Cux1抑制剂及其用途

cux1抑制剂及其用途
技术领域
1.本发明涉及生物医药领域，特别涉及cux1抑制剂及其用途。


背景技术：

2.皮肤干燥症可以分为生理性皮肤干燥症和病理性皮肤干燥症。其中，病理性皮肤干燥症往往伴随一些皮肤疾病出现，如银屑病、特应性皮炎和鱼鳞病等，其临床特征主要表现为皮肤干燥、粗糙，外观似网格状或铺路石样，显示不同程度皮肤增生、鳞屑和脱屑，常伴红斑、裂纹和瘙痒。病理性皮肤干燥症目前仍无很好的治疗手段，已成为一个棘手的医疗负担。因此，研究病理性皮肤干燥症的致病机制，寻找潜在的治疗靶点和特异性药物成为十分重要的研究方向。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于提供cux1抑制剂。
4.本发明的另一目的在于提供cux1抑制剂的用途。
5.本发明的另一目的在于提供治疗与cux1过表达相关的疾病的方法。
6.本发明的另一目的在于提供降低细胞中cux1表达水平的方法。
7.为解决上述技术问题，本发明的第一方面，提供了cux1抑制剂的用途，用于制备药物或药物组合物，所述药物或组合物用于：
8.(i)降低slc39a1的表达水平；
9.(ii)降低cux1的表达水平；
10.(iii)降低bmpr1a、bmpr2和/或egfr的表达水平；
11.(iv)降低cdk2、ccnd1、ccnd2和/或ccne1的表达水平；
12.(v)降低krt6a、hes1、ctnbp1、cebpb、aqp3和/或mafb的表达水平；
13.(vi)抑制角质细胞增殖；和/或
14.(vii)预防和/或治疗与cux1过表达相关的疾病。
15.在一些优选的方案中，所述应用为体外非治疗性。
16.在一些优选的方案中，与cux1过表达相关的疾病包括病理性皮肤干燥症及其并发症。
17.在一些优选的方案中，所述病理性皮肤干燥症的并发症包括表皮增生症、银屑病、特应性皮炎和鱼鳞病。
18.在一些优选的方案中，所述cux1抑制剂选自：sirna、microrna、shrna、dsrna、抗体、化合物或其组合。
19.本发明的第二方面，提供了一种cux1抑制剂，所述cux1抑制剂为靶向cux1的sirna，所述sirna的目标序列选自以下任一种：
20.(i)如seq id no.2所示的多核苷酸序列；和
21.(ii)与seq id no.2所示的多核苷酸序列同源性≥90％，较佳地≥95％，更佳地≥
98％，最佳地≥99％的多核苷酸序列。
22.本发明的第三方面，提供了一种cux1抑制剂，所述cux1抑制剂为靶向cux1的shrna，所述shrna由包括如第一序列单元、与第一序列互补的第二序列单元和位于两者之间的茎环序列单元，
23.所述第一序列单元包括如seq id no.2所示的多核苷酸序列。
24.本发明的第四方面，提供了一种用于(i)抑制皮肤增生，和/或(ii)缓解或改善皮肤干燥，和/或(iii)缓解或改善皮肤瘙痒，和/或(iv)缓解或改善皮肤炎症，和/或(v)抑制角质细胞增殖，和/或(vi)治疗病理性皮肤干燥症及其并发症的组合物，所述组合物包括：抑制细胞内cux1表达的物质和/或促进细胞内cux1降解的物质。
25.优选地，本发明的组合物可用于美容或药学并且特别是可用于皮肤病学应用。
26.在一些优选的方案中，所述组合物为药物组合物，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体或赋型剂。
27.在一些优选的方案中，所述药学上可接受的载体或赋形剂选自：经纯化的蒸馏水、植物油、麻油、茶油、桃仁油、橄榄油、花生油、油酸乙酯、苯甲酸酯、丙二醇、聚乙二醇、二甲基乙酰胺、乙醇、甘油、山梨糖醇、甘露醇、苯甲醇、凡士林、石蜡、羊毛脂、峰蜡、二甲基硅油、十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸镁、聚氧乙烯单硬酯酸镁、edta、滑石粉、微粉硅胶、淀粉、硬脂酸镁、明胶、糊精、琼脂、阿拉伯胶、纤维素、甲基羟基苯甲酸酯、丙基羟基苯甲酸酯、聚乙烯吡咯烷酮和卵磷脂。
28.在一些优选的方案中，所述组合物为化妆品组合物，所述化妆品组合物还包括化妆品可接受的辅料。
29.在一些优选的方案中，所述化妆品可接受的辅料选自溶剂、增溶剂、防腐剂、抗氧化剂、ph调节剂、促渗剂、脂质体、保湿剂、增稠剂、螯合剂、肤感调节剂、表面活性剂、乳化剂、推进/抛射剂、香精、色素，以及其他功效添加剂。
30.在一些优选的方案中，所述化妆品组合物选自以下任一种形式：化妆水、乳液、化妆霜、精华、面膜、膏状凝胶、喷雾、香皂、洗面奶、沐浴露、洗发露、护发素、粉底、粉霜、身体乳或按摩膏。
31.本发明的第五方面，提供了一种(i)抑制皮肤增生，和/或(ii)缓解或改善皮肤干燥，和/或(iii)缓解或改善皮肤瘙痒，和/或(iv)缓解或改善皮肤炎症，和/或(v)抑制角质细胞增殖，和/或(vi)治疗病理性皮肤干燥症及其并发症的方法，所述方法包括步骤：向受试者施用至少一种选自以下的物质：
32.(i)抑制细胞内cux1表达的物质；
33.(ii)促进细胞内cux1降解的物质；
34.(iii)降低细胞内krt17、defb6、ctnnb1、marcks、cdk4、ddit4、srsf2、tubb5、crip1、ccl2、smc4、hist1h1b、pclaf、slc39a10、top2a、mki67、hes1、cd74、postn、krt71、ler3、krt79、adamts1、krt14、krt5、krt6a、gja1、stfa3、fam162a、ptgs2、atp1a1、lars2、fgfbp1、ll33、stfa1、ctsc、klf4、ovol1、ggct、dusp1、krt16、ccdc711、fabp5、mafb、krt1、ankfy1、teddm3、krt6b、phlda1、casp14、aprr1b、flg、blmh、cebpb、ppif、klk8、arc和/或ccl20表达水平的物质；
35.(iv)增加细胞内thbs1、sparc、dst、krt15、ccl27a、txnip、col1a1、col1a2、
col3a1、actg1、cdkn1a、tacstd2、plet1、fosl1、pof1b、slc6a14、dapl1、ssfa2、spink5、cysrt1、krt80、rgcc、eppk1、sbsn、sdc4、lce1m、wfdc21、egr1和/或hspb1表达水平的物质。
36.本发明的第六方面，提供了一种降低细胞中cux1表达水平的方法，所述方法包括步骤：在本发明第一方面所述的sirna存在的条件下培养细胞，从而降低所述细胞中cux1的表达水平。
37.在一些优选的方案中，将含有靶向cux1的shrna的多核苷酸序列的载体导入培养细胞。
38.在一些优选的方案中，所述载体为慢病毒载体。
39.本发明相对于现有技术而言，至少具有下述优点：
40.(1)本发明中创新性地研究了慢性皮肤干燥症小鼠模型的单细胞转录组图谱，并通过生物信息学分析发现了若干潜在的慢性皮肤干燥症的治疗靶点，为后续药物研发奠定基础；
41.(2)本发明中创造性地发现了新型皮肤干燥诱发的cux1+增殖型基底细胞，通过配体受体研究确认了其作用和影响机制，并通过基因敲除实验证实了cux1阳性基底细胞与银屑病患者表皮增生病症密切相关，因此，cux1抑制剂可广泛用于治疗表皮增生类皮肤疾病；
42.(3)本发明中还设计了cux1抑制剂。
43.应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
44.一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。
45.图1是根据本发明实施例中水和aew处理的小鼠皮肤样本的进行scrna-seq过程示意图；
46.图2是根据本发明实施例中umap图，示出在所有样本中，细胞的异质性，即总样本能被分为八个不同的细胞群并分别以不同颜色编码。在图的右侧注释了每个细胞群的名称和每个细胞群占总细胞数的百分比；
47.图3是根据本发明实施例中对标准化处理后的细胞群标记基因表达量用不同颜色进行编码并投射在umap图上所得图像；
48.图4是根据本发明实施例中显示不同细胞类型的代表性标记基因的平均表达水平的点图；
49.图5是根据本发明实施例中水和aew组数据集的分别的umap图，其中每个点对应一个细胞，根据细胞类型着色；
50.图6是根据本发明实施例中来自水和aew组的每种细胞类型占总细胞数量的平均百分比图；
51.图7是根据本发明实施例中upset图显示水组和aew组主要细胞类型中上调的degs(左)和下调的degs(右)的综合比较分析，上调的degs：在aew组上调，在水组下调；下调的degs：在水组上调，在aew组下调；
52.图8是根据本发明实施例中根据不同皮肤细胞类型的功能富集分析，在上调的degs(左)和下调的degs(右)中富集的，具有代表性的go项目和通路，"计数"表示基因数量，颜色标尺，从粉色到红色(左)，或从灰色到蓝色(右)，表示p值的范围；
53.图9是根据本发明实施例中五个kc亚群的umap图，并在总样本中用颜色编码，图右侧注释了每个亚群的名称和每个细胞亚群占总细胞数的百分比；
54.图10是根据本发明实施例中经标准化处理后的细胞亚群标记基因表达量用不同颜色进行编码并投射在umap图所得图像；
55.图11是根据本发明实施例中不同细胞类型的代表性标记基因的平均表达水平点图；
56.图12是根据本发明实施例中水和aew数据集的分别的umap图，图中每个点对应于一个细胞，根据亚群类型着色；
57.图13是根据本发明实施例中来自water和aew组的每个亚群的平均细胞百分比图；
58.图14是根据本发明实施例中不同kc亚群的功能富集分析中具有代表性的，富集于上调的degs的go项目和通路示意图，图中计数"表示基因数量，颜色标尺从粉色到红色表示p值的范围；
59.图15是根据本发明实施例中水组和aew组不同kc亚群中不同go生物过程的基因集得分分析，水平线代表中位数，纵向标线延伸到最大四分位数的1.5倍范围内的最远数据点，两侧wilcoxon排名和用于确定统计学意义，*p《0.05；**p《0.01；***p《0.001；ns,没有统计学差异；
60.图16是根据本发明实施例中点阵图显示水组和aew组之间至少有三个亚群共享的不同kc亚群的上调基因，圆点大小与特定亚群的百分比呈正相关，颜色标尺从灰色到红色表示基因表达水平从低到高；
61.图17是根据本发明实施例中aew处理过的表皮细胞的pbc、bc、sc和gc亚群的轨迹重建，显示为一个线性的伪时序进展，pbc：增殖型基底细胞；bc：基底细胞；sc：刺细胞；gc：颗粒细胞；
62.图18是根据本发明实施例中pbc、bc、sc和gc亚群标记基因在整个线性伪时序轨迹中的表达情况示意图；
63.图19是根据本发明实施例中热图显示随着伪时序(列)呈现差异表达的基因(行)被分层聚类为四个集群，图右侧注释了每个聚类的代表性通路；
64.图20是根据本发明实施例中aew组kc亚群中上调的degs与轨迹相关基因之间58个交集基因的表达水平热图；
65.图21是根据本发明实施例中aew组kc亚群中下调的degs与轨迹相关基因之间31个交集基因的表达水平热图；
66.图22是根据本发明实施例中进一步细分的两个pbc亚群的umap图，在总样本中分别用不同颜色编码两类pbc亚群，图右侧注释了每个亚群的名称和颜色；
67.图23是根据本发明实施例中热图显示col17a1
hi pbc或cux1
hi pbc中高表达的代表性基因的表达水平，从蓝色到红色的颜色标尺表示基因表达水平从低到高，图右侧注释了与该基因相关的通路；
68.图24是根据本发明实施例中对标准化处理后的标记基因表达量用不同颜色进行
编码并投射在umap图上，以方便识别两类pbc；
69.图25是根据本发明实施例中col17a1
hi pbc和cux1
hi pbc在water和aew数据集中的分别的umap图，每个点对应于一个细胞，根据细胞类型着色。黑色箭头代表细胞的发育方向；
70.图26是根据本发明实施例中.rnascope数据显示cux1 rna和ki67蛋白、col17a1 rna和ki67蛋白在水和aew处理过的皮肤中的空间分布，白色标尺代表50mm，白框内区域的放大图像显示在右侧，以突出阳性细胞的细节，比例条代表5mm，直方图表示阳性细胞的百分比的统计结果，每组n＝3只小鼠，数据以平均值
±
sem表示，用学生t检验来确定统计学意义，**p《0.01；ns,没有统计学差异；
71.图27是根据本发明实施例中col17a1
hi
和cux1
hi pbc的轨迹分析结果，按亚群着色；
72.图28是根据本发明实施例中箱形图显示col17a1
hi
和cux1
hi pbc的cytotrace值；
73.图29是根据本发明实施例中两种pbc状态和其他皮肤细胞类型在水组和aew组的传入通讯模式热图，每个信号通路的相对强度以灰色到蓝色的颜色编码；
74.图30是根据本发明实施例中两个pbc状态和其他皮肤细胞类型在水组和aew组的传出通讯模式热图，每个信号通路的相对强度以灰色到绿色的颜色编码；
75.图31是根据本发明实施例中根据在水组和aew组之间的信号网络中的整体信息流的差异对所有重要的信号通路进行排序图，上方标注红色的信号通路在aew组中更为丰富，中间标注黑色的信号通路在两组中同样丰富，底部标注绿色的信号通路在water组中更为丰富；
76.图32是根据本发明实施例中小提琴图显示水组和aew组之间tnf、vegfa、bmp2和hbegf信号的相关配体和受体基因的表达水平；
77.图33是根据本发明实施例中圆形图显示aew组不同细胞群之间的tnf-tnfrsf1a信号传导网络，每个细胞类型都用不同颜色编码，线条宽度代表通讯概率；
78.图34是根据本发明实施例中aew组的vegfa-flt1信号网络；
79.图35是根据本发明实施例中aew组的bmp2-bmpr1a和bmp2-bmpr2信号网络；
80.图36是根据本发明实施例中aew组中的hbegf-egfr信号网络；
81.图37是根据本发明实施例中转染cux1 shrna组和对照组的相对cux1表达量，每组n＝3次重复，数据以平均值
±
sem表示。用学生t检验来确定统计学意义，**p《0.01；
82.图38是根据本发明实施例中转染cux1 shrna组和对照组的cck8增殖事实验。数据以平均值表示，误差太小，不显示在图中，采用学生t检验来确定统计学意义，****p《0.0001；
83.图39是根据本发明实施例中转染cux1 shrna组和对照组的克隆形成实验代表图；
84.图40是根据本发明实施例中转染cux1 shrna组和对照组的流式细胞仪分析结果，左方为代表性的结果图，直方图表示每个细胞周期阶段的细胞比例的统计结果，数据以平均值
±
sem表示，用学生t检验来确定统计学意义，****p《0.0001；ns，没有统计学差异；
85.图41是根据本发明实施例中.qpcr显示转染cux1 shrna组和对照组的特定细胞周期相关基因的表达水平，数据以平均值
±
sem表示。用学生t检验来确定统计学意义，*p《0.05；**p《0.01；***p《0.001；ns，没有统计学差异；
86.图42是根据本发明实施例中银屑病模型小鼠scrna-seq数据(gse165021)的kc细胞亚群中，增殖标记基因如ube2c、top2a和mki67的标准化表达水平，用颜色编码各基因表达水平并投影在umap图上；
87.图43是根据本发明实施例中银屑病患者scrna-seq数据(gse162183)的kc细胞亚群中，增殖标记基因如ube2c、top2a和mki67的标准化表达水平，用颜色编码各基因表达水平并投影在umap图上；
88.图44是根据本发明实施例中gse165021数据集中pbc和其他类型kc的umap图；
89.图45是根据本发明实施例中数据集gse165021中pbc和其他类型kc的平均细胞百分比图；
90.图46是根据本发明实施例中gse162183数据集中pbc和其他类型kc的umap图；
91.图47是根据本发明实施例中数据集gse162183中pbc和其他类型kc的平均细胞百分比图；
92.图48是根据本发明实施例中健康对照组和银屑病患者pbc中cux1的表达水平图；
93.图49是根据本发明实施例中免疫荧光染色结果显示cux1和ki67蛋白在银屑病患者和健康对照组的皮肤切片中的空间分布，白色标尺代表50m，白色框内区域的放大图像显示在右侧，以突出阳性细胞的细节，比例尺代表10m，直方图代表阳性细胞百分比的统计结果，健康组n＝9，银屑病组n＝8，数据以平均值
±
sem表示，用学生的t检验来确定统计学意义，**p《0.01；
94.图50是根据本发明实施例中水和aew处理过的皮肤的he染色图，黑色比例尺代表200m，右侧显示了黑框区域的放大图像，以突出表皮层的细节，比例尺代表20m，直方图代表表皮厚度的统计结果，每组n＝3只小鼠，数据以平均值
±
sem表示，用学生t检验来确定统计学意义，**p《0.01；ns,没有统计学差异；
95.图51是根据本发明实施例中水和aew处理过的皮肤的masson's染色；
96.图52是根据本发明实施例中散点图显示scrna-seq分析中使用的质量控制指标，左图显示了映射到线粒体基因组的读数百分比，右图显示了每个细胞中检测到的独特基因的数量；
97.图53是根据本发明实施例中本研究中产生的全部scrna-seq数据集的各种质量控制指标的小提琴图；
98.图54是根据本发明实施例中细胞异质性的umap图，在四个单独的样本中，鉴定出八个不同的细胞群并以不同颜色编码，图右侧注释了每个细胞群的名称；
99.图55是根据本发明实施例中从四个单独的样本中得出的每种细胞类型的平均细胞百分比；
100.图56是根据本发明实施例中水组和aew组八个细胞类型在炎症反应基因集得分分析，水平线代表中位数，纵向标线延伸到最大四分位数的1.5倍范围内的最远数据点，两侧wilcoxon排名和用于确定统计学意义，*p《0.05；**p《0.01；***p《0.001；ns,没有统计学差异；
101.图57是根据本发明实施例中"炎症反应"go基因集中的基因与八个细胞群中的上调degs之间的交集基因点图；
102.图58是根据本发明实施例中八个细胞类型在细胞外基质组织基因集得分分析图；
103.图59是根据本发明实施例中八个细胞群中"细胞外基质组织"go基因集中的基因与上调degs之间的交集基因点图；
104.图60是根据本发明实施例中在五类kc亚群的功能富集分析中，具有代表性的，富集于下调的degs的go项目和通路。"计数"表示基因数量。颜色标尺从灰色到蓝色表示p值的范围；
105.图61是根据本发明实施例中在五类kc亚群中与紧密连接组织相关的基因集得分分析图，水平线代表中位数，纵向标线延伸到最大四分位数的1.5倍范围内的最远数据点，两侧wilcoxon排名和用于确定统计学意义，*p《0.05；**p《0.01；***p《0.001；ns,没有统计学差异；
106.图62是根据本发明实施例中在五类kc亚群中与紧密连接组织相关的基因集得分分析图；
107.图63是根据本发明实施例中"紧密连接组织"go基因集中的基因与五个kc亚群中下调的degs之间的交集基因点图；
108.图64是根据本发明实施例中"细胞外基质组织"go基因集中的基因与五个kc亚群中下调的degs之间的交集基因点图；
109.图65是根据本发明实施例中pbc、bc、sc和gc的cytotrace值方框图；
110.图66是根据本发明实施例中scorpius基于scrna-seq数据创建了一个精确的表皮细胞发育模型图；
111.图67是根据本发明实施例中在aew组的kc亚群中分泌因子的表达水平热图；
112.图68是根据本发明实施例中在aew组的kc亚群中细胞外基质的表达水平热图；
113.图69是根据本发明实施例中在aew组的kc亚群中转录因子的表达水平热图；
114.图70是根据本发明实施例中.免疫荧光染色结果显示ki67蛋白在水处理和aew处理的皮肤中的分布，白色标尺代表25m，直方图表示阳性细胞百分比的统计结果，每组n＝3只小鼠。数据以平均值
±
sem表示，用学生t检验来确定统计学意义，**p《0.01；
115.图71是根据本发明实施例中两组pbc中的选定的标记基因的表达水平图；
116.图72是根据本发明实施例中免疫荧光染色结果图，ki67蛋白在银屑病患者和健康对照组的皮肤切片中的空间分布，白色标尺代表50m，直方图代表阳性细胞百分比的统计结果，健康组n＝9，银屑病组n＝8，数据以平均值
±
sem表示。用学生t检验来确定统计学意义，**p《0.01。
具体实施方式
117.本发明通过单细胞rna测序分析和原位杂交技术，独立地检验aew模型中单一细胞群的rna表达谱，并鉴定得到一种新型的增殖型基底细胞状态，它专门表达转录因子cut like homeobox 1(cux1)，并据此研究了cux1在aew模型中的作用机制，为皮肤干燥相关皮肤病提供了针对性的潜在治疗靶点。本发明还设计了靶向cux1的rnai抑制剂，直接从源头出发，在基因层面将相关靶点的mrna沉默，使其无法表达cux1蛋白以达到治疗的目的。
118.cux1抑制剂
119.本发明涉及cux1抑制剂。本发明中所用的术语“cux1”指的是同源框cut样蛋白1，是dna结合蛋白同源域家族的成员。cux1具有如seq id no.1所示的多核苷酸序列；或者包
括seq id no.1所示的多核苷酸序列的核酸分子；或者seq id no.1所示的多核苷酸序列中任一个或多个核苷酸经过取代、添加或缺失所得的多核苷酸序列；或者与seq id no.1所示的多核苷酸序列同源性≥90％，较佳地≥95％，更佳地≥98％，最佳地≥99％的多核苷酸序列。
120.seq id no.1：人源cux1编号1523
121.本发明中，术语“cux1抑制剂”的范畴包括一切可以降低细胞内cux1水平的物质，包括直接或间接地(优选直接作用于cux1)抑制细胞内cux1表达的物质和/或促进细胞内cux1降解的物质/或抑制cux1表达或转录的物质。cux1的抑制剂包括(但不限于)：sirna、microrna、化合物、shrna、dsrna、抗体或其组合。cux1的抑制剂优选sirna、或shrna。
122.本发明中，术语“sirna”或“sina”或“短干扰核酸分子”或“短干扰rna”指的是通过介导rna干扰(“sirna”)或基因沉默以序列特异性方式抑制或下调基因表达或病毒复制的任何核酸分子。这些核酸分子可以是指个别核酸分子、多个此类核酸分子、或此类核酸分子的合并物。sirna可以是包含自我互补的有义和反义链的双链核酸分子，其中所述反义链包含与目标核酸分子中的核苷酸序列或其部分互补的核苷酸序列，且有义链包含对应于目标核酸序列或其部分的核苷酸序列。sirna可以是具有双链体、不对称的双链体、发夹或不对称的发夹二级结构、具有自我互补的有义和反义区的多核苷酸，其中所述反义区包含与分开的目标核酸分子中的核苷酸序列或其部分互补的核苷酸序列，且有义区包含对应于目标核酸序列或其部分的核苷酸序列。sirna可以是具有2个或更多环结构和包含自我互补的有义和反义区的茎的环状单链多核苷酸，其中所述反义区包含与目标核酸分子中的核苷酸序列或其部分互补的核苷酸序列，且有义区包含对应于目标核酸序列或其部分的核苷酸序列，且其中环状多核苷酸可以在体内或体外进行加工以产生能够介导rnai的活性sirna分子。sirna还可以包含具有与目标核酸分子中的核苷酸序列或其部分互补的核苷酸序列的单链多核苷酸(例如，其中此类sirna分子不需要在sirna分子内存在对应于目标核酸序列或其部分的核苷酸序列)，其中所述单链多核苷酸可以进一步包含末端磷酸酯基团，例如5
′‑
磷酸酯(参见例如martinez等人，2002，cell.，110，563-574和schwarz等人，2002，molecular cell，10，537-568)或5’，3
’‑
二磷酸酯。
123.本发明中，术语“sirna的目标序列”指的是sirna的有义链。
124.本发明中，术语“微小rna”或“mirna”是指其如本领域一般接受的意义。该术语一般指通过mrna切割、翻译阻抑/抑制或异染色质沉默调节目标信使rna的表达的小双链rna。
125.本发明中，术语“shrna”和“短发夹rna”可互换使用，指的是sirna连接形成发夹或茎环结构的分子，包括两个短反向重复序列，和一个loop序列。
126.本发明中，术语“rna干扰”或“rnai”是指如本领域一般已知的且由短干扰核酸分子介导的抑制或下调细胞中的基因表达的生物过程。
127.在发明优选的实施方式中，所述cux1抑制剂为靶向cux1的sirna，所述sirna选自以下任一种：
128.(i)如seq id no.2所示的多核苷酸序列；和
129.(ii)与seq id no.2所示的多核苷酸序列同源性≥90％，较佳地≥95％，更佳地≥98％，最佳地≥99％的多核苷酸序列。
130.seq id no.2：5
’‑
aagaagaacactccagaggattt-3’。
131.在发明优选的实施方式中，所述cux1抑制剂为靶向cux1的shrna，所述shrna由包括如第一序列单元、与第一序列互补的第二序列单元和位于两者之间的茎环序列单元，
132.所述第一序列单元包括如seq id no.2所示的多核苷酸序列。
133.本发明的实施方式还涉及含有cdna的载体，所述cdna序列含有与靶向cux1的shrna序列互补的核酸片段，例如慢病毒载体。
134.cux1抑制剂的用途
135.本发明还涉及cux1抑制剂的用途。cux1抑制剂的用途包括，用于制备药物或组合物，所述的药物或组合物用于：
136.(i)降低slc39a1的表达水平；
137.(ii)降低cux1的表达水平；
138.(iii)降低bmpr1a、bmpr2和/或egfr的表达水平；
139.(iv)降低cdk2、ccnd1、ccnd2和/或ccne1的表达水平；
140.(v)降低krt6a、hes1、ctnbp1、cebpb、aqp3和/或mafb的表达水平；
141.(vi)抑制角质细胞增殖；和/或
142.(vii)预防和/或治疗病理性皮肤干燥症及其并发症。
143.在一些优选的实施方式中，所述病理性皮肤干燥症的并发症包括银屑病、特应性皮炎和鱼鳞病等。
144.在一些优选的实施方式中，cux1抑制剂通过抑制与角质细胞增殖、分化和/或迁移相关基因的表达来抑制角质细胞增殖和/或治疗病理性皮肤干燥症及其并发症。
145.在一些优选的实施方式中，所述与角质细胞增殖、分化和/或迁移相关基因选自以下至少一种krt6a、hes1、ctnbp1、cebpb、aqp3和/或mafb。
146.在一些优选的实施方式中，cux1抑制剂通过抑制bmpr1a、bmpr2和/或egfr的表达来抑制角质细胞增殖和/或治疗病理性皮肤干燥症及其并发症。
147.在一些优选的实施方式中，cux1抑制剂通过降低cdk2、ccnd1、ccnd2和/或ccne1的mrna表达水平来抑制角质细胞增殖和/或治疗病理性皮肤干燥症及其并发症。
148.在一些优选的实施方式中，cux1抑制剂通过降低pbc细胞中cux1
hi
状态细胞数目来抑制角质细胞增殖和/或治疗病理性皮肤干燥症及其并发症。
149.在一些优选的实施方式中，cux1抑制剂通过阻断或减慢pbc细胞从col17a1
hi
状态至cux1
hi
状态来抑制角质细胞增殖和/或治疗病理性皮肤干燥症及其并发症。
150.组合物
151.本发明还涉及组合物，包括作为活性物质的抑制细胞内cux1表达的物质和/或促进细胞内cux1降解的物质，并且还包括其他成分。根据组合物的用途差异，其他成分的类型有所差别。
152.在一些实施方式中，当组合物作为药物组合物，用于医疗用途时，组合物中除包括活性物质外，还包括药学上可接受的载体和赋形剂。
153.本发明中，药学上可接受的载体非限制地可选自：经纯化的蒸馏水、植物油、麻油、茶油、桃仁油、橄榄油、花生油、油酸乙酯、苯甲酸酯、丙二醇、聚乙二醇、二甲基乙酰胺、乙醇、甘油、山梨糖醇、甘露醇、苯甲醇、凡士林、石蜡、羊毛脂、峰蜡、二甲基硅油、十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸镁、聚氧乙烯单硬酯酸镁、edta、滑石粉、微粉硅胶、淀粉、硬脂酸镁、明
胶、糊精、琼脂、阿拉伯胶、纤维素、甲基羟基苯甲酸酯、丙基羟基苯甲酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、卵磷脂、阳离子脂质、胆固醇、聚乙二醇化磷脂、蔗糖或海藻糖等。根据本发明的药物组合物可以进一步包括润滑剂、润湿剂、甜味剂、调味剂、乳化剂、悬浮剂和防腐剂中至少一种。合适的药物学上可接受的载体和制剂的详细内容可以在remington’spharmaceutical sciences(第19版，1995)中找到。
154.本发明的药物组合物可以与如上所述的药物学上可接受的载体和/或介质一起配制，制剂的非限制性实例包括但不限于口服制剂，如粉末、颗粒、片剂、胶囊、悬浮液、乳液、糖浆和气雾剂，外用制剂，如粉剂、乳剂、膏剂、涂膜剂、酊剂、醑剂、糊剂、油剂、洗剂、霜剂、栓剂、脂质体和无菌注射液，优选为脂质体。
155.在一些实施方式中，当组合物作为化妆品组合物，用于美容等用途时，化妆品组合物还包括化妆品可接受的辅料。本发明中所用的术语“化妆品组合物”是指以涂抹、喷洒或者其他类似方法，散布于人体表面的任何部位，如皮肤、毛发、指趾甲、唇齿等，以达到清洁、保养、美容、修饰和改变外观，或者修正人体气味，保持良好状态为目的的化学工业品或精细化工产品。根据本发明的优选实施方式中，所述化妆品包括：保湿化妆品、具有保湿功效的抗炎化妆品、具有保湿功效的止痒化妆品。本发明中，化妆品组合物选自以下任一种形式：化妆水、乳液、化妆霜、精华、面膜、膏状凝胶、喷雾、香皂、洗面奶、沐浴露、洗发露、护发素、粉底、粉霜、身体乳或按摩膏。本发明中所用的术语“化妆品可接受的辅料”选自溶剂、增溶剂、防腐剂、抗氧化剂、ph调节剂、促渗剂、脂质体、保湿剂、增稠剂、螯合剂、肤感调节剂、表面活性剂、乳化剂、推进/抛射剂、香精、色素，以及其他功效添加剂。
156.应将化妆品组合物定期地局部施用在任何需要使用获得所需结果必不可少的频率和用量治疗的皮肤面积上。优选将所述的化妆品每天至少施用一次、最优选每天施用两次。治疗的频率取决于皮肤损害或恶化的程度、使用者皮肤的反应性、活性组分在化妆品中的浓度、用于将活性组分转运入角质层的载体的有效性、通过与衣服的物理性接触而除去该制品或通过出汗或其它内部或外部液体而除去该制品的便利性以及对使用者类型的便利性。以所述化妆品的总重为基准，诸如本文所述的化妆品这样相对简单的生化活性物质的典型浓度可以在约0.01％-约5.0％(重量)的范围，且应将该制品以等于约1.0mg/cm2皮肤-约20.0mg/cm2皮肤的比例施用于皮肤。
157.适应症和治疗方法
158.本发明中，药物或组合物适用于(i)抑制皮肤增生，和/或(ii)缓解或改善皮肤干燥，和/或(iii)缓解或改善皮肤瘙痒，和/或(iv)缓解或改善皮肤炎症，和/或(v)抑制角质细胞增殖，和/或(vi)治疗病理性皮肤干燥症及其并发症(银屑病、特应性皮炎和鱼鳞病等)。
159.本发明中，“受试对象”是指其如本领域一般接受的意义。受试对象可以是哺乳动物或哺乳动物细胞，包括人或人细胞。该术语还指其是外植细胞的供体或受体或细胞自身的生物。
160.本发明中，向受试对象施用“药物”或“组合物”以实现预防、缓解或治疗目的。应当根据施用对象的特点和治疗的需求，将“药物”或“组合物”制成药剂的形式施用，包括单位剂型和多剂量形式的几种形式。这样的药剂形式的非限制性实例包括但不限于口服制剂，如粉末、颗粒、片剂、胶囊、悬浮液、乳液、糖浆和气雾剂，外用制剂，如膏剂和霜剂、栓剂和无
菌注射液，优选为外用膏基、霜基、凝胶、液态涂覆剂。本发明中，优选地将“药物”或“组合物”制备成外用制剂的形式给予受试者，采用的给药途径优选地为外敷、涂抹、皮下注射；例如将含有本发明活性成分的药物或组合物与受试者皮肤/头皮/粘膜进行接触，然后可将其清洗或不将其清洗。本发明中，给药的方式优选局部施用，例如将含有本发明活性成分的药物或组合物与受试者敏感和/或炎症和/或干燥和/或瘙痒和/或反应性和/或不耐受性的局部皮肤和/或头皮和/或粘膜进行接触，然后可将其清洗或不将其清洗。
161.本发明还涉及(i)抑制皮肤增生，和/或(ii)缓解或改善皮肤干燥，和/或(iii)缓解或改善皮肤瘙痒，和/或(iv)缓解或改善皮肤炎症的方法，和/或(v)抑制角质细胞增殖，和/或治疗病理性皮肤干燥症及其并发症(银屑病、特应性皮炎和鱼鳞病等)的方法，向受试者施用至少一种选自以下的物质：
162.(i)抑制细胞内cux1表达的物质；
163.(ii)促进细胞内cux1降解的物质；
164.(iii)降低细胞内krt17、defb6、ctnnb1、marcks、cdk4、ddit4、srsf2、tubb5、crip1、ccl2、smc4、hist1h1b、pclaf、slc39a10、top2a、mki67、hes1、cd74、postn、krt71、ler3、krt79、adamts1、krt14、krt5、krt6a、gja1、stfa3、fam162a、ptgs2、atp1a1、lars2、fgfbp1、ll33、stfa1、ctsc、klf4、ovol1、ggct、dusp1、krt16、ccdc711、fabp5、mafb、krt1、ankfy1、teddm3、krt6b、phlda1、casp14、aprr1b、flg、blmh、cebpb、ppif、klk8、arc和/或ccl20表达水平的物质；
165.(iv)增加细胞内thbs1、sparc、dst、krt15、ccl27a、txnip、col1a1、col1a2、col3a1、actg1、cdkn1a、tacstd2、plet1、fosl1、pof1b、slc6a14、dapl1、ssfa2、spink5、cysrt1、krt80、rgcc、eppk1、sbsn、sdc4、lce1m、wfdc21、egr1和/或hspb1表达水平的物质。
166.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。
167.除非另有指明，本文所用的技术和科学术语具有与本技术所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义，需要注意的是，本文所用的术语仅为了描述具体实施方式，而非意图限制本技术的示例性实施方式。
168.实施例1、通过单细胞rna测序分析鉴定aew小鼠模型中干燥皮肤中的细胞类型
169.从经水处理和经aew处理的小鼠背部皮肤获得组织样本he染色。
170.根据染色结果图，与水组相比，aew组的表皮厚度明显增加。此外，aew组的表皮，表现出明显的增生和角化不全(图50)。然而masson染色结果显示，aew组的真皮层胶原蛋白密度与水组相比无明显差异(图51)。上述结果表明，aew处理主要损害了表皮层结构，而非真皮层结构。
171.为了在单细胞水平上系统地剖析稳态和慢性干燥皮肤之间的转录组差异，发明人设置了每个组别有两个生物学混合样本，每个生物学混合样本中含有三只小鼠皮肤样本，对各组样本进行了单细胞rna测序研究(图1)。经过质量控制，在aew组获得了18,578个细胞，在水组获得了24,160个细胞用于下游分析(图52和53)。经过数据预处理、样本整合和主
成分分析，通过umap分析，将高质量的细胞划分为八个主要集群(图2。根据公认的特定细胞标记物，划定了八个细胞集群，包括成纤维细胞(fib，dcn+)、角质细胞(kc，krt10+，和krt14+)、骨髓细胞(myl，cd74+)、t细胞(tc，cd3g+)、脂肪细胞(adi，scd1+)、内皮细胞(endo，pecam1+)、肥大细胞(mc，mcpt1+)和血管平滑肌细胞(vsmc，acta1+)(图3和图4)通过分别分析aew组和water组，观察到上述8个细胞群，而aew组在第一级聚类分析过程中没有一个新的细胞群(图5)。与水组相比，aew组的myl的平均百分比增加了，而kc和vsmc的百分比则下降了(图6)。通过分别分析aew组和water组的四个样本，仍然观察到八个细胞群，同时每个细胞类型的平均百分比与综合分析中观察到的数量相似(图54和55)。
172.为了进一步探索细胞水平的致病机制，发明人分析了每种细胞类型的差异表达基因(degs，|avg log2fc|》0.4和p adj《0.05)(图7；表s3)。对于细胞类型特定的degs，发明人发现fib、myl和kc是差异基因上调最显著的前三种细胞类型，分别有100、70和61个degs。相比之下，tc、kc和myl是差异基因下调最显著的前三种细胞类型，分别有34、32和20个degs。go分析显示，aew处理上调的deg主要与调节炎症反应和调节上皮细胞增殖有关，而下调的deg主要与皮肤发育和细胞外基质(ecm)组织有关(图8)。aew组的所有细胞类型都高表达炎症反应基因(图56)。相反，除了endo外，aew组的其他细胞类型都低表达ecm组织基因(图57)。例如，mc的标志基因cma1，负责编码chymase-1蛋白，mc的浸润与特应性皮炎等炎症性皮肤病密切相关。cma1在aew组的mc中明显增加(图58)。参与ecm蛋白生成的基因，如aebp1和lrp1，在aew组的fib中明显减少(图59)。这些结果表明，与皮肤干燥有关的degs主要在kc和myl中被发现，突出了这两类细胞在皮肤干燥中的作用。
173.实施例2、根据小鼠角质细胞的转录特征将其分为5亚群
174.在脱水情况下，kc的功能紊乱被认为是引发皮肤干燥的诱因。因此，接下来对kc进行了更详细的分析。所有的kc被重新分组为五个亚群，包括刺细胞(sc，krt1+)、基底细胞(bc，krt14+)、皮脂腺细胞(sgc，krt79+)、增殖型基底细胞(pbc，mki67+)和颗粒细胞(gc，lor+)(图9-11)。水组和aew组样本都含有上述五个kc亚群(图12)。通过比较各kc亚群的分布，发明人发现aew组与水组相比，pbc的比例增加，sc和sgc的比例减少(图13)。
175.在kc中上调的degs主要涉及经皮水分丢失、角质化和表皮发育(图14)。相对应地，与经皮水分丢失和角质化有关的基因在gc中显著增加，同时显示出最高的分数。此外，与kc增殖和细胞周期的正向调节有关的基因在pbc中显著增加，同时显示出最高的分数(图15)。此外，kc中下调的degs主要涉及细胞外基质(ecm)组织和紧密连接(tj)组织(图60)。tj组织相关基因在sc、bc和gc中减少，而ecm相关基因在所有类型的kc中都减少(图61-64)。
176.进一步分析特定的kc上调的degs，发明人发现aew皮肤干燥模型与其他皮肤病有许多相似的转录特征。fabp5是一种脂肪酸结合蛋白，对化学物质引起的皮肤炎症和肿瘤发生有所响应。cd74是mif受体，在系统性硬化症的kc中增强，可能与促炎症途径有关。il33是一种著名的二类炎症细胞因子，在特应性皮炎患者的kc中高度表达。上述所有显著增加的的基因表达表明，aew模型小鼠的皮肤正经历着严重的炎症反应。kc增殖、分化和迁移相关的基因，包括krt6a、hes1、ctnbp1、cebpb、aqp3和mafb，在aew模型中也被上调，揭示了细胞加速发展的潜力(图16)。
177.实施例3、伪时序轨迹分析揭示干燥皮肤中的角质细胞分化动态
178.为了研究干燥的皮肤状况是否会影响表皮发育，发明人应用伪时序轨迹分析来揭
示kc的分化途径。实验观察到，aew组中kc的所有五个亚群都排列成一条发育轨迹，从pbc、bc、sc到gc依次分化发育，发育轨迹并没有分岔(图17和65)。
179.发明人还进行了scorpius，一种以纯数据驱动的方式来推断轨迹的新分析方法，以验证上述kc的分化轨迹。利用scorpius分析后，得到了一致的发展轨迹(图66)。细胞表达增殖标志物mki67主要分布在轨迹的起始部分，角蛋白基因krt14和krt11分布在中间部分，兜甲蛋白基因lor分布在末端(图18)。然后，发明人从aew组的所有kc中鉴定出327个伪时间依赖基因，这些基因在不同的发育阶段有明显的变化(图19)。与特定生物过程有关的基因在每个过渡期都有高度表达。pbc状态由第1基因组定义，这个基因组与dna包装、细胞对dna损伤刺激的反应和细胞周期过程有关；bc状态由第2基因组定义，这个基因组与皮肤发育、ecm组织和细胞迁移的正向调节有关；sc状态由第3基因组定义，这个基因组与皮肤发育、经皮水分丢失和对伤口反应有关；gc状态由第4基因组定义，这个基因组与表皮发育、角质化包膜的形成和皮肤屏障的建立有关。这些伪时序相关的基因包括分泌因子(图67、细胞外基质(图68)和转录因子(图69)。发明人还发现，aew组的kc中58个上调的degs和31个下调的degs是伪时序相关的基因(图20和21)。本实施例中伪时序分析为探索aew模型中kc分化调控程序建立了基础。
180.实施例4、干燥皮肤中的新型cux1+增值型基底细胞
181.由于表皮中ki67+细胞的比例在aew皮肤中明显增加(图70)，发明人进一步探究了aew模型中pbc的异质性和转录概况。通过重新分析了pbc，发现它们可以被细分为两种状态(col17a1hi和cux1hi)(图22)。col17a1hi状态的特点是高表达anxa2基因，一个编码细胞表面annexins的基因，以及高表达col17a1，一个表皮干/祖细胞的标记基因。cux1hi状态的特征是高表达编码锌离子跨膜转运体基因slc39a1和高表达编码细胞周期相关转录因子基因cux1(图23和24；图71)。cux1hi pbc主要存在于aew组(图25)。然后我们利用rnascope来研究皮肤组织中两种pbc状态的分布情况。col17a1 rna探针与ki67蛋白的共染分析结果显示，大约40％的pbc表达高水平的col17a1，但aew处理并不影响col17a1hi pbc的细胞比例。对cux1 rna探针与ki67蛋白的共染分析结果显示，约28％的pbc表达cux1，但aew处理明显提高了cux1hi pbc的细胞比例(图26)。不同的伪时序分析方法(scorpius和cytotrace)都显示，col17a1hi pbc的发育顺序高于cux1hi pbc，意味着在aew模型中，pbc的发育轨迹是从col17a1hi状态到cux1hi状态(图27和28)。上述数据显示了一种崭新的，皮肤干燥诱发的cux1hi pbc状态。
182.实施例5、在干燥皮肤中pbc与其他细胞潜在的配体—受体相互作用
183.为了研究pbc和其他细胞类型之间潜在的细胞-细胞交流模式，发明人对scrna-seq数据集进行了cellchat分析。cellchat在aew组和water组都检测到22条重要的信号通路(图29和30)。其中8条信号通路，包括cxcl、igf、pros、ptn、grn、ccl、fgf和gas，在水组和aew组中显示出相似的信息流量，表明它们在两种处理中对皮肤的生物学功能均具有同样的重要作用。同时，与水组相比，其他14条信号通路的信息流量在aew组发生了明显变化：增加的通路有(tnf、visfatin、vegf、il6、bmp、kit、complement、mif、tgfb、egf和galectin)，减少的通路有(csf、calcr和angptl)(图31)。接下来，发明人进一步分析了col17a1hi pbc和cux1hi pbc在tnf、vegf、bmp和egf信号传导通路中的作用(图32-36)。col17a1hi pbc和cux1hi pbc都表达了受体tnfrsf1a来接收来自mc的tnf信号。col17a1hi pbc是vegfa的主
要分泌来源，endo中的flt1是vegfa信号的唯一接受者。bmp2和hbegf都以自分泌和旁分泌的方式发挥作用。col17a1hi pbc既是发送者又是接受者，而cux1hi pbc只是通过表达bmpr1a、bmpr2和egfr发挥接受者的作用。总的来说，上述结果意味着，aew处理可以通过调节细胞-细胞信号网络来影响pbc的生物学功能。
184.实施例6、转录因子cux1能促进角质细胞增殖
185.为了进一步研究cux1在kc中的分子功能，发明人在hacat细胞(一种永生的人类kc细胞系)中使用shrna(具体shrna序列见下表1)策略进行了敲降实验。qpcr分析(引物序列见表2)显示，利用慢病毒转染cux1目标shrna和阴性对照shrna后，cux1的mrna表达水平明显下降(图37)。由于cux1hi pbc显示出很强的增殖能力，因此通过cck-8和菌落形成实验检查了cux1对kc增殖的影响。结果表明，与阴性对照组相比，cux1敲除明显损害了hacat细胞的细胞增殖能力和克隆形成能力(图38和39)。我们也通过流式细胞法分析cux1对细胞周期的影响。结果显示，敲除cux1导致g1期的hacat细胞比例增加，s期的hacat细胞比例降低(图40)。相应地，发明人通过qpcr检测cux1对细胞周期调节蛋白的影响。结果显示，cux1的敲除降低了cdk2、ccnd1、ccnd2和ccne1的mrna表达，但并不影响cdk4和cdk6(图41)。总之，这些发现表明，cux1促进了kc的增殖。
186.表1shrnas序列
187.oligo setsequencelv3-cux1 human5
’‑
aagaagaacactccagaggattt-3’lv3-nc5
’‑
ttctccgaacgtgtcacgt-3’188.注：上表1中示出的序列，与通过软件设计的shrna其他部分组合并整合入慢病毒载体。
189.表2.rt-pcr引物序列
190.[0191][0192]
实施例7、银屑病患者中cux1+增值型基底细胞数量增加
[0193]
银屑病是成人中最常见的慢性皮肤病之一，其特点是皮肤干燥和kc过度增殖。为了检验研究结果的适用性，发明人分析了最近发表的小鼠和人类银屑病研究中的scrna-seq数据。用增殖标记物ube2c、top2a和mki67来区分pbc和其他类型的kc(图42和43)。发明人发现，无论是银屑病模型小鼠还是患者，pbc的比例都比对照组明显增加(图44-47)。为了进一步验证cux1在银屑病患者和健康对照组中的蛋白表达水平，发明人收集了来自浙江省人民医院的人皮肤组织切片。免疫荧光染色结果进一步显示，银屑病患者表皮中ki67+细胞的比例明显增加(图72)。此外，scrna数据和免疫荧光染色结果表明，银屑病患者的pbc中cux1的mrna和蛋白水平都有所增加(图48和49)。综上所述，这些结果表明，cux1+pbc的增加可能是导致银屑病患者表皮增生的一个共通机制。
[0194]
本领域的普通技术人员可以理解，上述各实施方式是实现本发明的具体实施例，而在实际应用中，可以在形式上和细节上对其作各种改变，而不偏离本发明的精神和范围。

技术特征：
1.cux1抑制剂的用途，用于制备药物或药物组合物，其特征在于，所述药物或组合物用于：(i)降低slc39a1的表达水平；(ii)降低cux1的表达水平；(iii)降低bmpr1a、bmpr2和/或egfr的表达水平；(iv)降低cdk2、ccnd1、ccnd2和/或ccne1的表达水平；(v)降低krt6a、hes1、ctnbp1、cebpb、aqp3和/或mafb的表达水平；(vi)抑制角质细胞增殖；和/或(vii)预防和/或治疗与cux1过表达相关的疾病。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述cux1过表达相关的疾病包括病理性皮肤干燥症及其并发症，所述病理性皮肤干燥症的并发症包括表皮增生症、银屑病、特应性皮炎和鱼鳞病。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述cux1抑制剂选自：sirna、microrna、shrna、dsrna、抗体、化合物或其组合。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述cux1抑制剂为靶向cux1的sirna，所述sirna的目标序列选自以下任一种：(i)如seq id no.2所示的多核苷酸序列；和(ii)与seq id no.2所示的多核苷酸序列同源性≥90％，较佳地≥95％，更佳地≥98％，最佳地≥99％的多核苷酸序列。5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述cux1抑制剂为靶向cux1的shrna，所述shrna由包括如第一序列单元、与第一序列互补的第二序列单元和位于两者之间的茎环序列单元，所述第一序列单元包括如seq id no.2所示的多核苷酸序列。6.一种用于(i)抑制皮肤增生，和/或(ii)缓解或改善皮肤干燥，和/或(iii)缓解或改善皮肤瘙痒，和/或(iv)缓解或改善皮肤炎症，和/或(v)抑制角质细胞增殖，和/或(vi)治疗病理性皮肤干燥症及其并发症的组合物，其特征在于，所述组合物包括抑制细胞内cux1表达的物质和/或促进细胞内cux1降解的物质。7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述组合物为药物组合物，所述药物组合物中还包括药学上可接受的载体和赋形剂。8.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述组合物为化妆品组合物，所述化妆品组合物还包括化妆品可接受的辅料。9.一种降低细胞中cux1表达水平的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：在权利要求4所述的sirna存在的条件下培养细胞，从而降低所述细胞中cux1的表达水平。10.一种用于(i)抑制皮肤增生，和/或(ii)缓解或改善皮肤干燥，和/或(iii)缓解或改善皮肤瘙痒，和/或(iv)缓解或改善皮肤炎症，和/或(v)抑制角质细胞增殖，和/或(vi)治疗病理性皮肤干燥症及其并发症的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：向受试者施用至少一种选自以下的物质：(i)抑制细胞内cux1表达的物质；(ii)促进细胞内cux1降解的物质；
(iii)降低细胞内krt17、defb6、ctnnb1、marcks、cdk4、ddit4、srsf2、tubb5、crip1、ccl2、smc4、hist1h1b、pclaf、slc39a10、top2a、mki67、hes1、cd74、postn、krt71、ler3、krt79、adamts1、krt14、krt5、krt6a、gja1、stfa3、fam162a、ptgs2、atp1a1、lars2、fgfbp1、ll33、stfa1、ctsc、klf4、ovol1、ggct、dusp1、krt16、ccdc711、fabp5、mafb、krt1、ankfy1、teddm3、krt6b、phlda1、casp14、aprr1b、flg、blmh、cebpb、ppif、klk8、arc和/或ccl20表达水平的物质；和(iv)增加细胞内thbs1、sparc、dst、krt15、ccl27a、txnip、col1a1、col1a2、col3a1、actg1、cdkn1a、tacstd2、plet1、fosl1、pof1b、slc6a14、dapl1、ssfa2、spink5、cysrt1、krt80、rgcc、eppk1、sbsn、sdc4、lce1m、wfdc21、egr1和/或hspb1表达水平的物质。

技术总结
本申请公开了一种Cux1抑制剂及其用途。本申请中，创新性地研究了慢性皮肤干燥症小鼠模型的单细胞转录组图谱，并通过生物信息学分析发现了若干潜在的治疗靶点。本申请中发现了新型皮肤干燥诱发的Cux1+增殖型基底细胞，通过配体受体研究确认了其作用和影响机制，并通过基因敲除实验证实了Cux1阳性基底细胞与银屑病患者表皮增生病症密切相关，因此，Cux1抑制剂可广泛用于治疗表皮增生类皮肤疾病。本申请还新设计了降低Cux1表达水平的抑制剂。还新设计了降低Cux1表达水平的抑制剂。还新设计了降低Cux1表达水平的抑制剂。


技术研发人员：杨巍 余沛霖 黄敏华 华宁 张宜
受保护的技术使用者：浙江大学
技术研发日：2023.03.06
技术公布日：2023/7/19