一种用于评价难溶性固体分散体溶出的产品的制作方法

1.本发明属于药剂学研究领域，更加具体地说，涉及用于评价难溶性固体分散体溶出的产品。


背景技术：

2.生物药剂学分类系统(bcs)为预测药物的溶出和吸收提供了参考。难溶性药物多属于bcs ii or iv类。难溶性药物按结晶行为分为3类：i类(rep.萘普生)为快速结晶；ii类(rep.硝苯地平)为中速结晶；iii类(rep.伊曲康唑,利托那韦)为慢速结晶。在药物探索的过程中，许多难溶性药物被发现，但它们的应用受到低吸收和生物利用度的限制。过去的十年中，许多制剂方法如脂质体，固体分散体，或纳米晶体等技术通过一些聚合物，以“spring-parachute”模式，产生和稳定药物过饱和效应，增强吸收和生物利用度。尤其是，固体分散体制剂技术正逐渐被广泛应用。制备方式主要包括热熔挤出和喷雾干燥两种，可以根据聚合物和药物的特征进行选择。热熔挤出可以传递，混合，熔合药物和聚合物，制备固体分散体。固体分散体可以在溶出过程中通过抑制药物结晶的成核或生长，产生和保持药物过饱和状态，从而促进吸收和生物利用度，减少副作用，优化药物在体内的作用。
3.黏液是黏膜表面的粘弹性保护层，由杯状细胞合成。其分布在身体所有暴露在外部环境下的器官，如眼睛、呼吸系统、消化系统和阴道等，但其特性(组成、结构、厚度)不尽相同。黏液有许多生理功能：天然屏障，润滑腔道，维持上皮细胞水分层，作为交换气体和营养物质的可渗透凝胶层，作为菌群的定植部位和附着点，及转导细胞信号等。黏液含有90-95％水、2-5％糖蛋白、脂质、蛋白质、电解质和dna，但主要成分是黏蛋白。黏蛋白属于高分子量(200kda-200mda)和大量糖基化(高达90％)蛋白质家族，是一种天然的聚合物。其蛋白质核心称作“apomucin”，糖基存在于蛋白质核心周围，以o-低聚糖和n-聚糖链结合于蛋白质核心。黏蛋白有许多基因亚型：muc1,muc2,muc3a,muc3b,muc4,muc5ac,muc5b,muc6,muc7,muc12,muc13,muc15,muc16,muc17,muc19,muc20等。这些亚型分为两类：分泌型黏蛋白和膜结合型黏蛋白。分泌型黏蛋白可形成巨大聚合物网络，表达于整个腔道；膜结合型黏蛋白结合于上皮细胞膜表面，是分泌型网络的锚。黏蛋白之间可以相互作用，有聚集和成胶的趋势，发生单分子-聚合物的分子状态变化；黏蛋白由于其高粘度和疏水/静电作用，也可以与其他成分相互作用。
4.caron,g.等研究发现黏蛋白作为一种聚合物，具有与药物的静电和疏水作用。yeap,y.等研究发现肠道黏液减缓难溶性药物-卡维地洛和吡罗昔康沉淀，稳定其过饱和。但含有黏蛋白的溶出介质是否影响难溶性固体分散体的溶出特征，尚无研究。因此，有必要在溶出介质中添加新的考察因素—黏蛋白，并对其关键参数(黏蛋白的浓度、缓冲溶液的ph)进行优化筛选，以更客观地模拟体内特征，有效地评价制剂。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种用于评价难溶性固体分散体溶出的产品。溶出介质中
加入黏蛋白，通过延长难溶性药物的过饱和，影响其固体分散体的“spring-parachute”。
6.为了实现上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：
7.一种用于评价难溶性固体分散体溶出的产品，配制溶出介质ph4.0-8.0的fassif缓冲溶液，加入0.1％-2％w/v黏蛋白(黏蛋白质量，单位为g，与fassif缓冲溶液体积的比，缓冲溶液体积单位为ml)，于35—38摄氏度，优选37℃搅拌至充分溶解，所得溶液用于评价难溶性固体分散体的溶出特征。
8.固体分散体制备方式为热熔挤出。
9.制备固体分散体的药物为不同结晶行为的bcs ii or iv类难溶性药物，选自快速结晶型、中速结晶型、慢速结晶型难溶性药物。
10.优选的，所述难溶性药物包括：萘普生、硝苯地平、伊曲康唑、利托那韦。
11.优选的，所述溶出法为小杯法。
12.所述fassif缓冲溶液，配制方法见商品说明书(https://biorelevant.com/fassif-fessif-fassgf/buy)。
13.优选的，所述fassif缓冲溶液的ph为6.5。
14.黏蛋白为各种分泌型胃肠道黏蛋白，选自猪胃黏蛋白ii。
15.优选的，所述黏蛋白的浓度为0.2％w/v。
16.本发明首次发现黏蛋白作为一种天然的过饱和稳定剂，延长固体分散体的“parachute”。黏蛋白延长硝苯地平的过饱和，延缓其沉淀，呈现浓度依赖性和ph依赖性，不改变溶解度。其机制是黏蛋白在单分子状态下抑制药物过饱和溶液的结晶过程。黏蛋白的浓度为0.2％w/v，溶出介质的ph为6.5时，曲线特征为最优，故选择该条件。黏蛋白通过抑制药物结晶或形成黏蛋白-药物相互作用，延长了具有不同结晶行为的难溶性药物的过饱和，而不改变溶解度。在体内条件下，黏蛋白的这种作用广泛存在于不同结晶机制的难溶性药物中。黏蛋白延长各固体分散体的“parachute”。建议改进制剂溶出评价方法，在溶出介质中添加新的考察因素-黏蛋白，以更客观地模拟体内特征。
附图说明
17.图1是实施例1中，不同浓度黏蛋白溶液中硝苯地平的过饱和比曲线图(n＝3)，其中，ssr表示过饱和比。
18.图2是实施例1中，fassif和fassif containing 0.2％mucin中结晶的显微照片，其中，a表示0min；b表示80min；c表示130min。
19.图3是实施例1中，不同ph值的黏蛋白溶液中硝苯地平的过饱和比曲线图(n＝3)，其中，ssr表示过饱和比；a表示ph 4.0；b表示ph 6.5；c表示ph 8.0。
20.图4是实施例2中，fassif vs in fassif containing 0.2％mucin中不同难溶性药物的过饱和比曲线图(n＝3)，其中，ssr表示过饱和比；a表示萘普生；b表示硝苯地平；c表示伊曲康唑；d表示利托那韦。
21.图5是实施例2中，fassif和fassif containing 0.2％mucin中结晶的显微照片，其中，ssr表示过饱和比；a表示萘普生；b表示硝苯地平；c表示伊曲康唑。
22.图6是实施例2中，大鼠灌胃给与难溶性药物后血浆浓度曲线图(n＝3)，其中，ssr表示过饱和比；a表示萘普生；b表示硝苯地平；c表示伊曲康唑。
23.图7是实施例3中，溶出介质fassif和fassif containing 0.2％mucin中固体分散体的过饱和比曲线图(n＝3)，其中，ssr表示过饱和比；a表示萘普生；b表示硝苯地平；c表示伊曲康唑。
具体实施方式
24.以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。以下结合附图来详细说明本发明的实施方案。
25.实施例1黏蛋白对硝苯地平过饱和溶液的影响及最优参数的筛选
26.实验材料和仪器：
27.硝苯地平购于letco medical公司；fassif/fessif/fassgf购于biorelevant.com公司；猪胃黏蛋白ii购于sigma公司；dmso购于sigma公司；色谱纯的甲醇、乙腈购于fisher chemical公司；超纯水由水净化系统制备。
28.lab-line恒温摇床；waters hplc；olympus bx53偏光显微镜；mettler toledo ph计。
29.实验方法
30.1.溶解度测定
31.硝苯地平宜见光分解，所有实验必须避光。称取硝苯地平，分别加入含和不含黏蛋白的fassif或不同ph缓冲液中，于37℃100rpm的恒温摇床中溶解至过饱和。溶液离心，hplc测定。
32.2.过饱和溶液的制备
33.以solvent-shift法，制备硝苯地平过饱和溶液。硝苯地平预溶于甲醇中。将含和不含黏蛋白的fassif或不同ph缓冲液置于37℃100rpm的恒温摇床中，逐渐加入硝苯地平预溶液至过饱和。
34.3.过饱和稳定性实验
35.本实验为测试过饱和稳定性和沉淀而设计。过饱和溶液置于37℃100rpm的恒温摇床中。于不同的时间点，取样600μl，立即14000r/min离心10min。取300μl上清液，加入等体积的dmso，用于终止随后的沉淀。hplc检测。
36.4.偏光显微镜分析
37.使用20倍放大的olympus bx53偏光显微镜，分析过饱和溶液样品。linkam t95 hostage reactor with linksys 32software package(olympus co.,tokyo,japan)控制温度在37℃。加入样品后，使用指甲油封闭盖玻片，以阻止溶液挥发。不同时间点采集图像，以观察结晶行为。
38.5.hplc分析
39.使用c18色谱柱(4μm,3.9mm
×
75mm,waters,usa)，c18保护柱(4μm,4mm
×
3.0mm,waters,usa)，保持柱温在37℃。流动相为0.1％三氟乙酸的水和0.1％三氟乙酸的乙腈(70:30)。流速为1ml/min。进样体积为10μl。检测波长为237nm。
40.6.数据分析
41.过饱和比(ssr)
[0042][0043]
其中，c
t
：时间点t时的浓度；c
max
：最大浓度；ssr：实验过饱和比。
[0044]
激增后时间(t
ss
)
[0045]
t
ss
是在浓度维持最大浓度90％以上时的时间长度。它是一种测量药物过饱和稳定性的方法。
[0046]
曲线下面积(auc)
[0047]
auc是从0时间点到t时间点曲线下面积，通过梯形法计算。它也是一种测量药物过饱和稳定性的方法。
[0048]
7.统计学分析
[0049]
结果以mean
±
sd表示。采用独立样本t检验法比较不同组之间的参数差异是否具有统计学意义。p《0.05表示差异具有显著意义，所有统计学分析方法均使用spss软件处理。
[0050]
实验结果
[0051]
1.黏蛋白对硝苯地平溶解度的影响
[0052]
从表1中可以看出，硝苯地平在含和不含黏蛋白的fassif或不同ph缓冲液中溶解度无显著性差异。说明黏蛋白不能改变溶解度。
[0053]
表1硝苯地平的溶解度(n＝3)
[0054][0055][0056]
2.不同浓度的黏蛋白对硝苯地平过饱和的影响
[0057]
从图1和表2中可以看出，t
ss
或auc随黏蛋白的浓度增加而显著增大。硝苯地平的t
ss
或auc在fassif containing 0.1％mucin和fassif无显著性差异。t
ss
或auc在fassif containing 0.2％mucin和fassif间有显著性差异(p《0.05)。虽然t
ss
在fassif containing 2％mucin和fassif间没有显著性差异，但auc有显著性差异(p《0.05)。这表明黏蛋白延长硝
苯地平的过饱和，并呈现浓度依赖性。根据参数的统计学分析，黏蛋白的浓度为0.2％w/v时，足以延缓硝苯地平的沉淀，最能反映曲线特征，因此为最优条件。
[0058]
表2不同浓度黏蛋白溶液中硝苯地平的参数(n＝3)
[0059] t
ss
(min)aucfassif80
±
17.321913.89
±
146.37fassif containing 0.1％mucin90
±
30.002156.61
±
179.62fassif containing 0.2％mucin130
±
17.32
*
2313.82
±
60.66
*
fassif containing 2％mucin80
±
45.832565.04
±
226.65
*
[0060]
*vs fassif,p《0.05.
[0061]
3.黏蛋白对硝苯地平结晶的影响
[0062]
从图2中可以看出，在fassif中，硝苯地平于80min形成结晶，于130min结晶增长。而在0.2％黏蛋白中，结晶时间延长到130min。这表明黏蛋白抑制硝苯地平过饱和溶液的结晶。
[0063]
4.ph对黏蛋白功能的影响
[0064]
应用不含fassif的不同ph值缓冲液，检测ph对黏蛋白功能的影响。硝苯地平被认为是弱酸(pka＝3.93)。鉴于pka，ph的范围选择4到8。黏蛋白溶液随着ph的升高，可见浊度逐渐减小。从图3和表3中可以看出，硝苯地平的t
ss
或auc在base buffer ph 4.0containing 0.2％mucin和base buffer ph 4.0间没有显著性差异。t
ss
或auc在base buffer ph 6.5containing 0.2％mucin与base buffer ph 6.5间有显著性差异(p《0.05,or p《0.01)。t
ss
或auc在base buffer ph 8.0containing 0.2％mucin和base buffer ph 8.0间有显著性差异(p《0.05,or p《0.01)。这表明黏蛋白延长硝苯地平的过饱和，并呈现ph依赖性。根据参数的统计学分析，考虑肠道的ph特征，缓冲溶液的ph为6.5时，有效地模拟小肠环境，最能反映曲线特征，因此为最优条件。
[0065]
表3不同ph值的黏蛋白溶液中硝苯地平的参数(n＝3)
[0066] t
ss
(min)aucbase buffer ph 4.030
±
0.002027.07
±
198.51base buffer ph 4.0containing 0.2％mucin30
±
0.002445.43
±
184.18base buffer ph 6.530
±
0.001237.41
±
27.46base buffer ph 6.5containing 0.2％mucin90
±
30.00
*
2464.35
±
31.18
**
base buffer ph 8.030
±
0.001244.69
±
108.79base buffer ph 8.0containing 0.2％mucin90
±
30.00
*
2040.22
±
131.77
**
[0067]
*vs base buffer,p《0.05；**vs base buffer,p《0.01.
[0068]
实验结论
[0069]
黏蛋白延长硝苯地平的过饱和，延缓其沉淀，呈现浓度依赖性和ph依赖性，不改变溶解度。其机制是黏蛋白在单分子状态下抑制药物过饱和溶液的结晶过程。黏蛋白是一种天然的过饱和稳定剂。黏蛋白的浓度为0.2％w/v，溶出介质的ph为6.5时，曲线特征为最优，故选择该条件。
[0070]
实施例2黏蛋白对不同结晶行为难溶性药物过饱和溶液的影响及体内外相关性研究
[0071]
实验材料和仪器：
[0072]
萘普生，伊曲康唑，利托那韦购于nexconn pharmatechs公司；硝苯地平购于letco medical公司；地西泮购于sigma公司；fassif/fessif/fassgf购于biorelevant.com公司；猪胃黏蛋白ii购于sigma公司；dmso购于sigma公司；色谱纯的甲醇、乙腈购于fisher chemical公司；超纯水由水净化系统制备。
[0073]
lab-line恒温摇床；waters hplc；olympus bx53偏光显微镜；organomation氮吹仪；mettler toledo ph计。
[0074]
动物：雄性sd大鼠(体重：210-230g；年龄：2月)购于北京华阜康生物科技股份有限公司。大鼠保持12小时光暗循环。实验前禁食12小时不禁水。动物实验已通过伦理审查(no.nkyy-dwll-2020-004)。
[0075]
实验方法
[0076]
1.溶解度测定
[0077]
称取不同结晶行为的难溶性药物，分别加入fassif和含黏蛋白的fassif溶液中，于37℃100rpm的恒温摇床中溶解至过饱和。溶液离心，hplc测定。
[0078]
2.过饱和溶液的制备
[0079]
以solvent-shift法，制备不同结晶行为难溶性药物的过饱和溶液。萘普生、硝苯地平、利托那韦预溶于甲醇中；伊曲康唑预溶于dmso中。将含和不含黏蛋白的fassif置于37℃100rpm的恒温摇床中，逐渐加入药物预溶液至过饱和。
[0080]
3.过饱和稳定性实验
[0081]
本实验为测试过饱和稳定性和沉淀而设计。过饱和溶液置于37℃100rpm的恒温摇床中。于不同的时间点，取样600μl，立即14000r/min离心10min。取300μl上清液，加入等体积的dmso，用于终止随后的沉淀。hplc检测。
[0082]
4.偏光显微镜分析
[0083]
使用20倍放大的olympus bx53偏光显微镜，分析过饱和溶液样品。linkam t95 hostage reactor with linksys 32software package(olympus co.,tokyo,japan)控制温度在37℃。加入样品后，使用指甲油封闭盖玻片，以阻止溶液挥发。不同时间点采集图像，以观察结晶行为。
[0084]
5.药代动力学研究
[0085]
萘普生，硝苯地平，伊曲康唑，利托那韦预溶于dmso中。将fassif置于37℃100rpm的恒温摇床中，逐渐加入药物预溶液至过饱和。口服灌胃给予大鼠过饱和溶液。于不同的时间点眼眶采血250μl，4000r/min离心10分钟，-20℃储存备用。将地西泮作为内标加入血浆样品中。涡旋30秒后，加入1ml甲醇，涡旋10min以沉淀蛋白。悬液于15000r/min离心10分钟，取上清液，并于40℃氮气吹干。以50μl甲醇复溶，离心，hplc检测。
[0086]
6.hplc分析
[0087]
体外样本
[0088]
使用c18色谱柱(4μm,3.9mm
×
75mm,waters,usa)，c18保护柱(4μm,4mm
×
3.0mm,waters,usa)，保持柱温在37℃。流动相为0.1％三氟乙酸的水和0.1％三氟乙酸的乙腈：萘普生70:30；硝苯地平70:30；伊曲康唑60:40；利托那韦60:40。流速为1ml/min。进样体积为10μl。检测波长：萘普生245nm；硝苯地平237nm；伊曲康唑258nm；利托那韦240nm。
[0089]
体内样本
[0090]
使用c18色谱柱(4μm,3.9mm
×
75mm,waters,usa)，c18保护柱(4μm,4mm
×
3.0mm,waters,usa)，保持柱温在37℃。流动相为0.1％三氟乙酸的水和0.1％三氟乙酸的乙腈：萘普生65:35；硝苯地平63:37；伊曲康唑50:50；利托那韦57:43。流速为1ml/min。进样体积为10μl。检测波长：250nm。
[0091]
7.数据分析
[0092]
过饱和比(ssr)
[0093][0094]
其中，c
t
：时间点t时的浓度；c
max
：最大浓度；ssr：实验过饱和比。
[0095]
激增后时间(t
ss
)
[0096]
t
ss
是在浓度维持最大浓度90％以上时的时间长度。它是一种测量药物过饱和稳定性的方法。
[0097]
曲线下面积(auc)
[0098]
auc是从0时间点到t时间点曲线下面积，通过梯形法计算。它也是一种测量药物过饱和稳定性的方法。
[0099]
体内外相关性(ivivc)
[0100]
fda将ivivc定义为一种预测数学模型，描述了体外特性和相关体内反应之间的关系。a级ivivc是相关性最高的一类，代表了体外数据和体内数据之间的点对点关系。对c
in vitro
和c
in vivo
进行线性回归分析。
[0101]
8.统计学分析
[0102]
结果以mean
±
sd表示。采用独立样本t检验法比较不同组之间的参数差异是否具有统计学意义。p《0.05表示差异具有显著意义，所有统计学分析方法均使用spss软件处理。
[0103]
实验结果
[0104]
1.黏蛋白对不同结晶行为难溶性药物溶解度的影响
[0105]
萘普生,硝苯地平,伊曲康唑,利托那韦在含和不含黏蛋白的fassif中溶解度无显著性差异(表4)。说明黏蛋白不改变不同结晶行为难溶性药物的溶解度。
[0106]
表4不同结晶行为难溶性药物的溶解度(n＝3)
[0107][0108]
2.黏蛋白对不同结晶行为难溶性药物过饱和的影响
[0109]
如图4和表5，萘普生的t
ss
或auc在fassif containing 0.2％mucin和fassif间有显著性差异(p《0.05)。这表明黏蛋白延长萘普生的过饱和。硝苯地平的t
ss
或auc在fassif containing 0.2％mucin和fassif间有显著性差异(p《0.05)。这表明黏蛋白延长硝苯地平的过饱和。伊曲康唑的t
ss
或auc在fassif containing 0.2％mucin和fassif间有显著性差异(p《0.05)。这表明黏蛋白延长伊曲康唑的过饱和。虽然利托那韦的t
ss
在fassif containing 0.2％mucin和fassif间没有显著性差异，但auc有显著性差异(p《0.05)。这表明黏蛋白延长利托那韦的过饱和，但仅影响过饱和程度。沉淀延缓作用可归因于黏蛋白的高粘度(抑制成核或结晶增长)或黏蛋白与药物间的疏水/静电作用(阻止成核)。考虑到萘普生、硝苯地平、伊曲康唑浓度逐渐降低，其作用机制可能为抑制结晶；利托那韦浓度保持不变，其作用机制可能为黏蛋白与药物间相互作用。
[0110]
表5 fassif vs in fassif containing 0.2％mucin中难溶性药物的参数(n＝3).
[0111][0112]
*vs fassif,p《0.05.
[0113]
3.黏蛋白对不同结晶行为难溶性药物结晶的影响
[0114]
如图5，在fassif中，萘普生于15min形成结晶，于60min结晶增长。而在0.2％黏蛋白中，结晶时间延长到60min。这表明黏蛋白抑制萘普生过饱和溶液的结晶。在fassif中，硝苯地平于80min形成结晶，于130min结晶增长。而在0.2％黏蛋白中，结晶时间延长到130min。这表明黏蛋白抑制硝苯地平过饱和溶液的结晶。fassif中，伊曲康唑于150min形成结晶，于220min结晶增长。而在0.2％黏蛋白中，结晶时间延长到220min。这表明黏蛋白抑制伊曲康唑过饱和溶液的结晶。
[0115]
4.药代动力学特征
[0116]
图6显示了大鼠灌胃后萘普生、硝苯地平、伊曲康唑和利托那韦的血浆浓度。数据经das ver 2.0拟合为一室开放系统的药代动力学模型。药代动力学参数见表6。
[0117]
表6难溶性药物体内药动学参数(n＝3).
[0118]
[0119][0120]
5.回归特征
[0121]cin vitro
和c
in vivo
的线性回归方程和相关系数见表7。经统计学比较，萘普生在含fassif containing 0.2％mucin中浓度与大鼠血浆中浓度的相关系数,r
mean
(r
mean
＝0.5868
±
0.0407)》r
8,0.10
(r
8,0.10
＝0.5494)，明显高于fassif与大鼠血浆的相关系数(p《0.05)。硝苯地平在含fassif containing 0.2％mucin中浓度与大鼠血浆中浓度的相关系数,r
mean
(r
mean
＝0.8981
±
0.0615)》r
6,0.01
(r
6,0.01
＝0.8343)，明显高于fassif与大鼠血浆的相关系数(p《0.05)。伊曲康唑在含fassif containing 0.2％mucin中浓度与大鼠血浆中浓度的相关系数,r
mean
(r
mean
＝0.9102
±
0.0038)》r
6,0.01
(r
6,0.01
＝0.8343)，明显高于fassif与大鼠血浆的相关系数(p《0.05)。利托那韦在含fassif containing 0.2％mucin中浓度与大鼠血浆中浓度的相关系数,r
mean
(r
mean
＝0.9135
±
0.0357)》r
6,0.01
(r
6,0.01
＝0.8343)，明显高于fassif与大鼠血浆的相关系数(p《0.05)。对于不同结晶行为的难溶性药物，fassif containing 0.2％mucin比fassif更接近于体内条件。
[0122]
表7回归比较(n＝3).
[0123][0124][0125]
*vs fassif vs rat,p《0.05.
[0126]
实验结论
[0127]
黏蛋白通过抑制药物结晶或形成黏蛋白-药物相互作用，延长了具有不同结晶行为的难溶性药物的过饱和，而不改变溶解度。在体内条件下，黏蛋白的这种作用广泛存在于不同结晶机制的难溶性药物中。
[0128]
实施例3黏蛋白对难溶性药物固体分散体“spring-parachute”的影响
[0129]
实验材料和仪器：
[0130]
萘普生，伊曲康唑购于nexconn pharmatechs公司；硝苯地平购于letco medical公司；fassif/fessif/fassgf购于biorelevant.com公司；猪胃黏蛋白ii购于sigma公司；dmso购于sigma公司；色谱纯的甲醇、乙腈购于fisher chemical公司；超纯水由水净化系统制备。
[0131]
萘普生、硝苯地平、伊曲康唑固体分散体由德克萨斯大学奥斯汀分校药学院feng zhang教授实验室提供。
[0132]
waters hplc；mettler toledo ph计；varian溶出仪。
[0133]
实验方法
[0134]
1.溶出测试
[0135]
德克萨斯大学奥斯汀分校药学院feng zhang教授实验室通过热熔挤出法制备固体分散体，干燥，粉碎，过筛，压片。选择小杯法，以fassif和fassif containing 0.2％mucin为溶出介质，温度37℃，转速120r/min，于不同的时间点，取样600μl，立即14000r/min离心10min。取300μl上清液，加入等体积的dmso，用于终止随后的沉淀。hplc检测。
[0136]
2.hplc分析
[0137]
使用c18色谱柱(4μm,3.9mm
×
75mm,waters,usa)，c18保护柱(4μm,4mm
×
3.0mm,waters,usa)，保持柱温在37℃。流动相为0.1％三氟乙酸的水和0.1％三氟乙酸的乙腈：萘普生70:30；硝苯地平70:30；伊曲康唑60:40；利托那韦60:40。流速为1ml/min。进样体积为10μl。检测波长：萘普生245nm；硝苯地平237nm；伊曲康唑258nm。
[0138]
3.数据分析
[0139]
过饱和比(ssr)
[0140][0141]
其中，c
t
：时间点t时的浓度；c
max
：最大浓度；ssr：实验过饱和比。
[0142]
激增后时间(t
ss
)
[0143]
t
ss
是在浓度维持最大浓度90％以上时的时间长度。它是一种测量药物过饱和稳定性的方法。
[0144]
曲线下面积(auc)
[0145]
auc是从0时间点到t时间点曲线下面积，通过梯形法计算。它也是一种测量药物过饱和稳定性的方法。
[0146]
4.统计学分析
[0147]
结果以mean
±
sd表示。采用独立样本t检验法比较不同组之间的参数差异是否具有统计学意义。p《0.05表示差异具有显著意义，所有统计学分析方法均使用spss软件处理。
[0148]
实验结果
[0149]
从图7和表8中可以看出，萘普生固体分散体于15min开始释放，90min达峰。萘普生
的t
ss
或auc在fassif containing 0.2％mucin和fassif间有显著性差异(p《0.05)。这表明黏蛋白延长萘普生固体分散体的“parachute”。硝苯地平固体分散体于15min开始释放，150min达峰。硝苯地平的t
ss
或auc在fassif containing 0.2％mucin和fassif间有显著性差异(p《0.05)。这表明黏蛋白延长硝苯地平固体分散体的“parachute”。伊曲康唑固体分散体于15min开始释放，150min达峰。伊曲康唑的t
ss
或auc在fassif containing 0.2％mucin和fassif间有显著性差异(p《0.01,or p《0.05)。这表明黏蛋白延长伊曲康唑固体分散体的“parachute”。
[0150]
表8溶出介质fassif和fassif containing 0.2％mucin中固体分散体的参数(n＝3)
[0151][0152]
*vs fassif,p《0.05.
[0153]
实验结论：黏蛋白延长各固体分散体的“parachute”(固体分散体本身对“parachute”也有延长作用)。建议改进制剂溶出评价方法，在溶出介质中添加新的考察因素-黏蛋白，以更客观地模拟体内。
[0154]
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

技术特征：
1.一种用于评价难溶性固体分散体溶出的产品，其特征在于：所述产品由溶出介质ph4.0-8.0的fassif缓冲溶液和0.1％-2％w/v的黏蛋白组成，通过延长难溶性药物的过饱和，影响其固体分散体的“spring-parachute”。2.根据权利要求1所述的一种用于评价难溶性固体分散体溶出的产品，其特征在于，该产品由溶出介质ph6.5的fassif缓冲溶液和0.2％w/v的黏蛋白组成。3.根据权利要求1所述的一种用于评价难溶性固体分散体溶出的产品，其特征在于：所述固体分散体制备方式为热熔挤出法。4.根据权利要求1至2任一所述的一种用于评价难溶性固体分散体溶出的产品，其特征在于：制备固体分散体的药物为不同结晶行为的bcs ii or iv类难溶性药物，选自快速结晶型、中速结晶型、慢速结晶型难溶性药物。5.根据权利要求1至3任一所述的一种用于评价难溶性固体分散体溶出的产品，其特征在于：所述难溶性药物为萘普生、硝苯地平、伊曲康唑、利托那韦。6.根据权利要求5所述的一种用于评价难溶性固体分散体溶出的产品，其特征在于：溶出法为小杯法。7.根据权利要求1至3任一所述的一种用于评价难溶性固体分散体溶出的产品，其特征在于：黏蛋白为各种分泌型胃肠道黏蛋白，选自猪胃黏蛋白ii。8.一种用于评价难溶性固体分散体溶出的产品的制备方法，其特征在于：配制溶出介质ph4.0-8.0的fassif缓冲溶液，加入0.1％-2％w/v黏蛋白，于35—38摄氏度搅拌至充分溶解，所得溶液用于评价难溶性固体分散体的溶出特征。9.根据权利要求8所述的一种用于评价难溶性固体分散体溶出的产品的制备方法，其特征在于：在37℃下搅拌至充分溶解。10.如权利要求1-3任一所述产品在评价难溶性固体分散体溶出特征中的应用，其特征在于，所述产品应用于不同结晶行为的bcs ii or iv类难溶性药物分散体的溶出评价，所述难溶性药物分散体选自快速结晶型、中速结晶型、慢速结晶型难溶性药物分散体。

技术总结
本发明提供一种用于评价难溶性固体分散体溶出的产品，由溶出介质pH4.0-8.0的FaSSIF缓冲溶液，0.1％-2％w/v的黏蛋白组成。黏蛋白在单分子状态下抑制药物过饱和溶液的结晶过程。黏蛋白通过抑制药物结晶或形成黏蛋白-药物相互作用，延长了具有不同结晶行为的难溶性药物的过饱和，而不改变溶解度。在体内条件下，黏蛋白的这种作用广泛存在于不同结晶机制的难溶性药物中。溶出介质中加入小肠黏蛋白，影响其固体分散体的“spring-parachute”。建议改进制剂溶出评价方法，在溶出介质中添加新的考察因素-黏蛋白，以更客观地模拟体内特征。以更客观地模拟体内特征。以更客观地模拟体内特征。


技术研发人员：刘韦鋆 涂正伟
受保护的技术使用者：天津市中西医结合医院（天津市南开医院）
技术研发日：2022.03.25
技术公布日：2023/10/6