一种免疫磁珠孵育方法与流程

1.本技术涉及细胞分离技术领域，特别涉及一种免疫磁珠孵育方法。


背景技术：

2.免疫磁珠技术当前广泛运用到免疫检测、细胞分离、生物大分子钝化和生物学等方面。免疫磁珠细胞分选是利用磁珠其可结合活性蛋白质(抗体)，又可被磁铁所吸引的性质，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，而其余细胞由于不能与连接着磁珠的特异性抗体结合而不具磁性，从而不在磁场中停留以达到细胞分离的目的。磁珠孵育方法是为了让目标细胞与磁珠或者抗体结合，并把目标细胞与磁珠的复合物或者目标细胞与抗体和磁珠的复合物作为终产品，后续可根据用户需求做磁珠分选，筛选出目标细胞。然而现有的磁珠孵育方法在操作过程中存在污染风险、孵育效果不佳、细胞活性较低、回收率不高的问题，故亟待开发一种安全精准、孵育效果良好的免疫磁珠孵育方法。


技术实现要素：

3.本技术的主要目的是提供一种免疫磁珠孵育方法，旨在解决现有工艺中孵育效果不佳的技术问题。
4.为实现上述目的，本技术提出了一种免疫磁珠孵育方法，包括以下步骤：
5.将样品加入离心设备，再加入磁珠，进行磁珠孵育；
6.磁珠孵育结束后，将孵育液加入上述离心设备内进行离心以洗涤磁珠；
7.洗涤磁珠后，排出废液，并将上述离心设备内的产品混匀并排出，即得孵育产品。
8.可选地，上述将样品加入离心设备的步骤，包括：按预置的样品总量将样品加入上述离心设备内。
9.可选地，上述将样品加入离心设备的步骤，包括：将样品分批次加入上述离心设备内，进样以空气探测器检测到连续气体或上述离心设备装满样品后检测到活塞到顶作为结束。
10.可选地，上述将样品加入离心设备步骤后，还包括：对样品浓缩至预先设置的样品保留量后，排废液；其中，浓缩的离心力为100-800xg，浓缩的加减速时间为5-30s，浓缩的离心时间为60-600s。
11.可选地，上述将样品加入离心设备步骤后，还包括：将孵育液加入上述离心设备内，对样品进行洗涤，结束后，上述离心设备保持运行状态，排废液；其中，洗涤的离心力为100-1000xg，洗涤的加减速时间为5-30s，洗涤的离心时间为60-600s。
12.可选地，上述将样品加入离心设备步骤后，还包括：将将孵育液加入上述离心设备内并和样品混匀以稀释样品；其中，稀释混匀的离心力为100-1000xg，稀释混匀的加减速时间为5-30s，稀释混匀的次数为0-8次。
13.可选地，上述将样品加入离心设备步骤后，还包括：
14.将抗体加入上述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；
15.进行抗体孵育；
16.抗体孵育结束后，将孵育液加入上述离心设备内，进行洗涤抗体，结束后，上述离心设备保持运行状态，排废液；
17.其中，抗体孵育混匀离心力为5-100xg，抗体孵育混匀加减速时间为1-30s，混匀1-100次后，间隔时间0-600s，再混匀1-100次；
18.洗涤抗体离心力为100-1000xg，洗涤抗体加减速时间为5-30s，洗涤抗体离心时间为60-600s。
19.可选地，上述加入磁珠，进行磁珠孵育的步骤，包括：
20.将磁珠加入上述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；
21.进行磁珠孵育；
22.其中，磁珠孵育混匀离心力为5-100xg，磁珠孵育混匀加减速时间为5-30s，混匀1-100次后，间隔时间0-600s，再混匀1-100次。
23.可选地，上述将孵育液加入上述离心设备内进行离心以洗涤磁珠的步骤，包括：将孵育液加入上述离心设备后，进行磁珠洗涤；其中，洗涤磁珠离心力为100-1000xg，洗涤磁珠加减速时间为5-30s，洗涤磁珠离心时间为60-600s。
24.可选地，将上述离心设备内的产品混匀并排出的步骤，包括：
25.将上述离心设备内的产品混匀，混匀后将产品排出到产品袋，再清空管路残留至上述产品袋；
26.产品排出后，将孵育液加入上述离心设备内，洗涤上述离心设备内残留产品并将洗涤液排出到上述产品袋，再清空管路残留至上述产品袋；
27.其中，产品混匀离心力为100-300xg，产品混匀加减速时间为5-30s，产品混匀次数为3-8次；
28.洗涤离心设备内残留产品的混匀离心力为100-500xg，混匀加减速时间为5-30s，混匀次数为3-8次。
29.本技术的免疫磁珠孵育方法在离心设备内全封闭操作，故而避免了手动操作中的污染风险，提高了产品制备的安全性，且可孵育的样品类型较多，包括全血孵育、培养液孵育以及pbmc产品孵育等，可孵育的样品量范围大，孵育体积精准，孵育效果好，可组合抗体+磁珠进行孵育或是进行磁珠孵育，从而获得目标细胞与磁珠的复合物，或者目标细胞与抗体和磁珠的复合物作为终产品，后续可根据用户需求做磁珠分选，筛选出目标细胞，得到的终产品中目标细胞的回收率高，且细胞活性高，所使用的仪器及耗材兼容性强，因而，该免疫磁珠孵育方法不仅安全精准，孵育效果较好，而且所使用的仪器及耗材可满足不同生产线需求，操作简单，适用于批量生产，且用户可根据样品的不同情况选择预处理，如样品进样+浓缩+洗涤、样品进样+稀释、样品进样+洗涤等，用户可适配度高。
附图说明
30.为了更清楚地说明本技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以
根据这些附图示出的结构获得其他的附图。
31.图1为本技术实施例所述的免疫磁珠孵育方法的耗材布局图；
32.图2为本技术实施例所述的免疫磁珠孵育方法的流程图。
具体实施方式
33.下面将结合本技术实施例中的附图，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本技术保护的范围。
34.针对现有的免疫磁珠孵育方法所存在的技术问题，本技术的实施例提供了一种免疫磁珠孵育方法，包括以下步骤：
35.将样品加入离心设备，再加入磁珠，进行磁珠孵育；
36.磁珠孵育结束后，将孵育液加入上述离心设备内进行离心以洗涤磁珠；
37.洗涤磁珠后，排出废液，并将上述离心设备内的产品混匀并排出，即得孵育产品。
38.本技术的耗材布局图如图1所示，该免疫磁珠孵育方法可孵育的样品类型较多，包括全血孵育、培养液孵育以及pbmc产品孵育等，可孵育的样品量范围大，孵育体积精准，孵育效果好，通过磁珠孵育，从而获得目标细胞与磁珠的复合物作为终产品，后续可根据用户需求做磁珠分选，筛选出目标细胞，得到的终产品中目标细胞的回收率高，且细胞活性高，所使用的仪器及耗材兼容性强，因而，该免疫磁珠孵育方法不仅安全精准，孵育效果较好，而且所使用的仪器及耗材可满足不同生产线需求，操作简单，适用于批量生产。
39.作为本技术的一种可实施方式，上述将样品加入离心设备的步骤，包括：按预置的样品总量将样品加入上述离心设备内。该样品进样方式为精确进样，按照预先设置的样品总量一次性将样品加入离心设备内。
40.作为本技术的一种可实施方式，上述将样品加入离心设备的步骤，包括：将样品分批次加入上述离心设备内，进样以空气探测器检测到连续气体或上述离心设备装满样品后检测到活塞到顶作为结束。该样品进样方式为模糊进样，样品不用设置总量，超过离心桶容量可分批次全部进入。
41.作为本技术的一种可实施方式，上述将样品加入离心设备步骤后，还包括：对样品浓缩至预先设置的样品保留量后，排废液；其中，浓缩的离心力为100-800xg，浓缩的加减速时间为5-30s，浓缩的离心时间为60-600s。通过具体限定浓缩的离心力、加减速时间和离心时间等，用户可根据需求，将样品浓缩至预先设置的样品保留量。
42.作为本技术的一种可实施方式，上述将样品加入离心设备步骤后，还包括：将孵育液加入上述离心设备内，对样品进行洗涤，结束后，上述离心设备保持运行状态，排废液；其中，洗涤的离心力为100-1000xg，洗涤的加减速时间为5-30s，洗涤的离心时间为60-600s。用户可根据需求对样品进行洗涤的预处理，通过具体限定洗涤的离心力、加减速时间和离心时间等，以便对样品进行洗涤。
43.作为本技术的一种可实施方式，上述将样品加入离心设备步骤后，还包括：将孵育液加入上述离心设备内并和样品混匀以稀释样品；其中，稀释混匀的离心力为100-1000xg，稀释混匀的加减速时间为5-30s，稀释混匀的次数为0-8次。用户可根据需求对样品进行稀
释的预处理，通过具体限定稀释混匀的离心力、加减速时间和次数等，以便对样品进行稀释混匀。
44.作为本技术的一种可实施方式，上述将样品加入离心设备步骤后，还包括：
45.将抗体加入上述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；
46.进行抗体孵育；
47.抗体孵育结束后，将孵育液加入上述离心设备内，进行洗涤抗体，结束后，上述离心设备保持运行状态，排废液；
48.其中，抗体孵育混匀离心力为5-100xg，抗体孵育混匀加减速时间为1-30s，混匀1-100次后，间隔时间0-600s，再混匀1-100次；
49.洗涤抗体离心力为100-1000xg，洗涤抗体加减速时间为5-30s，洗涤抗体离心时间为60-600s。
50.通过抗体孵育，让目标细胞与抗体充分结合，再将多余的未结合的抗体去除，从而得到目标细胞与抗体的结合物，再经磁珠孵育后，最终得到目标细胞与抗体和磁珠的复合物作为终产品。
51.作为本技术的一种可实施方式，上述加入磁珠，进行磁珠孵育的步骤，包括：
52.将磁珠加入上述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；
53.进行磁珠孵育；
54.其中，磁珠孵育混匀离心力为5-100xg，磁珠孵育混匀加减速时间为5-30s，混匀1-100次后，间隔时间0-600s，再混匀1-100次。
55.通过具体限定磁珠孵育混匀的离心力、加减速时间、混匀次数和间隔时间等，以便于在磁珠孵育过程中是目标细胞和磁珠能够充分结合，从而得到目标细胞与磁珠的复合物作为产品。
56.作为本技术的一种可实施方式，上述将孵育液加入上述离心设备内进行离心以洗涤磁珠的步骤，包括：将孵育液加入上述离心设备后，进行磁珠洗涤；其中，洗涤磁珠离心力为100-1000xg，洗涤磁珠加减速时间为5-30s，洗涤磁珠离心时间为60-600s。通过具体限定洗涤磁珠的离心力、加减速时间以及离心时间等，以便于在洗涤磁珠时将磁珠孵育过程中多余的未与目标细胞结合的磁珠去除。
57.作为本技术的一种可实施方式，将上述离心设备内的产品混匀并排出的步骤，包括：
58.将上述离心设备内的产品混匀，混匀后将产品排出到产品袋，再清空管路残留至上述产品袋；
59.产品排出后，将孵育液加入上述离心设备内，洗涤上述离心设备内残留产品并将洗涤液排出到上述产品袋，再清空管路残留至上述产品袋；
60.其中，产品混匀离心力为100-300xg，产品混匀加减速时间为5-30s，产品混匀次数为3-8次；
61.洗涤离心设备内残留产品的混匀离心力为100-500xg，混匀加减速时间为5-30s，混匀次数为3-8次。
62.将离心设备内的产品混匀，以便于目标细胞与磁珠能够充分结合，并在产品排出后，通入孵育液，通过离心设备正反转混匀，将离心设备的内壁充分洗涤，再排入产品袋，最
后再排空管路残留到产品袋，将离心设备的内壁和管路残留的产品充分利用起来，避免浪费，提高了产品的收率。
63.下面结合具体实施例对本技术上述技术方案进行详细说明。
64.实施例1
65.一种免疫磁珠孵育方法，包括以下步骤：
66.按图2所示的流程图，将100g的培养液加入上述离心设备内，将样品浓缩至预先设置的样品保留量后，排废液；其中，浓缩的离心力为500xg，浓缩的加减速时间为20s，浓缩的离心时间为180s，培养液浓缩至30g；
67.浓缩后，将抗体加入上述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；进行抗体孵育；其中，抗体孵育混匀离心力为20xg，抗体孵育混匀加减速时间为20s，混匀8次后，间隔时间120s，再混匀8次；
68.抗体孵育结束后，将孵育液100g加入上述离心设备内，以洗涤抗体，结束后，上述离心设备保持运行状态，排废液；其中，洗涤抗体离心力为500xg，洗涤抗体加减速时间为20s，洗涤抗体离心时间为300s，洗涤桶内保留量为30g；
69.再将磁珠加入上述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；进行磁珠孵育；其中，磁珠孵育混匀离心力为20xg，磁珠孵育混匀加减速时间为20s，混匀8次后，间隔时间120s，再混匀8次；
70.磁珠孵育结束后，将孵育液200g加入上述离心设备内，进行磁珠洗涤；其中，洗涤磁珠离心力为500xg，洗涤磁珠加减速时间为20s，洗涤磁珠离心时间为300s，洗涤桶内保留量为20g；
71.洗涤磁珠后，排出废液，并将上述离心设备内的产品混匀，混匀后将产品排出到产品袋，再清空管路残留至上述产品袋；其中，产品混匀离心力为100xg，产品混匀加减速时间为20s，产品混匀次数为8次；
72.产品排出后，将孵育液10g加入上述离心设备内，洗涤上述离心设备的内壁并将洗涤液排出到上述产品袋，再清空管路残留至上述产品袋，得到孵育产品30g；其中，洗涤的混匀离心力为100xg，洗涤的混匀加减速时间为20s，洗涤的混匀次数为5次。
73.实施例2
74.一种免疫磁珠孵育方法，包括以下步骤：
75.将90g的pbmc产品加入上述离心设备内，将样品浓缩至预先设置的样品保留量后，排废液；其中，浓缩的离心力为480xg，浓缩的加减速时间为25s，浓缩的离心时间为180s，pbmc产品浓缩至10g；
76.浓缩后，将孵育液30g加入上述离心设备内，对样品进行洗涤，结束后，上述离心设备保持运行状态，排废液；其中，洗涤的离心力为480xg，洗涤的加减速时间为25s，洗涤的离心时间为280s，洗涤桶内保留量为30g；
77.洗涤后，将抗体加入上述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；进行抗体孵育；其中，抗体孵育混匀离心力为18xg，抗体孵育混匀加减速时间为15s，混匀8次后，间隔时间130s，再混匀8次；
78.抗体孵育结束后，将孵育液30g加入上述离心设备内，以洗涤抗体，结束后，上述离心设备保持运行状态，排废液；其中，洗涤抗体离心力为480xg，洗涤抗体加减速时间为25s，
洗涤抗体离心时间为320s，洗涤桶内保留量为30g；
79.再将磁珠加入上述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；进行磁珠孵育；其中，磁珠孵育混匀离心力为18xg，磁珠孵育混匀加减速时间为25s，混匀8次后，间隔时间130s，再混匀8次；
80.磁珠孵育结束后，将孵育液200g加入上述离心设备内，进行磁珠洗涤；其中，洗涤磁珠离心力为480xg，洗涤磁珠加减速时间为25s，洗涤磁珠离心时间为320s，洗涤桶内保留量为10g；
81.洗涤磁珠后，排出废液，并将上述离心设备内的产品混匀，混匀后将产品排出到产品袋，再清空管路残留至上述产品袋；其中，产品混匀离心力为90xg，产品混匀加减速时间为15s，产品混匀次数为3次；
82.产品排出后，将孵育液10g加入上述离心设备内，洗涤上述离心设备的内壁并将洗涤液排出到上述产品袋，再清空管路残留至上述产品袋，得到孵育产品20g；其中，洗涤的混匀离心力为90xg，洗涤的混匀加减速时间为25s，洗涤的混匀次数为3次。
83.实施例3
84.一种免疫磁珠孵育方法，包括以下步骤：
85.将110g的全血样品加入上述离心设备内，进样以空气探测器检测到连续气体或上述离心设备装满样品后检测到活塞到顶作为结束；
86.再将孵育液100g加入上述离心设备内，对样品进行洗涤，结束后，上述离心设备保持运行状态，排废液；其中，洗涤的离心力为520xg，洗涤的加减速时间为15s，洗涤的离心时间为280s，洗涤桶内保留量为30g；
87.洗涤后，将抗体加入上述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；进行抗体孵育；其中，抗体孵育混匀离心力为22xg，抗体孵育混匀加减速时间为15s，混匀8次后，间隔时间110s，再混匀8次；
88.抗体孵育结束后，将孵育液100g加入上述离心设备内，以洗涤抗体，结束后，上述离心设备保持运行状态，排废液；其中，洗涤抗体离心力为520xg，洗涤抗体加减速时间为15s，洗涤抗体离心时间为280s，洗涤桶内保留量为30g；
89.再将磁珠加入上述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；进行磁珠孵育；其中，磁珠孵育混匀离心力为22xg，磁珠孵育混匀加减速时间为15s，混匀8次后，间隔时间110s，再混匀8次；
90.磁珠孵育结束后，将孵育液100g加入上述离心设备内，进行磁珠洗涤；其中，洗涤磁珠离心力为520xg，洗涤磁珠加减速时间为15s，洗涤磁珠离心时间为280s，洗涤桶内保留量为10g；
91.洗涤磁珠后，排出废液，并将上述离心设备内的产品混匀，混匀后将产品排出到产品袋，再清空管路残留至上述产品袋；其中，产品混匀离心力为110xg，产品混匀加减速时间为15s，产品混匀次数为8次；
92.产品排出后，将孵育液5g加入上述离心设备内，洗涤上述离心设备的内壁并将洗涤液排出到上述产品袋，再清空管路残留至上述产品袋，得到15g孵育产品；其中，洗涤的混匀离心力为110xg，洗涤的混匀加减速时间为15s，洗涤的混匀次数为8次。
93.实施例4
94.一种免疫磁珠孵育方法，包括以下步骤：
95.将80g的pbmc产品加入上述离心设备内，进样以空气探测器检测到连续气体或上述离心设备装满样品后检测到活塞到顶作为结束；
96.再将孵育液30g加入上述离心设备内并和样品混匀以稀释样品；其中，稀释混匀的离心力为200xg，稀释混匀的加减速时间为20s，稀释混匀的次数为8次；
97.稀释后，将抗体加入上述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；进行抗体孵育；其中，抗体孵育混匀离心力为20xg，抗体孵育混匀加减速时间为20s，混匀8次后，间隔时间120s，再混匀8次；
98.抗体孵育结束后，将孵育液100g加入上述离心设备内，以洗涤抗体，结束后，上述离心设备保持运行状态，排废液；其中，洗涤抗体离心力为500xg，洗涤抗体加减速时间为20s，洗涤抗体离心时间为300s，洗涤桶内保留量为20g；
99.再将磁珠加入上述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；进行磁珠孵育；其中，磁珠孵育混匀离心力为20xg，磁珠孵育混匀加减速时间为20s，混匀8次后，间隔时间120s，再混匀8次；
100.磁珠孵育结束后，将孵育液100g加入上述离心设备内，进行磁珠洗涤；其中，洗涤磁珠离心力为500xg，洗涤磁珠加减速时间为20s，洗涤磁珠离心时间为300s，洗涤桶内保留量为25g；
101.洗涤磁珠后，排出废液，并将上述离心设备内的产品混匀，混匀后将产品排出到产品袋，再清空管路残留至上述产品袋，得到25g孵育产品；其中，产品混匀离心力为100xg，产品混匀加减速时间为20s，产品混匀次数为7次。
102.实施例5
103.一种免疫磁珠孵育方法，包括以下步骤：
104.将120g的培养液加入上述离心设备内，进样以空气探测器检测到连续气体或上述离心设备装满样品后检测到活塞到顶作为结束；
105.再将磁珠加入上述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；进行磁珠孵育；其中，磁珠孵育混匀离心力为20xg，磁珠孵育混匀加减速时间为20s，混匀8次后，间隔时间120s，再混匀8次；
106.磁珠孵育结束后，将孵育液100g加入上述离心设备内，进行磁珠洗涤；其中，洗涤磁珠离心力为500xg，洗涤磁珠加减速时间为20s，洗涤磁珠离心时间为300s，洗涤桶内保留量为20g；
107.洗涤磁珠后，排出废液，并将上述离心设备内的产品混匀，混匀后将产品排出到产品袋，再清空管路残留至上述产品袋，得到20g孵育产品；其中，产品混匀离心力为100xg，产品混匀加减速时间为20s，产品混匀次数为8次。
108.综上，本技术提出一种免疫磁珠孵育方法，该方法在离心设备内全封闭操作，故而避免了手动操作中的污染风险，提高了产品制备的安全性，且可孵育的样品类型较多，包括全血孵育、培养液孵育以及pbmc产品孵育等，可孵育的样品量范围大，孵育体积精准，孵育效果好，可组合抗体+磁珠进行孵育或是进行磁珠孵育，从而获得目标细胞与磁珠的复合物，或者目标细胞与抗体和磁珠的复合物作为终产品，后续可根据用户需求做磁珠分选，筛选出目标细胞，得到的终产品中目标细胞的回收率高，且细胞活性高，所使用的仪器及耗材
兼容性强，如图1和图2所示，因而，该免疫磁珠孵育方法不仅安全精准，孵育效果较好，而且所使用的仪器及耗材可满足不同生产线需求，操作简单，适用于批量生产，且用户可根据样品的不同情况选择预处理，如样品进样+浓缩+洗涤、样品进样+稀释、样品进样+洗涤等，用户可适配度高。
109.以上所述仅为本技术的可选实施例，并非因此限制本技术的专利范围，凡是在本技术的发明构思下，利用本技术说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本技术的专利保护范围内。

技术特征：
1.一种免疫磁珠孵育方法，其特征在于，包括以下步骤：将样品加入离心设备，再加入磁珠，进行磁珠孵育；磁珠孵育结束后，将孵育液加入所述离心设备内进行离心以洗涤磁珠；洗涤磁珠后，排出废液，并将所述离心设备内的产品混匀并排出，即得孵育产品。2.根据权利要求1所述的免疫磁珠孵育方法，其特征在于，所述将样品加入离心设备的步骤，包括：按预置的样品总量将样品加入所述离心设备内。3.根据权利要求1所述的免疫磁珠孵育方法，其特征在于，所述将样品加入离心设备的步骤，包括：将样品分批次加入所述离心设备内，进样以空气探测器检测到连续气体或所述离心设备装满样品后检测到活塞到顶作为结束。4.根据权利要求1所述的免疫磁珠孵育方法，其特征在于，所述将样品加入离心设备步骤后，还包括：对样品浓缩至预先设置的样品保留量后，排废液；其中，浓缩的离心力为100-800xg，浓缩的加减速时间为5-30s，浓缩的离心时间为60-600s。5.根据权利要求1所述的免疫磁珠孵育方法，其特征在于，所述将样品加入离心设备步骤后，还包括：将孵育液加入所述离心设备内，对样品进行洗涤，结束后，所述离心设备保持运行状态，排废液；其中，洗涤的离心力为100-1000xg，洗涤的加减速时间为5-30s，洗涤的离心时间为60-600s。6.根据权利要求1所述的免疫磁珠孵育方法，其特征在于，所述将样品加入离心设备步骤后，还包括：将孵育液加入所述离心设备内并和样品混匀以稀释样品；其中，稀释混匀的离心力为100-1000xg，稀释混匀的加减速时间为5-30s，稀释混匀的次数为0-8次。7.根据权利要求1所述的免疫磁珠孵育方法，其特征在于，所述将样品加入离心设备步骤后，还包括：将抗体加入所述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；进行抗体孵育；抗体孵育结束后，将孵育液加入所述离心设备内，进行洗涤抗体，结束后，所述离心设备保持运行状态，排废液；其中，抗体孵育混匀离心力为5-100xg，抗体孵育混匀加减速时间为1-30s，混匀1-100次后，间隔时间0-600s，再混匀1-100次；洗涤抗体离心力为100-1000xg，洗涤抗体加减速时间为5-30s，洗涤抗体离心时间为60-600s。8.根据权利要求1所述的免疫磁珠孵育方法，其特征在于，所述加入磁珠，进行磁珠孵育的步骤，包括：将磁珠加入所述离心设备内，进液以空气探测器检测到连续气体作为结束；进行磁珠孵育；其中，磁珠孵育混匀离心力为5-100xg，磁珠孵育混匀加减速时间为5-30s，混匀1-100次后，间隔时间0-600s，再混匀1-100次。9.根据权利要求1所述的免疫磁珠孵育方法，其特征在于，所述将孵育液加入所述离心设备内进行离心以洗涤磁珠的步骤，包括：将孵育液加入所述离心设备后，进行磁珠洗涤；其中，洗涤磁珠离心力为100-1000xg，洗涤磁珠加减速时间为5-30s，洗涤磁珠离心时间为60-600s。
10.根据权利要求1所述的免疫磁珠孵育方法，其特征在于，所述将所述离心设备内的产品混匀并排出的步骤，包括：将所述离心设备内的产品混匀，混匀后将产品排出到产品袋，再清空管路残留至所述产品袋；产品排出后，将孵育液加入所述离心设备内，洗涤所述离心设备内残留产品并将洗涤液排出到所述产品袋，再清空管路残留至所述产品袋；其中，产品混匀离心力为100-300xg，产品混匀加减速时间为5-30s，产品混匀次数为3-8次；洗涤离心设备内残留产品的混匀离心力为100-500xg，混匀加减速时间为5-30s，混匀次数为3-8次。

技术总结
本申请公开了一种免疫磁珠孵育方法，涉及细胞分离技术领域。一种免疫磁珠孵育方法，包括以下步骤：将样品加入离心设备，再加入磁珠，进行磁珠孵育；磁珠孵育结束后，将孵育液加入离心设备内进行离心以洗涤磁珠；洗涤磁珠后，排出废液，并将离心设备内的产品混匀并排出，即得孵育产品。该免疫磁珠孵育方法不仅安全精准，孵育效果较好，而且所使用的仪器及耗材兼容性高，可满足不同生产线需求，且用户可根据样品的不同情况选择预处理。样品的不同情况选择预处理。样品的不同情况选择预处理。


技术研发人员：魏东兵
受保护的技术使用者：中博瑞康（上海）生物技术有限公司
技术研发日：2023.05.11
技术公布日：2023/7/20