一种一段式混菌发酵豆粕的方法与流程

1.本发明涉及微生物发酵技术领域，尤其涉及一种一段式混菌发酵豆粕的方法。


背景技术：

2.豆粕(soybean meal,sbm)是大豆加工的副产品，其蛋白质含量高(40-60％)，氨基酸组成平衡，富含低聚糖、矿物质和维生素等，是一种优良的动物蛋白。豆粕中的小肽由是由2-20个氨基酸组成，分子量小于6000da的蛋白混合物。小肽作为豆粕的重要成分，具有多种独特的生理活性功能，小肽易消化、吸收快、抗原性低，小肽的存在能有效刺激肠道内有益菌的增殖，调节体内微生态菌群的结构，增加整个消化道对营养物质的分解、合成、吸收和利用，同时能增加动物的免疫力、抗氧化、抗菌、降血脂。另一方面，豆粕中存在胰蛋白酶抑制剂、植酸、脲酶、大豆抗原蛋白等多种抗营养因子(antinutritional factor,anf)，影响了动物对营养成分的消化、吸收、代谢，从而对动物的健康和生产性能产生不良影响。
3.目前研究的方法主要有物理法、化学水解法和微生物发酵法。物理法虽能部分降低豆粕中抗营养因子水平，但不会新增营养成分，且存在一些如加热过度使大豆的营养效价和生物学活性降低，加热不足抗营养因子去除效果不佳等问题。而化学法需要投入大量人力物力，同时某些化学试剂的残留、废液排放还可能发生产品安全性问题和环境污染问题。微生物发酵法是利用有益微生物发酵豆粕产生各种活性酶和大量有益的代谢产物，进而通过活性酶分解豆粕中的抗原物质和蛋白，降低或消除抗营养因子，同时生成大量小分子蛋白。
4.目前的混菌发酵方式大都采用两段发酵，这主要是由于不同微生物的最佳生长条件不同。但这种工艺时间长且操作繁琐，增加了人工成本，不利于大规模生产。另外，目前的混菌发酵通常需要将菌株培养到一定的生物量后再进行发酵，且几乎所有的发酵方式接种的菌种剂量都很小，这对控制发酵豆粕的品质是一个挑战，且存在被杂菌污染的风险。因此，对豆粕混菌发酵方法的改良是必要的。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种一段式混菌发酵豆粕的方法，利用贝莱斯芽孢杆菌、屎肠球菌和布拉迪酵母的最大酶活发酵液的混合发酵液协同厌氧发酵处理豆粕，在改善蛋白品质的同时，提高粗蛋白和小肽含量，降低抗营养因子水平；外源添加蛋白酶可以与微生物协同作用于蛋白质的不同位点，使蛋白质降解更彻底，丰富小肽的种类，提高小肽的含量，进而提高蛋白品质。
6.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
7.本发明提供了一种一段式混菌发酵豆粕的方法，包括如下步骤：
8.(1)将贝莱斯芽孢杆菌、屎肠球菌和布拉迪酵母分别活化、培养，得到贝莱斯芽孢杆菌发酵液、屎肠球菌发酵液和布拉迪酵母发酵液；
9.(2)将步骤(1)得到的三种发酵液按质量比3:(0.1-3):3混合，得到混合发酵液；
10.(3)将步骤(2)得到的混合发酵液、酸性蛋白酶以及豆粕按质量比55:(0.5-1):(43-45)混合后进行发酵，烘干，即得到发酵豆粕。
11.作为优选，步骤(1)所述贝莱斯芽孢杆菌发酵液的蛋白酶活为260-300u/ml，所述屎肠球菌发酵液的蛋白酶活为40-50u/ml，所述布拉迪酵母发酵液的蛋白酶活为120-130u/ml。
12.作为优选，步骤(1)所述贝莱斯芽孢杆菌培养过程中伴随震荡，所述培养的温度为37℃，所述震荡转速为150-250rpm；所述屎肠球菌为静置培养，所述静置培养的温度为37℃；所述布拉迪酵母培养过程中伴随震荡，所述培养的温度为30℃，所述震荡转速为150-250rpm。
13.作为优选，步骤(3)所述发酵在无氧环境中进行。
14.作为优选，步骤(3)所述发酵的温度为40-50℃，所述发酵的时间为3-9d。
15.作为优选，步骤(3)所述烘干的温度为40-50℃，所述烘干的时间为10-15h。
16.通过采用上述技术方案，本发明具有如下有益效果：
17.1.本发明中利用贝莱斯芽孢杆菌、屎肠球菌和布拉迪酵母的最大酶活发酵液的混合发酵液协同厌氧发酵处理豆粕，随菌体蛋白的产生和蛋白酶的作用，明显提高粗蛋白和小肽的含量。
18.2.本发明中添加的外源酸性蛋白可以与微生物协同作用于蛋白质的不同位点，使蛋白质降解更彻底，丰富小肽的种类；且在发酵过程中添加外源蛋白酶的添加量与小肽的提高呈正相关，蛋白酶从0添加到0.8％的过程中，小肽从20.40％提高到了27.51％。
19.3.通过本发明技术方案获得的发酵豆粕质地疏松，酯类和酸类呈味物质明显增加；蛋白质分解为活性肽也更彻底，大大增加了小肽的含量，有效的提高豆粕的品质。
附图说明
20.图1为一段式混菌发酵豆粕的工艺过程；
21.图2为发酵液的蛋白酶活力的测定情况；
22.图3为发酵液添加量对小肽含量影响的情况；
23.图4为外源酸性蛋白酶的添加量对小肽含量影响的情况；
24.图5为发酵温度对小肽含量影响的情况；
25.图6为发酵时间对小肽含量影响的情况；
26.图7为发酵豆粕的外观情况。
具体实施方式
27.本发明提供了一种一段式混菌发酵豆粕的方法，包括如下步骤：
28.(1)将贝莱斯芽孢杆菌、屎肠球菌和布拉迪酵母分别活化、培养，得到贝莱斯芽孢杆菌发酵液、屎肠球菌发酵液和布拉迪酵母发酵液；
29.(2)将步骤(1)得到的三种发酵液按质量比3:(0.1-3):3混合，得到混合发酵液；
30.(3)将步骤(2)得到的混合发酵液、酸性蛋白酶以及豆粕按质量比55:(0.5-1):(43-45)混合后进行发酵，烘干，即得到发酵豆粕。
31.在本发明中，所述贝莱斯芽孢杆菌是由本实验室分离自桑叶，参考“一株产中性蛋
白酶菌株的筛选及其发酵产酶条件优化”(李娜,附俊杰,刘军,等.一株产中性蛋白酶菌株的筛选及其发酵产酶条件优化[j/ol].食品工业科技.)；所述屎肠球菌购自北纳生物河南省工业微生物菌种工程技术研究中心；所述布拉迪酵母是由本实验室从贾罗工业公司(美国洛杉矶)生产的益生菌胶囊中分离出来的，参考“adaptive response and tolerance to weak acids in saccharomyces cerevisiae boulardii:a metabolomics approach”(junjie fu,etal.adaptive response and tolerance to weak acids in saccharomyces cerevisiae boulardii:a metabolomics approach[j].international journal offood science and technology.)。
[0032]
在本发明中，首先将所述贝莱斯芽孢杆菌、屎肠球菌和布拉迪酵母进行活化处理，其中所述贝莱斯芽孢杆菌的活化过程优选为：用接种环从保藏的所述贝莱斯芽孢杆菌斜面试管中勾两环菌接种到营养肉汤试管培养基中，37℃摇床活化；所述屎肠球菌的活化过程优选为：使用移液枪从屎肠球菌甘油保藏管中吸取70μl到试管中37℃深层静置活化；所述布拉迪酵母的活化过程优选为：用接种环从保藏的所述布拉迪酵母斜面试管中勾两环菌接种到营养肉汤试管培养基中，30℃摇床活化。
[0033]
在本发明中，所述贝莱斯芽孢杆菌、屎肠球菌和布拉迪酵母活化处理后需进行接种培养。
[0034]
本发明将活化后的贝莱斯芽孢杆菌优选的接种到装有100ml营养肉汤培养基的250ml三角瓶中，所述接种量优选为80-120μl/瓶，进一步的优选为90-110μl/瓶，更进一步的优选为100μl/瓶；然后进行震荡培养，所述培养的温度优选为35-39℃，进一步的优选为36-38℃，更进一步的优选为37℃；所述培养的时间优选为35-45h，进一步的优选为38-42h，更进一步的优选为40h，所述震荡转速优选为150-250rpm，进一步的优选为180-220rpm，更进一步的优选为200rpm。
[0035]
本发明将活化后的屎肠球菌优选的接种到装有200ml mrs培养基的250ml三角瓶中，所述接种量优选为80-120μl/瓶，进一步的优选为90-110μl/瓶，更进一步的优选为100μl/瓶；然后进行恒温静置培养，所述培养的温度优选为35-39℃，进一步的优选为36-38℃，更进一步的优选为37℃；所述培养的时间优选为20-26h，进一步的优选为22-25h，更进一步的优选为24h。
[0036]
本发明将活化后的布拉迪酵母优选的接种到装有100mlypd培养基的250ml三角瓶中，所述接种量优选为80-120μl/瓶，进一步的优选为90-110μl/瓶，更进一步的优选为100μl/瓶；然后进行震荡培养，所述培养的温度优选为28-32℃，进一步的优选为29-31℃，更进一步的优选为30℃；所述培养的时间优选为25-30h，进一步的优选为27-29h，更进一步的优选为28h；所述震荡转速优选为150-250rpm，进一步的优选为180-220rpm，更进一步的优选为200rpm。
[0037]
在本发明中，在所述贝莱斯芽孢杆菌、屎肠球菌和布拉迪酵母培养过程中优选的每隔5h取相应培养液测定蛋白酶活，使培养得到的所述贝莱斯芽孢杆菌发酵液的蛋白酶活优选为260-300u/ml，进一步的优选为280-290u/ml，更进一步的优选为286u/ml；所述屎肠球菌发酵液的蛋白酶活优选为40-50u/ml，进一步的优选为45-49u/ml，更进一步的优选为47u/ml；所述布拉迪酵母发酵液的蛋白酶活优选为120-130u/ml，进一步的优选为125-128u/ml，更进一步的优选为127u/ml。
[0038]
在本发明中，将培养至蛋白酶活要求的贝莱斯芽孢杆菌发酵液、屎肠球菌发酵液和布拉迪酵母发酵液混合得到混合发酵液，所述混合的质量比优选为3:(0.1-3):3，进一步的优选为3:(1.5-2.5):3，更进一步的优选为3:2:3。
[0039]
在本发明中，获得的混合发酵液依次与酸性蛋白酶、豆粕混合后发酵，所述混合的质量比优选为55:(0.5-1):(43-45)，进一步的优选为55:(0.7-0.9):(43.5-44.5)，进一步的优选为55:0.8:44.2。本发明所述发酵优选在无氧环境中进行，所述无氧环境优选的通过如下操作达到：将依次混合后的混合发酵液、酸性蛋白酶和豆粕装入厌氧袋中，并以塑封机封口挤压排除空气来达到无氧状态。本发明中所述厌氧袋总装量优选为1kg，所述装入的质量优选为厌氧袋总装量的1/2；所述发酵的时间优选为3-9d，进一步的优选为5-7d，更进一步的优选为6d；所述发酵的温度优选为40-50℃，进一步的优选为43-48℃，更进一步的优选为45℃。
[0040]
在本发明中，发酵完成后优选的进行烘干处理，具体操作为：将所述厌氧袋拆封，倒出半成品发酵豆粕在干燥容器上进行烘干。本发明所述烘干的温度优选为40-50℃，进一步的优选为43-48℃，更进一步的优选为45℃；所述烘干的时间优选为10-15h，进一步的优选为11.5-13h，更进一步的优选为12h。
[0041]
在本发明中，所述半成品发酵豆粕烘干完成后还包括用粉碎机进行粉碎的操作，粉碎后优选的过筛网，所得筛下物即为发酵豆粕成品。本发明中所述筛网的目数优选为25-50目，进一步的优选为38-43目，更进一步的优选为40目。
[0042]
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
[0043]
实施例1
[0044]
一段式混菌发酵豆粕的方法，包括如下步骤：
[0045]
(1)将100μl活化后的贝莱斯芽孢杆菌接种到装有100ml营养肉汤培养基的250ml三角瓶中，以200rpm转速在37℃的恒温震荡培养40h，得到蛋白酶活为286u/ml的贝莱斯芽孢杆菌发酵液；将100μl活化后的屎肠球菌接种到装有200ml mrs培养基的250ml三角瓶中，37℃恒温静置培养24h，得到蛋白酶活为47u/ml的屎肠球菌发酵液；将100μl活化后的布拉迪酵母接种到装有100mlypd培养基的250ml三角瓶中，以200rpm转速，30℃的恒温振荡培养28h，得到蛋白酶活为127u/ml的布拉迪酵母发酵液；
[0046]
(2)分别取103.125g贝莱斯芽孢杆菌发酵液、68.75g屎肠球菌发酵液和103.125g布拉迪酵母发酵液混合，得到混合发酵液；
[0047]
(3)将所述混合发酵液依次与4g的酸性蛋白酶、221g的豆粕混合，装入规格为1kg的厌氧袋中，以塑封机封口挤压排出空气达到无氧环境，45℃下发酵6d，得到半成品发酵豆粕；
[0048]
(4)将厌氧袋拆封倒出半成品发酵豆粕在45℃条件下烘干12h，然后粉碎，过40筛网，所述筛下物即成品发酵豆粕。
[0049]
实施例2
[0050]
一段式混菌发酵豆粕的方法，包括如下步骤：
[0051]
(1)将100μl活化后的贝莱斯芽孢杆菌接种到装有100ml营养肉汤培养基的250ml三角瓶中，以180rpm转速在37℃的恒温震荡培养42h，得到蛋白酶活为260u/ml的贝莱斯芽
孢杆菌发酵液；将100μl活化后的屎肠球菌接种到装有200ml mrs培养基的250ml三角瓶中，37℃恒温静置培养24h，得到蛋白酶活为47u/ml的屎肠球菌发酵液；将100μl活化后的布拉迪酵母接种到装有100mlypd培养基的250ml三角瓶中，以220rpm转速，28℃的恒温振荡培养28h，得到蛋白酶活为127u/ml的布拉迪酵母发酵液；
[0052]
(2)分别取103.125g贝莱斯芽孢杆菌发酵液、68.75g屎肠球菌发酵液和103.125g布拉迪酵母发酵液混合，得到混合发酵液；
[0053]
(3)将所述混合发酵液依次与3g的酸性蛋白酶、221g的豆粕混合，装入规格为1kg的厌氧袋中，以塑封机封口挤压排出空气达到无氧环境，45℃下发酵6d，得到半成品发酵豆粕；
[0054]
(4)将厌氧袋拆封倒出半成品发酵豆粕在45℃条件下烘干12h，然后粉碎，过40筛网，所述筛下物即成品发酵豆粕。
[0055]
实施例3
[0056]
一段式混菌发酵豆粕的方法，包括如下步骤：
[0057]
(1)将100μl活化后的贝莱斯芽孢杆菌接种到装有100ml营养肉汤培养基的250ml三角瓶中，以200rpm转速在37℃的恒温震荡培养40h，得到蛋白酶活为286u/ml的贝莱斯芽孢杆菌发酵液；将100μl活化后的屎肠球菌接种到装有200ml mrs培养基的250ml三角瓶中，37℃恒温静置培养24h，得到蛋白酶活为45u/ml的屎肠球菌发酵液；将100μl活化后的布拉迪酵母接种到装有100mlypd培养基的250ml三角瓶中，以180rpm转速，28℃的恒温振荡培养28h，得到蛋白酶活为125u/ml的布拉迪酵母发酵液；
[0058]
(2)分别取103.125g贝莱斯芽孢杆菌发酵液、65g屎肠球菌发酵液和103.125g布拉迪酵母发酵液混合，得到混合发酵液；
[0059]
(3)将所述混合发酵液依次与4g的酸性蛋白酶、210g的豆粕混合，装入规格为1kg的厌氧袋中，以塑封机封口挤压排出空气达到无氧环境，45℃下发酵6d，得到半成品发酵豆粕；
[0060]
(4)将厌氧袋拆封倒出半成品发酵豆粕在45℃条件下烘干12h，然后粉碎，过40筛网，所述筛下物即成品发酵豆粕。
[0061]
试验例1发酵液蛋白酶活的测定
[0062]
在贝莱斯芽孢杆菌、屎肠球菌和布拉迪酵母培养发酵过程中每隔5h取相应培养液测定蛋白酶活，如图2所示，三种菌在培养发酵过程中都呈现出相似的趋势，在开始的前8h没有明显的差别，在第8h后开始出现明显的上升，达到最大酶活后开始略微降低，最后保持平缓。其中贝莱斯芽孢杆菌的酶活力上升时间更久，从8到40h，酶活力最高，在16h后蛋白酶活急剧升高，并在第40h达到了最大值286u/ml；其次是布拉迪酵母的酶活力在第8到16h高于其它两个菌株，此后在第28h最大达到了126u/ml；屎肠球菌的蛋白酶活力最低，活力则缓慢增长在第24h达到了47u/ml。本发明采用的培养至最大蛋白酶活的发酵液对豆粕进行处理。
[0063]
试验例2发酵液混合比例的确定
[0064]
本发明利用贝莱斯芽孢杆菌作为好氧的细菌在前期液体发酵积累，形成了大量的细胞内外的产物后再参与到后期豆粕的固体厌氧发酵中来，而屎肠球菌和布拉迪酵母能在无氧的环境中生长，同样通过前期液体发酵积累，更是利用其在后期的固体厌氧环境中的
微生物活动产酸增香提高豆粕品质。研究表明发酵的过程中伴随菌体蛋白的产生和蛋白酶的作用，会明显提高粗蛋白和小肽含量。如表1所示，当贝莱斯芽孢杆菌发酵液、屎肠球菌发酵液和布拉迪酵母发酵液的质量比为组合9(即3:2:3)时，发酵豆粕中粗蛋白55.81g/100g，小肽6.99％，并且蛋白溶解度70.26％较好。
[0065]
表1各发酵液混合比例对发酵豆粕的影响
[0066][0067]
试验例3混合发酵液添加量的确定
[0068]
发酵豆粕的含水量是由豆粕中的结合水与添加的混合发酵液组成，含水量越高则混合发酵液的添加量越高，越高的混合发酵液含量带来的是高蛋白酶含量。混合发酵液添加量对豆粕小肽的影响如图3所示，小肽随着混合发酵液的含量的升高而逐渐升高，在混合发酵液添加量达到40％时，小肽达到了13.20％；对比混合发酵液添加量达到55％时，小肽达到了18.20％，小肽从13.20％提高到18.20％，这表明混合发酵液的添加量在提高小肽的过程中有及其重要的作用，考虑到过高的混合发酵液会导致干燥发酵豆粕成本过高，因此确定最佳的混合发酵液的添加量为55％。
[0069]
试验例4外源酸性蛋白酶的添加量的确定
[0070]
微生物降解大豆蛋白的能力有限，添加适量的蛋白酶可以显著提高发酵效率，酸性蛋白酶具有较好的蛋白酶切割位点。添加蛋白酶可以与微生物协同作用于蛋白质的不同位点，使蛋白质降解更彻底，丰富小肽的种类。外源酸性蛋白酶对发酵的影响如图4所示，添加酸性蛋白酶对小肽提高中有明显作用，发酵酶解的过程中，酸性蛋白酶的添加是蛋白品质提高的主要原因。添加蛋白酶后小肽含量最高为31.22％，相比不添加蛋白酶的小肽含量18.74％大大增加。由于过高的蛋白酶会大大增加成本，因此确定最佳的蛋白酶添加量为0.8％。
[0071]
试验例5发酵温度的确定
[0072]
基于实施例1，添加完豆粕拌匀后，装入厌氧袋中，并分别将厌氧袋放入不同发酵温度(30℃、35℃、40℃、45℃、50℃)的恒温培养箱发酵，测定样品小肽含量。
[0073]
适于蛋白酶作用的最佳温度通常大大高于菌株生长的发酵温度，不同菌株的最适生长温度也不同，在菌株和酶的协同发酵中，温度的选择应同时考虑蛋白酶作用和菌株代谢。如图5所示，随着温度的升高豆粕中小肽逐渐升高，表明温度对提高小肽有明显作用，在温度为45℃的时候小肽达到了最大含量36.90％；当继续增加温度示，小肽的含量有所下降，过高的温度可能影响了菌株在发酵酶解过程中的生长；当温度较低时，又会显著抑制蛋白酶活性。因此，确定最适的温度为45℃。
[0074]
试验例6发酵时间的确定
[0075]
基于实施例1，将厌氧袋放入最适发酵温度的恒温培养箱，分别在发酵的第1至8d取出，测定样品小肽含量。
[0076]
发酵过程涉及微生物的生长和代谢以及蛋白酶的降解作用，这一过程时间的长短对豆粕发酵的影响如图6所示，发酵开始时，发酵液中的蛋白酶与外源蛋白酶协同降解豆粕蛋白质，在4d内，随着发酵酶解的时间增加小肽含量增长迅速，在第6d达到了47.40％。随着发酵的进行，营养物质和培养基ph值逐渐降低，发酵微生物生长缓慢，蛋白酶活性逐渐丧失。在发酵后期，培养基中含有大量的有机酸，酸解对蛋白质的降解起主要作用，但这种降解过程效率低，耗时长，因此，小肽含量的几乎没有改变。考虑到发酵的周期以提高生产效率，确定最佳的发酵酶解时间为6天。
[0077]
试验例7成品发酵豆粕的确定
[0078]
豆粕经过发酵、干燥后颜色变深，豆粕为黄色，而发酵豆粕为黄褐色，如图7所示，左边为豆粕，右边为发酵豆粕。
[0079]
试验例8成品发酵豆粕香气成分的测定
[0080]
对发酵豆粕进行挥发性化合物的gc-ms分析检测，所用gc-ms联用仪为agilent 5975b(购自于美国agilent公司)。方法：称取2g待测样品于20ml顶空瓶中，加入2.88g氯化钠、8ml蒸馏水，超声波震荡均匀，拧紧盖子，70℃下预处理10min。将进样针插入到萃取瓶中，在70℃下萃取40min，取出进样针，将进样针插入气相色谱进样口，于230℃解吸3min后抽出针，开始运行。色谱条件：色谱柱db-wax，60m
×
250μm
×
0.25μm；流速：1ml/min；升温程序：开始温度40℃保持5min，以5℃/min升温到60℃，再以10℃/min升温到230℃，维持10min；汽化室230℃；载气为氦气。
[0081]
检测结果如表2，豆粕中仅含有少量的醇和烷类挥发性成分，而在发酵豆粕中的酯类和酸类呈味物质明显增加；乙酸苯乙酯呈甜的玫瑰和蜂蜜香气、棕榈酸乙酯呈微弱蜡香、果爵和奶油香气，正己酸有类似于干奶酪气味、苯乙醇具有清甜的玫瑰样花香、正辛酸和壬酸都具有特殊的香味，这些物质共同赋予了发酵豆粕一种特殊的成熟酸香味。
[0082]
表2豆粕和发酵豆粕中挥发性化合物的gc-ms分析
[0083]
[0084][0085]
试验例9成品发酵豆粕营养成分的测定
[0086]
通过微生物的发酵作用，可以有效的提高豆粕的品质。一方面，豆粕经微生物发酵后，蛋白质被分解为活性肽，大大增加了小肽的含量；另一方面微生物发酵能大大降低豆粕中抗营养因子的水平，使得豆粕产品安全可靠。除此之外，发酵豆粕富含多种微生物酶类可补充机体内源酶不足，加强营养物质的消化，提高动物对蛋白质和能量的利用率。发酵豆粕富含多种营养物质如乳酸、维生素、氨基酸、未知促生长因子等，具有特有的发酵香味，适口性好，增加动物的采食量，促进动物生长。在发酵的过程中营养成分的变化如表3，菌体的代谢活动产生了蛋白质，使得发酵豆粕的粗蛋白含量由51.43g/100g提高到53.83g/100g；发酵的前期，豆粕的品质急剧变化，可以观察到明显的美拉德反应，这个过程中，发酵豆粕产酸增香，乳酸含量积累从1.13g/100g提高到5.22g/100g，增加了361.95％。
[0087]
表3豆粕和发酵豆粕的营养成分分析
[0088][0089][0090]
由以上实验可知，本发明技术方案利用贝莱斯芽孢杆菌、屎肠球菌和布拉迪酵母的最大酶活发酵液的混合发酵液协同厌氧发酵处理豆粕，在改善蛋白品质的同时，提高了粗蛋白和小肽含量，降低了抗营养因子水平；外源添加蛋白酶液使得蛋白质降解更彻底，丰富了小肽的种类，提高了小肽的含量，进而提高蛋白品质，获得了更好品质的发酵豆粕。
[0091]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种一段式混菌发酵豆粕的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将贝莱斯芽孢杆菌、屎肠球菌和布拉迪酵母分别活化、培养，得到贝莱斯芽孢杆菌发酵液、屎肠球菌发酵液和布拉迪酵母发酵液；(2)将步骤(1)得到的三种发酵液按质量比3:(0.1-3):3混合，得到混合发酵液；(3)将步骤(2)得到的混合发酵液、酸性蛋白酶以及豆粕按质量比55:(0.5-1):(43-45)混合后进行发酵，烘干，即得到发酵豆粕。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述贝莱斯芽孢杆菌发酵液的蛋白酶活为260-300u/ml，所述屎肠球菌发酵液的蛋白酶活为40-50u/ml，所述布拉迪酵母发酵液的蛋白酶活为120-130u/ml。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述贝莱斯芽孢杆菌培养过程中伴随震荡，所述培养的温度为35-39℃，所述震荡转速为150-250rpm；所述屎肠球菌为静置培养，所述静置培养的温度为35-39℃；所述布拉迪酵母培养过程中伴随震荡，所述培养的温度为28-32℃，所述震荡转速为150-250rpm。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述发酵在无氧环境中进行。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述发酵的温度为40-50℃，所述发酵的时间为3-9d。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述烘干的温度为40-50℃，所述烘干的时间为10-15h。

技术总结
本发明属于微生物发酵技术领域，本发明提供了一种一段式混菌发酵豆粕的方法，利用贝莱斯芽孢杆菌、屎肠球菌和布拉迪酵母三者的最大酶活发酵液得到混合发酵液，再与酸性蛋白酶、豆粕混合发酵来得到发酵豆粕。本发明所述方法利用混菌菌酶协同厌氧发酵处理豆粕，能在改善蛋白品质的同时，提高粗蛋白和小肽含量，降低抗营养因子水平；外源添加蛋白酶可以与微生物协同作用于蛋白质的不同位点，使蛋白质降解更彻底，丰富小肽的种类，提高小肽的含量，进而提高蛋白品质。高蛋白品质。高蛋白品质。


技术研发人员：刘军 李丽 王川 赵琦锴 王景峰 邱孝智
受保护的技术使用者：乐山恒峰华邦生物科技有限公司
技术研发日：2023.03.21
技术公布日：2023/7/18