一种石榴皮提取物的制备方法及其应用与流程

1.本发明属于食品、药品及化妆品技术领域，具体涉及一种石榴皮提取物的制备方法及其应用，具体应用在缓解炎症、抗氧化、抗菌功能的药品、食品、化妆品中应用。


背景技术：

2.红石榴皮为石榴的干燥果皮，含有多酚、黄酮、皂苷、生物碱、多糖等多种活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性。研究证实，石榴皮多酚具有很好地保健功能，但其在氧气、光照等条件下易被氧化，导致货架期短。针对石榴皮多酚稳定性问题，目前主要通过提取石榴皮多酚后，再添加辅料应用脂质体、乳化等技术制备石榴皮多酚脂质体，现有技术工艺主要在前端提取时，应用大量的有机溶剂提取纯化得到石榴皮多酚，再采用不同辅料及溶剂制备，工艺复杂且所用辅料可能不适用食品、化妆品及药品体系。因此，本发明采用研磨乳化、提取包埋及干燥制备的一体化方法制备获得石榴皮提取物，同时所采用辅料均为食品、化妆品及药品目录内允许使用的辅料成分，工艺简单，易于产业化推广应用。经实验证实，本发明专利所制备的石榴皮提取物稳定性显著提高，并且可显著抑制由lps诱导raw 264.7细胞分泌no的作用，所述石榴皮提取物具有良好的抗炎功能，可以应用在缓解炎症、抗氧化、抗菌的药品、食品、化妆品中。


技术实现要素：

3.本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明第一个方面提出一种石榴皮提取物，石榴皮与乳化剂形成乳化包裹物，从而显著增强石榴皮提取物的稳定性与生物活性。
4.本发明的第二个方面提出了一种上述石榴皮提取物的制备方法。
5.本发明上述的目的通过以下技术方案实现：一种石榴皮提取物，以石榴皮为原料，通过研磨乳化、提取、干燥制备方法获得石榴皮提取物，其特征在于，石榴皮提取物由石榴皮、乳化剂组成，所述乳化剂至少部分包合所述石榴皮，所述乳化剂选自氢化蓖麻油，聚甘油脂肪酸脂、单甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸脂，卵磷脂的至少两种。
6.所述乳化剂溶于50%~80%乙醇水溶液中，得到乳化剂溶液，其中乳化剂的质量分数为5%~40%，优选为5%~20%。
7.本发明中，采用乳化剂分散液能对石榴皮进行乳化富集和包合一体化，制得溶解度高且生物活性优异的石榴皮包合物，可直接应用到产品中。本发明制备方法能避免传统提取方法中采用提取、分离、纯化，再进行包裹的复杂工艺，同时大量减少有机溶剂，生产成本大幅度降低。
8.一种石榴皮提取物的制备方法，其特征在于，主要由以下步骤制备得到：（1）研磨处理：取石榴皮干制品粉碎过80目筛获得石榴皮细粉，按料液比为1:（5~30）加入乳化剂溶液，于37℃搅拌均匀后，加入研磨机中以3000r/min转速处理2h，得到石榴
皮研磨液；（2）提取处理：取步骤（1）所得石榴皮研磨液，将其投入提取罐中80℃保温1h后，采用10000r/min的管式离心，得到石榴皮上清液；（3）脱色处理：取步骤（2）所得石榴皮上清液，升温至50~60℃,加入0.5%活性炭脱色处理4h，过滤得到石榴皮滤液；（4）浓缩干燥：取步骤（3）所得的石榴皮滤液，于70℃浓缩至滤液体积的1/10，得到浓缩液，采用温度为165-170℃进行喷雾干燥，得到石榴皮提取物。
9.进一步地，在一些较优的实施例中，所述乳化剂由三种成分组成，其质量比为1~10:1~10:1~10；进一步地，所述乳化剂溶于50%~70%乙醇水溶液中，得到乳化剂溶液，其中乳化剂的质量分数为5%~40%。
10.进一步地，所制备的石榴皮提取物稳定性显著提高，并且可显著抑制由lps诱导raw 264.7细胞分泌no的作用，提示石榴皮提取物具有良好的抗炎功能，可以应用在消除炎症、抗氧化、抗菌的药品、食品、化妆品中。
11.优选地，所述乳化剂由氢化蓖麻油，聚甘油脂肪酸脂、单甘油脂肪酸酯组成，其质量比为1~3:2~5:1~5；优选地，所述乳化剂溶于60%乙醇水溶液中，得到乳化剂溶液，其中乳化剂的质量分数为10%。
12.优选地，在本发明的一些更优选的实施方式中，所述石榴皮提取物的制备方法，包括如下步骤：（1）研磨处理：取石榴皮干制品粉碎过80目筛获得石榴皮细粉，按料液比为1:（10-15）加入乳化剂溶液，乳化剂溶液由氢化蓖麻油，单甘油脂肪酸酯、卵磷脂组成，其质量比为1:3:3，乳化剂浓度为10%，于37℃搅拌均匀后，加入研磨机中以3000r/min转速处理2h，得到石榴皮研磨液；（2）提取处理：取步骤（1）所得石榴皮研磨液，投入提取罐中80℃保温1h后，采用10000r/min的管式离心，得到石榴皮上清液；（3）脱色处理：取步骤（2）所得石榴皮上清液，升温至50~60℃,加入0.5%活性炭脱色处理4h，过滤得到石榴皮滤液；（4）浓缩干燥：取步骤（3）所得的石榴皮滤液，于70℃浓缩至滤液体积的1/10，得到浓缩液，采用温度为165-170℃进行喷雾干燥，得到石榴皮提取物。
13.其中，当制备产品为药品、保健食品、功能食品时，产品形式包括口服液、颗粒剂、片剂、胶囊剂、压片糖果、粉剂、凝胶糖果，并通过口服方式食用。外用贴剂时，产品形式包括凝胶剂、乳膏及喷雾。
14.优选地，所述的化妆品、药品、食品还包含药剂学、普通食品、保健食品、特殊医学食品法规允许使用的辅料本发明具有以下增益效果：本发明技术能实现对石榴皮中的多酚进行乳化富集和包合一体化，制得溶解性、稳定性高且抗炎活性良好的石榴皮提取物，可直接应用到产品中。本发明制备方法能避免传统提取方法中采用提取、分离、纯化，再进行制剂包裹的复杂工艺，并且可大量减少工艺
过程使用的有机溶剂，有利于降低工艺生产成本。此外，经实验证实，本发明专利所制备的石榴皮提取物稳定性显著提高，并且可显著抑制由lps诱导raw 264.7细胞分泌no的作用，提示石榴皮提取物具有良好的抗炎功能，可以应用在缓解炎症、抗氧化、抗菌的药品、食品、化妆品中。
15.具体实施方式
16.以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围，本发明实施例采用的石榴皮原料由广州市康伦生物技术有限公司提供，其余试剂为常规购买的原料试剂。
17.实施例1采用以石榴皮为原料，通过以下方法制备，得到一种石榴皮提取物，主要由以下步骤制备得到：（1）研磨处理：取石榴皮干制品粉碎过80目筛获得石榴皮细粉，按料液比为1:15加入乳化剂溶液，乳化剂溶液由氢化蓖麻油、单甘油脂肪酸酯，卵磷脂组成，其质量比为1:3:3，乳化剂浓度为10%，于37℃搅拌均匀后，加入研磨机中以3000r/min转速处理2h，得到石榴皮研磨液；（2）提取处理：取步骤（1）所得石榴皮研磨液，投入提取罐中80℃保温1h后，采用10000r/min的管式离心，得到石榴皮上清液；（3）脱色处理：取步骤（2）所得石榴皮上清液，升温至60℃,加入0.5%活性炭脱色处理4h，过滤得到石榴皮滤液；（4）浓缩干燥：取步骤（3）所得的石榴皮滤液，于70℃浓缩至滤液体积的1/10，得到浓缩液，采用温度为170℃进行喷雾干燥，得到石榴皮提取物。
18.实施例2采用以石榴皮为原料，通过以下方法制备，得到一种石榴皮提取物，主要由以下步骤制备得到：（1）研磨处理：取石榴皮干制品粉碎过80目筛获得石榴皮细粉，按料液比为1:20加入乳化剂溶液，乳化剂溶液由氢化蓖麻油，聚甘油脂肪酸脂、单甘油脂肪酸酯组成，其质量比为1:5:4，乳化剂浓度为5%，于37℃搅拌均匀后，加入研磨机中以3000r/min转速处理2h，得到石榴皮研磨液；（2）提取处理：取步骤（1）得石榴皮研磨液，投入提取罐中80℃保温1h后，采用10000r/min的管式离心，得到石榴皮上清液；（3）脱色处理：取步骤（2）石榴皮上清液，升温至60℃,加入0.5%活性炭脱色处理4h，过滤得到石榴皮滤液；（4）浓缩干燥：取步骤（3）所得的石榴皮滤液，于70℃浓缩至滤液体积的1/10，得到浓缩液，采用温度为170℃进行喷雾干燥，得到石榴皮提取物。
19.实施例3
采用以石榴皮为原料，通过以下方法制备，得到一种石榴皮提取物，主要由以下步骤制备得到：（1）研磨处理：取石榴皮干制品粉碎过80目筛获得石榴皮细粉，按料液比为1:10加入乳化剂溶液，乳化剂溶液由氢化蓖麻油，蔗糖脂肪酸脂，其质量比为1:5，乳化剂浓度为20%，于37℃搅拌均匀后，加入研磨机中以3000r/min转速处理2h，得到石榴皮研磨液（2）提取处理：取步骤（1）所得石榴皮研磨液，投入提取罐中80℃保温1h后，采用10000r/min的管式离心，得到石榴皮上清液；（3）脱色处理：取步骤（2）所得石榴皮上清液，升温至60℃,加入0.5%活性炭脱色处理4h，过滤得到石榴皮滤液；（4）浓缩干燥：取步骤（3）所得的石榴皮滤液，于70℃浓缩至滤液体积的1/10，得到浓缩液，采用温度为165℃进行喷雾干燥，得到石榴皮提取物。
20.实验1石榴皮提取物储藏稳定性分析取本发明实施例样品、市售石榴皮提取物1样品装透明瓶并置于室温条件下存放，于第0、1、3、6、12月取样检测石榴皮提取物中多酚含量，计算石榴皮多酚保留率。测试方法为将一定量的多酚粗提液稀释至 100 倍，取 1 ml 稀释液于试管中并分别加入福林-酚试剂
ⅱꢀ
0.2 ml、水 6 ml、10% 碳酸钠 1 ml。在室温下避光反应 30 min，在 a=765 nm 下测定吸光值。用水做空白对照，每组三个平行。以没食子酸标准溶液中溶质溶度（mg/ml）为 x 轴，吸光度 a 为 y 轴，绘制标准曲线，标准曲线方程为：y=10.256x+0.0028，r2=0.9993。m多酚含量(mg/g) = c/m
ꢀ×v×
100式中，（c：没食子酸浓度mg/ml；m：石榴皮质量g；v：稀释液体积ml，）多酚保留率/（%）=mi/m0
×
100%，其中m0为第0月多酚含量，mi为第i月多酚含量。
21.表1石榴多酚提取物稳定性测试在石榴皮提取物储藏稳定性分析实验中，市售石榴皮提取物在1，3，6，12个月后，其多酚含量大量流失，12月后石榴皮中多酚含量只有初始含量的78.07%。而实施例1~3所述石榴皮提取物多酚含量无明显变化。因此，本专利所发明的研磨乳化、提取包埋及干燥方法获得石榴皮提取物能够最大限度的保留其多酚含量。经实验证实，本发明专利所制备的石榴皮提取物稳定性显著提高。
22.实验2石榴皮提取物对lps诱导的raw264.7细胞分泌no抑制作用
将小鼠巨噬细胞系raw264.7加入含有10%fbs胎牛血清、1%双抗（链霉素100 mg/ml、青霉素100u/ml）和90%dmem完全培养基中培养。待raw264.7细胞长满培养瓶后，按体积比1:3的稀释比对细胞进行传代培养。在96孔板中加入8x103个/孔对数期生长的raw264.7细胞，37℃，5%co2条件下孵育过夜。取活化好的raw264.7细胞适量，以5*10^4个/孔的细胞密度接种 24孔板中，空白组加入完全培养基，lps 组加入终质量浓度为1mg/l的lps，给药组分别加入实施例1组（125μg/ml），随后加入1mg/l的lps，使每组的总体积为3 ml，放入细胞培养箱中继续培养24 h后，随后加入1mg/l的lps，使每组的总体积为3 ml，放入细胞培养箱中继续培养24 h后，随后取上清加入格里斯试剂，使用酶标仪于540nm波长检测od值，计算no含量和抑制率，计算抑制率公式为x（%）=（h模型组-h样品组）/（h模型组-h空白组）*100%，其中h为实验组的no含量。
23.表1.石榴皮提取物对抑制raw264.7生成no的影响实验组no含量/（μmol/l）抑制率/（%）空白组16.12
±
1.31—lps组63.07
±
1.12
####
—实施例151.23
±
1.41
**
25.21实施例248.95
±
1.13
**
30.07实施例344.22
±
1.26
***
40.14市售石榴皮提取物156.07
±
1.0714.91注：####表示：与lps组相比，p＜0.0001；*表示：与lps组相比，p＜0.05；***表示：与lps组相比，p＜0.001。
24.本实验发现石榴皮提取物能够抑制lps诱导的巨噬细胞对no的产生，与市售石榴皮提取物相比，本专利所发明研磨乳化、提取包埋及干燥方法获得石榴皮提取物，其对no的抑制率有显著提高。实施例3所提供的一种石榴皮的制备方法对no的抑制率高达40.14%，而与市售石榴皮比，实施例3对no产生的抑制率提高了25.23%。实施例2提高了15.17%，实施例1提高了10.3%。本发明专利所制备的石榴皮提取物能够抑制lps诱导的raw cell 264.7 的no释放作用，表明其具有良好的抗炎症反应生物活性， 可以应用在缓解炎症、抗氧化、抗菌的药品、食品、化妆品中。
25.显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

技术特征：
1.一种石榴皮提取物，以石榴皮为原料，通过研磨乳化、提取、干燥制备方法获得石榴皮提取物，其特征在于，包裹石榴皮提取物与乳化剂，所述乳化剂至少部分包合所述石榴皮，所述乳化剂选自氢化蓖麻油，聚甘油脂肪酸脂、单甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸脂，卵磷脂的至少两种。2.根据权力要求1所述的石榴皮包合物，其特征在于，所述乳化剂溶于50%~80%乙醇水溶液中，得到乳化剂溶液，其中乳化剂的质量分数为5%~40%。3.一种如权力要求1或2所述的石榴皮包合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）研磨处理：取石榴皮干制品粉碎过80目筛获得石榴皮细粉，按料液比为1:（5~20）加入乳化剂溶液，于37℃搅拌均匀后，加入研磨机中以3000r/min转速处理2h，得到石榴皮研磨液；（2）提取处理：取步骤（1）所得石榴皮研磨液，将其投入提取罐中80℃保温1h后，采用10000r/min的管式离心，得到石榴皮上清液；（3）脱色处理：取步骤（2）所得石榴皮上清液，升温至50~60℃,加入0.5%活性炭脱色处理4h，过滤得到石榴皮滤液；（4）浓缩干燥：取步骤（3）所得的石榴皮滤液，于70℃浓缩至滤液体积的1/10，得到浓缩液，采用温度为165-170℃进行喷雾干燥，得到石榴皮提取物。4.根据权利要求1、3任一所述的石榴皮提取物，具有抗炎的功效，可以应用在缓解炎症反应、抗氧化，抗菌相关的药品、食品、化妆品等领域中。5.一种具备改善炎症功效的食品、日化产品、药品和/或皮肤外科用制品，其特征在于，其由权利要求1、3、4任意一项所述石榴皮提取物和食品、化妆品及药品可接受的辅料制备而成。

技术总结
专利名称：一种石榴皮提取物的制备方法及其应用本发明涉及一种石榴皮提取物的制备方法及其应用，所述的石榴皮提取物以石榴皮为原料，采用研磨乳化、提取包埋及干燥方法获得石榴皮提取物。经实验证实，本发明专利所制备的石榴皮提取物稳定性显著提高，并且可显著抑制由LPS诱导RAW 264.7细胞分泌NO的作用，所述石榴皮提取物具有良好的抗炎。榴皮提取物具有良好的抗炎。


技术研发人员：林丽 杜志云 朱溶滔
受保护的技术使用者：佛山市康伲爱伦生物技术有限公司
技术研发日：2023.04.06
技术公布日：2023/7/22