人参皂苷Ro防治心血管疾病的新用途的制作方法

人参皂苷ro防治心血管疾病的新用途
技术领域
1.本发明涉及生物医药领域，具体地说是人参皂苷ro防治心血管疾病的新用途。


背景技术：

2.心血管疾病，是全球死亡和致残的主要原因。急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction，ami)多继发于多种因素引起的冠状动脉粥样硬化的斑块破裂，发生出血或诱发急性闭塞性血栓，堵塞冠脉，使局部心肌细胞供血急剧减少或完全中断，发生急性、持续性缺血缺氧，导致局部心肌坏死，最终发展为心衰。急性心梗是心血管疾病致死的主要原因，其发病迅速、死亡率高且预后不良，严重威胁人们的健康。因此，寻找防治急性心梗改善心血管疾病的药物具有重要意义。
3.为此，本领域技术人员提出了人参皂苷ro用于预防、缓解和/或治疗急性心梗等心血管疾病。


技术实现要素：

4.为了解决上述技术问题，本发明提供人参皂苷ro防治心血管疾病的新用途，以解决背景技术中提出的问题。
5.人参皂苷ro防治心血管疾病的新用途，包括：
6.实验对象：雄性c57bl/6j小鼠；
7.分组：将实验对象分为假手术组、假手术+人参皂苷ro组、模型组、人参皂苷ro低剂量组、人参皂苷ro中剂量组、人参皂苷ro高剂量组、阳性药卡托普利组，共7组，每组12只；
8.给药：假手术组于术前2h灌胃等量生理盐水，1次；假手术+人参皂苷ro组于术前2h灌胃人参皂苷ro80mg/kg，1次；模型组于术前2h灌胃等量生理盐水1次；人参皂苷ro低剂量组于术前2h灌胃人参皂苷ro20mg/kg，1次；人参皂苷ro中剂量组于术前2h灌胃人参皂苷ro40mg/kg，1次；人参皂苷ro高剂量组于术前2h灌胃人参皂苷ro80mg/kg，1次；阳性药卡托普利组于术前2h腹腔注射卡托普利160mg/kg，1次；
9.模型制备：腹腔注射实验对象3％戊巴比妥钠，麻醉后仰卧位固定，连接人工呼吸机，剪去实验对象胸部的毛，碘伏消毒，在胸骨左侧作一纵行切口，钝性分离胸大肌，暴露第四根肋骨，用止血钳将胸腔打开并撕开心包，暴露心脏，轻压胸廓将心脏挤出胸腔外，用丝线在冠状动脉左前降支下方3mm处和线穿过的心肌组织一起结扎，将心脏迅速放回胸腔，并将胸腔空气完全挤出后缝合；
10.各组实验对象分别在结扎后24h后取血和心脏组织。
11.其中，测定心肌梗死面积的方法为：摘取心脏，置于-20℃冰箱冷冻6h后，从心尖开始，迅速1mm左右的薄片，共取5片，再将切片置于含1％ttc，ph7.4染液的6孔细胞培养板中，37℃孵育箱中避光孵育20min后取出，吸去多余的染液，并记录，采用图像分析系统imagej测量心肌梗死面积，计算其占心脏面积百分比，再统计分析。
12.其中，检测血清肌钙蛋白ctnt以及肌酸激酶同工酶ck-mb的方法为：各组小鼠造模
24h后，进行眼眶取血；室温静置30min后，以3500rpm离心10min，取上清并分装保存并检测。
13.其中，对心脏组织病理损伤的检测方法为：各组小鼠取血后摘取心脏，在预冷pbs溶液中挤出残留血液，滤纸吸干残液，使用4％多聚甲醛溶液固定心脏组织24h，采用石蜡包埋，进行he和masson染色。
14.其中，所有数据采用graphpadprism8软件统计，以mean
±
sem表示，两组间的比较用students't检验，三组或三组以上比较用单因素方差分析，用dunnett's检验。
15.其中，人参皂苷ro在防治心血管疾病中的医药用途。
16.其中，所述心血管疾病包括急性心梗，因冠状动脉血流急性受阻导致心肌严重缺血坏死，临床多表现为恶性心率失常、心源性休克，继而诱发心力衰竭。
17.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
18.本发明通过人参皂苷ro用于治疗急性心梗相关疾病，具有心脏保护效应，预给药人参皂苷ro2h后采用冠脉结扎诱导急性心肌梗死小鼠模型，通过测定心脏梗死面积、血清肌钙蛋白ctnt含量以及肌酸激酶同工酶ck-mb活性、心脏组织病理损伤等指标，其有效减少冠脉结扎诱导的急性心梗小鼠的心脏梗死面积，降低血清中肌钙蛋白ctnt以及肌酸激酶同工酶ck-mb活性，显著减轻心梗小鼠心脏组织病理损伤，证实人参皂苷ro具有显著改善心肌缺血诱导的急性心梗的作用，证实人参皂苷ro可用于防治急性心梗，有效剂量低，具有广阔的应用前景。
附图说明
19.图1为本发明不同剂量人参皂苷ro对急性心梗小鼠心脏梗死面积的影响，其中a为心脏组织ttc染色图，b为ttc染色统计图，(n＝3，以mean
±
sem表示，##p《0.01与假手术组比较，**p《0.01与模型组比较)；
20.图2为本发明不同剂量人参皂苷ro对急性心梗小鼠血清生化指标的影响，其中a为肌钙蛋白t统计图，b为肌酸激酶同工酶统计图；(n＝12，以mean
±
sem表示，##p《0.01与假手术组比较，*p《0.05和**p《0.01与模型组比较)；
21.图3为本发明不同剂量人参皂苷ro对急性心梗小鼠心脏组织病理结构损伤，其a为he染色图，b为he染色病理评分统计图，c为masson染色图，d为masson染色胶原面积统计图；(n＝3，以mean
±
sem表示，##p《0.01与假手术组比较，*p《0.05和**p《0.01与模型组比较)。
具体实施方式
22.下面结合附图和实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不能用来限制本发明的范围。
23.如附图1至附图3所示：
24.实施例一：本发明提供人参皂苷ro防治心血管疾病的新用途，1、动物分组及给药方法，将84只雄性c57bl/6j小鼠随机分为7组(12只/组)；
25.假手术组：于术前2h灌胃等量生理盐水，1次；
26.假手术+人参皂苷ro组：于术前2h灌胃人参皂苷ro80mg/kg，1次；
27.模型组：于术前2h灌胃等量生理盐水，1次；
28.人参皂苷ro低剂量组：于术前2h灌胃人参皂苷ro20mg/kg，1次；
29.人参皂苷ro中剂量组：于术前2h灌胃人参皂苷ro40mg/kg，1次；
30.人参皂苷ro高剂量组：于术前2h灌胃人参皂苷ro80mg/kg，1次；
31.阳性药卡托普利组：于术前2h腹腔注射卡托普利160mg/kg，1次。
32.2、模型制备：采用腹腔注射的方式给予c57bl/6j小鼠3％戊巴比妥钠，小鼠麻醉后，采用仰卧位固定，连接人工呼吸机后，剪去小鼠胸部的毛，使用碘伏消毒，在胸骨左侧作一纵行切口，钝性分离小鼠的胸大肌，并暴露出第四根肋骨，用止血钳将胸腔打开并撕开心包，使心脏暴露，轻压胸廓将心脏挤出胸腔外，用6-0号丝线，在冠状动脉左前降支下方3mm处和线穿过的心肌组织一起结扎，将心脏迅速放回胸腔，将胸腔空气完全挤出后进行缝合，各组小鼠分别在结扎后24h后取血和心脏组织用于后续实验。
33.3、心脏梗死面积测定：摘取心脏，置于-20℃冰箱冷冻6h后，从心尖开始，迅速切1mm左右的薄片，共取5片，再将切片置于含1％ttc(ph7.4)染液的6孔细胞培养板中，37℃孵育箱中避光孵育20min后取出，吸去多余的染液，拍照记录，采用图像分析系统imagej测量心肌梗死面积，计算其占心脏面积百分比，再进行统计分析。
34.4、数据处理：所有数据采用graphpadprism8软件进行统计，以mean
±
sem表示，对于两组间的比较用students't检验，当三组或三组以上比较时用单因素方差分析，检验采用dunnett's检验，p《0.05有统计学意义。
35.5、实验结果：如图1所示，与假手术组相比，假手术给药组小鼠心肌组织呈红色，未见明显梗死区域；而模型组小鼠心脏左室壁可见白色梗死区域，梗死面积达34％(##p《0.01)，提示心梗小鼠心脏组织出现梗死；给予人参皂苷ro(20、40、80mg/kg)以及阳性对照药卡托普利预处理后再进行冠脉结扎，心脏梗死面积较模型组显著减少(**p《0.01)，其中人参皂苷ro80mg/kg与卡托普利160mg/kg作用相当。
36.由上可知，人参皂苷ro可减少冠脉结扎诱导的急性心梗小鼠的心脏梗死面积，显著改善心肌缺血诱导的急性心梗。
37.实施例二：1、动物分组、模型制备和给药方法同实施例1。
38.2、检测血清肌钙蛋白ctnt以及肌酸激酶同工酶ck-mb：各组小鼠造模24h后，进行眼眶取血；室温静置30min后，离心(3500rpm,10min)，取上清并分装保存；根据肌钙蛋白ctnt以及肌酸激酶同工酶ck-mb试剂盒进行检测。
39.3、数据处理同实施例1。
40.4、实验结果：如2所示，与假手术组比较，经冠脉结扎24h后，模型组小鼠血清ctnt和ck-mb水平显著增加(##p《0.01)，提示在心肌缺血后，心肌组织损伤严重；给予人参皂苷ro(20、40、80mg/kg)以及阳性对照药卡托普利预处理后再进行冠脉结扎，其小鼠血清中ctnt和ck-mb均得到显著改善(**p《0.01)。
41.由上可知，人参皂苷ro对冠脉结扎诱导的急性心梗小鼠血清中肌钙蛋白以及肌酸激酶同工酶具有改善作用，降低血清中肌钙蛋白ctnt以及肌酸激酶同工酶ck-mb活性。
42.实施例三：1、动物分组、模型制备和给药方法同实施例1。
43.2、对冠脉结扎诱导的慢性心衰小鼠心脏组织染色：各组小鼠取血后摘取心脏，在预冷pbs溶液中挤出残留血液，滤纸吸干残液。使用4％多聚甲醛溶液固定心脏组织24h，采用石蜡包埋，进行he和masson染色，采用数字扫描仪对切片进行扫描，利用imagej软件计算胶原面积，并对he切片进行双盲评分。
44.3、数据处理同实施例1。
45.4、实验结果：如3所示，与假手术组相比，冠脉结扎24h后，模型组小鼠心肌细胞排列无规则，结构断裂，部分心肌细胞呈空泡化，出现炎性细胞浸润；同时出现大量的蓝染胶原纤维，心脏肌束排列杂乱(##p《0.01)；给予人参皂苷ro(20、40、80mg/kg)和阳性对照药卡托普利预处理后，心衰小鼠心脏组织炎性浸润和纤维化显著减轻，病理损伤明显改善(**p《0.01)。
46.由上可知，人参皂苷ro可显著改善心衰小鼠心脏组织病理损伤，而发挥心血管保护效应。
47.本发明的实施例是为了示例和描述起见而给出的，尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

技术特征：
1.人参皂苷ro防治心血管疾病的新用途，其特征在于，包括：实验对象：雄性c57bl/6j小鼠；分组：将实验对象分为假手术组、假手术+人参皂苷ro组、模型组、人参皂苷ro低剂量组、人参皂苷ro中剂量组、人参皂苷ro高剂量组、阳性药卡托普利组，共7组，每组12只；给药：假手术组于术前2h灌胃等量生理盐水，1次；假手术+人参皂苷ro组于术前2h灌胃人参皂苷ro 80mg/kg，1次；模型组于术前2h灌胃等量生理盐水1次；人参皂苷ro低剂量组于术前2h灌胃人参皂苷ro 20mg/kg，1次；人参皂苷ro中剂量组于术前2h灌胃人参皂苷ro 40mg/kg，1次；人参皂苷ro高剂量组于术前2h灌胃人参皂苷ro 80mg/kg，1次；阳性药卡托普利组于术前2h腹腔注射卡托普利160mg/kg，1次；模型制备：腹腔注射实验对象3％戊巴比妥钠，麻醉后仰卧位固定，连接人工呼吸机，剪去实验对象胸部的毛，碘伏消毒，在胸骨左侧作一纵行切口，钝性分离胸大肌，暴露第四根肋骨，用止血钳将胸腔打开并撕开心包，暴露心脏，轻压胸廓将心脏挤出胸腔外，用丝线在冠状动脉左前降支下方3mm处和线穿过的心肌组织一起结扎，将心脏迅速放回胸腔，并将胸腔空气完全挤出后缝合；各组实验对象分别在结扎后24h后取血和心脏组织。2.如权利要求1所述人参皂苷ro防治心血管疾病的新用途，其特征在于：测定心肌梗死面积的方法为：摘取心脏，置于-20℃冰箱冷冻6h后，从心尖开始，迅速1mm左右的薄片，共取5片，再将切片置于含1％ttc，ph7.4染液的6孔细胞培养板中，37℃孵育箱中避光孵育20min后取出，吸去多余的染液，并记录，采用图像分析系统image j测量心肌梗死面积，计算其占心脏面积百分比，再统计分析。3.如权利要求1所述人参皂苷ro防治心血管疾病的新用途，其特征在于：检测血清肌钙蛋白ctnt以及肌酸激酶同工酶ck-mb的方法为：各组小鼠造模24h后，进行眼眶取血；室温静置30min后，以3500rpm离心10min，取上清并分装保存并检测。4.如权利要求1所述人参皂苷ro防治心血管疾病的新用途，其特征在于：对心脏组织病理损伤的检测方法为：各组小鼠取血后摘取心脏，在预冷pbs溶液中挤出残留血液，滤纸吸干残液，使用4％多聚甲醛溶液固定心脏组织24h，采用石蜡包埋，进行he和masson染色。5.如权利要求2-4任一所述人参皂苷ro防治心血管疾病的新用途，其特征在于：所有数据采用graphpad prism 8软件统计，以mean
±
sem表示，两组间的比较用students't检验，三组或三组以上比较用单因素方差分析，用dunnett's检验。6.如权利要求1所述人参皂苷ro防治心血管疾病的新用途，其特征在于：人参皂苷ro在防治心血管疾病中的医药用途。7.如权利要求6所述人参皂苷ro防治心血管疾病的新用途，其特征在于：所述心血管疾病包括急性心梗，因冠状动脉血流急性受阻导致心肌严重缺血坏死，临床多表现为恶性心率失常、心源性休克，继而诱发心力衰竭。

技术总结
本发明涉及生物医药领域，提供了人参皂苷Ro防治心血管疾病的新用途，本发明发现人参皂苷Ro可显著减少冠脉结扎诱导的急性心梗AM I小鼠心脏梗死面积，降低血清肌钙蛋白cTnT含量以及肌酸激酶同工酶CK-MB活性，显著减轻心梗小鼠心脏组织病理损伤，具有有效剂量低、起效快等优势，根据结果，人参皂苷Ro可用于防治心血管疾病。血管疾病。血管疾病。


技术研发人员：刘金成 屈素君 柯清华
受保护的技术使用者：荆门市中心医院
技术研发日：2023.08.09
技术公布日：2023/10/6