亚胺酰基酰肼类化合物、含其的组合物和其应用的制作方法

1.本发明涉及一种亚胺酰基酰肼类化合物、含其的组合物和其应用，其可用于治疗或预防病毒感染以及与其有关的疾病、特别是由正痘病毒和疱疹病毒引起的病毒感染和相关疾病。


背景技术：

2.正痘属（正痘病毒（orthopoxviridae））是痘病毒（poxviridae）科和脊椎动物痘病毒（chordopoxivirinae）亚科的成员。该属由许多在人群和动物群中引起重大疾病的病毒组成。在正痘属中的病毒包括牛痘（cowpox）、猴痘、痘苗（vaccinia）和天花（smallpox），它们都可以感染人。
3.天花病毒主要经呼吸道黏膜侵入人体，通过飞沫吸入或直接接触而传染。感染天花病毒后的潜伏期平均约为12天。感染后的初期症状包括：高烧、疲累、头疼、心跳加速等类似流感的症状。2-3天后，脸部、手臂和腿部会有典型的天花红疹。在发疹的初期，还会有淡红色的块状面积伴随疹子而出现。病灶在几天之后开始化脓，直到第2个星期开始结痂，然后慢慢剥落。患者在痊愈后脸上会留有麻子，亦可能因角膜溃疡而导致眼盲，重型天花致死率可高达30%。天花已经影响了人类数千年，由于天花疫苗的出现，到 1980 年时，人类已在世界范围内被消灭天花。天花疫苗计划在1972年终止；因此，许多个体不再对痘症感染免疫。即使接种过的个体也不再受到完全的保护，特别是针对病毒的强毒株或重组株。因此，如果将天花病毒再次有意地或意外地引入到人群中，死亡率将是高的。
4.猴痘病毒是人类天花病毒的近亲，最早于20世纪40年代在非洲西部的猴子中发现，人类可以通过接触感染了病毒的动物或其体液（如血液、尿液、粪便、唾液等）而感染猴痘病毒。此外，猴痘病毒还可以在人际之间传播，尤其是在家庭、医院或实验室等密闭环境中。猴痘的症状通常包括发烧、剧烈头痛、肌肉酸痛、背痛、精力不足、淋巴结肿大和皮疹或皮肤损伤，皮损可以是平坦的或略微凸起的，充满透明或淡黄色的液体，然后可以结痂，干瘪和脱落。猴痘病人的皮损数量可以从几个到几千个不等。皮疹往往集中在面部、手掌和脚底，也可以在口腔、生殖器和眼部找到。严重猴痘病例的并发症包括皮肤感染、肺炎、神志不清和可导致视力丧失的眼部感染。新生儿、儿童和有免疫缺陷基础疾病的人可能面临更严重的症状和死于猴痘的风险。近年来猴痘疫情有向全球蔓延趋势，截至2023年2月21日，全球已有110个国家（地区）报告了85000多例猴痘确诊病例，包含93例死亡病例，在流行国家报告的病例中约有3%-6%导致死亡。
5.猴痘病毒的疾病症状通常比天花轻微，但仍然需要进行治疗。目前，没有特定的治疗猴痘病毒感染的药物，但可以通过使用镇痛药、退烧药和抗病毒药物来缓解症状，结合物理隔离以控制疫情爆发，临床上用于支持治疗的抗病毒药物包括核苷类抗代谢物西多福韦（cidofovir）、布达韦（brincidofovir）和特考韦瑞（tecovirimat，代号 st-246））。
[0006][0007]
西多福韦（cidofovir）是美国 gilead 公司开发的一种核苷类抗病毒药物，于1996年批准用于治疗艾滋病巨细胞病毒（cmv）性视网膜炎的药物，对包括腺病毒、疱疹病毒、嗜肝 dna 病毒、多瘤病毒、乳头状瘤病毒和正痘病毒等具有广谱抗病毒活性，它通过抑制病毒的dna合成和复制来减轻症状和缩短疾病持续时间，缺点是可能会引起肾脏毒性和其他副作用，例如恶心、呕吐、头痛等。
[0008]
布达韦（brincidofovir）是西多福韦的脂质体修饰药物，作为西多福韦的前体药物在血浆中保持原型，进入靶细胞后，可自组装成不同形态，进而缓慢释放西多福韦，使得抗病毒作用大大延长。同时其脂质化修饰，使其生物利用度更高，可口服，同时肾毒性较西多福韦更小。针对天花病毒的治疗剂量为 200 mg/ 周，持续治疗至少 3 周以上。brincidofovir 在 2016 年及 2018 年分别获批欧洲及 fda 针对天花治疗的孤儿药。
[0009]
特考韦瑞（tecovirimat，st-246）美国siga公司研发的口服预防和治疗正痘病毒的药物，tecovirimat可与病毒 f13l 产物相结合，进而干扰病毒衣壳的组装，阻止病毒自靶细胞的再次传播，对正痘病毒属的病毒包括天花病毒、牛痘病毒和猴痘病毒等均有较强活性。在针对猴痘的猕猴动物实验中，5 天应用 tecovirimat 的存活率可达 100%，8 天应用 tecovirimat 的存活率约为 50%。2018 年 6 月，tecovirimat 获批用于治疗＞13 kg 患者的天花治疗。
[0010]
虽然这些药物虽然可以用于治疗痘病毒感染，但也存在耐药性、疗效和副作用的不确定性以及治疗成本高昂的缺点，另一方面，全球对于正痘病毒属小分子药物存在着强烈的需求，为正痘病毒属患者提供有效且安全的临床疗法。


技术实现要素：

[0011]
本发明所要解决的技术问题时为了克服现有技术中正痘病毒属的化合物的种类有限的缺陷，为此，而提供了一种亚胺酰基酰肼类化合物、含其的组合物和其应用。本发明的亚胺酰基酰肼类化合物对正痘病毒具有强的抗病毒活性。
[0012]
本发明是通过如下方案解决上述技术问题的。
[0013]
本发明提供了一种如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物或其药学上可接受的盐：
[0014]
[0015]
其中：
“‑‑‑”
为碳碳键或不存在；
[0016]
l为不存在（即-nh-l-r1为-nh-r1）、-c(o)-或-s(o)
2-；
[0017]
r1为c
6-14
芳基、5-10元杂芳基或5-10元杂环基，r1可任选地被1个或多个r
1-1
取代（例如1、2、3或4个）；所述的5-10元杂芳基中的杂原子和所述的5-10元杂环基中的杂原子为n、s和o中的一种或多种，个数为1、2、3或4个；
[0018]
各r
1-1
独立地为氘、卤素、硝基、氰基、羧基、巯基、氨基、脒基、-sf
n1
、-r
1-1-1
、-or
1-1-1
、-sr
1-1-1
、-nhr
1-1-1
、-n(r
1-1-1
)2、-r
1-1-1-nh2、-c(o)nh2、-c(o)nh(r
1-1-1
)、-c(o)n(r
1-1-1
)2、-s(o)2nh2、-s(o)2nh(r
1-1-1
)2、-s(o)2n(r
1-1-1
)2、c
2-6
烯基或c
2-6
炔基；
[0019]
n1为1、2、3、4或5；
[0020]
各r
1-1-1
独立地为c
1-6
烷基，r
1-1-1
可任选地被1个、2个或3个卤素取代；
[0021]r2a
、r
2b
、r
3a
和r
3b
独立地为氢、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-6
环烷基或c
3-6
环烯基；或者r
2a
和r
3a
与它们所连接的碳一起；或者r
2a
和r
3a
与它们所连接的碳一起形成，r
2b
和r
3b
一起形成-(ch2)
n2
，n2为0（即r
2b
和r
3b
与其相连的源自未形成环的情况）、1、2、3或4；
[0022]-m-为-(ch2)
n3-，n3为1、2、3或4；-(ch2)
n3-中任意的1个或2个-ch
2-可任选地被-cr8r
9-或-cr
10
=cr
11-替代；
[0023]
r8、r9、r
10
和r
11
独立地为h或c
1-6
的烷基，且r8和r9不同时为h；
[0024]
r4、r5、r6和r7独立地为h或c
1-6
的烷基，或者，r6和r7与它们所连接的碳一起形成、或；
[0025]r12
、r
13
、r
14
和r
15
独立地为h或c
1-6
的烷基；
[0026]
r'和r''独立为氢或c
1-6
烷基；
[0027]r2c
和r
3c
独立地为氢、c
1-6
烷基或不存在（此情况为当
“‑‑‑”
为碳碳键，根据价键规律，r
2c
和r
3c
为不存在）；
[0028]
当
“‑‑‑”
为碳碳键时，当r6和r7与它们所连接的碳一起形成，l为-c(o)-，r1为c
6-14
芳基时，至少有1个r
1-1
为-sf
n1
；
[0029]
当r6和r7与它们所连接的碳一起形成，
“‑‑‑”
为碳碳键，l为-c(o)-，-m-中的-(ch2)
n3-中任意的1个或2个-ch
2-被-cr
10
=cr
11-替代时，r1被1个或多个r
1-1
取代，各r
1-1
独立地为氰基、-sf
n1
或-r
1-1-1
，r
1-1-1
为被1个、2个或3个卤素取代；
[0030]
当r6和r7与它们所连接的碳一起形成，l为-c(o)-，r1为c
6-14
芳基，各r
1-1
独立地为卤素时，
“‑‑‑”
为不存在。
[0031]
所述的上述的如式i所示的化合物或其药学上可接受的盐里，部分基团的定义如下所述，其余基团的定义如其他任一方案所述。
[0032]
在一些实施方案中，r1中，所述的c
6-14
芳基可为苯基或萘基。
[0033]
在一些实施方案中，r1中，所述的5-10元杂芳基可为5-6元的单环的杂芳基或9-10元的并环的杂芳基。
[0034]
所述的5-6元的单环的杂芳基可以吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、恶唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异恶唑基、异噻唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,3-三唑基或四唑基，例如吡啶基。
[0035]
所述的9-10元的并环的杂芳基可以为苯并5-6元杂芳基、5元杂芳基并5元杂芳基、6元杂芳基并5元杂芳基、5元杂芳基并6元杂芳基或6元杂芳基并6元杂芳基，杂原子为n，例如喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、萘啶基、苯并三唑基、1h-吲唑基（例如）、三唑并吡啶基（例如）或吡啶并嘧啶基。
[0036]
在一些实施方案中，r1中，所述的卤素可为氟、氯或溴。
[0037]
在一些实施方案中，r1中，所述的c
2-6
炔基可为乙炔基。
[0038]
在一些实施方案中，各r
1-1-1
中，所述的c
1-6
的烷基可为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，例如甲基或乙基。
[0039]
在一些实施方案中，r
1-1-1
可任选地被1个、2个或3个卤素取代中的卤素可为氟、氯或溴，例如氟。
[0040]
在一些实施方案中，各r
1-1-1
中，所述的c
1-6
的烷基可任选地被1个、2个或3个f取代，例如-cf3、-chf2或-cf2me。
[0041]
在一些实施方案中，r
2a
、r
2b
、r
2c
、r
3a
、r
3b
和r
3c
中，所述的c
1-6
的烷基可为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基或正己基，例如甲基、或正己基。
[0042]
在一些实施方案中，各r
2a
、r
2b
、r
3a
和r
3b
中，所述的c
2-6
烯基可以为乙烯基、丙烯基、丁烯基（例如）、戊烯基或己烯基（例如），例如丁烯基或己烯基。
[0043]
在一些实施方案中，r4、r5、r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
和r
15
中，所述的c
1-6
的烷基可为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，例如甲基。
[0044]
在一些实施方案中，r'和r''中，所述的c
1-6
的烷基可为甲基、乙基、正丙基、异丙
基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，例如甲基。
[0045]
在一些实施方案中，r1为c
6-14
芳基或5-10元杂芳基，r1可任选地被1个r
1-1
取代，r
1-1
为氰基、-sf
n1
、-r
1-1-1
或c
2-6
炔基。
[0046]
在一些实施方案中，r1为、、、、、、、、、、或。
[0047]
在一些实施方案中，-nh-l-r1为、、、、、、、、、、、或。
[0048]
在一些实施方案中，当r
2a
和r
3a
与它们所连接的碳一起形成，r
2b
和r
3b
一起形成-(ch2)
n2
，n2为0、1、2、3或4时，为或（例如）。
[0049]
在一些实施方案中，为（例如）、（例如）或
（例如）。
[0050]
在一些实施方案中，所述的通式i可为通式i-a至if：
[0051][0052]
。
[0053]
较佳地，通式i-a至i-c、i-e和i-f中，各r
1-1
独立地为-sf
n1
、-r
1-1-1
、c
2-6
烯基或c
2-6
炔基。
[0054]
较佳地，通式i-a、i-c、i-d至i-f中，r
2b
和r
3b
独立地为氢或c
1-6
烷基。
[0055]
较佳地，通式i-c中，r
2c
和r
3c
独立地为氢或c
1-6
烷基。
[0056]
较佳地，通式i-a和i-c中，r'和r''独立地为氢或c
1-6
烷基。
[0057]
较佳地，通式i-b、i-d至i-f中，r4和r5独立地为氢或c
1-6
烷基。
[0058]
较佳地，通式i-d和i-e中，r
12
和r
13
独立地为氢或c
1-6
烷基。
[0059]
优选，通式i-b为通式i-b-1：
[0060]
。
[0061]
优选，通式i-c为通式i-c-1：
[0062]
。
[0063]
优选，通式i-d为通式i-d-1：
[0064]
。
[0065]
优选，通式i-e为通式i-e-1：
[0066]
。
[0067]
在一些实施方案中，所述的亚胺酰基酰肼类化合物为如下任一化合物：
[0068]
[0069][0070]
。
[0071]
本发明还提供了一种如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：将化合物ii与肼化合物iii进行酰胺化反应制得；
[0072][0073]
“‑‑‑”
、r1、r
2a
、r
2b
、r
2c
、r
3a
、r
3b
、r
3c
和l的定义均同前所述。
[0074]
本发明还提供了一种药物组合物，其包括上述的如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物或其药学上可接受的盐（有效治疗量）以及药学上可接受的载体。
[0075]
所述的药学上可接受的载体（药用辅料）可为药物生产领域中广泛采用的那些辅料。辅料主要用于提供一个安全、稳定和功能性的药物组合物，还可以提供方法，使受试者接受给药后活性成分以所期望速率溶出，或促进受试者接受组合物给药后活性成分得到有效吸收。所述的药用辅料可以是惰性填充剂，或者提供某种功能，例如稳定该组合物的整体ph值或防止组合物活性成分的降解。所述的药用辅料可以包括下列辅料中的一种或多种：粘合剂、助悬剂、乳化剂、稀释剂、填充剂、成粒剂、胶粘剂、崩解剂、润滑剂、抗粘着剂、助流剂、润湿剂、胶凝剂、吸收延迟剂、溶解抑制剂、增强剂、吸附剂、缓冲剂、螯合剂、防腐剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
[0076]
本发明的药物组合物可根据公开的内容使用本领域技术人员已知的任何方法来制备。例如，常规混合、溶解、造粒、乳化、磨细、包封、包埋或冻干工艺。
[0077]
本发明还提供了一种物质a在制备抗病毒药物中的用途，所述物质a为如前如式i
所示亚胺酰基酰肼类化合物、其药学上可接受的盐或上述的药物组合物；所述病毒为痘病毒、黄热病毒、塞卡病毒、诺如病毒和疱疹病毒中的一种或多种。
[0078]
较佳地，所述的痘病毒选自raractuba病毒、bean58058 病毒、坎塔加洛病毒（cantagalo virus，ctgv）和正痘病毒中的一种或多种。
[0079]
更佳地，所述的正痘病毒为水牛痘病毒、骆驼痘病毒、牛痘病毒、小鼠痘病毒、象痘病毒、猴痘病毒、兔痘病毒、浣熊痘病毒、臭鼬痘病毒、沙鼠痘病毒、痘苗病毒（vaccinia）、天花病毒和田鼠痘病毒中的一种或多种。
[0080]
最佳地，所述的正痘病毒痘病毒选自痘苗病毒、牛痘病毒、天花病毒、猴痘病毒、和骆驼痘病毒中的一种或多种，例如痘苗病毒。
[0081]
所述的黄热病毒(yellow fever virus ,yfv)和寨卡病毒(zikv)与西尼罗河病毒(wnv)和登革热病毒(denv)等同属黄病毒科黄病毒属，是以伊蚊为传播媒介，当前主要流行于非洲和南美洲的热带、亚热带地区。黄热病毒可引起严重危害人类健康的黄热病，表现为黄疸，出血、甚至多系统的器官衰竭。虽有减毒疫苗，但疫苗在流行区的接种覆盖率有限，每年均有疫情发生。目前尚无针对yfv感染的特异治疗药物。所述黄热病毒和寨卡病毒优选为黄热病毒(yellow fever virus ,yfv)和寨卡病毒(zikv)。
[0082]
所述的诺如病毒选自为诺瓦克样病毒(norwalk-likevirus,nlv)、夏威夷病毒(hawaii virus, hv)、山地病毒(snw mountainvirus, smv)、墨西哥病毒(mexico virus, mxv)和南安普顿病毒(southampton virus, sov)中的一种或多种。
[0083]
较佳地，所述的疱疹病毒选自单纯疱疹病毒1型（herpes simplex virus-1，hsv-1），单纯疱疹病毒2型（herpes simplex virus-2，hsv-2）、水痘-带状疱疹病毒（varicella zoster virus，vzv）、eb病毒（epstein-barr virus，ebv）、人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus，hcmv）、人类疱疹病毒6型（hhv-6）、人类疱疹病毒7型（hhv-7）和卡波济肉瘤相关病毒（kaposi's sarcoma-associated herpesvirus，kshv）中的一种或多种。
[0084]
如无特别说明，本发明所用术语具有如下含义：
[0085]
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
[0086]
术语“烷基”是指具有指定的碳原子数（例如c1~c6）的直链或支链烷基。烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。
[0087]
术语“烯基”是指具有指定碳原子数（例如，c2~c6）的、直链或支链的、不饱和的一价烃基，其具有一个或多个（例如，1个、2个或3个）碳-碳sp2双键。烯基包括但不限于：乙烯基、等。
[0088]
术语“炔基”是指具有指定碳原子数（例如，c2~c6）的、直链或支链的、不饱和的一价烃基，其具有一个或多个（例如，1个、2个或3个）碳-碳sp3三键。炔基包括但不限于：乙炔基、等。
[0089]
术语“环烷基”是指具有指定的碳原子数（例如c3~c6）的、仅由碳原子组成的、饱和的单环环状基团。环烷基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
[0090]
术语“杂环烷基”是指具有指定环原子数（例如，5-10元）的、指定杂原子数（例如，1个、2个、3个或4个）的、指定杂原子种类（n、o和s中的一种或多种）的、环状的、饱和的一价基
团，其为单环。杂环烷基通过碳原子或杂原子与分子其余部分相连。杂环烷基包括但不限于：等。
[0091]
术语“芳基”是指具有指定碳原子数（例如，c6~c
10
）的、环状的、不饱和的一价烃基，其为单环或多环（例如，2个或3个），为多环时，单环之间共用两个原子和一根键，且（至少一个环/每个环均）具有芳香性。芳基通过具有芳香性的环或不具有芳香性的环与分子其余部分相连。芳基包括但不限于：苯基、萘基等。
[0092]
术语“杂芳基”是指具有指定环原子数（例如，5~10元）的、指定杂原子数（例如，1个、2个、3个或4个）的、指定杂原子种类（n、o和s中的一种或多种）的、环状的、不饱和的一价基团，其为单环或多环，单环之间共用两个原子和一根键，且（至少一个环/每个环均）具有芳香性。杂芳基通过碳原子或杂原子与分子其余部分相连；杂芳基通过具有杂原子的环或不具有杂原子的环与分子其余部分相连；杂芳基通过具有芳香性的环或不具有芳香性的环与分子其余部分相连。杂芳基包括但不限于：等。
[0093]
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
[0094]
本发明中间体（cas：944-41-2）参照对比文件cn104758281a中实施例1中的化合物（1a）的方法制备，其他所用试剂和原料均市售可得。
[0095]
本发明的积极进步效果在于：本发明的亚胺酰基酰肼类化合物对正痘病毒属的病毒（例如痘苗病毒（vacciniavirus））具有强的抗病毒活性。
具体实施方式
[0096]
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0097]
实施例14-(五氟化硫基)苯甲酰肼（iiic）的合成
[0098][0099]
步骤1：2-(4-(五氟化硫基)苯甲酰基)肼-1-羧酸叔丁酯（iiic-1）
[0100]
将4-(五氟化硫基）苯甲酸（1.00g,4.03mmol）溶于10ml的dmf中，然后加入缩合剂hatu（1.84g,4.84mmol）,在搅拌下加入n,n-二异丙基乙胺（1.04g,8.06mmol）和肼基甲酸叔丁酯（639mg,4.84mmol）,在常温下搅拌2小时，lcms显示反应完成后，加入水
和乙酸乙酯（100ml*3）萃取，然后旋干拌样，通过柱色谱（pe:ea=2:1）得到iiic-1(1.22g,白色固体，收率83.6%)。lc-ms(esi,m/z)361.2[m-h]-;1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.68(s,1h),7.88(d,2h),7.79(d,2h),6.77(s,1h),1.53(s,9h).
[0101]
步骤2：4-(五氟化硫基)苯甲酰肼（iiic）
[0102]
将iiic-1(1.2g,3.31mmol)溶于hcl(4min1,4-dioxane)(15ml)，常温搅拌1小时，lcms显示反应完全，然后旋干,加入碳酸氢钠中和，乙酸乙酯萃取，然后旋干得到iiic(840mg，白色固体,收率96.73%)。lc-ms(esi,m/z)261.16[m-h]-;1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.04(s,1h),8.01(s,4h),4.62(s,2h).
[0103]
实施例23-(五氟化硫基)苯甲酰肼的合成（iiid）的合成
[0104][0105]
步骤1：2-(3-(五氟化硫基)苯甲酰基)肼-1-羧酸叔丁酯（iiid-1）
[0106]
将3-(五氟化硫基）苯甲酸（250mg,4.03mmol）溶于3ml的n,n-二甲基甲酰胺中，然后加入缩合剂hatu（574mg,1.51mmol）,在搅拌下加入n,n-二异丙基乙胺（360mg,2.01mmol）和肼基甲酸叔丁酯（159mg,1.21mmol）,在常温下搅拌2小时，lcms显示反应完成后，加入水和乙酸乙酯（100ml*3）萃取，然后旋干拌样，通过柱色谱（pe:ea=2:1）得到iiid-1(300mg,白色固体，收率82.2%)。lc-ms(esi,m/z)361.0[m-h]-;1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.79(s,1h),8.22(t,1h),7.90(d,2h),7.86(d,1h),7.52-7.46(m,1h),1.51(s,9h).
[0107]
步骤2：3-(五氟化硫基)苯甲酰肼（iiid）
[0108]
将iiid-1(300mg,828umol)溶于hcl(4min1,4-dioxane)(5ml)，常温搅拌1小时，然后旋干，加入碳酸氢钠中和，乙酸乙酯萃取，然后旋干得到iiid(200mg，淡黄色固体，收率92.1%)。lc-ms(esi,m/z)261.2[m-h]-.
[0109]
实施例3n-(1,3-二氧代八氢-2h-4,7-环氧异吲哚-2-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺（化合物i-1）的合成
[0110][0111]
将4-（三氟甲基）苯甲酰肼(iiia,300mg,1.47mmol)和去甲斑蝥素（iia,296mg,1.76mmol）溶于5ml的甲苯，然后滴加2滴浓硫酸，在100℃下反应1h，lcms显示反应完全，旋干有机相，拌样，通过柱色谱(meoh:dcm=1:20)得到i-1（150mg,白色固体，收率29%）。lc-ms(esi,m/z):355.3[m+h]
+
；1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ11.50-11.20(m,1h),8.10(d,2h),7.94(d,2h),4.81(s,2h),3.33(s,2h),1.71-1.68(m,4h).
[0112]
实施例4n-((3ar,4s,7r,7as)-1,3-二氧代八氢-2h-4,7-环氧异吲哚-2-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺（化合物i-2）的合成
[0113][0114]
将4-三氟甲基苯甲酰肼(iiia，300mg,1.47mmol)和iib（296mg,1.76mmol）溶于5ml的无水乙醇，然后加入dipea(197.17mg,1.53mmol)，加热回流反应1小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，拌样，通过柱色谱(meoh:dcm=1:20)得到i-2（140mg,白色固体，收率27%）。lc-ms(esi,m/z)355.2[m+h]
+
;1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.50(s,1h),8.10(d,2h),7.94(d,2h),4.80(s,2h),3.33(s,2h),1.71-1.68(m,4h).
[0115]
实施例5n-((3ar,4s,7r,7as)-1,3-二氧代八氢-2h-4,7-环氧异吲哚-2-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺（化合物i-3）的合成
[0116][0117]
将4-三氟甲基苯甲酰肼(iiia，300mg,1.47mmol)和iib（296mg,1.76mmol）溶于5ml的无水乙醇，然后加入dipea(197.17mg,1.53mmol)，加热回流反应1小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，拌样，通过柱色谱(meoh:dcm=1:20)得到i-3（140mg,白色固体，收率27%）。lc-ms(esi,m/z)355.2[m+h]
+
;1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.51-11.24(m,1h),8.25
–
8.20(m,2h),8.05(d,1h),7.82(t,1h),4.81(s,2h),3.34(s,2h),1.71(s,4h).
[0118]
实施例6n-((3ar,4s,7r,7as)-1,3-二氧代八氢-2h-4,7-环氧异吲哚-2-基)-4-(五氟-l
6-亚磺酰)苯甲酰胺（化合物i-4）的合成
[0119][0120]
将4-(五氟巯基)苯甲酰肼(iiic,200mg,762.78umol)和iib（256mg,
1.53mmol）溶于4ml的无水乙醇，然后加入dipea(197.17mg,1.53mmol)，加热回流反应1小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，拌样，通过柱色谱(pe:ea=2:1)得到i-4（182mg,白色固体，收率59.9%）。lc-ms(esi,m/z)411.0[m-h]-;1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.55(s,1h),8.14-8.06(m,4h),4.80(s,2h),3.37-3.33(m,2h),1.70(s,4h).
[0121]
实施例7n-((3ar,4s,7r,7as)-1,3-二氧代八氢-2h-4,7-环氧异吲哚-2-基)-3-(五氟化硫基)苯甲酰胺（化合物i-5）的合成
[0122][0123]
将3-(五氟巯基)苯甲酰肼(iiid,200mg,762.78umol)和iib（256mg,1.53mmol）溶于4ml的乙醇，然后加入dipea(197.17mg,1.53mmol)，在80℃下反应12小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，拌样，通过柱色谱(pe:ea=2:1)得到i-5（72mg,白色固体,收率22.9%）。lc-ms(esi,m/z)411.0[m-h]-;1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.63(s,1h),8.40(s,1h),8.24-8.21(m,2h),7.84(t,1h),4.81(s,2h),3.35(s,2h),1.71(s,4h).
[0124]
实施例8n-(1,3-二氧代-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2h-4,7-环氧异吲哚-2-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺（化合物i-6）的合成
[0125][0126]
将iiia(200mg,979.68umol)和iic（325.51mg,1.96mmol）溶于4ml的乙醇，加入dipea(253.23mg,1.96mmol)，在80℃下反应12小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，通过pre-hplc得到目标产物i-6（57mg,收率16.5%，白色固体）。lc-ms(esi,m/z)351.0[m-h]-;1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.50(s,1h),8.11(d,2h),7.94(d,2h),6.60(s,2h),5.26(s,2h),3.17-3.09(m,2h).
[0127]
实施例9n-((3ar,4s,7r,7as)-3a,7a-二甲基-1,3-二氧代八氢-2h-4,7-环氧异吲哚-2-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺（化合物i-7）的合成：
[0128]
[0129]
将iiia（100mg,489.84umol）和iid（105.72mg,538.82umol）溶于2ml的乙醇，然后加入dipea(126.62mg,979.68umol)，在80℃下反应12小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，拌样，通过柱色谱(pe:ea=2:1)得到i-7（71mg,白色固体收率37.9%）。lc-ms(esi,m/z)383.2[m+h]
+
;1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.61(s,1h),8.12(d,2h),7.95(d,2h),4.54(s,2h),1.90-1.88(m,2h),1.62-1.59(m,2h),1.18(s,6h).
[0130]
实施例10n-((3ar,4s,7r,7as)-3a,7a-二甲基-1,3-二氧代八氢-2h-4,7-环氧异吲哚-2-基)-4-(五氟化硫基)苯甲酰胺（化合物i-8）的合成
[0131][0132]
将4-(五氟巯基)苯甲酰肼（iiic，20mg,97.97umol）和iid（21.14mg,107.76umol）溶于3ml的乙醇，然后加入dipea(25.32mg,195.94umol)，在80℃下反应12小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，拌样，通过柱色谱(pe:ea=2:1)得到i-8(16mg,白色固体,收率37.1%）。lc-ms(esi,m/z)439.0[m-h]-;1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.74(s,1h),7.88(d,2h),7.78(d,2h),1.89-1.84(m,2h),1.77-1.69(m,2h),1.59(s,2h),1.28(s,6h).
[0133]
实施例114-(三氟甲基)-n-((1r，5s)-1，8，8-三甲基-2，4-二氧代-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)苯甲酰胺（化合物i-9）的合成
[0134][0135]
将4-(三氟甲基）苯甲酰肼（iiia,200mg,979.68umol）和（d）-樟脑酸酐（iie,288.38mg,1.47mmol）溶于4ml的乙醇，然后加入dipea(253.23mg,1.96mmol)，在80℃下反应12小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，通过pre-hplc得到白色固体i-9（59mg,收率15.75%）。lc-ms(esi,m/z)369.0[m+h]
+
;1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.09-10.94(m,1h),8.11-8.06(m,2h),7.97-7.93(m,2h),2.85(d,1h),2.36-2.27(m,1h),2.10-2.02(m,1h),2.01-1.64(m,2h),1.28(s,2h),1.16(s,3h),1.04(s,1h),0.99(s,3h).
[0136]
实施例124-(三氟甲基)-n-((1s，5r)-1，8，8-三甲基-2，4-二氧-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)苯甲酰胺(化合物i-10）的合成
11.13-11.01(m,1h),8.15-8.07(m,4h),2.85(d,1h),2.37-2.25(m,1h),2.13-2.01(m,1h),1.98-1.66(m,2h),1.27(s,2h),1.15(s,3h),1.04(s,1h),0.99(s,3h).
[0144]
实施例15n-(6，6-二甲基-2，4-二氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺（化合物i-13）的合成：
[0145][0146]
将4-(三氟甲基）苯甲酰肼(iiia,200mg,979.68umol)和iih（274.58mg,1.96mmol）溶于4ml的乙醇，加入dipea(253.23mg,1.96mmol)，在80℃下反应12小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，拌样，通过pe:ea=2:1得到目标产物i-13（100mg,收率31.29%，白色固体）。lc-ms(esi，m/z)325.0[m-h]-;1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.19(s,1h),8.08(d,2h),7.95(t,2h),2.73-2.70(m,1h),2.65(s,1h),1.61-1.29(m,3h),1.25(s,3h).
[0147]
实施例16n-(3-异丁基-2，5-二氧吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺（i-14）的合成
[0148][0149]
步骤1n-(3-(2-甲基丙基)-2,5-二氧代吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺（i-14-1）
[0150]
将4-三氟甲基苯甲酰肼(iiia,300mg,1.47mmol)和iii（453.09mg,2.94mmol）溶于4ml的甲苯，在90℃下反应5小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，拌样，通过柱色谱（pe:ea=2:1）得到白色固体i-14-1（220mg,收率43.9%）。lc-ms(esi,m/z)341.2[m+h]
+
.
[0151]
步骤2n-(3-异丁基-2，5-二氧吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺（i-14）
[0152]
将i-14-1（200mg，587.72umol）溶于5ml的乙酸乙酯中，加入钯碳（62.55mg，587.72umol），在氢气保护下，常温搅拌4小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，通过pre-hplc得到白色固体i-11（57.04mg，收率28.3%）。lc-ms(esi,m/z)342.8[m+h]
+
;1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.38(s,1h),8.11(d,2h),7.95(d,2h),3.29-3.27(m,1h),3.08-3.03(m,2h),2.86-2.57(m,1h),2.17-2.08(m,1h),1.81-1.72(s,1h),1.64(d,2h),1.60-1.38(m,1h),0.94(d,3h),0.91(d,3h).
[0153]
实施例17(e)-n-(3-(己烯-1-基)-2,5-二氧代吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺（i-15）的合成：
[0154][0155]
将4-三氟甲基苯甲酰肼 (iiia, 200 mg, 979.68umol)和iij （357.03 mg, 1.96mmol）溶于4ml的甲苯，在90℃下反应5小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，拌样，通过柱色谱（pe:ea=2:1）标题化合物i-15 （51 mg, 白色固体, 收率14.13%）。lc-ms (esi, m/z) 367.1 [m+h]
+
。 1
h nmr (400 mhz, dmso-d6) δ 11.36 (s, 1h), 8.11 (d, 2h), 7.95 (d, 2h), 5.66
ꢀ–ꢀ
5.52 (m, 1h), 5.42-5.37 (m, 1h), 3.21
ꢀ–ꢀ
2.95 (m, 2h), 2.71
ꢀ–ꢀ
2.52 (m, 1h), 2.46
ꢀ–ꢀ
2.28 (m, 2h), 1.97 (q, 2h), 1.36 (q, 2h), 0.86 (t, 3h).
[0156]
实施例18 n-（3-己基-2，5-二氧代吡咯烷-1-基）-4-三氟甲基苯甲酰胺(i-16)的合成
[0157][0158]
将i-12 (20 mg, 54.3 umol)溶于2ml的乙酸乙酯，并加入钯碳（5.78 mg，54.3 umol）在氢气保护下常温反应4小时，lcms显示反应完全，旋干有机相便得到标题化合物i-13（18 mg, 收率89.51%，白色固体）。lc-ms (esi，m/z)= 369.12 [m-h]-;1h nmr (400 mhz, dmso-d6) δ 11.41 (s, 1h), 8.17 (d, 2h), 8.02 (d, 2h), 3.12-3.07 (m, 2h), 2.73-2.63 (m, 1h), 1.92
ꢀ–ꢀ
1.76 (m, 1h), 1.64-1.61 (m, 1h), 1.45-1.30 (m, 8h), 0.94 (t, 3h).
[0159][0160][0161]
将(3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-4，4a，5，5a，6，6a-六氢-1h-4，6-乙烯环丙[f]异苯并呋喃-1，3(3ah)-二酮(iik, 300 mg, 1.58 mmol)和4-(五氟巯基)苯甲酰肼(iiic, 322.1 mg, 1.58 mmol)溶于4ml的甲苯，在90℃下反应5小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，硅胶柱层析纯化(pe/ea =30/1-5/1), 得标题化合物i-17 (350 mg, 白色固体，收率59.0 %)。lc-ms (esi，m/z) 435.4 [m+h]
+
；1h nmr (dmso-d6, 400 mhz) d: 11.43-11.15 (m, 1h), 8.10 (s, 4h), 5.80 (s, 2h), 3.29-3.19 (m, 4h), 1.18-1.03(m, 2h), 0.28-0.26 (m, 1h), 0.07 (s, 1h) .
[0162][0163]
将iik (300 mg, 1.58 mmol)和3-(五氟巯基)苯甲酰肼(iiid, 413.6 mg, 1.58 mmol)溶于4ml的甲苯，在90℃下反应5小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，硅胶柱层析纯化(pe/ea =30/1-5/1), 得标题化合物i-18 (330 mg, 白色固体，收率48.1 %)。lc-ms (esi): 435.4 [m+h]
+
；1h nmr (400 mhz, dmso-d6)δ 11.49-11.27 (m, 1h), 8.37-8.32 (m, 1h), 8.22-8.18(m, 2h), 7.84-7.78 (m,1h), 5.80 (s, 2h), 3.30-3.24 (m, 4h), 1.23-1.17 (m, 2h),0.30-0.26 (m, 1h), 0.06-0.01 (m, 1h).
[0164]
实施例21 4-(二氟甲基)-n-((3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-1，3-二氧代-3，3a，4，4a，5，5a，6，6a-八氢-4，6-乙烯基环丙[f]异吲哚-2(1h)-基)苯甲酰胺（i-19）的合成
[0165][0166]
将4-(二氟甲基）苯甲酸 (va, 500 mg, 2.91 mmol)和(3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-2-氨基-4，4a，5，5a，6，6a-六氢-4，6-乙烯环丙[f]异吲哚-1，3(2h，3ah)-二酮 (iva, 300 mg, 1.47 mmol)溶解于n，n-二甲基甲酰胺(5 ml)中，加入hatu (1.02 g, 2.69 mmol) 和 tea (407.2 mg, 4.03 mmol) ，搅拌反应2h. 加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水、水洗涤，无硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱层析纯化(pe/ea=4/1~2/1)标题化合物i-19 (230 mg, 白色固体，收率43.7 %。lc-ms (esi，m/z) 359 [m+h]
+
;1h nmr (cdcl3, 400 mhz) d: 8.08 (s, 1h), 7.90 (d, 2h), 7.58 (d, 2h), 6.68 (t, 1h), 5.85 (s, 2h), 3.46 (s, 2h), 3.15 (s, 2h), 1.15 (d, 2h), 0.33-0.25 (m, 2h).
[0167]
实施例22 4-(1，1-二氟乙基)-n-((3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-1，3-二氧代-3，3a，4，4a，5，5a，6，6a-八氢-4，6-乙烯基环丙[f]异吲哚-2(1h)-基)苯甲酰胺（i-20）的合成
[0168][0169]
将(3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-2-氨基-4，4a，5，5a，6，6a-六氢-4，6-乙烯环丙[f]
3.16(s,2h),1.15(s,2h),0.36-0.26(m,2h).
[0177]
实施例25n-((3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-1，3-二氧代-3，3a，4，4a，5，5a，6，6a-八氢-4，6-乙烯基环丙[f]异吲哚-2(1h)-基)-4-(三氟甲基)苯磺酰胺(i-23)的合成
[0178][0179]
在0℃下向(3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-2-氨基-4，4a，5，5a，6，6a-六氢-4，6-乙烯环丙[f]异吲哚-1，3(2h，3ah)-二酮（iva,300mg，1.47mmol）的dcm（10ml）溶液中加入tea（445.7mg，4.41mmol），dmap（35.9mg，0.29mmol）和4-(三氟甲基)苯磺酰氯（ve,899.3mg，3.68mmol）。将反应混合物在室温下搅拌5h。加h2o（20ml）淬灭，用ea（25ml
×
3）萃取，旋蒸除去ea，加入meoh（10ml），搅拌下加入naohaq.(2m,3.03ml,6.07mmol).将反应混合物在室温下搅拌1h，反应混合物用水稀释，用ea（30ml
×
3）萃取。合并有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法（pe/ea=2/1）纯化，得到标题化合物i-23(265mg,白色固体,收率53.0%)。lc-ms(esi,m/z)413.4[m+h]
+
;1hnmr(cdcl3,400mhz)d7.84(d,2h),7.57(d,2h),5.54-5.52(m,2h),3.18-3.17(m,2h),2.82-2.81(m,2h),0.89-0.88(m,2h),0.11-0.02(m,2h).
[0180]
实施例26(3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-2-((6-(三氟甲基)-1h-吲唑-3-基)氨基)-4，4a，5，5a，6，6a-六氢-4，6-乙烯环丙[f]异吲哚-1，3(2h，3ah)-二酮(i-24)的合成：
[0181][0182]
步骤1:3-碘-1-(四氢2h-吡喃-2-基)-6-(三氟甲基)-1h-吲唑（i-24-1）
[0183]
在0℃下向3-碘-6-(三氟甲基)-1h-吲唑（vf,900mg，2.89mmol）的dcm（18ml）溶液中加入tsoh-h2o（54.8mg，0.29mmol）和dhp（363.5mg，4.33mmol）。将混合物在室温下搅拌1h。反应混合物用水淬灭，用dcm（50ml
×
3）提取。有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法（pe/ea=10/1）纯化，得到标题化合物i-24-1（1.0g，白色固体，产率87.7％）。lc-ms(esi,m/z)397.2[m+h]
+
.
[0184]
步骤2:(3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-2-((1-(四氢2h-吡喃-2-基)-6-(三氟甲基)-1h-吲唑-3-基)氨基)-4，4a，5，5a，6，6a-六氢-4，6-乙烯环丙[f]异吲哚-1，3(2h，3ah)-二酮（i-24-2）
[0185]
室温下向i-24-1（1.00g，2.53mmol）的甲苯（10ml）溶液中加入iva（0.51g，2.53mmol）、cs2co3（1.65g，5.05mmol）、pd2(dba)3（0.23g，0.253mmol）和xantphos（0.15g，0.253mmol），将混合物加热100℃搅拌12h。过滤，浓缩滤液，残留物通过硅胶柱色谱法（pe/ea=3/1）提纯，得到标题化合物i-24-2（110mg，黄色固体,产率9.3%）。lc-ms(esi,m/z)473.5[m+h]
+
.
[0186]
步骤3： (3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-2-((6-(三氟甲基)-1h-吲唑-3-基)氨基)-4，4a，5，5a，6，6a-六氢-4，6-乙烯环丙[f]异吲哚-1，3(2h，3ah)-二酮（i-24）
[0187]
向i-24-2 （110 mg，0.23 mmol）的meoh（5 ml）溶液中加入tsoh-h2o（88.6 mg，0.47 mmol），混合物在室温下搅拌1h。反应混合物用水淬灭，用ea（20 ml
×
3）萃取。合并有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并浓缩。残余物通过预hplc纯化，得到标题化合物i-24 (25 mg，白色固体, 产率27.6％)。lc-ms (esi, m/z) 389.3 [m+h]
+
；1h nmr (dmso-d6, 400 mhz) d 12.30 (s, 1h), 9.19 (s, 1h), 7.91 (d, 1h), 7.69 (s, 1h) , 7.28 (d, 1h), 5.78 (t, 2h), 3.31-3.21 (m, 3h), 1.18-1.17 (m, 2h), 0.27-0.26 (m, 1h), 0.07-0.06 (m, 2h).
[0188]
实施例27 (3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-2-((7-(三氟甲基)-[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶-3-基)氨基)-4，4a，5，5a，6，6a-六氢-4，6-乙烯环丙[f]异吲哚-1，3(2h，3ah)-二酮(i-25)的合成
[0189][0190]
步骤1：3-氯-7-(三氟甲基)-[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶(vg)
[0191]
将7-(三氟甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a ]吡啶
ꢀ‑
3(2h)-酮 (2.00 g，9.85 mmol)和pocl3(50ml)的混合物在氮气下于110℃搅拌16h。浓缩反应混合物，用na2co3aq.将残余物调至ph＝7，所得混合物用ea（100 ml
×
3）提取。有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法（pe/ea=4/1）纯化，得到标题化合物vg (0.45 g，白色固体，产率20.6％）。lc-ms (esi, m/z) 222.6 [m+h]
+
；
[0192]
步骤2：(3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-2-((7-(三氟甲基)-[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶-3-基)氨基)-4，4a，5，5a，6，6a-六氢-4，6-乙烯环丙[f]异吲哚-1，3(2h，3ah)-二酮(i-25)
[0193]
向vg（250mg，1.13 mmol）的dmso（5ml）溶液中加入cs2co3（882.3mg，2.71 mmol），iva（411.6mg，1.35 mmol）和tbai（100.0mg，0.27 mmol）。将混合物在110℃下搅拌5h。过滤反应混合物，滤液通过制备hplc纯化，得到标题化合物 i-25 （40mg，黄色固体, 产率9.1%）。lc-ms (esi, m/z) 390.3 [m+h]
+
；1h nmr (dmso-d6, 400 mhz) d10.05 (s, 1h), 8.30 (d, 1h), 8.19 (s, 1h), 7.20-7.18 (m, 1h), 5.81-5.78 (m, 2h), 3.31-3.24 (m, 4h), 1.19 (m, 2h), 0.29-0.24 (m, 1h), 0.08-0.04 (m, 1h).
[0194]
对比实施例 n-((3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-1，3-二氧代-3，3a，4，4a，5，5a，6，6a-八氢-4，6-乙烯基环丙[f]异吲哚-2(1h)-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺（st-246）的合成
[0195][0196]
将(3ar，4r，4ar，5as，6s，6as)-4，4a，5，5a，6，6a-六氢-1h-4，6-乙烯环丙[f]异苯并呋喃-1，3(3ah)-二酮(iik, 300 mg, 1.58 mmol)和4-(三氟甲基苯甲酰肼(iiia, 322.0 mg, 1.58 mmol) 溶于4ml的甲苯，在90℃下反应5小时，lcms显示反应完全，旋干有机相，硅胶柱层析纯化得标题化合物 st-246 (350 mg, 白色固体，收率59.0 %). lc-ms (esi，m/z) 377 [m+h]
+
;1h nmr (cdcl3, 400 mhz) d 8.06 (s, 1h), 7.94 (d, 2h), 7.71 (d, 2h), 5.85 (s, 2h), 3.47 (s, 2h), 3.16 (s, 2h), 1.16-1.15 (m, 2h), 0.36-0.26 (m, 2h).
[0197]
效果实施例1
[0198]
抑制正痘病毒的复制：本发明应用细胞病变实验（cpe）评价受试化合物体外抗痘苗病毒（vaccinia）活性。
[0199]
1.实验材料
[0200]
1.1.细胞株和病毒株
[0201]
人包皮成纤维细胞hff-1和vaccinia vp13病毒株分别来自美国典型培养物保藏中心（atcc，货号scrc-1041）和中国典型培养物保藏中心（cctcc，货号gdv088）。细胞于添加了10 %胎牛血清和2 mm l-谷氨酰胺、1 %非必需氨基酸、1 %双抗、1%丙酮酸钠的dulbecco's modified eagle medium（dmem）培养液中培养。添加了2 %胎牛血清和2 mm l-谷氨酰胺、1 %非必需氨基酸、1 %双抗、1%丙酮酸钠的dmem培养液用作实验培养液。
[0202]
1.2.化合物
[0203]
本发明实施例化合物用100 % dmso配制成20 mm储存溶液保存。对照化合物为st-246（medchemexpress，货号hy-14805s）和西多福韦（medchemexpress，货号hy-17438）。受试化合物先以10、50和100μm三个浓度初筛。对于半抑制浓度（ec50）低于50um的化合物进行复测，依据初筛结果确定起始浓度，每个化合物测试8个浓度，3倍系列稀释，双复孔。
[0204]
1.3.主要试剂和仪器
[0205]
（1）主要仪器：酶标仪（molecule devices，型号spectramax340pc384）。
[0206]
（2）主要试剂：细胞活力检测试剂cck-8（上海李记生物科技有限公司，货号ac11l057）。
[0207]
2. 实验方法
[0208]
st-246和西多福韦为为活性测试的对照化合物。化合物测试8个浓度，3倍系列稀释，双复孔。病毒实验方法如下：
[0209]
表1：抗病毒活性实验方法
[0210]
[0211]
第一天：hff-1细胞以每孔6,000个细胞，每孔100 μl的密度接种到96孔测试板中并于5 % co2、37 ℃培养箱中培养过夜。
[0212]
第二天：每孔分别加入50 μl倍比稀释后的化合物（8个浓度，3倍梯度稀释，双复孔）和50 μl 病毒（病毒接种量为moi=0.1）。设置细胞对照（细胞，无化合物处理或病毒感染），病毒对照（细胞感染病毒，无化合物处理）和培养液对照（只有培养液）。细胞培养液总体积为每孔200 μl。培养液中dmso的终浓度分别为0.5 %。细胞于5 % co2、37 ℃培养箱中培养4天。
[0213]
第六天：使用细胞活力检测试剂盒cck8检测细胞活力。受试样品的抗病毒活性和细胞毒性分别由不同浓度下的样品对病毒引起的细胞病变效应的抑制率（%）和细胞的活率（%）表示。计算公式如下：
[0214]
抑制率（%）=（测试孔读值-病毒对照平均值）/（细胞对照平均值-病毒对照平均值）
×ꢀ
100
[0215]
细胞活率（%）=（测试孔读值-培养基对照平均值）/（细胞对照平均值-培养基对照平均值）
×ꢀ
100
[0216]
ec
50
和cc
50
值通过prism软件（version 7）计算，抑制曲线拟合方法为log(inhibitor) vs. response
ꢀ‑‑ꢀ
variable slope of graphpad prism。
[0217]
3.结果与讨论
[0218]
受试化合物进行细胞病变实验测试。其中，阳性对照化合物st-246均表现出预期的抗病毒活性和细胞毒性（表2），表明了实验的可信性。受试化合物和对照化合物抗病毒活性和细胞毒性结果总结在表2。
[0219]
表2
[0220][0221]
结果表明，本发明的化合物可以有效抗痘苗病毒（vaccinia）。本发明的化合物对正痘病毒的抑制活性与阳性对照西多福韦相当甚至更优。除化合物i-15和i-16外，其它21个化合物（化合物i-1至i-14、i-7至i-24）的抗痘苗病毒活性都优于阳性对照西多福韦，其中，有8个化合物（化合物i-3、i-11、i-17至i-20、i-22、i-24）的ec
50
值低于1.0μm，显著优于西多福韦，特别地，有2个化合物（化合物i-18、i-19）的ec
50
值低于0.1μm，略优于st-246或与之相当。
[0222]
在测试浓度范围内，受试化合物对hff-1细胞均未显示出明显的细胞毒性，其cc
50
值均大于最高检测浓度100μm。

技术特征：
1.一种如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物或其药学上可接受的盐：其中：
“‑‑‑”
为碳碳键或不存在；l为不存在、-c(o)-或-s(o)
2-；r1为c
6-14
芳基、5-10元杂芳基或5-10元杂环基，r1可任选地被1个或多个r
1-1
取代；所述的5-10元杂芳基中的杂原子和所述的5-10元杂环基中的杂原子为n、s和o中的一种或多种，个数为1、2、3或4个；各r
1-1
独立地为氘、卤素、硝基、氰基、羧基、巯基、氨基、脒基、-sf
n1
、-r
1-1-1
、-or
1-1-1
、-sr
1-1-1
、-nhr
1-1-1
、-n(r
1-1-1
)2、-r
1-1-1-nh2、-c(o)nh2、-c(o)nh(r
1-1-1
)、-c(o)n(r
1-1-1
)2、-s(o)2nh2、-s(o)2nh(r
1-1-1
)2、-s(o)2n(r
1-1-1
)2、c
2-6
烯基或c
2-6
炔基；n1为1、2、3、4或5；各r
1-1-1
独立地为c
1-6
烷基，r
1-1-1
可任选地被1个、2个或3个卤素取代；r
2a
、r
2b
、r
3a
和r
3b
独立地为氢、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-6
环烷基或c
3-6
环烯基；或者r
2a
和r
3a
与它们所连接的碳一起；或者r
2a
和r
3a
与它们所连接的碳一起形成，r
2b
和r
3b
一起形成-(ch2)
n2
，n2为0、1、2、3或4；-m-为-(ch2)
n3-，n3为1、2、3或4；-(ch2)
n3-中任意的1个或2个-ch
2-可任选地被-cr8r
9-或-cr
10
=cr
11-替代；r8、r9、r
10
和r
11
独立地为h或c
1-6
的烷基，且r8和r9不同时为h；r4、r5、r6和r7独立地为h或c
1-6
的烷基，或者，r6和r7与它们所连接的碳一起形成、或；r
12
、r
13
、r
14
和r
15
独立地为h或c
1-6
的烷基；r'和r''独立为氢或c
1-6
烷基；r
2c
和r
3c
独立地为氢、c
1-6
烷基或不存在；
当
“‑‑‑”
为碳碳键时，当r6和r7与它们所连接的碳一起形成，l为-c(o)-，r1为c
6-14
芳基时，至少有1个r
1-1
为-sf
n1
；当r6和r7与它们所连接的碳一起形成，
“‑‑‑”
为碳碳键，l为-c(o)-，-m-中的-(ch2)
n3-中任意的1个或2个-ch
2-被-cr
10
=cr
11-替代时，r1被1个或多个r
1-1
取代，各r
1-1
独立地为氰基、-sf
n1
或-r
1-1-1
，r
1-1-1
为被1个、2个或3个卤素取代；当r6和r7与它们所连接的碳一起形成，l为-c(o)-，r1为c
6-14
芳基，各r
1-1
独立地为卤素时，
“‑‑‑”
为不存在。2.如权利要求1所述的如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其满足如下1个或多个条件：（1）r1中，所述的c
6-14
芳基为苯基或萘基；（2）r1中，所述的5-10元杂芳基为5-6元的单环的杂芳基或9-10元的并环的杂芳基；（3）r1中，所述的卤素为氟、氯或溴，例如氟；（4）r1中，所述的c
2-6
炔基为乙炔基；（5）各r
1-1-1
中，所述的c
1-6
的烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，例如甲基或乙基；（6）r
1-1-1
可任选地被1个、2个或3个卤素取代中的卤素为氟、氯或溴，例如氟；（7）r
2a
、r
2b
、r
2c
、r
3a
、r
3b
和r
3c
中，所述的c
1-6
的烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基或正己基，例如甲基、或正己基；（8）各r
2a
、r
2b
、r
3a
和r
3b
中，所述的c
2-6
烯基可以为乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基，例如丁烯基或正己烯基；（9）r4、r5、r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
、r
14
和r
15
中，所述的c
1-6
的烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，例如甲基；（10），r'和r''中，所述的c
1-6
的烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，例如甲基。3.如权利要求2所述的如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其满足如下1个或多个条件：（1）所述的5-6元的单环的杂芳基为吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、恶唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异恶唑基、异噻唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,3-三唑基或四唑基，例如吡啶基；（2）所述的9-10元的并环的杂芳基为苯基并5-6元杂芳基、5元杂芳基并5元杂芳基、6元杂芳基并5元杂芳基、5元杂芳基并6元杂芳基或6元杂芳基并6元杂芳基，杂原子为n，例如喹
啉基、异喹啉基、喹唑啉基、萘啶基、苯并三唑基、1h-吲唑基、三唑并吡啶基或吡啶并嘧啶基；所述的1h-吲唑基可为；所述的三唑并吡啶基可为；（3）各r
1-1-1
中，所述的c
1-6
的烷基可任选地被1个、2个或3个f取代，例如-cf3、-chf2或-cf2me；（4）所述的丁烯基为；（5）所述的己烯基为。4.如权利要求1所述的如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其满足如下1个或多个条件：（1）r1为c
6-14
芳基或5-10元杂芳基，r1可任选地被1个r
1-1
取代，r
1-1
为氰基、-sf
n1
、-r
1-1-1
或c
2-6
炔基；优选，r1为、、、、、、、、、、或；（2）当r
2a
和r
3a
与它们所连接的碳一起形成，r
2b
和r
3b
一起形成-(ch2)
n2
，n2为0、1、2、3或4时，为或；
优选，为；（3）为、或；优选，为；优选，为；优选，为。5.如权利要求1所述的如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其满足如下1个或多个条件：所述的通式i可为通式i-a至i-f：f：；较佳地，通式i-a至i-c、i-e和i-f中，各r
1-1
独立地为-sf
n1
、-r
1-1-1
、c
2-6
烯基或c
2-6
炔基；和/或，通式i-a、i-c、i-d至i-f中，r
2b
和r
3b
独立地为氢或c
1-6
烷基；和/或，通式i-c中，r
2c
和r
3c
独立地为氢或c
1-6
烷基；和/或，通式i-a和i-c中，r'和r''独立地为氢或c
1-6
烷基；和/或，通式i-b、i-d至i-f中，r4和r5独立地为氢或c
1-6
烷基；和/或，通式i-d和i-e中，r
12
和r
13
独立地为氢或c
1-6
烷基。
6.如权利要求5所述的如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，通式i-b为通式i-b-1：；通式i-c为通式i-c-1：；通式i-d为通式i-d-1：；通式i-e为通式i-e-1：。7.如权利要求1所述的如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的亚胺酰基酰肼类化合物为如下任一化合物：
。8.如权利要求1-7中任一项所述的如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物或其药学上可接
受的盐，其特征在于，所述的如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物的制备方法包括如下步骤：将化合物ii与肼化合物iii进行酰胺化反应制得；
“‑‑‑”
、r1、r
2a
、r
2b
、r
2c
、r
3a
、r
3b
、r
3c
和l的定义均同如权利要求1-7中任一项所述。9.一种药物组合物，其特征在于，其包含如权利要求1-7中任一项所述的如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。10.一种物质a在制备抗病毒药物中的用途，其特征在于，所述物质a为如权利要求1-7中任一项所述的如式i所示亚胺酰基酰肼类化合物、其药学上可接受的盐或如权利要求9所述的药物组合物；所述病毒为痘病毒、黄热病毒、塞卡病毒、诺如病毒和疱疹病毒中的一种或多种；所述的痘病毒优选选自raractuba病毒、bean58058 病毒、坎塔加洛病毒和正痘病毒中的一种或多种；所述的正痘病毒较佳地为水牛痘病毒、骆驼痘病毒、牛痘病毒、小鼠痘病毒、象痘病毒、猴痘病毒、兔痘病毒、浣熊痘病毒、臭鼬痘病毒、沙鼠痘病毒、痘苗病毒、天花病毒和田鼠痘病毒中的一种或多种；更佳地，所述的正痘病毒痘病毒选自痘苗病毒、牛痘病毒、天花病毒、猴痘病毒、和骆驼痘病毒中的一种或多种，例如痘苗病毒；所述的诺如病毒优选选自诺瓦克样病毒、夏威夷病毒、山地病毒、墨西哥病毒和南安普顿病毒中的一种或多种；所述的疱疹病毒优选选自单纯疱疹病毒1型，单纯疱疹病毒2型、水痘-带状疱疹病毒、eb病毒、人类巨细胞病毒、人类疱疹病毒6型、人类疱疹病毒7型和卡波济肉瘤相关病毒中的一种或多种。

技术总结
本发明公开了一种亚胺酰基酰肼类化合物、含其的组合物和其应用。该亚胺酰基酰肼类化合物如式I所示。本发明的亚胺酰基酰肼类化合物对正痘病毒具有强的抗病毒活性，具有良好的应用前景。用前景。用前景。


技术研发人员：沈孝坤 黄金文 李中原 金慧泽
受保护的技术使用者：浙江甫康制药有限公司
技术研发日：2023.08.31
技术公布日：2023/10/6