一种裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体及其应用

1.本发明属于微生物制剂领域，具体涉及一种裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体及其应用。


背景技术：

2.金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus,s.aureus)也称“金葡菌”，隶属于葡萄球菌属，是革兰氏阳性菌代表，为一种常见的食源性致病微生物，与皮炎的发生与加重密切相关。金葡菌在健康人皮肤中定植率约5-30％，而在皮损患者皮肤上定植率能达到75-100％，非皮损患者皮肤也能达到至少30％。临床上常用抗生素来对抗细菌引起的感染，然而随着抗生素的大规模生产与使用，特别是对抗生素的滥用，催生出大量耐药菌，最终导致多重耐药(multidrug resistant，mdr)菌和eskape超级耐药菌的产生。
3.噬菌体是侵袭细菌的病毒，由于其特异性杀灭病原菌、毒副作用小、不破坏机体正常微生物群和不引发严重内毒血症的特点被视为替代抗生素最有潜力的一种策略，重新引起了研究者们的重视。专利cn109082414a公开了一种金黄色葡萄球菌噬菌体，其对耐药性金黄色葡萄球菌具有良好的体内外抗菌作用。由于其感染复数moi为1时，不能抑制金黄色葡萄球菌，感染复数moi为10时，才能有效治疗金黄色葡萄球菌引起的皮肤感染，而通常moi值越高的细胞越难被感染，因此，其噬菌体抑制耐药性金黄色葡萄球菌的效果并不理想，有必要获得抑制耐药金黄色葡萄球菌效果更好的噬菌体，用于皮肤抗感染治疗。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种裂解金黄色葡萄球菌的噬菌体，所述噬菌体保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为cctcc no:m2023496。
5.进一步地，所述噬菌体是裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体。
6.进一步地，所述噬菌体是裂解皮炎来源的耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体。
7.进一步地，所述耐药金黄色葡萄球菌是耐氯霉素、林可霉素、红霉素、卡那霉素、氨苄青霉素和/或头孢呋辛酯的金黄色葡萄球菌。
8.本发明还提供了一种前述噬菌体在制备抑制金黄色葡萄球菌的抑菌剂中的用途。
9.进一步地，所述抑菌剂是抑制耐药金黄色葡萄球菌的抑菌剂。
10.进一步地，所述抑菌剂是抑制皮炎来源的耐药金黄色葡萄球菌的抑菌剂；所述耐药金黄色葡萄球菌是耐氯霉素、林可霉素、红霉素、卡那霉素、氨苄青霉素和/或头孢呋辛酯的金黄色葡萄球菌。
11.本发明最后提供了一种前述噬菌体在制备抗菌药物中的用途，所述药物是抗金黄色葡萄球菌的药物。
12.进一步地，所述药物是抗耐药金黄色葡萄球菌的药物。
13.进一步地，所述药物具有抑制皮炎来源的耐药金黄色葡萄球菌生长的作用；所述耐药金黄色葡萄球菌是耐氯霉素、林可霉素、红霉素、卡那霉素、氨苄青霉素和/或头孢呋辛
酯的金黄色葡萄球菌。
14.本发明金黄色葡萄球菌噬菌体vb
_
saum_si2(staphylococcus aureus bacteriophage vb
_
saum_si2)，于2023年04月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为cctcc no:m 2023496，保藏地址为：中国武汉，武汉大学，邮编：430072。
15.本发明金黄色葡萄球菌噬菌体，是以金黄色葡萄球菌株做宿主，从污水中分离的裂解性噬菌体，该噬菌体能裂解宿主菌，并在双层平板上形成清晰透亮、边缘整齐、直径约1.65
±
0.24mm的噬菌斑；电镜结果显示其头部直径96
±
3.9nm，颈部长16.4
±
1.4nm，尾部长110
±
4.4nm、直径27
±
0.1nm，尾管长104
±
5.6nm，核酸链型为dsdna，属于caudovirales(尾病毒目)下的myoviridae(肌病毒科)；主要结构蛋白分子量约55kda，低于50℃下60min内具有稳定感染活性，在ph5.0
±
2.0范围内60min内稳定；对宿主菌的最适moi范围为0.03-0.27；能在不同moi范围内抑制皮炎来源耐药金葡菌株生长，具有较好抑菌效果，为耐药金葡菌株引起的皮炎治疗提供了新的更有效的选择。
16.显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
17.以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
18.图1基因组1％琼脂糖凝胶电泳图(a：部分测试细菌基因组，m泳道：dl5000 bp dna marker，泳道1-2：其中两个测试菌株；b：部分测试菌株16s扩增结果，m：dl5000 dna marker，泳道1-8：其中8个测试株)
19.图2测试菌株与参比菌株进化关系树图
20.图3spa分型pcr扩增产物1％琼脂糖凝胶电泳图(m泳道：dl5000 dna marker；1-9泳道：9株皮炎来源金葡菌pcr扩增产物)
21.图4噬菌体vb_saum_si2的噬菌斑和形态(a：噬菌体在双层平板上的噬菌斑；b：噬菌体在透射电镜下的形态)
22.图5基因组和经酶切后1％琼脂糖凝胶电泳图(泳道1均为噬菌体vb
_
saum_si2；a：基因组；泳道m：dl5,000dna marker；b：dnaseι酶切产物；泳道m：dl7,000dna marker；c：rnase a酶切产物；泳道m：dl15,000dna marker；d：exonucleaseι酶切产物；泳道m：dl5,000dna marker)
23.图6噬菌体vb_saum_si2系统发育树
24.图7噬菌体vb
_
saum_si2结构蛋白sds-page分析
25.图8噬菌体vb
_
saum_si2稳定性曲线(a：热稳定性。60min内，噬菌体vb
_
saum_si2在不同温度下的滴度变化，纵坐标为滴度的平均值
±
标准差(sd)；b：ph稳定性；60min内，噬菌体vb
_
saum_si2在不同ph下的滴度变化，纵坐标为滴度的平均值
±
标准差sd)
26.图9噬菌体vb
_
saum_si2对10株金葡菌的抑菌效果
具体实施方式
27.实施例1金葡菌噬菌体vb_saum_si2对皮炎来源耐药金葡菌株的抗菌效果研究
28.1材料与方法
29.1.1菌株及样品来源
30.菌株来源：9株国家新抗生素菌种保藏中心馈赠的皮炎患者皮肤源金葡菌株(编号分别为sa1、sa5、sa6、sa7、sa8、sa18、sa24、sa38、sa39)；1株国家新抗生素菌种保藏中心馈赠的非临床金葡菌株siia1005。
31.污水来源及前处理：从成都市某研究所污水系统取样，经10000r/min离心2min去除大杂质，上清液过0.45μm滤膜除菌，滤液存放于4℃备用。
32.1.2金葡菌16s鉴定
33.1.2.1菌株扩增及基因组提取
34.将10株20％甘油保种金葡菌划线至lb琼脂平板，37℃倒置于恒温培养箱孵育18-24h。挑取单菌落接种到3ml lb肉汤中，于37℃，220rpm振荡培养18h。
35.参照takara minibest bacteria genomic dna extraction kit说明书进行基因组提取，使用酶标仪检测核酸溶液的浓度，置于-20℃保存；1％琼脂糖凝胶电泳验证基因组质量。
36.1.2.2pcr扩增与测序
37.以所提基因组作模板，使用16s通用引物27f：5
′‑
agagtttgatcctggctcag-3
′
，1492r：5
′‑
tacggctaccttgttacgactt-3
′
进行pcr扩增。pcr反应条件：98℃5min；(98℃30s，53℃30s，72℃2min)30cycles；72℃5min。pcr混合体系(50μl)：20μl金牌mix(green)，1μl 27f(10μm)，1μl 1492r(10μm)，50-500ng dna模板，超纯水补足体系50μl。1％琼脂糖凝胶电泳验证pcr扩增产物条带大小。将pcr产物送往至北京擎科生物科技有限公司(成都分公司)进行测序。将测序结果导入ncbi网站，进行blast核酸比对。使用mega
ⅹ
软件进行多序列核酸比对，以mle法构建系统进化树。
38.1.3金葡菌株spa分型
39.以所提金葡菌基因组做模板，使用引物spa-1113f：5
′‑
taaagacgatccttcggtgagc-3
′
，和spa-1514r：5
′‑
cagcagtagtgccgtttgctt-3
′
扩增基因组中spa的可变重复区(x区)。1％琼脂糖凝胶电泳分析pcr扩增产物。扩增产物送北京擎科生物科技有限公司(成都分公司)测序，并使用ridom软件进行分析，以确定菌株spa类型，不能被归类为任何已知spa类型的金葡菌视为不可分型(nt)。
40.pcr反应的条件：98℃2min；(98℃25s，55℃40s，72℃60s)30cycles，72℃10min。pcr混合体系同16s扩增。
41.1.4金葡菌耐药性测试
42.使用欧盟试验标准(eucast)推荐kirby-bauer法和微量肉汤稀释法进行抗生素耐药性测试。参考2020版clsi药敏标准m100选择氯霉素、环丙沙星、四环素、氨苄青霉素、头孢西丁、卡那霉素、妥布霉素、红霉素、利福平、亚胺培南、林可霉素11种常用抗生素药敏纸片，对临床来源的9株金葡菌株进行耐药性试验。质控菌株为siia1005。
43.参考2020版clsi药敏标准m100进行折点判断，抑菌环直径判断标准见表1。
44.表1.k-b法药敏试验抑菌环直径判断标准
[0045][0046][0047]
根据kirby-bauer纸片法耐药性测试结果，分别随机选取3种至少1株菌耐受的抗生素和3种敏感的抗生素，另增加1种β-内酰胺类抗生素：头孢呋辛酯，使用微量肉汤稀释法进行耐药性测试，该法与kirby-bauer法结合用于耐药性验证。
[0048]
1.5噬菌体分离与纯化
[0049]
1.5.1噬菌体分离
[0050]
以非临床金葡菌株siia1005做宿主菌，采用单宿主富集法(single host enrichment method)从经处理后的污水中分离噬菌体。取10ml处理后水样和1ml新鲜制备的金葡菌株siia1005菌悬液加至装有10ml 2
×
lb肉汤的锥形瓶中，混匀后置于室温5min，后置于37℃，220rpm振荡培养10h。培养结束后，培养液12000r/min，10min离心；取上清液，0.22μm滤膜除菌，得到含噬菌体的第一次富集液。将第一次富集液按上述方法与菌液再次共培养10h。重复两次上述共培养、离心和除菌步骤，得到含噬菌体的第3次富集液。以不加污水样的金葡菌培养液做对照。
[0051]
采用斑点法(spot method)验证噬菌体：将新鲜培养siia1005菌悬液与3ml 0.6％lb琼脂混匀后立即倒至1.5％lb下层琼脂平板上，室温静置10min，30℃孵育过夜。
[0052]
1.5.2噬菌体纯化
[0053]
双层琼脂平板(double layer agar plate，dlap)对噬菌体进行纯化。10倍系列稀释噬菌体富集液，吸取100μl系列稀释富集液与100μl对数生长期金葡菌菌悬液混匀后制作双层平板，30℃孵育至长出噬菌斑。
[0054]
用1ml无菌枪头挑取清晰透亮、边缘整齐且斑块大的单噬菌斑于装有1ml sm buffer的1.5ml离心管，涡旋振荡1min溶出噬菌体，12000r/min离心3min，取上清进行10倍系列稀释用于单噬菌斑获得，重复此步骤直到双层平板上出现均一的噬菌斑为止。
[0055]
1.5.3噬菌体扩增及保存
[0056]
挑取双层平板上斑块均一的噬菌斑于1ml sm buffer中，12000r/min离心3min，取500μl上清，使用富集法与宿主菌共培养扩增噬菌体。
[0057]
1.5.4peg浓缩噬菌体颗粒
[0058]
参考pascale的peg沉淀法对噬菌体进行浓缩。具体步骤：
[0059]
1)加入终浓度0.2％的氯仿，37℃孵育30min；
[0060]
2)加入终浓度0.5m的氯化钠中，4℃放置至少1h；
[0061]
3)裂解液4℃，8000
×
g，20min离心除去较大的细胞碎片，上清液转至干净容器；
[0062]
4)加入终浓度8-10％的peg8000，4℃中混匀，并放置过夜；
[0063]
5)过夜放置的噬菌体混合液4℃，8000
×
g离心20min，小心去除上清，最后将离心管倒置5min；
[0064]
6)加入sm buffer重悬噬菌体沉淀(1ml/100ml sm buffer)；
[0065]
7)重悬后4℃，5000
×
g低速离心10min；
[0066]
8)等体积氯仿萃取1min，5000
×
g离心15min，取出含噬菌体的水相；
[0067]
9)0.22μm滤膜除菌得到噬菌体悬液。
[0068]
1.5.5噬菌体滴度测定
[0069]
10倍系列稀释噬菌体sm buffer悬液，取100μl与100μl对数生长期菌液混匀置于室温10min，与3ml 0.6％lb琼脂混匀后立即倒入至双层平板，倒置于37℃孵育过夜，每个稀释度做2个平行。选择长有30-300个噬菌斑的平板进行噬菌体计数。
[0070]
滴度pfu/ml＝平均噬菌斑数pfu
×
稀释倍数10n/加样量ml。
[0071]
1.6噬菌体透射电镜
[0072]
将sm buffer噬菌体悬液(10
11
pfu/ml)送至成都奥创生物科技有限公司进行透射电镜拍照。
[0073]
1.7噬菌体核酸链型验证
[0074]
取扩增所得5ml噬菌体裂解液(滴度≥109pfu/ml)用hipure lambda mini kit提取基因组；分别使用dnase i和rnase a验证核酸类型为dna或rna；exonuclease i验证噬菌体的核酸链型为dsdna或ssdna。均在1％琼脂糖凝胶上进行核酸电泳验证。
[0075]
1.8噬菌体主要结构蛋白分子量验证
[0076]
取peg纯化后噬菌体悬液(滴度≥109pfu/ml)与5
×
loading buffer(含100mmβ-巯基乙醇)混匀后100℃煮沸10min制样，在12％浓度分离胶上进行sds-page电泳，胶块经染色、脱色后置于biorad凝胶成像仪上拍照。
[0077]
1.9噬菌体稳定性考察
[0078]
参考tan等的方法并作修改对噬菌体进行温度稳定性和ph稳定性考察。取等体积噬菌体悬液，分别置于40℃、50℃、60℃、70℃恒温水浴1h。使用1m hcl和1m naoh分别调节lb肉汤ph至2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0，取5μl噬菌体悬液分别与495μl不同ph的lb肉汤混匀，37℃静置1h。各组分别于0、20、40和60min取样，测定噬菌体在不同温度及ph下各取样点的效价(即滴度)。每个处理重复3次。
[0079]
1.10噬菌体宿主范围测定
[0080]
使用斑点法测定分离获得的噬菌体对10株金葡菌的裂解性，以获得噬菌体的裂解谱(方法见1.5.1)。观察噬菌斑的有无，有透明斑块产生表明能够裂解此菌株。
[0081]
1.11噬菌体对耐药金葡菌的抗菌效果测定
[0082]
参考benala等人的方法稍作修改测定噬菌体对宿主菌siia1005和临床来源耐药金葡菌的抗菌活性。
[0083]
初始宿主菌调整至od
600
≈0.2(约1.0
×
108cfu/ml)，初始噬菌体滴度调整至1.0
×
108pfu/ml，分别10倍系列稀释获得宿主菌和噬菌体；将不同浓度噬菌体与宿主菌等体积混合使得moi＝0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、100、1000。在96微孔板中测定各moi下噬菌体对金葡菌株生长的影响，获得能抑制金葡菌生长的最适moi范围。使用biotek酶标仪检测od
600
值，每60min检测1次，连续检测360min。每个处理重复3次。
[0084]
2结果
[0085]
2.1金葡菌株16s鉴定
[0086]
部分测试菌株的核酸1％琼脂糖凝胶电泳图见(图1a)。凝胶图上显示pcr产物在约1500bp左右有明显特异性扩增条带，大小与预期相符(图1b)。
[0087]
blast核酸比对结果与已知金葡菌相似度均高于99％，采用mle法构建的系统进化树见图2。10株测试菌株与内源参比菌株s.aureus atcc 12600聚类于同一分支中，与外源参比菌株s.epidermidis、s.lutrae、s.hominis、s.haemolyticus、s.cohnii、s.saprophyticus不在同一分支中。说明测试株与金葡菌的进化关系更近。可确证10株测试菌株均属金黄色葡萄球菌(s.aureus)。
[0088]
2.2金葡菌spa分型
[0089]
pcr扩增产物凝胶电泳见图3。spa分型结果显示10株金葡菌菌株可被分型为9种不同的spa类型，另有1株无法确定spa类型(表2)。
[0090]
表2.金葡菌株spa分型
[0091][0092]
2.3金葡菌耐药性测试
[0093]
耐药性结果显示9株临床来源金葡菌各对至少1种抗生素耐药，质控菌株siia1005对所有测试抗生素均敏感，耐药谱见表3。
[0094]
其中5株(56％)金葡菌同时对至少2类抗生素耐药，2株(22％)金葡菌属于mdr菌(至少对3种抗生素表现出耐药性)；sa38金葡菌株共同耐药率最高，对“氯霉素-林可霉素-红霉素-卡那霉素-头孢呋辛酯”5种抗生素共同耐药。由此结果可推测，继续使用抗生素对抗金葡菌引起的皮炎将面临更多的挑战，因此寻求新的方法对抗多药耐药金葡菌迫在眉睫。
[0095]
表3.10株金黄色葡萄球菌多重耐药谱
[0096][0097][0098]
注：“+”代表耐药
[0099]
2.4噬菌体分离与形态
[0100]
分离纯化获得1株噬菌体，将其命名为vb_saum_si2，在宿主菌双层平板上噬菌斑直径约1.65
±
0.24mm，斑块清晰透亮、边缘整齐(图4a)。
[0101]
从单斑分离出噬菌体，经透射电镜拍照显示该噬菌体属于caudovirales(尾病毒目)下的myoviridae(肌病毒科)，即具有二十面体的头部和可收缩的尾部。电镜图显示噬菌体vb_saum_si2由直径为96
±
3.9nm的二十面体头部，和长110
±
4.4nm、直径27
±
0.1nm可收缩的尾部组成(图4b)，并且具有清晰可见的颈部(b1)、带尾丝的基板(b2)和尾管(b3)。
[0102]
噬菌体vb_saum_si2在2023年04月10日被保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为cctcc no:m 2023496。
[0103]
2.5噬菌体核酸类型
[0104]
噬菌体基因组1％琼脂糖凝胶电泳图显示条带单一，质量符合预期(图5a)。经dnaseι酶切后，结果显示基因组降解(见图5b)；经rnase a酶切，结果显示基因组无降解(见图5c)，可判断噬菌体的核酸类型为dna；再经exonucleaseι酶切，基因组无降解(图5d)，表明噬菌体的核酸为dsdna。该噬菌体的核酸链型为dsdna进一步证明了噬菌体归属于myoviridae(肌病毒科)(核酸链型为dsdna)。
[0105]
对噬菌体vb_saum_si2进行基因分析并构建系统发育树(图6)，其中，噬菌体vb_saum_si2与staphylococcus phage vb_sauh_sap1,complete genome的相似度为98％。
[0106]
2.6噬菌体结构蛋白
[0107]
sds-page电泳图像(图7)可见4条蛋白条带a、b、c、d，分子量分别约170、80、55、25kda，其中分子量大小约55kda的条带c含量最高，可推测该蛋白为噬菌体的主要结构蛋白，这与文献报道的金葡菌噬菌体sa2主要结构蛋白分子量42kda接近。
[0108]
2.7稳定性
[0109]
噬菌体vb_saum_si2在低于50℃温度下至少60min内具有较高稳定性，高于60℃时20min内滴度降低至检测限度以下(1lg pfu/ml)(图8a)。
[0110]
噬菌体vb_saum_si2在ph5.0-9.0范围内滴度稳定无明显变化，而在ph4.0和ph10.0-12.0时滴度降低1-2lg pfu/ml，在ph2.0-3.0范围时滴度降至检测限度以下(1lg pfu/ml)(图8b)，此结果表明噬菌体vb_saum_si2能在ph7.0
±
2.0范围内稳定存在并保持其感染活性，在碱性更强时(ph10.0-12.0)会影响其感染活性，在酸性更强时(ph2.0-3.0)几
乎丧失感染活性。
[0111]
2.8噬菌体宿主范围
[0112]
宿主范围测定结果显示除宿主菌siia1005外，对另外7株耐药金葡菌株具有强裂解活性，对其余2株(sa39、sa39)金葡菌具有较弱的裂解活性(表4)。同时，这9株金葡菌都是耐药菌株，这表明噬菌体vb_saum_si2具有抗耐药金葡菌的作用。
[0113]
表4.噬菌体裂解范围
[0114][0115]
注：“+”代表能裂解，数量越多裂解效果越好(斑块越清晰透亮)
[0116]
2.9噬菌体抗菌效果
[0117]
不同moi下噬菌体vb_saum_si2对宿主菌siia1005和9株耐药金葡菌生长的影响见图9，最适moi范围归纳如表5所示。所有未添加噬菌体的菌株对照组均能进入对数生长期(od
600
》0.3)，且随时间增加其od
600
值逐渐增加；噬菌体添加比例(moi值)增加使得菌株生长的od
600
所能达到的最高值降低。
[0118]
在最适moi范围内噬菌体能抑制对应耐药金葡菌株进入对数生长期(od
600
《0.3)，且od
600
值均呈现出先升后降的趋势，其中对耐药金葡菌株sa38和sa39的最适moi范围分别为1.2-12和13.2-132，大于其余测定金葡菌株的最适moi范围，这与前期裂解谱测定中该噬菌体对这两株金葡菌的裂解效果较对其他测试金葡菌株裂解效果弱的结果相符。
[0119]
表5.噬菌体对金葡菌株的最适moi范围
[0120][0121]
3、讨论
[0122]
本发明以菌库非临床来源金葡菌株(无耐药性)做宿主从环境水样中分离获得1株噬菌体vb_saum_si2，检测其对皮炎来源耐药(n＝7)及多重耐药金葡菌株(n＝2)的宿主范围，结果表明该噬菌体能以不同程度裂解耐药金葡菌，宿主范围的测定被视为噬菌体施用前的基础研究，对用于治疗时的效果具有重要指导作用。透射电镜结果显示其属于caudovirales(尾病毒目)下的myoviridae(肌病毒科)，该噬菌体核酸链型为dsdna，与电镜下形态共同证明了其归属类型。
[0123]
考察分离噬菌体在不同温度和ph条件下的稳定性，能为噬菌体的生产、运输、储存和施用条件提供指导。噬菌体vb_saum_si2在60min内低于50℃条件下能保持其感染活性，生产时的温度应介于此温度范围内，此温度还可为噬菌体制剂在非冷链条件下进行运输时仍然保持其感染活性提供保障；此外，施用于皮肤表面时，皮肤表面的温度也不会对其感染活性产生明显影响。噬菌体vb_saum_si2能在60min内介于ph7.0
±
2.0范围时保持其感染活性，研究表明正常人体皮肤表面ph常常偏酸性(ph5.4-5.9)，而皮炎皮肤ph接近7.0，ph稳定性测定结果表明噬菌体vb_saum_si2能适应于皮炎皮肤上的ph并保持其裂解活性，这为噬菌体的施用提供了参考。
[0124]
此外，噬菌体vb_saum_si2能以不同的最适moi范围感染并抑制宿主金葡菌和皮炎来源耐药金葡菌株进入对数生长期，表明该噬菌体具有用于治疗耐药金葡菌引起的皮炎的作用。

技术特征：
1.一种裂解金黄色葡萄球菌的噬菌体，其特征在于：所述噬菌体保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为cctcc no:m 2023496。2.如权利要求1所述的噬菌体，其特征在于：所述噬菌体是裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体。3.如权利要求2所述的噬菌体，其特征在于：所述噬菌体是裂解皮炎来源的耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体。4.如权利要求2或3所述的噬菌体，其特征在于：所述耐药金黄色葡萄球菌是耐氯霉素、林可霉素、红霉素、卡那霉素、氨苄青霉素和/或头孢呋辛酯的金黄色葡萄球菌。5.权利要求1～4任一项所述噬菌体在制备抑制金黄色葡萄球菌的抑菌剂中的用途。6.如权利要求3所述的用途，其特征在于：所述抑菌剂是抑制耐药金黄色葡萄球菌的抑菌剂。7.如权利要求6所述的用途，其特征在于：所述抑菌剂是抑制皮炎来源的耐药金黄色葡萄球菌的抑菌剂；所述耐药金黄色葡萄球菌是耐氯霉素、林可霉素、红霉素、卡那霉素、氨苄青霉素和/或头孢呋辛酯的金黄色葡萄球菌。8.权利要求1～4任一项所述噬菌体在制备抗菌药物中的用途，其特征在于：所述药物是抗金黄色葡萄球菌的药物。9.如权利要求8所述的用途，其特征在于：所述药物是抗耐药金黄色葡萄球菌的药物。10.如权利要求8所述的用途，其特征在于：所述药物具有抑制皮炎来源的耐药金黄色葡萄球菌生长的作用；所述耐药金黄色葡萄球菌是耐氯霉素、林可霉素、红霉素、卡那霉素、氨苄青霉素和/或头孢呋辛酯的金黄色葡萄球菌。

技术总结
本发明公开了一种裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体及其应用。本发明以金黄色葡萄球菌株做宿主，从污水中分离的裂解性噬菌体，该噬菌体能裂解耐药金黄色葡萄球菌，对耐药金黄色葡萄球菌的最适MOI范围为0.03-0.27；能在不同MOI范围内抑制皮炎来源耐药金葡菌株生长，具有较好抑菌效果，为耐药金葡菌株引起的皮炎治疗提供了新的更有效的选择。疗提供了新的更有效的选择。疗提供了新的更有效的选择。


技术研发人员：王辂 杨蓉 李端华 赵晨 李进军 饶峻
受保护的技术使用者：成都大学
技术研发日：2023.05.18
技术公布日：2023/10/6