一种检测总三碘甲状腺原氨酸含量的试剂盒及其检测方法与流程

1.本发明涉及人体血液中三碘甲状腺原氨酸含量检测技术，尤其涉及一种检测总三碘甲状腺原氨酸含量的试剂盒及其检测方法。


背景技术：

2.三碘甲状腺原氨酸(t3)是甲状腺分泌的一种激素，分子量为650，是一种半抗原小分子物质。血液中的t3大部分与甲状腺激素结合蛋白(tbg)、甲状腺结合前白蛋白及白蛋白结合，只有0.3％以游离状态存在，发挥生理活性的是游离的t3(ft3)。总三碘甲状腺原氨酸(tt3)是指血清或血浆中游离态和结合态三碘甲状腺原氨酸的总和，在临床上主要用于辅助诊断甲状腺功能亢进症(简称甲亢)、甲状腺功能减低症(简称甲减)及其临床疗效的评价等。游离t3检测对疾病诊断的灵敏度和特异性较好，但相对总t3而言更容易受到一些疾病和药物的干扰导致结果假性偏高或偏低，此时总t3检测结果更能准确反映体内三碘甲状腺原氨酸的状态。t3的主要生理功能有氧化生热作用、促进机体生长发育的作用、调节蛋白质、脂类及碳水化合物合成代谢的作用。临床上主要用于辅助诊断甲状腺功能亢进症(简称甲亢)、甲状腺功能减低症(简称甲减)及其临床疗效的评价等。
3.目前，t3常用的检测方法有酶免疫法、放射免疫法、化学发光法、电化学发光法。现有的这几种检测方法，都存在一定的优劣势，具体如下：
4.1)、酶免疫法它将酶催化反应的放大作用和抗原抗体亲和反应的高度专一性、特异性相结合，以酶标记的抗原或抗体作为主要试剂进行免疫测试，所以具有很高的灵敏度。样本里的抗原(自由抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一起竞争相同的抗体，当样品里的自由抗原越多，就可以结合越多的抗体，而固定抗原就只能结合到较少的抗体，反之亦然。经清洗步骤，洗去自由抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较，根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。但缺点是整体的敏感性和专一性都较差；操作过程有些繁琐，反应需要时间较长。
5.2)、放射免疫法既具有免疫反应的高特异性，又具有放射性测量的高灵敏度，因此能精确测定各种具有免疫活性的极微量的物质。但只由于使用了生物试剂，其稳定性受多种因素影响，需要有一整套质量控制措施来确保结果的可靠性。灵敏度受方法本身工作原理的限制，对体内某些含量特别低的物质尚不能测定。由于放射免疫分析是竞争性的反应，被测物和标准物都不能全部参与反应，测得的值是相对量而非绝对量。此外，还存在放射线辐射和污染等问题。
6.3)、化学发光法要是指参与化学变化的物质的发光剂利用吸收的化学能进行辐射而产生光的现象，主要包括直接化学发光和酶促化学发光。直接化学发光最常见的为吖啶酯/过氧化氢系统，其灵敏度相对较高但同时存在发光时间短等缺点。酶促化学发光主要包括辣根过氧化物酶(hrp)－鲁米诺系统、碱性磷酸酶(alp)－amppd系统等。其优势是发光信号强而稳定，且发光时间较长，但可能会存在工作曲线随时间漂移的问题。化学发光法检测
精度不高，仪器设备的成本较高。
7.4)、电化学发光是电化学和化学发光相结合的产物。它是指通过电极表面的电子转移反应生成激发态，当其返回基态时产生光辐射的现象。电化学发光经历两个过程：电化学反应和化学发光反应。以三丙胺作为电子供体，用三联吡啶钌来标记抗体(抗原)在电场环境中发生化学反应。相对于光致发光分析，电化学发光是电启动的，无需激发光源，其发光信号稳定，发光时间长，有效避免了杂散光及光源不纯所产生的干扰，极大增加了分析的灵敏度。但同时存在测量方式复杂、仪器维护成本高等缺点。
8.5)、荧光定量免疫层析技术，是免疫荧光技术(immunofluorescence technique)与传统免疫层析技术相结合发展创新的一种定量新型检测技术。该技术在保留胶体金免疫层析技术操作简便、检测快速、便携性强的优点外，还通过荧光示踪增强技术实现了检测结果的精确定量。


技术实现要素：

9.基于上述问题，本发明所要解决的问题在于提供一种采用荧光定量免疫层析技术可实现操作简便、检测快速、便携性强的检测总三碘甲状腺原氨酸含量的试剂盒及其检测方法。
10.本发明从两个技术方面来实现。
11.本发明的技术方案一如下：
12.一种检测总三碘甲状腺原氨酸含量的试剂盒，包括用于稀释样本的稀释液、检测卡及id卡芯片；所述检测卡包括长条状的pvc底板，在所述pvc底板的一个表面沿其长度方向依次排列设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸收垫，且所述硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、结合垫搭接，所述结合垫的另一端与样品垫的一端搭接；所述结合垫上设有荧光标记t3抗体和荧光标记的羊抗鸡igy抗体；所述硝酸纤维素膜上设有间隔排列的检测线和质控线，所述检测线包被t3－bsa偶联物，所述质控线包被鸡igy抗体；所述id卡芯片预存有检测标准曲线。
13.一实施例，所述试剂盒中，所述稀释液组分包括0.01m pbs、1％pvp、1％氯化钠及1％吐温。
14.一实施例，所述试剂盒中，所述荧光标记t3抗体的生物源性为鼠源单克隆igg。
15.一实施例，所述试剂盒中，所述羊抗鸡igy抗体的生物源性为羊源抗体。
16.一实施例，所述试剂盒中，所述包被t3－bsa偶联物的抗原生物源性为重组抗原。
17.一实施例，所述试剂盒中，所述包被鸡igy抗体的标记抗体生物源性为鸡源抗体。
18.一实施例，所述试剂盒中，所述羊抗鸡igy抗体标记有荧光微球。
19.本发明的技术方案二如下：
20.一种使用上述试剂盒进行总三碘甲状腺原氨酸含量的检测方法，包括如下步骤：
21.准备全血、血浆及血清样本；
22.用移液管吸取全血、血浆、血清样本各100μl，并分别加入稀释液稀释，备用；
23.用移液管分别吸取稀释后的全血、血浆、血清样本液体分别滴加到三个试剂盒中的检测卡上，置于免疫荧光检测仪中检测，分别获得全血、血浆、血清中总三碘甲状腺原氨酸含量。
24.一实施例，所述检测方法中于，所述检测卡中包括t3抗原的标记抗体、t3抗原的包被抗原、质控线的标记抗体及质控线的包被抗体。
25.一实施例，所述检测方法中于，所述t3抗原的标记抗体在检测卡上的终浓度为0.8－1mg/ml；所述t3抗原的包被抗原在检测卡上的终浓度为0.8－1mg/ml；所述用于质控线的标记抗体在检测卡上的终浓度为0.8－1mg/ml；所述用于质控线的包被抗体在检测卡上的终浓度为0.8－1mg/ml。
26.本发明提供的检测总三碘甲状腺原氨酸含量的试剂盒及其检测方法，采用荧光定量免疫层析技术，基于配套定量仪器直接检测激发荧光信号，并通过仪器内置的标准曲线即可计算出样品中待测物的含量。除了保留胶体金的优点外，还有以下优点：
①
与胶体金法相比荧光定量免疫层析具有更高的检测灵敏度；
②
结果准确，抗基质干扰强，试剂稳定性好；
③
仪器实现定量计算，剔除人为因素对结果的影响；
④
与传统定量检测技术相比，该技术具有快速、价格低廉等优点，更适于床旁及时定量快速检测。本发明使用荧光免疫层析技术中竞争法的方法定量检测血清中tt3的含量。通过优化工艺条件、性能评估、临床应用等手段建立了一个有效的tt3荧光免疫层析测定试剂盒。
27.采用本发明提供的检测方法，采用荧光定量免疫层析技术，是基于免疫学原理的定量检测方法，具有快速、操作简便、成本低的特点，应用前景广。
附图说明
28.图1为本发明提供的试剂盒中检测卡结构示意图；
29.图2为本发明提供的试剂盒中卡壳(内含检测卡)结构示意图。
具体实施方式
30.下面结合附图，对本发明的较佳实施例作进一步详细说明。
31.荧光定量免疫层析技术，是免疫荧光技术(immunofluorescence technique)和传统免疫层析技术相结合发展创新的一种定量新型检测技术。该技术在保留胶体金免疫层析技术操作简便、检测快速、便携性强的优点外，还通过荧光示踪增强技术实现了检测结果的精确定量。
32.本发明提供了一种定量测定血清、血浆和全血中总三碘甲腺原氨酸含量的荧光免疫层析试剂盒及检测方法。其具有灵敏度高、特异性强、所用试剂有良好的稳定性、检测限较宽、尤其是能消除常规荧光测定中的高背景等优点。
33.本发明的技术方案如下：
34.本发明提供的检测体血清、血浆以及全血样本中总三碘甲状腺原氨酸含量的试剂盒，用于检测血清、血浆和全血总三碘甲状腺原氨酸的浓度或含量。该试剂盒包括用于稀释样本的稀释液、检测卡及id卡芯片；其中，所述id卡芯片预存有检测标准曲线，即包含本批次试剂标准曲线信息；所述稀释液(又称为tt3稀释液)组分包括0.01m pbs、1％pvp、1％氯化钠及1％吐温。
35.如图1所示，检测卡包括长条状的pvc底板7，在所述pvc底板7的一个表面沿其长度方向依次排列设置有样品垫1、结合垫2、硝酸纤维素膜4及吸收垫6，且所述硝酸纤维素膜4的两端分别与吸收垫6、结合垫2的各自一端搭接，所述结合垫2的另一端与样品垫1的一端
搭接；结合垫上设有荧光标记t3抗体和荧光标记的羊抗鸡igy抗体；硝酸纤维素膜上设有间隔平行排列的检测线3和质控线5，检测线3包被t3－bsa偶联物，质控线5包被鸡igy抗体。
36.进一步地，如图2所示，试剂盒还包括长条状构造、硬质材质制得的卡壳8，其规格尺寸与检测卡相适配，用于纳置所述检测卡，在卡壳上设有加样孔9和检测结果观察区10。检测卡置于卡壳8内后，加样孔9与样品垫1适配对齐、检测结果观察区10与硝酸纤维素膜适配对齐，可以观察到t线和c线的颜色变化。检测时，卡壳8起到避免检测卡因柔性弯曲所带来的不变操作。
37.再进一步地，为防止检测卡污染和受潮，所述检测卡还被密封包裹在铝箔袋内、且袋内内置干燥剂。
38.上述结合垫上，涂布有免疫荧光交联三碘甲状腺原氨酸t3抗体和羊抗鸡igy荧光抗体。
39.上述硝酸纤维素膜上，设置检测线3(t线)和质控线5(c线)，该检测线t包被三碘甲状腺原氨酸t3－bsa偶联物；质控线c上包被鸡igy抗体。
40.本发明提供的试剂盒，利用荧光免疫层析的技术原理来实现，具体实现原理如下：
41.测试时，血清、血浆和全血样本分别与稀释液混匀，并滴加到试剂盒中的检测卡上的加样孔中，在毛细效应下进行层析，样本中的tt3抗原与荧光标记tt3抗体结合形成反应复合物，此时液体中待测物－荧光标记抗体复合物与未结合的荧光标记抗体共存，扩散至测试区，未与待测物结合的荧光标记tt3单克隆抗体被硝酸纤维素膜检测线上包被的tt3偶联bsa抗原捕获；样本中的tt3浓度与检测线上的复合物荧光强度成反比，根据设定的标准曲线，免疫荧光检测仪将荧光信号值转换成样本中tt3浓度。通过适用荧光免疫发分析仪，可检测出样本中血清、血浆和全血总三碘甲状腺原氨酸的浓度，仪器默认的测定结果用nmol/l作单位。
42.上述人体血清、血浆以及全血样本中总三碘甲状腺原氨酸测定试剂盒中，检测卡中的所含组件要素及组分如表1所示。
43.表1总三碘甲状腺原氨酸检测卡组件及组分
44.编号组分组分中的主要成分a样品垫玻璃纤维素膜b结合垫荧光标记的t3抗体和荧光标记的羊抗鸡抗体igy抗体c硝酸纤维素膜包被t3－bsa偶联物，质控线包被鸡igy抗体d吸收垫h－1吸水纸epvc底板 f卡壳上(下)盖 45.其中，荧光标记抗体生物源性为鼠源单克隆igg，其标记有荧光微球，所述t3－bsa偶联物的包被抗原生物源性为重组抗原，用于质控线(c线)的标记羊抗鸡igy(来源于结合垫)抗体生物源性为羊源抗体，其标记有荧光微球，用于质控线(c线)的包被鸡igy抗体生物源性为鸡源抗体；其中，荧光微球便于与缓冲液结合，获得时间分辨荧光－抗体复合物。
46.稀释液组分，按照每个组分的含量(每100ml稀释液含有1gpvp、1g氯化钠、1g吐温)，即为0.01m pbs、1％pvp、1％氯化钠及1％吐温混合制得。
47.上述检测卡中，包含有测定人体血清、血浆以及全血样本中总三碘甲状腺原氨酸
(tt3)的特异性抗体、偶联抗原；如，结合垫的t3抗体生物源性如ab1所示，硝酸纤维素膜上的t3－bsa偶联物包被抗原生物源性如ab2所示，用于c线质控的标记羊抗鸡igy抗体生物源性如ab3所示，用于c线质控的鸡igy包被抗体生物源性如ab4所示。
48.定量测定总三碘甲状腺原氨酸(tt3)的抗体的生物源性如下表2所示：
49.表2检测总三碘甲状腺原氨酸(tt3)的抗体和抗原的生物源性
[0050][0051][0052]
上述定量测定人体血清、血浆以及全血样本中总三碘甲状腺原氨酸的试剂盒，其制作实施步骤如下。
[0053]
步骤一、样品垫的制备：
[0054]
处理液的配制：0.1m bb，1％蔗糖，1％海藻糖，1％pvpk3o(聚乙烯吡咯烷酮)，0.1mg/mlrbc(人抗红细胞抗体)。
[0055]
样品垫处理：将上述处理液按50ml/张的量(宽：25，长：30cm)均匀涂抹在样品垫上，放置在温度(18～26)℃、相对湿度≤30％条件下干燥过夜(16～24)h。在温度(18～28)℃、相对湿度≤30％条件下，将干燥后的样品垫上下两条长边各裁去5mm，然后裁为(23
±
1)mm
×
(300
±
10)mm大小，备用。
[0056]
步骤二、结合垫的制备：
[0057]
免疫荧光微球的活化：取100ul固含为1％的微球悬浮液，加入到离心管中，加入2－(n－吗啉代)乙磺酸(mes)缓冲液1ml，混匀，量取30ul的edc(1－乙基－碳酰二亚胺盐盐酸盐)和nhs(n－羟基琥珀酰亚胺)(1：1)活化液与离心管中的胶乳混合，于旋转混匀仪上旋转反应30min，将反应后的悬浮液用超声波超声，使管壁上的微球重新悬浮在水溶液中然后将微球悬浮液离心，离心条件12000r/min 15min，弃去上清液，加入1ml2－(n－吗啉代)乙磺酸(mes)缓冲液，然后用超声波超声分散均匀；
[0058]
免疫荧光微球交联t3抗体：向上述活化后的微球悬浮液加入0.5mgt3抗体，旋转反应2小时，反应完成后加入10％牛血清白蛋白(bsa)进行封闭30min，将封闭好的微球分别进行4℃离心，速度为12000r/min 15min。离心结束后，弃上清，留取沉淀，加入1ml tris缓冲液(三羟甲基氨基甲烷)，超声3min，随后12000r/min，4℃，离心15min，重复一次此步骤。去上清后加入1ml微球复溶液，超声3min，2000r/min离心3min，去沉淀4℃避光保存。
[0059]
免疫荧光微球交联羊抗鸡igy抗体：向上述活化后的微球悬浮液加入0.5mg羊抗鸡igy抗体，旋转反应2小时，反应完成后加入10％牛血清白蛋白(bsa)进行封闭30min，将封闭好的微球分别进行4℃离心，速度为12000r/min 15min。离心结束后，弃上清，留取沉淀，加入1ml tris缓冲液(三羟甲基氨基甲烷)，超声3min，随后12000r/min，4℃，离心15min，重复
一次此步骤。去上清后加入1ml微球复溶液，超声3min，2000r/min离心3min，去沉淀4℃避光保存。
[0060]
免疫荧光微球交联t3抗体和免疫荧光微球交联羊抗鸡igy抗体混合：将标记后的免疫荧光微球交联t3抗体、免疫荧光微球交联羊抗鸡igy抗体按1：1(v：v)混合均匀，90w超声，工作2s，间歇5s，重复3次。
[0061]
喷垫：将玻璃纤维8964裁为(10
±
0.5)mm
×
(300
±
10)mm。荧光微球标记抗体溶液上样到喷金划线机中，按照4.0μl/cm的喷量，将其喷到剪裁后的结合垫上；将喷好的结合垫放置于(37
±
2)℃，湿度≤30％环境中里干燥过夜(16～24)h。
[0062]
步骤三：免疫层析试纸条的制备：
[0063]
包被稀释液配制：0.05m tris(三羟甲基氨基甲烷)，1％蔗糖。
[0064]
划膜：将nc膜贴在pvc板上，用上述包被稀释液将nc膜检测线上t3－bsa包被浓度稀释为1mg/ml，质控线上羊抗兔igg的包被浓度为1mg/ml。使用喷金划膜仪，在说书nc膜上的预定位置划出。优选地，划膜量为1μl/cm，划膜长度为300mm，c线和t线的距离为(5
±
0.5)mm，c线与硝酸纤维素膜下缘的距离为(10
±
0.5)mm，t线与硝酸纤维素膜上缘的距离为(10
±
0.5)mm。划膜完成后，将nc膜放置在温度(37
±
2)℃、湿度≤30％干燥箱中干燥(16～24)h。
[0065]
吸收垫的制备：将h－1吸水纸裁剪成(23
±
1)mm
×
(300
±
10)mm大小
[0066]
组装检测卡样本：将反应板平铺于工作台面上，揭开反应板上吸收垫粘贴处的保护膜，将吸收垫粘附于其上，确保吸收垫上方与底板的顶端对齐，另一侧则部分覆盖在nc膜上2～3mm。将反应板平铺于工作台面上，揭开反应板上结合垫与样品垫粘贴处的保护膜，将结合垫粘附于其上端，优选结合垫正面朝上且结合垫一端覆盖在nc膜上1～2mm。将样品垫粘附于其上，样品垫下端与pvc底板样品垫粘贴处对齐，样品垫上端覆盖在结合垫上。
[0067]
标准检测卡组装：将准备好的大板切成(3.85
±
0.05)mm宽的试纸条；将每一试纸条装入荧光卡壳下盖中，装好后，盖上上盖，置于压卡机上，调整压壳机高度为3.5mm，使荧光卡壳上下盖紧密结合。每一试剂卡装入铝箔袋中，每袋加入干燥剂1包，封口，作为标准检测卡。
[0068]
步骤四、检测效果质量判定：
[0069]
样品稀释液配制：0.01m pb，1％pvp(聚乙烯吡咯烷酮)，1％氯化钠，1％吐温。
[0070]
样品检验：取待检测的血清、血浆或全血样品100ul加入到300ul的上述样品稀释液中，待混合均匀后滴加至免疫层析试剂卡上进行免疫层析反应；随后在荧光检测器下采用与荧光胶乳微粒相对应的发射光波长进行荧光检测。荧光检测器下荧光检测时，仅在质检线上检测到信号，才能证明检测结果是有效的。
[0071]
本发明还提供一种使用上述试剂盒检测血清、血浆和全血样本总三碘甲腺原氨酸含量的检测方法：
[0072]
采集患者静脉血，置于抗凝管中摇匀，取部分全血分离出血浆、血清，分别制得全血、血浆及血清样本，备用；
[0073]
用移液管吸取全血、血浆、血清样本各100μl，并分别加入稀释液稀释，稀释备用；
[0074]
用移液管分别吸取稀释后的全血、血浆、血清样本液体滴加到三个上述试剂盒中的检测卡上，置于免疫荧光检测仪中检测，分别获得全血、血浆、血清中总三碘甲状腺原氨
酸含量。
[0075]
优选地，所述稀释液中包括t3抗原的标记抗体、t3抗原的包被抗原、质控线的标记抗体及质控线的包被抗体；其中，t3抗原的标记抗体在检测卡上的终浓度为0.8－1mg/ml，所述t3抗原的包被抗原在检测卡上的终浓度为0.8－1mg/ml，所述用于c线质控的标记抗体在检测卡上的终浓度为0.8－1mg/ml，所述用于c线质控的包被抗体在检测卡上的终浓度为0.8－1mg/ml。
[0076]
上述总三碘甲腺原氨酸含量的检测方法中，样本采样制备如下：
[0077]
样本采集方法是全血采集用含有肝素锂、edta－k2或柠檬酸钠抗凝剂的抗凝管采集受检者静脉血，将采集血样摇匀备用；血浆采集用含有肝素锂、edta－k2或柠檬酸钠抗凝剂的抗凝管采集受检者静脉血，采血后应尽快分离血浆，以免溶血；血清采集用血清管或含有促凝剂的快速血清管采集受检者静脉血，采血后应尽快分离血清，以免溶血。
[0078]
样本类型包括：全血、血浆、血清。
[0079]
优选地，所述不同样本采集后应尽可能立即使用。若不能及时检测，血清/血浆/全血室温放置可保存3小时；血清/血浆2℃～8℃放置可保存7天，全血2℃～8℃放置可保存3天；血清/血浆－20
±
5℃放置可保存90天，全血样本不能冷冻保存。冷藏、冷冻样本检测前要充分溶解混匀，并恢复至室温后方可进行测试，请勿反复冻融。
[0080]
上述总三碘甲腺原氨酸含量的检测方法的具体操作如下：
[0081]
1、打开仪器，插入与试剂批号相同的芯片；
[0082]
2、用移液器吸取100μl样本，加入到稀释液中，上下颠倒混匀；
[0083]
3、打开铝箔袋，取出检测卡，水平放置于桌面上；
[0084]
4、用移液器吸取稀释后混匀的样本100μl，加入到检测卡的加样孔中；
[0085]
5、在配套仪器上选择样本类型“血浆、血清或全血”；
[0086]
6、即时测试：待室温反应15min后，将检测卡放入仪器卡槽中，选择“即时测试”模式，点击“测试”；标准测试：将检测卡放入仪器卡槽中，选择“标准测试”模式，点击“测试”，仪器自动计时，计时结束后，自动测试并显示结果；
[0087]
7、点击“打印”，可打印检测结果报告。
[0088]
下面结合具体实施例对本发明进行清晰地描述。
[0089]
实施例1
[0090]
一种总三碘甲状腺原氨酸试剂盒的组成成分、包装及数量(1/10/25/50人份/盒)，如表3所示。
[0091]
表3试剂盒的组成成分、包装及数量
[0092][0093]
实施例2
[0094]
本技术试剂盒的线性范围性能评估实验
[0095]
将接近线性区间上限的高值样本按一定比例稀释为0.61nmol/l、1.5nmol/l、3nmol/l、6nmol/l、9.22nmol/l，各取100μl分别加入至稀释液中混合均匀，取混合液体各100μl加入至tt3检测卡加样孔中，且每一参考品各重复3次。静置反应15min之后于荧光免疫分析仪上读取浓度值。计算每一参考品3次检测结果均值，然后采用最小二乘法进行直线拟合，得出线性相关系数r。通过表4所示实验数据可以看出相关系数r＞0.9900。
[0096]
表4试剂盒线性范围检测结果
[0097][0098]
实施例2
[0099]
本技术试剂盒的空白限检测实验
[0100]
空白限：用0nmol/l tt3参考品重复测定20次，其相对t/c平均值和标准差(sd)，得出所对的数值，将其带入线性方程中，得出相应浓度值，即为空白限。通过表5所示。结果表明，本试剂盒的空白限不高于0.4nmol/l。
[0101]
表5试剂盒空白限检测结果
[0102][0103]
[0104]
实施例3
[0105]
本技术试剂盒的准确度性能评估试验
[0106]
取浓度约为1.5nmol/l、6nmol/ltt3企业参考品100ul与试剂盒中的样本稀释液充分混合，然后取100ul混合液加入试剂卡的加样孔中，静置反应15min后插入荧光免疫分析仪中，读取荧光信号t/c值，得出相应的样本浓度。通过表6所示，试验数据可看出，所有样本的相对偏差均不超过
±
15％。
[0107]
表6准确度检测结果
[0108][0109][0110]
根据上表所述结果，各质控品准确性的检测结果符合率为100％，表明本发明试剂盒的准确性检测符合要求。
[0111]
实施例4
[0112]
本技术试剂盒的重复性性能评估试验
[0113]
检测1.5nmol/l、3nmol/l的tt3企业参考品，各重复10次，分别计算10次测量结果的平均值m和标准差sd，根据公式得出变异系数(cv)。取参考品100ul与试剂盒中的样本稀释液充分混合，取100ul混合液加入试剂卡的加样孔中，静置反应15min后插入荧光免疫分析仪中，读取荧光信号t/c值，得出相应的样本浓度。通过表7所示。试验数据可看出，样本的变异系数均不超过
±
15％。
[0114]
表7试剂盒重复性检测结果
[0115]
[0116]
应当理解的是，上述针对本发明较佳实施例的表述较为详细，并不能因此而认为是对本发明专利保护范围的限制，本发明的专利保护范围应以所附权利要求为准。

技术特征：
1.一种检测总三碘甲状腺原氨酸含量的试剂盒，其特征在于，包括用于稀释样本的稀释液、检测卡及id卡芯片；所述检测卡包括长条状的pvc底板，在所述pvc底板的一个表面沿其长度方向依次排列设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸收垫，且所述硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、结合垫搭接，所述结合垫的另一端与样品垫的一端搭接；所述结合垫上设有荧光标记的t3抗体和荧光标记的羊抗鸡igy抗体；所述硝酸纤维素膜上设有间隔排列的检测线和质控线，所述检测线包被t3－bsa偶联物，所述质控线包被鸡igy抗体；所述id卡芯片预存有检测标准曲线。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稀释液组分包括0.01m pbs、1％pvp、1％氯化钠及1％吐温。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光标记t3抗体的生物源性为鼠源单克隆igg。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述羊抗鸡igy抗体的生物源性为羊源抗体。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述包被t3－bsa偶联物的抗原生物源性为重组抗原。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述包被鸡igy抗体的标记抗体生物源性为鸡源抗体。7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述羊抗鸡igy抗体标记有荧光微球。8.一种使用如权利要求1至7任一所述试剂盒进行总三碘甲状腺原氨酸含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：准备全血、血浆及血清样本；用移液管吸取全血、血浆、血清样本各100μl，并分别加入稀释液稀释，备用；用移液管分别吸取稀释后的全血、血浆、血清样本液体分别滴加到三个所述试剂盒中的检测卡上，置于免疫荧光检测仪中检测，分别获得全血、血浆、血清中总三碘甲状腺原氨酸含量。9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述检测卡中包括t3抗原的标记抗体、t3抗原的包被抗原、质控线的标记抗体及质控线的包被抗体。10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述t3抗原的标记抗体在检测卡上的终浓度为0.8－1mg/ml；所述t3抗原的包被抗原在检测卡上的终浓度为0.8－1mg/ml；所述用于质控线的标记抗体在检测卡上的终浓度为0.8－1mg/ml；所述用于质控线的包被抗体在检测卡上的终浓度为0.8－1mg/ml。

技术总结
本发明公开了一种检测总三碘甲状腺原氨酸含量的试剂盒及其检测方法，该试剂盒包括用于稀释样本的稀释液、检测卡及ID卡芯片；检测卡包括PVC底板，在PVC底板上设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸收垫；结合垫上设有荧光标记抗体；硝酸纤维素膜上设有间隔排列的检测线和质控线，所述检测线包被T3－BSA偶联物，质控线包被鸡IgY抗体；所述ID卡芯片预存有检测标准曲线。本发明提供试剂盒及其检测方面，具有灵敏度高、特异性强、所用试剂有良好的稳定性、检测限较宽、尤其是能消除常规荧光测定中的高背景等优点。中的高背景等优点。中的高背景等优点。


技术研发人员：齐文闯 蒋析文 刘双 潘秀华 朱赛云
受保护的技术使用者：广州达安基因股份有限公司
技术研发日：2021.12.29
技术公布日：2023/7/13