一种利用共价有机框架快速原位包封酶的方法

1.本发明属于固定化酶技术领域，具体涉及一种利用共价有机框架快速原位包封酶的方法。


背景技术：

2.酶是一种具有催化效率高、区域和立体选择性好等特性的生物催化剂，广泛应用于医药制造、食品加工、生物传感器等领域。尽管存在诸多优势，但酶价格昂贵且易失活、体外环境稳定性差等缺陷使其难以适应于复杂恶劣的工业化操作。酶固定化技术是利用载体材料通过物理吸附、共价或交联、原位包封等策略来提高酶的操作稳定性，是克服工业化应用局限的有效方法。目前，研究者一般采用物理吸附、共价或交联等后固定化策略，以上方法具有较好的酶学性能，但存在大尺寸酶封装难、酶载量低以及酶泄露等局限。
3.许多载体材料都可用于酶固定化，例如壳聚糖、二氧化硅、分子筛等。共价有机框架(cofs)是由有机结构单元通过共价键连接而成的晶态有机多孔聚合物，具有结构明确可设计、比表面积大、易于修饰与功能化等优点，其规则的孔道利于进行底物转移和酶构象限制，是酶固定化的理想载体。但是，cofs固定化酶技术仍存在制备工艺苛刻的问题，如所需温度高、使用大量有机溶剂、反应时间长等。原位包封酶是将有机组成单元与酶混合，同步完成cofs的合成与酶的有序封装，具有操作步骤简便、无需考虑酶尺寸、酶载量大且不易泄露等特点，但是难点在于要求载体的制备工艺温和，对酶活性影响小。
4.目前只有少量的cofs原位包封酶方法被报道，hao c.等(cn 114395549a一种基于中空共价有机框架材料原位封装酶的方法)(acs appl.mater.interfaces 2022,14,18,20641
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20651)首次实现了cofs原位包封酶，通过使用少量乙酸作为催化剂，在1,4-二氧六环溶剂中，将胰蛋白酶或葡萄糖氧化酶与cofs配体对苯二胺和均苯三甲醛进行共沉淀反应，同时在室温下经ostwald熟化过程孵育3天，制备了具有中空胶囊结构的酶@cofs催化剂，然而整个过程反应时间长达3天，而且使用有毒有机溶剂1,4-二氧六环，对环境不友好。yao c.等(angewandte chemie international edition.2022.)利用较少量乙酸作为催化剂，在室温下的水溶液中，将脂肪酶与cofs配体2,5-双(2-甲氧基乙氧基)对苯二甲酰肼和均苯三甲醛进行共沉淀反应，10min内制备了脂肪酶@cofs催化剂，但是使用的cofs胺基配体2,5-双(2-甲氧基乙氧基)对苯二甲酰肼是由2,5-二羟基对苯二甲酸二乙酯从头合成的，制备时间长、操作繁琐、产率较低，而该配体的市售价格较高，导致制备酶@cofs的成本高。sachin t.等(chemical engineering journal.2022.)利用由氯化胆碱和尿素组成的低共熔溶剂作为反应溶剂和催化剂，选择胺基配体为对苯二胺、1,3,5-三(4-氨基苯基)苯，醛基配体为2,4,6-三羟基苯-1,3,5-三甲醛，首先将葡萄糖氧化酶表面的氨基与cofs醛基配体进行预交联，再加入两种cofs配体，室温下2h制备得到酶@cofs催化剂，固定化葡萄糖氧化酶的活性只能达到游离酶的62％。然而相关文献报道了尿素会使酶失活，尽管作为低共熔溶剂组分的尿素与氯化胆碱形成的氢键网络能一定程度上限制尿素分子靠近酶活性中心，但在纯低共熔溶剂中反应较长时间也会对酶活性产生极大影响。
5.综上，虽然研究者们发现了几种能成功实现cofs原位包封酶的方法，但也存在一些问题，如制备时间较长，使用尿素对多数酶活影响大，使用有毒的有机试剂；此外，cofs结晶较难是限制其应用的原因之一，cofs配体价格昂贵导致的制备成本大幅提高，也将严重阻碍其在固定化酶领域的应用。


技术实现要素：

6.为解决现有技术的缺点和不足之处，本发明的目的在于提供一种利用共价有机框架快速原位包封酶的方法；该方法不仅制备成本低、条件温和、操作简便快速，而且制备的酶@cofs催化剂的酶活性高、酶负载量大，具有优异的耐有机溶剂稳定性和重复使用性；本发明以细胞色素c(cyt c)作为模型酶来证明酶@cofs催化剂的优良性能。
7.本发明采用dess与水构成的混合物作为反应溶剂和催化剂，通过原位包封策略，常温快速(10min)制备酶@cofs催化剂。首先，所述dess由氢键受体与氢键供体组成，将dess与水混合作为反应溶剂和催化剂，然后在常温下将cofs前驱体与酶进行共沉淀反应10min，得到酶@cofs催化剂。
8.本发明的目的通过以下技术方案实现：
9.一种利用共价有机框架快速原位包封酶的方法，包括以下步骤：
10.(1)将氢键受体和氢键供体混合，加热搅拌反应，得到低共熔溶剂dess；将所得dess与水混合构成反应溶剂；
11.(2)将胺基单体加入到步骤(1)所得反应溶剂中，超声1～2min分散均匀，将醛基单体加入到步骤(1)所得反应溶剂中，超声1～2min分散均匀，然后将二者混合，加入细胞色素c酶液，常温静置反应，收集固体产物，洗涤，离心并干燥，得到cyt c@cofs催化剂。
12.优选地，步骤(1)中，所述氢键受体为氯化胆碱chcl，氢键供体为乙酸hac，氯化胆碱与乙酸的摩尔比为1∶2～1∶10。
13.优选地，步骤(1)中，所述加热温度为60～80℃，加热时间为1～2h。
14.优选地，步骤(1)中，所述反应溶剂中，dess的体积分数为50％。
15.优选地，步骤(2)中，所述胺基单体为2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪tapt，醛基单体为均苯三甲醛tfb。
16.优选地，步骤(2)中，cyt c酶溶解于水中。
17.优选地，步骤(2)中，所述静置反应时间为10min。
18.优选地，步骤(2)所述洗涤步骤为用去离子水洗涤2次以上。
19.优选地，步骤(2)中，所述离心参数为7500rpm，5min，干燥参数为50℃，12h。
20.不同于其他方法，本发明具有以下优点及有益效果：
21.(1)本发明制备过程中使用低共熔溶剂(dess)，dess是由氢键供体(hba)与氢键供体(hbd)组成的绿色溶剂，具有成本低廉、易于制备、溶解度范围广、化学性质可调节、无毒且可生物降解等特点，在生物转化领域作为可替代的反应介质，同时其具有良好的化学反应性是材料合成领域的有效工具。
22.(2)本发明的制备过程不使用有机溶剂或者尿素；所用的dess成分为氯化胆碱与乙酸，所用cofs配体为2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪与均苯三甲醛，价格便宜且易得，制备成本低；dess与水混合作为反应溶剂和催化剂，常温10min可获得结晶度好的cofs
以及性能优异的酶@cofs催化剂，反应条件温和、操作简便快速；
23.(3)所用反应溶剂必须由dess与水混合构成，水起到调节dess性质的作用，可加快cofs结晶速率，有效避免了制备cofs的苛刻条件，同时溶剂中的氢键网络能稳定酶构象，减少酶失活；
24.(4)采用原位包封法实现了cofs固定化酶，制备的cyt c@cofs催化剂具有高酶活性、高酶负载量，其耐有机溶剂稳定性和循环稳定性得到极大提高，有望扩展到其他固定化酶体系。
附图说明
25.图1为实施例1和对比例1～2制备的cof-tapt-tfb材料的xrd图。
26.图2为实施例5制备的cyt c@cof-tapt-tfb催化剂的酶负载量与酶活性保留图。
27.图3为实施例5制备的cyt c@cof-tapt-tfb催化剂与游离cyt c、cyt c&cof-tapt-tfb混合物的耐有机溶剂稳定性对比图。
28.图4为实施例5制备的cyt c@cof-tapt-tfb催化剂与cyt c&cof-tapt-tfb混合物的循环稳定性对比图。
具体实施方式
29.下面结合具体实施方式和附图对本发明作进一步详细描述，但本发明的实施方式不限于此。
30.本发明所述方法如无特别说明均为常规方法，所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。
31.实施例1
32.称取氯化胆碱(chcl)13.96g和乙酸(hac)12.01g倒入100ml圆底烧瓶中混合，70℃加热搅拌2h，得到室温下澄清透明的dess，此时chcl与hac摩尔比为1∶2，记为des-2；由des-2与水混合构成反应溶剂，其中des-2的体积分数为50％；称取2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪17.8mg和均苯三甲醛8.2mg，分别加入两个装有反应溶剂的西林瓶中，分别超声1～2min分散均匀，然后将其混合，总反应体积为10ml，常温静置反应10min，收集固体产物，用去离子水洗涤2次，离心7500rpm、5min，干燥50℃、12h，得到cof-tapt-tfb材料。
33.实施例2
34.称取氯化胆碱13.96g和乙酸12.01g倒入100ml圆底烧瓶中混合，70℃加热搅拌2h，得到室温下澄清透明的dess，此时chcl与hac摩尔比为1∶2，记为des-2；由des-2与水混合构成反应溶剂，其中des-2的体积分数为50％；称取2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪17.8mg和均苯三甲醛8.2mg，分别加入两个装有反应溶剂的西林瓶中，分别超声1～2min分散均匀，然后将其混合，总反应体积为10ml，同时加入250μl浓度为16mg/ml的cyt c酶液(cyt c溶解于去离子水中)，常温静置反应10min，收集固体产物，用去离子水洗涤2次，离心7500rpm、5min，干燥50℃、12h，得到cyt c@cof-tapt-tfb催化剂。
35.实施例3
36.称取氯化胆碱13.96g和乙酸24.02g倒入100ml圆底烧瓶中混合，70℃加热搅拌2h，得到室温下澄清透明的dess，此时chcl与hac摩尔比为1∶4，记为des-4；由des-4与水混合构
成反应溶剂，其中des-4的体积分数为50％；称取2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪17.8mg和均苯三甲醛8.2mg，分别加入两个装有反应溶剂的西林瓶中，分别超声1～2min分散均匀，然后将其混合，总反应体积为10ml，同时加入250μl浓度为16mg/ml的cyt c酶液(cyt c溶解于去离子水中)，常温静置反应10min，收集固体产物，用去离子水洗涤2次，离心7500rpm、5min，干燥50℃、12h，得到cyt c@cof-tapt-tfb催化剂。
37.实施例4
38.称取氯化胆碱13.96g和乙酸48.04g倒入100ml圆底烧瓶中混合，70℃加热搅拌2h，得到室温下澄清透明的dess，此时chcl与hac摩尔比为1∶8，记为des-8；由des-8与水混合构成反应溶剂，其中des-8的体积分数为50％；称取2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪17.8mg和均苯三甲醛8.2mg，分别加入两个装有反应溶剂的西林瓶中，分别超声1～2min分散均匀，然后将其混合，总反应体积为10ml，同时加入250μl浓度为16mg/ml的cyt c酶液(cyt c溶解于去离子水中)，常温静置反应10min，收集固体产物，用去离子水洗涤2次，离心7500rpm、5min，干燥50℃、12h，得到cyt c@cof-tapt-tfb催化剂。
39.实施例5
40.称取氯化胆碱13.96g和乙酸12.01g倒入100ml圆底烧瓶中混合，70℃加热搅拌2h，得到室温下澄清透明的dess，此时chcl与hac摩尔比为1∶2，记为des-2；由des-2与水混合构成反应溶剂，其中des-2的体积分数为50％；称取2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪17.8mg和均苯三甲醛8.2mg，分别加入两个装有反应溶剂的西林瓶中，分别超声1～2min分散均匀，然后将其混合，总反应体积为10ml，同时加入250μl系列浓度为8mg/ml、16mg/ml、24mg/ml、32mg/ml、40mg/ml的cyt c酶液(cyt c溶解于去离子水中)，常温静置反应10min，收集固体产物，用去离子水洗涤2次，离心7500rpm、5min，干燥50℃、12h，得到系列不同酶负载的cyt c@cof-tapt-tfb催化剂。
41.对比例1
42.称取氯化胆碱13.96g和乙酸12.01g倒入100ml圆底烧瓶中混合，70℃加热搅拌2h，得到室温下澄清透明的dess，此时chcl与hac摩尔比为1∶2，记为des-2；由des-2构成反应溶剂，其中des-2的体积分数为100％；称取2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪17.8mg和均苯三甲醛8.2mg，分别加入两个装有反应溶剂的西林瓶中，分别超声1～2min分散均匀，然后将其混合，总反应体积为10ml，常温静置反应10min，收集固体产物，用去离子水洗涤2次，离心7500rpm、5min，干燥50℃、12h，得到cof-tapt-tfb材料。
43.对比例2
44.由6m乙酸水溶液构成反应溶剂；称取2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪17.8mg和均苯三甲醛8.2mg，分别加入两个装有反应溶剂的西林瓶中，分别超声1～2min分散均匀，然后将其混合，总反应体积为10ml，常温静置反应10min，收集固体产物，用去离子水洗涤2次，离心7500rpm、5min，干燥50℃、12h，得到cof-tapt-tfb材料。
45.对比例3
46.称取氯化胆碱13.96g和乙酸12.01g倒入100ml圆底烧瓶中混合，70℃加热搅拌2h，得到室温下澄清透明的dess，此时chcl与hac摩尔比为1∶2，记为des-2；由des-2构成反应溶剂，其中des-2的体积分数为100％；称取2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪17.8mg和均苯三甲醛8.2mg，分别加入两个装有反应溶剂的西林瓶中，分别超声1～2min分散均匀，然后将
其混合，总反应体积为10ml，同时加入250μl浓度为16mg/ml的cyt c酶液(cyt c溶解于去离子水中)，常温静置反应10min，收集固体产物，用去离子水洗涤2次，离心7500rpm、5min，干燥50℃、12h，得到cyt c@cof-tapt-tfb催化剂。
47.对比例4
48.由6m乙酸水溶液构成反应溶剂；称取2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪17.8mg和均苯三甲醛8.2mg，分别加入两个装有反应溶剂的西林瓶中，分别超声1～2min分散均匀，然后将其混合，总反应体积为10ml，同时加入250μl浓度为16mg/ml的cyt c酶液(cyt c溶解于去离子水中)，常温静置反应10min，收集固体产物，用去离子水洗涤2次，离心7500rpm、5min，干燥50℃、12h，得到cyt c@cof-tapt-tfb催化剂。
49.实施例效果说明
50.图1为实施例1和对比例1～2制备的cof-tapt-tfb材料的xrd图，其中实施例1、对比例1、对比例2的反应溶剂条件分别为50％(v/v)des-2、100％(v/v)des-2、6m乙酸水溶液。
51.图1说明，在常温10min内，只有在50％(v/v)des-2溶剂条件中可制得结晶度高、不含缺陷的cof-tapt-tfb，其xrd衍射特征峰分别为5.6
°
、9.8
°
、11.3
°
、15.1
°
、25.3
°
，而在100％(v/v)des-2和6m乙酸水溶液的溶剂条件中均未获得完整晶型的cof-tapt-tfb，表明在纯des-2或者乙酸水溶液中均不能得到cof-tapt-tfb材料，而当dess与水同时存在且dess体积分数不低于50％时，可快速制备结晶度好的cof-cof-tapt-tfb，这可能是由于水调节了dess的粘度等性质间接地影响了cofs的成核与生长速率，同时水对dess氢键网络的调节改变了cofs单体在溶剂中的排布，使其能够更快的结晶。
52.此外，我们测试了改变dess组分中chcl与hac的摩尔配比，反应溶剂中dess的体积分数仍为50％，均可获得结晶度良好的cof-tapt-tfb；此外，在反应溶剂50％(v/v)des-2中，总反应体积为10ml，当加入cofs配体tapt/tfb摩尔浓度分别为2.5/2.5mm、5/5mm、10/10mm时(对应tapt/tfb质量分别为8.9/4.1mg、17.8/8.2mg、35.6/16.4mg)，cof-tapt-tfb收率分别为46.5％、81.9％、71.2％，浓度过低或者过低会导致收率下降，当反应单体浓度为0.05mm时，收率高、结晶度较好。
53.下表1为实施例2～4与对比例3～4制备cyt c@cofs催化剂在酶包埋率与酶活保留性能上的比较。
54.酶负载量或包埋率：采用bca法测试包封前后上清液中cyt c的浓度差异，从而计算出cofs中cyt c的负载量或包埋率。按照bca法，将20μl样品加入96孔板中，然后加入200μl bca工作液，在培养箱中37℃、200rpm反应30min后，用紫外-可见分光光度计检测。蛋白质的浓度与562nm处的吸收强度成正比。利用公式(1-1)计算酶负载量或包埋率。
[0055][0056]
公式(1-1)中c1(mg/ml)为加入酶溶液的初始浓度，v1(ml)为加入酶溶液的体积，c2(mg/ml)为上清液中酶的浓度，v2(ml)为上清液的体积，计算酶负载量时m(mg)为固定后样品的总质量，计算酶包埋率时m(mg)为加入酶的总质量。
[0057]
酶活性测试：以abts和h2o2为反应底物，cyt c通过消耗h2o2将无色的abts转化为浅绿色的abts
·
+
氧化态，在405nm处显示紫外特征吸收峰；具体测试条件为将50μl酶液和50μl h2o2加入到900μl ph7.4的pbs缓冲液(50mm)中，反应总体积为1ml，其中abts浓度为2mm，
h2o2浓度为100mm。参与反应的不同样品中，酶含量是相等的。反应在室温下进行，反应过程中记录405nm处吸光值的变化量，并与游离酶进行对比来计算酶的活性保留。
[0058]
表1不同反应溶剂条件制备的cyt c@cofs催化剂的酶包埋率与酶活保留性能
[0059][0060]
表1说明，实施例2中所述反应溶剂中des-2的体积分数为50％时，10min便能形成良好的cofs晶体结构，所得cyt c@cof-tapt-tfb催化剂的酶包埋率达到52.8％，酶活性保留达到86.6％，性能最好；实施例3～4改变了dess组分中氯化胆碱与乙酸的摩尔比，反应溶剂中dess的体积分数不变，由于乙酸的相对量增大，cofs沉淀反应明显更加快速，使得酶来不及与cofs配体共沉淀，从而使得酶包埋率下降，同时乙酸量增大使得ph降低，导致酶活性下降；对比例3～4中溶剂条件为100％(v/v)des-2、6m乙酸水溶液时，不能形成完整晶体结构的cof-tapt-tfb，可能会导致cofs内部的孔道无法形成或者不规则，虽然酶包埋率较好，但酶活性损失达90％。综上，dess组分中氯化胆碱与乙酸摩尔比为1∶2，反应溶剂中des-2的体积分数为50％，反应时间为10min可作为原位制备cyt c@cof-tapt-tfb的最优条件。
[0061]
图2～4为实施例5制备的cyt c@cof-tapt-tfb催化剂的酶负载量与酶活性保留关系图、cyt c@cof-tapt-tfb与cyt c&cof-tapt-tfb(将cyt c与cof-tapt-tfb简单物理混合而得到cyt c&cof-tapt-tfb)的耐有机溶剂稳定性和循环稳定性对比图。
[0062]
耐有机溶剂稳定性是将游离cyt c、cyt c&cof-tapt-tfb、cyt c@cof-tapt-tfb分别置于去离子水、乙腈、丙酮、四氢呋喃中，摇床浸泡24h、37℃、200rpm，之后检测各样品的催化活性。循环稳定性是将cyt c&cof-tapt-tfb、cyt c@cof-tapt-tfb在上述的酶活测试条件下进行反应，反应结束后通过离心回收催化剂，经去离子水洗涤后用于下一次反应。连续反应7次以考察cyt c@cof-tapt-tfb的循环使用性能。
[0063]
图2说明，实施例5制备的cyt c@cof-tapt-tfb催化剂的最大负载能力可达到0.325g/g，最大酶活保留可达到88％，并且当cofs负载量超过0.162g/g时，酶活保留均超过60％；我们还测试了酶动力学，游离cyt c的km值为44.9mm，cyt c&cof-tapt-tfb的km值为60.7mm，cyt c@cof-tapt-tfb的km值为23.8mm，其中cyt c@cof-tapt-tfb的km值最小，表明固定化cyt c对底物具有更好的亲和力，推测cofs将底物富集在酶附近，增加了酶活性中心与底物接触。
[0064]
图3说明，实施例5制备的cyt c@cof-tapt-tfb催化剂与游离cyt c、cyt c&cof-tapt-tfb混合物分别经过去离子水、乙腈、丙酮、四氢呋喃四种溶剂处理后，游离cyt c、cyt c&cof-tapt-tfb混合物在乙腈、丙酮、四氢呋喃中均出现明显失活现象，酶活损失达50％以上；相同条件下，cyt c@cof-tapt-tfb酶活损失不大，在乙腈、丙酮、四氢呋喃中均小于5％；
以上表明不同于简单混合后cyt c吸附于cof-tapt-tfb表面，cofs原位包封cyt c是由cof-tapt-tfb将cyt c原位封装在结构内部，这样的限域空间提供了坚固有力的保护，避免了有机溶剂对酶构象的干扰。
[0065]
图4说明，实施例5制备的cyt c&cof-tapt-tfb催化剂与cyt c&cof-tapt-tfb混合物分别经过连续七次反应处理，cyt c&cof-tapt-tfb混合物七次循环后活性仅为初始活性20％左右，而cyt c@cof-tapt-tfb经七次循环后仍能保留其初始活性的90％以上；以上也验证了cof-tapt-tfb原位封装cyt c在结构内部，避免了酶的泄露，具有优异的重复使用性。
[0066]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种利用共价有机框架快速原位包封酶的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将氢键受体和氢键供体混合，加热搅拌反应，得到低共熔溶剂dess；将所得dess与水混合构成反应溶剂；(2)将胺基单体加入到步骤(1)所得反应溶剂中，超声1～2min分散均匀，将醛基单体加入到步骤(1)所得反应溶剂中，超声1～2min分散均匀，然后将二者混合，加入细胞色素c酶液，常温静置反应，收集固体产物，洗涤，离心并干燥，得到cyt c@cofs催化剂。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述氢键受体为氯化胆碱chcl，氢键供体为乙酸hac。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：氯化胆碱与乙酸的摩尔比为1∶2～1∶10。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述加热温度为60～80℃，加热时间为1～2h。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述反应溶剂中，dess的体积分数为50％。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述胺基单体为2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪tapt，醛基单体为均苯三甲醛tfb。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，cyt c酶溶解于水中。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述静置反应时间为10min。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)所述洗涤步骤为用去离子水洗涤2次以上。10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述离心参数为7500rpm，5min，干燥参数为50℃，12h。

技术总结
本发明公开了一种利用共价有机框架快速原位包封酶的方法，属于固定化酶技术领域。本发明方法首先制备氯化胆碱与乙酸组成的低共熔溶剂，将低共熔溶剂与水按一定体积分数混合构成反应溶剂，加入COFs配体2,4,6-三(4-氨基苯基)-1,3,5-三嗪和均苯三甲醛，与Cyt c进行共沉淀，常温反应10min制备了Cyt c@COF-TAPT-TFB催化剂，其酶活性高、酶负载量大、操作稳定性优异；本发明提供了一种COFs原位包封酶的思路，其制备成本低、条件温和、操作简便快速，有望扩展到其他固定化酶体系，对扩大COFs材料在生物催化领域的应用具有重要意义。生物催化领域的应用具有重要意义。


技术研发人员：李致贤 李良卫 楼宏铭 庞煜霞 沈葵 吴晓玲 杨东杰 邱学青
受保护的技术使用者：华南理工大学
技术研发日：2023.04.27
技术公布日：2023/8/1