一种油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法

1.本发明属于植物优异种质筛选鉴定领域，特别涉及一种油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法。


背景技术：

2.土壤盐碱化是限制农作物生产的重要因素之一。中国有近1亿公顷的盐碱地，其中约有1/3亿公顷具有开发利用潜力。目前，以植被修复为主的生物修复作为盐碱地改良的重要手段，具有低成本、受益快、对环境友好等优点。而油菜作为我国第五大农作物和第一大油料作物，应用范围广，具有耐盐碱能力强，种质成本低，生长速度快，营养体产量高，覆盖土壤效果好等优势，是改良与利用盐碱地的先锋作物。油菜种子萌发期是对盐碱胁迫最敏感的时期，故提高油菜种子萌发期耐盐碱能力对利用耐盐碱油菜改良和利用盐碱地具有重要价值。因此，需要对现有油菜种质资源进行萌发期耐盐碱性鉴定，筛选出萌发期耐盐碱种质。
3.目前，常见的油菜萌发期耐盐碱性鉴定方法主要为萌发皿加一定量的盐碱溶液来模拟盐碱胁，该方法存在效率低、工作量大、不同培养皿间存在误差、水分蒸发影响盐碱浓度等不足，无法满足对大量油菜种质资源萌发期耐盐碱鉴定与评价的要求。
4.因此，如何提供一种高效、便捷、精准的油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，是本领域技术人员亟需解决的问题。


技术实现要素：

5.本发明的目的是为了克服现有鉴定方法存在的效率低、工作量大、存在误差等缺陷，提供一种油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，可快速从大量油菜种质资源中筛选获得萌发期耐盐碱性强的油菜种质。
6.为了实现上述目的，本发明提供了一种油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，所述鉴定分级方法包括：步骤1)制备若干个高通量油菜萌发苗床，每一个所述高通量油菜萌发苗床上铺设无菌纱布形成若干个播种单元格；步骤2)向若干个所述高通量油菜萌发苗床中加入盐碱混合溶液，所述盐碱混合溶液包括氯化钠、碳酸钠和纯水，其中，所述氯化钠的浓度为1％，所述碳酸钠的浓度为0.12％；步骤3)将若干份不同品质或种质的待测油菜种子播种到对应的加入盐碱混合溶液的播种单元格中；步骤4)将所述播种单元格中的待测油菜种子分散均匀，保证待测油菜种子湿润；步骤5)播种七天后，拍照并统计每个品质或种质的待测油菜种子的萌发情况，根据待测油菜种子的萌发情况，将油菜耐盐碱性分为4级进行评估，所述4级包括：0级：种子不萌发，1级：种子露白，2级：长出胚根，3级：长出子叶。
7.作为本发明的再进一步技术方案是：所述盐碱混合溶液的ph值为10.3-10.9。
8.作为本发明的再进一步技术方案是：所述制备若干个高通量油菜萌发苗床包括：将一个穴盘和一个塑料方盒进行组合，制成一个所述高通量油菜萌发苗床，重复组合制备所述若干个高通量油菜萌发苗床；所述在每一个所述高通量油菜萌发苗床上铺设无菌纱布
形成若干个播种单元格包括：将无菌纱布铺设在所述穴盘上形成若干个播种单元格。
9.作为本发明的再进一步技术方案是：所述穴盘的长、宽、高分别为54、28、5cm，所述穴盘包括120个孔穴。
10.作为本发明的再进一步技术方案是：所述塑料方盒的长、宽、高分别为60、40、10cm。
11.作为本发明的再进一步技术方案是：步骤2)还包括设置空白对照试验，所述设置空白对照试验包括：制备与所述步骤1)中相同数量的高通量油菜萌发苗床，每一个所述高通量油菜萌发苗床上铺设无菌纱布形成若干个播种单元格，在该数量相同的高通量油菜萌发苗床中加入纯水，所述纯水的体积与所述盐碱混合溶液的体积相同，所述纯水的ph值为7.45-8.05；在将若干份不同品质或种质的待测油菜种子播种到对应的加入盐碱混合溶液的播种单元格中之后，所述步骤3)还包括：将若干份不同品质或种质的对照油菜种子播种到加入纯水的播种单元格中，每一个加入纯水的播种单元格中的对照油菜种子的种类与对应的一个加入盐碱混合溶液的播种单元格中的待测油菜种子的种类相同；步骤4)还包括：将所述播种单元格中的对照油菜种子分散均匀，保证对照油菜种子湿润。
12.作为本发明的再进一步技术方案是：步骤3)中，所述待测油菜种子包括华油杂62油菜品种，所述华油杂62油菜品种为对照品种。
13.作为本发明的再进一步技术方案是：步骤3)中，所述将若干份不同品质或种质的待测油菜种子播种到对应的加入盐碱混合溶液的播种单元格中还包括：一个所述播种单元格中播种一份待测油菜种子，所述一份待测油菜种子包括50粒相同品种或种质的待测油菜种子。
14.作为本发明的再进一步技术方案是：所述将所述播种单元格中的待测油菜种子分散均匀包括：用镊子将所述播种单元格中的待测油菜种子分散均匀；在保证待测油菜种子湿润后，所述步骤4)还包括：将透明塑料盖盖在所述高通量油菜萌发苗床上，减少水分蒸发；所述将所述播种单元格中的对照油菜种子分散均匀包括：用镊子将所述播种单元格中的对照油菜种子分散均匀；在保证对照油菜种子湿润后，所述步骤4)还包括：将透明塑料盖盖在所述高通量油菜萌发苗床上，减少水分蒸发。
15.作为本发明的再进一步技术方案是：所述鉴定分级方法还包括：重复三次进行步骤1)-步骤5)的试验步骤。
16.有益效果：本发明提出了一种油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，通过制备的高通量油菜萌发苗床中的若干个播种单元格，可同时对多种待测油菜种子进行大量筛选鉴定；通过包括浓度为1％的氯化钠、浓度为0.12％的碳酸钠以及纯水的盐碱混合溶液，可有效区分不同品种的抗性差异；通过待测油菜种子的萌发情况，将油菜耐盐碱性分为4级进行评估，所述4级包括：0级：种子不萌发，1级：种子露白，2级：长出胚根，3级：长出子叶，可实现更便捷、高效、精准的对油菜萌发期耐盐碱性进行评价。
附图说明
17.为了更清楚地说明本说明书实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图
获得其他的附图。
18.图1为本发明实施例中一种油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法的试验流程图；
19.图2为本发明实施例中的鉴定分级方法中的油菜萌发期耐盐碱性的分级标准图；
20.图3为本发明实施例中的鉴定分级方法中的300份待测油菜材料萌发期耐盐碱性等级分布图；
具体实施方式
21.下面将结合附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
22.同时，在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
23.除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
24.实施例1
25.如图1-2，按以下油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法筛选获得萌发期耐盐碱性强的油菜种质：
26.步骤1)将一个穴盘和一个塑料方盒进行组合，制成一个高通量油菜萌发苗床，重复组合制备所述若干个高通量油菜萌发苗床；每一个所述高通量油菜萌发苗床上铺设无菌纱布形成若干个播种单元格；所述每一个所述高通量油菜萌发苗床上铺设无菌纱布形成若干个播种单元格包括：将无菌纱布铺设在所述穴盘上形成若干个播种单元格。所述穴盘的长、宽、高分别为54、28、5cm，所述穴盘包括120个孔穴；所述塑料方盒的长、宽、高分别为60、40、10cm。
27.步骤2)向若干个所述高通量油菜萌发苗床中加入盐碱混合溶液，所述盐碱混合溶液包括氯化钠、碳酸钠和纯水，其中，所述氯化钠的浓度为1％，所述碳酸钠的浓度为0.12％，所述盐碱混合溶液的ph值为10.3-10.9；设置空白对照试验，所述设置空白对照试验包括：制备与所述步骤1)中相同数量的高通量油菜萌发苗床，每一个所述高通量油菜萌发苗床上铺设无菌纱布形成若干个播种单元格，在该数量相同的高通量油菜萌发苗床中加入纯水，所述纯水的体积与所述盐碱混合溶液的体积相同，所述纯水的ph值为7.45-8.05；
28.步骤3)将300份不同品质或种质的待测油菜种子播种到对应的加入盐碱混合溶液的播种单元格中；一个所述播种单元格中播种一份待测油菜种子，所述一份待测油菜种子包括50粒相同品种或种质的待测油菜种子；所述待测油菜种子包括华油杂62油菜品种，所述华油杂62油菜品种为对照品种；在将300份不同品质或种质的待测油菜种子播种到对应的加入盐碱混合溶液的播种单元格中之后，所述步骤3)还包括：将300份不同品质或种质的对照油菜种子播种到加入纯水的播种单元格中，每一个加入纯水的播种单元格中的对照油菜种子的种类与对应的一个加入盐碱混合溶液的播种单元格中的待测油菜种子的种类相同；
29.步骤4)用镊子将所述播种单元格中的待测油菜种子分散均匀，在保证待测油菜种
子湿润后，将透明塑料盖盖在所述高通量油菜萌发苗床上，减少水分蒸发；步骤4)还包括：用镊子将所述播种单元格中的对照油菜种子分散均匀；在保证对照油菜种子湿润后，将透明塑料盖盖在所述高通量油菜萌发苗床上，减少水分蒸发。
30.步骤5)播种七天后，拍照并统计每个品质或种质的待测油菜种子的萌发情况，根据待测油菜种子的萌发情况，将油菜耐盐碱性分为4级进行评估，所述4级包括：0级：种子不萌发，1级：种子刚刚露白，2级：长出胚根，3级：长出子叶。
31.为了保证试验结果的准确性，以上鉴定分级方法还包括：设置三组生物学重复试验，所述设置三组生物学重复试验包括：重复三次进行步骤1)-步骤5)的试验步骤。
32.试验分级结果如表1和图3：
33.[0034][0035]
[0036]
根据表1和图3可知，利用本发明提供的油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法可将300份油菜品种/种质萌发期耐盐碱性分为4个等级，其中0级的有167份，1级的有92份，2级的31份，其中耐盐碱油菜华油杂62的萌发期耐盐碱等级为2级，3级的10份。
[0037]
根据耐盐碱油菜品种“华油杂62”的表现，确定耐盐碱性等级为2级的材料为萌发期耐盐碱油菜种质。耐盐碱性等级为3级的为萌发期极端耐盐碱油菜种质，具体编号如：17tp2母、2022-1、20-832-1、20-p31-1母、21-6-2032-3、21-p28母、21-p32母、6-1813-6、兰6-626-3、兰6-627-2。
[0038]
最后，还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
[0039]
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
[0040]
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

技术特征：
1.一种油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，其特征在于，所述鉴定分级方法包括：步骤1)制备若干个高通量油菜萌发苗床，每一个所述高通量油菜萌发苗床上铺设无菌纱布形成若干个播种单元格；步骤2)向若干个所述高通量油菜萌发苗床中加入盐碱混合溶液，所述盐碱混合溶液包括氯化钠、碳酸钠和纯水，其中，所述氯化钠的浓度为1％，所述碳酸钠的浓度为0.12％；步骤3)将若干份不同品质或种质的待测油菜种子播种到对应的加入盐碱混合溶液的播种单元格中；步骤4)将所述播种单元格中的待测油菜种子分散均匀，保证待测油菜种子湿润；步骤5)播种七天后，拍照并统计每个品质或种质的待测油菜种子的萌发情况，根据待测油菜种子的萌发情况，将油菜耐盐碱性分为4级进行评估，所述4级包括：0级：种子不萌发，1级：种子露白，2级：长出胚根，3级：长出子叶。2.根据权利要求1所述的油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，其特征在于：所述盐碱混合溶液的ph值为10.3-10.9。3.根据权利要求2所述的油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，其特征在于：所述制备若干个高通量油菜萌发苗床包括：将一个穴盘和一个塑料方盒进行组合，制成一个所述高通量油菜萌发苗床，重复组合制备所述若干个高通量油菜萌发苗床；所述每一个所述高通量油菜萌发苗床上铺设无菌纱布形成若干个播种单元格包括：将无菌纱布铺设在所述穴盘上形成若干个播种单元格。4.根据权利要求3所述的油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，其特征在于：所述穴盘的长、宽、高分别为54、28、5cm，所述穴盘包括120个孔穴。5.根据权利要求4所述的油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，其特征在于：所述塑料方盒的长、宽、高分别为60、40、10cm。6.根据权利要求5所述的油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，其特征在于：步骤2)还包括设置空白对照试验，所述设置空白对照试验包括：制备与所述步骤1)中相同数量的高通量油菜萌发苗床，每一个所述高通量油菜萌发苗床上铺设无菌纱布形成若干个播种单元格，在该数量相同的高通量油菜萌发苗床中加入纯水，所述纯水的体积与所述盐碱混合溶液的体积相同，所述纯水的ph值为7.45-8.05；在将若干份不同品质或种质的待测油菜种子播种到对应的加入盐碱混合溶液的播种单元格中之后，所述步骤3)还包括：将若干份不同品质或种质的对照油菜种子播种到加入纯水的播种单元格中，每一个加入纯水的播种单元格中的对照油菜种子的种类与对应的一个加入盐碱混合溶液的播种单元格中的待测油菜种子的种类相同；步骤4)还包括：将所述播种单元格中的对照油菜种子分散均匀，保证对照油菜种子湿润。7.根据权利要求6所述的油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，其特征在于：步骤3)中，所述待测油菜种子包括华油杂62油菜品种，所述华油杂62油菜品种为对照品种。8.根据权利要求7所述的油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，其特征在于：步骤3)中，所述将若干份不同品质或种质的待测油菜种子播种到对应的加入盐碱混合溶液的播种单元格中还包括：一个所述播种单元格中播种一份待测油菜种子，所述一份待
测油菜种子包括50粒相同品种或种质的待测油菜种子。9.根据权利要求8所述的油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，其特征在于：所述将所述播种单元格中的待测油菜种子分散均匀包括：用镊子将所述播种单元格中的待测油菜种子分散均匀；在保证待测油菜种子湿润后，所述步骤4)还包括：将透明塑料盖盖在所述高通量油菜萌发苗床上，减少水分蒸发；所述将所述播种单元格中的对照油菜种子分散均匀包括：用镊子将所述播种单元格中的对照油菜种子分散均匀；在保证对照油菜种子湿润后，所述步骤4)还包括：将透明塑料盖盖在所述高通量油菜萌发苗床上，减少水分蒸发。10.根据权利要求9所述的油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，其特征在于:所述鉴定分级方法还包括：重复三次进行步骤1)-步骤5)的试验步骤。

技术总结
本发明提供一种油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法，所述鉴定分级方法包括：步骤1)制备高通量油菜萌发苗床，每一个所述高通量油菜萌发苗床上铺设无菌纱布形成若干个播种单元格；步骤2)向若干个所述高通量油菜萌发苗床中加入盐碱混合溶液，所述盐碱混合溶液包括氯化钠、碳酸钠和纯水，其中，所述氯化钠的浓度为1％，所述碳酸钠的浓度为0.12％；步骤3)将不同品质或种质的待测油菜种子播种到对应的加入盐碱混合溶液的播种单元格中；步骤4)将所述播种单元格中的待测油菜种子分散均匀；步骤5)播种七天后，根据待测油菜种子的萌发情况，将油菜耐盐碱性分为4级进行评估。本发明提供的油菜萌发期耐盐碱性的鉴定分级方法高效、便捷、精准。精准。精准。


技术研发人员：万何平 曾长立 戴希刚 刘小云 赵慧霞 郭瑞 文静 沈金雄 傅廷栋
受保护的技术使用者：江汉大学
技术研发日：2023.02.14
技术公布日：2023/7/11