一种灌肠缓解溃疡性结肠炎的复方药物及其应用

1.本发明属于中药药物的应用领域，具体涉及一种灌肠缓解溃疡性结肠炎的复方药物及其应用。


背景技术：

2.溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,uc)是一种常见的慢性、非特异性、炎症性疾病，主要涉及病发部位为乙状结肠和直肠，也可延伸至降结肠，甚至整个结肠，多为结肠浅表炎症，主要侵袭黏膜及黏膜下层。溃疡性结肠炎的早期症状为持续反复发作的血性腹泻，并依次伴有腹痛、便血、粘液状粪便、体重减轻、里急后重、呕吐等症状。持续发展则可能导致息肉及肠穿孔等情况的发生，具有一定的癌变率，与结直肠癌的发病相关。严重危害溃疡性结肠炎患者的健康及正常生活，给患者带来巨大的身体不适和生活不便。且临床治愈难度大，易反复发作，为终生复发性疾病。
3.溃疡性结肠炎治疗缓解途径多样，主要手段包括药物治疗和手术治疗。常见的治疗药物有：5-氨基水杨酸类药物、类固醇类药物、免疫抑制剂和单抗等。溃疡性结肠炎的治疗短期目标主要是维持病情稳定，缓解病患痛苦，延缓病情发展，包括临床症状缓解和内镜检查缓解；长期目标主要为预防残疾和结直肠癌的发生，减轻病人痛苦。
4.现有临床研究对于溃疡性结肠炎的发病机制尚不明确，普遍认为是由多因素共同影响导致溃疡性结肠炎的病发，主要包括遗传易感性、上皮屏障缺陷、免疫反应失调、肠道微生物菌群的改变、饮食和环境因素等。因其发病机制不明，造成了溃疡性结肠炎治疗存在一定局限和不足，例如：常见治疗药物美沙拉嗪，需长期用药，具有一定的肝毒性；免疫抑制剂类药物会造成患者免疫功能紊乱等不良反应。
5.西医治疗溃疡性结肠炎主要是对症治疗、改善状况，治疗难以彻底，难以从根本上控制病情的发展；同时药物的毒副作用大，从而导致患者的依从性低；且溃疡性结肠炎病程较长，迁延难愈，机体内环境平衡被打破，免疫功能紊乱，自我康复能力和抗病能力低下，且西医的治疗往往忽视整体调节，这也是导致本病难以治愈的重要原因。
6.近年来，中医药领域在溃疡性结肠炎治疗中的缓解效果逐渐受到重视，部分中药或中药有效成分已经被证实具有良好的药效。中医角度看待溃疡性结肠炎，根据其临床表现，多将该病归为“痢疾”、“肠澼”、“滞下”等范畴。在治疗理念上更注重整体调节，突出辨证辨病相结合的理念，随症灵活加减药物，强调整体观念与个体化治疗相协调，表现为多靶点、多方位、多环节的综合治理，利于从多方面、多角度缓解临床症状。
7.中药灌肠治疗是溃疡性结肠炎局部治疗的一种重要手段，使用中药灌肠治疗的方法具有一定优势：药物直接作用于病灶部位，降低口服等方式首过效应的影响，减少肝毒性或其他胃肠道不良反应；药液直达患处，维持局部药物浓度稳定，有利于药物吸收，充分发挥灌肠液的局部治疗效果；拓宽了部分刺激性气味药物的适用范围。但是现有中药灌肠的药物效果有限，且价格昂贵。


技术实现要素：

8.为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种效果好、副作用小、低价易得的灌肠治疗溃疡性结肠炎的中药复方药物复方二黄。
9.本发明提供上述中药复方药物复方二黄的制备方法。
10.本发明提供上述中药复方药物复方二黄的应用
11.本发明证明上述中药复方药物复方二黄具有较好抗炎效果。
12.本发明证明上述中药复方药物复方二黄可以抑制nlrp3炎症小体信号通路的激活。
13.本发明采用的技术方案如下：
14.一种灌肠缓解溃疡性结肠炎的复方药物：复方二黄，由如下组分组成：黄芩、黄柏、乳香、没药，其重量组成成分为2：2：1：1。
15.将配方量的黄芩、黄柏、乳香和没药提取物粉末(规格均为20：1)混合，加入沸水煮沸10分钟，自然晾凉后不过滤，保留提取物粉末混匀后定容到统一药物浓度。其中加入水的重量为中药混合物重量的20-70倍，即得灌肠液。
16.上述灌肠液作为溃疡性结肠炎局部治疗药物，经实验证实：对于溃疡性结肠炎具有良好缓解效果，具有清热燥湿、泻火除蒸等功效，可以发挥抗炎、镇痛、抑菌、促修复等效果。
17.理论优势：结合现有研究进展，从中医药角度出发，合理看待溃疡性结肠炎的发病，该病主要表现为急性发作期和慢性缓解期交替发生，反复发作，治愈难度大，病程长。中医将溃疡性结肠炎归为“痢疾”、“肠澼”、“滞下”等范畴，且根据临床表现特点，应归属于痢疾之“久痢”。随着研究的推进，发现虽然溃疡性结肠炎病变位置在结肠，但其病理基础在“脾虚”，即所谓“邪之所凑,其气必虚”；强调湿热疫毒杂合是重要致病条件，湿热蕴积从而导致一系列腹痛、腹泻、便血等临床症状的出现；病程长，久病多虚多於，进一步导致虚实夹杂，加重病情，缠绵难愈；同时表现出严重的肠屏障脆弱和功能的丧失。针对溃疡性结肠炎的发病特点，可以具有选择行气活血、化瘀止痛、消肿生肌等功效的药物，有助于提高治疗效果。
18.中药复方药物优势：中药复方药物复方二黄具有抗炎、抑菌、化瘀、止痛等功效，理论上对于溃疡性结肠炎具有一定的缓解治疗效果，有一定针对性；药液通过灌肠给药的方式，直达患处，利于提高局部药物浓度，利于对药物的吸收利用，提高效率；且该灌肠液的制备方法简单快速、便于操作、廉价易得。
19.专利申请cn 109939182a公开了一种治疗溃疡性结肠炎的生肤油及其制备方法和应用，其中公开涉及了黄芩、黄柏、乳香和没药的成分，但本发明相当于在对比文件1的基础上省略了黄连、大黄、黄芪、当归、地榆、地黄、白芷、白薇、白芨、冰片、食用植物油、乳膏剂基质，总共12种其他成分。本发明仅4味中药成分依然保持溃疡性结肠炎的治疗功能，可降低药物配伍复杂性甚至毒副作用，带来预料不到的技术效果。
20.本发明虽然没有创造出全新的物质，却也不是现有技术的简单组合，本发明技术配方经过严格选择和重新组合之后，与专利申请cn 109939182a或者其他记载有类似成分的文献相比，本发明具有以下突出优势：中药复方药物复方二黄组成成分廉价易得，大大降低用药成本，经济效益高；灌肠液制备方式简单快速且方便，可操作性强；中药复方药物复
方二黄虽组成成分简单，但治疗效果显著，可以发挥较好抗溃疡性结肠炎效果，为临床用药拓宽药物选择范围；本发明公开了中药复方药物复方二黄对溃疡性结肠炎的治疗效果；公开了中药复方药物复方二黄具备一定抗炎作用；公开了中药复方药物复方二黄可能是通过抑制nlrp3炎症小体信号通路激活达到缓解溃疡性结肠炎的目的。
附图说明
21.图1是大鼠结肠组织解剖图片，包括正常组、tnbs模型组、给药组(h)(高浓度复方二黄药液)、给药组(l)(低浓度复方二黄药液)和5-asa组(阳性对照药物美沙拉嗪)各组别大鼠结肠组织代表图片；
22.正常组大鼠结肠组织完整，表面光滑，未见坏死溃疡等形成；
23.tnbs模型组大鼠结肠组织出现明显红肿，大面积坏死，肠壁增厚，结肠长度缩短等情况；
24.给药组分为高、低浓度，分别对应加水重量为提取物重量的20和70倍，即为给药组(h)和给药组(l)；
25.不同浓度给药组和5-asa组较tnbs模型组相比，结肠组织外观形态出现明显好转，红肿消退，坏死面积减小，肠壁增厚情况得到控制，炎症缓解。
26.图2是各组别大鼠结肠组织h&e染色代表图片；
27.正常组大鼠结肠组织完整性高，结肠黏膜结构完整；
28.tnbs模型组大鼠结肠组织完整性被破坏，结肠黏膜缺失，结构紊乱，组织松散；
29.给药组分为高、低浓度，分别对应加水重量为提取物重量的20和70倍，即为给药组(h)和给药组(l)；
30.不同浓度给药组和5-asa组较tnbs模型组相比，结肠组织结构有所恢复，结肠黏膜结构紧密，肠屏障完整性有所提高。
31.图3是促炎细胞因子il-1β的表达情况结果图，以动物实验中大鼠结肠组织匀浆为样本，通过western blot法，检测其促炎细胞因子il-1β的表达情况；
32.在经过tnbs刺激后，tnbs模型组大鼠结肠组织检测到il-1β表达量明显增加；在经中药复方药物复方二黄治疗之后，给药组(h)和给药组(l)大鼠结肠组织匀浆中促炎细胞因子il-1β的高表达被逆转，证明给药组(h)和给药组(l)大鼠炎症症状明显减轻，促炎细胞因子表达水平降低，中药复方药物复方二黄具有一定抗炎效果。
33.图4是nlrp3炎症小体信号通路相关蛋白表达情况结果图，以动物实验中大鼠结肠组织匀浆为样本，通过western blot法，检测nlrp3炎症小体信号通路相关蛋白表达情况；
34.在经过tnbs刺激后，tnbs模型组大鼠结肠组织检测到nlrp3、asc和pro-caspase1蛋白表达水平提高，cleaved-caspase1蛋白表达水平提高；在经中药复方药物复方二黄治疗之后，给药组(h)和给药组(l)大鼠结肠组织匀浆中nlrp3、asc和pro-caspase1蛋白表达水平下降，cleaved-caspase1蛋白表达水平下降。证明中药复方药物复方二黄可以降低nlrp3炎症小体信号通路相关蛋白表达量，抑制nlrp3炎症小体信号通路的激活，从而减轻炎症。
具体实施方式
35.为使本领域技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例和附图对本发明做进一步说明。如无特殊说明，本发明所采用的实验方法均为常规方法，所用实验器材、材料、试剂等均可从商业途径获得。
36.实施例1：
37.中药复方药物复方二黄，作为一种灌肠治疗溃疡性结肠炎的中药复方药物，其组成成分为黄芩、黄柏、乳香、没药，且重量组成成分为2：2：1：1。
38.制备方法：将配方量的黄芩、黄柏、乳香和没药提取物粉末(规格均为20：1)混合，加入沸水煮沸10分钟，自然晾凉后不过滤，保留提取物粉末混匀后定容到统一药物浓度。其中加入水的重量为中药混合物重量的20-70倍，即得灌肠液。
39.实施例2：
40.中药复方药物复方二黄，作为一种灌肠治疗溃疡性结肠炎的中药复方药物，在治疗溃疡性结肠炎中的药效。
41.2.1实验动物
42.spf级7周龄的雄性sd大鼠，购买于辽宁省长生生物技术股份有限公司。(动物许可证号：scxk(辽)2020-0001)
43.2.2实验材料
44.黄芩、黄柏、乳香和没药提取物粉末(规格均为20：1)购于西安圣青生物科技有限公司；水合氯醛购于国药集团化学试剂有限公司；5％w/v三硝基苯磺酸(tnbs)溶液购于sigma；无水乙醇购于天津市科密欧化学试剂有限公司；磷酸盐缓冲溶液(pbs)购于德国欧蒙公司；一次性直肠给药管购于邯郸一超医疗器械销售有限公司。
45.2.3tnbs诱导sd大鼠实验性溃疡性结肠炎模型的制备及给药
46.雄性sd大鼠随机分组，造模前禁食24h，使用10％水合氯醛腹腔注射麻醉。使用tnbs/乙醇混合溶液(60％tnbs+40％乙醇混合物)构建sd大鼠实验性溃疡性结肠炎模型：sd大鼠麻醉后分别于距离肛门口7cm、8cm处，灌肠给与tnbs/乙醇混合溶液各0.14ml，期间间隔15分钟，保证药物不流出体外。次日起，雄性sd大鼠出现活动减少、蜷缩、腹泻、便血等症状，视为造模成功，即得tnbs诱导sd大鼠实验性溃疡性结肠炎模型。
47.造模后第二天，给药组分别灌肠给与不同浓度中药复方药物复方二黄(浓度为1.44g/100ml、4.32g/100ml，分别对应加入水的重量为中药提取物粉末重量的70、20倍)各0.8ml，5-asa组灌肠给与5-氨基水杨酸(5-aminosalicylic acid，5-asa)混悬液(浓度为0.1g/ml)0.8ml，正常组和tnbs模型组灌肠给与等体积生理盐水。造模后24h开始药物治疗，每日同时间给药一次，连续五天药物治疗为一实验周期。
48.2.4记录数据和标本留取
49.每次给药前记录大鼠体重变化、粪便情况(粪便稠度、便潜血)、精神状态等，末次给药后处死实验对象，取其结肠组织、胸腺组织，由肛门处起始，沿肠系膜轴剪开，观察大鼠病变部位组织病理情况(红肿、坏死面积等)，记录大鼠结肠长度，整个过程于低温环境操作，用冷生理盐水冲净后留取标本用于后续指标检测及实验。
50.2.6考察项目及评价标准
51.(1)sd大鼠状况
52.造模成功后，观察不同组别sd大鼠毛发光泽度、活动频次、食欲状态、是否蜷缩身体、粪便状况等，并记录大鼠每日体重变化情况。
53.(2)sd大鼠体重变化情况
54.sd大鼠体重变化百分比＝(取材当日大鼠体重-第一天大鼠体重)/第一天大鼠体重*100％
55.(3)sd大鼠结肠长度
56.sd大鼠结肠组织，由肛门处起始，至完整结肠远端，沿肠系膜轴剪开，记录长度。
57.(4)sd大鼠胸腺指数
58.sd大鼠胸腺指数＝胸腺质量/取材当日体重
59.(5)疾病活动指数dai评分统计
60.统计治疗期结束当日大鼠疾病活动指数，即取材当日大鼠dai评分。大鼠dai评分＝(粪便性状评分+体重变化情况评分+便潜血情况评分)
61.表1疾病活动指数dai评分标准
[0062][0063]
(6)结肠黏膜损伤指数cmdi评分统计
[0064]
cmdi评分＝红肿、溃疡及坏死情况评分+黏连情况评分
[0065]
表2结肠黏膜损伤指数cmdi评分标准
[0066]
[0067][0068]
2.7统计学处理
[0069]
应用prism7.0统计软件，所有数据均以均数
±
标准差表示。采用单因素方差分析(anova)进行统计分析。确认方差齐性，采用tukey多元比较检验比较组间差异。p《0.05为差异有统计学意义，p《0.01为有显著统计学差异。
[0070]
2.8结果
[0071]
(1)sd大鼠状况：正常组大鼠精神状态正常，无明显不适，毛发光泽，进食饮水量保持正常。其它组别大鼠造模之后出现不同程度的精神萎靡，状态不济，身体蜷缩，活动频次降低，出现不同程度体重降低和稀便。其中tnbs模型组大鼠粪便多为稀便或严重水便，部分鼠出现便血的情况，毛发杂乱无光泽，进食饮水量降低，多蜷缩；给药组(h)和给药组(l)组别的大鼠较tnbs模型组大鼠行为活动状态有所改善，从治疗第三天起精神状态好转，活动频次逐渐增加，粪便由稀便转变为多松散软便。
[0072]
(2)sd大鼠体重变化情况
[0073]
表3sd大鼠体重变化情况(x
±
s)
[0074][0075]
与正常组比较，
#
p《0.05，
##
p《0.01；与tnbs模型组比较，
*
p《0.05，
**
p《0.01。
[0076]
(3)sd大鼠结肠长度
[0077]
表4sd大鼠结肠长度
[0078][0079][0080]
与正常组比较，
#
p《0.05，
##
p《0.01；与tnbs模型组比较，
*
p《0.05，
**
p《0.01。
[0081]
(4)sd大鼠胸腺指数
[0082]
表5sd大鼠胸腺指数
[0083][0084]
与正常组比较，
#
p《0.05，
##
p《0.01；与tnbs模型组比较，
*
p《0.05，
**
p《0.01。
[0085]
(5)疾病活动指数dai评分统计
[0086]
表6疾病活动指数dai评分统计
[0087][0088]
与正常组比较，
#
p《0.05，
##
p《0.01；与tnbs模型组比较，
*
p《0.05，
**
p《0.01。
[0089]
(6)结肠黏膜损伤指数cmdi评分统计
[0090]
表7结肠黏膜损伤指数cmdi评分统计
[0091][0092]
与正常组比较，
#
p《0.05，
##
p《0.01；与tnbs模型组比较，
*
p《0.05，
**
p《0.01。
[0093]
2.9结果分析
[0094]
在无外加tnbs刺激的情况下，正常组大鼠保持正常活动，毛发光泽，身体舒展，进食、饮水量正常，大鼠体重呈现逐步增长的趋势；且其粪便形态正常，无软便、稀便、便血等情况发产生。结肠组织表面光滑，无明显炎症、红肿、溃疡或坏死。dai和cmdi评分低。
[0095]
在经过tnbs造模后，tnbs模型组大鼠出现活动频次下降，毛发毛躁，身体蜷缩，进食、饮水量明显降低，体重下降等表现；且出现明显稀便，甚至血便等情况。结肠组织肠道内壁突起，肠壁增厚，且出现大面积红肿、明显坏死、出现肠黏连、溃疡等情况。dai和cmdi评分显著升高。
[0096]
给药组大鼠在经过不同浓度中药复方药物复方二黄灌肠治疗后，都表现出了一定的好转，精神状态明显回升，蜷缩状态改善，不适症状有所缓解，体重下降趋势得到控制；腹泻、便血等情况得到明显改善，结肠组织的红肿、坏死、肠壁增厚等情况得到治疗。其中给药组(h)的dai和cmdi评分与模型组呈现显著差异。
[0097]
实施例3：
[0098]
通过western blot法，评价中药复方药物复方二黄，作为一种灌肠治疗溃疡性结肠炎的中药复方药物，对促炎细胞因子表达的影响和在抗炎效果方面的作用。
[0099]
3.1通过western blot法测定促炎细胞因子il-1β
[0100]
以实施例2中所获得的大鼠结肠组织为样本进行实施例3：将大鼠结肠组织制备为组织匀浆，定量后通过western blot法测定促炎细胞因子il-1β的表达(结果见图3)。
[0101]
3.2结果分析
[0102]
在western blot实验中，可以看到：在经过tnbs刺激后，tnbs模型组大鼠结肠组织检测到il-1β表达量明显增加；在经中药复方药物复方二黄治疗之后，给药组(h)和给药组(l)大鼠结肠组织匀浆中促炎细胞因子il-1β的高表达被逆转，且有一定剂量依赖关系。证明给药组(h)和给药组(l)大鼠炎症症状明显减轻，中药复方药物复方二黄可以降低促炎细胞因子的表达水平，具有一定抗炎效果。
[0103]
实施例4：
[0104]
通过western blot法，评价中药复方药物复方二黄，作为一种灌肠治疗溃疡性结肠炎的中药复方药物，在抑制nlrp3炎症小体信号通路激活情况的作用。
[0105]
4.1通过western blot法测定nlrp3炎症小体信号通路相关蛋白表达情况
[0106]
以实施例2中所获得的大鼠结肠组织为样本进行实施例4：将大鼠结肠组织制备为组织匀浆，定量后通过western blot法测定nlrp3炎症小体信号通路相关蛋白的表达(结果见图4)。
[0107]
4.2结果分析
[0108]
在western blot实验中，可以看到：在经过tnbs刺激后，tnbs模型组大鼠结肠组织检测到nlrp3、asc和pro-caspase1蛋白表达水平提高，cleaved-caspase1蛋白表达水平提高；在经中药复方药物复方二黄治疗之后，给药组(h)和给药组(l)大鼠结肠组织匀浆中nlrp3、asc和pro-caspase1蛋白表达水平下降，cleaved-caspase1蛋白表达水平下降。证明中药复方药物复方二黄可以降低nlrp3炎症小体信号通路相关蛋白的表达水平，抑制nlrp3炎症小体信号通路的激活，从而减轻炎症。
[0109]
以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例，而并非本发明可行实施的全部实施例。对于本领域一般技术人员而言，在不背离本发明原理和精神的前提下对其所作出的任何显而易见的改动，都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。

技术特征：
1.一种灌肠缓解溃疡性结肠炎的复方药物：复方二黄，其特征在于，包括如下组分：黄芩、黄柏、乳香、没药。2.如权利要求1所述的一种灌肠缓解溃疡性结肠炎的复方药物，其特征在于，包括如下重量分数的组分：黄芩2份，黄柏2份，乳香1份，没药1份。3.如权利要求1所述的一种灌肠缓解溃疡性结肠炎的复方药物，其特征在于，所述黄芩、黄柏、乳香、没药为黄芩、黄柏、乳香、没药的水提物。4.如权利要求3所述的一种灌肠缓解溃疡性结肠炎的复方药物的制备方法，其特征在于：将配方量的黄芩、黄柏、乳香和没药提取物混合，加入沸水煮沸10分钟，自然晾凉后不过滤，保留提取物粉末混匀后定容到统一药物浓度。5.如权利要求1所述的一种灌肠缓解溃疡性结肠炎的复方药物，其特征在于，在制备缓解溃疡性结肠炎药物中的应用。6.如权利要求1所述的一种灌肠缓解溃疡性结肠炎的复方药物，其特征在于，在制备缓解溃疡性结肠炎药物的给药方式为灌肠给药。7.如权利要求1所述的一种灌肠缓解溃疡性结肠炎的复方药物，其特征在于在制备缓解溃疡性结肠炎灌肠药物中具有抗炎作用。8.如权利要求1所述的一种灌肠缓解溃疡性结肠炎的复方药物，在制备缓解溃疡性结肠炎灌肠药物中抑制nlrp3炎症小体信号通路的激活。

技术总结
本发明属于中药药物的应用领域，公开了一种灌肠缓解溃疡性结肠炎的复方药物及其应用，这种复方药物为复方二黄，它组成成分包括：黄芩、黄柏、乳香和没药，其重量组成成分为2：2：1：1。本发明揭示了上述复方制剂抗溃疡性结肠炎的应用及其抗炎作用，进一步阐明该中药复方制剂对NLRP3炎症小体信号通路激活状态的影响。剂对NLRP3炎症小体信号通路激活状态的影响。


技术研发人员：杨丽 安雯 张一鸣 李威 孙静 卢家骐
受保护的技术使用者：大连理工大学
技术研发日：2023.03.23
技术公布日：2023/7/20