剂等化合物。化合物c48/80是n-甲基-对甲氧基苯乙胺与甲醛的合成缩聚物，在分化的mcs、成熟的mcs、lad2mcs和cd341细胞来源的mcs中具有脱颗粒活性，常用于研究人类和啮齿动物的mcs脱颗粒。rbl-2h3是大鼠嗜碱性粒细胞，该细胞能模拟有关mcs的生理、病理反应，其胞质内含有丰富的嗜碱性颗粒，当受到抗原或者非抗原物质刺激，可释放组胺、β-氨基己糖苷酶、白细胞介素、tnf-α等物质，因此rbl-2h3细胞成为了替代mcs，研究脱颗粒反应经典细胞模型。在本研究中，采用化合物c48/80诱导rbl-2h3细胞构建细胞脱颗粒模型，模拟肥大细胞脱颗粒的过程，用以研究假性变态反应的发生机制。
32.本发明前期通过转录组测序筛选假性变态反应相关基因，通过c48/80诱导rbl-2h3细胞脱颗粒，提取rna进行转录组测序获得差异基因，对其进行go和kegg富集分析筛选出显著富集信号通路，通过对富集通路相关基因进行差异倍数筛选并结合文献资料，最终选择plk1作为研究目的基因，利用qpcr技术和蛋白免疫印迹技术对plk1进行表达量验证发现，plk1在c48/80诱导的rbl-2h3细胞中表达水平明显升高，表明plk1与假性变态反应密切相关。由此开展研究验证plk1调控假性变态反应的作用，具体如下：
33.实施例1敲低plk1基因对假性变态反应的影响
34.1实验试剂及仪器
35.1.1实验材料
36.敲低plk1基因的rnai序列plk1-sirna-1、plk1-sirna-2、plk1-sirna-3，以及阴性对照序列nc，nc-fam由吉玛制药技术有限公司合成。
37.1.2实验试剂
38.表1
[0039][0040]
2实验方法
[0041]
2.1sirna-plk1转染并验证转染效率
[0042]
2.1.1sirna-plk1转染
[0043]
转染试剂用gp-transfect-mate，转染150nm nc-fam序列，转染6h后于荧光显微镜下对转染效果进行观察。sirna序列设计如下所示。
[0044]
plk1 sirna-1：
[0045]
ggugcaucauguauaccuutt(seq id no：1)；
[0046]
aagguauacaugaugcacctt(seq id no：2)；
[0047]
plk1 sirna-2：
[0048]
ccgaggauccugcuugcautt(seq id no：3)；
[0049]
augcaagcaggauccucggtt(seq id no：4)；
[0050]
plk1 sirna-3：
[0051]
gcacacgcagcgccaucautt(seq id no：5)；
[0052]
augauggcgcugcgugugctt(seq id no：6)；
[0053]
negative control：
[0054]
uucuccgaacgugucacgutt(seq id no：7)；
[0055]
acgugacacguucggagaatt(seq id no：8)；
[0056]
negative control fam：
[0057]
uucuccgaacgugucacgutt(seq id no：9)；
[0058]
acgugacacguucggagaatt(seq id no：10)。
[0059]
(1)胰蛋白酶消化对数生长期rbl-2h3细胞，计数3
×
105个接种于6孔板中，mem完全培养基2ml/孔，于37℃培养箱中培养。设置正常组：无处理；阴性对照组：转染nc-sirna序列；sirna组：转染plk1 sirna-1，plk1 sirna-2，plk1 sirna-3；每组3个复孔。
[0060]
(2)将gp-transfect-mate转染试剂放置于室温中，使用前轻轻混匀。
[0061]
(3)在1.5ml无酶离心管中加入193μl无血清培养基，缓慢滴加7μl gp-transfect-mate转染试剂，用移液枪轻轻混匀，室温下静置5min。
[0062]
(4)取另一1.5ml无酶离心管，加入190μl无血清培养基，缓慢滴加10μl sirna(100nm)，移液枪轻轻混匀，室温下静置5min。
[0063]
(5)将gp-transfect-mate培养基混合物滴加到sirna培养基混合物中，用移液枪轻轻混匀，室温静置20min，立即转染。
[0064]
(6)将预先接种好的六孔板从培养箱中取出，显微镜下观察细胞密度，吸去原有培养基，每孔换上1.6ml新鲜培养基。
[0065]
(7)将400μl转染混合物加入孔中，终体系为2ml，加完后轻轻晃动六孔板是混合物分布均匀。
[0066]
(8)37℃培养细胞，6h后更换为完全培养基。
[0067]
2.1.2定量pcr检测plk1表达
[0068]
(1)抽提总rna及反转录
[0069]
收集2.1.1中转染36h的细胞，采用细胞组织rna抽提试剂盒(takara rnaiso plus)提取rna后，按照fastquantcdna第一链合成试剂盒(primescript
tm
rt reagent kitwith gdna eraser)说明书的步骤将rna反转为cdna。上述试剂盒均购自takara公司。
[0070]
(2)扩增plk1基因
[0071]
根据基因mrna全序列，引物设计如下表所示：
[0072]
表2
[0073][0074]
pcr反应体系：2
×
flash hot start mastermix(dye)25μl、forward primer，10μm 1μl、reverse primer，10μm 1μl、template cdna 2μl、ddh2o up to25μl。
[0075]
冰上配置反应体系，设置pcr反应条件：98℃，10s；55℃，5s；72℃，10s；30次循环。产物用1.5％琼脂糖凝胶进行检测，凝胶电泳显像仪拍照。
[0076]
2.1.3westernblot检测plk1蛋白的表达
[0077]
收集2.1.1中转染72h的细胞，进行蛋白表达的检测。检测步骤如下所示：
[0078]
(1)提取蛋白
[0079]
从37℃培养箱中取出六孔板，酒精消毒后进行操作，弃去旧培养基，向六孔板中每孔加入150μl细胞裂解液，移液枪反复吹打，转移至1.5ml离心管，冰浴10min，4℃12000g离心5min，取上清液于新的离心管中，-20℃保存。
[0080]
(2)蛋白定量
[0081]
采用bca蛋白定量法检测提取蛋白浓度，根据测量结果对各组蛋白浓度进行调整。
[0082]
(3)免疫印迹
[0083]
(a)蛋白变性处理。向样品中加入四分之一体积的sds-page蛋白上样缓冲液，100℃煮沸5至10min，冷却至室温后离心，-20℃下保存。
[0084]
(b)电泳。制备10％分离胶，5％浓缩胶，将1
×
电泳缓冲液加入电泳槽中，每孔加入20μg蛋白。电泳程序：浓缩胶80v恒压30min；分离胶120v恒压90min。
[0085]
(c)转印。将胶、滤纸、pvdf膜放入转印缓冲液中静置10min后放入转膜仪中进行转膜，转膜条件为22v恒压45min。
[0086]
(d)封闭。采用5％脱脂奶粉封闭蛋白，室温下置于摇床振摇2h。
[0087]
(e)一抗孵育。封闭完成后取出pvdf膜，使用1
×
tbst清洗三次，每次10min，4℃下一抗孵育过夜。
[0088]
(f)二抗孵育。一抗孵育结束后，用1
×
tbst清洗pvdf膜3次，每次10min。室温下二抗孵育1h，孵育结束后，1
×
tbst清洗pvdf膜3次，每次10min。
[0089]
(g)显影。漂洗完成后，配制ecl发光液，将发光液均匀滴加在pvdf膜上，静置2-3min，放入成像仪中进行拍照观察。
[0090]
2.2敲低plk1对rbl-2h3细胞形态的影响
[0091]
胰蛋白酶消化对数生长期rbl-2h3细胞，计数105个接种于24孔板中，mem完全培养基1ml/孔。设置正常组：加dmso；模型组：加c48/80；敲低组：转染sirna-plk1序列，加c48/80；阴性对照组：转染nc序列，加c48/80；每组3个复孔。转染36h后，模型组加入200μl完全培养基，c48/80浓度为25μg/ml，正常组加入完全培养基，含同等体积dmso，30min后置于冰盒终止反应。加入中性红染料，按说明书操作。敲低组、阴性对照组转染步骤如下所示：
[0092]
(1)分别取sirna-plk1 rna oligo，sirna-nc rna oligo3.75μl/孔，用无血清培养基稀释至50μl(150nm)，混匀。
[0093]
(2)取gp-transfect-mate转染试剂2μl/孔，用无血清培养基稀释至50μl，混匀。
[0094]
(3)将gp-transfect-mate-培养基混合物滴加到稀释后的质粒-培养基混合物中，混匀，室温静置20min。
[0095]
(4)将100μl转染试剂/质粒混合液均匀缓慢滴加到预先放置的无血清培养基中形成500μl培养基。
[0096]
(5)恒温培养箱培养6h后更换为完全培养基。
[0097]
2.3敲低plk1对rbl-2h3细胞释放β-hex的影响
[0098]
胰酶消化对数生长期rbl-2h3细胞，细胞计数8
×
104个/孔接种于24孔板。细胞分为四组，正常组：加dmso；模型组：加c48/80；敲低组：转染sirna-plk1-3，加c48/80；阴性对照组：转染nc-sirna序列，加入c48/80；同时设置空白孔；每组3个复孔。转染12h后更换培养基，24h后除正常组与空白孔外，模型组加入200μl完全培养基，c48/80浓度为25μg/ml，正常组加入完全培养基，含同等体积dmso，10min后置于冰盒终止反应。吸取上清液至离心管中，
设置参数：4℃，2500rpm，离心6min，取上清液备用。向空白孔细胞中加入0.1％tritonx-100，裂解10min。设置参数：4℃，11000rpm，离心6min，取空白孔细胞裂解液上清液为总酶孔上清液。每组向96孔板中加入50μl上清液和50μl显色液，静置1h后，加入200μl终止液，405nm下检测od值，记录数值。β-hex释放率计算方法如下所示：
[0099]
β-hex释放率(％)＝(实验组上清od值-空白孔上清od值)/(总酶孔od值-空白孔上清od值)
×
100％
[0100]
2.4敲低plk1对rbl-2h3细胞释放组胺的影响
[0101]
胰酶消化对数生长期rbl-2h3细胞，24孔板接种细胞8
×
104个/孔，细胞分组同2.3。敲低转染12h后，更换培养基，24h后除正常组外，每组加入200μl完全培养基，c48/80浓度为25μg/ml，正常组加入完全培养基，含同等体积dmso，30min后于显微镜下观察，10min后置于冰盒终止反应。取上清，4℃，3000rpm，离心5min，按组胺检测试剂盒操作。
[0102]
2.5敲低plk1对rbl-2h3细胞凋亡的影响
[0103]
采用ao/eb双染色法观察rbl-2h3细胞脱颗粒时的凋亡变化。胰酶消化对数生长期rbl-2h3细胞，24孔板接种8
×
104个/孔，细胞分组同2.2。转染12h后，更换培养基，24h后除正常组外，每组加入200μl完全培养基，c48/80浓度为25μg/ml，正常组加入完全培养基，含同等体积dmso，30min后于显微镜下观察，10min后置于冰盒终止反应。使用ao/eb试剂盒检测细胞凋亡情况，荧光显微镜下随机选择5个视野内300个细胞进行观察并记录，凋亡率计算方法如下所示：
[0104]
凋亡率(％)＝(凋亡细胞)/(正常细胞+坏死细胞)
×
100％。
[0105]
2.6统计学分析
[0106]
spss22.0软件用于统计分析，数据结果以均数
±
标准差表示，单因素方差分析进行多样本间两两比较，p《0.05即有统计学差异。
[0107]
3实验结果
[0108]
3.1plk1转染效果验证
[0109]
3.1.1sirna转染效率验证
[0110]
利用带有荧光的nc-fam对转染效率进行验证，结果如图1所示，在150nm浓度nc-fam下细胞内出现明显的荧光，说明转染效率较好，因此最终选择在150nm浓度进行基因转染。
[0111]
3.1.2plk1定量pcr结果
[0112]
rna提取浓度及质量如表3所示，a260/a280均在1.9-2.2之间，表明提取rna质量良好。定量pcr结果如图2所示，plk-sirna-3的敲低效果最为显著，因此选用plk-sirna-3进行后续实验。
[0113]
表3
[0114]
[0115][0116]
3.1.3plk1蛋白表达结果
[0117]
wb验证plk1蛋白表达，结果如图3所示，plk1-sirna-3能够显著抑制plk1的表达，降低程度显著优于另两条sirna，与定量pcr结果一致，所以选择plk1-sirna-3作为敲低plk1的sirna。
[0118]
3.2敲低plk1对rbl-2h3细胞形态的影响
[0119]
如图4所示，经中性红染色后，正常组rbl-2h3细胞边缘光滑，成正常形态梭形，细胞内部有均匀红色颗粒。与正常组相比，c48/80刺激后的模型组与阴性对照组细胞形态明显发生肿胀变形、着色不均等现象。利用sirna降低plk1表达后，细胞的肿胀度明显改善，细胞内中性红着色较为均匀。结果表明plk1表达降低可以明显减轻c48/80诱导rbl-2h3细胞脱颗粒时形态的改变。
[0120]
3.3敲低plk1对rbl-2h3细胞释放β-hex的影响
[0121]
结果如图5所示，与正常组相比，模型组和阴性对照组的β-hex释放率明显升高，而降低plk1表达后，敲低组的β-hex释放率显著下降，与模型组具有明显差异，表明plk1降低可能减少肥大细胞炎症介质的释放。
[0122]
3.4敲低plk1对rbl-2h3细胞释放组胺的影响
[0123]
组胺是肥大细胞脱颗粒是释放的主要介质之一，检测组胺释放能够观察肥大细胞的脱颗粒情况。结果如图6所示，与正常组相比，模型组与阴性对照组的组胺释放量显著升高，而plk1表达被降低后，组胺的释放量明显减少，表明肥大细胞的脱颗粒现象被抑制。
[0124]
3.5敲低plk1对rbl-2h3细胞凋亡的影响
[0125]
经过ao/eb染色后，正常存活细胞应呈现出绿色荧光，形态正常，而凋亡细胞则呈现红色荧光，并呈现为圆形形态。结果如图7所示，正常组细胞均呈现出绿色荧光，形态无异常，模型组与正常组相比，呈现出明显的红色荧光，凋亡明显增多，而plk1表达降低后则明显改善了这一情况(图8)。
[0126]
4结果分析
[0127]
小干扰rna(smallinterferingrna,sirna)，也被称为短干扰rna或沉默rna、非编码rna。sirna的概念于1998年被发现，是一种天然存在的防御机制，由内切酶切割双链rna形成的具有特定序列的小片段rna，用于抵御外来基因的入侵。这些sirna可以与外源基因表达的mrna相结合，并诱导相应mrna降解。sirna被发现以来就一直被广泛用于沉默多种基因的rna，由于其能够沉默与任何疾病相关的基因，该方法操作简单，比基因敲除方法crispr/cas9技术要求低，是研究基因功能的常用实验方法。
[0128]
rbl-2h3细胞作为经典的用于研究假性变态反应的细胞，其可行性和有效性已被多个研究所证实。rbl-2h3细胞含有丰富的嗜碱性颗粒，正常形态下，rbl-2h3形态呈不规则
梭形，在受到抗原或非抗原物质刺激后，释放多种炎性介质，细胞形态会迅速肿胀变圆，细胞内颗粒分布不均。用中性红染液对rbl-2h3细胞染色，发现c48/80诱导的rbl-2h3细胞出现明显的变圆肿胀现象，且着色不均匀，敲低plk1基因后，细胞形态异常的现象明显减少，表明plk1表达降低减少了rbl-2h3细胞炎症介质的释放，对假性变态反应具有明显的改善作用。
[0129]
rbl-2h3细胞胞质内含有多种炎性介质，在外来刺激作用下，能够释放组胺、β-hex、白介素等物质。组胺和β-hex是mcs脱颗粒的重要标志物，组胺是一种有机含氮化合物，由组氨酸脱羧反应产生，广泛分布于皮肤、肺、肠粘膜等组织的mcs中，发生炎症和过敏反应时，组胺即可释放出来引起血管舒张，组织水肿等症状。本实验发现，降低plk1表达后，rbl-2h3细胞的β-hex和组胺释放量相对于模型组明显减少，表明plk1表达降低能够抑制细胞脱颗粒的现象。ao/eb荧光染色法是检测细胞凋亡的经典方法，ao/eb可用于识别细胞凋亡过程中，细胞膜的相关变化，能够直观地看出细胞的凋亡情况，具有简洁直观、成本较低的优势。通过ao/eb染色可看出，plk1表达降低能够抑制c48/80诱导的rbl-2h3细胞凋亡现象。
[0130]
综合上述，本发明经体外细胞实验，证实敲低plk1表达水平能够改善c48/80诱导的rbl-2h3细胞脱颗粒时的形态变化，减少细胞凋亡，降低ha和β-hex释放量，对假性变态反应具有明显的改善作用。本发明证实plk1对假性变态反应具有显著的调控作用，为探究假性变态反应的潜在机制和治疗方法提供理论基础和实验依据。
[0131]
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

技术特征：
1.一种敲低plk1的试剂在制备防治假性变态反应药物中的应用，其特征在于，所述试剂包括干扰plk1基因表达的sirna。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述sirna的核苷酸序列如seq id no：5-6所示。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述sirna通过改善肥大细胞脱颗粒的形态变化，减少细胞凋亡，以及降低细胞的组胺和β-氨基己糖苷酶释放量，发挥治疗假性变态反应的作用。4.一种防治假性变态反应的药物，其特征在于，包含干扰plk1基因表达的sirna。5.根据权利要求4所述的药物，其特征在于，所述sirna的核苷酸序列如seq id no：5-6所示。6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂或喷雾剂。7.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述药物服用方法为口服或非经肠胃形式服用。8.一种plk1的干扰rna，其特征在于，所述干扰rna具有如seq id no：5-6所示的核苷酸序列。

技术总结
本发明公开了一种PLK1的干扰RNA及其应用，属于生物医药技术领域。本发明公开了一种敲低PLK1的试剂在制备防治假性变态反应药物中的应用，所述试剂包括干扰PLK1基因表达的siRNA，该siRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：5-6所示。本发明经体外细胞实验，证实敲低PLK1表达水平能够改善C48/80诱导的RBL-2H3细胞脱颗粒时的形态变化，减少细胞凋亡，降低HA和β-HEX释放量，对假性变态反应具有明显的改善作用；本发明证实PLK1对假性变态反应具有显著的调控作用，为探究假性变态反应的潜在机制和治疗方法提供理论基础和实验依据。疗方法提供理论基础和实验依据。疗方法提供理论基础和实验依据。


技术研发人员：刘中成 赵跃 许峰 温占波 谭之磊
受保护的技术使用者：河北渤腾医药技术有限公司
技术研发日：2023.06.06
技术公布日：2023/9/7