一种阳离子脂质化合物及其组合物和用途的制作方法

[0001][0002]
本发明涉及脂质递送载体领域。具体的说，本发明涉及用于递送核酸的阳离子脂质化合物及其组合物和用途。


背景技术：

[0003][0004]
基因治疗是通过将外源基因导入靶细胞或组织，替代、补偿、阻断或修正特定基因，以达到治疗和预防疾病的目的。但是，外源基因在体内循环时间短、易被降解，从而难以进入靶细胞或者靶组织。因此，寻找良好的基因递送载体，提高基因药物的体内递送效率，是提高基因治疗产品有效性的关键方向之一。
[0005]
目前，应用最广的基因递送载体是脂质纳米颗粒，它可以保护核酸在体内不被迅速降解，延长循环时间，增强靶向递送。脂质纳米颗粒由不同的脂质组分组成，包括阳离子脂质化合物、结构脂质、磷脂和peg脂质等。其中阳离子脂质化合物在核酸包载和释放中起关键作用，因此研发新型、高效、低毒的阳离子脂质化合物至关重要。
[0006]
为克服现有技术的缺点，仍然需要一种符合基因治疗产品递送需求的新型阳离子脂质化合物，以用于含基因治疗产品的开发。本技术的发明人设计合成本发明提供的阳离子脂质化合物，由其构成的脂质纳米颗粒组合物在包封率，生物安全性，细胞和生物体内转染效率，蛋白质表达等方面中的至少一方面存在优势，解决了现有技术存在的问题，对基因治疗产品的开发具有非常重要的意义。


技术实现要素：

[0007][0008]
本发明提供一种新型阳离子脂质化合物及其组合物和用途。
[0009]
根据本发明的目的，本发明提供一种式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，
[0010][0011]
其中，
[0012]
l1和l2各自独立地选自-c(=o)o-、-oc(=o)-、-c(=o)nh-和-nhc(=o)-；
[0013]
g1和g2各自独立地选自取代或未取代的亚烷基、亚烯基和亚炔基，所述取代是被至
少一个q1取代；
[0014]
r1和r2各自独立地选自取代或未取代的烷基、烯基和炔基，所述取代是被至少一个q2取代；
[0015]
q1每次出现均独立地选自烷基、烯基和炔基；
[0016]
q2每次出现均独立地选自烷基、烯基和炔基。
[0017]
发明的效果
[0018]
本发明提供的阳离子脂质化合物的合成工艺简单、稳定性好，其兼具高效(可体现为高转染效率)和低毒性；同时稳定均一、易于制备；可用于各种细胞系转染。从而具备优秀的传递性，可将活性物质(如示例的sirna、mrna)高效递送到细胞、组织、器官中，实现活性物质的高效调控。
具体实施方式
[0019][0020]
为使本发明的技术方案和有益效果能够更加明显易懂，下面通过列举具体实施例的方式进行详细说明。除非另有定义，本文所使用的技术和科学术语与本技术所属的技术领域中的技术和科学术语的含义相同。
[0021]
一方面，本发明提供一种式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，
[0022][0023]
其中，
[0024]
l1和l2各自独立地选自-c(=o)o-、-oc(=o)-、-c(=o)nh-和-nhc(=o)-；
[0025]
g1和g2各自独立地选自取代或未取代的亚烷基、亚烯基和亚炔基，所述取代是被至少一个q1取代；
[0026]
r1和r2各自独立地选自取代或未取代的烷基、烯基和炔基，所述取代是被至少一个q2取代；
[0027]
q1每次出现均独立地选自烷基、烯基和炔基；
[0028]
q2每次出现均独立地选自烷基、烯基和炔基。
[0029]
在某些实施方案中，所述l1选自-c(=o)o-和-oc(=o)-。
[0030]
在某些实施方案中，所述l2选自-c(=o)o-和-oc(=o)-。
[0031]
在某些实施方案中，所述g1选自取代或未取代的亚烷基，所述取代是被至少一个q1取代。
[0032]
在某些实施方案中，所述g1选自未取代的c
2-16
亚烷基。
[0033]
在某些实施方案中，所述g1选自未取代的c
2-8
亚烷基。
[0034]
在某些实施方案中，所述g1选自未取代的c3、c4、c5、c6和c7亚烷基。
[0035]
在某些实施方案中，所述g1选自、、、和。
[0036]
在某些实施方案中，所述g2选自取代或未取代的亚烷基，所述取代是被至少一个q1取代。
[0037]
在某些实施方案中，所述g2选自未取代的c
2-16
亚烷基。
[0038]
在某些实施方案中，所述g2选自未取代的c
2-8
亚烷基。
[0039]
在某些实施方案中，所述g2选自未取代的c3、c4、c5、c6和c7亚烷基。
[0040]
在某些实施方案中，所述g2选自、、、和。
[0041]
在某些实施方案中，所述q1每次出现均独立地选自烷基。
[0042]
在某些实施方案中，所述q1每次出现均独立地选自c
1-6
烷基。
[0043]
在某些实施方案中，所述q1每次出现均独立地选自c
1-3
烷基。
[0044]
在某些实施方案中，所述r1选自取代或未取代的烷基和烯基，所述取代是被至少一个q2取代。
[0045]
在某些实施方案中，所述r1选自未取代的c
6-21
烷基和c
6-21
烯基。
[0046]
在某些实施方案中，所述r1选自未取代的c
8-18
烷基和c
6-18
烯基。
[0047]
在某些实施方案中，所述r1选自未取代的c8烷基、c9烷基、c
10
烷基、c
11
烷基、c
12
烷基、c
13
烷基、c
14
烷基、c
15
烷基、c
16
烷基、c
17
烷基、c9烯基、c
10
烯基、c
11
烯基、c
12
烯基、c
13
烯基、c
14
烯基、c
15
烯基、c
16
烯基、c
17
烯基和c
18
烯基。
[0048]
在某些实施方案中，所述r1选自未取代的c8烷基、c9烷基、c
10
烷基、c
15
烷基、c
16
烷基、c
17
烷基、c9烯基、c
17
烯基和c
18
烯基；所述烯基含有一个或两个不饱和键。
[0049]
在某些实施方案中，所述r1选自、、、 、、 、、、、、、、、、、、、和。
[0050]
在某些实施方案中，所述r1选自、、 、、、、、、和。
[0051]
在某些实施方案中，所述r2选自取代或未取代的烷基和烯基，所述取代是被至少一个q2取代。
[0052]
在某些实施方案中，所述r2选自未取代的c
6-21
烷基和c
6-21
烯基。
[0053]
在某些实施方案中，所述r2选自未取代的c
8-18
烷基和c
6-18
烯基。
[0054]
在某些实施方案中，所述r2选自未取代的c8烷基、c9烷基、c
10
烷基、c
11
烷基、c
12
烷基、c
13
烷基、c
14
烷基、c
15
烷基、c
16
烷基、c
17
烷基、c9烯基、c
10
烯基、c
11
烯基、c
12
烯基、c
13
烯基、c
14
烯基、c
15
烯基、c
16
烯基、c
17
烯基和c
18
烯基。
[0055]
在某些实施方案中，所述r2选自未取代的c8烷基、c9烷基、c
10
烷基、c
15
烷基、c
16
烷基、c
17
烷基、c9烯基、c
17
烯基和c
18
烯基；所述烯基含有一个或两个不饱和键。
[0056]
在某些实施方案中，所述r2选自、、、 、、 、、、、、、、、、、、、和。
[0057]
在某些实施方案中，所述r2选自、、 、、、、、、和
。
[0058]
在某些实施方案中，所述q2每次出现均独立地选自烷基、烯基。
[0059]
在某些实施方案中，所述q2每次出现均独立地选自c
1-6
烷基、c
2-6
烯基。
[0060]
在某些实施方案中，所述q2每次出现均独立地选自c
1-3
烷基、c
2-4
烯基。
[0061]
本发明提供一种阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述阳离子脂质化合物具有以下所示的结构之一：
[0062]
、、、、、、
、、、、、、、
、、和。
[0063]
另一方面，本发明提供一种脂质纳米颗粒组合物，包含上述阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物。
[0064]
在某些实施方案中，所述脂质纳米颗粒组合物还包含治疗剂和/或预防剂、结构脂质、磷脂或peg脂质的一种或多种组分。
[0065]
在某些实施方案中，所述治疗剂和/或预防剂选自核酸。
[0066]
在某些实施方案中，所述核酸可列举：sirna、mirna、shrna表达载体、反义寡核苷酸、mrna、核酶等。
[0067]
在某些实施方案中，所述核酸可列举：sirna、mirna、mrna。
[0068]
在某些实施方案中，所谓磷脂意指在生理性ph值下以不带电或中性的两性离子的任一种形式存在的脂质。作为中性脂质，可列举：二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(popc)、卵磷脂酰胆碱(epc)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(dmpc)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、二花生酰磷脂酰胆碱(dapc)、二山萮酰磷脂酰胆碱(dbpc)、二(木蜡酰)磷脂酰胆碱(dlpc)、二油酰磷脂酰胆碱(dopc)、神经鞘磷脂、脑酰胺、二油酰磷脂酰甘油(dopg)、二棕榈酰磷脂酰甘油(dppg)、磷脂酰乙醇胺(pope)、二油酰磷脂酰乙醇胺4-(n-顺丁烯二酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧酸酯(dope-mal)等。中性脂质可单独使用1种，或者亦可将2种以上混合而使用。
[0069]
在某些实施方案中，作为peg脂质，可列举：peg2000-dmg (peg2000-二肉豆蔻基甘油) 、peg2000-dpg(peg2000-二棕榈酰甘油)、peg2000-dsg(peg2000-二硬脂酰甘油)、peg5000-dmg (peg5000-二肉豆蔻基甘油)、peg5000-dpg (peg5000-二棕榈酰甘油)、
peg5000-dsg(peg5000-二硬脂酰甘油)、peg-cdma(n-[(甲氧基聚(乙二醇)2000)胺甲酰基]-1，2-二肉豆蔻氧基丙基-3-胺)、peg-c-domg(r-3-[(ω-甲氧基-聚(乙二醇)2000)胺甲酰基]-1，2-二肉豆蔻氧基丙基-3-胺)、聚乙二醇(peg)-二酰甘油(dag)、peg-二烷基氧基丙基(daa)、peg-磷脂质、peg-脑酰胺(cer)、alc-0159（2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-二十四烷基乙酰胺）等。
[0070]
在某些实施方案中，作为peg-二烷基氧基丙基，可列举：peg-二月桂基氧基丙基、peg-二肉豆蔻基氧基丙基、peg-二棕榈基氧基丙基、peg-二硬脂基氧基丙基等。聚乙二醇修饰脂质可单独使用1种，或者亦可将2种以上混合而使用。
[0071]
在某些实施方案中，作为结构脂质，可列举：胆固醇、二氢胆固醇、羊毛固醇、β-植固醇、菜油固醇、豆固醇、菜籽固醇、麦角固醇、海藻固醇、3β-[n-(n
ꢀ′
，n
ꢀ′‑
二甲胺基乙基)胺甲酰基]胆固醇(dc-chol)等。固醇可单独使用1种，或者亦可将2种以上混合而使用。
[0072]
在某些实施方案中，本实施例的组合物以组合物所含的全部脂质为基准，而含有例如10～80摩尔％、例如20～70摩尔％、例如30～60摩尔％的上述的阳离子脂质化合物。阳离子脂质化合物可单独使用1种，或者亦可将2种以上混合而使用。
[0073]
在某些实施方案中，本实施例的组合物以组合物所含的全部脂质为基准，而可含有例如0～50摩尔％、例如0～40摩尔％、例如0～30摩尔％、例如0～15摩尔％的磷脂。
[0074]
在某些实施方案中，本实施例的组合物以组合物所含的全部脂质为基准，而可含有例如0～10摩尔％、例如0～5摩尔％、例如0～3摩尔％、例如0～2摩尔％、例如0.5～2摩尔％的peg脂质。
[0075]
在某些实施方案中，本实施例的组合物以组合物所含的全部脂质为基准，而可含有例如0～70摩尔％、例如10～60摩尔％、例如20～50摩尔％的结构脂质。
[0076]
在某些实施方案中，本实施例的组合物相对于组合物的总重量，而含有例如1～30重量％、例如2～25重量％、例如3～20重量％的核酸、例如4~15重量%的核酸。
[0077]
另一方面，本发明提供上述阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物或上述脂质纳米颗粒组合物具有下述1)-4)中任一种功能的产品中的应用：
[0078]
1)包封活性物质；
[0079]
2)将活性物质递送至细胞、组织或器官；
[0080]
3)使活性物质在细胞、组织或器官中发挥活性；
[0081]
4)预防、诊断和/或治疗疾病。
[0082]
在某些实施方案中，本发明提供上述阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物或上述脂质纳米颗粒组合物在制备将治疗剂和/或预防剂递送至细胞的药物载体中的用途。
[0083]
术语解释：
[0084]
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
[0085]
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至25个碳原子的直链或支链基团。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二
甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自氘原子、卤素、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基。
[0086]
上述烷基从母体原子上除去一个氢原子所衍生的残基，即“亚烷基”。
[0087]
术语“烯基”指分子中含有至少一个碳碳双键的烷基化合物，其中烷基的定义如上所述。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基。
[0088]
术语“炔基”指分子中含有至少一个碳碳三键的烷基化合物，其中烷基的定义如上所述。炔基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基。
[0089]
本公开的化合物包含其同位素衍生物。术语“同位素衍生物”指结构不同仅在于存在一种或多种同位素富集原子的化合物。例如，具有本公开的结构，用“氘”或“氚”代替氢，或者用
18
f-氟标记（
18
f同位素）代替氟，或者用
11
c-，
13
c-，或者
14
c-富集的碳（
11
c-，
13
c-，或者
14
c-碳标记；
11
c-，
13
c-，或者
14
c-同位素）代替碳原子的化合物处于本公开的范围内。这样的化合物可用作例如生物学测定中的分析工具或探针，或者可以用作疾病的体内诊断成像示踪剂，或者作为药效学、药动学或受体研究的示踪剂。本公开的各种氘化形式的化合物是指与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的化合物。在制备氘代形式的化合物时可使用市售的氘代起始物质，或它们可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。氘代物通常可以保留与未氘代的化合物相当的活性，并且当氘代在某些特定位点时可以取得更好的代谢稳定性，从而获得某些治疗优势。
[0090]“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为1~5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下(通过实验或理论)确定可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和
(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
[0091]“阳离子脂质”是指在其环境的任何ph值或氢离子活性下带正电，或能够响应于其环境(例如其预定用途的环境)的ph值或氢离子活性而带正电的脂质。因此，术语“阳离子”涵盖“永久性阳离子”和“可阳离子化”。在某些实施方案中，阳离子脂质中的正电荷源自季氮原子的存在。在某些实施方案中，阳离子脂质在其预定用途的环境中(例如在生理ph值下)带正电荷。在某些实施方案中，阳离子脂质是如本文所描述的一种或多种式(i)的脂质。
[0092]“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
[0093]
本文所用的术语“药学上可接受的”是指这些化合物、材料、组合物和/或剂型，在合理的医学判断范围内，适用于与患者组织接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，具有合理的获益/风险比，并且对预期的用途是有效。
[0094]“药学上可接受的盐”是指本公开化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。可以在化合物的最终分离和纯化过程中，或通过使合适的基团与合适的碱或酸反应来单独制备盐。通常用于形成药学上可接受的盐的碱包括无机碱，以及有机碱。通常用于形成药学上可接受的盐的酸包括无机酸以及有机酸。
[0095]
术语“异构体”意思指化合物的任何几何异构体、互变异构体、两性离子、立体异构体、对映异构体或非对映异构体。化合物可以包括一个或多个手性中心和/或双键，并因此呈立体异构体，如双键异构体(即，几何e/z异构体)或非对映异构体(例如对映异构体(即，(+)或(-))或顺式/反式异构体)形式存在。本公开涵盖本文所描述的化合物的任何和所有异构体，包括立体异构纯形式(例如几何异构纯、对映异构纯或非对映异构纯)以及对映异构体和立体异构体混合物，例如外消旋物。化合物的对映异构体和立体异构体混合物以及将其拆分成其组成对映异构体或立体异构体的方式是众所周知的。
[0096]
本文所使用的，单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数引用，反之亦然，除非上下文另外明确指出。
[0097]
以上对本发明的涉及的术语进行了定义，本领域技术人员还可以结合现有技术对以上术语进行理解，以下基于本发明的内容以及对术语的定义进一步进行描述。
[0098]
所述“室温”不是特定的温度值，是指10-30
ꢀ°
c温度范围。
[0099]
本发明中术语“约”，当用来指可测量的数值时，例如质量、时间、温度等，意味着可围绕具体数值有一定的浮动的范围，该范围可以为
±
10%、
±
5%、
±
1%、
±
0.5%、或
±
0.1%。
[0100]
本公开的合成工艺可以容许多个官能团，因此可以使用各种被取代的起始物质。这些工艺大体上提供了在整个工艺结束或快结束时所希望的最终化合物，不过在某些情况下可能需要将该化合物进一步转化成其药学上可接受的盐。
[0101]
本公开的化合物可以使用可商购的起始物质、文献中已知的化合物，或由易于制备的中间物，通过采用标准合成方法和本领域技术人员已知或技术人员根据本文的传授内容显而易见的程序，以多种方式制备。用于制备有机分子的标准合成方法和程序以及官能团转化和操作可以从相关科学文献或从本领域的标准教科书获得。
[0102]
以下有关合成方法的描述被设计用于说明而非限制用于制备本公开化合物的通用程序。具有本文所描述各式的本发明所述化合物可以根据以下代表性合成方法中所说明
的程序，由可商购的起始物质或可以使用文献程序制备的起始物质制备。各方案中的变量(例如r1和r2等如本文所定义)。本领域技术人员应注意到，在本文所描述的反应工序和合成方案期间，某些步骤的次序可以变化，如保护基的引入和移除。本领域的普通技术人员将认识到，可能需要使用保护基保护某些基团免受反应条件影响。
[0103]
优选的保护基包括但不限于：
[0104]
对于羟基部分：tbs、苯甲基、thp、ac；
[0105]
对于羧酸：苯甲酯、甲酯、乙酯、烯丙基酯；
[0106]
对于胺：fmoc, cbz, boc, dmb, ac, bn, tr, ts、三氟乙酰基、邻苯二甲酰亚胺、亚苯甲基胺；
[0107]
对于二醇：ac(
×
2)、tbs(
×
2)或当连在一起时是丙酮；
[0108]
对于硫醇：ac；
[0109]
对于苯并咪唑：sem、苯甲基、pmb、dmb；
[0110]
对于醛：二烷基缩醛，如二甲氧基乙缩醛或二乙基乙酰基。
[0111]
在本文所描述的反应方案中，可以制造出多种立体异构体。当未指示特定立体异构体时，这应理解为意思指可以由该反应制造的所有可能的立体异构体。本领域普通技术人员应认识到，所述反应可以被优化以优先得到一种异构体，或可以设计出新的方案以制造单一异构体。如果制造出混合物，则可以使用如制备型薄层色谱法、制备型hplc、制备型手性hplc或制备型sfc等技术分离异构体。
[0112]
实施例1 化合物t01的合成
[0113][0113][0113][0114]
步骤1：化合物t01-i的合成
[0115]
向1,6-己二醇（27.95 g）、dcm（475 ml）的混合物中加入2-己基癸酸(19.51 g)、dcc(18.93 g)和dmap(11.37 g)。反应体系在室温下搅拌三天后，过滤。向滤液中加入石油醚(500 ml)，搅拌析出固体。过滤后滤液用稀盐酸（1 m）洗涤。洗涤后的有机相经无水硫酸钠干燥，过滤后旋蒸，得到化合物t01-i的粗品。
[0116]
步骤2：化合物t01的合成
[0117]
在0℃下向化合物t01-i (35.21 g)与net3(13.99 g)、dmap(1.13 g)、dcm(200 ml)的混合物中缓慢加入tscl(25.96 g)，随后升至室温，搅拌过夜。向反应体系中加入饱和碳酸氢钠水溶液，分液后有机相经无水硫酸镁干燥，过滤后旋蒸。残留物经硅胶柱（洗脱剂
hz, 2h), 2.30 (t, j = 7.5 hz, 2h), 1.85 (p, j = 6.9 hz, 2h), 1.69
ꢀ‑ꢀ
1.58 (m, 3h), 1.52
ꢀ‑ꢀ
1.41 (m, 2h), 1.39
ꢀ‑ꢀ
1.19 (m, 28h), 0.87 (t, j = 6.6 hz, 6h)。
[0132]
实施例5 化合物t16的合成
[0133][0134]
向化合物7-溴庚酸（10.01 g）与2-己基-1-癸醇（11.36 g）、dmap（6.65 g）、二氯甲烷（250ml）的混合物中加入dcc（15.68 g），室温搅拌16小时。将反应体系用二氯甲烷（200 ml）稀释，抽滤后旋蒸。残留物经硅胶柱（洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯）分离提纯，得到化合物t16。
[0135]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 3.97 (d, j = 5.8 hz, 2h), 3.40 (t, j = 6.8 hz, 2h), 2.31 (t, j = 7.4 hz, 2h), 1.86 (dt, j = 14.4, 6.9 hz, 2h), 1.68
ꢀ‑ꢀ
1.59 (m, 3h), 1.51
ꢀ‑ꢀ
1.42 (m, 2h), 1.40
ꢀ‑ꢀ
1.33 (m, 2h), 1.27 (d, j = 3.7 hz, 24h), 0.88 (t, j = 6.8 hz, 6h)。
[0136]
实施例6 化合物t17的合成
[0137][0138]
向化合物8-溴辛酸（8.71 g）与3-辛醇（5.00 g）、dmap（4.72 g）、二氯甲烷（100 ml）的混合物中加入dcc（11.75 g），室温搅拌16小时。将反应体系用二氯甲烷（200 ml）稀释，抽滤后旋蒸。残留物经硅胶柱（洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯）分离提纯，得到化合物t17。
[0139]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.81 (ddd, j = 12.5, 6.8, 5.5 hz, 1h), 3.40 (t, j = 6.8 hz, 2h), 2.29 (t, j = 7.5 hz, 2h), 1.95
ꢀ‑ꢀ
1.69 (m, 3h), 1.65
ꢀ‑ꢀ
1.49 (m, 6h), 1.46
ꢀ‑ꢀ
1.41 (m, 2h), 1.30 (ddd, j = 19.2, 7.2, 2.9 hz, 9h), 0.87 (td, j = 7.2, 2.2 hz, 6h)。
[0140]
实施例7 化合物t18的合成
[0141][0142]
向8-溴辛酸（7.77 g）的dcm（100 ml）溶液中依次加入dcc（8.75 g），dmap（5.12 g）与顺-2-壬烯-1-醇（5.12 g），在室温搅拌18 h。向反应体系中加入石油醚（100 ml），振荡后过滤，滤液浓缩后残留物经硅胶柱（洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯）分离提纯，得到化合物t18。
[0143]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 5.79
ꢀ‑ꢀ
5.59 (m, 1h), 5.59
ꢀ‑ꢀ
5.45 (m, 1h), 4.71
ꢀ‑ꢀ
4.53 (m, 2h), 3.40 (t, j = 6.8 hz, 2h), 2.31 (t, j = 7.5 hz, 2h), 2.10 (qd, j = 7.4, 1.4 hz, 2h), 1.85 (p, j = 6.9 hz, 2h), 1.69
ꢀ‑ꢀ
1.59 (m, 2h), 1.49
ꢀ‑ꢀ
1.22 (m, 14h), 0.93
ꢀ‑ꢀ
0.83 (m, 3h)。
[0144]
实施例8 化合物t23的合成
2.18 (q, j = 6.3 hz, 4h), 2.05 (q, j = 6.8 hz, 2h), 1.65
ꢀ‑ꢀ
1.59 (m, 2h), 1.39
ꢀ‑ꢀ
1.22 (m, 14h), 0.95
ꢀ‑ꢀ
0.83 (m, 3h)。
[0156]
实施例11 化合物t30的合成
[0157][0158]
向化合物亚油酸（0.5960 g）、dcc（0.5396g）、dmap（0.2515 g）与dcm（20ml）的混合物中加入4-溴丁醇（0.4038 g），室温搅拌18小时。减压过滤，滤饼用dcm（20 ml）洗涤，滤液旋蒸。残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物t30。
[0159]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 5.83
ꢀ‑ꢀ
4.99 (m, 4h), 4.10 (t, j = 6.3 hz, 2h), 3.43 (t, j = 6.6 hz, 2h), 3.09
ꢀ‑ꢀ
2.55 (m, 2h), 2.29 (t, j = 7.5 hz, 2h), 2.05 (q, j = 6.9 hz, 4h), 1.99
ꢀ‑ꢀ
1.89 (m, 2h), 1.85
ꢀ–ꢀ
1.75 (m, 2h), 1.70
ꢀ‑ꢀ
1.49 (m, 2h), 1.31 (q, j = 4.4, 2.9 hz, 14h), 0.94
ꢀ‑ꢀ
0.84 (m, 3h)。
[0160]
实施例12 化合物t31的合成
[0161][0162]
向8-溴辛酸（3.1429 g）的dcm（50 ml）溶液中依次加入dcc（3.1352 g），dmap（2.0727 g）与4-癸醇（2.0050 g），在室温搅拌16 h。向反应体系中加入石油醚（50 ml），振荡后过滤，滤液浓缩后残留物经硅胶柱（洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯）分离提纯，得到化合物t31。
[0163]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.89 (ddd, j = 12.5, 7.0, 5.5 hz, 1h), 3.40 (t, j = 6.8 hz, 2h), 2.28 (t, j = 7.4 hz, 2h), 1.85 (p, j = 7.0 hz, 2h), 1.70
ꢀ‑ꢀ
1.57 (m, 2h), 1.48 (ddddd, j = 18.4, 15.2, 9.5, 6.6, 3.3 hz, 5h), 1.38
ꢀ‑ꢀ
1.19 (m, 15h), 0.89 (dt, j = 9.9, 7.2 hz, 6h)。
[0164]
实施例13 化合物t36的合成
[0165][0166]
向化合物8-溴辛酸（3.4143 g）、dcc（3.4680g）、dmap（1.6740g）与dcm（50 ml）的混合物中加入3-壬醇（2.0421 g），室温搅拌18小时。抽滤，滤饼用dcm（20 ml）洗一遍，滤液旋蒸。残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物t36。
[0167]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.81 (p, j = 6.2 hz, 1h), 3.40 (t, j = 6.8 hz, 2h), 2.29 (t, j = 7.5 hz, 2h), 1.85 (p, j = 7.0 hz, 2h), 1.67
ꢀ‑ꢀ
1.57 (m, 3h), 1.57
ꢀ‑ꢀ
1.48 (m, 3h), 1.38
ꢀ‑ꢀ
1.23 (m, 14h), 0.95
ꢀ‑ꢀ
0.80 (m, 6h)。
[0168]
实施例14 化合物t37的合成
[0169][0170]
向7-溴庚酸（1.16116 g）的二氯甲烷（40 ml）溶液中依次加入dcc（1.7053 g），dmap（1.0046 g）与3-壬醇（1.0241 g），在室温搅拌22 h。向反应体系中加入石油醚（40 ml），振荡后过滤，滤液浓缩后残留物经硅胶柱（洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯）分离提纯，得到化合物t37。
[0171]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.82 (p, j = 6.3 hz, 1h), 3.40 (t, j = 6.8 hz, 2h), 2.30 (t, j = 7.4 hz, 2h), 1.86 (p, j = 6.9 hz, 2h), 1.65 (p, j = 7.5 hz, 2h), 1.59
ꢀ‑ꢀ
1.42 (m, 5h), 1.41
ꢀ‑ꢀ
1.17 (m, 11h), 1.00
ꢀ‑ꢀ
0.78 (m, 6h)。
[0172]
实施例15 化合物t38的合成
[0173][0174]
向化合物7-溴庚酸（1.3154 g）与4-癸醇（0.9976 g）、dmap（0.8145 g）、dcm（15 ml）的混合物中加入dcc（1.5778 g），室温搅拌16小时。将反应体系用dcm稀释，抽滤后旋蒸。残留物经硅胶柱（洗脱剂为pe/etoac）分离提纯，得到化合物t38。
[0175]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.88 (ddd, j = 12.5, 7.0, 5.5 hz, 1h), 3.40 (t, j = 6.8 hz, 2h), 2.29 (t, j = 7.5 hz, 2h), 1.86 (p, j = 6.9 hz, 2h), 1.64 (p, j = 7.5 hz, 2h), 1.54
ꢀ‑ꢀ
1.41 (m, 6h), 1.40
ꢀ‑ꢀ
1.25 (m, 12h), 0.89 (dt, j = 9.7, 7.1 hz, 6h)。
[0176]
实施例16 化合物h05t01的合成
[0177][0178]
将n,n
’‑
二甲基乙二胺（0.0335 g）与化合物t01（0.2150 g）在室温下溶于10 ml mecn中，在此温度下加入k2co3（0.1070 g），反应体系在70 ℃搅拌24 h。将反应液过滤，滤液经旋蒸浓缩，残留物经硅胶柱分离提纯（洗脱剂为dcm/meoh，比例为20:1），得到化合物h05t01。
[0179]
ms m/z (apci): [m+h]: 427.48。
[0180]
实施例17 化合物h05t13的合成
[0181][0182]
向化合物n,n
’‑
二甲基乙二胺（0.5056 g）、t13（0.2639 g）与mecn（20 ml）的混合物中加入k2co3（0.0943 g），在75 ℃搅拌反应约18 h；反应体系过滤，滤饼用dcm洗涤（20 ml），滤液旋蒸，残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物h05t13。
[0183]
ms m/z (apci): [m+h]: 357.28。
[0184]
实施例18 化合物h05t14的合成
[0185][0186]
向化合物n,n
’‑
二甲基乙二胺（0.2548 g）与t14（0.8090 g）、mecn（10ml）的混合物中加入k2co3（0.3535 g），在75oc搅拌16小时。将反应体系用dcm稀释，减压过滤后旋蒸。残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物h05t14。
[0187]
实施例19 化合物h05t23的合成
[0188][0189]
将化合物n,n
’‑
二甲基乙二胺（0.9001 g）与t23（2.0013 g）于室温下溶于50 ml mecn中，在此温度下加入k2co3（1.3172 g），反应体系在72 ℃搅拌22 h。将反应液过滤，滤液经旋蒸浓缩，残留物经硅胶柱分离提纯（洗脱剂为dcm/meoh，比例为20:1），得到化合物h05t23。
[0190]
ms m/z (apci): [m+h]: 427.54。
[0191]
实施例20 化合物1的合成
[0192][0193]
向化合物n,n
’‑
二甲基乙二胺（0.0313 g）与化合物t14（0.3573 g）、乙腈（5 ml）的混合物中加入碳酸钾（0.1511 g），在75 ℃搅拌反应约16 h。反应体系过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤（20 ml），滤液旋蒸，残留物经硅胶柱（洗脱剂为二氯甲烷/甲醇）分离提纯，得到化合物1。
[0194]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 3.96 (d, j = 5.8 hz, 4h), 2.69 (s, 3h), 2.50 (t, j = 7.8 hz, 3h), 2.36 (s, 6h), 2.30 (t, j = 7.4 hz, 4h), 1.73
ꢀ‑ꢀ
1.50 (m, 10h), 1.41
ꢀ‑ꢀ
1.16 (m, 54h), 0.87 (t, j = 6.7 hz, 12h)。
[0195]
ms m/z (apci): [m+h]: 765.85。
[0196]
实施例21 化合物2的合成
[0197][0197][0198]
向化合物h05t01（0.1038 g）与t15（0.1282 g）、mecn（6 ml）的混合物中加入k2co3(0.09648 g)，在75 ℃搅拌反应约18 h。反应体系过滤，滤饼用dcm洗涤（20 ml），滤液旋蒸，残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物2。
[0199]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.85 (p, j = 6.3 hz, 1h), 4.05 (t, j = 6.6 hz, 2h), 2.55 (s, 3h), 2.40 (t, j = 7.6 hz, 4h), 2.34
ꢀ‑ꢀ
2.19 (m, 9h), 1.66
ꢀ‑ꢀ
1.56 (m, 5h), 1.49 (p, j = 5.9 hz, 8h), 1.37
ꢀ‑ꢀ
1.16 (m, 56h), 0.87 (t, j = 6.7 hz, 12h)。
[0200]
ms m/z (apci): [m+h]: 793.94。
[0201]
实施例22 化合物3的合成
[0202][0203]
向化合物h05t01（0.1065 g）与t17（0.0976 g）、mecn（6 ml）的混合物中加入k2co3（0.0964 g），在75 ℃搅拌反应约18 h。反应体系过滤，滤饼用dcm洗涤（20 ml），滤液旋蒸，残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物3。
[0204]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.80 (ddd, j = 12.5, 6.9, 5.5 hz, 1h), 4.05 (t, j = 6.6 hz, 2h), 3.35 (s, 2h), 2.69 (s, 3h), 2.55
ꢀ‑ꢀ
2.45 (m, 4h), 2.40
ꢀ‑ꢀ
2.22 (m, 9h), 1.68
ꢀ‑ꢀ
1.47 (m, 14h), 1.37
ꢀ‑ꢀ
1.15 (m, 37h), 0.94
ꢀ‑ꢀ
0.74 (m, 12h)。
[0205]
ms m/z (apci): [m+h]: 681.73。
[0206]
实施例23 化合物4的合成
[0207][0208]
向化合物h05t13（0.1207 g）与t14（0.1752 g）、mecn（6 ml）的混合物中加入k2co3(0.0926g)，在75 ℃搅拌反应约18 h。反应体系过滤，滤饼用dcm洗涤（20 ml），滤液旋蒸，残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物4。
[0209]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.05 (t, j = 6.8 hz, 2h), 3.96 (d, j = 5.8 hz, 2h), 2.63 (s, 3h), 2.46 (q, j = 8.7, 7.9 hz, 4h), 2.38
ꢀ‑ꢀ
2.24 (m, 9h), 1.76
ꢀ‑ꢀ
1.45 (m, 10h), 1.38
ꢀ‑ꢀ
1.19 (m, 47h), 0.88 (t, j = 6.7 hz, 9h)。
[0210]
ms m/z (apci): [m+h]: 695.71。
[0211]
实施例24 化合物5的合成
[0212][0213]
将化合物h05t23（0.0847 g）与t18（0.0785 g）在室温下溶于10 ml mecn中，在此温度下加入k2co3（0.0548 g），反应体系在75 ℃搅拌20 h。将反应液过滤，滤液经旋蒸浓缩，残留物经硅胶柱分离提纯（洗脱剂为dcm/meoh，比例为20:1），得到化合物5。
[0214]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 5.70
ꢀ‑ꢀ
5.58 (m, 1h), 5.58
ꢀ‑ꢀ
5.48 (m, 1h), 4.62 (dd, j = 7.0, 1.2 hz, 2h), 4.06 (t, j = 6.6 hz, 2h), 2.49 (s, 3h), 2.40
ꢀ‑ꢀ
2.21 (m, 13h), 2.14
ꢀ‑ꢀ
2.05 (m, 2h), 1.53
ꢀ‑ꢀ
1.19 (m, 51h), 0.88 (tt, j = 6.2, 3.0 hz, 9h)。
[0215]
ms m/z (apci): [m+h]: 693.76。
[0216]
实施例25 化合物6的合成
[0217]
[0218]
将化合物h05t23（0.0811 g）与t27（0.0921 g）在室温下溶于10 ml mecn中，在此温度下加入k2co3（0.0595 g），反应体系在75 ℃搅拌18 h。将反应液过滤，滤液经旋蒸浓缩，残留物经硅胶柱分离提纯（洗脱剂为dcm/meoh，比例为20:1），得到化合物6。
[0219]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 5.45
ꢀ‑ꢀ
5.30 (m, 4h), 4.05 (td, j = 6.7, 3.2 hz,4h), 2.77 (t, j = 6.5 hz, 2h), 2.53 (s, 3h), 2.39 (d, j = 7.2 hz, 3h), 2.36
ꢀ‑ꢀ
2.19 (m, 9h), 2.05
ꢀ‑ꢀ
1.99 (q, j = 6.6 hz, 4h), 1.89 (s, 3h), 1.61
ꢀ‑ꢀ
1.56 (p, j = 6.8 hz, 6h), 1.43
ꢀ‑ꢀ
1.15 (m, 47h), 0.88 (q, j = 6.6 hz, 9h)。
[0220]
ms m/z (apci): [m+h]: 775.73。
[0221]
实施例26 化合物7的合成
[0222][0222][0223]
向化合物h05t14（0.1024 g）与t15（0.1631 g）、mecn（10 ml）的混合物中加入k2co3（0.0771 g），在75 ℃搅拌16小时。将反应体系用dcm稀释，减压过滤后旋蒸。残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物7。
[0224]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.85 (p, j = 6.3 hz, 1h), 3.96 (d, j = 5.8 hz, 2h), 2.67 (s, 4h), 2.49 (q, j = 7.8 hz, 6h), 2.40
ꢀ‑ꢀ
2.25 (m, 11h), 1.69
ꢀ‑ꢀ
1.45 (m, 14h), 1.37
ꢀ‑ꢀ
1.25 (m, 50h), 0.87 (td, j = 6.9, 2.1 hz, 12h)。
[0225]
ms m/z (apci): [m+h]: 793.94。
[0226]
实施例27 化合物8的合成
[0227]
（0.0956 g），在75 ℃搅拌反应约18 h。反应体系过滤，滤饼用dcm洗涤（20 ml），滤液旋蒸，残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物10。
[0239]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 5.28 (tddd, j = 12.7, 8.7, 4.5, 1.7 hz, 4h), 4.00 (q, j = 6.6 hz, 4h), 2.70 (t, j = 6.5 hz, 2h), 2.60 (s, 3h), 2.53
ꢀ‑ꢀ
2.37 (m, 4h), 2.32 (s, 3h), 2.29
ꢀ‑ꢀ
2.18 (m, 6h), 1.98 (q, j = 6.7 hz, 4h), 1.66
ꢀ‑ꢀ
1.45 (m, 10h), 1.33
ꢀ‑ꢀ
1.11 (m, 43h), 0.81 (q, j = 6.7 hz, 9h)。
[0240]
ms m/z (apci): [m+h]: 761.81。
[0241]
实施例30 化合物11的合成
[0242][0242][0243]
向化合物h05t01(0.1084 g)与t29(0.1163g)、乙腈(6 ml)的混合物中加入k2co3(0.0936 g)，在75 ℃搅拌反应约18 h。反应体系过滤，滤饼用dcm洗一次(20 ml)，滤液旋蒸，残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物11。
[0244]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 5.48
ꢀ‑ꢀ
5.16 (m,4h), 4.08 (dt, j = 17.6, 6.6 hz, 4h), 2.76 (t, j = 6.4 hz, 2h), 2.52 (s, 3h), 2.42 (dt, j = 13.9, 7.5 hz, 4h), 2.33
ꢀ‑ꢀ
2.21 (m, 9h), 2.04 (q, j = 6.9 hz, 4h), 1.87
ꢀ‑ꢀ
1.74 (m, 2h), 1.68
ꢀ‑ꢀ
1.53 (m, 6h), 1.41
ꢀ‑ꢀ
1.17 (m, 43h), 0.95
ꢀ‑ꢀ
0.80 (m, 9h)。
[0245]
ms m/z (apci): [m+h]: 747.82。
[0246]
实施例31 化合物12的合成
[0247][0247]
[0248]
向化合物h05t14(0.1241 g)与t17(0.1131g)、mecn(6 ml)的混合物中加入k2co3(0.0757 g)，在75 ℃搅拌反应约18 h。反应体系过滤，滤饼用dcm洗一次(20 ml)，滤液旋蒸，残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物12。
[0249]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.81 (ddd, j = 12.4, 6.8, 5.5 hz, 1h), 3.96 (d, j = 5.8 hz, 2h), 2.64 (s, 3h), 2.47 (dt, j = 15.1, 7.6 hz, 4h), 2.41
ꢀ‑ꢀ
2.19 (m, 9h), 1.71
ꢀ‑ꢀ
1.44 (m, 10h), 1.38
ꢀ‑ꢀ
1.19 (m, 43h), 0.96
ꢀ‑ꢀ
0.80 (m, 12h)。
[0250]
ms m/z (apci): [m+h]: 681.85。
[0251]
实施例32 化合物13的合成
[0252][0252][0253]
向化合物h05t14(0.1256 g)与t31(0.1237 g)、mecn(6 ml)的混合物中加入k2co3(0.0801 g)，在75 ℃搅拌反应约18 h。反应体系过滤，滤饼用dcm洗一次(20 ml)，滤液旋蒸，残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物13。
[0254]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.88 (ddd, j = 12.4, 7.0, 5.4 hz, 1h), 3.96 (d, j = 5.8 hz, 2h), 2.52 (s, 3h), 2.38 (s, 4h), 2.34
ꢀ‑ꢀ
2.18 (m, 9h), 1.63 (dt, j = 10.0, 7.2 hz, 5h), 1.56
ꢀ‑ꢀ
1.44 (m, 9h), 1.38
ꢀ‑ꢀ
1.14 (m, 43h), 0.98
ꢀ‑ꢀ
0.78 (m, 12h)。
[0255]
ms m/z (apci): [m+h]: 709.89。
[0256]
实施例33 化合物14的合成
[0257][0257]
[0258]
向化合物h05t14(0.1249 g)与t36(0.1151 g)、mecn(6 ml)的混合物中加入k2co3(0.0831 g)，在75 ℃搅拌反应约18 h。反应体系过滤，滤饼用dcm洗一次(20 ml)，滤液旋蒸，残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物14。
[0259]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.80 (p, j = 6.2 hz, 1h), 3.96 (d, j = 5.8 hz, 2h), 2.68 (s, 3h), 2.48 (d, j = 8.4 hz, 4h), 2.41
ꢀ‑ꢀ
2.22 (m, 9h), 1.73
ꢀ‑ꢀ
1.46 (m, 12h), 1.38
ꢀ‑ꢀ
1.20 (m, 43h), 0.87 (dp, j = 7.5, 2.7 hz, 12h)。
[0260]
ms m/z (apci): [m+h]: 695.84。
[0261]
实施例34 化合物15的合成
[0262][0262][0263]
向化合物h05t01（0.1522 g）与t38（0.1486 g）、mecn（5 ml）的混合物中加入k2co3（0.1107 g），在75 ℃搅拌16小时。将反应体系用dcm稀释，抽滤后旋蒸。残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物15。
[0264]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.88 (ddd, j = 12.5, 7.0, 5.5 hz, 1h), 4.05 (t, j = 6.6 hz, 2h), 2.75 (d, j = 46.8 hz, 7h), 2.50 (t, j = 6.0 hz, 4h), 2.36 (d, j = 4.5 hz, 6h), 2.32
ꢀ‑ꢀ
2.25 (m, 3h), 1.68
ꢀ‑ꢀ
1.47 (m, 15h), 1.41
ꢀ‑ꢀ
1.24 (m, 36h), 0.88 (dt, j = 10.0, 7.1 hz, 12h)。
[0265]
ms m/z (apci): [m+h]: 695.90。
[0266]
实施例35 化合物16的合成
[0267][0267][0268]
向化合物h05t01（0.1035 g）与t36（0.1052 g）、mecn（5 ml）的混合物中加入k2co3（0.0757 g），在75 ℃搅拌16小时。将反应体系用dcm稀释，抽滤后旋蒸。残留物经硅胶柱（洗脱剂为dcm/meoh）分离提纯，得到化合物16。
[0269]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.81 (ddd, j = 12.4, 6.8, 5.5 hz, 1h), 4.05 (t, j = 6.6 hz, 2h), 2.60 (s, 4h), 2.43 (q, j = 7.6, 6.7 hz, 6h), 2.35
ꢀ‑ꢀ
2.25 (m, 9h), 1.68
ꢀ‑ꢀ
1.47 (m, 14h), 1.37
ꢀ‑ꢀ
1.24 (m, 38h), 0.90
ꢀ‑ꢀ
0.84 (m, 12h)。
[0270]
ms m/z (apci): [m+h]: 695.97。
[0271]
实施例36 化合物17的合成
[0272][0272][0273]
将化合物h05t14（0.1060 g）与t37（0.0869 g）在室温下溶于10 ml mecn中，在此温度下加入k2co3（0.0657 g），反应体系在75 ℃搅拌18 h。将反应液过滤，滤液经旋蒸浓缩，残留物经硅胶柱分离提纯（洗脱剂为dcm/meoh），得到化合物17。
[0274]1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ 4.81 (p, j = 6.3 hz, 1h), 3.96 (d, j = 5.8 hz, 2h), 2.52 (s, 3h), 2.38 (s, 3h), 2.34
ꢀ‑ꢀ
2.20 (m, 9h), 1.70 (s, 12h), 1.67
ꢀ‑ꢀ
1.43 (m, 12h), 1.29 (dd, j = 17.3, 5.6 hz, 33h), 0.87 (ddt, j = 7.4, 4.7, 2.9 hz, 9h)。
[0275]
ms m/z (apci): [m+h]: 681.98。
[0276]
实施例37 纳米脂质颗粒(lnp)的制备
[0277]
将本发明中所述的阳离子脂质化合物与二硬酯酰磷脂酰胆碱、胆固醇和2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-二十四烷基乙酰胺按照50:10:38.5:1.5的摩尔比溶于乙醇，制备混合脂质乙醇溶液。将fluc-mrna溶解在10 mm柠檬酸盐缓冲液(ph = 4.4)中。
[0278]
使用两个微量注射泵，将混合脂质乙醇溶液与mrna柠檬酸盐缓冲液(10 mm，ph = 4.4)溶液按1:3的体积比（阳离子脂质与mrna的质量比为15:1）制备纳米脂质颗粒组合物的混合溶液。用pbs缓冲液稀释混合溶液至原体积的30倍后，使用100kda超滤管超滤浓缩，再使用pbs缓冲液定容至一定体积，得到纳米脂质颗粒组合物溶液。
[0279]
实施例38 纳米脂质颗粒包封率、粒径及多分散系数(pdi)的测定
[0280]
使用quant-it ribogreen rna定量测定试剂盒（thermo fisher scientific, uk），根据试剂盒的说明，确定脂质纳米颗粒组合物（根据实施例37制备）的包封率。
[0281]
取60 μl纳米脂质颗粒组合物溶液，加入微量样品池，使用马尔文公司的zetasizer nano仪器（90
°
散射角，25
°
c）测定粒径及多分散系数(pdi)，每个样品重复测定2次，结果取两次的平均值。结果如表1所示。
[0282]
表1
[0283]
阳离子脂质粒径(nm)pdi包封率化合物175.440.1279%化合物279.210.1387%化合物370.130.1587%化合物481.680.1086%化合物577.610.1490%化合物687.230.1062%化合物779.840.1683%化合物881.100.0983%化合物970.810.1291%化合物1084.780.1075%化合物1185.040.0878%化合物1279.740.1083%化合物1375.630.1195%化合物1478.110.1291%化合物1570.650.1289%化合物1674.310.1691%化合物1777.370.0891%
[0284]
从表1中可以看出，采用本发明所述阳离子脂质制备的纳米脂质颗粒的多分散系数为0.05～0.2，粒径在70~90 nm之间，表明纳米脂质颗粒尺寸均一，分散性良好，均可用于递送mrna；进一步，采用本发明所述阳离子脂质制备的纳米脂质颗粒的包封率高。包封率是脂质体的关键质量属性，能够反映出脂质体中药物包封程度的高低。本发明所述的纳米脂质颗粒包封率高，有助于高效包载活性物质(如sirna、mrna)，提高载药量。
[0285]
实施例39 细胞毒性测定
[0286]
将hela细胞（人宫颈癌细胞）传代至96孔板中培养24 h（37 ℃，5% co2），每孔加入100 μl dmem培养基。将含有2 μg/ml fluc-mrna的lnp溶液与细胞共孵育24 h。每孔加入10 μl cell counting kit-8（cck-8）试剂，孵育1.5 h。根据试剂盒说明，使用酶标仪检测各孔在450 nm处吸光度，吸收越强即活细胞数目越多，药物细胞毒性越低。根据下式计算相对细胞活力：
[0287][0288]as
为样品吸光度，ab为96孔板背景吸光度，ac为空白组吸光度（空白组为正常培养的hela细胞）。结果如表2所示。
[0289]
表2
[0290]
阳离子脂质相对细胞活力化合物3100%化合物493%
化合物1297%化合物1796%
[0291]
从表2可以看出，由本发明所述的阳离子脂质制备的脂质纳米颗粒组合物并未表现出明显的细胞毒性，可安全作用于药物递送及细胞转染。
[0292]
实施例40体内验证脂质纳米颗粒组合物递送mrna性能（尾静脉注射）
[0293]
每组随机选取3只6~8周龄，重量20~25 g的雌性icr小鼠，按100
ꢀµ
g/kg体重的用量，尾静脉注射脂质纳米颗粒组合物溶液。6小时后，分别向每只小鼠体内通过腹腔注射200 μl 15 mg/ml的d-荧光素钾盐。10分钟后，将小鼠放置于ivis lumina xrms series iii活体成像系统下，观察每只小鼠总的荧光强度并拍照记录。结果如表3所示。
[0294]
表3
[0295]
阳离子脂质尾静脉注射转染强度(p/s)化合物14.2e+10化合物23.7e+10化合物38.8e+10化合物44.5e+10化合物54.7e+10化合物61.8e+10化合物73.0e+10化合物84.2e+10化合物93.2e+10化合物102.4e+10化合物111.9e+10化合物129.6e+10化合物134.6e+10化合物147.2e+10化合物154.3e+10化合物166.4e+10化合物171.0e+11
[0296]
从表3可以看出，由本发明所述的阳离子脂质制备的脂质纳米颗粒组合物，其递送mrna的性能好，可使得mrna在小鼠体内进行高效表达。
[0297]
实施例41体内验证脂质纳米颗粒组合物递送mrna性能（肌肉注射）
[0298]
每组随机选取3只6~8周龄，重量20~25 g的雌性icr小鼠，按100
ꢀµ
g/kg体重的用量，向腿部肌肉注射脂质纳米颗粒组合物溶液。6小时后，分别对每只小鼠腹腔注射200 μl 15 mg/ml的d-荧光素钾盐溶液。10分钟后麻醉小鼠，使用ivis lumina xrms series iii活体成像系统观察每只小鼠的发光强度，并拍照记录。结果如表4所示。
[0299]
表4
[0300]
阳离子脂质肌肉注射转染强度(p/s)化合物39.4e+09化合物121.4e+10
化合物172.5e+10
[0301]
从表4可以看出，由本发明所述的阳离子脂质制备的脂质纳米颗粒组合物，其递送mrna的性能好，可使得mrna在小鼠体内进行高效表达。
[0302]
应当理解，以上实施例均为示例性的，不用于包含权利要求所包含的所有可能的实施方式。在不脱离本公开的范围的情况下，还可以在以上实施例的基础上做出各种变形和改变。同样的，也可以对以上实施例的各个技术特征进行任意组合，以形成可能没有被明确描述的本发明的另外的实施例。因此，上述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，不对本发明专利的保护范围进行限制。

技术特征：
1.一种式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，；其中，l1和l2各自独立地选自-c(=o)o-、-oc(=o)-、-c(=o)nh-和-nhc(=o)-；g1和g2各自独立地选自取代或未取代的亚烷基、亚烯基和亚炔基，所述取代是被至少一个q1取代；r1和r2各自独立地选自取代或未取代的烷基、烯基和炔基，所述取代是被至少一个q2取代；q1每次出现均独立地选自烷基、烯基和炔基；q2每次出现均独立地选自烷基、烯基和炔基。2.根据权利要求1所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述l1选自-c(=o)o-和-oc(=o)-。3.根据权利要求1所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述l2选自-c(=o)o-和-oc(=o)-。4.根据权利要求1所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述g1选自取代或未取代的亚烷基，所述取代是被至少一个q1取代。5.根据权利要求4所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述g1选自未取代的c
2-16
亚烷基。6.根据权利要求5所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述g1选自未取代的c
2-8
亚烷基。7.根据权利要求6所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述g1选自未取代的c3、c4、c5、c6和c7亚烷基。8.根据权利要求7所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述g1选自、、、和。9.根据权利要求1所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述g2选自取代或未取代的亚烷基，所述取代是被至少一个q1取代。10.根据权利要求9所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异
构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述g2选自未取代的c
2-16
亚烷基。11.根据权利要求10所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述g2选自未取代的c
2-8
亚烷基。12.根据权利要求11所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述g2选自未取代的c3、c4、c5、c6和c7亚烷基。13.根据权利要求12所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述g2选自、、、和。14.根据权利要求1所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述q1每次出现均独立地选自烷基。15.根据权利要求14所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述q1每次出现均独立地选自c
1-6
烷基。16.根据权利要求15所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述q1每次出现均独立地选自c
1-3
烷基。17.根据权利要求1所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r1选自取代或未取代的烷基和烯基，所述取代是被至少一个q2取代。18.根据权利要求17所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r1选自未取代的c
6-21
烷基和c
6-21
烯基。19.根据权利要求18所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r1选自未取代的c
8-18
烷基和c
6-18
烯基。20.根据权利要求19所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r1选自未取代的c8烷基、c9烷基、c
10
烷基、c
11
烷基、c
12
烷基、c
13
烷基、c
14
烷基、c
15
烷基、c
16
烷基、c
17
烷基、c9烯基、c
10
烯基、c
11
烯基、c
12
烯基、c
13
烯基、c
14
烯基、c
15
烯基、c
16
烯基、c
17
烯基和c
18
烯基。21.根据权利要求20所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r1选自未取代的c8烷基、c9烷基、c
10
烷基、c
15
烷基、c
16
烷基、c
17
烷基、c9烯基、c
17
烯基和c
18
烯基；所述烯基含有一个或两个不饱和键。22.根据权利要求21所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r1选自、、、 、、 、、、、、、、、、
、、、和。23.根据权利要求22所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r1选自、、 、、、、、、和。24.根据权利要求1所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r2选自取代或未取代的烷基和烯基，所述取代是被至少一个q2取代。25.根据权利要求24所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r2选自未取代的c
6-21
烷基和c
6-21
烯基。26.根据权利要求25所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r2选自未取代的c
8-18
烷基和c
6-18
烯基。27.根据权利要求26所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r2选自未取代的c8烷基、c9烷基、c
10
烷基、c
11
烷基、c
12
烷基、c
13
烷基、c
14
烷基、c
15
烷基、c
16
烷基、c
17
烷基、c9烯基、c
10
烯基、c
11
烯基、c
12
烯基、c
13
烯基、c
14
烯基、c
15
烯基、c
16
烯基、c
17
烯基和c
18
烯基。28.根据权利要求27所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r2选自未取代的c8烷基、c9烷基、c
10
烷基、c
15
烷基、c
16
烷基、c
17
烷基、c9烯基、c
17
烯基和c
18
烯基；所述烯基含有一个或两个不饱和键。29.根据权利要求28所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r2选自、、、 、、 、、、、、、、
、、、、、和。30.根据权利要求29所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述r2选自、、 、、、、、、和。31.根据权利要求1所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述q2每次出现均独立地选自烷基、烯基。32.根据权利要求31所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述q2每次出现均独立地选自c
1-6
烷基、c
2-6
烯基。33.根据权利要求32所述的式(i)所示的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述q2每次出现均独立地选自c
1-3
烷基、c
2-4
烯基。34.一种阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物，其特征在于，所述阳离子脂质化合物具有以下所示的结构之一：、、、
、、、、、、、、
、、、、和。35.一种脂质纳米颗粒组合物，包含权利要求1-34任一项所述的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物。36.权利要求1-34任一项所述的阳离子脂质化合物或其药学上可接受的盐、异构体、稳定的同位素衍生物或权利要求35的脂质纳米颗粒组合物在制备将治疗剂和/或预防剂递送至细胞的药物载体中的用途。

技术总结
本发明涉及一种阳离子脂质化合物及其组合物和用途。所述化合物如下式（I）所示。本发明还提供了以所述化合物为关键组分的脂质纳米颗粒在核酸递送方面的用途，包含递送载体的组分、制备方法和使用方法。分、制备方法和使用方法。分、制备方法和使用方法。


技术研发人员：刘金良 姜骞 张世超 钱佳乐 荆慧泽 陈宇浩 孟丽苹
受保护的技术使用者：苏州科睿思制药有限公司
技术研发日：2023.09.05
技术公布日：2023/10/11