一种酪胺生产菌株及其构建方法与应用

1.本发明涉及发酵工程技术领域，尤其是一种酪胺生产菌株及其构建方法与应用。


背景技术：

2.酪胺(l-tyrami ne)又名对羟基苯乙胺，是一种生物胺。在医药、化妆品、保健、化工等行业具有重要应用。
3.目前酪胺合成方法主要为化学合成法、酶催化法和微生物发酵法。化学合成法存在环境污染较大，转化率较低的问题；酶催化法是由酪氨酸脱羧酶作为关键酶催化酪氨酸底物生成酪胺，此方法对环境污染少，反应条件温和，但在催化过程中需要添加酪氨酸底物，增加了生产成本；微生物发酵法是以葡萄糖作为微生物生长的能量来源，微生物从头合成酪胺，无需添加底物，减少了生产成本，发酵过程条件温和，具有工业化生产的潜力。
4.酪胺发酵过程中的关键酶是酪氨酸脱羧酶，其依赖磷酸吡哆醛催化酪氨酸脱羧生成酪胺并释放co2。通常来讲辅因子plp添加量较少时，不满足酪氨酸脱羧酶催化的要求，会造成酪胺的生成量降低；当plp添加量较多的时候，导致部分辅因子没有起到作用，造成资源的浪费。因此为了避免这两种情况的出现，需要探究酪胺发酵过程中最适plp添加量，为后续酪胺发酵工艺的优化做铺垫。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的技术问题在于提供一种酪胺生产菌株。
6.本发明所要解决的技术问题在于提供上述酪胺生产菌株的构建方法。
7.本发明所要解决的技术问题在于提供上述酪胺生产菌株的应用。
8.为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
9.一种酪胺生产菌株，是利用代谢工程改造方法在出发菌株e.coliw3110基础上进行进一步改造获得的，具体为对tyna、tyra
fbr
、arog
fbr
、tyrb、tdc、tyrp基因的表达强度进行调整，其中：
10.在e.coli w3110基因组上敲除tyna基因，使其不表达，
11.在yciq假基因位点使用p
trc
启动子控制tyra
fbr
基因过表达，
12.在mbha假基因位点使用p
trc
启动子控制arog
fbr
基因过表达，
13.在yeel假基因位点使用p
trc
启动子控制tyrb基因过表达，
14.在ygay假基因位点使用p
trc
启动子控制tdc基因异源表达，
15.在yjit假基因位点使用p
trc
启动子控制tyrp基因过表达。
16.优选的，上述酪胺生产菌株，所述代谢工程改造方法为crispr-cas9基因编辑技术。
17.优选的，上述酪胺生产菌株，所述出发菌株为e.coliw3110，保藏号为atcc273250。
18.优选的，上述酪胺生产菌株，所述酪胺氧化酶基因tyna，来源于大肠杆菌，敲除该基因可有效减少酪胺的分解代谢，以达到酪胺积累的目的。
19.优选的，上述酪胺生产菌株，所述预苯酸脱氢酶基因tyra
fbr
，为大肠杆菌突变后的tyra
fbr
基因，其编码酪氨酸合成的第一个酶，突变后可解除负反馈抑制作用，该酶可有效提高酪胺前体物酪氨酸的产量。
20.优选的，上述酪胺生产菌株，所述dahp合成酶基因arog
fbr
，为大肠杆菌突变后的arog
fbr
基因，其编码莽草酸途径的第一个酶，同时也是该途径的关键酶，突变后可解除负反馈抑制作用，其可提高酪胺前体物的产量。
21.优选的，上述酪胺生产菌株，所述芳香族氨基转移酶tyrb基因，来源于大肠杆菌，其编码的酶可促进酪胺的前体物质酪氨酸的积累。
22.优选的，上述酪胺生产菌株，所述酪氨酸脱羧酶tdc基因，来源于短乳杆菌密码子优化后的tdc基因，其编码催化酪胺生成的关键酶。
23.优选的，上述酪胺生产菌株，所述酪氨酸转运蛋白tyrp基因，来源于大肠杆菌，其可促进菌体吸收酪氨酸，并将胞内产物酪胺转运到胞外。
24.上述酪胺生产菌株的构建方法，在出发菌株e.coliw3110基础上进行进一步定向改造，具体步骤如下：
25.(1)在出发菌株e.coli w3110基因组上敲除tyna基因得到菌株tym01；
26.(2)以菌株tym01为出发菌株，在yciq假基因位点使用p
trc
启动子控制tyra
fbr
基因过表达得到菌株tym02；
27.(3)以菌株tym02为出发菌株，在mbha假基因位点使用p
trc
启动子控制arog
fbr
基因过表达得到菌株tym03；
28.(4)以菌株tym03为出发菌株，在yeel假基因位点使用p
trc
启动子控制tyrb基因过表达得到菌株tym04；
29.(5)以菌株tym04为出发菌株在ygay假基因位点使用p
trc
启动子控制tdc基因异源表达得到菌株tym05；
30.(6)以菌株tym05为出发菌株在yjit假基因位点使用p
trc
启动子控制tyrp基因过表达得到菌株tym06，菌株tym06即为改造成功后的目的菌。
31.优选的，上述酪胺生产菌株的构建方法，所述p
trc
启动子具有序列表seq id no.1所示核苷酸序列；所述tyna基因具有序列表seq id no.2所示核苷酸序列；所述tyra
fbr
基因具有序列表seq id no.3所示核苷酸序列；所述arog
fbr
基因具有序列表seq id no.4所示核苷酸序列；所述tyrb基因具有序列表seq id no.5所示核苷酸序列；所述tdc基因具有序列表seq id no.6所示核苷酸序列；所述tyrp基因具有序列表seq id no.7所示核苷酸序列。
32.上述酪胺生产菌株在发酵生产酪胺方面的应用。
33.优选的，上述酪胺生产菌株的应用，具体步骤如下：
34.(1)种子培养：使用5l机械搅拌式发酵罐，培养温度为37℃，通过自动流加25％氨水溶液维持培养ph在7.0
±
0.2，通过调整搅拌转速或通风量维持培养溶氧值为30％，当od
600nm
为15时达到接种要求；
35.(2)发酵培养：使用5l机械搅拌式发酵罐，接种量为20％，培养温度为37℃，通过自动流加25％氨水溶液维持培养ph在7.0
±
0.2，通过调整搅拌转速或通风量维持培养溶氧值为30％，通过流加80％葡萄糖溶液将罐内葡萄糖浓度控制在≤0.5g/l，发酵周期≤36h。
36.上述酪胺生产菌株的应用，酪胺生产菌株利用葡萄糖作为底物，高效稳定的从头
合成酪胺，发酵36h时生产酪胺13g/l。
37.优选的，上述酪胺生产菌株的应用，所述种子培养中采用的种子培养基：葡萄糖20g/l，酵母3g/l，蛋白胨1g/l，(nh4)2so
4 1g/l，k2hpo4·
3h2o 2g/l，mgso4·
7h2o 2g/l，柠檬酸1.5g/l，mnso4·
h2o 5mg/l，feso4·
7h2o 10mg/l。
38.优选的，上述酪胺生产菌株的应用，所述发酵培养中采用的发酵培养基：葡萄糖15g/l，酵母粉3.5g/l，蛋白胨1g/l，(nh4)2so
4 2g/l，k2hpo4·
3h2o 2g/l，mgso4·
7h2o 2g/l，谷氨酸2g/l，甲硫氨酸0.5g/l，磷酸吡哆醛50mg/l，mnso4·
h2o 10mg/l，feso4·
7h2o 30mg/l。
39.优选的，上述酪胺生产菌株的应用，在发酵培养初始阶段向发酵培养基中分别添加0.90mg/gdcw、1.15mg/gdcw、1.27mg/gdcw、1.51mg/gdcw或2.01mg/gdcw的plp辅因子。
40.优选的，上述酪胺生产菌株的应用，所述plp辅因子的添加量为1.51mg/gdcw。
41.有益效果：
42.上述酪胺生产菌株，通过酪胺代谢合成途径采用从头合成的定向改造方法获得，以葡萄糖为碳源，无需添加酪氨酸底物，生产成本低，具有生产速率高，发酵周期短，菌株稳定性高的优点，具有很高的经济效益；应用过程中，对发酵过程中plp的添加量进行优化，一方面能够保证酪氨酸脱羧酶的催化需求，另一方面能够避免高浓度plp辅因子造成的资源浪费，节约生产成本，提高生产效益，为实现酪胺的大规模生产奠定基础。
附图说明
43.图1为酪胺生产菌株从头合成途径基因改造过程图。
具体实施方式
44.为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。
45.实施例中涉及到的百分号“％”，若未特别说明，指质量百分比，溶液的百分比指100ml中含有溶质的克数，液体之间的百分比，是指在25℃时溶液的体积比例。
46.实施例中所用的出发菌株e.coliw3110，保藏号为atcc 273250。
47.实施例1
48.1.基因编辑的方法
49.采用的基因编辑方法参照文献(li y，lin z，huang c，et al.metabolic engineering of escherichia coli using crispr-cas9 meditated genome editing.metabolic engineering，2015，31：13-21.)。该方法涉及的工程质粒predcas9、pgrb，其中predcas9携带grna表达质粒pgrb的消除系统、λ噬菌体的red重组系统、cas9蛋白表达系统以及奇霉素抗性(工作浓度：100mg/l)；pgrb以puc18为骨架，包括启动子j23100、grna-cas9结合区域序列和终止子序列以及氨节青霉素抗性(工作浓度：100mg/l)。下述实施例2-4中涉及到的专业名词均可在该文章中解释。
50.2.菌株构建过程中用到的引物见表1。
51.表1菌株构建过程中所涉及的引物
52.53.[0054][0055]
实施例2
[0056]
本实施例旨在说明敲除基因组tyna基因的步骤，具体步骤如下：
[0057]
①
以大肠杆菌w3110基因组为模板，分别以tyna-u-s、tyna-u-a与tyna-d-s、tyna-d-a为引物，通过hs酶pcr扩增获得到上游同源臂和下游同源臂，再以其为模板，通过hs酶重叠pcr获得δtyna基因敲除片段，所述基因整合片段由tyna上游同源臂和tyna下游同源臂组成。
[0058]
②
以pgrb-tyna-s和pgrb-tyna-a为引物，通过pcr退火程序构建pgrb-tyna使用的含靶序列的dna片段，并将其化转至dh5α化转感受态细胞中，筛选获得阳性转化子，提取质粒pgrb-tyna；
[0059]
③
将步骤
②
、
③
中得到的δtyna基因敲除片段与pgrb-tyna质粒电转进入e.coliw3110菌株中，经过筛选获得阳性转化子，并命名为tym01。
[0060]
实施例3
[0061]
本实施例旨在说明在yciq假基因位点使用p
trc
启动子控制tyra
fbr
基因过表达的步骤，具体步骤如下：
[0062]
①
以大肠杆菌w3110基因组为模板，分别以yciq-u-s、yciq-u-a、yciq-d-s、yciq-d-a与tyra
fbr-s、tyra
fbr-a为引物，通过hs酶pcr扩增获得到上游同源臂、下游同源臂与目的基因片段，再以其为模板，通过hs酶重叠pcr获得p
trc-tyra
fbr
(yciq)基因整合片段，所述基
因整合片段由yciq上游同源臂、p
trc-tyra
fbr
目的基因和yciq下游同源臂组成。
[0063]
②
以pgrb-yciq-s和pgrb-yciq-a为引物，通过pcr退火程序构建pgrb-yciq使用的含靶序列的dna片段，并将其化转至dh5α化转感受态细胞中，筛选获得阳性转化子，提取质粒pgrb-yciq。
[0064]
③
将步骤
②
、
③
中得到的p
trc-tyra
fbr
(yciq)基因整合片段与pgrb-yciq质粒电转进入tym01菌株中，经过筛选获得阳性转化子，并命名为tym02。
[0065]
实施例4
[0066]
本实施例旨在说明在mbha假基因位点使用p
trc
启动子控制arog
fbr
基因过表达的步骤，具体步骤如下：
[0067]
①
以大肠杆菌w3110基因组为模板，分别以mbha-u-s、mbha-u-a、mbha-d-s、mbha-d-a与arog
fbr-s、arog
fbr-a为引物，通过hs酶pcr扩增获得到上游同源臂、下游同源臂、与目的基因片段，再以其为模板，通过hs酶重叠pcr获得p
trc-arog
fbr
(mbha)基因整合片段，所述基因整合片段由mbha上游同源臂、p
trc-arog
fbr
目的基因和mbha下游同源臂组成。
[0068]
②
以pgrb-mbha-s和pgrb-mbha-a为引物，通过pcr退火程序构建pgrb-mbha使用的含靶序列的dna片段，并将其化转至dh5α化转感受态细胞中，筛选获得阳性转化子，提取质粒pgrb-mbha。
[0069]
③
将步骤
②
、
③
中得到的p
trc-arog
fbr
(mbha)基因整合片段与pgrb-mbha质粒电转进入tym02菌株中，经过筛选获得阳性转化子，并命名为tym03。
[0070]
实施例5
[0071]
本实施例旨在说明在yeel假基因位点使用p
trc
启动子控制tyrb基因过表达的步骤，具体步骤如下：
[0072]
①
以大肠杆菌w3110基因组为模板，分别以yeel-u-s、yeel-u-a、yeel-d-s、yeel-d-a与tyrb-s、tyrb-a为引物，通过hs酶pcr扩增获得到上游同源臂、下游同源臂、与目的基因片段，再以其为模板，通过hs酶重叠pcr获得p
trc-tyrb(yeel)基因整合片段，所述基因整合片段由yeel上游同源臂、p
trc-tyrb目的基因和yeel下游同源臂组成。
[0073]
②
以pgrb-yeel-s和pgrb-yeel-a为引物，通过pcr退火程序构建pgrb-yeel使用的含靶序列的dna片段，并将其化转至dh5α化转感受态细胞中，筛选获得阳性转化子，提取质粒pgrb-yeel。
[0074]
③
将步骤
②
、
③
中得到的p
trc-tyrb(yeel)基因整合片段与pgrb-yeel质粒电转进入tym03菌株中，经过筛选获得阳性转化子，并命名为tym04。
[0075]
实施例6
[0076]
本实施例旨在说明在ygay假基因位点使用p
trc
启动子控制tdc基因异源表达的步骤，具体步骤如下：
[0077]
①
以大肠杆菌w3110基因组为模板，分别以ygay-u-s、ygay-u-a、ygay-d-s、ygay-d-a与tdc-s、tdc-a为引物，通过hs酶pcr扩增获得到上游同源臂、下游同源臂、与目的基因片段，再以其为模板，通过hs酶重叠pcr获得p
trc-tdc(ygay)基因整合片段，所述基因整合片段由ygay上游同源臂、p
trc-tdc目的基因和ygay下游同源臂组成。
[0078]
②
以pgrb-ygay-s和pgrb-ygay-a为引物，通过pcr退火程序构建pgrb-ygay使用的含靶序列的dna片段，并将其化转至dh5α化转感受态细胞中，筛选获得阳性转化子，提取质
粒pgrb-ygay。
[0079]
③
将步骤
②
、
③
中得到的p
trc-tdc(ygay)基因整合片段与pgrb-ygay质粒电转进入tym04菌株中，经过筛选获得阳性转化子，并命名为tym05。
[0080]
实施例7
[0081]
本实施例旨在说明在yjit假基因位点使用p
trc
启动子控制tyrp基因过表达的步骤，具体步骤如下：
[0082]
①
以大肠杆菌w3110基因组为模板，分别以yjit-u-s、yjit-u-a、yjit-d-s、yjit-d-a与tyrp-s、tyrp-a为引物，通过hs酶pcr扩增获得到上游同源臂、下游同源臂、与目的基因片段，再以其为模板，通过hs酶重叠pcr获得p
trc-tyrp(yjit)基因整合片段，所述基因整合片段由yjit上游同源臂、p
trc-tyrp目的基因和yjit下游同源臂组成。
[0083]
②
以pgrb-yjit-s和pgrb-yjit-a为引物，通过pcr退火程序构建pgrb-yjit使用的含靶序列的dna片段，并将其化转至dh5α化转感受态细胞中，筛选获得阳性转化子，提取质粒pgrb-yjit。
[0084]
③
将步骤
②
、
③
中得到的p
trc-tyrp(yjit)基因整合片段与pgrb-yjit质粒电转进入tym05菌株中，经过筛选获得阳性转化子，并命名为tym06。
[0085]
实施例8
[0086]
以tym06为酪胺生产菌株，本实施例旨在说明应用该生产菌株生产酪胺的方法，具体培养方式如下：
[0087]
种子培养：使用5l机械搅拌式发酵罐，培养温度为36.5℃，通过自动流加25％氨水溶液维持培养ph在7.0
±
0.2，通过调整搅拌转速或通风量维持培养溶氧值为30％，当od
600nm
为15时达到接种要求；采用的种子培养基为：葡萄糖20g/l，酵母3g/l，蛋白胨1g/l，(nh4)2so
4 1g/l，k2hpo4·
3h2o 2g/l，mgso4·
7h2o 2g/l，柠檬酸1.5g/l，mnso4·
h2o 5mg/l，feso4·
7h2o 10mg/l；
[0088]
发酵培养：使用5l机械搅拌式发酵罐，发酵接种量为20％，培养温度为36.5℃，通过自动流加25％氨水溶液维持培养ph在7.0
±
0.2，通过调整搅拌转速或通风量维持培养溶氧值为30％，通过流加80％葡萄糖溶液将罐内葡萄糖浓度控制在≤0.5g/l，发酵周期为36h；采用的发酵培养基为：葡萄糖15g/l，酵母粉3.5g/l，蛋白胨1g/l，(nh4)2so42g/l，k2hpo4·
3h2o 2g/l，mgso4·
7h2o 2g/l，谷氨酸2g/l，甲硫氨酸0.5g/l，磷酸吡哆醛50mg/l，mnso4·
h2o 10mg/l，feso4·
7h2o 30mg/l。
[0089]
实施例9
[0090]
以tym06为生产菌株，本实施例旨在说明酪胺发酵应用中磷酸吡哆醛的最适用量。具体发酵培养方式如实施例8所示，唯一不同的是发酵培养基中plp的初始浓度，共设置了6个浓度梯度，分别是0mg/l、20mg/l、30mg/l、40mg/l、50mg/l、60mg/l。本发明公开了5组发酵罐发酵36h的数据，分别为添加辅因子plp浓度为20mg/l、30mg/l、40mg/l、50mg/l、60mg/l时的od
600nm
与酪胺产量值，结果如表2所示。
[0091]
表2plp浓度对菌体生物量和酪胺产量的影响
[0092][0093]
由结果可以看出，plp辅因子添加量为1.51mg/g dcw时菌体生物量与酪胺产量达到最高，分别为33.2g dcw与13.1g/l。当plp辅因子添加量较少的时候，增加plp添加量可以有效提高酪胺的产量，但是当添加量过多如2.01mg/gdcw时，不仅没有提高产量，反而会影响酪胺的产生，因此plp辅因子最适添加量为1.51mg/gdcw。
[0094]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，本发明菌株的构建步骤不分先后顺序，本技术领域技术人员以本发明的方法或以本方法为基础进行的菌种改造等改进和润饰均视为本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种酪胺生产菌株，其特征在于：是利用代谢工程改造方法在出发菌株e.coliw3110基础上进行进一步改造获得的，具体为对tyna、tyra
fbr
、arog
fbr
、tyrb、tdc、tyrp基因的表达强度进行调整，其中：在e.coli w3110基因组上敲除tyna基因，使其不表达，在yciq假基因位点使用p
trc
启动子控制tyra
fbr
基因过表达，在mbha假基因位点使用p
trc
启动子控制arog
fbr
基因过表达，在yeel假基因位点使用p
trc
启动子控制tyrb基因过表达，在ygay假基因位点使用p
trc
启动子控制tdc基因异源表达，在yjit假基因位点使用p
trc
启动子控制tyrp基因过表达。2.根据权利要求1所述的酪胺生产菌株，其特征在于：所述代谢工程改造方法为crispr-cas9基因编辑技术。3.根据权利要求1所述的酪胺生产菌株，其特征在于：所述出发菌株为e.coliw3110，保藏号为atcc 273250。4.根据权利要求1所述的酪胺生产菌株，其特征在于：所述酪胺氧化酶基因tyna，来源于大肠杆菌；所述预苯酸脱氢酶基因tyra
fbr
，为大肠杆菌突变后的tyra
fbr
基因；所述dahp合成酶基因arog
fbr
，为大肠杆菌突变后的arog
fbr
基因；所述芳香族氨基转移酶tyrb基因，来源于大肠杆菌；所述酪氨酸脱羧酶tdc基因，来源于短乳杆菌密码子优化后的tdc基因；所述酪氨酸转运蛋白tyrp基因，来源于大肠杆菌。5.权利要求1所述酪胺生产菌株的构建方法，其特征在于：在出发菌株e.coliw3110基础上进行进一步定向改造，具体步骤如下：(1)在出发菌株e.coli w3110基因组上敲除tyna基因得到菌株tym01；(2)以菌株tym01为出发菌株，在yciq假基因位点使用p
trc
启动子控制tyra
fbr
基因过表达得到菌株tym02；(3)以菌株tym02为出发菌株，在mbha假基因位点使用p
trc
启动子控制arog
fbr
基因过表达得到菌株tym03；(4)以菌株tym03为出发菌株，在yeel假基因位点使用p
trc
启动子控制tyrb基因过表达得到菌株tym04；(5)以菌株tym04为出发菌株在ygay假基因位点使用p
trc
启动子控制tdc基因异源表达得到菌株tym05；(6)以菌株tym05为出发菌株在yjit假基因位点使用p
trc
启动子控制tyrp基因过表达得到菌株tym06，菌株tym06即为改造成功后的目的菌。6.根据权利要求5所述的酪胺生产菌株的构建方法，其特征在于：所述p
trc
启动子具有序列表seq id no.1所示核苷酸序列；所述tyna基因具有序列表seq id no.2所示核苷酸序列；所述tyra
fbr
基因具有序列表seq id no.3所示核苷酸序列；所述arog
fbr
基因具有序列表seq id no.4所示核苷酸序列；所述tyrb基因具有序列表seq id no.5所示核苷酸序列；所述tdc基因具有序列表seq id no.6所示核苷酸序列；所述tyrp基因具有序列表seq id no.7所示核苷酸序列。7.权利要求1所述酪胺生产菌株在发酵生产酪胺方面的应用。8.根据权利要求7所述的酪胺生产菌株的应用，其特征在于：具体步骤如下：
(1)种子培养：使用5l机械搅拌式发酵罐，培养温度为37℃，通过自动流加25％氨水溶液维持培养ph在7.0
±
0.2，通过调整搅拌转速或通风量维持培养溶氧值为30％，当od
600nm
为15时达到接种要求；(2)发酵培养：使用5l机械搅拌式发酵罐，接种量为20％，培养温度为37℃，通过自动流加25％氨水溶液维持培养ph在7.0
±
0.2，通过调整搅拌转速或通风量维持培养溶氧值为30％，通过流加80％葡萄糖溶液将罐内葡萄糖浓度控制在≤0.5g/l，发酵周期≤36h。9.根据权利要求8所述的酪胺生产菌株的应用，其特征在于：所述种子培养中采用的种子培养基：葡萄糖20g/l，酵母3g/l，蛋白胨1g/l，(nh4)2so
4 1g/l，k2hpo4·
3h2o 2g/l，mgso4·
7h2o 2g/l，柠檬酸1.5g/l，mnso4·
h2o 5mg/l，feso4·
7h2o 10mg/l；所述发酵培养中采用的发酵培养基：葡萄糖15g/l，酵母粉3.5g/l，蛋白胨1g/l，(nh4)2so
4 2g/l，k2hpo4·
3h2o 2g/l，mgso4·
7h2o 2g/l，谷氨酸2g/l，甲硫氨酸0.5g/l，磷酸吡哆醛50mg/l，mnso4·
h2o 10mg/l，feso4·
7h2o 30mg/l。10.根据权利要求9所述的酪胺生产菌株的应用，其特征在于：在发酵培养初始阶段向发酵培养基中分别添加0.90mg/gdcw、1.15mg/gdcw、1.27mg/gdcw、1.51mg/gdcw或2.01mg/gdcw的plp辅因子。

技术总结
本发明提供了一种酪胺生产菌株及其构建方法与应用，所述酪胺生产菌株采用从头合成的定向改造方法获得，以葡萄糖为碳源，无需添加酪氨酸底物，生产成本低，具有生产速率高，发酵周期短，菌株稳定性高的优点，具有很高的经济效益；应用过程中，利用5L发酵罐，发酵36h时，酪胺的产量为13g/L；对发酵过程中PLP的添加量进行优化，一方面能够保证酪氨酸脱羧酶的催化需求，另一方面能够避免高浓度PLP辅因子造成的资源浪费，节约生产成本，提高生产效益，为实现酪胺的大规模生产奠定基础。酪胺的大规模生产奠定基础。酪胺的大规模生产奠定基础。


技术研发人员：徐庆阳 马零 李旭 陈志超
受保护的技术使用者：天津科技大学
技术研发日：2023.06.14
技术公布日：2023/10/5