一种丁酸梭菌复合菌剂及其应用的制作方法

1.本发明涉及功能微生物技术领域，具体涉及一种丁酸梭菌复合菌剂及其应用。


背景技术：

2.畜禽养殖业中，高密度养殖产生的有害气体严重制约行业的健康发展。例如，鸡粪产生的有害气体能够污染舍内空气，降低家禽的生产性能，传播疾病，导致养殖场区及附近的空气质量下降，对人体健康构成威胁。研究发现，养殖环境对畜禽类生产力的贡献率可达30％～40％。实际生产中多采取通风、清除粪尿和喷洒吸附剂等方式降低圈舍内臭味气体。喷洒吸附剂方法成本较高、不便于规模化养殖、效果不理想；通风致使圈舍温度急剧下降，容易影响畜禽的生产性能。
3.目前，微生物饲料添加剂是采用农业部认可的有益微生物经发酵制成的生物制剂，是抗生素的最佳替代品。用于提高畜、禽的健康水平的微生物及其代谢产物，可调整畜、禽体内的微生态失调，保持微生态平衡，是激发动物自身有益菌种繁殖增长，同时抵制有害菌系生长的微生物制品。研究发现，家禽日粮中添加微生物菌剂能够有效降低圈舍有害气体的浓度。
4.丁酸梭菌(clostridium butyricum)，专性厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌，属梭菌属。细胞形态为：直径0.6～1.2μm，长度0.3～0.7μm，两端钝圆，中部轻度膨胀，呈杆状，单个或成对，周身鞭毛，能运动。丁酸梭菌作为饲料添加剂，不受胃酸、胆汁酸的影响，可促进动物肠道有益菌群(双歧杆菌,乳酸杆菌)的增殖，抑制肠道内有害菌和腐败菌的生长、繁殖，纠正肠道菌群紊乱；主要代谢产物丁酸是肠道上皮组织细胞的再生和修复主要营养物质，对减少饲料抗生素的滥用、降低动物细菌耐药性和保障动物健康方面具有重要意义。
5.周安树等在《丁酸梭菌对畜禽肠道有害菌及有益菌的抑制作用》(饲料博览，2023年第1期)的研究中表明，丁酸梭菌对畜禽肠道主要有害菌有一定的抑制作用，具有调控畜禽肠道菌群平衡的饲用价值，且饲粮中单一添加丁酸梭菌能够显著提高畜禽肠道中乳酸杆菌和双歧杆菌的总数量，有利于改善畜禽生产性能；徐翡等在《丁酸梭菌及其在生猪养殖中的应用研究》中揭示了，丁酸梭菌具有耐酸、耐高温高压、耐多种抗生素的特点，由于其在生猪养殖生产方面，具有安全无毒、绿色、无残留以及良好的稳定性，还具有调节肠道微生物菌落平衡，改善肠黏膜形态，提高机体生长性能、消化率、免疫力、抗氧化能力等多种优良生物学功能，丁酸梭菌作为新型饲料添加剂广泛应用于畜牧养殖业，其同时也提出了，菌株宿主来源性的差异，从猪肠道分离获得的菌株，其对猪的效果明显而对鸡则未必有效，丁酸梭菌制剂来源不同，使用对象不同。孙玉霜等在《甘露寡糖-丁酸梭菌对14日龄肉鸡粪便菌群的影响》中指出，在肉鸡日粮中添加丁酸梭菌、甘露寡糖或联合添加在门、纲、目、科、属等5个分类水平上优势菌群变化明显，对肠道菌群结构起到调节作用。
6.综上所述，微生物饲料添加剂存在的主要问题是优良菌种的选择和由于菌种失活导致的微生物饲料添加剂活性降低。如何能筛选高效的菌株，并配以合理组方，发挥微生物饲料添加剂的最佳作用具有重要的研究意义。


技术实现要素：

7.发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一株优势丁酸梭菌菌株，并进一步提供一种复合菌剂，以降低内源减少畜禽臭气生成，降低圈舍有害气体的饲料添加剂，为其推广应用提供参考。
8.具体地，本发明进一步提出了一种丁酸梭菌复合菌剂，包含如下重量份数的组分：丁酸梭菌菌剂55～90份、聚谷氨酸6～25份、菊芋提取物1-10份、胆汁酸3～10份。其中，所述丁酸梭菌菌剂包含丁酸梭菌，所述丁酸梭菌分类命名为丁酸梭菌sds-01(clostridium butyricum sds-01)，于2023年3月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国 武汉 武汉大学，保藏编号为cctcc no：m 2023287。丁酸梭菌采集自养鸡场土壤中。
9.优选地，所述复合菌剂包含如下重量份数的组分：丁酸梭菌菌剂75～80份、聚谷氨酸10-15份、菊芋提取物3-5份、胆汁酸6-8份。
10.在一个具体的实施方式中，所述复合菌剂包含如下重量份数的组分：丁酸梭菌菌剂78.33份、聚谷氨酸12.33份、菊芋提取物4.00份、胆汁酸7.67份。
11.优选地，所述聚谷氨酸重均分子量为10kda-1000kda；更优选地，所述聚谷氨酸重均分子量为50-200kda。
12.所述菊芋提取物通过如下方法制备得到:将菊芋干粉置于水中，料液比为1：30-60，超声辅助提取，条件为50-70℃，热水浸提60-120min，离心获得上清液浸提液，喷雾干燥，即得菊芋提取物。
13.进一步地，本发明提供了一种丁酸梭菌菌剂，其包含上述丁酸梭菌，所述菌剂中有效活菌总数1.0
×
108～2
×
109cfu/ml。
14.本发明进一步提出了上述复合菌剂、上述丁酸梭菌、包含其的菌剂中的任意一种在内源性降低畜禽粪便中臭气成分生成上的应用。
15.具体地，臭气成分包括吲哚、3-甲基吲哚和氨态氮中的任意一种或几种。
16.本发明还进一步提出了上述复合菌剂、上述丁酸梭菌、包含其的菌剂中的任意一种在调节肠道菌群、改善肠道微生态、增强畜禽抗病能力上的应用，其中，所述调节肠道菌群为：抑制沙门氏菌的定植、促进了厚壁菌门和放线菌门的生长、下调拟杆菌门的比例。
17.本技术还进一步发现了上述复合菌剂、上述丁酸梭菌、包含其的菌剂中的任意一种在在提高畜禽饲料转化率和生长性能上的应用，所述畜禽为鸡，所述生长性能包括体重、屠宰性能和产蛋率，其中，所述屠宰性能包括半净膛率、全净膛率、胸肌率和腿肌率。
18.在应用时，将上述丁酸梭菌、包含其的菌剂或上述复合菌剂中的任意一种添加至养殖动物饲料或饮水中使用。
19.其中，按0.001～0.1％质量比与饲用基础日粮混合，或用洁净的水按1:50～1:500的比例稀释，添加至畜禽类饮水中
20.有益效果：本发明筛选到的丁酸梭菌sds-01及其复合菌剂，一方面能有效减少畜禽粪便中吲哚、粪臭素和氨态氮等恶臭气体的释放量，从源头上减少恶臭气体的产生，下降率为18.67％、19.25％和16.5％，环境中氨气和有机酸。另一方面，丁酸梭菌sds-01复合菌剂在上述效果的基础上，对肉鸡生长性能有显著增强效果，具有一定的经济效益；与此同时，还能抵御沙门氏菌对肉鸡的侵染，保证了肉鸡正常生长和肌肉品质。具体地，丁酸梭菌sds-01复合菌剂能增加肉鸡机体抵抗力，减少沙门氏菌对其造成的损伤。实验中，攻毒模型
组出现了40％阳性，肉鸡肝脏出现明显病灶，攻毒前日粮添加丁酸梭菌干预和攻毒后前日粮添加丁酸梭菌干预，肉鸡肝脏病灶明显减少，约50％；攻毒前后均采用日粮添加丁酸梭菌干预，肝脏无明显病灶。饲喂1-2周丁酸梭菌后，肝脏载菌量显著低于攻毒对照组，尤其以连续饲喂丁酸梭菌效果最好，此时肝脏几乎没有沙门氏菌病变部位，说明丁酸梭菌复合菌剂可有效抑制沙门氏菌的定植。此外，丁酸梭菌sds-01sds-01复合菌剂还能有效增加饲料转化率，降低肉料比，提高生长性能，与对照组相比，在整个肉鸡饲养周期中，饲料添加丁酸梭菌sds-01复合菌剂的平均体增重比对照组大幅提高，日均采食量增加1.7％，料肉比降低了4.70％。本发明所述丁酸梭菌及其复合菌剂不仅可单独粪便除臭处理，也可与其他具有除臭功能的微生物和/或化学物质进行复配，除臭效果也很显著。
附图说明
21.下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。
22.图1为丁酸梭菌的菌落形态示意图；
23.图2为菌剂对鸡肝脏的影响示意图；
24.图3为肉鸡盲肠菌群门水平相对丰度；
25.图4为丁酸梭菌的添加对吲哚、粪臭素和氨态氮含量的影响；
26.图5为白羽肉鸡体重增长图。
具体实施方式
27.下面结合具体实施例进一步阐述本发明。对于实施例中所用到的具体方法或材料，本领域技术人员可以在本发明技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选择，而不仅限于本发明实施例的具体记载。
28.实施例1丁酸梭菌sds-01的筛选及鉴定。
29.从南京溧水养鸡场土壤中采集微生物样品，加入一定体积0.9％的生理盐水中振荡，采用10倍梯度稀释法，将土壤微生物菌液涂布于梭菌增值培养基平板中，待培养基完全凝固后，装入2.5l厌氧培养袋中，加入厌氧产气包，封口，37℃培养24小时。将梭菌增殖培养基固体平板长出的单菌落进行镜检，对符合梭状芽孢杆菌特征的单菌落划线、接种到新鲜梭菌增殖培养基固体平板上，继续厌氧培养，直到获取形态基本一致的单菌落。挑选含有溶钙圈的菌落，反复在上述平板上划线，获得单一菌株。其菌落形态图如图所示。其中，梭菌增殖培养基配方(1l)：葡萄糖5.0g、月示胨10.0g、牛肉粉10.0g、酵母粉3.0g、可溶性淀粉1.0g、氯化钠5.0g、醋酸钠3.0g、l-半胱氨酸盐酸盐0.5g、琼脂0.5g，ph 6.8
±
0.2。
30.将筛选获得的单一菌株送中国典型培养物保藏中心进行菌株鉴定，根据菌株的细胞形态、生理生化实验，16s rrna基因序列等实验数据综合分析，鉴定结果为丁酸梭菌(clostridium butyricum)。16s rrna基因序列测定结果如seq id no.1所示。
31.实施例2丁酸梭菌sds-01的培养及制备方法。
32.丁酸梭菌sds-01微生物制剂，有效活菌总数≥1.0
×
108cfu/ml，其中，主要有效活菌丁酸梭菌为1
×
108～2
×
109cfu/ml。制备方法如下：
33.(1)平板培养，使用固体活化培养基，平板活化丁酸梭菌，采用划线接种法将丁酸
梭菌接种于固体活化培养基平板上，于50℃培养36～48h，使其复苏，形成单菌落。其中固体活化培养基按照下述重量百分比配制：蛋白胨1％，酵母粉0.5％，氯化钠1％，琼脂2％，其余为蒸馏水，121℃灭菌20min，冷却备用。
34.(2)摇瓶种子制作，使用摇瓶及液体活化培养基，用接种环将步骤(1)中长势良好无污染的菌种分别接种到液体活化培养基中，以500ml三角瓶30℃～35℃、厌氧静置培养36～48h，得到摇瓶种子液，并无菌操作取样进行菌株鉴定，确保菌株正确；
35.其中液体活化培养基按照下述重量百分比配制：蛋白胨1％，酵母粉0.5％，氯化钠1％，其余为蒸馏水，121℃灭菌20min，冷却备用；
36.(3)驯化培养，使用液体驯化培养基，驯化培养步骤(2)中的丁酸梭菌单菌株在1l大三角瓶内加入液体驯化培养基，接入步骤(2)的单菌株进行驯化培养，接种量为5％，培养条件为33～37℃，静置培养，36～48h，传代两代；
37.其中驯化培养基按照下述重量百分比配制：糖蜜3％，酵母粉0.5％，ph 6.0～6.5，其余为蒸馏水115℃灭菌15min，冷却备用。
38.(4)发酵培养，使用不锈钢发酵罐及发酵培养基，发酵培养步骤(3)中驯化后的丁酸梭菌，在1吨不锈钢发酵罐中加入发酵培养基800l，取步骤(3)中驯化培养好的液体菌株进行接种，接种量9％，常温厌氧下发酵72h后，在显微镜下计算活菌数，有效活菌总数为1.5
×
109cfu/ml时，此时芽孢率可达95.3％，停止搅拌，将菌液喷雾干燥，得到丁酸梭菌制剂，即菌粉。
39.本发明确定了在最适发酵培养基组成，接种量为9％时活菌数及芽孢率最为理想，分别可达1.5
×
109cfu/ml，95.3％，无机盐成分对菌体的生长影响不明显。
40.实施例3丁酸梭菌sds-01复合菌剂配方优化。
41.(1)复合菌剂组分的筛选
42.前期实验发现，本发明中筛选的一株丁酸梭菌sds-01用于禽类养殖中，具有内源性除臭的功效，为增强其使用效果，采用丁酸梭菌sds-01复配的形式制成复合菌剂，拟选择的复配物质有：辅助促进饲料转化吸收的γ聚谷氨酸、聚赖氨酸、纳豆激酶；用于辅助调节肠道菌群组成的魔芋提取物、菊芋提取物和豆渣提取物；以及用于辅助增强饲料消化和生长的胆汁酸、柑橘油和牛磺酸，通过单因素实验设计，与丁酸梭菌sds-01复配，添加至肉鸡的基础日粮中，以肉鸡盲肠内容物(排泄后即为粪便)中吲哚、三甲基吲哚和氨态氮的生成量为指标，筛选复配效果好的组分。其中，高效液相色谱法测定吲哚、粪臭素(3-甲基吲哚)含量，靛酚蓝法测定氨态氮含量。
43.其中，下述实施例中使用的γ聚谷氨酸重均分子量为100kda.
44.菊芋提取物通过如下方法制备得到:将菊芋干粉置于水中，料液比为1：50，超声辅助提取，条件为60℃，热水浸提100min，离心获得上清液浸提液，喷雾干燥，即得菊芋提取物。
45.魔芋提取物通过如下方法制备得到:将魔芋干粉置于水中，料液比为1：20，超声辅助提取，条件为40℃，热水浸提100min，离心获得上清液浸提液，喷雾干燥，即得魔芋提取物。
46.豆渣提取物通过如下方法制备得到:将魔芋干粉置于水中，料液比为1：20，超声辅助提取，条件为90℃，热水浸提60min，离心获得上清液浸提液，喷雾干燥，即得豆渣提取物。
47.表1
[0048][0049][0050]
表2
[0051][0052]
表3
[0053]
[0054][0055]
(2)复合菌剂组分比例的优化
[0056]
对于已经筛选得到的复合菌剂组分，丁酸梭菌sds-01、聚谷氨酸、菊芋提取物和胆汁酸组分的比例进行优化，设计四因素四水平的正交设计，按照表中设计的比例混匀制备复合菌剂，将25种不同比例的复合菌剂按0.1％添加至肉鸡的日粮中，通过测定肉鸡粪便种吲哚、三甲基吲哚和氨态氮的降低率，优化最佳比例。结果发现，11号复合菌剂添加至肉鸡日粮中，吲哚、三甲基吲哚总量和氨态氮的降低率均为最低，据此判断11号比例为最佳复配比例，用于后续实施例实验，同时结合研究判断，聚谷氨酸、菊芋提取物和胆汁酸可以协同丁酸梭菌，通过提高氨基酸代谢、调节菌群组成等，降低臭气的生成。
[0057]
表4
[0058]
[0059][0060]
实施例4丁酸梭菌sds-01复合菌剂及其制备方法
[0061]
丁酸梭菌sds-01复合菌剂，其组成为丁酸梭菌sds-01、聚谷氨酸、菊芋提取物、胆汁酸，制备方法如下：采用实施例2中制备的丁酸梭菌sds-01菌粉、与聚谷氨酸、菊芋提取物和胆汁酸，按照重量比例为78:12:4:8，混匀，造粒，即得到丁酸梭菌sds-01复合菌剂，其中，丁酸梭菌sds-01菌粉的有效活菌数是1.26
×
109cfu/g。
[0062]
该复合菌剂的使用方法为：按0.001～0.1％质量比与饲用基础日粮混合，饲喂畜禽类动物，也可用洁净的水按1:50～1:500的比例稀释，添加至畜禽类饮水中。
[0063]
实施例5饲料添加丁酸梭菌sds-01复合菌剂对肉鸡抗病能力的影响
[0064]
用玉米、豆粕、油的基础日粮按表5比例混匀，配制成肉鸡基础日粮，选用15日龄白羽肉鸡125只鸡苗饲养，分为对照组、沙门攻毒组和沙门攻毒-微生物菌剂组，微生物菌剂组是在肉鸡基础日粮的基础上，添加实施例4中制备的丁酸梭菌sds-01复合菌剂，按照表6的分组设计饲养，饲喂23天后进行称重等观察鸡的生长状态。其中，预混料1为市售肉鸡预混料，每千克饲料提供如下组分：维生素a 6132.00iu，维生素d3 3579iu，维生素e11.00iu，维生素k1.6 0mg，维生素b12 0.07mg，维生素b2 4.11mg，维生素b6 0.62mg，维生素b3 4.82mg，泛酸钙12mg，烟酸22.00mg，叶酸0.4mg，锰60.00mg，铁42mg，铜2.5mg，锌45mg，碘0.9mg，se 0.25mg。
[0065]
表5肉鸡基础日粮组成
[0066][0067]
表6分组设计
[0068][0069]
结果如表7所示，攻毒模型组出现了40％阳性，肉鸡肝脏出现明显病灶，攻毒前和攻毒后，日粮添加丁酸梭菌复合菌剂干预，肉鸡肝脏病灶明显减少，约50％，肝脏无明显病灶(表7)。肝脏载菌量显著低于攻毒对照组，肝脏几乎没有沙门氏菌病变部位，说明丁酸梭菌复合菌剂可有效抑制沙门氏菌的定植，连续饲喂可显著降低鸡肝脏病变数、阳性率和载菌量。
[0070]
表7丁酸梭菌sds-01复合菌剂添加对肉鸡肝脏病变和沙门氏菌载菌量影响
[0071][0072]
在进行沙门氏菌攻毒实验时，添加丁酸梭菌复合菌剂组有效降低了鸡肠炎沙门氏菌侵染对肉鸡带来的危害。对实验解剖后的肉鸡肝脏进行观察，饲喂丁酸梭菌复合菌剂的实验组肉鸡基本没有染病迹象或已经治愈完全，载菌量也下降至几乎消失，见表2、图2。对上述几组肉鸡肠道的菌群结构进行16s测序分析，结果表明，沙门氏菌侵染组表现出最低的属相对丰度，乳酸杆菌下降最为明显，饲料添加丁酸梭菌复合菌剂促进了厚壁菌门和放线菌门的生长，拟杆菌门的比例则有所下降，可以有效调节沙门氏菌侵染后造成的菌群紊乱，见图3，这可能因为丁酸梭菌孢子萌发可以快速消耗氧气，制造低氧环境，有助于肠道厌氧益生菌的生长多项数据表面，添加丁酸梭菌复合菌剂并不会改变肉鸡本身肠道总体的菌群稳定性，只会改变其中部分菌群的占比，在不破坏原有菌群丰度的情况下对菌群进行优化调整。同时，γ聚谷氨酸、菊芋提取物、胆汁酸等复配物也可以增强影响肉鸡肠道微生物结构的功效，从而支持其作为肠道益生菌的潜在用途。
[0073]
实施例6添加丁酸梭菌sds-01复合菌剂对肉鸡粪便臭气化合物的影响。
[0074]
将实施例4中制备的丁酸梭菌sds-01复合菌剂(活菌数为1.26
×
109cfu/g)、与玉米、豆粕、油的基础日粮按表5比例混匀，选用1日龄白羽肉鸡400只鸡苗饲养,分为对照组和复合菌剂组，对照组饲喂基础日粮(表5中所列基础日粮)，丁酸梭菌组在基础日粮基础上每组添加0.01％的丁酸梭菌复合菌粉，饲喂38天后肉鸡进行屠宰，并取出盲肠内容物(排泄后即为粪便)，采用高效液相色谱法测定吲哚、粪臭素(3-甲基吲哚)含量，靛酚蓝法测定氨态氮含量。
[0075]
结果表明，本发明提供的丁酸梭菌复合菌剂可以显著降低肉鸡粪便中吲哚、粪臭素和氨态氮含量，下降率为18.67％、19.25％和16.5％，见图4，丁酸梭菌复合菌剂的添加可以内源性的显著降低肉鸡粪便中臭气化合物的生成。
[0076]
实施例7饲料添加丁酸梭菌sds-01复合菌剂对鸡舍环境气体的影响
[0077]
在实施例5中，白羽肉鸡饲养38后，采用气体采样袋分别收集基础日粮组和丁酸梭菌复合菌剂组鸡舍环境的环境气体，气相法测定鸡舍环境中气体组成和挥发性有机化合物的变化，结果表明，添加丁酸梭菌复合菌剂后，鸡舍环境中氨气含量较对照组降低了11.73％，有机酸降低12.58％，表8。说明通过饲料添加丁酸梭菌复合菌剂后，可以有效降低鸡舍环境中臭气的浓度，改善鸡舍环境。
[0078]
表8鸡舍环境成分分析
[0079]
序号组分名称对照组复合菌剂组1二氧化碳0.0828vo1％0.1336vo1％2氧气21.4283vo1％22.6175vo1％3氮气78.4787vo1％77.2387vo1％4氨气7.76mg/m36.85mg/m35乙酸2.2205mg/m32.1375mg/m36异丁酸5.2443mg/m35.106mg/m37戊酸5.277mg/m34.9497mg/m3[0080]
实施例8饲料添加丁酸梭菌sds-01复合菌剂对肉鸡生长性能的影响。
[0081]
用实施例4中制备的丁酸梭菌sds-01复合菌剂(活菌数为1.26
×
109cfu/g)、与玉米、豆粕、油的基础日粮按表5比例混匀，选用1日龄白羽肉鸡288只鸡苗饲养,分为对照组和菌剂组，对照组饲喂肉鸡基础日粮(表5所示)，丁酸梭菌复合菌剂组在基础日粮基础上每组添加0.01％的丁酸梭菌复合菌剂，饲喂42天后进行称重等生长性能指标测试。
[0082]
如图5所示，与对照组相比，在整个肉鸡饲养周期中，添加丁酸梭菌复合菌剂组的平均体增重比对照组大幅提高，日均采食量增加1.7％，料肉比降低了4.70％。每只鸡每天采食90.6克，整个试验期采食量为3171.9克，丁酸梭菌产品添加量为0.32克；比对照组多采食1.569克，整个试验期多采食54.915克；整个试验期增重83.72g。屠宰性能方面，添加丁酸梭菌后，肉鸡半净膛率、全净膛率、胸肌率和腿肌率均明显提高(表9)。
[0083]
表9肉鸡屠宰性能
[0084][0085]
注：a,b是显著性分组，标记不同的分组，代表组间有显著性差异。
[0086]
实施例9丁酸梭菌sds-01复合菌剂在蛋鸡养殖中的应用效果。
[0087]
为评价实施例4中制备的丁酸梭菌sds-01复合菌剂在蛋鸡养殖中的应用效果，选用120只海兰褐蛋鸡(380日龄)进行饲养实验，均分为对照组和丁酸梭菌sds-01复合菌剂组，对照组饲喂基础日粮，组成见表10。试验组于第8天开始，在基础饲粮的基础上，添加0.1％丁酸梭菌sds-01复合菌剂，持续42d，试验鸡采用笼养，对照组与菌剂组鸡笼分开放置，自由采食和饮水，白天自然光照，早晚灯照。观察鸡群体重、采食量和产蛋量等，做好记录，分别在实验第49日，每个处理随机选择30只鸡，测试其肠道内容物中吲哚、3-甲基吲哚、氨态氮含量。其中，预混料2为市售蛋鸡预混料，每千克预混料提供如下组分：维生素a 37500iu，维生素d3 10000iu，维生素e250iu，维生素k3 30mg，维生素b1 45.5mg，维生素b2 152mg，维生素b6 80mg，烟酸500mg，泛酸钙525mg，胆碱6g，铁875mg，铜10mg，锌1000mg，锰
1000mg，碘2.5mg，硒2.5mg。
[0088]
表10蛋鸡基础日粮组成
[0089]
原料含量(％)玉米58.2豆粕27.7大豆磷脂油粉1.9石粉8.3预混料23.9总计100
[0090]
表11可知，与对照组相比，在整个肉鸡饲养周期，饲粮添加0.1％丁酸梭菌sds-01复合菌剂菌剂，平均只均采食量和平均日增重分别提高了4.28％和13.95％，饲料转化率比对照降低了7.8％；平均产蛋率提高了4.78％。
[0091]
表11饲粮添加丁酸梭菌sds-01复合菌剂对蛋鸡生长性能的影响
[0092][0093]
饲粮添加0.1％丁酸梭菌sds-01复合菌剂组，盲肠内容物中吲哚、粪臭素和氨态氮含量，下降率为69.45％、55.99％和39.52％，见表12，说明本发明提供的丁酸梭菌复合菌剂可以内源性的显著降低蛋鸡肠道内容物中臭气化合物的生成。
[0094]
表12鸡盲肠内容物中吲哚和3-甲基吲哚、氨态氮含量测定
[0095][0096]
本发明提供了一种丁酸梭菌及其用于畜禽肠道调节剂的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。

技术特征：
1.一种丁酸梭菌复合菌剂，其特征在于，包含如下重量份数的组分：权利要求2所述的丁酸梭菌菌剂55~90份、γ聚谷氨酸6~25份、菊芋提取物1-10份、饲用胆汁酸3~10份，其中，所述丁酸梭菌菌剂包含丁酸梭菌，所述丁酸梭菌分类命名为丁酸梭菌sds-01（clostridium butyricum sds-01），于2023年3月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：m 2023287。2.根据权利要求1所述的丁酸梭菌复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂包含如下重量份数的组分：权利要求2所述的丁酸梭菌菌剂75~80份、聚谷氨酸10-15份、菊芋提取物3-5份、胆汁酸6-8份。3.根据权利要求1或2所述的丁酸梭菌复合菌剂，其特征在于，所述聚谷氨酸重均分子量为10 kda-1000kda；所述菊芋提取物通过如下方法制备得到:将菊芋干粉置于水中，料液比为1：30-60，超声辅助提取，条件为50-70℃，热水浸提60-120min，离心获得上清液浸提液，喷雾干燥，即得菊芋提取物。4.一种丁酸梭菌，其分类命名为丁酸梭菌sds-01（clostridium butyricum sds-01），于2023年3月10日保藏于中国微生物菌种保藏中心，保藏编号为cctcc no：m 2023287。5.一种丁酸梭菌菌剂，其特征在于，其包含权利要求4所述的丁酸梭菌，所述菌剂中有效活菌总数范围为1.0
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109cfu/ml。6.权利要求1所述的复合菌剂、权利要求3所述的丁酸梭菌或权利要求4所述的菌剂中的任意一种在内源性降低畜禽粪便中臭气成分生成上的应用；所述臭气成分包括吲哚、3-甲基吲哚和氨态氮中的任意一种或几种。7.权利要求1所述的复合菌剂、权利要求3所述的丁酸梭菌或权利要求4所述的菌剂中的任意一种在调节肠道菌群、改善肠道微生态、增强畜禽抗病能力上的应用，其中，所述调节肠道菌群为：抑制沙门氏菌的定植、促进了厚壁菌门和放线菌门的生长、下调拟杆菌门的比例。8.权利要求1所述的复合菌剂、权利要求4所述的丁酸梭菌或权利要求5所述的菌剂中的任意一种在提高畜禽饲料转化率和生长性能上的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述畜禽为鸡，所述生长性能包括体重、屠宰性能和产蛋率，其中，所述屠宰性能包括半净膛率、全净膛率、胸肌率和腿肌率。10.根据权利要求6、7和8中任意一项所述的应用，其特征在于，在应用时，将权利要求1所述的丁酸梭菌、权利要求2所述的菌剂或权利要求5所述的复合菌剂中的任意一种添加至养殖动物饲料或饮水中使用。

技术总结
本发明公开了一种丁酸梭菌复合菌剂及其在内源性降低畜禽粪便中臭气成分生成上的应用。本发明的复合菌剂可作为饲料添加，能内源性减少禽类肠道中吲哚、粪臭素和氨态氮产生，下降率为18.67%、19.25%和16.5%，降低养殖环境中氨气、有机酸等含量。此外，本发明的微生物复合菌剂还能预防和治疗肠道疾病，维持畜禽类肠道菌群平衡，提高机体抗病力，增强免疫力，并增加饲料转化率，降低肉料比，提高生长性能。本发明的养殖方法适用于各种规模的禽类养殖场。明的养殖方法适用于各种规模的禽类养殖场。明的养殖方法适用于各种规模的禽类养殖场。


技术研发人员：殷文锋 张亚涛 储玉龙 冯小海 许宗奇
受保护的技术使用者：南京轩凯生物科技股份有限公司 轩凯生物科技（山东）有限公司
技术研发日：2023.05.09
技术公布日：2023/8/4