一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法及其应用

1.本发明涉及农用微生物生产技术领域，尤其是涉及一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法及其应用。


背景技术：

2.土壤盐渍化现象是世界范围内限制作物生长和产量的最主要因素之一，极大的阻碍了现代农业经济的可持续性发展。预计至2050年，世界上一半的耕地将发生盐渍化。土壤次生盐渍化也在加剧，全球范围内近33％的灌溉农田因不合理的处置措施正在发生次生盐渍化，并不断加剧。在世界干旱及半干旱地区，降雨量少，蒸发量高，用低盐水灌溉以及水管理效率低下也加深了土壤盐渍化问题。
3.乙烯作为气态的植物响应激素，与植物果实成熟、种子萌发及根的生成紧密相关，是植物五大内源激素之一。但当植物面临生物胁迫，如病虫害，病原菌侵害；或非生物胁迫，干旱，洪涝，盐渍等胁迫时，乙烯会维持在一个较高的水平，过量的乙烯会导致植物叶片凋落，细胞凋亡，甚至导致植物死亡。因此，降低逆境下乙烯在植物体内的积累水平，就成了提高植物在胁迫发生长发育及抗逆能力的关键。在缓解过量乙烯带来的危害中，acc脱氨酶产生菌起着重要的作用。1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶，又称acc脱氨酶(accdeaminase)，ec：4.1.99.4，由acc脱氨酶基因(acds)编码。产acc脱氨酶的微生物能够催化裂解乙烯的前体物质acc，生成α-丁酮酸和氨，既能获得自身所需的部分c源和n源物质，又能一定程度上降低植物因为胁迫产生的大量的乙烯，增强植物对环境的适应能力。
4.目前acc脱氨酶的合成基本依靠植物根际促生菌产生，能够依靠自身生产acc脱氨酶的植物较少。在众多微生物中都发现了acc脱氨酶，如阴沟肠杆菌，无色杆菌，根瘤菌等。真菌中也能够分泌表达acc脱氨酶，但其在真菌中的表达频率低于细菌。而植物及植物根际促生菌产生的acc脱氨酶的活性普遍较低。因此为缓解植物面临的胁迫水平和增强植物的抗逆性，田地中施加大量化肥，但效果甚微并加剧土壤盐渍化和板结问题。
5.利用基因工程的手段合成高效表达acc脱氨酶的重组工程菌能够有效缓解植物应对盐胁迫而产生的高乙烯水平。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法及其应用，能够提高农作物的抗逆性，促进农作物生物质含量增加及茎叶的生长增强农作物生物量的积累，从整体水平上提高农作物的经济价值。
7.为实现上述目的，本发明提供了解盐促生复合微生物菌剂制备方法，包括以下步骤：
8.s1、将大肠杆菌bl-ef在lb固体平板上划线法活化，挑取单菌落培养，将单菌落在液体lb培养基中，37℃活化培养12h，再以1％的比例接种至新的lb液体培养基中，待大肠杆菌bl-ef培养菌体生长至对数期末期时，加入iptg诱导，得到高效表达acc脱氨酶的大肠杆
菌bl-ef发酵液；
9.s2、将霍氏肠杆菌rs-2在lb固体平板上划线法活化，挑取单菌落培养，将单菌落在液体lb培养基中，37℃活化培养12h，再以1％的比例接种至新的lb液体培养基中，37℃培养48h，得到霍氏肠杆菌rs-2发酵液；
10.s3、使用生理盐水分别稀释步骤s1和步骤s2得到的高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌bl-ef发酵液和霍氏肠杆菌rs-2发酵液，制成高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌bl-ef菌液和霍氏肠杆菌rs-2菌液，然后将高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌bl-ef菌液和霍氏肠杆菌rs-2菌液按体积比例混合，得到解盐促生复合微生物菌剂。
11.优选的，复合微生物菌剂中大肠杆菌含量为150～200亿cfu/ml，霍氏肠杆菌的含量为50～70亿cfu/ml，acc脱氨酶酶活为5.42～5.78u/mg。
12.优选的，所述大肠杆菌bl-ef以大肠杆菌bl21(de3)为宿主菌和pet-28a(+)为表达载体构建，选用bamh i和hind iii酶切位点双酶切acc脱氨酶基因和载体pet-28a(+)并连接，将连接产物转入大肠杆菌bl21(de3)中进行稳定表达。
13.优选的，液体lb培养基成分为：蛋白胨10g/l，酵母浸粉5g/l，氯化钠10g/l，121℃灭菌20min，调节为7.0。
14.优选的，步骤s1中，加入iptg诱导，诱导时间为24h，诱导温度为12℃，iptg浓度为0.4mm。
15.优选的，步骤s3中，高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌bl-ef菌液和霍氏肠杆菌rs-2菌液体积比例为3：1，复合微生物菌剂的ph为中性。
16.优选的，步骤s3中，生理盐水与高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌bl-ef发酵液的比例为1：50，生理盐水与霍氏肠杆菌rs-2发酵液的比例为1：50。
17.本发明还提供了一种解盐促生复合微生物菌剂在提高农作物抗逆性中的应用。
18.因此，本发明采用上述一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法及其应用，其技术效果如下：
19.(1)提供了含有高acc脱氨酶酶活的复合微生物菌剂，通过大肠杆菌bl-ef和霍氏肠杆菌rs-2两种特定菌株的发酵液复配获得，其中大肠杆菌bl-ef的发酵过程中需要在特定时间内添加iptg诱导菌体产生acc脱氨酶。
20.(2)在发酵过程中产生的高活性acc脱氨酶能够有效缓解环境胁迫下农作物体内的乙烯水平，并且能够促进农作物生物质含量增加及茎叶的生长。
21.(3)霍氏肠杆菌rs-2在其生长发育过程中还会生产吲哚乙酸，嗜铁素，溶磷酶等能够促进植物生长发育的物质，具有较强的溶磷促生功能，在提高农作物抗逆性的同时还能减少化肥的使用量，促进农作物生长发育，增强农作物生物量的积累，从整体水平上提高农作物的经济价值。
22.下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
23.图1为pcr产物凝胶电泳图；
24.图2为转化子质粒双酶切验证图；
25.图3为bl-ef的添加对番茄根际土壤营养元素的影响图；
26.图4为ck和最佳比例复合菌剂处理后的土壤中营养物质的含量图。
具体实施方式
27.以下通过附图和实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
28.除非另外定义，本发明使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。
29.对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的主旨或基本特征的情况下，能够以其它的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内，不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
30.此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其它实施方式。这些其它实施方式也涵盖在本发明的保护范围内。
31.还应当理解，以上所述的具体实施例仅用于解释本发明，本发明的保护范围并不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明/发明的保护范围之内。
32.对于相关领域普通技术人员已知的技术、方法和设备可能不作为详细讨论，但在适当情况下，所述技术、方法和设备应当被视为说明书的一部分。
33.本发明说明书中引用的现有技术文献所公开的内容整体均通过引用并入本发明中，并且因此是本发明公开内容的一部分。
34.实施例一
35.大肠杆菌bl-ef的制备
36.1.设计引物ef-f和ef-r，上下游引物分别引入限制性内切酶酶切位点bamhi和hindiii。
37.pcr引物ef-f：gtcgcggatccatgaacctgaatcgttttaaacg；
38.ef-r：gtcgcggatcctcagccgttgcgaaacaagaagc；
39.扩增模板为acc脱氨酶基因，其扩增的反应条件如表所示：
40.表1pcr反应体系
41.试剂体积10
×
pcr缓冲液5μldntp4μldna模板1μl上游引物2μl下游引物2μldna聚合酶0.3μl双蒸水upto50μl
42.pcr产物经过0.8％琼脂糖凝胶电泳，得到1017bp的条带(acc脱氨酶基因)。电泳图
谱见图1，其中，1-4：ef011160pcr产物；m：dna ladder。
43.2、使用凝胶回收试剂盒对目标pcr产物进行凝胶回收和纯化。
44.3、将质粒pet-28a(+)和回收后的acc脱氨酶基因经bamh i和hind iii双酶切后进行连接，构建出重组质粒。
45.4、将重组质粒转化至感受态大肠杆菌bl21(de3)细胞中，42℃热激60s后涂布在含有30μg/ml卡那霉素的平板上，37℃培养12h。挑选出阳性转化子，提取转化子质粒，并进行双酶切验证，确定构建出的菌株为目标重组菌株bl-ef。如图2所示，其中1-4：pet28a-ef011160；m：dnaladder，在图2中，重组质粒经bamh i和hind iii酶切后，获得的条带大小约5163bp(质粒pet-28a(+)经酶切后的基因)和1017bp(acc脱氨酶基因)，说明成功获得了含acc脱氨酶基因的重组菌株。
46.acc脱氨酶活性测定
47.于-80℃冰箱里取出甘油保藏的大肠杆菌bl-ef和霍氏肠杆菌rs-2，在lb固体平板上划线法活化，分别挑取单菌落进行培养，随后将单菌落在液体lb培养基中于37℃下活化12h。以1％的比例重新接种至新的lb液体培养基中，大肠杆菌bl-ef培养至对数期末期时，加入0.4mm的iptg诱导，诱导时间为24h，诱导温度为12℃。
48.液体lb培养基成分为：蛋白胨10g/l，酵母浸粉5g/l，氯化钠10g/l，121℃灭菌20min，调节ph为7.0。
49.lb固体培养基成分为：蛋白胨10g/l，酵母浸粉5g/l，氯化钠10g/l，琼脂20g/l，121℃灭菌20min，调节ph为7.0。
50.绘制牛血清蛋白标准样品的od
595
值以及α-丁酮酸标准曲线，来计算单位时间内酶活与蛋白质含量的比值(u
·
mg-1
)即为acc脱氨酶活性。4℃下5000rpm离心10min收集各菌株24h的纯培养物，用adf培养液洗涤离心两次，菌体重悬于adf培养液，在28℃200rpm的条件下培养24h，以诱导产生acc脱氨酶。4℃离心收集菌体，用0.1mol/ltris-hcl缓冲液(ph值为7.6)洗涤两次，重悬于600μl 0.1mol/ltris-hcl缓冲液(ph为8.5)中，加入30μl甲苯后迅速振荡30s以破碎细胞。取400μl含甲苯的细胞提取物，加入50μl0.5mol/lacc混匀。再加入50μl 2mmol/lfeso2和1.5ml 0.1mol/ltris-hcl，混匀，充分通气后密封，30℃水浴30min。随即加入0.5ml 4mol/l hcl终止反应。取反应液1ml，加入0.2ml的0.1％2，4-二硝基苯胼和2mmol/l hcl溶液混匀，30℃15min最后加入1ml 2mol/lnaoh混匀，于540nm测其吸光度。每组做3个平行同时用重蒸水代替酶提取液，作为空白对照，重复3次。霍氏肠杆菌rs-2和大肠杆菌bl-ef的酶活分别为0.80u/mg和5.60u/mg。大肠杆菌bl-ef中acc脱氨酶活性高于霍氏肠杆菌rs-2，为霍氏肠杆菌rs-2的7倍。
51.大肠杆菌bl-ef解盐促生试验
52.将高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌bl-ef发酵液用生理盐水以1:50的比例稀释，可直接用于农作物的灌溉。试验设置4组对照，分别为：
53.t1：大肠杆菌bl21(de3)，双蒸水灌溉
54.t2：大肠杆菌bl-ef，双蒸水灌溉
55.t3：大肠杆菌bl21(de3)，盐水(100mm nacl溶液)灌溉
56.t4：大肠杆菌bl-ef，盐水(100mmnacl溶液)灌溉
57.灌溉方式为：用育苗穴盘育苗，待番茄幼苗长至10cm左右时移栽，隔天开始浇灌菌
液，每盆浇灌50ml稀释菌液，每5天浇灌一次菌液，定期用水或等量盐水(100mm nacl)浇灌盆栽，一日两次。生长30天左右后测定相关指标。
58.每组试验做5个平行，在光照温室内进行番茄生长状态考察，期间各考察组适当浇等量的水于实验盆中以保持土壤湿润。待实验组番茄生长至10cm时，开始处理。对番茄株高，根长，鲜重，干重进行考察，结果如表2所示。
59.表2各试验组番茄形态指数
60.试验组株高(cm)根长(cm)鲜重(g)干重(g)t118.27
±
2.37bc11.9
±
1.64b0.89
±
0.23bc0.09
±
0.02dt222.57
±
3.05a16.93
±
1.56a1.39
±
0.17a0.13
±
0.03cdt314.6
±
0.92bc10.01
±
1.45b0.71
±
0.11c0.06
±
0.01bct420.02
±
2.24ab15.65
±
2.16a1.19
±
0.19ab0.09
±
0.01bc
61.从上表数据来看，大肠杆菌bl-ef能够缓解番茄植株面临的盐胁迫，并且在有或无盐胁迫的情况下，均能够增加番茄植株的株高、根长、鲜重和干重。具有解盐促生的功能。
62.检测4组试验的番茄幼苗根际土壤中营养元素的含量，检测结果如图3所示。添加大肠杆菌bl-ef能够在盐胁迫下促进土壤中碱解氮，有效磷及速效钾的含量，但效果并不显著。大肠杆菌bl-ef显著促进了盐胁迫下番茄根际土壤中水溶性钙和水溶性镁的含量。在无胁迫下，大肠杆菌bl-ef的接种对碱解氮，有效磷，速效钾的含量的影响并不显著，但对于根际土壤中水溶性钙和水溶性镁的积累具有显著效果。因此，大肠杆菌bl-ef在盐胁迫下能够促进土壤中营养物质含量并显著提升水溶性钙和水溶性镁含量积累，以便植物利用。
63.复合微生物菌剂的制备及解盐促生试验
64.复合微生物菌剂由高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌的发酵液和霍氏肠杆菌的发酵液按体积比为3：1的比例配制而成，复合微生物菌剂的ph为中性。
65.复合微生物菌剂中大肠杆菌含量为150～200亿cfu/ml，霍氏肠杆菌的含量为50～70亿cfu/ml，acc脱氨酶酶活为5.42～5.78u/mg。
66.高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌为大肠杆菌bl-ef，大肠杆菌bl-ef以大肠杆菌bl21(de3)为宿主菌和pet-28a(+)为表达载体构建，选用bamh i和hind iii酶切位点双酶切acc脱氨酶基因和载体pet-28a(+)并连接，将连接产物转入大肠杆菌bl21(de3)中进行稳定表达；
67.霍氏肠杆菌为霍氏肠杆菌rs-2。
68.于-80℃冰箱里取出甘油保藏的大肠杆菌bl-ef和霍氏肠杆菌rs-2，在lb固体平板上划线法活化，分别挑取单菌落进行培养，随后将单菌落在液体lb培养基中于37℃下活化12h后，以1％的比例接种于新的lb培养基中，大肠杆菌bl-ef培养至对数期末期时，加入0.4mm的iptg诱导。在12℃下继续培养24h后，得到发酵液。
69.于-80℃冰箱里取出甘油保藏的大肠杆菌bl-ef和霍氏肠杆菌rs-2，在lb固体平板上划线法活化，分别挑取单菌落进行培养，随后将单菌落在液体lb培养基中于37℃下活化12h后，以1％的比例接种于新的lb培养基中，培养环境保持为37℃，培养时间为48h，得到发酵液。
70.使用生理盐水以比例1：50的比例稀释两种发酵液，可直接用于农作物的浇灌。将大肠杆菌bl-ef与霍氏肠杆菌rs-2菌液按照1：1，1：2，1：3，2：1，3：1的比例复配，得到不同比
例的菌液配制。
71.盆栽试验包括8种不同的处理方式：
72.t1(ck，盐胁迫)
73.t2(盐胁迫+大肠杆菌bl-ef)
74.t3(盐胁迫+霍氏肠杆菌rs-2)
75.t4(盐胁迫+大肠杆菌bl-ef：霍氏肠杆菌rs-2＝1：1)
76.t5(盐胁迫+大肠杆菌bl-ef：霍氏肠杆菌rs-2＝1：2)
77.t6(盐胁迫+大肠杆菌bl-ef：霍氏肠杆菌rs-2＝1：3)
78.t7(盐胁迫+大肠杆菌bl-ef：霍氏肠杆菌rs-2＝2：1)
79.t8(盐胁迫+大肠杆菌bl-ef：霍氏肠杆菌rs-2＝3：1)。
80.所选番茄耐盐浓度为100mm，致死浓度为250mm，因此选择100mm nacl对番茄进行耐盐实验。其中盐胁迫的处理方式为：用育苗穴盘育苗，待番茄幼苗长至10cm左右时移栽，隔天开始浇灌菌液，每盆浇灌50ml菌液，每5天浇灌一次菌液，定期用水或等量盐水(100mm nacl)浇灌盆栽，一日两次。生长30天左右后测定相关指标。
81.每组试验做5个平行，在光照温室内进行番茄生长状态考察，期间各考察组适当浇等量的水于实验盆中以保持土壤湿润。待实验组番茄生长至10cm时，开始处理。对番茄株高，根长，鲜重，干重进行考察，结果如下表3所示。
82.表3各试验组番茄形态指数
83.试验组株高(cm)根长(cm)鲜重(g)干重(g)t111.97
±
1.75d7.57
±
1.58c0.72
±
0.14c0.05
±
0.01dt217.85
±
1.32ab8.65
±
1.98bc1.01
±
0.16b0.09
±
0.02cdt314.98
±
0.30bcd8.46
±
2.52c0.86
±
0.10bc0.09
±
0.02bct415.74
±
1.35abc8.5
±
1.27c0.97
±
0.11b0.10
±
0.02bct513.57
±
1.71cd13.83
±
1.51ab0.87
±
0.15bc0.12
±
0.03abt613.89
±
1.93cd9.13
±
1.63bc0.78
±
0.17bc0.09
±
0.03bct714.63
±
1.28bcd16.77
±
6.83ab0.94
±
0.14bc0.11
±
0.02bct818.34
±
2.16a18.56
±
2.92a1.30
±
0.17a0.15
±
0.02a
84.从上表数据可以看出，试验组8相较于其余7组具有最强的解盐促生效果，抗逆性最强。通过显著性分析，第8组番茄长势最佳，且相较于第1组均具有显著性，并且相较于单菌抗逆促生效果更佳。因此，确定两菌均有抗逆促生效果，并确定两菌最佳比例为大肠杆菌bl-ef：霍氏肠杆菌rs-2为3：1。
85.检测ck和最佳比例复合菌剂处理后的土壤中营养物质的含量，检测结果如图4所示。
86.复合菌剂相较于ck处理显著提升了土壤中碱解氮，有效磷，速效钾，水溶性钙和水溶性镁的含量，为保持植物体内稳态和缓解植物面临的离子毒害发挥重要作用，有效提高农作物对土壤中营养元素的利用。
87.因此，本发明采用上述一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法及其应用，提供了含有高acc脱氨酶酶活的复合微生物菌剂，通过大肠杆菌bl-ef和霍氏肠杆菌rs-2两种特定菌株的发酵液复配获得，其中大肠杆菌bl-ef的发酵过程中需要在特定时间内添加iptg诱
导菌体产生acc脱氨酶；在发酵过程中产生的高活性acc脱氨酶能够有效裂解环境胁迫下农作物体内的乙烯水平，并且能够促进农作物生物质含量增加及茎叶的生长；霍氏肠杆菌rs-2在其生长发育过程中还会生产吲哚乙酸，嗜铁素，溶磷酶等能够促进植物生长发育的物质，具有较强的溶磷促生功能，在提高农作物抗逆性的同时还能减少化肥的使用量，促进农作物生长发育，增强农作物生物量的积累，从整体水平上提高农作物的经济价值。
88.最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而这些修改或者等同替换亦不能使修改后的技术方案脱离本发明技术方案的精神和范围。

技术特征：
1.一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、将大肠杆菌bl-ef在lb固体平板上划线法活化，挑取单菌落培养，将单菌落在液体lb培养基中，37℃活化培养12h，再以1％的比例接种至新的lb液体培养基中，待大肠杆菌bl-ef培养菌体生长至对数期末期时，加入iptg诱导，得到高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌bl-ef发酵液；s2、将霍氏肠杆菌rs-2在lb固体平板上划线法活化，挑取单菌落培养，将单菌落在液体lb培养基中，37℃活化培养12h，再以1％的比例接种至新的lb液体培养基中，37℃培养48h，得到霍氏肠杆菌rs-2发酵液；s3、使用生理盐水分别稀释步骤s1和步骤s2得到的高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌bl-ef发酵液和霍氏肠杆菌rs-2发酵液，制成高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌bl-ef菌液和霍氏肠杆菌rs-2菌液，然后将高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌bl-ef菌液和霍氏肠杆菌rs-2菌液按体积比例混合，得到解盐促生复合微生物菌剂。2.根据权利要求1所述的一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法，其特征在于，复合微生物菌剂中大肠杆菌含量为150～200亿cfu/ml，霍氏肠杆菌的含量为50～70亿cfu/ml，acc脱氨酶酶活为5.42～5.78u/mg。3.根据权利要求1所述的一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法，其特征在于，所述大肠杆菌bl-ef以大肠杆菌bl21(de3)为宿主菌和pet-28a(+)为表达载体构建，选用bamhi和hindiii酶切位点双酶切acc脱氨酶基因和载体pet-28a(+)并连接，将连接产物转入大肠杆菌bl21(de3)中进行稳定表达。4.根据权利要求1所述的一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法，其特征在于，液体lb培养基成分为：蛋白胨10g/l，酵母浸粉5g/l，氯化钠10g/l，121℃灭菌20min，ph为7.0。5.根据权利要求1所述的一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法，其特征在于，步骤s1中，加入iptg诱导，诱导时间为24h，诱导温度为12℃，iptg浓度为0.4mm。6.根据权利要求1所述的一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法，其特征在于，步骤s3中，高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌bl-ef菌液和霍氏肠杆菌rs-2菌液体积比例为3：1，复合微生物菌剂的ph为中性。7.根据权利要求1所述的一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法，其特征在于，步骤s3中，生理盐水与高效表达acc脱氨酶的大肠杆菌bl-ef发酵液的比例为1：50，生理盐水与霍氏肠杆菌rs-2发酵液的比例为1：50。8.一种解盐促生复合微生物菌剂在提高农作物抗逆性中的应用。

技术总结
本发明公开了一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法及其应用，包括以下步骤：将大肠杆菌BL-EF和霍氏肠杆菌Rs-2分别活化培养，大肠杆菌BL-EF培养菌体生长至对数期末期时，加入IPTG低温诱导。使用生理盐水分别稀释得到的高效表达ACC脱氨酶的大肠杆菌BL-EF发酵液和霍氏肠杆菌Rs-2发酵液，制成高效表达ACC脱氨酶的大肠杆菌BL-EF菌液和霍氏肠杆菌Rs-2菌液，然后将高效表达ACC脱氨酶的大肠杆菌BL-EF菌液和霍氏肠杆菌Rs-2菌液按体积比例为3：1混合，得到解盐促生复合微生物菌剂。本发明采用上述的一种解盐促生复合微生物菌剂制备方法及其应用，能够提高农作物的抗逆性，促进农作物生物质含量增加及茎叶的生长增强农作物生物量的积累，从整体水平上提高农作物的经济价值。值。值。


技术研发人员：刘啸尘 孙琳琳 武占省 何艳慧 田飞 周小虎 贾欣玉
受保护的技术使用者：西安工程大学
技术研发日：2023.06.14
技术公布日：2023/10/15