用于诱导抗微生物肽产生的羟基硬脂酸的制作方法

1.本发明涉及羟基硬脂酸用于在皮肤上产生amp(抗微生物肽)的新用途。这可应用于提高皮肤、头皮和口腔对抗微生物攻击的免疫力。本发明还涉及羟基硬脂酸和amp或aml(抗微生物脂质)或其混合物的组合用于抗微生物益处的用途，并且涉及包含该组合的组合物。


背景技术：

2.皮肤是保护人体免受病原体(如病毒和细菌)入侵的主要防线。作为主要防御器官，皮肤组织总是与环境保持恒定接触，因此它必须面对和解决来自入侵病原体的威胁和挑战。暴露的皮肤表面不仅受到致病性外来细菌的挑战，而且还保持与驻留的共生细菌接触并与其相互作用。尽管存在所有这些来自这类外来微生物的挑战，健康的皮肤保持没有感染，并且驻留微生物群落的数量通常保持恒定。因为皮肤具有复杂的防御策略(其中抗微生物肽(amp)形成重要部分)，皮肤组织和微生物之间相互作用的这种平衡得以维持。
3.amp形成皮肤自身防御系统的必要部分。amp在自然界中普遍存在，并且它们通常表现出针对入侵的细菌、真菌、病毒和寄生虫的广谱活性。amp通常是短肽，并且据报道在人类中存在约90种不同的amp。amp通常具有两个主要的物理特征，它们是：a)阳离子电荷和b)显著比例的疏水性残基。amp的阳离子电荷促进对带负电荷的微生物表面的选择性，而疏水性促进与微生物物种的细胞膜的相互作用。
4.本发明的发明人一直致力于通过提高皮肤中的amp水平的途径向消费者提供卫生益处。他们希望通过使用天然分子来提供这种益处，所述天然分子被消费者认为对皮肤更友好，且从而较少刺激性。此外，他们还希望通过杀死或灭活入侵的感染性微生物来为身体提供抗微生物益处。
5.具体地，皮肤感染的最常见的和主要的病原体之一是金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)，其引起各种皮肤和软组织感染。金黄色葡萄球菌在宿主皮肤表面上的定殖是感染的初始阶段，在突破更深的组织时，微生物通过采用其复杂的策略建立感染。特别地，金黄色葡萄球菌通过产生一系列损害细胞膜并引起裂解的毒素，如溶血素、白细胞毒素，来攻克宿主先天系统。
6.为了达到保护皮肤抵抗这些微生物的目的，测试了各种活性物质，并且在广泛研究后，本发明的发明人发现了常用的脂肪酸(即羟基硬脂酸)提高了皮肤上的amp水平。此外，如此产生的amp与外部施用的羟基硬脂酸协同地相互作用，以提供针对感染性生物体(如金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌(p.aeruginosa))等的抗微生物活性。还发现通过包含羟基硬脂酸和amp和/或aml的组合的组合物实现了抗微生物益处。
7.羟基硬脂酸，尤其是12-羟基硬脂酸(12-hsa)已在个人护理中用作清洁组合物中的脂肪酸混合物的一部分，或用作化妆品中的乳化剂。12-hsa在工业应用中作为润滑剂和用于生产润滑脂而具有广泛的用途。它在石油钻井工业中广泛用作润滑剂。就本发明的发明人所知，其作为用于身体局部表面上amp产生的活性剂的用途是未知的。
8.本发明的发明人已经发现了在皮肤(其可以是皮肤本身或头皮或口腔)上施用羟基硬脂酸时，该活性物质诱导amp的产生，这已知是提高皮肤抵抗微生物攻击的免疫力的重要步骤。因此，消费者获得的益处是通过施用包含羟基硬脂酸的组合物来保护皮肤免受将来可能侵袭的病菌。


技术实现要素：

9.本发明的第一个方面提供了羟基硬脂酸在施用于人体的外表面上时用于诱导抗微生物肽(amp)分泌的用途。
10.本发明的另一个方面提供了一种向身体的外表面提供抗微生物益处的方法，该方法包括将包含羟基硬脂酸和抗微生物肽或抗微生物脂质或其混合物的组合物施用于所述外表面的步骤。
11.本发明的再另一个方面提供了一种抗微生物组合物，其包含(i)羟基硬脂酸和(ii)抗微生物肽或抗微生物脂质或其混合物。
具体实施方式
12.通过阅读以下详细描述和所附权利要求，这些和其他方面、特征和优点对于本领域普通技术人员将变得显而易见。为了避免疑问，本发明的一个方面的任何特征可以用于本发明的任何其他方面中。词语“包含”旨在表示“包括”，但不一定是“由
……
组成”或“由
……
构成”。换句话说，所列出的步骤或选项不需要是穷举的。应注意，以下描述中给出的实施例旨在阐明本发明，并不旨在将本发明限制于那些实施例本身。类似地，除非另外指出，所有百分比是重量/重量百分比，且可缩写为“重量％”。除了在操作和比较实施例中，或者在另外明确指出的情况下，否则本说明书和权利要求中的所有表示材料的量或反应条件、材料的物理性质和/或使用的数字均由词语“约”来修饰。以“x至y”的格式表示的数值范围应理解为包括x和y。对于特定特征以“x至y”的形式描述多个优选范围时，应当理解还考虑了组合不同端点的所有范围。
13.如本文所用，“皮肤”意指包括哺乳动物，尤其是人的外表面，并且包括皮肤、头皮、毛发和口腔。根据本发明的用途可以是通过将羟基硬脂酸或根据本发明的组合物以免洗型或洗去型产品施用，并且包括施用于人体的任何产品，其主要用于卫生益处，但也可改善外观、清洁、气味控制或一般美学。组合物可以是液体、洗液、乳膏、泡沫、磨砂膏、凝胶、皂条或化妆水的形式，或者用工具或通过面膜、垫、擦拭物或贴片施用。此类组合物的非限制性实例包括免洗型产品，如皮肤乳液和乳膏、止汗剂、除臭剂、脱毛剂、唇膏、粉底、睫毛膏、免晒美黑剂、消毒剂、凝胶、喷雾剂或防晒乳液，或洗去型产品，如洗发水、护发素、沐浴凝胶、厕用皂条、洗面奶、洗手液或沐浴产品。
14.用于本发明的羟基硬脂酸优选诱导角质形成细胞的amp分泌。如此分泌的amp用于改善身体外表面的免疫力。外表面包括皮肤、头皮或口腔。
15.优选地，羟基硬脂酸是10-羟基硬脂酸、12-羟基硬脂酸或三羟基硬脂酸(例如9,10,13-三羟基硬脂酸)或三羟基硬脂精或者在其分解时产生一个或多个羟基硬脂酸或羟基硬脂酸酯分子的化合物，如甘油与羟基硬脂酸的单酯、二酯或三酯。其中，更优选的是10-羟基硬脂酸、12-羟基硬脂酸和9,10,13-三羟基硬脂酸。12-羟基硬脂酸(12-hsa)是最优选的。
12-hsa具有如下给出的结构：
[0016][0017]
通过本发明已经发现了羟基硬脂酸激活角质形成细胞(其是皮肤表皮中的主要细胞)以提供本发明的益处，即诱导抗微生物肽(amp)的分泌。这导致羟基硬脂酸增强对抗细菌的防护，即改善外表面的免疫力。因此，羟基硬脂酸通过增强身体自身的防御来为身体提供对抗感染的保护。换句话说，活性物质使身体表面为细菌保护做好准备。这样做的优点是它提供了持久的保护，例如长达24小时的抗细菌保护。
[0018]
根据本发明，羟基硬脂酸用于诱导amp分泌的用途优选用于美容用途，即其用于非治疗性应用。
[0019]
本发明的又一个方面涉及施用于人体的外表面上时用于预防性诱导抗微生物肽(amp)分泌的羟基硬脂酸。
[0020]
本发明的又一个方面涉及一种通过诱导抗微生物肽(amp)的分泌来为身体外表面提供保护的方法，所述方法包括将羟基硬脂酸施用于所述外表面的步骤。优选地，该方法是非治疗性的。
[0021]
根据本发明的又一个方面，提供了包含羟基硬脂酸和抗微生物肽或抗微生物脂质或其混合物的组合物用于抗微生物益处的用途。优选地，该用途是非治疗性的。
[0022]
根据本发明的又一个方面，提供了一种向身体外表面提供抗微生物益处的方法，该方法包括将包含羟基硬脂酸和抗微生物肽或抗微生物脂质或其混合物的组合物施用于所述外表面的步骤。优选地，该方法是非治疗性的。
[0023]
其中根据本发明使用羟基硬脂酸的组合物可包括以下优选特征。羟基硬脂酸优选以组合物重量的0.000001至10％，更优选0.00001至8％，甚至更优选0.0001至7％，进一步更优选0.0005至5％，仍更优选0.001至4％，仍更优选0.01至3％并且甚至进一步更优选0.1至1％存在。
[0024]
除了羟基硬脂酸之外，根据本发明的组合物还包含抗微生物肽(amp)或抗微生物脂质(aml)或其混合物以获得所需的抗微生物益处。优选地，除了羟基硬脂酸之外，组合物还包含aml。优选地，组合物是非治疗性的。
[0025]
优选地，amp选自防御素，例如人β防御素1、人β防御素2、人β防御素3和人β防御素4；组胺素(histatin)，例如组胺素5、组胺素7；抗菌肽(cathelicidin)，例如ll-37；皮离蛋白(dermcidin)，例如皮离蛋白1；s100肽，例如银屑素(psoriasin)；和rnase肽，例如rnase7，其可以单独或组合地用于本发明中。更优选地，amp选自人β防御素1、人β防御素2、人β防御素3和人β防御素4、ll-37及其混合物。甚至更优选地，所选择的amp是人β防御素3、ll-37及其混合物。
[0026]
最近的研究表明，多种抗微生物肽(amp)模拟趋化因子，并且通过用作预警信号而具有快速激活宿主先天性和适应性免疫系统的能力。它们能够募集和激活抗原呈递细胞。这些有效的免疫刺激剂包括防御素、抗菌肽(ll-37)、嗜酸性粒细胞衍生的神经毒素(edn)和高迁移率族盒蛋白1(hmgb1)。例如，防御素、ll-37、hmgb1和edn分别通过与ccr6、fprl-1
和toll样受体(tlr2)相互作用来模拟趋化因子和细胞因子活性。这些抗微生物肽由内衬胃肠道、泌尿生殖系统和气管支气管树的白细胞、角质形成细胞和上皮细胞组成性地产生和释放。此外，它们由有害刺激物和细胞因子诱导。这些肽都具有体内免疫佐剂作用。这些amp现在被归类为新术语“警报素(alarmin)”，这是因为认识到它们在快速动员免疫系统以保护免于宿主损伤中的作用。
[0027]
与羟基硬脂酸组合提供协同抗微生物活性的抗微生物脂质(aml)优选包括十六碳烯酸(sapienic acid)、鞘氨醇、二氢鞘氨醇、棕榈油酸、月桂酸、植物鞘氨醇或一种或多种aml的组合。更优选地，aml选自鞘氨醇、植物鞘氨醇、月桂酸及其混合物。
[0028]
用于本发明的各种抗微生物脂质的结构如下：
[0029][0030]
十六碳烯酸
[0031][0032]
鞘氨醇
[0033][0034]
二氢鞘氨醇
[0035][0036]
植物鞘氨醇
[0037][0038]
棕榈油酸
[0039]
十六碳烯酸和棕榈油酸通常以纯化形式加入抗微生物剂中。
[0040]
优选地，组合物包含为组合物重量的0.000001至2％、更优选0.00005至1％、甚至更优选0.00001至0.1％、进一步更优选0.0001至0.05％并且还更优选0.001至0.01％的量的aml或amp或其混合物。
[0041]
aml与羟基硬脂酸的优选组合包括：
[0042]-12-hsa+月桂酸，
[0043]-12-hsa+植物鞘氨醇；和
[0044]-12-hsa+鞘氨醇。
[0045]
amp与羟基硬脂酸的优选组合包括：
[0046]-12-hsa+ll-37，
[0047]-12-hsa+人β防御素3。
[0048]
优选地，此类组合选自：
[0049]-12-hsa+ll37+月桂酸，
[0050]-12-hsa+ll37+植物鞘氨醇，
[0051]-12-hsa+ll37+鞘氨醇，
[0052]-12＝hsa+人β防御素3+月桂酸，
[0053]-12-hsa+人β防御素3+植物鞘氨醇，
[0054]-12-hsa+人β防御素3+鞘氨醇。
[0055]
组合物优选包含化妆品可接受的基质。化妆品可接受的基质优选为乳膏、洗液、凝胶或乳液。特别优选的是，化妆品可接受的基质包含表面活性剂。
[0056]
可以制备本发明的组合物，使得其适合用作皮肤清洁产品或口腔护理、皮肤护理、头皮或毛发护理产品。产品可以以固体、软固体、液体、乳液、微乳液、乳液、乳膏、凝胶或气溶胶形式递送。
[0057]
皮肤清洁
[0058]
如本文所用，“清洁组合物”是指包括用于局部施用于哺乳动物，尤其是人的皮肤、毛发和/或头皮以获得清洁益处的组合物，并且此类组合物通常包括表面活性剂。这种组合物通常在用水稀释后施用到期望的身体局部表面上持续几秒至最多几分钟的时间段。在这段施用时间后，通常用水冲洗掉或擦去组合物。
[0059]
清洁组合物可以是固体形式或液体形式的任何形式。为固体形式时，其优选为皂条。
[0060]
皂条：
[0061]
用于制备本发明清洁组合物的皂优选为c
8-c
24
皂，更优选c
10-c
20
皂，且最优选c
12-c
18
皂。皂的阳离子可以是碱金属、碱土金属或铵。优选，皂的阳离子选自钠、钾或铵。更优选，皂的阳离子是钠或钾。衍生自其它合适的油/脂肪(如花生、大豆、牛脂、棕榈、棕榈仁等)的脂肪酸也可以以其他期望的比例使用。
[0062]
包含阴离子表面活性剂的化妆品可接受的基质形成除存在于清洁组合物中的油包水乳液之外的组合物的其余部分。因此，化妆品可接受的基质通常形成清洁组合物的80至99％重量。
[0063]
当存在时，阴离子表面活性剂(例如皂)优选以清洁组合物的1至90％重量，优选10至85％重量，更优选25至75％重量的量存在。清洁组合物优选为固体或半固体形式，最优选固体形式。优选的固体组合物为皂条的形状。
[0064]
其它阴离子表面活性剂优选选自烷基醚硫酸盐、伯烷基硫酸盐、仲烷基磺酸盐、烷基苯磺酸盐或乙氧基化烷基硫酸盐。在清洁组合物中优选的除皂之外的阴离子表面活性剂是烷基醚硫酸盐，优选具有1至3个环氧乙烷基团的那些，其来自天然或合成来源和/或磺酸。尤为优选的是月桂基醚硫酸钠。烷基多葡糖苷也可以存在于组合物中，优选具有碳链长度c6至c
16
的那些烷基多葡糖苷。
[0065]
优选的清洁组合物可包括其它已知成分，如香料、颜料、防腐剂、润肤剂、防晒剂、
胶凝剂和增稠剂。这些成分的选择将很大程度上取决于组合物的形式。水是优选的载体。存在水时，其优选以组合物重量的至少1％、更优选至少2％、进一步更优选至少5％存在。水是载体时，优选的清洁组合物包含10至50％，更优选12至40％重量的水。
[0066]
本发明的组合物还可以通过保湿条或液体组合物递送。包含脂肪酰基羟乙基磺酸盐(例如椰油酰基羟乙基磺酸盐)的保湿条组合物是特别优选的。
[0067]
脂肪酰基羟乙磺酸盐(例如，椰油酰基羟乙磺酸盐)表面活性剂“产品”定义为阴离子酰基羟乙磺酸盐表面活性剂和脂肪酸/脂肪酸皂的混合物。它们在个人护理皮肤或毛发清洁产品中，特别是在个人护理产品中是非常理想的，因为它们起泡良好，对皮肤温和并且具有良好的润肤性质。通常，脂肪酸羟乙基磺酸盐表面活性剂产品通过脂肪酸的酯化或通过具有c8至c20碳链长度的脂肪酰氯与羟乙基磺酸的反应来制备。含有脂肪酰基羟乙基磺酸盐的典型表面活性剂产品除了羟乙基磺酸盐(通常小于5％)和痕量(小于2％重量)的其它添加剂之外，还含有约40至95％重量的酸羟乙基磺酸盐和5至50％重量，通常10至40％重量的游离脂肪酸。可以包括5至15％重量范围的脂肪酸皂。其他表面活性剂(如甜菜碱)可以以1至5％重量包括。水通常以组合物的2至8％重量包括。
[0068]
液体清洁组合物：
[0069]
本发明的液体清洁组合物通常用于个人清洁。优选的是用于清洁身体、手或面部局部表面的组合物，其包含低浓度的表面活性剂并且在皮肤上是温和的。表面活性剂通常以液体清洁组合物重量的1至30％，优选4至18％，更优选6至12％包括。
[0070]
用于包含在本发明的液体清洁组合物中的表面活性剂可优选为阴离子、非离子、阳离子或两性类型的。包含在本发明的液体清洁组合物中的有用的表面活性剂是月桂基醚硫酸钠(sles)。用于本发明的sles通常优选具有1至3个乙氧基化物(eo)基团。sles优选以组合物的3至15％重量包含。可以包括在本发明中的其它表面活性剂是椰油酰胺单乙醇胺(cmea)。cmea优选以组合物重量的1至5％包括。本发明的液体清洁组合物的一个优选方面涉及其中表面活性剂包含月桂基醚硫酸钠(sles)和椰油酰胺单乙醇胺(cmea)的混合物的方面。
[0071]
包含在本发明的液体清洁组合物中的另一种有用的表面活性剂是两性表面活性剂，优选甜菜碱表面活性剂，更优选烷基酰胺丙基甜菜碱表面活性剂，例如椰油酰胺丙基甜菜碱。在优选的实施方案中，组合物包含0.1至5％重量，优选0.5至4％重量，更优选1至3％重量的甜菜碱表面活性剂。
[0072]
包含在本发明的液体清洁组合物中的非离子种类的表面活性剂优选是聚氧乙烯脱水山梨糖醇烷基酯类(以tween表面活性剂出售)、脂肪醇乙氧基化物(以brij表面活性剂出售)、烷基酚乙氧基化物(以triton表面活性剂出售)、脂肪酸乙氧基化物(以myrj表面活性剂出售)和烷基多葡糖苷(以plantacare表面活性剂出售)。
[0073]
水是本发明液体清洁组合物中的优选载体。在这样的组合物中，水通常以70至95％重量存在。优选的液体清洁组合物可包含其它已知成分，如电解质、香料、颜料、防腐剂、润肤剂、防晒剂、乳化剂、胶凝剂和增稠剂。
[0074]
本发明还可以用于私处卫生产品，尤其是供女性使用。这样的产品通常可作为具有一定量的表面活性剂和润肤剂的液体获得，其配制为在用于实现私处卫生时对女性温和的ph。此类产品也称为女性卫生产品或月经卫生产品。这种液体产品通常包含40至80wt％，
优选50至70wt％范围的大量水。它们还包含表面活性剂，例如阴离子和/或两性表面活性剂。此类表面活性剂优选以组合物的10至50wt％，优选20至40wt％包括。用于此类产品的特别优选的表面活性剂是月桂基硫酸三乙醇胺、月桂基硫酸铵、椰油酰胺丙基甜菜碱或其混合物。另外，该产品可包含油、润肤剂、增稠剂和其它添加剂，以帮助赋予对皮肤的温和感觉。羧酸，如乳酸，通常包括在此类组合物中以提供额外的卫生益处。此类产品的ph通常在2.5至6.0的范围内，优选在2.5至4.5的范围内。
[0075]
口腔护理
[0076]
递送个人护理组合物用于口腔护理时，其包括化妆品可接受的基质，其可以是磨料、增稠剂、保湿剂或口腔可接受的表面活性剂。产品可以以软膏、凝胶、洁齿剂或漱口水的形式提供。口腔护理组合物优选包含磨料。凝胶通常含有二氧化硅，而不透明乳膏通常含有钙基磨料，尤其是白垩。
[0077]
优选的牙膏组合物具有5至60wt％的钙基磨料。
[0078]
在优选的实施方案中，组合物包含增稠剂。通常，增稠的二氧化硅、羧甲基纤维素钠和/或卡波姆是用于本发明组合物的优选增稠剂。存在时，增稠剂优选占组合物重量的0.01至约10％，更优选0.1至9％，且最优选1.5至8％。
[0079]
合适的保湿剂优选用于本发明的口腔护理组合物中。甘油、聚乙二醇、山梨糖醇或其混合物是优选的保湿剂。
[0080]
保湿剂可以以口腔护理组合物重量的10至90％的范围存在。优选地，口腔护理组合物包含表面活性剂。优选地，组合物包含组合物重量的至少0.01％、更优选至少0.1％和最优选0.5至7％的表面活性剂。优选的阴离子表面活性剂是十二烷基硫酸钠和/或十二烷基苯磺酸钠。最优选地，表面活性剂是十二烷基硫酸钠。
[0081]
水可以优选以组合物总重量的5％至95％，特别是10％至75％，尤其是10％至60％，进一步更优选10％至45％包括。
[0082]
本发明的口腔护理组合物可含有本领域常用的多种其它成分以增强物理性质和性能。这些成分包括抗微生物剂、防龋剂、牙菌斑缓冲剂、氟化物源、维生素、植物提取物、脱敏剂、抗牙结石剂、生物分子、调味剂、蛋白质材料、防腐剂、遮光剂、着色剂、ph调节剂、甜味剂、颗粒研磨材料、聚合化合物、缓冲组合物的ph和离子强度的缓冲剂和盐，及其混合物。这些成分通常并且共同构成组合物重量的小于20％，优选0.0至15％重量，最优选0.01至12％重量，包括其中包含的所有范围。
[0083]
毛发护理
[0084]
根据本发明的优选方面，组合物可用于毛发护理或清洁。可以通过其实现这一点的一种介质是洗发剂的介质。本发明的组合物，尤其是洗发水，用阴离子表面活性剂(例如烷基硫酸盐和/或乙氧基化烷基硫酸盐表面活性剂)配制。这些阴离子表面活性剂优选以1至20％的含量存在。优选的烷基硫酸盐是c8-18烷基硫酸盐，更优选c12-18烷基硫酸盐，优选为与增溶阳离子(如钠、钾、铵或取代铵)的盐的形式。实例是月桂基醚硫酸钠(sles)。优选的乙氧基化烷基硫酸盐阴离子表面活性剂是月桂基醚硫酸钠(sles)。特别优选平均乙氧基化度为0.5至3，优选1至3的sles。洗发水优选另外包含两性表面活性剂，优选甜菜碱表面活性剂，优选烷基酰胺丙基甜菜碱表面活性剂，例如椰油酰胺丙基甜菜碱。在优选的实施方案中，组合物包含0.1至10wt.％，优选0.5至8wt.％，更优选1至5wt.％的甜菜碱表面活性
剂。
[0085]
为了增强来自本发明组合物(尤其是洗发水)的活性物质的沉积，其中通常包含阳离子聚合物。同样在本发明中，优选组合物另外包括0.01至2.0％的阳离子聚合物。阳离子聚合物优选为瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵。
[0086]
通过本发明的组合物递送调理益处时，该组合物被称为毛发调理剂。通常，用于毛发护理组合物中的最常用的调理剂是水不溶性油性材料，如矿物油、天然存在的油如甘油三酯和硅氧烷聚合物。
[0087]
调理益处通过将油性材料沉积到毛发上导致形成膜来实现，这使得毛发在湿润时更容易梳理并且在干燥时更易于管理。尤为有用的调理剂是硅氧烷化合物，优选非挥发性硅氧烷化合物。组合物的ph优选等于或高于4.0，更优选在5.0至7.0的范围内。
[0088]
毛发调理组合物通常包含选自阳离子表面活性剂的调理表面活性剂，其单独使用或混合使用。用于根据本发明的调理剂中的特别有用的阳离子表面活性剂是鲸蜡基三甲基氯化铵、山嵛基三甲基氯化铵或硬脂酰胺丙基二甲胺。本发明的毛发调理组合物优选还可另外包含脂肪醇。
[0089]
皮肤护理
[0090]
本发明的组合物可用于皮肤护理。皮肤护理是指将组合物施用在皮肤上并留在其上直至人们通常在几小时后或约一天后进行淋浴或沐浴。化妆品可接受的基质通常以组合物总重量的10至99.9％，更优选40至85％的量存在。特别优选的是，化妆品可接受的基质包括水。水优选以组合物总重量的30至90％，更优选30至85％，最优选30至80％的量存在。除了水之外，合适的载体种类包括硅氧烷、多元醇、烃、甘油三酯和增稠粉末。
[0091]
本发明的皮肤护理组合物可以是适于局部施用于皮肤的任何形式，包括化妆水、乳液、乳膏、摩丝、磨砂膏、精华液或凝胶。优选的是组合物是皮肤乳液或乳膏。
[0092]
组合物可包含充当共溶剂的润肤油。合适的润肤油包括例如烷氧基化芳族醇与脂肪羧酸的酯、聚二醇或二醇与脂肪羧酸的酯如辛酸/癸酸甘油三酯、脂肪醇和脂肪酸的酯、苯甲醇的烷氧基化衍生物及其混合物。优选地，润肤油是辛酸/癸酸甘油三酯。
[0093]
通常，基于防晒组合物的总重量，此类组合物包含0.01至10％，更优选0.1至8％，最优选1至6％的量的共溶剂，并且包括其中包含的所有范围。
[0094]
组合物可另外包含防晒剂，如无机防晒剂或有机防晒剂。有机防晒剂的实例是氧化锌、二氧化钛、氧化铁、二氧化硅，如热解法二氧化硅。本发明的组合物可包含uv-a防晒剂，其选自二苯甲酰甲烷衍生物、三嗪衍生物、二苯甲酮衍生物及其混合物。本发明的组合物还可包含uv-b防晒剂。本发明合适的uv-b防晒剂选自二苯甲酮、邻氨基苯甲酸酯、水杨酸酯、肉桂酸酯、樟脑、丙二酸亚苄基酯、三嗪酮及其衍生物。
[0095]
皮肤美白剂也可以掺入本发明的组合物中。
[0096]
皮肤护理产品还包括确保几乎立即杀死皮肤上存在的微生物的消毒剂。消毒剂优选包含20至90％重量，优选30至80％重量的c2至c4一元醇，其中所述一元醇选自乙醇、异丙醇或组合。消毒剂组合物可包含乙醇和异丙醇的组合。最优选地，醇优选为40至75wt.％，并且最佳地组合物包含55至70wt.％的c2至c4一元醇。
[0097]
优选地，消毒剂组合物可含有30至80wt.％，更优选40至70wt.％，且最优选50至68wt.％的乙醇。消毒剂可包括某些多元醇。根据本发明的组合物中的多元醇优选为山梨糖
醇、甘油、聚乙二醇、丙二醇及其组合。
[0098]
消毒剂优选包含0.01至1wt.％的增稠剂。更优选地，组合物包含0.05至0.8wt.％的增稠剂，最优选0.08至0.2wt.％的增稠剂。水通常以10至40wt.％存在于消毒剂组合物中。更优选地，组合物包含12至35wt.的水，最优选25至30wt.的水。
[0099]
除臭剂产品
[0100]
一个特定种类的皮肤护理组合物是所谓的除臭剂组合物。这些组合物通常施用于产生体臭的皮肤区域，如腋下区域。这些产品通过掩蔽气味或通过确保不产生引起气味的分子或通过杀死或灭活引起气味的微生物来起作用。一类这样的产品也被称为止汗剂产品，因为它们减少或最小化人产生的汗液的量。
[0101]
这些产品可以美容地和局部地施用于皮肤，一般地说，通过两种方法之一。在一种方法(有时称为接触方法)中，将组合物擦拭在皮肤表面上，在其通过时沉积一部分组合物。在第二种方法(有时称为非接触方法)中，从保持靠近皮肤的分配器喷射组合物。喷雾可以通过在分配器的内容物上产生压力的机械装置(例如泵或可挤压侧壁)或通过由一部分液化推进剂挥发导致的内部产生的压力来形成，分配器通常称为喷雾器。
[0102]
广义上讲，有两类接触组合物，其中一种是液体，且通常使用滚抹分配器施用或可能吸收到擦拭物中或擦拭物上，而在第二种组合物中，所需的活性物质分布在形成已胶凝的连续相内的载体液体中。在一个变体中，载体流体包含用于所需活性物质的溶剂，并且在第二个变体中，活性物质保持为悬浮在油(通常为油的共混物)中的颗粒状固体。
[0103]
棒状或软固体组合物：
[0104]
已经提出了许多不同的材料作为用于连续油相的胶凝剂，包括蜡、小分子胶凝剂和聚合物。它们各自具有其优点，并且其中最常用的胶凝剂种类之一包括蜡，至少部分地是由于它们易于获得和易于加工，特别地包括直链脂肪醇蜡胶凝剂。胶凝的除臭剂组合物通过在皮肤上擦拭并与皮肤接触而局部施用于皮肤，从而在皮肤上沉积薄膜。
[0105]
滚涂：
[0106]
可从滚涂应用的液体组合物广义上讲可分为两类，即其中活性物质悬浮在疏水性载体(如挥发性硅氧烷)中的那些和其中活性物质溶解在载体液体中的那些。后者已被证明是更流行的。主要有两个种类的溶解载体液液，即主要是醇的载体，也就是说大部分溶解载体液体包含乙醇，和中中载体液体主要是水的第二种类。前者非常受欢迎，因为乙醇本身是一种温和的杀菌剂，但它的流行度下降，因为它会引起刺痛，特别是如果施用组合物的表面已经损伤或切开，如在剃须或其他脱毛操作期间可能容易出现的情况。
[0107]
作为醇类制剂替代物的第二类制剂包含水不溶性或极难溶于水的成分在活性物质水溶液中的分散体。在本文中，此类组合物将被称为乳液。滚涂乳液通常包含一种或多种乳化剂以保持水溶性成分的分布。
[0108]
气溶胶组合物：
[0109]
除臭剂组合物可以通过气溶胶递送，其除了上文所述的其他成分之外还包含推进剂。
[0110]
本文的推进剂通常属于以下三个种类之一：i)通过压缩液化的低沸点气体，ii)挥发性醚和iii)压缩的非氧化性气体。
[0111]
种类i)方便地是低沸点材料，通常沸点低于-5℃，并且通常低于-15℃，并且特别
是烷烃和/或卤代烃。这类推进剂通常在气溶胶罐中在压力下液化并蒸发以产生将组合物排出罐的压力。合适的烷烃的实例特别地包括丙烷、丁烷或异丁烯。第二类推进剂包括非常高挥发性的醚，其中迄今为止最广泛使用的醚是二甲醚。该推进剂可以有利地以相对低的推进剂与基础制剂的重量比使用，例如低至5:95。它也可以与例如可压缩/可液化的烷烃气体混合使用。第三类推进剂包括压缩的非氧化性气体，并且特别是二氧化碳或氮气。惰性气体(如氖气)是理论上的替代物。
[0112]
皮肤护理组合物还可包含本领域常用的其它成分以增强物理特性和性能。合适的成分包括但不限于保湿剂、增稠剂、遮光剂、粘合剂、着色剂和颜料、ph调节剂、防腐剂、光学剂(optics)、香料、粘度调节剂、生物添加剂、缓冲剂、调理剂、精油和皮肤有益剂，包括抗炎剂、清凉剂、止汗剂、抗老化剂、抗痤疮剂、抗微生物剂和抗氧化剂。
[0113]
现在通过以下非限制性实施例进一步描述本发明。
[0114]
实施例
[0115]
实施例1-5：12-hsa(1μm浓度)对amp基因表达的影响
[0116]
以下方案用于在角质形成细胞上针对amp基因表达评估活性物质(12-hsa)
[0117]
材料：
[0118]
正常人表皮角质形成细胞(nhek)、epilife角质形成细胞生长培养基(kgm)(含抗生素pen-strep)、dulbecco磷酸盐缓冲盐水(dpbs)、胰蛋白酶-edta、胰蛋白酶中和剂溶液、乙醇、rna提取试剂盒(rneasy试剂盒)、rlt缓冲液、rt-pcr试剂盒。
[0119]
程序：
[0120]
1.将nhek细胞解冻并在2-25cc和然后75cc烧瓶中在kgm中扩增至80％汇合，每隔一天更换培养基并在37℃下在5％co2培养箱中孵育。
[0121]
2.弃去用过的培养基并用dpbs冲洗烧瓶中的粘附细胞。加入胰蛋白酶-edta并轻敲以使粘附的细胞脱落。加入胰蛋白酶中和剂并轻轻混合。
[0122]
3.将内容物转移到15-ml管中并旋转沉淀细胞。弃去上清液并将细胞重悬于kgm中。计数并在24孔tc板中以每孔30,000-50,000个细胞接种，孵育至80-85％汇合(～2-3天)。每隔一天更换培养基。添加分化培养基(含有2mm cacl2的kgm)并孵育2-3天。
[0123]
4.在kgm中制备所需浓度的活性物质(如果使用，乙醇溶剂的最终浓度应小于0.1％)。
[0124]
5.用含有活性物质的培养基替换分化培养基并孵育24h。
[0125]
6.弃去上清液并用dpbs洗涤细胞一次。向每个孔中加入250μlrlt缓冲液以裂解细胞并将全部内容物转移到1.5ml管中。储存在-80℃直至提取。
[0126]
7.按照试剂盒进行rna提取，定量rna，进行cdna合成并对cdna样品进行实时qpcr。计算针对管家基因归一化的相对于对照的相对表达水平。
[0127]
使用上述方案，测量amp基因的表达，并且数据总结在下表-1中。
[0128]
表-1：使用浓度为1μm(＝0.00003wt％)的12hsa的amp基因表达
[0129]
实施例amp基因相对于对照的倍数变化1对照1.002s100a71.663rnase72.56
4ll-372.095hbd-32.16
[0130]
倍数变化是与不使用活性物质(12-hsa)的对照相比表达的基因量的指示。因此，例如，具有12-hsa的样品引起的基因s100a7的表达是不具有12-hsa的样品的1.66倍。因此，上表中的数据表明，在角质形成细胞上使用12-hsa时，许多amp基因的表达比对照高许多倍。
[0131]
实施例6-10：来自不同浓度的12-hsa处理的抗微生物肽表达
[0132]
选择来自上述列表的银屑素(s100a7)amp来研究12-hsa浓度对amp分泌的影响。使用的程序如下：
[0133]
用于在角质形成细胞上针对amp分泌评估活性物质(12-hsa)的方案
[0134]
材料：
[0135]
正常人表皮角质形成细胞(nhek)、epilife角质形成细胞生长培养基(kgm)(含抗生素pen-strep)、dulbecco磷酸盐缓冲盐水(dpbs)、胰蛋白酶-edta、胰蛋白酶中和剂溶液、乙醇、银屑素elisa试剂盒。
[0136]
程序：
[0137]
1.将nhek细胞解冻并在2-25cc和然后75cc烧瓶中在kgm中扩增至80％汇合，每隔一天更换培养基并在37℃下在5％co2培养箱中孵育。
[0138]
2.弃去用过的培养基并用dpbs冲洗烧瓶中的粘附细胞。加入胰蛋白酶-edta并轻敲以使粘附的细胞脱落。加入胰蛋白酶中和剂并轻轻混合。
[0139]
3.将内容物转移到15-ml管中并旋转沉淀细胞。弃去上清液并将细胞重悬于kgm中。计数并在24孔tc板中以每孔30,000-50,000个细胞接种，孵育至80-85％汇合(～2-3天)。每隔一天更换培养基。添加分化培养基(含有2mm cacl2的kgm)并孵育2-3天。
[0140]
4.在kgm中制备所需浓度的活性物质(如果使用，乙醇溶剂的最终浓度应小于0.1％)。
[0141]
5.用含有活性物质的培养基替换分化培养基并孵育72h。
[0142]
6.收集上清液并储存在-80℃下。在进行elisa以测量amp(银屑素)前完全解冻。
[0143]
7.对于elisa，运行所需的标准品和样品(未稀释的和稀释的)和使用标准曲线，计算样品中的amp量。
[0144]
使用上述方案，测量肽的表达，并将数据总结在下表-2中。
[0145]
表2
[0146]
实施例12-hsa的浓度相对于对照的倍数变化(银屑素增加)6对照1.0070.25μm8.1280.50μm15.0791.0μm9.79102.0μm15.70
[0147]
上表中的数据表明了12-hsa引起角质形成细胞大量表达amp，并且这在大浓度范围内观察到。
[0148]
将理解本文所述的实验在体外测定中进行以评估协同抗微生物作用。预期实际用
于制备局部使用的组合物的浓度可以高几个数量级，这是由于影响与细胞水平下的浓度相比在本体中的浓度差异的以下原因。组合物可以配制成具有非常多的附加成分的乳液或凝胶。预期油相和水相中所需活性物质的浓度非常不同。它们还可以具有非常不同的物理和流体动力学性质，如分配系数、扩散速率、对流输送速率、流变性质等。因此，预期配制成组合物时使用的浓度将与细胞水平下的浓度非常不同。
[0149]
实施例11-26：12-hsa与aml或amp或其混合物在提供抗微生物功效方面的协同作用
[0150]
研究了10μm(＝0.0003wt％)的12-hsa与1μg/ml(＝0.0001wt％)的aml(植物鞘氨醇)和0.5μg/ml(＝0.00005wt％)的amp(ll-37)的组合对两种生物体金黄色葡萄球菌(s.aureus)和铜绿假单胞菌(p.aeruginosa)的抗微生物功效。使用以下测定进行实验。
[0151]
微量稀释测定
[0152]
材料：胰蛋白酶大豆琼脂(tsa)培养基，amp原液(ll37)，aml原液(植物鞘氨醇)，测试微生物(金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌)，磷酸盐缓冲液(ph 5.8)，d/e培养基。
[0153]
方法：
[0154]
1.将测试培养物接种在tsa板中，并在37℃下在培养箱中孵育18-24h。
[0155]
2.刮下培养物并重悬于10mm磷酸盐缓冲液中，将细胞数调节至1
×
108cfu/ml。
[0156]
3.将培养物在10mm磷酸盐缓冲液中连续稀释，以获得1
×
106cfu/ml。
[0157]
4.制备活性物质(在水、乙醇或dmso中)、ll37(在milliq水中)和植物鞘氨醇(在乙醇中)的10-100倍浓度的原液。
[0158]
5.在96孔微量滴定板中，加入缓冲液、活性ll37&植物鞘氨醇，并用水补足总体积至165μl。保留适当的对照。
[0159]
6.加入135μl稀释的培养物，混合并在37℃下孵育4h。
[0160]
7.孵育后，从每个反应中取出等分试样，并通过在d/e培养基中1:10稀释来中和。
[0161]
8.在d/e培养基中进一步稀释并在tsa板上铺板接种稀释液。在37℃下孵育24h。
[0162]
9.第二天计数菌落并计算与对照相比的回收率和对数减少。
[0163]
各个不同样品的对数(回收率)数据在下表3和4中给出。
[0164]
以下实施例中使用的羟基硬脂酸、amp和aml从供应商商购获得，且目录号如下所示。
[0165]
12-hsa(tci；h0308)、ll-37(tocris；5213/1)、植物鞘氨醇(tci；p1765)、十六碳烯酸(chemscene；cs-0105451)、鞘氨醇(sigma；s9666)、棕榈油酸(sigma；p9417)。下表中以及它们的美国典型培养物保藏中心(atcc)编号提及的细菌来于chromachemie。
[0166]
表-3：对金黄色葡萄球菌atcc 6538的抗微生物杀灭
[0167][0168]
表-4：对铜绿假单胞菌atcc15442的抗微生物杀灭
[0169][0170][0171]
表3和表4中的数据表明与单独用每种活性物质实现的抗微生物活性相比，12-hsa连同aml和amp的组合提供了协同的抗微生物活性。
[0172]
表5：对金黄色葡萄球菌atcc 6538的抗微生物杀灭
[0173]
实施例样品回收率(对数)19对照6.59200.005％12-hsa6.26211.0μg/ml ll-375.48220.005％12-hsa+1.0μg/ml ll-374.62
[0174]
表-6：对铜绿假单胞菌atcc 15442的抗微生物杀灭
[0175]
实施例样品回收率(对数)23对照6.3240.0003％12-hsa6.1251.0μg/ml植物鞘氨醇5.9260.0003％12-hsa+1.0μg/ml植物鞘氨醇5.4

技术特征：
1.羟基硬脂酸用于在施用于人体外表面时诱导抗微生物肽(amp)分泌的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其中羟基硬脂酸诱导角质形成细胞的amp分泌。3.根据权利要求1或2所述的用途，其用于改善所述外表面的免疫力。4.根据前述任一项权利要求所述的用途，其中所述外表面包括皮肤、头皮或口腔。5.根据前述任一项权利要求所述的用途，其中所述羟基硬脂酸是12-羟基硬脂酸。6.根据前述任一项权利要求所述的用途，其中所述用途是非治疗性用途。7.一种通过诱导抗微生物肽(amp)的分泌来为身体的外表面提供保护的方法，所述方法包括将羟基硬脂酸施用于所述外表面的步骤。8.包含羟基硬脂酸和抗微生物肽或抗微生物脂质或其混合物的组合物用于抗微生物益处的用途。9.一种向身体的外表面提供抗微生物益处的方法，所述方法包括将包含羟基硬脂酸和抗微生物肽或抗微生物脂质或其混合物的组合物施用于所述外表面的步骤。10.一种抗微生物组合物，其包含(i)0.000001至10％重量的羟基硬脂酸和(ii)0.000001至2％重量的抗微生物肽或抗微生物脂质或其混合物。11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述组合物包含(i)0.000001至10％重量的羟基硬脂酸和(ii)0.000001至1％重量的抗微生物脂质。12.根据前述权利要求10或11任一项所述的组合物，其包含化妆品可接受的基质。13.根据前述权利要求10至12中任一项所述的组合物，其中化妆品可接受的基质是乳膏、洗液、凝胶或乳液。14.根据前述权利要求10至13中任一项所述的组合物，其中化妆品可接受的基质包含表面活性剂。

技术总结
本发明涉及羟基硬脂酸在施用于人体外表面上时用于诱导抗微生物肽(AMP)分泌的新用途。还涉及包含羟基硬脂酸和抗微生物肽或抗微生物脂质或其混合物的组合的抗微生物组合物。其具有提高皮肤、头皮和口腔对抗微生物攻击的免疫力的应用。免疫力的应用。


技术研发人员：T
受保护的技术使用者：联合利华知识产权控股有限公司
技术研发日：2021.11.24
技术公布日：2023/8/1