诱导热带疫霉产孢的培养基、制备方法及应用

1.本发明涉及微生物领域，特别涉及诱导热带疫霉产孢的培养基、制备方法及应用。


背景技术：

2.胡椒(piper nigrum linn.)是一种经济价值极高的食品香料作物，广泛种植于世界热区各国。在中国，胡椒的种植面积约达40万多亩，年产值30多亿元，是涉及100多万农民生计的重要热作产业。胡椒瘟病具有极强的毁灭性和传播性，是危害世界胡椒生产上的首要病害。该病害在上世纪70年代曾导致胡椒种植面积缩减20％。近年来，胡椒瘟病在海南省各胡椒种植区均普遍发生、危害严重，呈再次蔓延加重的趋势，已成为影响胡椒生产的关键因素之一。胡椒瘟病主要通过游动孢子随雨水迸溅、田间径流及农事操作等方式传播，控制病源和切断传播途径是防控该病害的一贯方针。认识游动孢子是揭示胡椒瘟病致病成灾机制的关键，也是国内外科学家的关注的热点。
3.胡椒瘟病的病原菌曾被鉴定为辣椒疫霉菌(phytophthora capsici)。但是，研究表明从胡椒等热带作物上分离的部分菌株与从温带寄主上分离的菌株存在着显著的生物学和遗传学差异，将其从辣椒疫霉中独立出来，命名为热带疫霉(p.tropicalis)。国内已报道的辣椒疫霉产孢培养基种类有很多，包括v8蔬菜汁培养基(v8)，黑麦培养基(ra)、胡萝卜培养基(ca)、大豆培养基(ba)、橙子汁(oa)培养基、燕麦培养基(oma)、玉米粉培养基(cma)等等。但是这些培养基及其方法在热带疫霉上诱导产孢效率较低、甚至不产孢。目前尚未有针对热带疫霉菌的高效诱导游动孢子的培养基及方法，十分不利于胡椒等热带作物病害的致灾机制研究和防控技术研发。


技术实现要素：

4.虽然热带疫霉菌在生物学和遗传学上均与辣椒疫霉菌十分相似，但辣椒疫霉菌的游动孢子诱导培养基在热带疫霉上效率不高。本发明提供一种简便的高效诱导热带疫霉菌游动孢子的培养基及应用方法，以满足相应的实验室内分子机理研究和生产上病害监测防控的需求。
5.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
6.第一方面，本发明提供了诱导热带疫霉产生游动孢子的培养基，包括黄瓜、胡椒叶和维生素c。
7.在本发明的一些具体实施方案中，以重量份计，所述培养基包括如下组分：
8.黄瓜
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150～250重量份
9.胡椒叶
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20～30重量份
10.维生素c
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0.00001～0.00002重量份。
11.在本发明的一些具体实施方案中，以重量份计，所述培养基包括如下组分：
12.黄瓜
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150重量份
13.胡椒叶
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20重量份
14.维生素c
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0.00002重量份
15.或
16.黄瓜
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200重量份
17.胡椒叶
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30重量份
18.维生素c
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0.000015重量份
19.或
20.黄瓜
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250重量份
21.胡椒叶
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25重量份
22.维生素c
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0.00002重量份
23.或
24.黄瓜
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200重量份
25.胡椒叶
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30重量份
26.维生素c
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0.00001重量份。
27.在本发明的一些具体实施方案中，所述培养基还包括琼脂粉15～20重量份。
28.第二方面，本发明还提供了所述培养基的制备方法，所述黄瓜的使用方法为取所述黄瓜破碎后用双层纱布过滤去渣，收集滤液；和/或
29.所述胡椒叶的使用方法为取所述胡椒叶破碎后用双层纱布过滤去渣，收集滤液；和/或
30.所述维生素c的使用方法为取所述维生素c配制成1000倍母液于4℃冷藏保存，使用时添加于冷却至50℃的培养基溶液中。
31.在本发明的一些具体实施方案中，所述维生素c的使用方法为：取所述维生素c 0.5～1g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，过滤后于4℃保存，获得维生素c添加物；使用时以0.1％体积的所述维生素c添加物添加至50℃的培养基。
32.在本发明的一些具体实施方案中，所述制备方法包括：
33.取所述黄瓜150～250g粉碎后过滤；
34.取所述胡椒叶20～30g粉碎收集滤液，在所述滤液中加琼脂粉15～20g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min；
35.取所述维生素c 0.5～1g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，过滤后于冷藏4℃，获得维生素c添加物；使用时将培养基融化并冷却至50℃，加入0.1％体积的所述维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
36.在本发明的一些具体实施方案中，所述制备方法包括：
37.取新鲜带刺黄瓜150～250g在料理机打碎后用双层纱布过滤，新鲜胡椒叶20～30g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉15～20g，加去离子水定容至1l，115～121℃灭菌15-20min。维生素c 0.5～1g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
38.第三方面，本发明还提供了所述培养基所述制备方法制得的培养基在诱导热带疫霉菌游动孢子中的应用。
39.第四方面，本发明还提供了热带疫霉菌游动孢子的诱导方法，取热带疫霉菌接种
于所述培养基或所述制备方法制得的培养基，培养。
40.在本发明的一些具体实施方案中，所述诱导方法包括如下步骤：
41.步骤1：将热带疫霉菌接种于所述培养基，置于26℃培养4～7d，直至菌丝长满整个平板
42.步骤2：抹压菌丝使其贴附在所述培养基上，在25～28℃、4000～6000lx条件下光照诱导24～48h；
43.步骤3：加入无菌水后于4℃冷藏45～90min，于26℃恒温30～60min，收集孢子悬浮液；
44.步骤4：观察统计游动孢子数量。
45.在本发明的一些具体实施方案中，所述诱导方法包括如下步骤：
46.步骤1：将直径约0.5cm的热带疫霉菌菌丝块接种于培养基平板中央，置于26℃光照生化培养箱中培养4～7d，直至菌丝长满整个平板
47.步骤2：用无菌的l型玻棒轻轻抹压平板上的菌丝使其贴附在培养基上，在25～28℃、4000～6000lx条件下光照诱导24～48h；
48.步骤3：平板中加入10ml的无菌水后移至4℃冰箱中45～90min，再次26℃恒温30～60min，收集平板里的孢子悬浮液；
49.步骤4：吸取少量孢子悬浮液滴加在血球计数板上，通过显微镜观察统计游动孢子数量。
50.在本发明的一些具体实施方案中，所述诱导方法包括如下步骤：
51.步骤1：将直径约0.5cm的热带疫霉菌菌丝块接种于培养基平板中央，置于26℃光照生化培养箱中培养5d。
52.步骤2：用无菌的l型玻棒轻轻抹压平板上的菌丝使其贴附在培养基上，在26℃、5000lx条件下光照诱导30h；
53.步骤3：平板中加入10ml的无菌水后移至4℃冰箱中60min，再次26℃恒温60min，收集平板里的孢子悬浮液；
54.步骤4：吸取少量孢子悬浮液滴加在血球计数板上，通过显微镜观察统计游动孢子数量。
55.本发明提供的培养基及其诱导热带疫霉菌产生游动孢子的方法，游动孢子产量达1.32
×
106个/ml，远高于同类培养基。本发明主要原料黄瓜、胡椒叶和维生素c、价格便宜，配制方法简便易行，获得的游动孢子悬浮液纯净无菌，非常适用于热带疫霉机理研究和防控技术研发。
附图说明
56.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
57.图1示从胡椒上分离的热带疫霉与辣椒疫霉的ypti片段序列比对分析结果；
58.图2示在显微镜40倍放大视野下本发明实施例3诱导的游动孢子数量；
59.图3示在显微镜40倍放大视野下采用对比例1中黑麦培养基诱导的游动孢子数量。
具体实施方式
60.本发明公开了诱导热带疫霉产孢的培养基、制备方法及应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
61.培养基及配制方法：
62.本发明培养基配制方法如下，培养基部分：新鲜带刺黄瓜150-250g在料理机打碎后用双层纱布过滤，新鲜胡椒叶20-30g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉15-20g，加去离子水定容至1l，115-121℃灭菌15-20min，优选121℃灭菌20min。维生素c 0.5-1g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
63.游动孢子诱导方法：
64.1)将直径约0.5cm的热带疫霉菌菌丝块接种于培养基平板中央，置于26℃光照生化培养箱中培养4-7d，优选培养5d。
65.2)用无菌的l型玻棒轻轻抹压平板上的菌丝使其贴附在培养基上，在25-28℃、4000-6000lx条件下光照诱导24-48h，优选在26℃、5000lx条件下光照诱导30h；
66.3)平板中加入10ml的无菌水后移至4℃冰箱中45-90min，再次26℃恒温30-60min，优选的，平板中加入10ml的无菌水后移至4℃冰箱中60min，再次26℃恒温60min收集平板里的孢子悬浮液；
67.4)吸取少量孢子悬浮液滴加在血球计数板上，通过显微镜观察统计游动孢子数量。
68.本发明的有益效果包括但不限于：
69.本发明提供的培养基及其诱导热带疫霉菌产生游动孢子的方法，游动孢子产量达1.32
×
106个/ml，远高于同类培养基。本发明主要原料黄瓜、胡椒叶和维生素c、价格便宜，配制方法简便易行，获得的游动孢子悬浮液纯净无菌，非常适用于热带疫霉机理研究和防控技术研发。
70.本发明提供的诱导热带疫霉产孢的培养基、制备方法及应用中，所用原料及试剂均可由市场购得。
71.热带疫霉的标准菌株在cbs的保藏号为cbs 434.91，可以直接在其官网上搜索下单购买。
72.cbs(centraalbureauvoor schimmelcultures)荷兰微生物菌种保藏中心，是半政府性质的主要保藏真菌、酵母菌种保藏中心。
73.该中心主要从事菌种保藏方法、分类学、分子生物学、医学微生物学等的研究。该中心保藏有真菌35000株、酵母5500株。该中心保藏的菌种可出售。
74.下面结合实施例，进一步阐述本发明：
75.实施例1
76.从海南岛田间胡椒瘟病植株上采样并分离纯化病原菌，通过ypti基因序列比对分
析对病原菌进行鉴定，发现相对于从胡椒上分离的辣椒疫霉菌株，本发明案例实施所用的菌株存在1个12个碱基的缺失(gap)，说明实施菌株是热带疫霉(p.tropicalis)，详见bowers j h,martin f n,tooley p w,et al.genetic and morphologicaldiversity of temperate and tropicalisolates of phytophthora capsici[j].phytopathology,2007,97(4):492-503.或jeevalatha a,biju c n,bhair s.ypt1 gene-based recombinase polymerase amplification assay for phytophthora capsiciand p.tropicalis detection in blackpepper[j].european journalof plant pathology,2021:1-13.(图1)。
[0077]
实施例2
[0078]
培养基配制方法：新鲜带刺黄瓜150g在料理机打碎后用双层纱布过滤，新鲜胡椒叶20g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉20g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min。维生素c1g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
[0079]
游动孢子诱导方法：
[0080]
1)将直径约0.5cm的热带疫霉菌菌丝块接种于培养基平板上中央，置于26℃光照生化培养箱中培养5d；
[0081]
2)用无菌的l型玻棒轻轻抹压平板上的菌丝使其贴附在培养基上，在26℃、5000lx条件下光照诱导30h；
[0082]
3)平板中加入10ml的无菌水后移至4℃冰箱中1h，再次26℃恒温1h，收集平板里的孢子悬浮液；
[0083]
4)吸取少量孢子悬浮液滴加在血球计数板上，通过显微镜观察统计游动孢子数量。
[0084]
实施例3
[0085]
培养基配制方法：新鲜带刺黄瓜200g在料理机打碎后用双层纱布过滤，新鲜胡椒叶30g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉15g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min。维生素c 0.75g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
[0086]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0087]
实施例4
[0088]
培养基配制方法：新鲜带刺黄瓜250g在料理机打碎后用双层纱布过滤，新鲜胡椒叶25g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉17.5g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min。维生素c1g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
[0089]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0090]
实施例5
[0091]
培养基配制方法：新鲜带刺黄瓜200g在料理机打碎后用双层纱布过滤，新鲜胡椒
叶30g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉20g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min。维生素c 0.5g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，15-20ml/皿，凝固后即为培养基平板。
[0092]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0093]
对比例1
[0094]
黑麦培养基配制方法：60g黑麦种子在1000ml去离子水中浸泡24h，在121℃下高压蒸汽灭菌20分钟，经双层纱布过滤去渣。加入琼脂粉20g，加去离子水定容至1000ml。在121℃灭菌20min。
[0095]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0096]
对比例2
[0097]
大豆培养基配制方法：60g大豆种子在去离子水中浸泡24h。取出浸泡过的大豆与300ml去离子水混合，用料理机打碎后用双层纱布过滤去渣。加入琼脂粉20g，加去离子水定容至1000ml。培养基在121℃下高压蒸汽灭菌20min。
[0098]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0099]
对比例3
[0100]
v8培养基配制方法：v8果蔬汁(品牌：美国金宝)在5000g条件下离心5min后取上清液100ml，加caco
3 1g，琼脂粉20g，加去离子水定容至1000ml。培养基在121℃下高压蒸汽灭菌20min。
[0101]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0102]
对比例4
[0103]
胡萝卜培养基配制方法：新鲜胡萝卜200g切成边长约1cm的小块后放入1000ml去离子水中煮沸30min，用双层纱布过滤去渣。加入琼脂粉20g，加去离子水定容至1000ml。培养基在121℃下高压蒸汽灭菌20min。
[0104]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0105]
对比例5
[0106]
燕麦蔗糖培养基配制方法：燕麦片30g，加去离子水1000ml，在60℃下水浴1h，双层纱布过滤去渣。加入琼脂粉20g，加去离子水定容至1000ml。培养基在121℃下高压蒸汽灭菌20min。
[0107]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0108]
对比例6
[0109]
橙子汁培养基配制方法：新鲜甜橙去皮后切块榨汁，取橙子汁50ml，加入琼脂粉20g，加去离子水定容至1000ml。培养基在121℃下高压蒸汽灭菌20min。
[0110]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0111]
对比例7
[0112]
培养基配制方法：新鲜带刺黄瓜200g在料理机打碎后用双层纱布过滤，新鲜胡椒叶30g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉15g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min。使用时将培养基融化后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
[0113]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0114]
对比例8
[0115]
培养基配制方法：新鲜带刺黄瓜200g在料理机打碎后用双层纱布过滤，滤液中加琼脂粉15g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min。维生素c 0.75g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
[0116]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0117]
对比例9
[0118]
培养基配制方法：新鲜胡椒叶30g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉15g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min。维生素c 0.75g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
[0119]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0120]
对比例10
[0121]
培养基配制方法：新鲜带刺黄瓜100g在料理机打碎后用双层纱布过滤，新鲜胡椒叶30g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉15g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min。维生素c 0.75g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
[0122]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0123]
对比例11
[0124]
培养基配制方法：新鲜带刺黄瓜300g在料理机打碎后用双层纱布过滤，新鲜胡椒叶30g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉15g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min。维生素c 0.75g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
[0125]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0126]
对比例12
[0127]
培养基配制方法：新鲜带刺黄瓜200g在料理机打碎后用双层纱布过滤，新鲜胡椒叶10g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉15g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min。维生素c 0.75g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
[0128]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0129]
对比例13
[0130]
培养基配制方法：新鲜带刺黄瓜200g在料理机打碎后用双层纱布过滤，新鲜胡椒叶40g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉15g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min。维生素c 0.75g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4
℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
[0131]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0132]
对比例14
[0133]
培养基配制方法：新鲜带刺黄瓜200g在料理机打碎后用双层纱布过滤，新鲜胡椒叶10g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉15g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min。维生素c 0.25g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
[0134]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0135]
对比例15
[0136]
培养基配制方法：新鲜带刺黄瓜200g在料理机打碎后用双层纱布过滤，新鲜胡椒叶10g同样打碎取滤液，滤液中加琼脂粉15g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min。维生素c1.50g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，用孔径0.22μm的无菌滤器过滤后单独冷藏于4℃冰箱，作为添加物。使用时将培养基融化并冷却至50℃左右，加入0.1％体积的维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。
[0137]
游动孢子诱导方法同实施例2。
[0138]
效果例
[0139]
每个案例至少重复3次，使用ibmspss statistics 22软件，采用fisher的lsd(最小显著差异)法进行单向单因子分析，分析各案例结果在p＜0.05水平的差异显著性(见表1)。通过表1可以看出，本发明培养基的诱导产孢效果显著好于其他对照例，诱导的游动孢子数量是对照例的10倍以上。
[0140]
表1各实施例和对比例的游动孢子产量比较分析
[0141][0142][0143]
注：热带疫霉在各案例培养基之间的差异显著性，其中含有相同字母案例之间在
lsd单向单因素分析、p＜0.05水平差异不显著。
[0144]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：
1.诱导热带疫霉产生游动孢子的培养基，其特征在于，包括黄瓜、胡椒叶和维生素c。2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，以重量份计，包括如下组分：黄瓜
ꢀꢀ
150～250重量份胡椒叶
ꢀꢀ
20～30重量份维生素c 0.00001～0.00002重量份。3.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，以重量份计，包括如下组分：黄瓜
ꢀꢀ
150重量份胡椒叶
ꢀꢀ
20重量份维生素c 0.00002重量份或黄瓜
ꢀꢀ
200重量份胡椒叶
ꢀꢀ
30重量份维生素c 0.000015重量份或黄瓜
ꢀꢀ
250重量份胡椒叶
ꢀꢀ
25重量份维生素c 0.00002重量份或黄瓜
ꢀꢀ
200重量份胡椒叶
ꢀꢀ
30重量份维生素c 0.00001重量份。4.如权利要求1至3任一项所述的培养基，其特征在于，还包括琼脂粉15～20重量份。5.如权利要求1至4任一项所述培养基的制备方法，其特征在于，所述黄瓜的使用方法为取所述黄瓜破碎后用双层纱布过滤去渣，收集滤液；和/或所述胡椒叶的使用方法为取所述胡椒叶破碎后用双层纱布过滤去渣，收集滤液；和/或所述维生素c的使用方法为取所述维生素c配制成1000倍母液于4℃冷藏保存，使用时添加于冷却至50℃的培养基溶液中。6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述维生素c的使用方法为：取所述维生素c 0.5～1g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，过滤后于4℃保存，获得维生素c添加物；使用时以0.1％体积的所述维生素c添加物添加至50℃的培养基。7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，取所述黄瓜150～250g粉碎后过滤；取所述胡椒叶20～30g粉碎收集滤液，在所述滤液中加琼脂粉15～20g，加去离子水定容至1l，121℃灭菌20min；取所述维生素c 0.5～1g溶于50ml 1％浓度的草酸溶液中，过滤后于冷藏4℃，获得维生素c添加物；使用时将培养基融化并冷却至50℃，加入0.1％体积的所述维生素c添加物，混匀后倒入无菌培养皿中，凝固后即为培养基平板。8.如权利要求1至4任一项所述培养基或如权利要求5至7任一项所述制备方法制得的培养基在诱导热带疫霉菌游动孢子中的应用。9.热带疫霉菌游动孢子的诱导方法，其特征在于，取热带疫霉菌接种于如权利要求1至
4任一项所述培养基或如权利要求5至7任一项所述制备方法制得的培养基，培养。10.如权利要求9所述的诱导方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：将:热带疫霉菌接种于所述培养基，置于26℃培养4～7d，直至菌丝长满整个平板步骤2：抹压菌丝使其贴附在所述培养基上，在25～28℃、4000～6000lx条件下光照诱导24～48h；步骤3：加入无菌水后于4℃冷藏45～90min，于26℃恒温30～60min，收集孢子悬浮液；步骤4：观察统计游动孢子数量。

技术总结
本发明涉及微生物领域，特别涉及诱导热带疫霉产孢的培养基、制备方法及应用。本发明提供的培养基及其诱导热带疫霉菌产生游动孢子的方法，游动孢子产量达1.32


技术研发人员：高圣风 苟亚峰 刘世超 孙世伟 孟倩倩 薛超 田甜 温思为
受保护的技术使用者：中国热带农业科学院香料饮料研究所
技术研发日：2023.04.10
技术公布日：2023/7/7