抗SARS-CoV-2的疫苗套组的制作方法

抗sars-cov-2的疫苗套组
【技术领域】
1.本发明是关于一种疫苗套组，特别是关于一种用以预防sars-cov-2感染的疫苗套组。


背景技术：

2.covid-19(coronavirus disease 2019，冠状病毒疾病2019)为一种由严重急性呼吸道症候群冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，以下称为「sars-cov-2」)所引起的传染性疾病。covid-19在全球迅速蔓延并对人类社会的稳定发展造成巨大的伤害，而截至目前为止，全球已有超过580万人因感染covid-19而死亡。
3.冠状病毒为一种具有外套膜的rna病毒，于显微镜下观察呈球形，且病毒表面具有由病毒糖蛋白(viral spike glycoproteins,vsg)所形成的冠状棘刺(即棘蛋白)。在分类上，冠状病毒可进一步分为甲型冠状病毒属(alphacoronavirus)、乙型冠状病毒属(betacoronavirus)、丙型冠状病毒属(gammacoronavirus)与丁型冠状病毒属(deltacoronavirus)，其中已知有七种以人类为宿主的冠状病毒株，分别为属于甲型冠状病毒属的人类冠状病毒229e(以下称为「hcov-229e」)与人类冠状病毒nl63(以下称为「hcov-nl63」)以及属于乙型冠状病毒属的人类冠状病毒hku1(以下称为「hcov-hku1」)、人类冠状病毒oc43(以下称为「hcov-oc43」)、中东呼吸症候群冠状病毒(mers-cov,middle east respiratory syndrome-related coronavirus)、严重急性呼吸道症候群冠状病毒(sars-cov,severe acute respiratory syndrome coronavirus)与sars-cov-2。
4.在上述7种感染人类的冠状病毒中，引起普通感冒的冠状病毒株hcov-229e、hcov-nl63、hcov-hku1与hcov-oc43的主要临床症状为轻度至中度的上呼吸道疾病，并可能伴随全身不适、流鼻涕、喉咙痛、头痛、发烧、咳嗽等症状，然而，covid-19的病况却非常多样化，在不同患者可能出现轻症至重症的差异。具体而言，covid-19的常见临床症状与轻度普通感冒冠状病毒相似，但较为严重的症状则可能有呼吸困难或呼吸急促、言语或行动能力丧失、意识模糊、胸痛，更甚者恐导致患者因相关并发症而死亡。
5.再者，现行在控制covid-19蔓延上所面临的最大难题是尚未有疫苗可以完全预防sars-cov-2的感染，且仍未有针对covid-19的有效靶向治疗方法。因此，仍迫切需要发展一种可有效预防covid-19的方法，以挽救生命并减少此次疫情所造成的损害。


技术实现要素：

6.本发明的一实施方式为提供一种抗sars-cov-2的疫苗套组，包含一第一疫苗组合物以及一第二疫苗组合物。第一疫苗组合物包含一有效剂量的甲型冠状病毒(alphacoronavirus)，且第一疫苗组合物为一活毒疫苗。第二疫苗组合物包含一有效剂量的乙型冠状病毒(betacoronavirus)，且第二疫苗组合物为一活毒疫苗。
7.依据前述实施方式的抗sars-cov-2的疫苗套组，其中第一疫苗组合物可为一口服疫苗。
8.依据前述实施方式的抗sars-cov-2的疫苗套组，其中第二疫苗组合物可为一经鼻投药疫苗。
9.依据前述实施方式的抗sars-cov-2的疫苗套组，其中所述的甲型冠状病毒的有效剂量可为1
×
103pfu/ml至1
×
107pfu/ml，所述的乙型冠状病毒的有效剂量可为1
×
103pfu/ml至1
×
107pfu/ml。
10.依据前述实施方式的抗sars-cov-2的疫苗套组，其中所述的甲型冠状病毒可为hcov-229e、hcov-nl63或其组合。
11.依据前述实施方式的抗sars-cov-2的疫苗套组，其中所述的甲型冠状病毒可为hcov-229e。
12.依据前述实施方式的抗sars-cov-2的疫苗套组，其中所述的乙型冠状病毒可为hcov-hku1、hcov-oc43或其组合。
13.依据前述实施方式的抗sars-cov-2的疫苗套组，其中所述的乙型冠状病毒可为hcov-oc43。
14.依据前述实施方式的抗sars-cov-2的疫苗套组，可更包含一使用说明书，所述的使用说明书系记载抗sars-cov-2的疫苗套组的一使用方法。
15.依据前述实施方式的抗sars-cov-2的疫苗套组，其中所述的使用方法包含下述内容：将所述的第一疫苗组合物送入需要接受疫苗接种的一个体的体内；以及将所述的第二疫苗组合物送入所述的个体的体内，其中所述的第二疫苗组合物系于所述的第一疫苗组合物施用后至少四周后始施用于所述的个体。
16.藉此，本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组以较为温和的具感染活性的人类轻症感冒冠状病毒的全病毒作为抗原来诱导人体发生主动免疫反应，与目前使用棘蛋白或编码棘蛋白的核苷酸作为抗原的疫苗相比具有优异的抗sars-cov-2感染的效果。再者，本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组以第一疫苗组合物与第二疫苗组合物依序施用，且第一疫苗组合物与第二疫苗组合物包含不同属别的冠状病毒的方式，可更完整地诱导人体对于不同类型的冠状病毒发生主动免疫反应，并可提供广效的抗冠状病毒感染的效果，从而预防人体受sars-cov-2感染而减少此次疫情所造成的损害。
【附图说明】
17.为让本发明的上述和其他目的、特征、优点与实施例能更明显易懂，所附附图的说明如下：图1系受试者在接种本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组八周后的血清转化率结果图；图2系受试者1在接种本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组四周后的周边血液中细胞的流式细胞术分析图；以及图3系受试者1在接种本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组四周后的t细胞抗原分布的流式细胞术分析图。
【具体实施方式】
18.下述将更详细讨论本发明各实施方式。然而，此实施方式可为各种发明概念的应
用，可被具体实行在各种不同的特定范围内。特定的实施方式是仅以说明为目的，且不受限于揭露的范围。
19.《本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组》
20.本发明的一实施方式在于提供一种抗sars-cov-2的疫苗套组，包含一第一疫苗组合物以及一第二疫苗组合物。
21.第一疫苗组合物包含一有效剂量的甲型冠状病毒(alphacoronavirus)，且第一疫苗组合物为一活毒疫苗。详细而言，第一疫苗组合物中的甲型冠状病毒的有效剂量可为1
×
103pfu/ml至1
×
107pfu/ml，且甲型冠状病毒可为hcov-229e、hcov-nl63或其组合。再者，第一疫苗组合物可为一口服疫苗，但本发明并不以此为限。
22.第二疫苗组合物包含一有效剂量的乙型冠状病毒(betacoronavirus)，且第二疫苗组合物为一活毒疫苗。详细而言，第二疫苗组合物中的乙型冠状病毒的有效剂量可为1
×
103pfu/ml至1
×
107pfu/ml，且乙型冠状病毒可为hcov-hku1、hcov-oc43或其组合。再者，第二疫苗组合物可为一经鼻投药疫苗，但本发明并不以此为限。
23.详细而言，现行的sars-cov-2疫苗研发主要是以sars-cov-2的棘蛋白做为标靶抗原，然根据现行疫苗接种的临床结果，使用者在接种以sars-cov-2的棘蛋白或编码棘蛋白的核苷酸作为抗原的疫苗后，仍有很高的机率会受到sars-cov-2的变异株侵袭而发生突破性感染(breakthrough infection)，显示单纯以sars-cov-2的棘蛋白或编码棘蛋白的核苷酸作为抗原所诱发的主动免疫反应并无法有效地对抗不同sars-cov-2变异株的感染。有鉴于此，本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组以较为温和的具感染活性的人类轻症感冒冠状病毒的全病毒作为抗原，使人类轻症感冒冠状病毒自然感染人体，以诱导人体发生主动免疫反应而产生抗冠状病毒的抗体，以获得较为广泛且周全的保护。
24.再请参照表一，其系人类轻症感冒冠状病毒株hcov-229e、hcov-nl63、hcov-hku1、hcov-oc43与sars-cov-2在棘蛋白的序列相似性分析结果。
25.如表一所示，hcov-229e、hcov-nl63、hcov-hku1、hcov-oc43与sars-cov-2在棘蛋白方面至少具有27.78％的相似性，与hcov-oc43相比更可达37.65％的相似性。再者，在冠状病毒的蛋白质中，早期转录复制转录复合物(early transcribed replication transcription complex,rtc)中的rna聚合酶是人类轻症感冒冠状病毒和sars-cov-2具有最大的序列保守度的区域，且人类轻症感冒冠状病毒的其他结构蛋白和非结构蛋白也与
sars-cov-2的结构蛋白和非结构蛋白具有高度的保守性。因此，在与人类轻症感冒冠状病毒的棘蛋白以及其他二十多种候选蛋白的交互作用下，受人类轻症感冒冠状病毒感染后将有潜力提供针对sars-cov-2的免疫力。
26.另外，由临床上的数据显示，人类轻症感冒冠状病毒会自然感染受试者，而在病毒生命周期的第一阶段中所表达的具有高度保守性的rtc区域会优先被t细胞靶向并诱导人体发生主动免疫反应，且经由前述的主动免疫反应所产生的t细胞可以交叉识别sars-cov-2和人类轻症感冒冠状病毒的rtc的抗原表位(epitopes)，此结果更加证实感染人类轻症感冒冠状病毒后可于体内预先生成对于sars-cov-2具有交叉辨识能力的反应性t细胞。换言之，经由人类轻症感冒冠状病毒感染所生成的t细胞将有助于快速清除并预防后续受sars-cov-2和其他冠状病毒的感染。
27.有鉴于此，在异源初免/加强接种(heterologous prime/boost vaccination)的策略下，本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组以第一疫苗组合物与第二疫苗组合物分别包含不同属别的冠状病毒的方式，可更完整地诱导人体对于不同类型的冠状病毒发生主动免疫反应，并可达成抵抗sars-cov-2感染的目的。较佳地，甲型冠状病毒可为hcov-229e，乙型冠状病毒可为hcov-oc43，而甲型冠状病毒的有效剂量可为1
×
105pfu/ml，乙型冠状病毒的有效剂量可为1
×
105pfu/ml，但本发明并不以此为限。
28.再者，本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组可更包含一使用说明书，所述的使用说明书系记载抗sars-cov-2的疫苗套组的一使用方法。详细而言，所述的使用方法包含下述内容：将所述的第一疫苗组合物送入需要接受疫苗接种的一个体的体内；以及将所述的第二疫苗组合物送入所述的个体的体内，其中所述的第二疫苗组合物系于所述的第一疫苗组合物施用后至少四周后始施用于所述的个体。
29.具体而言，本发明的第一疫苗组合物使用活体甲型冠状病毒的全病毒作为抗原，以使甲型冠状病毒自然感染受试者并激活其主动免疫，并在第一疫苗组合物接种至少4周后将包含活体乙型冠状病毒的全病毒的第二疫苗组合物作为加强剂施用于受试者，使乙型冠状病毒自然感染受试者，藉以使受试者获得对抗sars-cov-2以及其他冠状病毒的免疫力，而以此方式获得的免疫力将可持续很长时间。
30.藉此，本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组通过第一疫苗组合物与第二疫苗组合物包含不同属别的冠状病毒，且第一疫苗组合物与第二疫苗组合物以间隔至少四周而依序施用的方式，可更完整地诱导人体对于不同类型的冠状病毒发生主动免疫反应，从而具有优异的预防sars-cov-2感染的潜力。
31.《本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组的抗冠状病毒效果分析》
32.本试验所使用的抗sars-cov-2的疫苗套组包含第一疫苗组合物及第二疫苗组合物，其中第一疫苗组合物包含甲型冠状病毒hcov-229e，第二疫苗组合物包含乙型冠状病毒hcov-oc43，且第一疫苗组合物与第二疫苗组合物的有效剂量皆为1
×
105pfu/ml。再者，第一疫苗组合物是以口服方式进行施用，而第二疫苗组合物则是以经鼻投药的方式进行施用。
33.一、抗体滴度分析
34.在实验方面，首先将本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组的第一疫苗组合物分别施用于237位受试者，接着在第一疫苗组合物施用至少四周后施用第二疫苗组合物，并在接种
第二疫苗组合物八周后分析受试者血液中抗hcov-229e与抗hcov-oc43的抗体滴度。
35.请参照图1，其系受试者在接种本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组八周后的血清转化率结果图。如图1所示，在接种本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组八周后，抗hcov-229e和抗hcov-oc43的抗体滴度表现均优，且有25.1％的受试者的抗hcov-229e的抗体和抗hcov-oc43的抗体的滴度同时大于1000，显示在接种本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组后可有效地诱导人体对于不同类型的冠状病毒发生主动免疫反应，并可对应产生高量的抗体。
36.二、t细胞分析
37.在实验方面，首先将本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组的第一疫苗组合物分别施用于484位受试者，接着在第一疫苗组合物施用至少四周后施用第二疫苗组合物，并在接种第二疫苗组合物八周后采集其中一位受试者(以下称为「受试者1」)的周边血液与唾液，并分析受试者1的周边血液中细胞的表现情形与t细胞的表面抗原状态以及唾液中的iga表现情形。
38.请参照图2与图3，图2系受试者1在接种本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组四周后的周边血液中细胞的流式细胞术分析图，图3系受试者1在接种本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组四周后的t细胞抗原分布的流式细胞术分析图。
39.如图2所示，在对受试者1的周边血液中的细胞进行分析后，表现cd3与cd45的活化t细胞(图2方框标示的细胞)占总细胞量约15.07％。再者，如图3所示，在将前述的占总细胞量约15.07％的t细胞进行进一步分析后，受试者1的血液中表现cd8但不表现cd4的t细胞(图3圆形框标示的细胞)占t细胞总量约75.5％，显示受试者1的周边血液中的t细胞能识别冠状病毒的抗原表位而对冠状病毒具有特异性，并能有效防止冠状病毒的侵扰。
40.再请参考表二，其系呈现25位受试者在接种疫苗后的唾液中的iga表现情形。具体而言，所述的25位受试者并未有受sars-cov-2感染的病史，亦无接种covid-19的商业疫苗，而本试验则是以商业套组covid-19 antibody rapid test(test()(toa industry co.,ltd.japan)进行分析。co.,ltd.japan)进行分析。
41.由表二可见，高达96％的受试者于唾液中皆具有iga的讯号表现，显示本发明的抗sars-cov-2可有效引发受试者对于sars-cov-2的粘膜免疫，而有相关临床的应用潜力。
42.三、副作用分析
43.本试验同时观察237位受试者在接种本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组八周后发生副作用的情形，并将观察结果纪录于表三。
44.如表三所示，本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组在接种后仅有不到3％的受试者有轻度上呼吸道感染的症状，而发生胃肠道不适与过敏性皮疹等副作用的情形皆为1.3％，显示本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组并未如现行临床上所使用的抗sars-cov-2的疫苗一般具有严重的副作用，并具有优异的生物安全性。
45.综上所述，本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组以较为温和的具感染活性的人类轻症感冒冠状病毒的全病毒作为抗原来诱导人体发生主动免疫反应，与目前使用棘蛋白或编码棘蛋白的核苷酸作为抗原的疫苗相比具有优异的抗sars-cov-2感染的效果。再者，本发明的抗sars-cov-2的疫苗套组以第一疫苗组合物与第二疫苗组合物依序施用，且第一疫苗组合物与第二疫苗组合物包含不同属别的冠状病毒的方式，可更完整地诱导人体对于不同类型的冠状病毒发生主动免疫反应，并可提供广效的抗冠状病毒感染的效果，而具有优异的临床应用潜力。
46.虽然本发明已以实施方式揭露如上，然其并非用以限定本发明，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作各种的更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的权利要求所界定者为准。【符号说明】无

技术特征：
1.一种抗sars-cov-2的疫苗套组，其特征在于，包含：一第一疫苗组合物，包含：一有效剂量的甲型冠状病毒(alphacoronavirus)，且该第一疫苗组合物为一活毒疫苗；以及一第二疫苗组合物，包含：一有效剂量的乙型冠状病毒(betacoronavirus)，且该第二疫苗组合物为一活毒疫苗。2.如权利要求1所述的抗sars-cov-2的疫苗套组，其特征在于，该第一疫苗组合物为一口服疫苗。3.如权利要求1所述的抗sars-cov-2的疫苗套组，其特征在于，该第二疫苗组合物为一经鼻投药疫苗。4.如权利要求1所述的抗sars-cov-2的疫苗套组，其特征在于，该甲型冠状病毒的有效剂量为1
×
103pfu/ml至1
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107pfu/ml，该乙型冠状病毒的有效剂量为1
×
103pfu/ml至1
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107pfu/ml。5.如权利要求1所述的抗sars-cov-2的疫苗套组，其特征在于，该甲型冠状病毒为hcov-229e、hcov-nl63或其组合。6.如权利要求5所述的抗sars-cov-2的疫苗套组，其特征在于，该甲型冠状病毒为hcov-229e。7.如权利要求1所述的抗sars-cov-2的疫苗套组，其特征在于，该乙型冠状病毒为hcov-hku1、hcov-oc43或其组合。8.如权利要求7所述的抗sars-cov-2的疫苗套组，其特征在于，该乙型冠状病毒为hcov-oc43。9.如权利要求1-8中任一项所述的抗sars-cov-2的疫苗套组，其特征在于，更包含：一使用说明书，其系记载该抗sars-cov-2的疫苗套组的一使用方法。10.如权利要求9所述的抗sars-cov-2的疫苗套组，其特征在于，该使用方法包含：将该第一疫苗组合物送入需要接受疫苗接种的一个体的体内；以及将该第二疫苗组合物送入该个体的体内，其中该第二疫苗组合物系于该第一疫苗组合物施用后至少四周后始施用于该个体。

技术总结
本发明提供一种抗SARS-CoV-2的疫苗套组，包含一第一疫苗组合物以及一第二疫苗组合物。第一疫苗组合物包含一有效剂量的甲型冠状病毒，且第一疫苗组合物为一活毒疫苗。第二疫苗组合物包含一有效剂量的乙型冠状病毒，且第二疫苗组合物为一活毒疫苗。藉此，本发明的抗SARS-CoV-2的疫苗套组以较为温和的具感染活性的人类轻症感冒冠状病毒的全病毒作为抗原来诱导人体发生主动免疫反应，与目前使用棘蛋白或编码棘蛋白的核苷酸作为抗原的疫苗相比具有优异的抗SARS-CoV-2感染的效果，并具有优异的临床应用潜力。异的临床应用潜力。异的临床应用潜力。


技术研发人员：陈立光 王建雄 金权 杨惠华
受保护的技术使用者：上池生物科技有限公司
技术研发日：2022.11.15
技术公布日：2023/7/11