一种柑橘木虱的柑橘黄龙病的防治方法

1.本发明属于生物防治应用领域，具体涉及一种柑橘木虱的柑橘黄龙病的防治方法。


背景技术：

2.柑橘黄龙病是柑橘产业中最具毁灭性的病害，其病原物为韧皮部杆菌黄龙病菌candidatus liberibacter asiaticus(clas)。柑橘树体感病会导致叶片产生不规则的斑驳黄化，最终严重影响柑橘果实产量和品质。目前，黄龙病无法被有效治愈，所以它又称为柑橘的“癌症”。柑橘“癌症”的扩散除了苗木调运外，柑橘木虱diaphorina citri是其最主要传播媒介。
3.防治黄龙病，必须要控制住木虱，传统对于木虱的防治主要在春梢抽芽之前，春梢时期，夏梢时期和秋梢时期这四个时期进行喷洒菊酯类或者喷洒阿维吡虫啉等药物，从源头上，把这种病菌消灭掉，从而减少黄龙病的发生几率，但喷洒药物对生态环境和其他生物均有不良影响。目前对于韧皮部杆菌黄龙病菌clas的侵染机制研究主要集中于植物宿主中，而在介体昆虫木虱中的研究未见报道。
4.由于clas是胞内菌，且为不可培养的革兰氏阴性菌，加上柑橘木虱目前无人工饲料品系和离体细胞系等研究材料，这些研究材料的缺失限制了病原微生物如何进入柑橘木虱中肠的机制研究。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种柑橘木虱的柑橘黄龙病的防治方法，解决现有技术在防治黄龙病时采用喷洒药剂来防治木虱而导致对生态环境和其他生物均有一定不良影响的技术问题，同时本发明提供一种在活体层面，利用了rnai干扰网格蛋白内吞途径的抑制剂，解决了由于研究材料局限而导致未对介体昆虫木虱进行clas的侵染机制进行研究的问题。
6.为解决以上技术问题，本发明采用扩增获得柑橘木虱chc基因序列，证实木虱体内存在网格蛋白内吞途径，且所述网格蛋白内吞途径是clas病菌进入柑橘木虱中肠细胞的大门。具体如下：
7.本发明公开了一种柑橘木虱的柑橘黄龙病的防治方法，采用基于柑橘木虱网格蛋白内吞途径为靶点的方式进行防治。
8.作为优选地，所述基于柑橘木虱网格蛋白内吞途径为靶点的方式具体为使用网格蛋白抑制剂chlorpromazine(cpz)(selleck，50-53-3，usa)。
9.作为优选地，所述网格蛋白抑制剂的浓度为400μm。
10.作为优选地，所述柑橘木虱网格蛋白的重链chc基因的分段扩增引物为chc-part1：f:atgacacaaccattgccgatt；r:cttagcggcctccgaatatt；chc-part2：f:tcagtgccgtgtccaatc；r:ttggccggttcgtacatt；chc-part3：f:tctgcctacatggacgtggtc；r:caacgcgatcgtgtcgaaat；chc-part4：f:ctgattgacgaggaggactat；r:
ttacattccatatcccgtctg。
11.作为优选地，所述基于柑橘木虱网格蛋白内吞途径为靶点的方式具体为使用柑橘木虱chc基因的rnai干扰，所采用的干扰溶液为dschc溶液，所述dschc溶液的合成引物为t7-dschc，所述t7-dschc的基因序列为
12.f:taatacgactcactatagggtcggaaacccaagaccc
13.r:taatacgactcactatagggtcaatgagcacctggatgg
14.与现有技术相比，本发明获得的有益效果是：
15.本发明通过pcr分段扩增引物的设计，获得柑橘木虱chc序列，证实柑橘木虱存在网格蛋白内吞途径；通过实验证实网格蛋白内吞途径是clas进入柑橘木虱中肠细胞的大门；提出抑制柑橘木虱内源的网格蛋白内吞途径，能够阻遏韧皮部杆菌黄龙病菌clas进入其中肠的方法，所述韧皮部杆菌黄龙病菌clas是胞内菌，且为不可培养的革兰氏阴性菌，加上柑橘木虱目前无人工饲料品系和离体细胞系等研究材料，这些研究材料的缺失限制了病原微生物如何进入柑橘木虱中肠的机制研究。本发明提供一种在活体层面，利用rnai干扰网格蛋白内吞途径抑制剂，解决了研究材料局限的问题。
16.本发明扩增获得柑橘木虱chc序列，证实该昆虫存在网格蛋白内吞途径，且验证了网格蛋白内吞途径是clas病菌进入柑橘木虱中肠细胞的大门，抑制柑橘木虱内源的网格蛋白内吞途径，能够阻遏clas病菌进入其中肠。基于柑橘木虱内源的网格蛋白内吞途径可以作为抑制柑橘黄龙病扩散的重要靶点，提出干扰柑橘木虱的dschc溶液的配制方法或者使用网格蛋白抑制剂chlorpromazine(cpz)(selleck，50-53-3，usa)用于防治柑橘木虱导致的柑橘黄龙病，解决了现有技术在防治黄龙病时采用喷洒药剂来防治木虱而导致对生态环境和其他生物均有一定不良影响的技术问题，同时本发明提供一种在活体层面，利用了rnai干扰网格蛋白内吞途径的抑制剂，解决了由于研究材料局限而导致未对介体昆虫木虱进行clas的侵染机制进行研究的问题。
附图说明
17.图1为使用dschc溶液及其对照组dsgfp溶液柑橘木虱chc基因干扰效率及其获菌差异。
18.图2为使用网格蛋白抑制剂cpz及其对照组dmso溶液的柑橘木虱获菌差异。
具体实施方式
19.以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
20.本发明公开了一种柑橘木虱的柑橘黄龙病的防治方法，采用基于柑橘木虱网格蛋白内吞途径为靶点的方式进行防治。
21.进一步的，所述基于柑橘木虱网格蛋白内吞途径为靶点的方式具体为使用网格蛋白抑制剂chlorpromazine(cpz)(selleck，50-53-3，usa)。
22.进一步的，所述网格蛋白抑制剂的浓度为400μm。
23.进一步的，所述柑橘木虱网格蛋白的重链chc基因的分段扩增引物为chc-part1：
f:atgacacaaccattgccgatt；r:cttagcggcctccgaatatt；chc-part2：f:tcagtgccgtgtccaatc；r:ttggccggttcgtacatt；chc-part3：f:tctgcctacatggacgtggtc；r:caacgcgatcgtgtcgaaat；chc-part4：f:ctgattgacgaggaggactat；r:ttacattccatatcccgtctg。
24.进一步的，所述基于柑橘木虱网格蛋白内吞途径为靶点的方式具体为使用柑橘木虱chc基因的rnai干扰，所采用的干扰溶液为dschc溶液，所述dschc溶液的合成引物为t7-dschc，所述t7-dschc的基因序列为
25.f:taatacgactcactatagggtcggaaacccaagaccc
26.r:taatacgactcactatagggtcaatgagcacctggatgg
27.实施例1柑橘木虱内源的网格蛋白重链chc基因序列
28.s1-1：引物设计
29.由于柑橘木虱内源的网格蛋白重链chc基因序列较长，通过设计用于扩增全长的引物并未获得对应片段，因此，将所述柑橘木虱内源的网格蛋白重链chc全长拆分4段，分别通过primer premier 5.0软件设计扩增引物，且每一段的重叠序列长度超过500bp。所述柑橘木虱内源的网格蛋白重链chc全长分段扩增引物表见表1：
30.表1chc全长分段扩增引物表
[0031][0032]
s1-2：柑橘木虱rna的提取
[0033]
1)向含有柑橘木虱rna待提取的样品1.5μl rnase-free的离心管中加入150μl trizol试剂，利用电动研磨器对样品充分研磨；
[0034]
2)加入850μl trizol试剂，吸打混匀后室温静置10min；
[0035]
3)采用转速12000rpm/min，于4℃温度下，离心5min；
[0036]
4)将离心后的上清转移至新的离心管中，加入200μl的三氯甲烷，振荡15s后室温静置5min；
[0037]
5)离心15min后，吸取适量上清至新的离心管，加入等体积的异丙醇，充分混匀后置于-20℃静置过夜；
[0038]
6)离心5min后，弃上清；
[0039]
7)加入1000μl 75％乙醇(depc水稀释)，充分洗涤rna沉淀；4℃，7500rpm/min离心5min；
[0040]
8)弃上清，加入500μl 75％乙醇(depc水稀释)，充分洗涤rna沉淀；4℃，7500rpm/
min离心5min；
[0041]
9)弃上清，短暂离心以除尽残液，室温晾干10min。加入适量rnase-free水溶解rna，置于-80℃保存或者用于后续实验。
[0042]
s1-3：dna合成
[0043]
利用simgen cdna第一链合成试剂盒合成cdna，具体步骤如下：
[0044]
1)在无酶pcr管中配制gdna去除体系，见表2：
[0045]
表2gdna去除体系
[0046]
试剂名称体积(μl)5
×
gdnabuffer2totalrnatemplate(1μg)1rnase-freeddh2o7
[0047]
2)将上述反应体系混合均匀，离心后置于pcr仪中，42℃反应3min；
[0048]
3)在新的无酶pcr管中配制反转录体系，见表3：
[0049]
表3cdna反转录体系
[0050]
试剂名称体积(μl)5
×
rtbuffer4rtprimermix4rtenzymemix2
[0051]
4)向所述gdna去除体系中加入10μl所述反转录体系，吸打混匀，离心后置于pcr仪中，42℃反应15min，95℃反应3min；
[0052]
5)将合成后的cdna置于-20℃保存备用或者用于后续实验。
[0053]
s1-4：pcr分段扩增
[0054]
将2.5μl10
×
buffer、1.5μl dntp、0.5μl分段pcr上游引物、0.5μl分段pcr下游引物、0.2μl rtaq、17.8μl ddh2o和1μl木虱cdna充分混匀配制成pcr反应体系，放入pcr仪中进行扩增。扩增程序为：94℃预变性3min；94℃20s，退火20s(退火温度根据不同引物设置，见表1)，72℃，30s共34个循环；72℃再延伸5min。
[0055]
s1-5：pcr产物回收
[0056]
将pcr产物通过琼脂糖凝胶电泳f恒压120v，30min)后，使用胶回收试剂盒对目的条带进行回收。
[0057]
1)准备已经称好重量的无菌离心管，并且将目的条带置于离心管中次称重，两次称重结果相减得到胶条的质量；
[0058]
2)往离心管中加入3倍体积的buffer g(每0.1g凝胶加入0.3ml buffer g)，放于50℃水浴锅加速溶解；
[0059]
3)当回收的目的条带不在500bp-4kb之间，则加入与胶同样体积的异丙醇，混合均匀；相反，则省略步骤c；
[0060]
4)将混合液体加入到含有核酸纯化柱的离心管中，12000rpm离心30s；
[0061]
5)倒掉收集管中的过滤液，将核酸纯化柱放回离心管中，加入500μl buffer ws，离心30s；
[0062]
6)倒掉离心管中的过滤液，再将核酸纯化柱放回离心管中，加入700μl buffer wg
(确定已经加入适量的无水乙醇)，盖上离心管的管盖，离心30s；
[0063]
7)重复1次步骤f；
[0064]
8)倒掉过滤液，14000rpm离心1min，若离心机最高转速达不到14000rpm，则用离心机最高转速离心2min；
[0065]
9)丢弃离心管，将核酸纯化柱放置于新的试剂盒自带离心管中，往纯化柱膜的中央部位加入15-20μl buffer te，室温静置1min后离心30min。
[0066]
10)丢弃纯化柱后，获得的胶回收产物可用于后续实验或者放于-20℃备用。
[0067]
s1-6：胶回收产物连接pmd19-t载体
[0068]
根据以下反应体系进行连接，连接条件：4℃，过夜。
[0069]
表4pmd19-t连接体系
[0070]
组分体积(μl)目的基因片段(胶回收)4.5pmd19-t0.5solutioni5总体积10
[0071]
s1-7：转化
[0072]
1)将保存于-80℃的trans5α感受态置于冰上融化；
[0073]
2)待感受态细胞融化后，加入5μl连接产物，置于冰上30min；
[0074]
3)将感受态细胞置于已为42℃的水浴锅中热激45s，后快速取出在冰上放置2min；
[0075]
4)往感受态细胞中加入500μl不含任何抗生素的lb液体培养基，放置于37℃摇床中培养，180r/min；
[0076]
5)培养1h后，吸取100μl菌液于lb固体培养基中(培养基：amp：iptg：x-gal：培养＝1000：1：2：1)，利用涂布棒将菌液均匀涂布；
[0077]
6)将已经涂布菌液的平板放于37℃培养箱中，过夜培养；
[0078]
7)待平板上长出蓝白斑即可用于后续实验。
[0079]
s1-8：pcr产物测序与序列拼接
[0080]
挑取平板的白斑至含有1ml lb培养基(含氨苄抗生素)的1.5ml离心管中，将离心管放置于摇床中扩摇4h。以2μl的菌液为模板，配制pcr体系，根据pcr程序扩增，pcr体系和程序与3.3.1.2一致。将pcr产物进行电泳，阳性菌液送测序。将4段引物扩增的dna片段进行重叠拼接，得到chc的开放阅读框orf。
[0081]
chc基因的开放阅读框长度为5064bp，编码1687个氨基酸。预测蛋白大小为192.3kda，等电点为5.41。同时，该基因具有7个网格蛋白重链重复同源结构域。验证了柑橘木虱存在网格蛋白内吞途径。
[0082]
实施例2柑橘木虱chc的rnai干扰
[0083]
s2-1：柑橘木虱chc基因的dsrna片段扩增
[0084]
利用primer premier 5.0设计引物，引物信息见表5：
[0085]
表5chc的dsrna合成引物
[0086][0087]
注：下划线加斜体序列为t7启动子序列。反应体系和pcr程序同实施例1中的步骤s1-4与s1-5。
[0088]
s2-2体外合成dsrna
[0089]
将得到的chc片段使用promega t7ribomax express rnai system试剂盒合成dsrna，具体步骤根据说明书进行操作。
[0090]
a.根据下列体系配置合成dsrna的体系
[0091]
表6dsrna的合成体系
[0092]
试剂体积(总20μl)ribomaxexpresst72
×
buffer10μl质粒模板(1μg)xnuclease-freewater10-x
[0093]
吸打混匀后，置于pcr仪器反应4-5h，温度为37℃
[0094]
1)反应结束后，将体系全部吸取至1.5ml dnase/rnase-free的离心管中，水浴10min，温度为70℃；
[0095]
2)关闭水浴锅，将温度自然降至37℃以下；
[0096]
3)往离心管中加入1μl rnase-free dnase和1μl rnase a solution(无酶水稀释200倍)，吸打混匀后水浴30min，温度为37℃。
[0097]
4)水浴结束后，加入22μl的异丙醇和2.2μl3m的乙酸钠(试剂盒自带)，吸打混匀后，冰上静置5min；在4℃条件下，12000rpm离心5min；
[0098]
5)去上清，加入1000μl70％depc乙醇，7500rpm离心5min；
[0099]
6)重复步骤f一次，乙醇体积改为500μl；
[0100]
7)去上清，短暂离心后吸尽残液，放于超净工作台吹干15min；
[0101]
8)加入30-50μl depc water使得dsrna溶解，得到干扰溶液dschc溶液，将样品置于-80℃或者用于后续rna i干扰实验。
[0102]
对照组利用t7ribomaxtm express rnai system试剂盒合成dsgfp片段(实验室自留)，然后用无rna酶的ddh2o稀释dsrna至工作浓度，用于后续实验。
[0103]
s2-3柑橘木虱显微注射
[0104]
将五龄柑橘木虱若虫背部粘于便签纸上，腹部朝上；通过拉针仪(narishige，pc-100，japan)使玻璃管(wpi，504949，usa)产生尖端。
[0105]
利用显微注射仪将15nl所述dschc溶液(浓度为2000ng/ul)和所述dsgfp(浓度为2000ng/ul，对照组)注射于柑橘木虱体内，速度为15nl/s，注射后将木虱置于健康枝条上饲养，24小时后收取样本。
[0106]
s2-4qrt-pcr检测chc的干扰效率
[0107]
1)将样本研磨后提取rna并转录生成cdna。具体流程同1.2和1.3.
[0108]
2)根据在线软件oligoarchitect(http://www.oligoarchitect.com/loginservlet)设计网格蛋白chc的荧光定量qrt-pcr引物，将引物用于扩增，检测引物特异性。将qpcr产物进行测序，使用原扩增序列进行序列比对，确证qrt-pcr靶向性扩增。引物序列见表7。
[0109]
表7chc荧光定量引物
[0110]
引物名称引物序列qdcchc-faagtatcacgagcagttgqdcchc-rcaatagaaccgaggaagtaa
[0111]
3)实时荧光定量qrt-pcr检测chc的表达量
[0112]
通过qrt-pcr检测基因相对表达量。以gapdh为内参基因，生物学重复3个，技术学重复3个，采用sybr染料法进行rt-qpcr，具体步骤参照说明书。qpcr反应体系：cdna模板1μl、(10μm)上游引物0.25μl、(10μm)下游引物0.25μl、sybr mix 5μl，加水补足10μl即可。qpcr程序：95℃30s，1个循环；95℃10s，60℃20s，72℃20s，共40个循环；95℃10s，65℃60s，97℃1s，1个循环；37℃30s，1个循环。通过spss软件分析qrt-pcr定量数据。clas侵染柑橘木虱后dcchc表达情况检测实验采用student’t-test(*＝p＜0.05，**＝p＜0.01)对结果进行差异显著性分析
[0113]
s2-5clas绝对定量qrt-pcr
[0114]
将包含clas片段的重组质粒(实验室自留)浓度稀释10-1
、10-2
、10-3
、10-4
、10-5
倍，以稀释质粒为模板，配制反应体系。
[0115]
表8绝对定量反应体系
[0116]
组分体积(μl)itaquniversalprobessupenmx(2
×
)5f0.3r0.3probe0.2dna1h2o3.2总体积10
[0117]
根据反应程序进行绝对定量pcr。程序为：95℃预变性30s；95℃变性15s，60℃退火/延伸60s，共40个循环；
[0118]
以1g
10
(拷贝数)为x轴，ct值为y轴，制作标准曲线。拷贝数＝[核酸浓度(ng/μl)
×
10-9
×
6.02
×
10
23
]/(碱基数
×
660)。
[0119]
s2-6绝对定量检测枝条和柑橘木虱中clas含量
[0120]
再次注射5龄若虫24h后，将注射后的若虫随机分为两份，一份虫体取食健康的甜橙枝条，一份取食利用rt-pcr检病验证感病的甜橙枝条。
[0121]
甜橙带叶嫩梢首先通过ctab法提取叶片dna，利用核酸测定仪测定dna纯度，后使用cqu04f/r引物对通过绝对定量qrt-pcr以验证枝条带菌(流程同s2-5)。
[0122]
采用s2-3所述的dschc溶液干扰24h后，将木虱分别放于检测为阳性感病枝条获取clas，枝条置于500
×
改良型霍格兰营养液(coolaber，ns10205，china)中培养。在获菌24h和48h时，利用解剖镊子(fst，11251-20，switzerland)解剖木虱中肠和头部。
[0123]
使用动物提取试剂盒(foregene，tp-01111，china)提取木虱中肠、头部以及剩余组织的dna，通过绝对定量pcr检测木虱不同组织检测clas的含量(绝对定量流程同s2-5)。
[0124]
请参阅附图1，附图1中(a)为注射dsrna片段24小时后的chc的基因表达水平。(b)基于绝对定量qrt-pcr检测成功干扰后24和48小时后的虫体获菌的水平；dschc：网格蛋白重链chc基因的dsrna片段；dsgfp：绿色荧光蛋白基因的dsrna片段；midgut：中肠，head：头，body：剩余残体；copy number(individual)：基于绝对定量qrt-pcr检测的clas病菌的拷贝数量/每个个体。*：p《0.05；**：p《0.01；基于student-t检验分析。结果显示，网格蛋白重链chc基因的rnai干扰可以下调网格蛋白内吞能力。利用rnai干扰后的柑橘木虱取食带菌柑橘枝条，鉴定了；利用所述干扰溶液dschc溶液实现下调柑橘木虱的网格蛋白内吞能力，从而降低黄龙病菌clas进入柑橘木虱肠中，验证了所述干扰溶液dschc溶液可以有效抑制柑橘木虱的网格蛋白内吞途径，实现黄龙病有效防治的效果。
[0125]
实施例3网格蛋白抑制剂chlorpromazine(cpz)的效果验证
[0126]
利用显微注射仪将网格蛋白抑制剂chlorpromazine(cpz)(selleck，50-53-3，usa)(浓度为400μm，对照组为0.255％的dmso)注射于木虱体内，速度为15nl/s，注射后将木虱置于健康九里香枝条上饲养24h。为了观察所述网格蛋白抑制剂是否注射进入木虱体内，在cpz溶液中加入食用亮红。
[0127]
所述网格蛋白抑制剂cpz处理24h后，将木虱分别放于检测为阳性感病枝条获取clas，枝条置于500
×
改良型霍格兰营养液(coolaber，ns10205，china)中培养。在获菌24h和48h时，利用解剖镊子(fst，11251-20，switzerland)解剖木虱中肠和头部。使用动物提取试剂盒(foregene，tp-01111，china)提取木虱中肠、头部以及剩余组织的dna，通过绝对定量pcr检测木虱不同组织检测clas的含量(绝对定量流程同s2-5)。
[0128]
请参阅附图2，附图2中(a)和(b)基于抑制剂处理后24和48小时后，绝对定量qrt-pcr检测clas病菌含量检测。dmso：0.255％的dmso；cpz：网格蛋白抑制剂。midgut：中肠，head：头，body：剩余残体；copy number(individual)：基于绝对定量qrt-pcr检测的clas病菌的拷贝数量/每个个体。*：p《0.05，基于student-t检验分析。结果显示，可以通过采用网格蛋白抑制剂cpz，用于阻遏黄龙病菌clas进入柑橘木虱体内。
[0129]
以上实施例公开了柑橘木虱网格蛋白重链chc基因序列的扩增方法及扩增结果，同时验证了使用干扰溶液dschc溶液和网格蛋白抑制剂cpz可以组织黄龙病菌clas进入柑橘木虱体内，从而具有防治柑橘黄龙病的效果。

技术特征：
1.一种柑橘木虱的柑橘黄龙病的防治方法，其特征在于，柑橘木虱的柑橘黄龙病的防治方法采用基于柑橘木虱网格蛋白内吞途径为靶点的方式进行防治。2.如权利要求1所述的柑橘木虱的柑橘黄龙病的防治方法，其特征在于，所述基于柑橘木虱网格蛋白内吞途径为靶点的方式具体为使用网格蛋白抑制剂chlorpromazine(cpz)(selleck，50-53-3，usa)。3.如权利要求2所述的柑橘木虱的柑橘黄龙病的防治方法，其特征在于，所述网格蛋白抑制剂的浓度为400μm。4.如权利要求1所述的柑橘木虱的柑橘黄龙病的防治方法，其特征在于，所述柑橘木虱网格蛋白的重链chc基因的分段扩增引物为chc-part1：f:atgacacaaccattgccgatt；r:cttagcggcctccgaatatt；chc-part2：f:tcagtgccgtgtccaatc；r:ttggccggttcgtacatt；chc-part3：f:tctgcctacatggacgtggtc；r:caacgcgatcgtgtcgaaat；chc-part4：f:ctgattgacgaggaggactat；r:ttacattccatatcccgtctg。5.如权利要求1所述的柑橘木虱的柑橘黄龙病的防治方法，其特征在于，所述基于柑橘木虱网格蛋白内吞途径为靶点的方式具体为使用柑橘木虱chc基因的rnai干扰，所采用的干扰溶液为dschc溶液，所述dschc溶液的合成引物为t7-dschc，所述t7-dschc的基因序列为f:taatacgactcactatagggtcggaaacccaagaccc；r:taatacgactcactatagggtcaatgagcacctggatgg。

技术总结
本发明扩增获得柑橘木虱Chc序列，证实该昆虫存在网格蛋白内吞途径，且验证了网格蛋白内吞途径是CLas病菌进入柑橘木虱中肠细胞的大门，抑制柑橘木虱内源的网格蛋白内吞途径，能够阻遏CLas病菌进入其中肠。基于柑橘木虱内源的网格蛋白内吞途径可以作为抑制柑橘黄龙病扩散的重要靶点，提出干扰柑橘木虱的dsChc溶液的配制方法或者使用网格蛋白抑制剂Chlorpromazine(CPZ)，用于防治柑橘木虱导致的柑橘黄龙病，解决了现有技术在防治黄龙病时采用喷洒药剂来防治木虱而导致对生态环境和其他生物均有一定不良影响的技术问题。其他生物均有一定不良影响的技术问题。其他生物均有一定不良影响的技术问题。


技术研发人员：陈玮 廖远 陈龙南 谢廉颉 吴梦洁 郭骞 钟鸿婧 钟欣 任鑫 许瑞俊 卢占军
受保护的技术使用者：赣南师范大学
技术研发日：2023.05.06
技术公布日：2023/8/4