葡磷酰胺的抗癌医药用途的制作方法

葡磷酰胺的抗癌医药用途
1.本技术是2018年10月22日提交的申请号为cn201880009940.3、发明名称为“葡磷酰胺的抗癌医药用途”的中国发明专利申请的分案申请。
技术领域
2.本发明涉及葡磷酰胺，特别是葡磷酰胺对特定基因发生突变的癌症或肿瘤患者的癌症、肿瘤的治疗。


背景技术：

3.葡磷酰胺(glufosfamide)，化学名为β-d-吡喃葡萄糖基-n，n
′‑
二(2-氯乙基)磷酰胺，英文名为β-d-glucopyranosyl-[n，n
′‑
bis[(2-chloroethyl)]phosphoric acid diamide，为一种新型的烷化剂类抗肿瘤药物，是由一分子具有直接烷化作用的异磷酰胺氮芥与一分子葡萄糖通过糖苷键相连而形成的。葡磷酰胺在钠依赖性的葡萄糖跨膜转运蛋白saat1的作用下转运进入肿瘤细胞，然后通过葡萄糖苷酶水解释放异磷酰胺氮芥而发挥活性。。
[0004]
该化合物最先由位于德国海德堡的asta medica(degussa)与癌症研究中心(dkfz)合作开发。2001年10月，百特国际baxter收购了astamedica的肿瘤部分，并更名为baxter oncology gmbh(ion niculescu-duvaz，current opinion in investigational drug，2002，3(10):1527-1532)，后baxter oncology的葡磷酰胺项目由美国threshold公司接手，并利用其代谢定位技术来选择性地将葡磷酰胺靶向至肿瘤部位，进行葡磷酰胺的商业化研究。
[0005]
美国threshold公司于2004年获得美国fda的快速审批资格，用于治疗以前接受过吉西他滨(gemcitabine)治疗的无法重新切除的局部晚期或转移胰腺癌(w.steve ammons,jin-wei wang y,zhijian yang y,george f.tidmarshz and robert m.hoffmany，neoplasia，2007.8,9(8)：625-633)，但2007年该公司宣布作为二线治疗用于转移性胰腺癌患者的ⅲ期临床试验没有显著增加总的存活率(tudor e.ciuleanua，alexander v.pavlovskyb，gyorgy bodokyc，,avgustm.garind，virginia k.langmuire，stewart krolle，george t.tidmarshe，a randomised phase iii trial of glufosfamide compared with best supportive care in metastatic pancreatic adenocarcinoma previously treated with gemcitabine，european journal of cancer，45(2009):1589-1596)，即该药物的后续开发因最后的ⅲ期临床试验没能通过而以失败而告终。
[0006]
国内已有齐鲁制药有限公司、江苏豪森药业股份有限公司于2005年也进行新药申请，并获得中国食品药品监督管理总局的批文，但后续也没有开发上市。


技术实现要素：

[0007]
发明人经过实验研究发现，葡磷酰胺对于有特定基因变异的癌细胞具有高敏感的生长抑制作用，具体而言就是dna修复酶受损的细胞，该细胞为至少有brca1、brca2、fanca，
fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2、ercc3、ercc4、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i(ligase i)、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶(ap endonuclease)、末端加工酶(end processing enzyme)、dna聚合酶(dna polymerase)、flap核酸内切酶(flap endonuclease)、dna连接酶(dna连接酶)对应的基因中的任意一个基因突变或更多个基因突变的细胞。
[0008]
为此，基于以上的实验发现，提供以下的技术方案：
[0009]
技术方案1：
[0010]
葡磷酰胺或其类似物用于治疗dna修复酶受损的肿瘤或癌症患者。肿瘤(tumour)是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物(neogrowth)，因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生物(neoplasm)。在医学上，癌症是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类。相对应的，起源于间叶组织的恶性肿瘤统称为肉瘤。有少数恶性肿瘤不按上述原则命名，如肾母细胞瘤、恶性畸胎瘤等。一般人们所说的“癌症”习惯上泛指所有恶性肿瘤。该患者的肿瘤或癌组织至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变，
[0011]
优选为brca1、brca2、bard1、fanca，rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、xrcc3、xrcc4/xpf、xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg中的一个或更多个基因突变，
[0012]
更优选为xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg。技术方案2：
[0013]
根据技术方案1所述的应用，其中dna修复受损为
[0014]
同源重组dna修复酶(homologous recombination repair)受损、核苷酸切除修复酶(nucleotide excision repair)受损、非同源末端连接酶受损(nonhomologous end joining)、碱基切除修复酶(base excision repair)受损、错配修复酶(mismatch repair)受损、范康尼贫血(fanconi’s anemia)途径修复酶受损中的一种或更多种，
[0015]
优选为同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、碱基切除修复酶受损中的任意一种或更多种，
[0016]
更优选为单独的同源重组dna修复酶受损或同时具有同源重组dna修复酶受损与核苷酸切除修复酶受损的患者，
[0017]
优选为brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的tmb为高的患者，
[0018]
更优选为同源重组dna修复酶受损的患者。
[0019]
技术方案3：
[0020]
根据技术方案1-2中任意一项所述的应用，其中，所述药品还含有其他抗癌药、抗肿瘤药及放射疗法及手术治疗的药物，其他抗癌药、抗肿瘤药包括hdac抑制剂、雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、细胞毒性/细胞生长抑制剂、抗增殖剂、异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂、hmg-coa还原酶抑制剂、hiv蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和其它血管生成抑制剂、细胞增殖和存活信号传导的抑制剂、细胞凋亡诱导剂。
[0021]
技术方案4：
[0022]
根据技术方案1-3中任意一项所述的应用，其中，所述肿瘤、癌症包括：
[0023]
肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、乳房癌、前列腺癌、睾丸癌、结肠癌、卵巢癌、膀胧癌、子宫颈癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊性腺癌、囊性癌、髓状癌、支气管癌、骨细胞癌、上皮癌、胆管癌、绒毛膜癌、胚癌、精原细胞癌、维尔姆斯癌、胶质细胞癌、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血细胞瘤、声带神经瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、成视神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、神经纤维瘤、纤维肉瘤、成纤维细胞瘤、纤维瘤、纤维腺瘤、纤维软骨瘤、纤维囊瘤、纤维粘液瘤、纤维骨瘤、纤维粘液肉瘤、纤维乳头状瘤、粘液肉瘤、粘液囊瘤、粘液软骨瘤、粘液软骨肉瘤、粘液软骨纤维肉瘤、粘液腺瘤、成粘液细胞瘤、脂肉瘤、脂肪瘤、脂肪腺瘤、成脂细胞瘤、脂肪软骨瘤、脂肪纤维瘤、脂肪血管瘤、粘液脂瘤、软骨肉瘤、软骨瘤、软骨肌瘤、脊索瘤、绒毛膜腺瘤、绒毛上皮瘤、成绒毛膜细胞瘤、骨肉瘤、成骨细胞瘤、骨软骨纤维瘤、骨软骨肉瘤、骨软骨瘤、骨囊瘤、骨牙质瘤、骨纤维瘤、骨纤维肉瘤、血管肉瘤、血管瘤、血管脂肪瘤、血管软骨瘤、成血管细胞瘤、血管角质瘤、血管神经胶质瘤、血管内皮瘤、血管纤维瘤、血管肌瘤、血管脂肪瘤、血管淋巴管瘤、血管脂肪平滑肌瘤、血管肌脂瘤、血管肌神经瘤、血管粘液瘤、血管网状内皮瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉芽瘤、淋巴管瘤、淋巴瘤、淋巴粘液瘤、淋巴肉瘤、淋巴管纤维瘤、淋巴细胞瘤、淋巴上皮瘤、成淋巴细胞瘤、内皮瘤、成内皮细胞瘤、滑膜瘤、滑膜肉瘤、间皮瘤、结缔组织瘤、尤因瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、成平滑肌瘤、平滑肌纤维瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、横纹肌粘液瘤、急性淋巴白血病、急性骨髓性白血病、慢性病细胞、红细胞增多症、淋巴瘤、子宫内膜癌、胶质瘤、结直肠癌、甲状腺癌、尿路上皮癌以及多发性骨髓瘤，优选为卵巢癌，宫颈癌，前列腺癌，胰腺癌，乳腺癌。
[0024]
技术方案5：
[0025]
根据技术方案1-4中任意一项所述的应用，其中，所述类似物是指：葡磷酰胺可药用的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物或前药(比如酯)，具体优选为
[0026]
a、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与有机酸、无机含氧酸通过酯化反应得到的酯；
[0027]
b、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与氨基酸通过酯化反应得到的酯；
[0028]
c、葡磷酰胺分子与酸反应所得的盐。
[0029]
技术方案6：
[0030]
根据技术方案1-5中任意一项所述的应用，其中患者是指人类(humanbeing)患者和除人类外的哺乳动物(mammal)患者。
[0031]
技术方案7：
[0032]
含葡磷酰胺或其类似物的治疗dna修复酶受损的患者的肿瘤、癌症的药物组合物，该患者的肿瘤或癌症组织至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变，
[0033]
优选为brca1、brca2、bard1、fanca，rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、xrcc3、xrcc4/xpf、xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg中的一个或更多个基因突变，
[0034]
更优选为xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg。技术方案8：
[0035]
根据技术方案7所述的药物组合物，其中dna修复酶受损为
[0036]
同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、非同源末端连接酶受损、碱基切除修复酶受损、错配修复酶受损、范康尼贫血途径修复酶受损中的一种或更多种，
[0037]
优选为同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、碱基切除修复酶受损中的任意一种或更多种，
[0038]
更优选为单独的同源重组dna修复酶受损或同时具有同源重组dna修复酶受损与核苷酸切除修复酶受损的患者，
[0039]
优选为brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的tmb为高的患者，
[0040]
更优选为同源重组dna修复酶受损的患者，
[0041]
技术方案9：
[0042]
根据技术方案7-8中任意一项所述的药物组合物，其中，所述药品还含有其他抗癌药、抗肿瘤药及放射疗法及手术治疗的药物，其他抗癌药、抗肿瘤药包括hdac抑制剂、雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、细胞毒性/细胞生长抑制剂、抗增殖剂、异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂、hmg-coa还原酶抑制剂、hiv蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和其它血管生成抑制剂、细胞增殖和存活信号传导的抑制剂、细胞凋亡诱导剂。
[0043]
技术方案10：
[0044]
根据技术方案7-9中任意一项所述的药物组合物，其中，所述肿瘤、癌症包括：
[0045]
肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、乳房癌、前列腺癌、睾丸癌、结肠癌、卵巢癌、膀胧癌、子宫颈癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊性腺癌、囊性癌、髓状癌、支气管癌、骨细胞癌、上皮癌、胆管癌、绒毛膜癌、胚癌、精原细胞癌、维尔姆斯癌、胶质细胞癌、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血细胞瘤、声带神经瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、成视神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、神经纤维瘤、纤维肉瘤、成纤维细胞瘤、纤维瘤、纤维腺瘤、纤维软骨瘤、纤维囊瘤、纤维粘液瘤、纤维骨瘤、纤维粘液肉瘤、纤维乳头状瘤、粘液肉瘤、粘液囊瘤、粘液软骨瘤、粘液软骨肉瘤、粘液软骨纤维肉瘤、粘液腺瘤、成粘液细胞瘤、脂肉瘤、脂肪瘤、脂肪腺瘤、成脂细胞瘤、脂肪软骨瘤、脂肪纤维瘤、脂肪血管瘤、粘液脂瘤、软骨肉瘤、软骨瘤、软骨肌瘤、脊索瘤、绒毛膜腺瘤、绒毛上皮瘤、成绒毛膜细胞瘤、骨肉瘤、成骨细胞瘤、骨软骨纤维瘤、骨软骨肉瘤、骨软骨瘤、骨囊瘤、骨牙质瘤、骨纤维瘤、骨纤维肉瘤、血管肉瘤、血管瘤、血管脂肪瘤、血管软骨瘤、成血管细胞瘤、血管角质瘤、血管神经胶质瘤、血管内皮瘤、血管纤维瘤、血管肌瘤、血管脂肪瘤、血管淋巴管瘤、血管脂肪平滑肌瘤、血管肌脂瘤、血管肌神经瘤、血管粘液瘤、血管网状内皮瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉芽瘤、淋巴管瘤、淋巴瘤、淋巴粘液瘤、淋巴肉瘤、淋巴管纤维瘤、淋巴细胞瘤、淋巴上皮瘤、成淋巴细胞瘤、内皮瘤、成内皮细胞瘤、滑膜瘤、滑膜肉瘤、间皮瘤、结缔组织瘤、尤因瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、成平滑肌瘤、平滑肌纤维瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、横纹肌粘液瘤、急性淋巴白血病、急性骨髓性白血病、慢性病细胞、红细胞增多症、淋巴瘤、子宫内膜癌、胶质瘤、结直肠癌、甲状腺癌、尿路上皮癌以及多发性骨髓瘤，优选为卵巢癌，宫颈癌，前列腺癌，胰腺癌，乳腺癌。
[0046]
技术方案11：
[0047]
根据技术方案7-10中任意一项所述的药物组合物，其中，所述类似物是指：葡磷酰胺可药用的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物或前药(比如酯)，具体优选为
[0048]
a、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与有机酸、无机含氧酸通过酯化反应得到的酯；
[0049]
b、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与氨基酸通过酯化反应得到的酯；
[0050]
c、葡磷酰胺分子与酸反应所得的盐。
[0051]
技术方案12：
[0052]
根据技术方案7-11中任意一项所述的药物组合物，其中患者是指人类患者和除人类外的哺乳动物患者。
[0053]
技术方案13：
[0054]
葡磷酰胺或其类似物用于治疗dna修复酶受损的患者的肿瘤、癌症，该患者的肿瘤，癌症组织至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、
bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变，
[0055]
优选为brca1、brca2、bard1、fanca，rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、xrcc3、xrcc4/xpf、xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg中的一个或更多个基因突变，
[0056]
更优选为xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg。技术方案14：
[0057]
根据技术方案13所述的葡磷酰胺或其类似物用于治疗dna修复酶受损的肿瘤、癌症，其中dna修复酶受损为
[0058]
同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、非同源末端连接酶受损、碱基切除修复酶受损、错配修复酶受损、范康尼贫血途径修复酶受损中的一种或更多种，
[0059]
优选为同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、碱基切除修复酶受损中的任意一种或更多种，
[0060]
更优选为单独的同源重组dna修复酶受损或同时具有同源重组dna修复酶受损与核苷酸切除修复酶受损的患者。
[0061]
技术方案15：
[0062]
根据技术方案13-14中任意一项所述的葡磷酰胺或其类似物用于治疗dna修复酶受损的肿瘤、癌症，其中，葡磷酰胺或其类似物还和其他抗癌药、抗肿瘤药放射疗法及手术治疗联合使用来进行治疗，其他抗癌药、抗肿瘤药包括hdac抑制剂、雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、细胞毒性/细胞生长抑制剂、抗增殖剂、异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂、hmg-coa还原酶抑制剂、hiv蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和其它血管生成抑制剂、细胞增殖和存活信号传导的抑制剂、细胞凋亡诱导剂。
[0063]
技术方案16：
[0064]
根据技术方案13-15中任意一项所述的葡磷酰胺或其类似物用于治疗dna修复酶受损的患者的肿瘤、癌症，其中，所述肿瘤、癌症包括：
[0065]
肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、乳房癌、前列腺癌、睾丸癌、结肠癌、卵巢癌、膀胧癌、子宫颈癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊性腺癌、囊性癌、髓状癌、支气管癌、骨细胞癌、上皮癌、胆管癌、绒毛膜癌、胚癌、精原细胞癌、维尔姆斯癌、胶质细胞癌、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血细胞瘤、声带神经瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、成视神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、神经纤维瘤、纤维肉瘤、成纤维细胞瘤、纤维瘤、纤维腺瘤、纤维软骨瘤、纤维囊瘤、纤维粘液瘤、纤维骨瘤、纤维粘液肉瘤、纤维乳头状瘤、粘液肉瘤、粘液囊瘤、粘液软骨瘤、粘液软骨肉瘤、粘液软骨纤维肉瘤、粘液腺瘤、成粘液细胞瘤、脂肉瘤、脂肪瘤、脂肪腺瘤、成脂细胞瘤、脂肪软骨瘤、脂肪纤维瘤、脂肪血管瘤、粘液脂瘤、软骨肉瘤、
软骨瘤、软骨肌瘤、脊索瘤、绒毛膜腺瘤、绒毛上皮瘤、成绒毛膜细胞瘤、骨肉瘤、成骨细胞瘤、骨软骨纤维瘤、骨软骨肉瘤、骨软骨瘤、骨囊瘤、骨牙质瘤、骨纤维瘤、骨纤维肉瘤、血管肉瘤、血管瘤、血管脂肪瘤、血管软骨瘤、成血管细胞瘤、血管角质瘤、血管神经胶质瘤、血管内皮瘤、血管纤维瘤、血管肌瘤、血管脂肪瘤、血管淋巴管瘤、血管脂肪平滑肌瘤、血管肌脂瘤、血管肌神经瘤、血管粘液瘤、血管网状内皮瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉芽瘤、淋巴管瘤、淋巴瘤、淋巴粘液瘤、淋巴肉瘤、淋巴管纤维瘤、淋巴细胞瘤、淋巴上皮瘤、成淋巴细胞瘤、内皮瘤、成内皮细胞瘤、滑膜瘤、滑膜肉瘤、间皮瘤、结缔组织瘤、尤因瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、成平滑肌瘤、平滑肌纤维瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、横纹肌粘液瘤、急性淋巴白血病、急性骨髓性白血病、慢性病细胞、红细胞增多症、淋巴瘤、子宫内膜癌、胶质瘤、结直肠癌、甲状腺癌、尿路上皮癌以及多发性骨髓瘤，优选为卵巢癌，宫颈癌，前列腺癌，胰腺癌，乳腺癌。
[0066]
技术方案17：
[0067]
根据技术方案13-16中任意一项所述的葡磷酰胺或其类似物用于治疗dna修复酶受损的肿瘤、癌症，其中，所述类似物是指：葡磷酰胺可药用的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物或前药(比如酯)，具体优选为
[0068]
a、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与有机酸、无机含氧酸通过酯化反应得到的酯；
[0069]
b、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与氨基酸通过酯化反应得到的酯；
[0070]
c、葡磷酰胺分子与酸反应所得的盐。
[0071]
技术方案18：
[0072]
根据技术方案13-17中任意一项所述的葡磷酰胺或其类似物用于治疗dna修复酶受损的肿瘤、癌症，其中肿瘤或癌症是指人类和除人类外的哺乳动物的肿瘤或癌症。
[0073]
技术方案19：
[0074]
用含葡磷酰胺或其类似物的制剂作为治疗dna修复酶受损的肿瘤、癌症患者的药品，该患者肿瘤，癌症组织至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变，
[0075]
优选为brca1、brca2、bard1、fanca，rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、xrcc3、xrcc4/xpf、xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg中的一个或更多个基因突变，
[0076]
更优选为xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg。技术方案20：
[0077]
根据技术方案19所述的用含葡磷酰胺或其类似物的制剂作为治疗dna修复酶受损的患者的肿瘤、癌症的药品，其中dna修复酶受损为
[0078]
同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、非同源末端连接酶受损、碱基
切除修复酶受损、错配修复酶受损、范康尼贫血途径修复酶受损中的一种或更多种，
[0079]
优选为同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、碱基切除修复酶受损中的任意一种或更多种，
[0080]
更优选为单独的同源重组dna修复酶受损或同时具有同源重组dna修复酶受损与核苷酸切除修复酶受损的患者
[0081]
优选为brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的tmb为高的患者，
[0082]
更优选为同源重组dna修复酶受损的患者，
[0083]
技术方案21：
[0084]
根据技术方案19-20中任意一项所述的用含葡磷酰胺或其类似物的制剂作为治疗dna修复受损的患者的肿瘤、癌症的药品，其中，含葡磷酰胺或其类似物的制剂还包含有其他抗癌药、抗肿瘤药及放射疗法及手术治疗，其他抗癌药、抗肿瘤药包括hdac抑制剂、雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、细胞毒性/细胞生长抑制剂、抗增殖剂、异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂、hmg-coa还原酶抑制剂、hiv蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和其它血管生成抑制剂、细胞增殖和存活信号传导的抑制剂、细胞凋亡诱导剂。
[0085]
技术方案22：
[0086]
根据技术方案19-21中任意一项所述的用含葡磷酰胺或其类似物的制剂作为治疗dna修复酶受损的患者的肿瘤、癌症的药品，其中，所述肿瘤、癌症包括：
[0087]
肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、乳房癌、前列腺癌、睾丸癌、结肠癌、卵巢癌、膀胧癌、子宫颈癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊性腺癌、囊性癌、髓状癌、支气管癌、骨细胞癌、上皮癌、胆管癌、绒毛膜癌、胚癌、精原细胞癌、维尔姆斯癌、胶质细胞癌、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血细胞瘤、声带神经瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、成视神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、神经纤维瘤、纤维肉瘤、成纤维细胞瘤、纤维瘤、纤维腺瘤、纤维软骨瘤、纤维囊瘤、纤维粘液瘤、纤维骨瘤、纤维粘液肉瘤、纤维乳头状瘤、粘液肉瘤、粘液囊瘤、粘液软骨瘤、粘液软骨肉瘤、粘液软骨纤维肉瘤、粘液腺瘤、成粘液细胞瘤、脂肉瘤、脂肪瘤、脂肪腺瘤、成脂细胞瘤、脂肪软骨瘤、脂肪纤维瘤、脂肪血管瘤、粘液脂瘤、软骨肉瘤、软骨瘤、软骨肌瘤、脊索瘤、绒毛膜腺瘤、绒毛上皮瘤、成绒毛膜细胞瘤、骨肉瘤、成骨细胞瘤、骨软骨纤维瘤、骨软骨肉瘤、骨软骨瘤、骨囊瘤、骨牙质瘤、骨纤维瘤、骨纤维肉瘤、血管肉瘤、血管瘤、血管脂肪瘤、血管软骨瘤、成血管细胞瘤、血管角质瘤、血管神经胶质瘤、血管内皮瘤、血管纤维瘤、血管肌瘤、血管脂肪瘤、血管淋巴管瘤、血管脂肪平滑肌瘤、血管肌脂瘤、血管肌神经瘤、血管粘液瘤、血管网状内皮瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉芽瘤、淋巴管瘤、淋巴瘤、淋巴粘液瘤、淋巴肉瘤、淋巴管纤维瘤、淋巴细胞瘤、淋巴上皮瘤、成淋巴细胞瘤、内皮
瘤、成内皮细胞瘤、滑膜瘤、滑膜肉瘤、间皮瘤、结缔组织瘤、尤因瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、成平滑肌瘤、平滑肌纤维瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、横纹肌粘液瘤、急性淋巴白血病、急性骨髓性白血病、慢性病细胞、红细胞增多症、淋巴瘤、子宫内膜癌、胶质瘤、结直肠癌、甲状腺癌、尿路上皮癌以及多发性骨髓瘤，优选为卵巢癌，宫颈癌，前列腺癌，胰腺癌，乳腺癌。
[0088]
技术方案23：
[0089]
根据技术方案19-22中任意一项所述的用含葡磷酰胺或其类似物的制剂作为治疗dna修复酶受损的肿瘤、癌症的药品，其中，所述类似物是指：葡磷酰胺可药用的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物或前药(比如酯)，具体优选为
[0090]
a、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与有机酸、无机含氧酸通过酯化反应得到的酯；
[0091]
b、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与氨基酸通过酯化反应得到的酯；
[0092]
c、葡磷酰胺分子与酸反应所得的盐。
[0093]
技术方案24：
[0094]
根据技术方案19-23中任意一项所述的用含葡磷酰胺或其类似物的制剂作为治疗dna修复酶受损的肿瘤、癌症的药品。
[0095]
技术方案25：
[0096]
一种治疗dna修复酶受损的患者的肿瘤、癌症的方法，该方法包括给患有该疾病的所述患者服用含有葡磷酰胺或其类似物的药物制剂，该患者的肿瘤或癌症组织至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变，
[0097]
优选为brca1、brca2、bard1、fanca，rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、xrcc3、xrcc4/xpf、xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg中的一个或更多个基因突变，
[0098]
更优选为xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg。技术方案26：
[0099]
根据技术方案25所述的治疗方法，其中dna修复酶受损为
[0100]
同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、非同源末端连接酶受损、碱基切除修复酶受损、错配修复酶受损、范康尼贫血途径修复酶受损中的一种或更多种，
[0101]
优选为同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、碱基切除修复酶受损中的任意一种或更多种，
[0102]
更优选为单独的同源重组dna修复酶受损或同时具有同源重组dna修复酶受损与核苷酸切除修复酶受损的患者，
[0103]
优选为brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、
brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的tmb为高的患者，
[0104]
更优选为同源重组dna修复酶受损的患者，
[0105]
技术方案27：
[0106]
根据技术方案25-26中任意一项所述的治疗方法，其中，所述药物制剂还含有其他抗癌药、抗肿瘤药及放射疗法及手术治疗的药物，其他抗癌药、抗肿瘤药包括hdac抑制剂、雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、细胞毒性/细胞生长抑制剂、抗增殖剂、异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂、hmg-coa还原酶抑制剂、hiv蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和其它血管生成抑制剂、细胞增殖和存活信号传导的抑制剂、细胞凋亡诱导剂。
[0107]
技术方案28：
[0108]
根据技术方案25-27中任意一项所述的治疗方法，其中，所述肿瘤、癌症包括：
[0109]
肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、乳房癌、前列腺癌、睾丸癌、结肠癌、卵巢癌、膀胧癌、子宫颈癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊性腺癌、囊性癌、髓状癌、支气管癌、骨细胞癌、上皮癌、胆管癌、绒毛膜癌、胚癌、精原细胞癌、维尔姆斯癌、胶质细胞癌、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血细胞瘤、声带神经瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、成视神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、神经纤维瘤、纤维肉瘤、成纤维细胞瘤、纤维瘤、纤维腺瘤、纤维软骨瘤、纤维囊瘤、纤维粘液瘤、纤维骨瘤、纤维粘液肉瘤、纤维乳头状瘤、粘液肉瘤、粘液囊瘤、粘液软骨瘤、粘液软骨肉瘤、粘液软骨纤维肉瘤、粘液腺瘤、成粘液细胞瘤、脂肉瘤、脂肪瘤、脂肪腺瘤、成脂细胞瘤、脂肪软骨瘤、脂肪纤维瘤、脂肪血管瘤、粘液脂瘤、软骨肉瘤、软骨瘤、软骨肌瘤、脊索瘤、绒毛膜腺瘤、绒毛上皮瘤、成绒毛膜细胞瘤、骨肉瘤、成骨细胞瘤、骨软骨纤维瘤、骨软骨肉瘤、骨软骨瘤、骨囊瘤、骨牙质瘤、骨纤维瘤、骨纤维肉瘤、血管肉瘤、血管瘤、血管脂肪瘤、血管软骨瘤、成血管细胞瘤、血管角质瘤、血管神经胶质瘤、血管内皮瘤、血管纤维瘤、血管肌瘤、血管脂肪瘤、血管淋巴管瘤、血管脂肪平滑肌瘤、血管肌脂瘤、血管肌神经瘤、血管粘液瘤、血管网状内皮瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉芽瘤、淋巴管瘤、淋巴瘤、淋巴粘液瘤、淋巴肉瘤、淋巴管纤维瘤、淋巴细胞瘤、淋巴上皮瘤、成淋巴细胞瘤、内皮瘤、成内皮细胞瘤、滑膜瘤、滑膜肉瘤、间皮瘤、结缔组织瘤、尤因瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、成平滑肌瘤、平滑肌纤维瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、横纹肌粘液瘤、急性淋巴白血病、急性骨髓性白血病、慢性病细胞、红细胞增多症、淋巴瘤、子宫内膜癌、胶质瘤、结直肠癌、甲状腺癌、尿路上皮癌或多发性骨髓瘤，优选为卵巢癌，宫颈癌，前列腺癌，胰腺癌，乳腺癌。
[0110]
技术方案29：
[0111]
根据技术方案25-28中任意一项所述的治疗方法，其中，所述类似物是指：葡磷酰胺可药用的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物或前药(比如酯)，具体优选为
[0112]
a、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与有机酸、无机含氧酸通过酯化反应
得到的酯；
[0113]
b、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与氨基酸通过酯化反应得到的酯；
[0114]
c、葡磷酰胺分子与酸反应所得的盐。
[0115]
技术方案30：
[0116]
根据技术方案25-29中任意一项所述的治疗方法，其中患者是指人类患者和除人类外的哺乳动物患者。
[0117]
技术方案31：
[0118]
治疗dna修复酶受损的患者的肿瘤、癌症的免疗组合治疗药物，该治疗药物含有：
[0119]
葡磷酰胺或其类似物；以及
[0120]
免疫检查点抑制剂，
[0121]
其中，所述患者的肿瘤或癌症组织至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变，
[0122]
优选为brca1、brca2、bard1、fanca，rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、xrcc3、xrcc4/xpf、xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg中的一个或更多个基因突变，
[0123]
更优选为xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg。技术方案32：
[0124]
根据技术方案31所述的免疗组合治疗药物，其中dna修复酶受损为
[0125]
同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、非同源末端连接酶受损、碱基切除修复酶受损、错配修复酶受损、范康尼贫血途径修复酶受损中的一种或更多种，
[0126]
优选为同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、碱基切除修复酶受损中的任意一种或更多种，
[0127]
更优选为单独的同源重组dna修复酶受损或同时具有同源重组dna修复酶受损与核苷酸切除修复酶受损的患者，
[0128]
优选为brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的tmb为高的患者，
[0129]
更优选为同源重组dna修复酶受损的患者。
[0130]
技术方案33：
[0131]
根据技术方案31所述的免疗组合治疗药物，所述免疫检查点抑制剂即为干扰细胞周期检查点的药物，包括pd-1(免疫抑制受体)抑制剂、pd-l1(免疫抑制受体配体)抑制剂及ctl4(溶解性t淋巴细胞4)抑制剂等抑制剂。
[0132]
技术方案34：
[0133]
根据技术方案31-33中任意一项所述的免疗组合治疗药物，其中，所述免疗组合治疗药物还含有其他抗癌药、抗肿瘤药及放射疗法及手术治疗的药物，其他抗癌药、抗肿瘤药包括hdac抑制剂、雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、细胞毒性/细胞生长抑制剂、抗增殖剂、异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂、hmg-coa还原酶抑制剂、hiv蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和其它血管生成抑制剂、细胞增殖和存活信号传导的抑制剂、细胞凋亡诱导剂。
[0134]
技术方案35：
[0135]
根据技术方案31-33中任意一项所述的免疗组合治疗药物，其中，所述肿瘤、癌症包括：
[0136]
肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、乳房癌、前列腺癌、睾丸癌、结肠癌、卵巢癌、膀胧癌、子宫颈癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊性腺癌、囊性癌、髓状癌、支气管癌、骨细胞癌、上皮癌、胆管癌、绒毛膜癌、胚癌、精原细胞癌、维尔姆斯癌、胶质细胞癌、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血细胞瘤、声带神经瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、成视神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、神经纤维瘤、纤维肉瘤、成纤维细胞瘤、纤维瘤、纤维腺瘤、纤维软骨瘤、纤维囊瘤、纤维粘液瘤、纤维骨瘤、纤维粘液肉瘤、纤维乳头状瘤、粘液肉瘤、粘液囊瘤、粘液软骨瘤、粘液软骨肉瘤、粘液软骨纤维肉瘤、粘液腺瘤、成粘液细胞瘤、脂肉瘤、脂肪瘤、脂肪腺瘤、成脂细胞瘤、脂肪软骨瘤、脂肪纤维瘤、脂肪血管瘤、粘液脂瘤、软骨肉瘤、软骨瘤、软骨肌瘤、脊索瘤、绒毛膜腺瘤、绒毛上皮瘤、成绒毛膜细胞瘤、骨肉瘤、成骨细胞瘤、骨软骨纤维瘤、骨软骨肉瘤、骨软骨瘤、骨囊瘤、骨牙质瘤、骨纤维瘤、骨纤维肉瘤、血管肉瘤、血管瘤、血管脂肪瘤、血管软骨瘤、成血管细胞瘤、血管角质瘤、血管神经胶质瘤、血管内皮瘤、血管纤维瘤、血管肌瘤、血管脂肪瘤、血管淋巴管瘤、血管脂肪平滑肌瘤、血管肌脂瘤、血管肌神经瘤、血管粘液瘤、血管网状内皮瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉芽瘤、淋巴管瘤、淋巴瘤、淋巴粘液瘤、淋巴肉瘤、淋巴管纤维瘤、淋巴细胞瘤、淋巴上皮瘤、成淋巴细胞瘤、内皮瘤、成内皮细胞瘤、滑膜瘤、滑膜肉瘤、间皮瘤、结缔组织瘤、尤因瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、成平滑肌瘤、平滑肌纤维瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、横纹肌粘液瘤、急性淋巴白血病、急性骨髓性白血病、慢性病细胞、红细胞增多症、淋巴瘤、子宫内膜癌、胶质瘤、结直肠癌、甲状腺癌、尿路上皮癌以及多发性骨髓瘤，优选为卵巢癌，宫颈癌，前列腺癌，胰腺癌，乳腺癌。
[0137]
技术方案36：
[0138]
根据技术方案31-33中任意一项所述的免疗组合治疗药物，其中，所述类似物是指：葡磷酰胺可药用的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物或前药(比如酯)，具体优选为
[0139]
a、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与有机酸、无机含氧酸通过酯化反应得到的酯；
[0140]
b、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与氨基酸通过酯化反应得到的酯；
[0141]
c、葡磷酰胺分子与酸反应所得的盐。
[0142]
技术方案37：
[0143]
根据技术方案31-33中任意一项所述的免疗组合治疗药物，其中患者是指人类患者和除人类外的哺乳动物患者。
[0144]
技术方案38：
[0145]
一种癌症或肿瘤患者的治疗方法，即先对该患者进行brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的基因诊断试剂或基因诊断方法或基因测序进行判别，以筛选出出现上述基因突变的患者，并对这些患者进行给药，所述给药的药物含有葡磷酰胺或其类似物。
[0146]
技术方案39：
[0147]
根据技术方案38所述的癌症或肿瘤患者的治疗方法，进一步，为了加强葡磷酰胺或其类似物的抗癌靶向作用，可以联合使用增强葡萄糖转运蛋白表达的药物、制剂或同时对该患者进行增强葡萄糖转运蛋白表达的治疗。
[0148]
更进一步，可以直接服用葡磷酰胺或其类似物与上述的增强葡萄糖转运蛋白表达的药物复合的复方制剂，
[0149]
优选为brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的tmb为高的患者，
[0150]
更优选为同源重组dna修复酶受损的患者。
[0151]
技术方案40：
[0152]
一种治疗癌症或肿瘤的复方制剂，含有：
[0153]
葡磷酰胺或其类似物；以及
[0154]
增强葡萄糖转运蛋白表达的药物，
[0155]
其中，该患者的肿瘤或癌组织至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、
rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变，
[0156]
优选为brca1、brca2、bard1、fanca，rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、xrcc3、xrcc4/xpf、xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg中的一个或更多个基因突变，
[0157]
更优选为xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg，
[0158]
优选为brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的tmb为高的患者，
[0159]
更优选为同源重组dna修复酶受损的患者。
[0160]
技术方案41：
[0161]
为了检测上述的brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因是否出现突变等异常，本发明还提供了对应的检测试剂，该试剂包括对应brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因基因编码的蛋白质或酶的抑制剂以及其他适当助剂。
[0162]
技术方案42：
[0163]
一种治疗癌症或肿瘤的免疫调节复方制剂，含有：
[0164]
葡磷酰胺或其类似物；以及
[0165]
免疫调节药物，
[0166]
其中，该患者的肿瘤或癌组织至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、
atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变，
[0167]
优选为brca1、brca2、bard1、fanca，rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、xrcc3、xrcc4/xpf、xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg中的一个或更多个基因突变，
[0168]
更优选为xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg，
[0169]
优选为brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的tmb为高的患者，
[0170]
更优选为同源重组dna修复酶受损的患者。
[0171]
所述免疫调节药物包括免疫抑制剂和免疫增强药。
[0172]
免疫抑制剂包括环孢素(ciclosporin)、他克莫司(tacrolimus)、硫唑嘌呤(azathioprine)等。
[0173]
免疫增强药包括：1增强、调节和恢复机体免疫应答的非特异性活性成分；2干扰素或干扰素诱生剂；3胸腺激素、胸腺因子；4淋巴因子、细胞因子；5单克隆抗体及交联物；6重新被激活的免疫活性细胞；7肿瘤抗原及免疫疫苗这7类物质，具体的药物包括胸腺素、转移因子、重组人干扰素、匹多莫德(pidotimod)、卡介菌多糖核酸制剂以及人参、黄芪、五味子、枸杞子、党参、冬虫夏草、灵芝和银耳多糖等具有提高免疫功能作用的天然药物。
[0174]
技术方案43：
[0175]
一种治疗癌症或肿瘤的方法，其包括
[0176]
对患者给予葡磷酰胺或其类似物进行治疗；以及
[0177]
进行免疫调节治疗，
[0178]
其中，该患者的肿瘤或癌组织至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、
fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变，
[0179]
优选为brca1、brca2、bard1、fanca，rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、xrcc3、xrcc4/xpf、xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg中的一个或更多个基因突变，
[0180]
更优选为xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg，
[0181]
优选为brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的tmb为高的患者，
[0182]
更优选为同源重组dna修复酶受损的患者。
[0183]
所述免疫调节药物包括免疫抑制剂和免疫增强药。
[0184]
免疫抑制剂包括环孢素、他克莫司、硫唑嘌呤等。
[0185]
免疫增强药包括：1增强、调节和恢复机体免疫应答的非特异性活性成分；2干扰素或干扰素诱生剂；3胸腺激素、胸腺因子；4淋巴因子、细胞因子；5单克隆抗体及交联物；6重新被激活的免疫活性细胞；7肿瘤抗原及免疫疫苗这7类物质，具体的药物包括胸腺素、转移因子、重组人干扰素、匹多莫德、卡介菌多糖核酸制剂以及人参、黄芪、五味子、枸杞子、党参、冬虫夏草、灵芝和银耳多糖等具有提高免疫功能作用的天然药物。
[0186]
具体的，可以先对患者进行葡磷酰胺或其类似物的给药，然后再进行免疫治疗的给药，葡磷酰胺或其类似物的给药方式可以为静脉给药，也可以包括肿瘤内给药。
[0187]
由于不同瘤种之间tmb(tumor mutation load(burden)即肿瘤基因突变负荷)高低不同：一般认为：tmb超过20个突变/mb(mb代表的就是每百万个碱基)，就是高；低于10个突变/mb，就是低，处于中间的就是中。2017年世界肺癌大会上，施贵宝公司公布过一项名为checkmate-032的临床试验结果。这是一项纳入了401名一线治疗失败的晚期肺癌患者的ii期临床试验，接受pd-1抑制剂单独或联合伊匹木治疗。按照tmb高低划分成tmb高、tmb中、tmb低三类病人，那么在接受联合治疗的人群中，三组的有效率分别为62％、20％、23％，tmb高的人群有效率高3倍；而三组的中位总生存期，分别为：22.0个月、3.6个月、3.4个月——22.0个月与3.4个月，相差6倍。该试验证明，对于不同的癌症治疗药物，不同的tmb水平对于药物的疗效有很大的影响。
[0188]
为此，本发明根据以往研究文献的结论，优选下列基因：brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、
mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的tmb为高的患者。
[0189]
术语解释：
[0190]
brca1、brca2，即breast cancer 1、2基因。
[0191]
fanca即fanconi anemia complememtation groupa基因fancd1、fancd2即fanconi anemia group d1、2protein基因。
[0192]
atm，共济失调毛细血管扩张突变基因(ataxia telangiectasia-mutated gene)。
[0193]
atr，atm-rad3-related基因。
[0194]
chek1、chek2，checkpoint kinase 1、2基因。
[0195]
ctp，cytidine triphosphate基因。
[0196]
bard1，brca1-associated ring domainprotein 1基因。
[0197]
brip1，brca1-interacting protein 1基因。
[0198]
rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57，即restriction-site associated dna即限制性内切位点51d、51c、52、54、55、57相关的dna基因。
[0199]
fam175，family with sequence similarity 175 member基因。
[0200]
nbn，nijmegen breakage syndrome 1基因。
[0201]
rad50、rad23a、rad23b、rad51b，dna repair protein rad50、rad23a、rad23b、rad51b基因。
[0202]
mre11，mismatch repair endonuclease 11基因。
[0203]
p53，tumor protein p53基因。
[0204]
nbs1，nijmegen breakage syndrome 1号基因。
[0205]
xrs2，人类nbs1的一个同源基因。
[0206]
xrcc1、xrcc2、xrcc3，dna repair protein x-ray repair cross complementing1、2、3基因。
[0207]
ercc1、ercc2、ercc3、ercc4、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa，excision repair cross-complementation group 1、2、3、4、5、6、8基因。
[0208]
ku80，编码ku80蛋白的基因。
[0209]
mhs6，muts homolog 6基因。
[0210]
mgmt，methylguanine methyltransferase基因。
[0211]
parp，poly adp-ribose polymerase聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶基因。
[0212]
ccnh，cyclin h基因。
[0213]
cdk7、12，cyclin dependent kinase 7、12基因。
[0214]
cetn2，centrin 2基因。
[0215]
ddb1，ddb2，damage specific dna binding protein 1/2基因。
[0216]
lig1/dna ligase i，dna连接酶1基因。
[0217]
mms19，mms19 homolog,cytosolic iron-sulfur assembly component。
[0218]
mnat1，nat1,cdk activating kinase assembly factor基因。
[0219]
rpa1、rpa2，replication protein a1、a2基因。
[0220]
tfiih，transcription factor iih基因。
[0221]
xab2，xpa binding protein 2基因。
[0222]
xpa，dna damage recognition and repair factor基因。
[0223]
xpc，pc complex subunit,dna damage recognition and repair factor基因。
[0224]
mbd4，methyl-cpg binding domain 4,dna glycosylase基因。
[0225]
neil1，nei like dna glycosylase 1基因。
[0226]
bap1，brca1 associated protein 1。
[0227]
exo1，exonuclease 1。
[0228]
faap20，fanconi anemia core complex associated protein 20。
[0229]
fan1，fancd2 and fanci associated nuclease 1。
[0230]
fance，fanconi anemia complementation group e。
[0231]
fancm，fanconi anemia complementation group m。
[0232]
mdc1，mediator of dna damage checkpoint 1。
[0233]
nono，non-pou domain containing octamer binding。
[0234]
polq，dna polymerase theta。
[0235]
rbbp8，rb binding protein 8,endonuclease。
[0236]
smc5，structural maintenance of chromosomes 5。
[0237]
usp11，ubiquitin specific peptidase 11。
[0238]
wrn，werner syndrome recq like helicase。
[0239]
ap endonucleases，ap内切核酸酶。
[0240]
end processing enzymes，末端加工酶。
[0241]
dna polymerases，dna聚合酶。
[0242]
flap endonuclease，flap核酸内切酶。
[0243]
显然，本发明提供的一种疾病的具体治疗方法，即先对该受试者或患者进行以上基因的基因诊断测试，即使用对应brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的基因诊断试剂或基因诊断方法或基因测序进行判别，以筛选出出现上述基因突变的患者，进行给药或治疗。
[0244]
进一步，为了加强葡磷酰胺或其类似物的抗癌靶向作用，可以联合使用增强葡萄糖转运蛋白表达的药物、制剂或同时对该患者进行增强葡萄糖转运蛋白表达的治疗，更进一步，可以直接服用葡磷酰胺或其类似物与上述的增强葡萄糖转运蛋白表达的药物复合的复方制剂。
[0245]
为了检测上述的brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、
ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因是否出现突变等异常，本发明还提供了对应的检测试剂，该试剂包括对应brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的基因编码的蛋白质或酶的抑制剂以及其他适当助剂，试验时通过观察该对应抑制剂对该细胞的作用效果来判别该细胞是否出现对应的brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的基因突变或缺陷。
[0246]
显然，葡磷酰胺作为一种广谱抗癌剂，能治疗的肿瘤、癌症是十分广泛的，包括但不限于以上的：肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、乳房癌、前列腺癌、睾丸癌、结肠癌、卵巢癌、膀胧癌、子宫颈癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊性腺癌、囊性癌、髓状癌、支气管癌、骨细胞癌、上皮癌、胆管癌、绒毛膜癌、胚癌、精原细胞癌、维尔姆斯癌、胶质细胞癌、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血细胞瘤、声带神经瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、成视神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、神经纤维瘤、纤维肉瘤、成纤维细胞瘤、纤维瘤、纤维腺瘤、纤维软骨瘤、纤维囊瘤、纤维粘液瘤、纤维骨瘤、纤维粘液肉瘤、纤维乳头状瘤、粘液肉瘤、粘液囊瘤、粘液软骨瘤、粘液软骨肉瘤、粘液软骨纤维肉瘤、粘液腺瘤、成粘液细胞瘤、脂肉瘤、脂肪瘤、脂肪腺瘤、成脂细胞瘤、脂肪软骨瘤、脂肪纤维瘤、脂肪血管瘤、粘液脂瘤、软骨肉瘤、软骨瘤、软骨肌瘤、脊索瘤、绒毛膜腺瘤、绒毛上皮瘤、成绒毛膜细胞瘤、骨肉瘤、成骨细胞瘤、骨软骨纤维瘤、骨软骨肉瘤、骨软骨瘤、骨囊瘤、骨牙质瘤、骨纤维瘤、骨纤维肉瘤、血管肉瘤、血管瘤、血管脂肪瘤、血管软骨瘤、成血管细胞瘤、血管角质瘤、血管神经胶质瘤、血管内皮瘤、血管纤维瘤、血管肌瘤、血管脂肪瘤、血管淋巴管瘤、血管脂肪平滑肌瘤、血管肌脂瘤、血管肌神经瘤、血管粘液瘤、血管网状内皮瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉芽瘤、淋巴管
瘤、淋巴瘤、淋巴粘液瘤、淋巴肉瘤、淋巴管纤维瘤、淋巴细胞瘤、淋巴上皮瘤、成淋巴细胞瘤、内皮瘤、成内皮细胞瘤、滑膜瘤、滑膜肉瘤、间皮瘤、结缔组织瘤、尤因瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、成平滑肌瘤、平滑肌纤维瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、横纹肌粘液瘤、急性淋巴白血病、急性骨髓性白血病、慢性病细胞、红细胞增多症、淋巴瘤、子宫内膜癌、胶质瘤、结直肠癌、甲状腺癌、尿路上皮癌以及多发性骨髓瘤。
[0247]
作为对上述41个技术方案的一种优选，所述类似物是指：
[0248]
a、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与有机酸、无机含氧酸通过酯化反应得到的酯，有机酸可以为羧酸(-cooh)、磺酸(-so3h)、亚磺酸(rsooh)、硫羧酸(rcosh)；
[0249]
b、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与氨基酸通过酯化反应得到的酯，氨基酸可以为天然的经由蛋白质水解得到的α-氨基酸或其他的β-，γ-...w-氨基酸，进一步优选为α-氨基酸；
[0250]
c、葡磷酰胺分子与酸进行酸碱反应反应所得的盐，酸可以为有机酸或无机酸，有机酸可以为羧酸(-cooh)、磺酸(-so3h)、亚磺酸(rsooh)、硫羧酸(rcosh)，无机酸为硫酸、盐酸、磷酸、氢溴酸等。
[0251]
本发明的葡磷酰胺或其类似物与其它抗癌或化学治疗剂、免疫治疗的药物的组合，显然也应该能够达到本发明的目的，也应得到保护。这种试剂的非限制性实例可参见肿瘤学的癌症原理与实务，v.t.devita与s.hellman(编辑者)，第6版(2001年2月15日)，lippincottwilliams&wilkins出版社。本领域技术人员能够以药物的特定特征与所涉及的癌症(或其它适应征)为基础，辨识试剂的何种组合可使用。合并作为复方来使用的抗癌剂，包括但不限于下列：雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、细胞毒剂、微管抑制剂/稳定剂、拓朴异构酶抑制剂、反义rna与dna寡核苷酸、抗代谢物、偶合至细胞毒剂的抗体或放射性同型物、hmg-coa还原酶抑制剂、异戊二烯基转移酶抑制剂、法呢基蛋白质转移酶抑制剂、血管生成抑制剂、激酶抑制剂、cox2抑制剂、整联蛋白阻断剂、ppar激动剂、mdr抑制剂及免疫治疗药物。其它抗癌剂也包括缺氧可活化剂、蛋白酶体抑制剂、泛素抑制剂、hdm2抑制剂、tnf活化剂、bub-r抑制剂、cenp-e抑制剂及干扰素(例如α-干扰素)。这种抗癌剂可为小分子或生物制剂(例如rna反义剂与抗体)。
[0252]
hdac抑制剂是组蛋白去乙酰化酶抑制剂，包括：
[0253]
a、脂肪酸，如丁酸盐、丁酸苯酯和丙戊酸；
[0254]
b、氧肟酸盐，如tsa是被发现的第1个能抑制hdacs的天然氧肟酸，saha与tsa结构相似，是被批准的第1个可以用于临床的制剂；
[0255]
c、环肽，如天然产物缩酚酸肽fk-228、apicidin和环氧肟酸；
[0256]
d、苯酰胺类，如ms-275、mgcd0103等。
[0257]
此处“雌激素受体调节剂”是指会干扰或抑制雌激素结合至受体的化合物，不管机制为何。雌激素受体调节剂的实例包括但不限于它莫西芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、碘昔芬(idoxifene)、ly353381、ly117081、托瑞米芬(toremifne)、氟维司群(fulvestrant)、阿纳托司唑(anastrozole)与列措唑(letrazole)。
[0258]“雄激素受体调节剂”是指会干扰或抑制雄激素结合至受体的化合物，不管机制为何。雄激素受体调节剂的实例包括非那司提(finasteride)及其它5α-还原酶抑制剂、尼鲁米特(nilutamide)、氟他米特(flutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、利阿唑(liarozole)
及阿比特龙(abiraterone)醋酸盐。
[0259]“类视色素受体调节剂”是指会干扰或抑制类视色素结合至受体的化合物，不管机制为何。这种类视色素受体调节剂的实例包括贝沙罗汀(bexarotene)、维甲酸(tretinoin)、13-顺式-视黄酸、9-顺式-视黄酸、二氟甲基鸟氨酸、ilx23-7553、反式-n-(4
′‑
羟苯基)视黄酰胺及n-4-羧基苯基视黄酰胺。
[0260]
细胞毒剂的实例包括但不限于sertenef、恶病质毒素、异磷酰胺(ifosfamide)、他索纳明(tasonermin)、氯尼达明(lonidamine)、碳氯胺铂、六甲密胺(altretamine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、二溴卫矛醇、雷莫司汀(ranimustine)、福替目丁tm(fotemustine)、奈达铂(nedaplatin)、草酸铂、替莫唑胺(temozolomide)、环磷酰胺、庚铂胺(heptaplatin)、雌氮芥(estramustine)、英丙舒凡(improsulfan)甲苯磺酸盐、氯乙环磷酰胺、尼莫司丁(nimustine)、氯化二溴史匹啶(dibrospidium chloride)、嘌嘧替派(pumitepa)、罗巴铂胺(lobaplatin)、沙催铂胺(satraplatin)、普非洛霉素(profiromycin)、顺氯胺铂、多克索红菌素、嘌嘧替派(irofulven)、得西磷酰胺(dexifosfamide)、顺式-胺二氯基(2-甲基-吡啶)铂、苄基鸟嘌呤、葡磷酰胺(glufosfamide)、gpx100、四氯化(反式，反式，反式)-双-μ-(己烷-1，6-二胺)-μ-[二胺-铂(ⅱ)]双[二胺(氯基)铂(ⅱ)]、二阿吉定基精胺(diarizidinylspermine)、三氧化二砷、1-(11-十二烷基氨基-10-羟基十一烷基)-3，7-二甲基黄嘌呤、唑红菌素(zorubicin)、依达红菌素、道诺红菌素、双安催(bisantrene)、丝裂黄酮(mitoxantrone)、皮拉红菌素(pirarubicin)、皮那怀德(pinafide)、瓦尔红菌素、阿姆红菌素(amrubicin)、抗新伯拉斯东(antineoplaston)、3
′‑
去安新(deansino)-3
′‑
吗啉基-13-脱氧-10-羟基洋红霉素、安那霉素(annamycin)、加拉红菌素(galarubicin)、也里那怀德(elinafide)、men10755、4-脱甲氧基-3-脱氨基-3-氮丙啶基-4-甲基磺酰基-道诺红菌素(参见wo 00/50032)、胺甲喋呤、吉西他滨(gemcitabine)及其混合物。
[0261]
微管抑制剂/微管稳定化剂的实例包括紫杉醇(paclitaxel)、长春花素硫酸盐、3
′
，4
′‑
二脱氢-4
′‑
脱氧-8
′‑
正长春花白胞生素、多谢他索(docetaxel)、长春新碱、长春碱、威诺瑞宾(vinorelobine)、利坐素(rhizoxin)、多拉他汀、米沃蛋白(mivobulin)、羟乙磺酸盐、欧利他汀(auristatin)、西马多汀(cemadotin)、rpr109881、bms184476、温弗路宁(vinflunine)、隐藻素、2，3，4，5，6-五氟-n-(3-氟基-4-甲氧苯基)苯磺酰胺、脱水长春花碱、n，n-二甲基-l-缬氨酰基-l-缬氨酰基-n-甲基-l-缬氨酰基-l-脯氨基酰基-l-脯氨酸-叔丁基酰胺、tdx258、艾波希酮(epothilone)(参见，例如美国专利us6,284,781与us6,288,237)及bms 188797。
[0262]
拓朴异构酶抑制剂的一些实例为托泊替康(topotecan)、海卡塔胺(hycaptamine)、依立替康(irinotecan)、卢比替康(rubitecan)等。
[0263]
抗代谢物的药物包括：5-氟尿嘧啶、依诺他滨(enocitabine)、嘧福禄(carmofur)、喃氟啶(tegafur)、喷司他丁(pentostatin)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、曲美沙特(trimetrexate)、氟达拉滨(fludarabine)、卡培他滨(capecitabine)、加洛他滨(galocitabine)、阿糖胞苷欧可弗斯特(ocfosfate)、弗提阿宾(fosteabine)钠水合物、雷替曲塞(raltitrexed)、巴提崔西得(paltitrexid)、乙嘧替氟(emitefur)、噻唑呋林(tiazofurin)、噻唑呋林(decitabine)、诺拉曲塞(nolatrexed)、培美曲塞(pemetrexed)、
尼札拉宾(nelzarabine)、2
′‑
脱氧-2
′‑
亚甲基胞嘧啶核苷、2
′‑
氟基亚甲基-2
′‑
脱氧胞苷、n-[5-(2，3-二氢-苯并呋喃基)磺酰基]-n
′‑
(3，4-二氯苯基)脲、n6-[4-脱氧-4-[n2-[2(e)，4(e)-十四烷二烯酰基]甘氨基酰氨基]-l-甘油基-b-l-甘露-庚吡喃糖基]腺嘌呤、阿普利定(aplidine)、也天西定(ecteinascidin)、曲沙他滨(troxacitabine)、4-[2-氨基-4-氧代-4，6，7，8-四氢-3h-嘧啶并[5，4-b][1，4]噻嗪-6-基-(s)-乙基]-2，5-噻吩酰基-l-谷氨酸、氨基喋呤、5-氟尿嘧啶、亚硝基羟基丙氨酸、11-乙酰基-8-(氨甲酰基氧基甲基)-4-甲酰基-6-甲氧基-14-氧-1，11-二氮杂四环(7.4.1.0.0)-十四-2，4，6-三烯-9-基醋酸酯、苦马豆碱(swainsonine)、洛美曲索(lometrexol)、右丙亚胺(dexrazoxane)、甲硫氨酸酶、2
′‑
氰基-2
′‑
脱氧-n4-棕榈酰基-1-b-d-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶及3-氨基吡啶-2-羧醛缩氨基硫脲。
[0264]“hmg-coa还原酶抑制剂”是指3-羟基-3-甲基戊二酰基-coa还原酶的抑制剂。可使用hmg-coa还原酶抑制剂的实例，包括但不限于洛伐他汀(lovastatin)(参见美国专利4,231,938、4,294，926及4,319,039)、辛伐他汀(simvastatin)(参见美国专利4,444,784、4,820,850及4,916,239)、普伐他汀(pravastatin)(参见美国专利4,346,227、4,537,859、4,410,629、5,030,447及5,180,589)、弗伐他汀(fluvastatin)(参见美国专利5,354,772、4,911,165、4,929,437、5,189,164、5,118,853、5,290,946及5,356,896)及阿托伐他汀(atorvastatin)(参见美国专利5,273,995、4,681,893、5,489,691及5,342,952)。于本文中使用的hmg-coa还原酶抑制剂一词，是包括所有药学上可接受的内酯与开环酸形式(即，其中内酯环被打开以形成游离酸)，以及具有hmg-coa还原酶抑制活性的化合物的盐与酯形式，因此，这种盐、酯、开放酸及内酯形式的利用，被包含在本发明的范围内。
[0265]“异戊二烯基-蛋白质转移酶抑制剂”是指一种化合物，其会抑制任一种或任何组合的异戊二烯基-蛋白质转移酶，包括法呢基蛋白质转移酶(fptase)、香叶草基香叶草基-蛋白质转移酶类型ⅰ(ggptase
‑ⅰ
)及香叶草基香叶草基-蛋白质转移酶类型
‑ⅱ
(ggptase
‑ⅱ
，也称为rab ggptase)。
[0266]
法呢基蛋白质转移酶抑制剂的实例包括sarasartm(4-[2-[4-[(11r)-3，10-二溴-8-氯-6，11-二氢-5h-苯并[5，6]环庚[1，2-b]吡啶-11-基-]-1-哌啶基]-2-氧代乙基]-1-哌啶羧酰胺、替皮法尼伯(tipifarnib)等。
[0267]“血管生成抑制剂”是指会抑制新血管形成的化合物，不管机制为何。血管生成抑制剂的实例包括但不限于酪氨酸酶抑制剂，例如酪氨酸酶受体flt-1(vegfr1)与flk-1/kdr(vegfr2)的抑制剂，表皮所衍生、成纤维细胞所衍生或血小板所衍生生长因子的抑制剂，mmp(间质金属蛋白酶)抑制剂、整联蛋白阻断剂、间白血球活素-12、戊聚糖多硫酸盐、环氧化酶抑制剂，包括非类固醇消炎剂(nsaid)，例如阿司匹林与布洛芬(ibuprofen)，以及选择性环氧化酶-2抑制剂，例如塞拉库西比(celecoxib)与罗费库西比(rofecoxib)
[0268]
血管生成抑制剂的其它实例包括但不限于内抑制素、由克拉因(ukrain)、豹蛙酶(ranpirnase)、im862、氨基甲酸5-甲氧基-4-[2-甲基-3-(3-甲基-2-丁烯基)环氧乙烷基]-1-氧螺[2，5]辛-6-基(氯基乙酰基)酯、乙酰基地那林(dinanaline)、5-氨基-1-[[3，5-二氯-4-(4-氯基苯甲酰基)苯基]甲基]-1h-1，2，3-三唑-4-羧酰胺、cm101、角鲨胺、风车子他汀、rpi4610、nx31838、硫酸化甘露戊糖磷酸酯、7，7-(羰基-双[亚氨基-n-甲基-4，2-吡咯并羰基亚氨基[n-甲基-4，2-吡咯]-羰基亚氨基]-双-(1，3-萘二磺酸盐)及3-[(2，4-二甲基吡
咯-5-基)亚甲基]-2-二氢吲哚酮(su5416)。
[0269]
调节或抑制血管生成且也可与葡磷酰胺或其类似物合并使用的其它治疗剂，包括会调节或抑制凝血与血纤维蛋白溶酶作用系统的试剂。会调节或抑制凝血与血纤维蛋白溶酶作用途径的这种试剂的实例，包括但不限于肝素(参见thromb.haemost.80：10-23(1998))，低分子量肝素及羧肽酶u抑制剂(也称为活性凝血酶可活化血纤维蛋白溶酶作用抑制剂[tafia]的抑制剂)。tafia抑制剂的实例已被描述于pct专利wo03/013,526中。
[0270]
激酶抑制剂的实例包括：会抑制细胞表面受体与这些表面受体下游信息转导阶式反应的试剂。这种试剂会抑制细胞增生与生存。其包括egfr的抑制剂(例如吉非汀尼伯(gefitinib)与婀罗提尼伯(erlotinib))、对egfr的抗体(例如c225)、erb-2的抑制剂(例如曲妥单抗(trastuzumab))、igfr的抑制剂、细胞活素受体的抑制剂、met的抑制剂、pi3k的抑制剂(例如ly294002)、丝氨酸/苏氨酸激酶(包括但不限于akt的抑制剂，例如在wo 02/083064、wo 02/083139、wo 02/083140及wo 02/083138中所述那些)、raf酶的抑制剂(例如bay-43-9006)、mek的抑制剂(例如ci-1040与pd-098059)、mtor的抑制剂(例如wyeth cci-779)及c-ab1激酶的抑制剂。其它激酶抑制剂包括会抑制涉及细胞循环的蛋白质的那些。其包括极光体激酶抑制剂、cdk抑制剂(例如黄酮吡啶醇、cyc202、bms387032及极状激酶抑制剂)。这些也包括会干扰细胞循环关卡且通过以使癌细胞对dna伤害剂敏化的试剂。这种试剂包括例如art、atm、chk1及chk2的抑制剂。
[0271]“整联蛋白阻断剂”是指会选择性地拮抗、抑制或中和生理学配位体结合至αvβ3整联蛋白的化合物，会选择性地拮抗、抑制或中和生理学配位体结合至αvβ5整联蛋白的化合物，会拮抗、抑制或中和生理学配位体结合至αvβ3整联蛋白与αvβ5整联蛋白两者的化合物，及会拮抗、抑制或中和经表现于微血管内皮细胞上的特定整联蛋白活性的化合物。此术语也指αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1、α5β1、α6β1及α6β4整联蛋白的拮抗剂。此术语也指αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1、α5β1、α6β1及α6β4整联蛋白的任何组合的拮抗剂。
[0272]
具有抗癌化合物以外的化合物的组合，也被涵盖在本发明方法中。例如，葡磷酰胺或其类似物与ppar-γ(即ppar-gamma)激动剂及ppar-δ(即ppar-delta)激动剂(总称为“ppar激动剂”)的组合，可用于治疗某些恶性病症。ppar-γ与ppar-δ是分别为核过氧化物酶体增生物活化受体γ与δ。ppar-γ于内皮细胞上的表现及其涉及血管生成，已被报告于文献中(参见j.cardiovasc.pharmacol.1998；31：909-913；j.biol.chem.1999；274：9116-9121；invest.ophthalmol vis.sci.2000；41：2309-2317)。最近，ppar-γ激动剂已被证实会抑制活体外对vegf的血管生成响应；曲格列酮(troglitazone)与罗西格列酮(rosiglitazone)顺丁烯二酸酯会抑制视网膜新血管生成作用在老鼠中的发展(arch.ophthamol.2001；119：709-717)。ppar-γ激动剂与ppar-γ/α激动剂的实例包括但不限于噻唑啶二酮(例如drf2725、cs-011、曲格列酮(troglitazone)、罗西格列酮(rosiglitazone)及匹格列酮(pioglitazone))、非诺贝特(fenofibrate)、吉非贝齐(gemfirozil)、安妥明(clofirate)。
[0273]
葡磷酰胺或其类似物也可并用一或多种固有多重抗药性(mdr)的抑制剂给药，特别是与高程度输送子蛋白质表现有关联的mdr。这种mdr抑制剂包括p-糖蛋白(p-gp)的抑制剂，例如ly335979、xr9576、oc144-093、r101922、vx853及psc833(伐司朴达(valspodar))。
[0274]
其它抗癌剂也包括缺氧可活化剂(例如替拉扎明(tirapazamine))、蛋白酶体抑制
剂(例如乳胱氨酸与博替左米(bortezomib))、泛素抑制剂、hdm2抑制剂、tnf活化剂、bub-r抑制剂、cenp-e抑制剂及干扰素α。
[0275]
目前已有超过200例的临床试验评估dna损伤剂(化学治疗,简称化疗)与免疫检查点抑制剂(免疫疗法,简称免疗)的组合治疗临床疗效。尤其是在过去的二年内，化疗/免疗临床试验的数量大幅度增长。已有报道阐述组合使用具有免疫上调活性的dna损伤剂与免疫检查点抑制剂拥有明显临床益处。同时由于二类药物不同的毒性特征，组合治疗已被证明非常安全。
[0276]
化疗/免疫治疗的设计原理是先使用dna损伤剂(化疗药物)增强癌细胞的免疫活性，然后再使用免疫疗法,会使免疫疗法抗癌效果大幅度增长。当考虑这种优越的组合治疗时，最关键的是必须选择具有免疫上调功能的dna损伤剂。
[0277]
dna损伤剂是通过以下机制上调癌细胞的免疫活性：
[0278]
1)诱导免疫活性细胞死亡(icd)；
[0279]
2)产生炎性肿瘤微环境(tme)；
[0280]
3)通过增加突变负载(开放阅读框突变和dna修复突变或缺陷)增加新抗原的产生数量和种类；
[0281]
4)增加抗原表达。
[0282]
为此，为了大幅度增加组合疗效，采用的常规策略有：
[0283]
1)选择能诱导免疫活性细胞死亡(ice)的dna损伤剂；
[0284]
2)选择能保护免疫反应性t细胞群的最佳dna损伤剂的剂量；
[0285]
3)选择最佳的给药时间和顺序；
[0286]
因为葡磷酰胺通过诱导dna损伤增加癌细胞的免疫活性，从而上调癌细胞对免疫检查点抑制剂的敏感性及抗癌治疗的有效性。在同源重组dna修复缺陷的癌症病例中，预计这种组合治疗会产生安全而且更有效的抗肿瘤疗效。原因如下:
[0287]
1)葡磷酰胺诱导更多dna损伤(已有实验证据表明同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、非同源末端连接酶受损、碱基切除修复酶受损、错配修复酶受损、范康尼贫血途径修复酶因受损而产生修复缺陷的细胞对葡磷酰胺敏感，而且同源重组dna修复缺陷细胞对葡磷酰胺更为敏感)，从而导致更重的突变负载；
[0288]
2)同源重组dna修复缺陷本身就已大幅度增加了肿瘤突变负载。已有临床数据表明肿瘤突变负载量与免疫疗法有效性呈正相关。突变负载越重，免疫疗法越有效；
[0289]
3)增加的肿瘤浸润淋巴细胞(til)；
[0290]
4)增加的淋巴细胞引诱剂；
[0291]
5)影响pd-l1表达。
[0292]
综上，葡磷酰胺和免疫疗法组合可以更有效治疗同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、非同源末端连接酶受损、碱基切除修复酶受损、错配修复酶受损、范康尼贫血途径修复酶受损的的癌症患者。
[0293]
免疫治疗药物包括免疫检查点抑制剂，例如pd-1抑制剂(例如keytruda)，pd-l1抑制剂(例如tecentriq，imfinzi)以及ctla4抑制剂(例如yervoy)。
[0294]
发明的作用与效果
[0295]
通过实验证明，葡磷酰胺或其类似物对于特定基因变异的细胞具有特异性的抑制
作用，具体而言就是dna修复酶受损的细胞，该细胞为至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因。
附图说明
[0296]
图1是本发明的实施例中第一批实验时的aa8细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线图；
[0297]
图2是本发明的实施例中第一批实验时的uv41细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线图；
[0298]
图3是本发明的实施例中第二批实验时的aa8细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线图；
[0299]
图4是本发明的实施例中第二批实验时的em9细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线图；
[0300]
图5是本发明的实施例中第二批实验时的uv5细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线图；
[0301]
图6是本发明的实施例中第二批实验时的uv20细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线图；
[0302]
图7是本发明的实施例中第二批实验时的uv24细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线图；
[0303]
图8是本发明的实施例中第二批实验时的uv135细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线图；
[0304]
图9是本发明的实施例中第一批实验时的aa8细胞在施加不同浓度的顺铂后的细胞存活率曲线图；
[0305]
图10是本发明的实施例中第一批实验时的uv41细胞在施加不同浓度的顺铂后的细胞存活率曲线图
[0306]
图11是本发明的实施例中第二批实验时的aa8细胞在施加不同浓度的顺铂后的细胞存活率曲线图；
[0307]
图12是本发明的实施例中第二批实验时的em9细胞在施加不同浓度的顺铂后的细胞存活率曲线图；
[0308]
图13是本发明的实施例中第二批实验时的uv5细胞在施加不同浓度的顺铂后的细胞存活率曲线图；
[0309]
图14是本发明的实施例中第二批实验时的uv20细胞在施加不同浓度的顺铂后的细胞存活率曲线图；
[0310]
图15是本发明的实施例中第二批实验时的uv24细胞在施加不同浓度的顺铂后的
细胞存活率曲线图；
[0311]
图16是本发明的实施例中第二批实验时的uv135细胞在施加不同浓度的顺铂后的细胞存活率曲线图；
[0312]
图17是本发明的实施例中第一批实验时的uv41细胞和aa8细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线比较图；
[0313]
图18是本发明的实施例中第二批实验时的em9细胞和aa8细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线比较图；
[0314]
图19是本发明的实施例中第二批实验时的uv5细胞和aa8细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线比较图；
[0315]
图20是本发明的实施例中第二批实验时的uv20细胞和aa8细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线比较图；
[0316]
图21是本发明的实施例中第二批实验时的uv24细胞和aa8细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线比较图；
[0317]
图22是本发明的实施例中第二批实验时的uv135细胞和aa8细胞在施加不同浓度的葡磷酰胺后的细胞存活率曲线比较图；
[0318]
图23是本发明的实施例中第一批实验时的uv41细胞和aa8细胞在施加不同浓度的顺铂后的细胞存活率曲线比较图；
[0319]
图24是本发明的实施例中第二批实验时的em9细胞和aa8细胞在施加不同浓度的顺铂后的细胞存活率曲线比较图；
[0320]
图25是本发明的实施例中第二批实验时的uv5细胞和aa8细胞在施加不同浓度的顺铂后的细胞存活率曲线比较图；
[0321]
图26是本发明的实施例中第二批实验时的uv20细胞和aa8细胞在施加不同浓度的顺铂后的细胞存活率曲线比较图；
[0322]
图27是本发明的实施例中第二批实验时的uv24细胞和aa8细胞在施加不同浓度的顺铂后的细胞存活率曲线比较图；
[0323]
图28是本发明的实施例中第二批实验时的uv135细胞和aa8细胞在施加不同浓度的顺铂后的细胞存活率曲线比较图；
[0324]
图29为mcf-7异种移植瘤模型荷瘤鼠在给予gluf后的体重随时间变化数据图。数据点代表各组平均体重，误差线代表标准误差(sem)；
[0325]
图30为mcf-7细胞移植到balb/c裸小鼠后，基于开始给药时动物体重计算得出的相对体重随时间的变化数据图。数据点代表各组平均体重变化百分比，误差线代表标准误差(sem)；
[0326]
图31为mcf-7异种移植瘤模型荷瘤鼠在给予gluf后的肿瘤生长曲线图。数据点代表各组平均肿瘤体积，误差线代表标准误差(sem)；
[0327]
图32为rpmi-8226异种移植瘤模型荷瘤鼠在给予gluf后的体重随时间变化数据图。数据点代表各组平均体重，误差线代表标准误差(sem)。注：给药14天结束后，观察至day 28或肿瘤平均体积达到2000mm3；
[0328]
图33为rpmi-8226细胞移植到cb-17 scid小鼠后，基于开始给药时动物体重计算得出的相对体重随时间的变化数据图。数据点代表各组平均体重变化百分比，误差线代表
标准误差(sem)。注：给药14天结束后，观察至day 28或肿瘤平均体积达到2000mm3；
[0329]
图34为rpmi-8226异种移植瘤模型荷瘤鼠在给予gluf后的肿瘤生长曲线。数据点代表各组平均肿瘤体积，误差线代表标准误差(sem)。注：给药14天结束后，观察至day28或肿瘤平均体积达到2000mm3；
[0330]
图35为sk-mel-28异种移植瘤模型荷瘤鼠在给予gluf后的体重变化。数据点代表各组平均体重，误差线代表标准误差(sem)；
[0331]
图36为rpmi-8226细胞移植到balb/c裸小鼠后，基于开始给药时动物体重计算得出的相对体重随时间的变化数据图。数据点代表各组平均体重变化百分比，误差线代表标准误差(sem)；
[0332]
图37为sk-mel-28异种移植瘤模型荷瘤鼠在给予gluf后的肿瘤生长曲线。数据点代表各组平均肿瘤体积，误差线代表标准误差(sem)。
具体实施方式
[0333]
一.离体细胞实验
[0334]
1、材料和方法
[0335]
1.1、材料与仪器
[0336]
aa8细胞株，购自美国模式培养物集存库(american type culture collection)(atcc#crl-1859)；
[0337]
uv41细胞株，购自美国模式培养物集存库(atcc#crl-1860)；
[0338]
em9细胞株，购自美国模式培养物集存库(atcc#crl-1861)；
[0339]
uv5细胞株购自美国模式培养物集存库(atcc#crl-1865)；
[0340]
uv20细胞株，购自美国模式培养物集存库(atcc#crl-1862)；
[0341]
uv24细胞株，购自美国模式培养物集存库(atcc#crl-1866)；
[0342]
uv135细胞株购自美国模式培养物集存库(atcc#crl-1867)；
[0343]
mem-alpha medium培养基，购自fisher试剂公司(fisher#12-561-056)；
[0344]
胎牛血清(fetal bovine serum，简称fbs)，购自thermofisher公司(thermofisher#26140-079)；
[0345]
青霉素链霉素溶液-双抗penn-step，购自hyclone公司(hyclone#sv30010)；
[0346]
alamarblue试剂，购自thermofisher公司(thermofisher#dal1100)。
[0347]
1.2、测试化合物
[0348]
化合物溶解溶剂测试浓度(m/l)稀释溶液葡磷酰胺dmso0.015-1000含0.5％dmso的培养基溶液顺铂dmso0.003-200含0.5％dmso的培养基溶液
[0349]
1.3、试验条件
[0350]
1.3.1、细胞培养
[0351]
将aa8和uv41细胞在具有10％fbs和1％penn-strep的mem-alpha培养基中培养。
[0352]
1.3.2、实验条件
[0353]
为了进行增殖测定，将aa8和em9、uv5、uv20、uv24、uv41、uv135细胞以4000个细胞/孔在96孔、黑色、透明底部组织培养板中接种。细胞在37℃和5％co2下培养过夜。然后将细
胞用1.2节中的化合物处理72小时。每孔培养基的总体积为200ul。处理后，使用alamarblue荧光定量方法测定细胞增殖率。alamarblue测定是基于检测荧光和比色的增长来检测代谢活性的。具体而言，alamarblue试剂的活性成分刃天青是蓝色的并且几乎不发荧光。在进入细胞后，刃天青被还原为试卤灵，这是一种红色和高度荧光的化合物。持续的细胞生长维持着还原性的环境，因此增加了细胞周围的介质的整体荧光和颜色。由于实验室限制，本次实验一共进行了两批，第一批分别是aa8和uv41两个细胞的实验，以及第二批分别是aa8和em9、uv5、uv20、uv24、uv135六个细胞的实验，所以一共有8组数据。
[0354]
实验显示alamarblue试剂的荧光强度与细胞数量成正比。为了进行alamarblue测定，将20ul alamarblue试剂添加到每个孔并在37℃培养器中孵育4小时。使用biotek synergy tm
2酶标仪在530nm激发和590nm发射下测量荧光强度。
[0355]
2、实验结果。所得的实验数据如下表1-表8所示。
[0356]
表1、葡磷酰胺对aa8细胞的增殖实验数据**
[0357][0358]
**注释，该数据为第一批的实验数据
[0359]
表2、葡磷酰胺对uv41细胞的增殖实验数据**
[0360][0361]
**注释，该数据为第一批的实验数据
[0362]
表3、葡磷酰胺对aa8细胞的增殖实验数据
#
[0363][0364]
#注释，该数据为第二批的实验数据
[0365]
表4、葡磷酰胺对em9细胞的增殖实验数据
#
[0366][0367]
#注释，该数据为第二批的实验数据
[0368]
表5、葡磷酰胺对uv5细胞的增殖实验数据
#
[0369][0370]
#注释，该数据为第二批的实验数据，
[0371]
*该数据被作为坏值剔除。
[0372]
表6、葡磷酰胺对uv20细胞的增殖实验数据
#
[0373][0374]
#注释，该数据为第二批的实验数据
[0375]
表7、葡磷酰胺对uv24细胞的增殖实验数据
#
[0376][0377][0378]
#注释，该数据为第二批的实验数据
[0379]
表8、葡磷酰胺对uv135细胞的增殖实验数据
#
[0380][0381]
#注释，该数据为第二批的实验数据
[0382]
表9、顺铂对aa8细胞的增殖实验数据**
[0383][0384]
**注释，该数据为第一批的实验数据*该组数据为坏值，被踢除不进行统计计算。
[0385]
表10、顺铂对uv41细胞的增殖实验数据**
[0386][0387][0388]
**注释，该数据为第一批的实验数据
[0389]
表11、顺铂对aa8细胞的增殖实验数据
#
[0390][0391]
#注释，该数据为第二批的实验数据
[0392]
表12、顺铂对em9细胞的增殖实验数据
#
[0393][0394]
#注释，该数据为第二批的实验数据。
[0395]
表13、顺铂对uv5细胞的增殖实验数据
#
[0396][0397]
#注释，该数据为第二批的实验数据
[0398]
表14、葡磷酰胺对uv20细胞的增殖实验数据
#
[0399][0400][0401]
#注释，该数据为第二批的实验数据
[0402]
表15、葡磷酰胺对uv24细胞的增殖实验数据
#
[0403][0404]
#注释，该数据为第二批的实验数据
[0405]
表16、葡磷酰胺对uv135细胞的增殖实验数据
#
[0406][0407]
#注释，该数据为第二批的实验数据
[0408]
3、数据分析
[0409]
细胞增殖试验的每个浓度要平行做三次。利用graphpadprism软件分析实验数据。在没有化合物的情况下，荧光强度(ft)被定义为100％。在没有细胞的情况下，荧光强度(fb)被定义为0％。根据以下公式计算在每个化合物存活的细胞百分比％＝(f-fb)/(ft-fb)，其中f＝在该化合物的存在下的荧光强度。
[0410]
使用非线性回归分析，将化合物的浓度-存活细胞百分比的实验数据即响应曲线绘制成图，细胞成活率为y轴,化合物的浓度值为x轴，50％最大活性对应的浓度定为ic
50
，如图1至图16所示。
[0411]
最终求得葡磷酰胺和顺铂对aa8、uv41细胞的ic
50
值如下表17。
[0412]
表17、葡磷酰胺ast1001和顺铂(cisplatin)对aa8、uv41细胞的ic
50
值
[0413]
[0414][0415]
4、实验结论
[0416]
4.1、aa8细胞与突变的uv41细胞
[0417]
uv41细胞株是cho-aa8细胞系的衍生物，来源于aa8的紫外敏感系，该细胞株是dnaercc4/xpf基因突变导致的同源重组dna修复酶受损和核苷酸切除修复酶受损的细胞株。
[0418]
有文献表明，uv41细胞株相对于aa8而言，是存在核苷酸切除修复酶缺陷的细胞，其对大体积加合物致突变物敏感，属于切除修复补充组4，uv41对dna交联剂极为敏感(参见thompson lh,et al.repair of dna adducts in asynchronous cho cells and the role of repair in cell killing and mutation induction in synchronous cells treated with 7-bromomethylbenz[a]anthracene.somatic cell mol.genet.10:183-194,1984.pubmed:6584989；thompson lh,et al.genetic diversity of uv-sensitive dna repair mutants of chinese hamster ovary cells.proc.natl.acad.sci.usa 78:3734-3737,1981.pubmed:6943579；hoy ca,et al.defective dna cross-link removal in chinese hamster cell mutants hypersensitive to bifunctional alkylating agents.cancerres.45:1737-1743,1985.pubmed:3919945；busch d,et al.summary of complementation groups of uv-sensitive cho cell mutants isolated by large-scale screening.mutagenesis 4:349-354,1989.pubmed:2687628；bessho t,et al.initiation of dna interstrand cross-link repair in humans:the nucleotide excision repair system makes dual incisions 5"to the cross-linked base and removes a 22-to 28-nucleotide-long damage-free strand.mol.cell.biol.17:6822-6830,1997.pubmed:9372913；thompson lh,et al.hypersensitivity to mutation and sister-chromatid-exchange induction in cho cell mutants defective in incising dna containing uv lesions.somatic cell genet.8:759-773,1982.pubmed:7163954)。
[0419]
uv41细胞的dna修复酶受损能导致brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、
of repair in cell killing and mutation induction in synchronous cells treated with 7-bromomethylbenz[a]anthracene.somatic cell mol.genet.10:183-194,1984.pubmed:6584989；thompson lh,et al.genetic diversity of uv-sensitive dna repair mutants of chinese hamster ovary cells.proc.natl.acad.sci.usa 78:3734-3737,1981.pubmed:6943579；hoy ca,et al.defective dna cross-link removal in chinese hamster cell mutants hypersensitive to bifunctional alkylating agents.cancer res.45:1737-1743,1985.pubmed:3919945；busch d,et al.summary of complementation groups of uv-sensitive cho cell mutants isolated by large-scale screening.mutagenesis 4:349-354,1989.pubmed:2687628；bessho t,et al.initiation of dna interstrand cross-link repair in humans:the nucleotide excision repair system makes dual incisions 5"to the cross-linked base and removes a 22-to 28-nucleotide-long damage-free strand.mol.cell.biol.17:6822-6830,1997.pubmed:9372913；thompson lh,et al.hypersensitivity to mutation and sister-chromatid-exchange induction in cho cell mutants defective in incising dna containing uv lesions.somatic cell genet.8:759-773,1982.pubmed:7163954；thompson lh,et al.ascreening method for isolating dna repair-deficient mutants of cho cells.somatic cell genet.6:391-405,1980.pubmed:7404270；hay,r.j.,caputo,j.l.,and macy,m.l.,eds.(1992),atcc quality control methods for cell lines.2nd edition,published by atcc；caputo,j.l.,biosafety procedures in cell culture.j.tissue culture methods 11:223-227,1988；fleming,d.o.,richardson,j.h.,tulis,j.j.and vesley,d.,(1995)laboratory safety:principles and practice.second edition,asm press,washington,dc；biosafety in microbiological and biomedical laboratories,5th ed.hhs.u.s.department of health and human services,centers for disease control and prevention.washington dc:u.s.government printing office；2007.)。
[0432]
uv20细胞的dna修复酶受损能导致brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变。
[0433]
通过对比表17的ic
50
值可知，葡磷酰胺对于正常的aa8细胞和aa8细胞发生基因突变的后的uv20细胞具有选择性抑制作用，对正常细胞的抑制活性ic
50
为16μm，对突变的细胞uv20(癌细胞或肿瘤细胞)却具有高达16倍即1μm的抑制活性。如图20所示，可知葡磷酰胺对具有上述基因突变的癌细胞具有选择性的抑制作用，对比作为细胞毒性药物的顺铂，如图26所示，进一步体现了葡磷酰胺的相对安全性，和较小的毒性。
[0434]
4.5、aa8细胞与突变的uv24细胞
[0435]
uv24细胞株是cho-aa8细胞系的衍生物，来源于aa8的紫外敏感系，该细胞株是dna ercc3/xpb基因突变导致的核苷酸切除修复酶受损的细胞株。
[0436]
有文献表明，uv24细胞株相对于aa8而言，是存在核苷酸切除修复酶缺陷的细胞，其对大体积加合物致突变物敏感，属于切除修复补充组3(参见thompson lh,et al.repair of dna adducts in asynchronous cho cells and the role of repair in cell killing andmutation induction in synchronous cells treated with 7-bromomethylbenz[a]anthracene.somatic cell mol.genet.10:183-194,1984.pubmed:6584989；thompson lh,et al.genetic diversity of uv-sensitive dna repair mutants of chinese hamster ovary cells.proc.natl.acad.sci.usa 78:3734-3737,1981.pubmed:6943579；hoy ca,et al.defective dna cross-link removal in chinese hamster cell mutants hypersensitive to bifunctional alkylating agents.cancer res.45:1737-1743,1985.pubmed:3919945；busch d,et al.summary of complementation groups of uv-sensitive cho cell mutants isolated by large-scale screening.mutagenesis 4:349-354,1989.pubmed:2687628；reardon jt,et al.isolation and characterization of two human transcription factor iih(tfiih)-related complexes:ercc2/cakand tfiih.proc.natl.acad.sci.usa 93:6482-6487,1996.pubmed:8692841；thompson lh,et al.hypersensitivity to mutation and sister-chromatid-exchange induction in cho cell mutants defective in incising dna containinguv lesions.somatic cell genet.8:759-773,1982.pubmed:7163954；.cellular responses to dna damage.new york:liss；1983.；bessho t,et al.initiation of dna interstrand cross-link repair in humans:the nucleotide excision repair system makes dual incisions 5"to the cross-linked base and removes a 22-to 28-nucleotide-long damage-free strand.mol.cell.biol.17:6822-6830,1997.pubmed:9372913；hay,r.j.,caputo,j.l.,and macy,m.l.,eds.(1992),atcc quality control methods for cell lines.2nd edition,published by atcc.；caputo,j.l.,biosafety procedures in cell culture.j.tissue culture methods 11:223-227,1988.；fleming,d.o.,richardson,j.h.,tulis,j.j.and vesley,d.,(1995)laboratory safety:principles and practice.second edition,asm press,washington,dc..)。
[0437]
uv24细胞的dna修复酶受损能导致brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变。
[0438]
通过对比表17的ic
50
值可知，葡磷酰胺对于正常的aa8细胞和aa8细胞发生基因突变的后的uv24细胞具有选择性抑制作用，对正常细胞的抑制活性ic
50
为16μm，对突变的细胞
uv24(癌细胞或肿瘤细胞)却有跟高的抑制活性。如图21所示，可知葡磷酰胺对具有上述基因突变的癌细胞具有选择性的抑制作用，对比作为细胞毒性药物的顺铂，如图27所示，进一步体现了葡磷酰胺的相对安全性，和较小的毒性。
[0439]
4.6、aa8细胞与突变的uv135细胞
[0440]
uv135细胞株是cho-aa8细胞系的衍生物，来源于aa8的紫外敏感系，该细胞株是dna ercc5/xpg基因突变导致的核苷酸切除修复酶受损的细胞株。
[0441]
有文献表明，uv135细胞株相对于aa8而言，是存在核苷酸切除修复酶缺陷的细胞，其对大体积加合物致突变物敏感，属于切除修复补充组5(参见thompson lh,et al.repair of dna adducts in asynchronous cho cells and the role of repair in cell killing and mutation induction in synchronous cells treatedwith 7-bromomethylbenz[a]anthracene.somatic cell mol.genet.10:183-194,1984.pubmed:6584989；thompson lh,et al.genetic diversity of uv-sensitive dna repair mutants of chinese hamster ovary cells.proc.natl.acad.sci.usa78:3734-3737,1981.pubmed:6943579；hoy ca,et al.defective dna cross-linkremoval in chinese hamster cell mutants hypersensitive to bifunctional alkylating agents.cancer res.45:1737-1743,1985.pubmed:3919945；buschd,et al.summary ofcomplementation groups of uv-sensitive cho cell mutants isolatedby large-scale screening.mutagenesis 4:349-354,1989.pubmed:2687628；cellular responses to dna damage.new york:liss；1983.；bessho t,et al.initiation of dna interstrand cross-link repair in humans:the nucleotide excision repair systemmakes dual incisions 5"to the cross-linkedbase and removes a 22-to 28-nucleotide-long damage-free strand.mol.cell.biol.17:6822-6830,1997.pubmed:9372913；reardon jt,et al.isolation and characterization of two human transcription factor iih(tfiih)-related complexes:ercc2/cakand tfiih.proc.natl.acad.sci.usa 93:6482-6487,1996.pubmed:8692841；thompson lh,et al.hypersensitivity to mutation and sister-chromatid-exchange induction in cho cell mutants defective in incising dna containing uv lesions.somatic cell genet.8:759-773,1982.pubmed:7163954..)。
[0442]
uv135细胞的dna修复酶受损能导致brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变。
[0443]
通过对比表17的ic
50
值可知，葡磷酰胺对于正常的aa8细胞和aa8细胞发生基因突变的后的uv135细胞具有选择性抑制作用，对正常细胞的抑制活性ic
50
为16μm，对突变的细胞uv135(癌细胞或肿瘤细胞)却有相近的抑制活性，如图22所示，如图28所示，进一步体现
了葡磷酰胺的相对安全性，和较小的毒性。
[0444]
4.7、总结
[0445]
也就是说，葡磷酰胺对于特定基因变异的细胞具有特异性的抑制作用，具体而言就是dna修复酶受损的细胞，该细胞为至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变的细胞，因此葡磷酰胺或其类似物能治疗dna修复受损的肿瘤、癌症，能用含葡磷酰胺或其类似物的制剂作为治疗dna修复受损的患者的肿瘤、癌症的药品，葡磷酰胺或其类似物能用于治疗dna修复酶受损的肿瘤、癌症，含葡磷酰胺或其类似物的治疗dna修复酶受损的患者的肿瘤、癌症的药物组合物被本发明所公开，葡磷酰胺或其类似物在制备治疗dna修复酶受损的肿瘤、癌症的药品中的应用、含有葡磷酰胺或其类似物与免疫检查点抑制剂的免疗组合治疗药物、治疗方法也被本发明所披露。
[0446]
更进一步，葡磷酰胺，是由一分子具有直接烷化作用的异磷酰胺氮芥与一分子葡萄糖通过糖苷键相连而形成的，其在钠依赖性的葡萄糖跨膜转运蛋白saat1的作用下转运进入肿瘤细胞，然后通过水解释放异磷酰胺氮芥而发挥活性，也就是说葡磷酰胺是异磷酰胺的前药。由于癌细胞的生长和增殖过程较一般的正常细胞更为旺盛，其对葡萄糖等的利用和需求也更多，也就是说，肿瘤细胞具有对葡萄糖的极高利用的独特特性(葡萄糖转运载体基因表达高)，这会导致患者体内的肿瘤情况的葡磷酰胺的局部浓度得到富集，即能选择性地将葡磷酰胺靶向至肿瘤部位而提高肿瘤被杀灭的效果。
[0447]
所以，葡磷酰胺作为靶向性前药，只有在葡萄糖转运载体和葡萄糖苷酶表达高的癌细胞中才能释放更多的具有杀伤力的毒素(异磷酰胺氮芥)，而在正常细胞中，由于葡萄糖转运载体低或无表达，前药无法释放毒素，所以无活性或毒性低。
[0448]
二.动物实验
[0449]
本试验使用mcf-7细胞balb/c裸小鼠皮下移植瘤模型评价受试化合物gluf的体内抗肿瘤作用。
[0450]
本试验使用rpmi-8226细胞cb-17 scid小鼠皮下移植肿瘤模型评价受试化合物gluf的体内抗肿瘤作用。
[0451]
本试验使用sk-mel-28细胞balb/c裸小鼠皮下移植肿瘤模型评价受试化合物gluf的体内抗肿瘤作用。
[0452]
供试品
[0453]
名称：ast-1001(glufosfamide，简写为gluf)
[0454]
提供单位：bellen chemistry co.ltd(北京六合宁远科技有限公司)
[0455]
批号：ae-050402
[0456]
性状描述:粉末
[0457]
分子量:383.16
[0458]
包装:5克/瓶
[0459]
保存条件：-20℃
[0460]
1、实验动物
[0461]
balb/c裸小鼠，6～8周龄，雌性，体重18～22克，24只(不包括分组剩余鼠)，供应商：上海灵畅生物科技有限公司；
[0462]
cb-17 scid小鼠，6～8周龄，雌性，体重18～22克，24只(不包括分组剩余鼠)，供应商：上海灵畅生物科技有限公司；
[0463]
2、实验方法与步骤
[0464]
2.1、细胞培养
[0465]
mcf-7细胞培养方法为体外贴壁培养，培养条件为emem培养基中加10％胎牛血清，100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素，37℃ 5％co2培养。一周常规传代2次。当细胞维持在指数增长期时，收取细胞，计数，接种。
[0466]
rpmi-8226细胞培养方法为体外贴壁培养，培养条件为rpmi 1640培养基中加10％胎牛血清，100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素，37℃ 5％co2培养。一周常规传代2次。当细胞维持在指数增长期时，收取细胞，计数，接种。
[0467]
sk-mel-28细胞培养方法为体外贴壁培养，培养条件为emem培养基中加10％胎牛血清，100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素，37℃ 5％co2培养。一周常规传代2次。当细胞维持在指数增长期时，收取细胞，计数，接种。
[0468]
2.2、肿瘤细胞接种
[0469]
将0.2ml 10
×
106个mcf-7细胞皮下接种于每只balb/c裸小鼠的右后背(pbs:matrigel＝1:1)。肿瘤平均体积达到161mm3时开始分组给药(见下表18)。
[0470]
表18、mcf-7细胞皮下接种到balb/c裸小鼠的分组给药情况
[0471][0472]
注：n:每组小鼠数目
[0473]
将0.2ml 10
×
106个rpmi-8226细胞皮下接种于每只cb-17 scid小鼠裸小鼠的右后背(pbs:matrigel＝1:1)。肿瘤平均体积达到153mm3时开始分组给药(见下表19)。
[0474]
表19、rpmi-8226细胞皮下接种到cb-17 scid小鼠裸小鼠的分组给药情况
[0475]
组别na化合物治疗剂量(mg/kg)给药体积参数(μl/g)给药途径给药频次b18溶剂对照
‑‑
10腹腔每天一次*14天28gluf3010腹腔每天一次*14天38gluf10010腹腔每周两次*2周
[0476]
将0.2ml 10
×
106个sk-mel-28细胞皮下接种于每只balb/c裸小鼠的右后背(pbs:matrigel＝1:1)。肿瘤平均体积达到181mm3时开始分组给药(见下表20)。
[0477]
表20、sk-mel-28细胞皮下接种到balb/c裸小鼠的分组给药情况
[0478]
组别na化合物治疗剂量(mg/kg)给药体积参数(μl/g)给药途径给药频次
18溶剂对照
‑‑
10腹腔每天一次*14天28gluf3010腹腔每天一次*14天38gluf10010腹腔每周两次*2周
[0479]
2.3、受试物的配制
[0480]
受试药物的配制条件，如下表21所示。
[0481]
表21、不同受试药物的配制方法
[0482][0483]
注：在给药前需要轻轻将药物充分混匀。
[0484]
2.4、肿瘤测量和实验指标
[0485]
实验指标是考察肿瘤生长是否被抑制、延缓或治愈。每周三次用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：v＝0.5a
×
b2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。
[0486]
化合物的抑瘤疗效用tgi(％)或相对肿瘤增殖率t/c(％)评价。tgi(％)，反映肿瘤生长抑制率。tgi(％)的计算：tgi(％)＝[(1-(某处理组给药结束时平均瘤体积－该处理组开始给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积－溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)]
×
100％。相对肿瘤增殖率t/c(％)的计算：t/c％＝某处理组给药结束时平均瘤体积/溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积
×
100％。
[0487]
在实验结束后安乐死动物并测量肿瘤重量。
[0488]
3、结果与统计分析
[0489]
3.1、使用mcf-7细胞balb/c裸小鼠皮下移植瘤模型评价受试化合物gluf的体内抗肿瘤作用的试验。
[0490]
3.1.1、统计分析
[0491]
统计分析，包括每个组的每个时间点的肿瘤体积的平均值和标准误差(sem)(具体数据见表22)。该实验于给药开始14天后结束，因此基于该天的数据进行统计学分析评估组间差异。三组或多组间比较用one-way anova进行统计分析。用graphpad prism 5.0进行所有数据分析。p《0.05认为有显著性差异。
[0492]
肿瘤体积
[0493]
mcf-7细胞异种移植瘤balb/c裸小鼠在给予gluf治疗后各组肿瘤体积变化如表22所示。
[0494]
表22、mcf-7细胞异种移植瘤balb/c裸小鼠后，各组不同时间点的瘤体积数据
[0495][0496]
注:a.平均值
±
sem；b.给药后天第7天前给药组(100mg/kg)共有2只小鼠死亡
[0497]
3.1.2、实验结果
[0498]
死亡率、发病率及体重变化情况
[0499]
实验期间，gluf 100mg/kg剂量组有4只小鼠在给药第6天至第11天均出现较明显的体重下降，其中2只在给药第7天死亡。gluf 30mg/kg剂量组有1只小鼠在给药第14天出现较为明显的体重下降。
[0500]
gluf对荷瘤balb/c裸小鼠的体重影响如图29和图30所示。
[0501]
肿瘤生长曲线
[0502]
肿瘤生长曲线如图31所示。
[0503]
抗肿瘤药效评价指标
[0504]
表23、gluf对mcf-7皮下移植瘤模型的抑瘤药效评价(day 14)结果
[0505]
组别肿瘤体积(mm3)at/c％tgi％p值(vs vehicle)vehicle926
±
60
‑‑‑‑‑‑
gluf(30mg/kg)847
±
6591.410.4＞0.05gluf(100mg/kg)768
±
5182.920.7＞0.05
[0506]
注：a.平均值
±
sem；b.p值采用one-wayanova法计算
[0507]
3.2、使用rpmi-8226细胞cb-17 scid小鼠皮下移植肿瘤模型评价受试化合物gluf的体内抗肿瘤作用的试验
[0508]
3.2.1、统计分析
[0509]
统计分析，包括每个组的每个时间点的肿瘤体积的平均值和标准误差(sem)(具体数据见表24)。该实验于给药开始14天后停止给药，观察至第28天结束(溶剂对照组在第23天因肿瘤平均体积大于2000mm3，按iacuc动物福利规定进行安乐死)。因此基于第14天的数据进行统计学分析评估组间差异。三组或多组间比较用one-way anova进行统计分析。用graphpad prism 5.0进行所有数据分析。p《0.05认为有显著性差异。
[0510]
肿瘤体积
[0511]
rpmi-8226细胞异种移植瘤cb-17 scid小鼠在给予gluf治疗后各组肿瘤体积变化如表24所示。
[0512]
表24、rpmi-8226细胞异种移植瘤cb-17 scid小鼠后，各组不同时间点的瘤体积
[0513][0514]
注:a.平均值
±
sem
[0515]
3.2.2实验结果
[0516]
死亡率、发病率及体重变化情况
[0517]
实验期间，gluf 30mg/kg和100mg/kg剂量组给药期间均未出现体重明显下降现象。
[0518]
gluf对荷瘤cb-17 scid小鼠的体重影响如图32和图33所示。
[0519]
肿瘤生长曲线
[0520]
肿瘤生长曲线如图34所示。
[0521]
抗肿瘤药效评价指标
[0522]
表25、gluf对rpmi-8226皮下移植瘤模型的抑瘤药效评价(day 14)
[0523]
组别肿瘤体积(mm3)at/c％tgi％p值b(vs vehicle)vehicle1085
±
134
‑‑‑‑‑‑
gluf(30mg/kg)412
±
5338.072.4＜0.001gluf(100mg/kg)338
±
2631.180.1＜0.001
[0524]
注：a.平均值
±
sem；b.p值采用one-way anova法计算
[0525]
3.3使用sk-mel-28细胞balb/c裸小鼠皮下移植肿瘤模型评价受试化合物gluf的体内抗肿瘤作用的试验。
[0526]
3.3.1统计分析
[0527]
统计分析，包括每个组的每个时间点的肿瘤体积的平均值和标准误差(sem)(具体数据见表26)。该实验于给药开始14天后结束，因此基于该天的数据进行统计学分析评估组间差异。三组或多组间比较用one-way anova进行统计分析。用graphpad prism 5.0进行所有数据分析。p《0.05认为有显著性差异。
[0528]
抗肿瘤药效评价指标
[0529]
表26、gluf对sk-mel-28皮下移植瘤模型的抑瘤药效评价(day 14)
[0530]
组别肿瘤体积(mm3)at/c％tgi％p值b(vs vehicle)vehicle715
±
68
‑‑‑‑‑‑
gluf(30mg/kg)603
±
5684.221.0＞0.05gluf(100mg/kg)563
±
4578.728.5＞0.05
[0531]
注：a.平均值
±
sem；b.p值采用one-way anova法计算
[0532]
3.3.2实验结果
[0533]
死亡率、发病率及体重变化情况
[0534]
实验期间，gluf 30mg/kg剂量组有2只小鼠在给药第12天出现较明显的体重下降，gluf 100mg/kg剂量组给药期间未出现体重明显下降现象。
[0535]
gluf对荷瘤balb/c裸小鼠的体重影响如图35和图36所示。
[0536]
肿瘤体积
[0537]
sk-mel-28细胞异种移植瘤balb/c裸小鼠在给予gluf治疗后各组肿瘤体积变化如表27所示。
[0538]
表27、sk-mel-28细胞异种移植瘤balb/c裸小鼠后，各组不同时间点的瘤体积
[0539][0540]
注:a.平均值
±
sem
[0541]
肿瘤生长曲线
[0542]
肿瘤生长曲线如图37所示。
[0543]
4、实验结果及讨论
[0544]
4.1、使用mcf-7细胞balb/c裸小鼠皮下移植瘤模型评价受试化合物gluf的体内抗肿瘤作用的试验
[0545]
在本实验中，我们评价了gluf在mcf-7皮下移植瘤模型中的体内药效。各实验组在不同时间点的瘤体积如表22，表23及图31所示。
[0546]
在给药14天后，溶剂对照组荷瘤鼠的肿瘤平均体积达到926mm3。gluf 30mg/kg组和100mg/kg组在给药14天后肿瘤平均体积分别为847mm3(t/c＝91.4％,tgi＝10.4％,p》0.05)和768mm3(t/c＝82.9％,tgi＝20.7％,p》0.05)。gluf在30mg/kg和100mg/kg剂量下均未显示出明显的抑瘤作用。
[0547]
gluf对荷瘤鼠体重变化的影响如图29，图30所示。gluf 100mg/kg剂量组的部分荷瘤鼠在实验期间出现较明显的体重下降，其中2只小鼠在治疗期间(第7天)死亡。
[0548]
4.2、使用rpmi-8226细胞cb-17 scid小鼠皮下移植肿瘤模型评价受试化合物gluf的体内抗肿瘤作用的试验
[0549]
在本实验中，我们评价了gluf在rpmi-8226皮下移植瘤模型中的体内药效。各实验组在不同时间点的瘤体积如表24，表25及图34所示。
[0550]
在观察期的第14天，溶剂对照组荷瘤鼠的肿瘤平均体积达到1085mm3。gluf 30mg/kg组和100mg/kg组在观察期第14天肿瘤平均体积分别为412mm3(t/c＝38.0％,tgi＝72.4％,p《0.001)和338mm3(t/c＝31.1％,tgi＝80.1％,p《0.001)。gluf在30mg/kg，100mg/kg均表现出显著的肿瘤生长抑制作用，且呈剂量依赖性。在第14天给药结束后，gluf组肿瘤表现出更快的增长速度。
[0551]
gluf对荷瘤鼠体重变化的影响如图32，图33所示。gluf 30mg/kg，100mg/kg剂量组在该实验给药频率下均未出现明显的体重下降。
[0552]
4.3、使用sk-mel-28细胞balb/c裸小鼠皮下移植肿瘤模型评价受试化合物gluf的体内抗肿瘤作用的试验
[0553]
在本实验中，我们评价了gluf在sk-mel-28皮下移植瘤模型中的体内药效。各实验组在不同时间点的瘤体积如表26，表27及图37所示。
[0554]
在给药14天后，溶剂对照组荷瘤鼠的肿瘤平均体积达到715mm3。gluf 30mg/kg组和100mg/kg组在给药14天后肿瘤平均体积分别为603mm3(t/c＝84.2％,tgi＝21.0％,p》0.05)和563mm3(t/c＝78.7％,tgi＝28.5％,p》0.05)。gluf在30mg/kg和100mg/kg剂量下均未显示出明显的抑瘤作用。
[0555]
gluf对荷瘤鼠体重变化的影响如图35，图36所示。gluf 30mg/kg剂量组的2只荷瘤鼠在实验期间出现约10％体重下降。
[0556]
在以上动物实验中，分别将人皮肤恶性黑色素瘤细胞sk-mel-28移植到balb/c裸小鼠上、人乳腺癌细胞mcf-7移植到balb/c裸小鼠上、多发性骨髓瘤细胞rpmi-8226细胞移植到cb-17scid小鼠上肿瘤开始增殖，然后给予葡磷酰胺，发现只有多发性骨髓瘤细胞rpmi-8226细胞移植到cb-17scid小鼠的肿瘤在给药后的肿瘤抑制结果是显著有效的。
[0557]
cb-17 scid小鼠：balb/c小鼠同源近交产生c.b-17小鼠，cb-17 scid小鼠为c.b-17的scid突变系(常染色体隐性突变)，1980年bosma从fox chase癌症中心饲养的c.b-17/lcr小鼠群中发现。该品系表现出严重的联合免疫缺陷症状，b细胞和t淋巴细胞功能缺失。同时该品系有正常的nk细胞、巨噬细胞和粒细胞。c.b-17小鼠携带了来自c57bl/ka的免疫球蛋白重链lg-1b等位基因，除此之外与balb/c小鼠基因完全相同，因此，cb-17 scid小鼠的遗传背景与balb/c基本相同。
[0558]
因为cb-17scid小鼠是相对于balb/c小鼠具有scid突变系(常染色体隐性突变)的小鼠，而以上动物实验证明，gulf对发生了特定的基因突变的动物(小鼠)的癌细胞具有选择性的抑制作用。

技术特征：
1.葡磷酰胺或其类似物用于制备治疗dna修复酶受损的肿瘤或癌症患者的药剂的用途，该患者的肿瘤或癌组织至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变，优选为brca1、brca2、bard1、fanca，rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、xrcc3、xrcc4/xpf、xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg中的一个或更多个基因突变，更优选为xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg。2.根据权利要求1所述的用途，其中dna修复受损为同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、非同源末端连接酶受损、碱基切除修复酶受损、错配修复酶受损、范康尼贫血途径修复酶受损中的一种或更多种，优选为同源重组dna修复酶受损、核苷酸切除修复酶受损、碱基切除修复酶受损中的任意一种或更多种，更优选为单独的同源重组dna修复酶受损或同时具有同源重组dna修复酶受损与核苷酸切除修复酶受损的患者，优选为brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的tmb为高的患者，更优选为同源重组dna修复酶受损的患者。3.根据权利要求1-2中任意一项所述的用途，其中，所述药剂还含有其他抗癌药、抗肿瘤药及放射疗法及手术治疗的药物，其他抗癌药、抗肿瘤药包括hdac抑制剂、雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、细胞毒性/细胞生长抑制剂、抗增殖剂、异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂、hmg-coa还原酶抑制剂、hiv蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和其它血管生成抑制剂、细胞增殖和存活信号传导的抑制剂、细胞凋亡诱导剂。4.根据权利要求1-3中任意一项所述的用途，其中，所述肿瘤、癌症包括：肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、乳房癌、前列腺癌、睾丸癌、结肠癌、卵巢癌、膀胧癌、子宫颈癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊性腺癌、囊性癌、髓状癌、支气管癌、骨细胞癌、上皮癌、胆管癌、绒毛膜癌、胚癌、精原细胞癌、维尔姆斯癌、胶质细胞癌、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血细胞瘤、声带神经瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、成视神经
细胞瘤、成视网膜细胞瘤、神经纤维瘤、纤维肉瘤、成纤维细胞瘤、纤维瘤、纤维腺瘤、纤维软骨瘤、纤维囊瘤、纤维粘液瘤、纤维骨瘤、纤维粘液肉瘤、纤维乳头状瘤、粘液肉瘤、粘液囊瘤、粘液软骨瘤、粘液软骨肉瘤、粘液软骨纤维肉瘤、粘液腺瘤、成粘液细胞瘤、脂肉瘤、脂肪瘤、脂肪腺瘤、成脂细胞瘤、脂肪软骨瘤、脂肪纤维瘤、脂肪血管瘤、粘液脂瘤、软骨肉瘤、软骨瘤、软骨肌瘤、脊索瘤、绒毛膜腺瘤、绒毛上皮瘤、成绒毛膜细胞瘤、骨肉瘤、成骨细胞瘤、骨软骨纤维瘤、骨软骨肉瘤、骨软骨瘤、骨囊瘤、骨牙质瘤、骨纤维瘤、骨纤维肉瘤、血管肉瘤、血管瘤、血管脂肪瘤、血管软骨瘤、成血管细胞瘤、血管角质瘤、血管神经胶质瘤、血管内皮瘤、血管纤维瘤、血管肌瘤、血管脂肪瘤、血管淋巴管瘤、血管脂肪平滑肌瘤、血管肌脂瘤、血管肌神经瘤、血管粘液瘤、血管网状内皮瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉芽瘤、淋巴管瘤、淋巴瘤、淋巴粘液瘤、淋巴肉瘤、淋巴管纤维瘤、淋巴细胞瘤、淋巴上皮瘤、成淋巴细胞瘤、内皮瘤、成内皮细胞瘤、滑膜瘤、滑膜肉瘤、间皮瘤、结缔组织瘤、尤因瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、成平滑肌瘤、平滑肌纤维瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、横纹肌粘液瘤、急性淋巴白血病、急性骨髓性白血病、慢性病细胞、红细胞增多症、淋巴瘤、子宫内膜癌、胶质瘤、结直肠癌、甲状腺癌、尿路上皮癌以及多发性骨髓瘤，优选为卵巢癌，宫颈癌，前列腺癌，胰腺癌，乳腺癌。5.根据权利要求1-4中任意一项所述的用途，其中，所述类似物是指：葡磷酰胺可药用的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物或前药(比如酯)，具体优选为a、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与有机酸、无机含氧酸通过酯化反应得到的酯；b、葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与氨基酸通过酯化反应得到的酯；c、葡磷酰胺分子与酸反应所得的盐。6.根据权利要求1-5中任意一项所述的用途，其中患者是指人类患者和除人类外的哺乳动物患者。7.治疗dna修复酶受损的患者的肿瘤、癌症的免疗组合治疗药物，该治疗药物含有：葡磷酰胺或其类似物；以及免疫检查点抑制剂，其中，所述患者的肿瘤或癌症组织至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变，优选为brca1、brca2、bard1、fanca，rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、xrcc3、xrcc4/xpf、xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg中的一个或更多个基因突变，更优选为xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg。8.根据权利要求7所述的免疗组合治疗药物，所述免疫检查点抑制剂为干扰细胞周期检查点的药物，包括pd-1(免疫抑制受体)抑制剂、pd-l1(免疫抑制受体配体)抑制剂及ctl4
(溶解性t淋巴细胞4)抑制剂等抑制剂。9.一种治疗癌症或肿瘤的复方制剂，含有：葡磷酰胺或其类似物；以及增强葡萄糖转运蛋白表达的药物，其中，该患者的肿瘤或癌组织至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变，优选为brca1、brca2、bard1、fanca，rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、xrcc3、xrcc4/xpf、xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg中的一个或更多个基因突变，更优选为xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg，优选为brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的tmb为高的患者，更优选为同源重组dna修复酶受损的患者。10.一种治疗癌症或肿瘤的免疫调节复方制剂，含有：葡磷酰胺或其类似物；以及免疫调节药物，其中，该患者的肿瘤或癌组织至少有brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶对应的基因中的任意一个基因突变或更多个突变，优选为brca1、brca2、bard1、fanca，rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、xrcc3、xrcc4/xpf、xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg中的一个或更多个基因突变，
优选为brca1、brca2、fanca、fancd1、fancd2、atm、atr、chek1、chek2、ctp、bard1、brip1、palb2、rad51d、rad51c、rad52、rad54、rad55、rad57、fam175、nbn、rad50、mre11、p53、nbs1、xrs2、xrcc2、xrcc3、xrcc4/xpf、ercc1、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、xrcc1、ku80、mhs6、mgmt、parp、ercc5/xpg、ccnh、cdk7、cetn2、ddb1、ddb2、ercc5/xpg、ercc6/csb、ercc8/csa、lig1/dna连接酶i、mms19、mnat1、rad23a、rad23b、rpa1、rpa2、tfiih、xab2、xpa、xpc、mbd4、neil1、bap1、cdk12、exo1、faap20、fan1、fance、fancm、mdc1、nono、polq、rad51b、rbbp8、smc5、usp11、wrn以及ap核酸内切酶、末端加工酶、dna聚合酶、flap核酸内切酶、dna连接酶对应的基因的tmb为高的患者，更优选为同源重组dna修复酶受损的患者，更优选为xrcc1/rcc、ercc1/rad10、ercc2/xpd、ercc3/xpb、ercc4/xpf、ercc5/xpg。11.根据权利要求10所述的治疗癌症或肿瘤的免疫调节复方制剂，其特征在于：所述免疫调节药物包括免疫抑制剂和免疫增强药，所述免疫抑制剂包括环孢素、他克莫司、硫唑嘌呤。

技术总结
葡磷酰胺或其类似物对于特定基因变异的细胞具有特异性的抑制作用，具体而言就是DNA修复受损的细胞，该细胞或组织至少有BRCA1、BRCA2、FANCD1、FANCD2、ATM、ATR、CHEK1、CHEK2、CTP、BARD1、BRIP1、PALB2、RAD51D、RAD51C、RAD52、RAD54、RAD55、RAD57、FAM175、NBN、Rad50、MER11、p53、NBS1、XRS2、XRCC2、XRCC3、ERCC1、ERCC2、ERCC3、ERCC4、XRCC1、Ku80、MHS6、MGMT、PARP或ERCC5中一个基因突变或更多个基因突变。类似物是指：葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与有机酸、无机含氧酸通过酯化反应得到的酯；葡磷酰胺分子中的一个羟基或更多个羟基与氨基酸通过酯化反应得到的酯；葡磷酰胺分子与酸反应所得的盐。为此提供了葡磷酰胺或其类似物在治疗上述特定基因变异的癌症患者的肿瘤、癌症疾病中的医药用途。癌症疾病中的医药用途。癌症疾病中的医药用途。


技术研发人员：段建新 李安蓉 孟繁英 荣唐纳德
受保护的技术使用者：深圳艾欣达伟医药科技有限公司
技术研发日：2018.10.22
技术公布日：2023/7/11