用于减少抗体纯化过程中的宿主细胞蛋白质含量的方法和具有减少的宿主细胞蛋白质含量的抗体组合物与流程

用于减少抗体纯化过程中的宿主细胞蛋白质含量的方法和具有减少的宿主细胞蛋白质含量的抗体组合物
1.本发明涉及重组蛋白制造领域。更具体地，本发明提供了在意图用于施用于患者的蛋白质例如治疗性或诊断性抗体或其抗原结合片段的制造过程中，用于减少在宿主细胞中重组产生的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法。可以执行所公开的方法，以便产生具有减少的宿主细胞蛋白质含量的抗体组合物。
2.宿主细胞蛋白质(hcp)是宿主细胞的蛋白质，其涉及细胞维持和生长、以及蛋白质合成和加工。然而，在治疗性或诊断性蛋白质领域，hcp的存在通过引发关注例如聚集、经由催化活性和/或免疫原性的产物碎片化，对产品质量和患者安全造成威胁。因此，hcp被鉴定为蛋白质制剂的关键质量属性(cqa)。不需要的聚集物的形成和产物碎片化需要另外的纯化步骤，以减少/去除hcp，并且这些另外的纯化步骤经常导致所需蛋白质的产率降低和总体制造成本增加。
3.消除来自制造过程的hcp的挑战以及改进过程以减少hcp的尝试已得到公开，例如如gilgunn等人；goey等人，biotechnology advances 36(2018)1223-1237；以及current opinion in chemical engineering 2018，22：98-106中所述。然而，去除hcp的这些过程具有局限性。例如，在一些情况下，这些公开证实了以下中的一种或多种：hcp的不完全去除，hcp去除过程中的不一致导致聚集，所需蛋白质和hcp的共纯化，产物功能受损，患者中的免疫原性关注和/或降低的药代动力学性质例如半衰期。此外，开发用于去除hcp的过程经常需要应对增加的体积和另外的纯化步骤，经常导致制造成本的增加和产率的减少。在一些情况下，该方法的适用性限于特定分子和/或形式。像这样，仍然需要在治疗性或诊断性蛋白质的纯化过程中减少hcp的替代方法。此类替代方法优选减少hcp而不影响产物稳定性、产率或最终维持产物质量的成本，并且顺应大规模制造并确保患者安全。
4.相应地，本发明通过提供减少治疗性或诊断性抗体或其抗原结合片段的制剂中的hcp的替代方法，解决了上述问题中的一个或多个。本发明的方法提供了可重现的方法，其在去除hcp方面高度有效，同时保存抗体稳定性、减少聚集、维持产物产率并且具有降低免疫原性风险的潜力。此类方法可以有效地去除hcp，而无需增加抗体制剂体积。令人惊讶的是，本发明的方法实现的hcp计数远低于＜100ppm的行业可接受标准。令人惊讶的是，本发明的其它实施方案实现了＜50ppm的hcp计数，同时保存蛋白质稳定性、减少聚集并维持产物产率。更令人惊讶的是，本发明的其它实施方案实现了＜20ppm、＜10ppm、＜5ppm、＜1ppm或～0ppm的hcp计数，同时保存蛋白质稳定性、减少聚集并维持产物产率。此外，本发明的实施方案提供了顺应广泛范围的分子的hcp去除方法。本发明的其它实施方案使得能够消除另外的纯化步骤，导致批处理时间的减少和降低的制造成本。可以执行所公开的方法，以便产生具有减少的宿主细胞含量的抗体组合物，其中所述抗体组合物的宿主细胞含量小于＜100pprn、＜50ppm、＜10ppm、＜5ppm、＜1ppm或～0ppm。
5.相应地，提供了减少抗n3pglu aβ抗体(“抗n3pg抗体”)制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法。在一些实施方案中，抗n3pg抗体在哺乳动物宿主细胞例如中国仓鼠卵巢细胞宿主细胞中重组产生。
6.相应地，在特定的实施方案中，提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在宿主细胞中重组产生的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，将洗脱物的ph升高到约ph 5.0或更高(例如，约ph 6.0或更高、或约ph 7.0或更高)，使包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗n3pglu aβ抗体的过滤的蛋白质制剂。在一些实施方案中，来自将ph升高到约ph 5.0或更高的步骤的洗脱物的离子强度是约10mm至约45mm。优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约50ppm、小于约20ppm、小于约10ppm、小于约5ppm、或小于约1ppm。
7.相应地，在特定的实施方案中，提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在宿主细胞中重组产生的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，执行病毒灭活，将洗脱物的ph升高到约ph 5.0或更高(例如，约ph 6.0或更高、或约ph 7.0或更高)，使包含蛋白质的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗n3pglu aβ抗体的过滤的蛋白质制剂。在一些实施方案中，来自将ph升高到约ph 5.0或更高的步骤的洗脱物的离子强度是约10mm至约45mm。优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约50ppm、小于约20ppm、小于约10ppm、小于约5ppm、或小于约1ppm。
8.相应地，在特定的实施方案中，提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，其中弱酸是乙酸且强酸是磷酸或乳酸，将来自从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体的所述步骤的包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物的ph调整到低于约ph 4.0，并且其中将洗脱物维持在低于约ph 4.0，持续约0分钟至约180分钟，将洗脱物的ph升高到约ph 5.0或更高(例如，约ph 6.0或更高、或约ph 7.0或更高)，使包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗n3pglu aβ抗体的过滤的蛋白质制剂。在一些实施方案中，来自将ph升高到约ph 5.0或更高的步骤的洗脱物的离子强度是约10mm至约45mm。优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约50ppm、小于约20ppm、小于约10ppm、小于约5ppm、或小于约1ppm。
9.在本发明的一些实施方案中，本公开提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，其中弱酸是乙酸且强酸是磷酸，其中乙酸的浓度为约20mm，并且其中磷酸的浓度为约5mm至约10mm，将来自从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体的所述步骤的包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物的ph调整到低于
约ph 4.0，并且其中将洗脱物维持在低于约ph 4.0，持续约0分钟至约180分钟，将洗脱物的ph升高到约ph 5.0或更高(例如，约ph 6.0或更高、或约ph 7.0或更高)，使包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗n3pglu aβ抗体的过滤的蛋白质制剂。在一些实施方案中，来自将ph升高到约ph 5.0或更高的步骤的洗脱物的离子强度是约10mm至约45mm。优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约50ppm、小于约20ppm、小于约10ppm、小于约5ppm、或小于约1ppm。
10.在本发明的一些实施方案中，本公开提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，其中弱酸是乙酸且强酸是乳酸，其中乙酸的浓度为约20mm，并且其中乳酸的浓度为约5mm，将来自从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体的所述步骤的包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物的ph调整到低于约ph 4.0，并且其中将洗脱物维持在低于约ph 4.0，持续约0分钟至约180分钟，将洗脱物的ph升高到约ph 5.0或更高(例如，约ph 6.0或更高、或约ph 7.0或更高)，使包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗n3pglu aβ抗体的过滤的蛋白质制剂。在一些实施方案中，来自将ph升高到约ph 5.0或更高的步骤的洗脱物的离子强度是约10mm至约45mm。优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约50ppm、小于约20ppm、小于约10ppm、小于约5ppm、或小于约1ppm。
11.在一些实施方案中，本公开提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，其中弱酸是乙酸且强酸是磷酸或乳酸，调整来自从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体的所述步骤的包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物的ph，其中调整洗脱物的ph的所述步骤包括将约20mm hcl加入洗脱物中，其中将洗脱物的ph调整到约ph 3.3至约ph 3.7，并且其中将洗脱物维持在约ph 3.3至约ph 3.7下约0分钟至约180分钟，将洗脱物的ph升高到约ph 5.0或更高(例如，约ph 6.0或更高、或约ph 7.0或更高)，使包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗n3pglu aβ抗体的过滤的蛋白质制剂。在一些实施方案中，来自将ph升高到约ph 5.0或更高的步骤的洗脱物的离子强度是约10mm至约45mm。优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约10ppm、小于约5ppm、或小于约1ppm。
12.在一些实施方案中，本公开提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，其中弱酸是乙酸且强酸是磷酸或乳酸，调整来自从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体的所述步骤的包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物的ph，其中调整洗脱物的ph的所述步骤包括将约20mm hcl加入洗脱物中，其中将洗脱
物的ph调整到约ph 3.5，并且其中将洗脱物维持在约ph 3.5下约0分钟至约180分钟，将洗脱物的ph升高到约ph 5.0或更高(例如，约ph 6.0或更高、或约ph 7.0或更高)，使包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗n3pglu aβ抗体的过滤的蛋白质制剂。在一些实施方案中，来自将ph升高到约ph 5.0或更高的步骤的洗脱物的离子强度是约10mm至约45mm。优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约10ppm、小于约5ppm、或小于约1ppm。
13.在一些特定的实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，其中弱酸是乙酸且强酸是磷酸或乳酸，将来自从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体的所述步骤的包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物的ph调整到低于约ph 4.0，并且其中将洗脱物维持在低于约ph 4.0，持续约0分钟至约180分钟，将洗脱物的ph升高到约ph 5.0至约ph 7.5包括将约250mm tris缓冲液加入洗脱物中，并且使包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗n3pglu aβ抗体的过滤的蛋白质制剂。在一些实施方案中，将洗脱物的ph升高到约ph 5.0至约ph 7.5包括将约100mm至约1000mm tris缓冲液加入洗脱物中。在一些实施方案中，来自将ph升高到高于约ph 5.0至约ph 7.5的步骤的洗脱物的离子强度是约10mm至约45mm。优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约10ppm、小于约5ppm、或小于约1ppm。
14.在一些实施方案中，本公开提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，其中弱酸是乙酸且强酸是磷酸或乳酸，将来自从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体的所述步骤的包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物的ph调整到低于约ph 4.0，并且其中将洗脱物维持在低于约ph 4.0，持续约0分钟至约180分钟，将洗脱物的ph升高到约ph 7.0包括将约250mm tris缓冲液加入洗脱物中，使包含抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得过滤的抗体制剂。在一些实施方案中，将洗脱物的ph升高到约ph 6.5至约ph 7.5(例如，约ph 7.0)包括将约100mm至约1000mm tris缓冲液加入洗脱物中。在一些实施方案中，来自将ph升高到约ph 6.5至约ph 7.5(例如，约ph 7.0)的步骤的洗脱物的离子强度是约10mm至约45mm。优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约10ppm、小于约5ppm、或小于约1ppm。
15.在一些实施方案中，本公开提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，其中弱酸是乙酸且强酸是磷酸或乳酸，将来自从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体的所述步骤的包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱
物的ph调整到低于约ph 4.0，并且其中将洗脱物维持在低于约ph 4.0，持续约0分钟至约180分钟，将洗脱物的ph升高到约ph 5.0或更高(例如，约ph 6.0或更高、或约ph 7.0或更高)，使包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗n3pglu aβ抗体的过滤的蛋白质制剂，其中经深层过滤器处理的洗脱物具有约10mm至约45mm的离子强度。优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约10ppm、小于约5ppm、或小于约1ppm。
16.在特定的实施方案中，本公开提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，其中弱酸是乙酸且强酸是磷酸或乳酸，将来自从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体的所述步骤的包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物的ph调整到低于约ph 4.0，并且其中将洗脱物维持在低于约ph 4.0，持续约0分钟至约180分钟，并且其中实现了病毒灭活。
17.本公开提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，其中弱酸包含浓度为约20mm的乙酸，并且其中强酸由磷酸、甲酸或乳酸中的任何一种构成，并且其中强酸的浓度为约5mm至约10mm，调整来自从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体的所述步骤的包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物的ph，其中调整洗脱物的ph的所述步骤包括将hcl、磷酸、柠檬酸、乙酸中的任何一种或其组合(例如，乙酸加上磷酸的组合或乙酸和柠檬酸的组合)加入洗脱物中，其中将ph调整到低于约ph 4.0，并且其中将洗脱物维持在低于约ph 4.0，持续约0分钟至约180分钟，将洗脱物的ph升高到约ph 5.0至约ph 7.5，使包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗n3pglu aβ抗体的过滤的蛋白质制剂。在一些实施方案中，来自将ph升高到约ph 5.0至约7.5的步骤的洗脱物的离子强度是约10mm至约45mm。
18.优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约10ppm、小于约5ppm或小于约1ppm。
19.在进一步的实施方案中，洗脱步骤包含洗脱缓冲液，其由乙酸和磷酸、乙酸和乳酸、或乙酸和甲酸中的任何一种的组合构成，并且其中将ph调整到低于约ph 4.0的步骤包括添加hcl、磷酸、柠檬酸、乙酸中的任何一种或其组合(例如，乙酸加上磷酸的组合或乙酸和柠檬酸的组合)。在进一步的实施方案中，洗脱步骤包含洗脱缓冲液，其包含约20mm乙酸和约10mm磷酸、约20mm乙酸和约5mm磷酸、或约20mm乙酸和约5mm甲酸中的任何一种的组合，并且其中将ph调整到低于约ph 4.0的步骤包括添加约20mm hcl、约15mm至约200mm磷酸、约1000mm柠檬酸、或约20mm乙酸和约10mm磷酸的组合中的任一种。在此类实施方案中，来自将ph升高到高于约6.0的ph的步骤的洗脱物的离子强度是约10mm至约45mm。
20.在本发明的一个方面，本发明提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括以下步骤：
21.使在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂经亲和层析柱处理；
22.用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体；其中弱酸是乙酸且强酸是磷酸或乳酸；
23.将来自从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体的所述步骤的包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物的ph调整到低于约ph 4.0，并且其中将洗脱物维持在低于约ph 4.0，持续约0分钟至约180分钟；
24.将洗脱物的ph升高到约ph 5.0或更高(例如，约ph 6.0或更高、或约ph 7.0或更高)；
25.使包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物经深层过滤器处理，和
26.获得包含抗n3pglu aβ抗体的过滤的蛋白质制剂。
27.优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约10ppm、小于约5ppm或小于约1ppm。
28.在本发明的一个进一步的实施方案中，提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，该方法包括以下步骤：
29.a)使蛋白质制剂经亲和层析柱处理；
30.b)从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，以获得包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物；
31.c)必要时，将洗脱物的ph调整到ph 5.0至ph 7.5，使洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗n3pglu aβ抗体的过滤的蛋白质制剂，其中所述深层过滤器是完全合成的深层过滤器。
32.优选地，层析柱包含蛋白a、蛋白g或蛋白l亲和层析柱。进一步优选地，深层过滤器孔径为至少约9μ(微米)至约0.1μ。另外进一步优选地，深层过滤器孔径为至少约2μ至约0.1μ。另外进一步优选地，深层过滤器孔径为约0.1μ。另外进一步优选地，深层过滤器是x0sp过滤器。在本发明的一个替代实施方案中，深层过滤器上的洗脱物的ph为约5.0。在本发明的一个进一步的替代实施方案中，深层过滤器上的洗脱物的ph为约6.0。在本发明的一个进一步的替代实施方案中，深层过滤器上的洗脱物的ph为约7.0。
33.该特定实施方案涵盖了其中用任何常用的弱酸或强酸，从亲和层析柱中洗脱抗n3pg抗体的方法，所述弱酸或强酸包括但不限于乙酸、柠檬酸、磷酸、盐酸、甲酸和乳酸。
34.已发现了，当与更传统的基于纤维素/硅藻土的过滤器相比时，在过滤器上的溶液的ph为5.0至7.0下使用完全合成的过滤器在减少和/或去除hcp方面是相当有效的。
35.可以执行所公开的方法，以便减少包含抗n3pglu aβ抗体或其抗原结合片段的制剂中的宿主细胞蛋白质(hcp)，以便获得具有减少的hcp含量的抗体组合物。在一些实施方案中，抗n3pglu aβ抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异性抗体或抗体片段。在一些实施方案中，抗n3pglu aβ抗体是igg1抗体或含有igg1抗体的fc部分。本文公开了一种抗sars-cov-2抗体。
36.在所公开的方法和所公开的方法产生的组合物的一些实施方案中，抗n3pg抗体是多奈单抗。在一些实施方案中，抗n3pg抗体包含轻链可变区(lh)，其包含存在于divmtqtpl
slsvtpgqpasisckssqsllysrgktylnwllqkpgqspqlliyavskldsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycvqgthypftfgqgtkleik(seq id no：13)的氨基酸序列中的lh互补决定区1(lcdr1)、lcdr2和lcdr3；并且抗n3pg抗体包含重链可变区(vh)，其包含存在于氨基酸序列qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgydftryyinwvrqapgqglewmgwinpgsgntkynekfkgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycaregitvywgqgttvtvss(seq id no：14)中的vh互补决定区1(hcdr1)、hcdr2和hcdr3。
37.在一些实施方案中，抗n3pg抗体包含kssqsllysrgktyln(seq id no：17)的lcdr1、avsklds(seq id no：18)的lcdr2、vqgthypft(seq id no：19)的lcdr3、gydftryyin(seq id no：20)的hcdr1、winpgsgntkynekfkg(seq id no：21)的hcdr2和egitvy(seq id no：22)的hcdr3。
38.在一些实施方案中，抗n3pg抗体包含：包含divmtqtplslsvtpgqpasisckssqsllysrgktylnwllqkpgqspqlliyavskldsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycvqgthypftfgqgtkleik(seq id no：13)的氨基酸序列的可变轻链(lc)，以及包含qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgydftryyinwvrqapgqglewmgwinpgsgntkynekfkgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycaregitvywgqgttvtvs s(seq id no：14)的氨基酸序列的可变重链(hc)。
39.在一些实施方案中，抗n3pg抗体包含由divmtqtplslsvtpgqpasisckssqsllysrgktylnwllqkpgqspqlliyavskldsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycvqgthypftfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seq id no：15)的氨基酸序列构成的轻链(lc)，以及由qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgydftryyinwvrqapgqglewmgwinpgsgntkynekfkgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycaregitvywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seq id no：16)的氨基酸序列构成的重链(hc)。
40.在一些实施方案中，抗n3pg抗体包含：包含由gatattgtgatgactcagactccactctccctgtccgtcacccctggacagccggcctccatctcctgcaagtcaagtcagagcctcttatatagtcgcggaaaaacctatttgaattggctcctgcagaagccaggccaatctccacagctcctaatttatgcggtgtctaaactggactctggggtcccagacagattcagcggcagtgggtcaggcacagatttcacactgaaaatcagcagggtggaggccgaagatgttggggtttattactgcgtgcaaggtacacattacccattcacgtttggccaagggaccaagctggagatcaaacgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgc(seq id no：33)的dna序列编码的氨基酸序列的轻链(lc)，以及包含由caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctgggtcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggttacgacttcactagatactatataaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggattaatcctggaagcggtaatactaagtacaatgagaaattcaagggcagagtcaccattaccgcggacgaatcca
cgagcacagcctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgagagaaggcatcacggtctactggggccaagggaccacggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttcccgctagcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggacgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgccccccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggt(seq id no：34)的dna序列编码的氨基酸序列的重链(hc)。
41.在所公开的方法和通过所公开的方法产生的组合物的一些实施方案中，抗n3pg抗体是美国专利号10，647，759中被称为“抗体201c”的抗体，所述美国专利的内容通过引用以其整体并入本文。在一些实施方案中，抗n3pg抗体包含轻链可变区(lh)，其包含存在于diqmtqspstlsasvgdrvtitcrasqslgnwlawyqqkpgkapklliyqastlesgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycqhykgsfwtfgqgtkveik(seq id no：23)的氨基酸序列中的lh互补决定区1(lcdr1)、lcdr2和lcdr3；并且抗n3pg抗体包含重链可变区(vh)，其包含存在于evqllesggglvqpggslrlscaasgftfssypmswvrqapgkglewvsaisgsggstyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycareggsgsyyngfdywgqgtlvtvss(seq id no：24)的氨基酸序列中的vh互补决定区1(hcdr1)、hcdr2和hcdr3。
42.在一些实施方案中，抗n3pg抗体包含rasqslgnwla(seq id no：27)的lcdr1、yqastles(seq id no：28)的lcdr2、qhykgsfwt(seq id no：29)的lcdr3、aasgftfssypms(seq id no：30)的hcdr1、aisgsggstyyadsvkg(seq id no：31)的hcdr2和areggsgsyyngfdy(seq id no：32)的hcdr3。
43.在一些实施方案中，抗n3pg抗体包含由diqmtqspstlsasvgdrvtitcrasqslgnwlawyqqkpgkapklliyqastlesgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycqhykgsfwtfgqgtkveik(seq id no：23)的氨基酸序列构成的可变轻链(vl)，以及由evqllesggglvqpggslrlscaasgftfssypmswvrqapgkglewvsaisgsggstyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycareggsgsyyngfdywgqgtlvtvss(seq id no：24)的氨基酸序列构成的可变重链(vh)。
44.在一些实施方案中，抗n3pg抗体包含由diqmtqspstlsasvgdrvtitcrasqslgnwlawyqqkpgkapklliyqastlesgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycqhykgsfwtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seq id no：25)的氨基酸序列构成的轻链(lc)，以及由evqllesggglvqpggslrlscaasgftfssypmswvrqapgkglewvsaisgsggstyyadsvkgrftisrdnsknt
lylqmnslraedtavyycareggsgsyyngfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seq id no：26)的氨基酸序列构成的重链(hc)。
45.在一些实施方案中，抗n3pg抗体包含：包含由gacatccagatgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggccagtcagagtcttggtaactggttggcctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctatcaggcgtctactttagaatctggggtcccatcaagattcagcggcagtggatctgggacagagttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttattactgccaacattataaaggttctttttggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaacggaccgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgc(seq id no：35)的dna序列编码的氨基酸序列的轻链(lc)，以及包含由gaggtgcagctgttggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagcagctatcctatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcagctattagtggtagtggtggtagcacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgagagaggggggctcagggagttattataacggctttgattattggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttcccgctagcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggacgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgccccccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggt(seq id no：36)的dna序列编码的氨基酸序列的重链(hc)。
46.在本发明的另一个方面，本发明提供了减少在宿主细胞中重组产生的抗n3pg抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括以下步骤：
47.使在宿主细胞中重组产生的抗n3pg抗体制剂经亲和层析柱处理，例如蛋白a亲和层析柱；
48.用包含乙酸和磷酸的组合或乙酸和乳酸的组合的缓冲液洗脱抗n3pg抗体；
49.通过添加约20mm hcl来调整包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph，其中将ph调整到约ph 3.3至约ph 3.7，并且其中将洗脱物维持在约ph 3.3至约ph 3.7下约0分钟至约180分钟；
50.通过添加约250mm tris缓冲液来升高包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph，其中将ph升高到约ph 5.0至约ph 7.5；
51.使包含抗n3pg抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得过滤的抗n3pg抗体制剂，
52.其中在深层过滤后的抗n3pg抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm，并且其中所述抗n3pg抗体是igg1抗体。
53.在本发明的一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的抗n3pg抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在宿主细胞中重组产生的抗n3pg抗体制剂经受蛋白a层析柱，用包含约20mm乙酸和约5mm磷酸的组合的缓冲液、或包含约20mm乙酸和约10mm磷酸的组合的缓冲液、或包含约20mm乙酸和约5mm乳酸的组合的缓冲液，从层析柱中洗脱抗n3pg抗体，通过添加约20mm hcl来调整包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph，其中将ph降低到约ph 3.3至约ph 3.7，并且其中将洗脱物维持在约ph 3.3至约ph 3.7下约0分钟至约180分钟，通过添加约250mm tris缓冲液来升高包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph，其中将ph升高到约ph 5.0至约ph 7.5，使包含抗n3pg抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得过滤的抗n3pg抗体制剂，其中在过滤的抗n3pg抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm，并且其中所述抗n3pg抗体是igg1抗体。在一些实施方案中，将洗脱物的ph升高到约ph 5.0至约ph 7.5包括将约100mm至约1000mm tris缓冲液加入洗脱物中。
54.在本发明的一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的抗n3pg抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在宿主细胞中重组产生的抗n3pg抗体制剂经受蛋白质层析柱，用包含约20mm乙酸和约5mm磷酸的组合的缓冲液、或包含约20mm乙酸和约10mm磷酸的组合的缓冲液、或包含约20mm乙酸和约5mm乳酸的组合的缓冲液，从层析柱中洗脱抗n3pg抗体，用约20mm hcl来调整包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph，其中将ph调整到约ph 3.5，并且其中将洗脱物维持在约ph 3.5下约0分钟至约180分钟，用约250mm tris缓冲液来升高包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph，其中将ph升高到约ph 5.0至约ph 7.5，使包含抗n3pg抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得过滤的抗n3pg抗体制剂，其中在过滤的抗n3pg抗体中的宿主细胞蛋白质含量约小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm，其中所述抗n3pg抗体是igg1抗体。在一些实施方案中，将洗脱物的ph升高到约ph 5.0至约ph 7.5包括将约100mm至约1000mm tris缓冲液加入洗脱物中。
55.在本发明的一些实施方案中，本公开提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的抗n3pg抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在宿主细胞中重组产生的抗n3pg抗体制剂经受蛋白质层析柱，用包含约20mm乙酸和约5mm磷酸的组合的缓冲液、或包含约20mm乙酸和约10mm磷酸的组合的缓冲液、或包含约20mm乙酸和约5mm乳酸的组合的缓冲液，从层析柱中洗脱抗n3pg抗体，通过添加约20mm hcl来调整包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph，其中将ph降低到约ph 3.5，并且其中将洗脱物维持在约ph 3.5下约0分钟至约180分钟，并且其中实现了病毒灭活。
56.在本发明的一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的抗n3pg抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在宿主细胞中重组产生的抗n3pg抗体制剂经受蛋白质层析柱，用包含约20mm乙酸和约5mm磷酸的组合的缓冲液、或包含约20mm乙酸和约10mm磷酸的组合的缓冲液、或包含约20mm乙酸和约5mm乳酸的组合的缓冲液，从层析柱中洗脱抗n3pg抗体，通过添加约20mm hcl来调整包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph，其中将ph降低到约ph 3.3至约ph 3.7，并且其中将洗脱物维持在约ph 3.3至约ph 3.7下约0分钟至约180分钟，用约250mm tris缓冲液来升高包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph，其中将ph升高到约ph 7.25，使包含抗n3pg抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得过滤的抗n3pg抗体制剂，其中在抗n3pg抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm，其中所述抗n3pg抗体是igg1抗体。在一些实施方案中，将洗脱物的ph升高到约ph7.25包括将约100mm至约1000mm tris缓冲液加入洗脱物中。
57.在本发明的一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的抗n3pg抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在宿主细胞中重组产生的抗n3pg抗体制剂经受蛋白质层析柱，用包含约20mm乙酸和约5mm磷酸的组合的缓冲液、或包含约20mm乙酸和约5mm磷酸的组合的缓冲液、或包含约20mm乙酸和约5mm乳酸的组合的缓冲液，从层析柱中洗脱抗n3pg抗体，通过添加约20mm hcl来调整包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph，其中将ph降低到约ph 3.5，并且其中将洗脱物维持在约ph 3.5下约0分钟至约180分钟，通过添加约250mm tris缓冲液来升高包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph，其中将ph升高到约ph 7.25，使包含抗n3pg抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得过滤的抗n3pg抗体制剂，其中在抗n3pg抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm，其中所述抗n3pg抗体是igg1抗体。在一些实施方案中，将洗脱物的ph升高到约ph 7.25包括将约100mm至约1000mm tris缓冲液加入洗脱物中。
58.在一些实施方案中，本发明提供了减少在宿主细胞中重组产生的抗n3pg抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，
59.在所公开的方法和通过所公开的方法产生的抗体组合物的一些实施方案中，抗体是针对突发性急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2)的刺突蛋白的抗体。在一些实施方案中，抗sars-cov-2抗体在哺乳动物宿主细胞例如中国仓鼠卵巢细胞中重组产生。合适的抗sars-cov-2抗体可以包括但不限于巴尼韦单抗(bamlanivimab)、埃特司韦单抗(etesevimab)和贝特洛韦单抗(bebtelovimab)。在一些实施方案中，抗sars-cov-2抗体是巴尼韦单抗。在一些实施方案中，抗sars-cov-2抗体包含由seq id no：1的氨基酸序列构成的可变重链(vh)、以及由seq id no：2的氨基酸序列构成的可变轻链(vl)。在一些实施方案中，抗sars-cov-2抗体包含由seq id no：3的氨基酸序列构成的重链(hc)、以及由seq id no：4的氨基酸序列构成的轻链(lc)。在其它实施方案中，抗sars-cov-2抗体是埃特司韦单抗。在又其它实施方案中，抗sars-cov-2抗体包含由seq id no：5的氨基酸序列构成的可变重链(vh)、以及由seq id no：6的氨基酸序列构成的可变轻链(vl)。在又进一步的实施方案中，抗sars-cov-2抗体包含由seq id no：7的氨基酸序列构成的重链(hc)、以及由seq id no：8的氨基酸序列构成的轻链(lc)。在一些实施方案中，抗sars-cov-2抗体是贝特洛韦单抗。在又其它实施方案中，抗sars-cov-2抗体包含由seq id no：9的氨基酸序列构成的可变重链(vh)、以及由seq id no：10的氨基酸序列构成的可变轻链(vl)。在又进一步的实施方
案中，抗sars-cov-2抗体包含由seq id no：11的氨基酸序列构成的重链(hc)、以及由seq id no：12的氨基酸序列构成的轻链(lc)。
60.在一些实施方案中，治疗性或诊断性抗体在哺乳动物细胞中产生。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢(cho)细胞或幼仓鼠肾(bhk)细胞、鼠杂交瘤细胞或鼠骨髓瘤细胞。
61.在一些实施方案中，本发明提供了方法，其中在经受深层过滤后减少在宿主细胞中重组产生的抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法进一步经受进一步的纯化和/或精制步骤，以获得原料药制剂。原料药被fda定义为一种活性成分，其意图提供在疾病的诊断、治愈、缓解、治疗或预防中的药理活性或其它直接效应，或者影响人体的结构或任何功能，但并不包括在此类成分的合成中使用的中间体。药物产品是一种适合施用于人患者的成品剂型，例如片剂、胶囊或溶液，其含有一般但不一定与一种或多种其它成分结合的原料药。在一些实施方案中，进一步的纯化和/或精制步骤包括下述中的一种或多种：执行病毒灭活、执行离子交换层析、执行病毒过滤和/或执行切向流过滤。
62.在一些实施方案中，本公开提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到约0ppm。
63.在一些实施方案中，本公开提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含plbl2，并且其中plbl2含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，plbl2含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，plbl2含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，plbl2含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，plbl2含量减少到约0ppm。
64.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含溶酶体保护蛋白，并且其中溶酶体保护蛋白含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，溶酶体保护蛋白含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，溶酶体保护蛋白含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，溶酶体保护蛋白含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，溶酶体保护蛋白含量减少到约0ppm。
65.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含蛋白质s 100-a6，并且其中蛋白质s 100-a6含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，蛋白质s 100-a6含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，蛋白质s100-a6含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，蛋白质s100-a6含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，蛋白质s100-a6含量减少到约0ppm。
66.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体
的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含蛋白质s100-a11，并且其中蛋白质s100-a11含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，蛋白质s100-a11含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，蛋白质s100-a11蛋白质含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，蛋白质s100-a11含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，蛋白质s100-a11含量减少到约0ppm。
67.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含泛素40s核糖体蛋白s27a，并且其中泛素40s核糖体蛋白s27a含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，泛素40s核糖体蛋白s27a含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，泛素40s核糖体蛋白s27a含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，泛素40s核糖体蛋白s27a含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，泛素40s核糖体蛋白s27a含量减少到约0ppm。
68.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含激肽释放酶-11，并且其中激肽释放酶-11含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，激肽释放酶-11含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，激肽释放酶-11含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，激肽释放酶-11含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，激肽释放酶-11含量减少到约0ppm。
69.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1，并且其中丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1含量减少到约0ppm。
70.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含补体c1r亚组分，并且其中补体c1r亚组分含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，补体c1r亚组分含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，补体c1r亚组分含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，补体c1r亚组分含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，补体c1r亚组分含量减少到约0ppm。
71.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1，并且其中主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1含量减少到小于约50pprn。在其它实施方案中，主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1含量减少到约0ppm。
72.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体
的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含热休克同源71kda蛋白，并且其中热休克同源71kda蛋白含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，热休克同源71kda蛋白含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，热休克同源71kda蛋白含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，热休克同源71kda蛋白含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，热休克同源71kda蛋白含量减少到约0ppm。
73.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含多聚泛素，并且其中多聚泛素含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，多聚泛素含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，多聚泛素含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，多聚泛素含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，多聚泛素含量减少到约0ppm。
74.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含过氧化物还原酶-1，并且其中过氧化物还原酶-1含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，过氧化物还原酶-1含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，过氧化物还原酶-1含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，过氧化物还原酶-1含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，过氧化物还原酶-1含量减少到约0ppm。
75.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含谷胱甘肽s-转移酶y1，并且其中谷胱甘肽s-转移酶y1含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，谷胱甘肽s-转移酶y1含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，谷胱甘肽s-转移酶y1含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，谷胱甘肽s-转移酶y1含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，谷胱甘肽s-转移酶y1含量减少到约0ppm。
76.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含40s核糖体蛋白s28，并且其中40s核糖体蛋白s28含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，40s核糖体蛋白s28含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，40s核糖体蛋白s28含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，40s核糖体蛋白s28含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，40s核糖体蛋白s28含量减少到约0ppm。
77.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含硫氧还蛋白同种型x1，并且其中硫氧还蛋白同种型x1含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，硫氧还蛋白同种型x1含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，硫氧还蛋白同种型x1含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，硫氧还蛋白同种型x1含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，硫氧还蛋白同种型x1含量减少到约0ppm。
78.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1，并且其中基底膜特异性硫酸
乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1含量减少到约0pprn。
79.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含肾小管间质性肾炎抗原样蛋白，并且其中肾小管间质性肾炎抗原样蛋白含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，肾小管间质性肾炎抗原样蛋白含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，肾小管间质性肾炎抗原样蛋白含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，肾小管间质性肾炎抗原样蛋白含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，肾小管间质性肾炎抗原样蛋白含量减少到约0ppm。
80.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含半乳糖凝集素-1，并且其中半乳糖凝集素-1含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，半乳糖凝集素-1含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，半乳糖凝集素-1含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，半乳糖凝集素-1含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，半乳糖凝集素-1含量减少到约0ppm。
81.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量包含角质蛋白(cornifin)α，并且其中角质蛋白α含量减少到小于约100ppm。在其它实施方案中，角质蛋白α含量减少到小于约50ppm。在其它实施方案中，角质蛋白α含量减少到小于约20ppm。在其它实施方案中，角质蛋白α含量减少到小于约10ppm、5ppm或1ppm。在其它实施方案中，角质蛋白α含量减少到约0ppm。
82.在一些实施方案中，本公开提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中使蛋白质制剂经受深层过滤。在一些实施方案中，使包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂经深层过滤器处理，其中所述深层过滤器是以下中的一种或多种：b1hc过滤器、x0sp过滤器、c0sp过滤器、x0hc过滤器、emphaze
tm aex hybrid purifier过滤器、或zeta plus(zb media)过滤器(例如zeta plus(60zb05a)过滤器、zeta plus(90zb05a)过滤器或zeta plus(90zb08a)过滤器)，或者与b1hc过滤器、x0sp过滤器、c0sp过滤器、x0hc过滤器、emphaze
tm aex hybrid purifier过滤器、或zeta plus(zb media)过滤器(例如zeta plus(60zb05a)过滤器、zeta plus(90zb05a)过滤器或zeta plus(90zb08a)过滤器)中的任一种具有相同性能特性的深层过滤器。
83.在一些实施方案中，使包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂经深层过滤器处理，其中所述深层过滤器是以下中的一种或多种：b1hc过滤器、x0hc过滤器、或zeta plus(zb media)过滤器(例如zeta plus(60zb05a)过滤器、zeta plus(90zb05a)过滤器或zeta plus(90zb08a)过滤器)，或者与b1hc过滤器、x0hc过滤器、或zeta plus(zb media)过滤器(例如zeta plus(60zb05a)过滤器、zeta plus(90zb05a)过滤器或zeta plus(90zb08a)过滤器)
中的任一种具有相同性能特性的深层过滤器。
84.在一些实施方案中，使包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂经深层过滤器处理，其中所述深层过滤器是以下中的一种或多种：x0sp过滤器、c0sp过滤器、x0hc过滤器或emphaze
tm aex hybrid purifier过滤器，或者与x0sp过滤器、c0sp过滤器或emphaze
tm aex hybrid purifier过滤器中的任一种具有相同性能特性的深层过滤器。
85.在所公开的方法的一些实施方案中，在该方法中利用的深层过滤器是包含完全合成的过滤介质的完全合成的深层过滤器。在一些实施方案中，深层过滤器孔径为约9微米至约0.1微米。在一些实施方案中，深层过滤器孔径为约2微米至约0.1微米。在一些实施方案中，深层过滤器孔径为约0.1微米。
86.在所公开的方法的一些实施方案中，经受深层过滤的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂的ph为约5.0，和/或在深层过滤后的包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph为约5.0。在其它实施方案中，经受深层过滤的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂的ph为约6.0，和/或在深层过滤后的包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph为约6.0。在其它实施方案中，经受深层过滤的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂的ph为约7.0，和/或在深层过滤后的包含抗n3pg抗体的洗脱物的ph为约7.0。
87.在一些实施方案中，本公开提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中来自将ph升高到约5.0或更高(例如，约6.0或至约7.0)的步骤的洗脱物的离子强度是约10mm至约45mm。在一些实施方案中，离子强度小于约30mm。在一些实施方案中，离子强度小于约20mm。在其它实施方案中，离子强度小于约15mm。
88.在一些实施方案中，本发明提供了方法，其中使在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂经受层析柱。在一些实施方案中，层析柱是亲和柱、离子交换柱、疏水相互作用柱、羟基磷灰石柱或混合模式柱中的一种或多种。在一些实施方案中，亲和层析柱是蛋白a柱、蛋白g柱或蛋白l柱。在其它实施方案中，离子交换层析柱是阴离子交换柱或阳离子交换柱。在一些实施方案中，本发明提供了其中从最终产物中充分去除hcp的方法。
89.在一些实施方案中，本发明提供了减少在宿主细胞中重组产生的包含抗n3pg抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其中所述抗n3pg抗体是治疗性或诊断性抗体。在进一步的实施方案中，治疗性或诊断性抗n3pg抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异性抗体或抗体片段。
90.在另一个方面，本文提供了包含含有抗n3pg抗体的蛋白质制剂的药物组合物。在进一步的方面，本公开提供了通过如本文所述的方法生产的组合物。在又其它实施方案中，本公开提供了通过如本文所述的方法产生的组合物，其中所述组合物中的宿主细胞蛋白质含量小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm。
91.术语“宿主细胞蛋白质”hcp)是宿主细胞中涉及细胞维持和生长、以及蛋白质合成和加工的蛋白质。某些hcp已与患者中的免疫原性问题相关，并且监管机构希望减少hcp，以便使免疫原性问题降到最低。用于免疫原性分析的一项强大技术依赖免疫信息学工具，其已显示为做出可用于生物治疗剂和疫苗两者的设计且在生物治疗剂和疫苗两者的设计内验证的可靠预测。与hcp驱动的免疫原性特别相关的是t细胞途径，其中抗原呈递细胞将外
源蛋白加工成组成成分肽，其中一些(“表位”)被主要组织相容性复合物(mhc)ii类蛋白识别，并且带到细胞表面用于通过t细胞的检查。三元mhc：表位：t细胞受体复合物的形成驱动最初的幼稚应答，并且可以刺激后续的b细胞活化和成熟。因此，许多免疫信息学研究已针对推定的t细胞表位的高度可靠预测(de groot和martin，clin immunol.2009 may；131(2)：189-201，其在此通过引用以其整体并入)，并且epimatrix系统是基于肽：mhc结合概况的一种严格验证的方法。除鉴定蛋白质内的个别表位之外，epimatrix随后还可以根据其相对于基准蛋白质的表位密度来评价蛋白质的整体免疫原性风险(de groot和martin，2009)。当使用epimatrix工具预测免疫原性时的一般经验法则是，评分为+20及以上的那些携带升高的免疫原性风险，并且因此期望减少或消除来自最终制剂的此类hcp。
92.此类hcp例如包括来自中国仓鼠卵巢(cho)细胞的那些，例如磷脂酶b样2蛋白(plbl2)(genbank登录号354497505)、s100-a6(genbank登录号354478978)、蛋白质s100-a11(genbank登录号354490016)、溶酶体保护蛋白(genbank登录号354476738)、泛素40s核糖体蛋白s27a(genbank登录号354483686)、激肽释放酶-11(genbank登录号625217455)、丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1(genbank登录号625222219)、补体c1r亚组分(genbank登录号625183025)、主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1(genbank登录号625206860)、热休克同源71kda蛋白(genbank登录号350539823)、过氧化物还原酶-1(genbank登录号350537945)、多聚泛素(genbank登录号346986309)、谷胱甘肽s-转移酶y1(genbank登录号354505868)、40s核糖体蛋白s28(genbank登录号625218224)、硫氧还蛋白同种型x1(genbank登录号625209431)、基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1(genbank登录号625201352)、肾小管间质性肾炎抗原样蛋白(genbank登录号625188472)、部分细胞质肌动蛋白2同种型x2(genbank登录号354497282)、半乳糖凝集素-1(genbank登录号354496408)，角质蛋白α(genbank登录号354504887)。在所公开的方法的一些实施方案中，抗体制剂中减少的hcp含量是选自以下的的hcp含量：s100-a6、蛋白质s100-a11、磷脂酶b样2蛋白、溶酶体保护蛋白、泛素40s核糖体蛋白s27a、激肽释放酶-11、丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1、补体c1r亚组分、主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1、热休克同源71kda蛋白和过氧化物还原酶-1及其组合。所公开的方法可以用于制备具有小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm、2ppm和1ppm的以下中的一种或多种的含量的抗体组合物：s100-a6、蛋白质s100-a11、磷脂酶b样2蛋白、溶酶体保护蛋白、泛素40s核糖体蛋白s27a、激肽释放酶-11、丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1、补体c1r亚组分、主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1、热休克同源71kda蛋白和过氧化物还原酶-1。
93.由于升高的免疫原性风险，特别期望去除epimatrix评分为+20的那些hcp，例如磷脂酶b样2蛋白(plbl2)(genbank登录号354497505)、s100-a6(genbank登录号354478978)、蛋白质s100-a11(genbank登录号354490016)、溶酶体保护蛋白(genbank登录号354476738)。由于其与感兴趣的蛋白质或抗体共洗脱的倾向，其它hcp例如过氧化物还原酶-1是相当持久且难以去除的。
94.术语“弱酸”是指具有＞～4的最低pka的酸。弱酸的实例包括但不限于乙酸、琥珀酸和2-(n-吗啉代)乙磺酸。
95.术语“强酸”是指具有＜～4的最低pka的酸。强酸的实例包括但不限于磷酸、乳酸、甲酸、苹果酸、丙二酸、乙醇酸、柠檬酸、酒石酸和盐酸。
96.术语“效价”是指原子的结合能力。可以作为化合物的部分形成的原子的键数由元素的效价表示。术语“一价”是指具有一价的原子、离子或化学基团，其因此可以形成一个共价键。
97.术语“深层过滤器”是指使用多孔过滤介质的过滤元件，所述过滤介质在介质各处(在介质内和介质上)，而不仅仅是在介质的表面上保留颗粒。深层过滤器可以另外具有起因于它们由其构成的材料的化学性质的吸附能力。商购可得的深层过滤器的实例包括但不限于b1hc过滤器、x0sp过滤器、cosp过滤器、x0hc过滤器、emphaze
tm aex hybrid purifier、zeta plus(60zb05a)过滤器、zeta plus(90zb05a)过滤器和zeta plus(90zb08a)过滤器。深层过滤器可以是包含完全合成的过滤介质的完全合成的深层过滤器。深层过滤器可以具有约9微米至约0.1微米、约2微米至约0.1微米、或约0.1微米的孔径。术语“深层过滤”是指使可能是异质或同质的液体材料通过深层过滤器的行为。
98.当提及溶液时，术语“离子强度”是该溶液中的离子浓度的量度。离子强度(i)是种类浓度ci和关于所有种类的净电荷zi的函数。为了确定离子强度，使用公式i。
[0099][0100]“抗体制剂”是提供用于纯化过程或方法的材料或溶液，其含有感兴趣的治疗性或诊断性抗体或其抗原结合片段，并且还可能含有各种杂质。非限制性实例可以包括例如在一个或多个离心步骤和/或过滤步骤之后，含有感兴趣的治疗性或诊断性抗体的收获的细胞培养液(hccf)、收获的细胞培养材料、澄清的细胞培养液、澄清的细胞培养材料、捕获池、回收池和/或收集池，在一个或多个纯化步骤之后，含有感兴趣的治疗性或诊断性抗体的捕获池、回收池和/或收集池。
[0101]
术语“杂质”是指不同于所需抗n3pg抗体产物的材料。杂质包括但不限于：宿主细胞材料，例如宿主细胞蛋白质、chop；浸出蛋白a；核酸；所需抗体的变体、大小变体、片段、聚集物或衍生物；内毒素；病毒污染物；细胞培养基组分等。
[0102]
术语“蛋白质”和“多肽”在本文中可互换使用，以指任何长度的氨基酸聚合物。聚合物可以是线性或分支的，它可以包含修饰的氨基酸，并且它可以被非氨基酸中断。这些术语还涵盖了已进行天然修饰或通过干预进行修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或者任何其它操纵或修饰，例如与标记组分缀合。在该定义内还包括的是例如含有氨基酸(包括例如非天然氨基酸等)的一种或多种类似物的蛋白质，以及本领域已知的其它修饰。蛋白质的实例包括但不限于抗体、肽、酶、受体、激素、调节因子、抗原、结合剂、细胞因子、fc融合蛋白、免疫粘附素分子等。
[0103]
如本文所用，术语“抗体”是指结合抗原的免疫球蛋白分子。抗体的实施方案包括单克隆抗体、多克隆抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、双特异性或多特异性抗体、或缀合抗体。抗体可以属于任何类别(例如igg、ige、igm、igd、iga)和任何亚类(例如igg1、igg2、igg3、igg4)。
[0104]
本公开的示例性抗体是免疫球蛋白g(igg)型抗体，其由经由链间二硫键交联的四条多肽链构成：两条重链(hc)和两条轻链(lc)。四条多肽链各自的氨基末端部分包括主要负责抗原识别的约100-125个或更多个氨基酸的可变区。四条多肽链各自的羧基末端部分含有主要负责效应子功能的恒定区。每条重链由重链可变区(vh)和重链恒定区构成。每条
轻链由轻链可变区(vl)和轻链恒定区构成。igg同种型可以进一步分成亚类(例如igg1、igg2、igg3和igg4)。
[0105]
vh和vl区可以进一步细分成称为互补决定区(cdr)的高变区，散布着称为框架区(fr)的更保守区域。cdr暴露在蛋白质的表面上，并且是抗体关于抗原结合特异性的重要区域。每个vh和vl由三个cdr和四个fr构成，其从氨基末端到羧基末端按以下次序排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。在本文中，重链的三个cdr被称为“hcdr1、hcdr2和hcdr3”，并且轻链的三个cdr被称为“lcdr1、lcdr2和lcdr3”。cdr含有与抗原形成特异性相互作用的大部分残基。将氨基酸残基分配至cdr可以根据众所周知的方案来完成，包括以下中描述的那些方案：kabat(kabat等人，“sequences of proteins of immunological interest，”national institutes of health，bethesda，md.(1991))，chothia(chothia等人，“canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins”，journal of molecular biology，196，901-917(1987)；al-lazikani等人，“standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins”，journal of molecular biology，273，927-948(1997))，north(north等人，“a new clustering of antibody cdr loop conformations”，journal of molecular biology，406，228-256(2011))或imgt(可在www.imgt.org处获得的国际immunogenetics数据库；参见lefranc等人，nucleic acids res.1999；27：209-212)。
[0106]
本公开的实施方案还包括抗体片段或抗原结合片段，如本文所用，其包含抗体的至少一部分，所述部分保留与抗原或抗原的表位特异性相互作用的能力，例如fab、fab
′
、f(ab
′
)2、fv片段、scfv抗体片段、scfab、二硫键连接的fv(sdfv)、fd片段。
[0107]
可以执行所公开的方法，以便制备原料药制剂。
[0108]
所公开的方法和组合物可以利用或包含针对np3glu淀粉样蛋白β肽的抗体(“抗np3g抗体”)。抗np3g抗体可以用于治疗与淀粉样蛋白β(aβ)肽聚集有关的疾病。淀粉样蛋白前体蛋白(app)的切割导致大小范围从38到43个氨基酸的aβ肽。aβ从可溶性形式转换为具有高β-片层含量的不溶性形式，以及这些不溶性形式在脑中作为神经炎和脑血管斑块沉积，已与许多状况和疾病包括阿尔茨海默氏病(ad)、唐氏综合征和脑淀粉样蛋白血管病(caa)相关。在斑块中发现的沉积物由aβ肽的异质混合物构成。n3pglu aβ，也被称为n3pe、pe3-x或aβ
p3-x
，是aβ肽的n末端截短形式，并且主要在斑块中发现。n3pglu aβ缺少在人aβ的n末端处的前两个氨基酸残基，并且在第三个氨基酸位置处具有衍生自谷氨酸的焦谷氨酸盐。尽管n3pglu aβ肽是脑中的沉积aβ的次要组分，但研究已证实了n3pglu aβ肽具有侵袭性聚集性质，并且在沉积级联中早期累积。针对n3pglu aβ的抗体是本领域已知的。例如，美国专利号8,679,498公开了人n3pglu aβ抗体(例如b12l；也称为ly3002813)和用所述抗体治疗疾病例如阿尔茨海默氏病的方法。美国专利号10,647,759公开了n3pgab抗体包括“抗体201c”，以及用所述抗体治疗疾病例如阿尔茨海默氏病的方法。所公开的方法和组合物的抗np3glu抗体可以特异性结合ab内存在的表位，其为pyr-efrhdsgyevhhqk(即pe3-16)。
[0109]
所公开的方法和组合物可以利用或包含针对突发性急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2)的刺突蛋白的抗体。如本文使用的术语“抗sars-cov2抗体”是指结合sars-cov-2的刺突(s)蛋白的抗体。sars-cov-2刺突(s)蛋白的氨基酸序列先前已例如在genbank登录号：yp_009724390.1中进行描述。
[0110]
术语“超滤”或“过滤”是一种膜过滤的形式，其中流体静水压迫使液体靠在半透膜上。高分子量的悬浮固体和溶质被保留，而水和低分子量的溶质通过膜。在一些实例中，超滤膜具有在1μm至100μm范围内的孔径。术语“超滤膜”、“超滤过滤器”、“滤膜”和“过滤过滤器”可以互换使用。滤膜的实例包括但不限于聚偏二氟乙烯(pvdf)膜、乙酸纤维素、硝酸纤维素、聚四氟乙烯(ptfe、特氟隆)、聚氯乙烯、聚醚砜、玻璃纤维或适用于cgmp制造环境的其它过滤材料。
[0111]
如本文所用，数字范围包括限定范围的数字在内。
[0112]
本领域公认的术语“eu编号”是指对免疫球蛋白分子的氨基酸残基进行编号的系统。eu编号例如在以下中进行描述：kabat等人，sequences of proteins of immunological interest，第5版，public health service，national institutes ofhealth，bethesda，md.(1991)；edelman，g.m等人，proc.natl.acad.usa，63，78-85(1969)；以及http：//www.imgt.org/imgtscientificchart/numbering/hu_ighgnber.html#refs。术语“kabat编号”在本领域中公认为是指对氨基酸残基进行编号的系统，所述氨基酸残基比重链和轻链可变区中的其它氨基酸残基更可变(即，高变)(参见例如，kabat等人，ann.nyacad.sci.190：382-93(1971)；kabat等人，sequences ofproteins ofimmunological interest，fifth edition，u.s.department of health and human services，nih publication no.91-3242(1991))。术语“north编号”是指对氨基酸残基进行编号的系统，所述氨基酸残基比重链和轻链可变区中的其它氨基酸残基更可变(即，高变)，并且至少部分基于具有大量晶体结构的亲和传播聚类，如(north等人，anew clustering of antibody cdr loop conformations，journal of molecular biology，406：228-256(2011)中所述。
[0113]
如本文所用，术语“亲和层析”是指基于生物分子之间的特异性、可逆的相互作用，用于分离生物化学混合物(例如，蛋白质和不需要的生物分子种类)的层析方法。亲和层析的示例性实施方案包括蛋白a亲和、蛋白g亲和、蛋白l亲和、κ亲和配体层析(例如captureselect
tm
、kappaxl
tm
、kappaselect
tm
、kappaxp
tm
)或λ亲和配体层析。
[0114]
本公开的蛋白质可以掺入药物组合物内，所述药物组合物可以通过本领域众所周知的方法进行制备，并且包含本公开的蛋白质和一种或多种药学上可接受的载体和/或稀释剂(例如，remington，the science and practice of pharmacy，第22版，loyd v.，编，pharmaceutical press，2012，其提供了从业者一般已知的配制技术纲要)。用于药物组合物的合适载体包括任何材料，当与蛋白质组合时，所述材料保留分子的活性并且与患者的免疫系统是非反应性的。
[0115]
能够指导它们与之可操作地连接的基因表达的表达载体是本领域众所周知的。表达载体可以编码促进多肽从宿主细胞中分泌的信号肽。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽。表达的多肽各自可以不依赖于它们在一个载体中与之可操作地连接的不同启动子而表达，或者可替代地，可以不依赖于它们在多重载体中与之可操作地连接的不同启动子而表达。表达载体通常可作为附加体或作为宿主染色体dna的整合部分在宿主生物中复制。通常，表达载体将含有选择标记物，例如四环素、新霉素和二氢叶酸还原酶，以允许检测用所需dna序列转化的那些细胞。
[0116]
宿主细胞是指用表达本公开的一种或多种蛋白质的一种或多种表达载体稳定或
瞬时转染、转化、转导或感染的细胞。产生本公开的蛋白质的宿主细胞系的创建和分离可以使用本领域已知的标准技术来完成。哺乳动物细胞是用于表达本公开的蛋白质的优选宿主细胞。特定的哺乳动物细胞包括hek 293、ns0、dg-44和cho。优选地，蛋白质被分泌到宿主细胞在其中进行培养的培养基内，蛋白质可以通过例如使用常规技术从所述培养基中进行回收或纯化。例如，培养基可以施加到蛋白a亲和层析柱和/或κ亲和配体或λ亲和配体层析柱并且从其中洗脱。不需要的生物分子种类包括可溶性聚集物和多聚体可以通过常用技术有效地去除，所述常用技术包括尺寸排阻、疏水性相互作用、离子交换或羟基磷灰石层析。产物可以立即例如在-70c下冷冻，冷藏或者可以是冻干的。可以采用蛋白质纯化的各种方法，并且此类方法是本领域已知的，且例如在deutscher，methods in enzymology 182：83-89(1990)和scopes，protein purification：principles and practice，第3版，springer，ny(1994)中进行描述。
[0117]
本文还公开了包含抗体或其抗原结合片段的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段通过包括从哺乳动物宿主细胞中纯化抗体的方法进行制备。在所公开的包含抗体的药物组合物中，组合物中的宿主细胞蛋白质(hcp)的总含量通常小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的药物组合物的一些实施方案中，所公开的药物组合物的抗体结合人n3pglu aβ(抗n3pglu aβ抗体)。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢(cho)细胞。
[0118]
所公开的药物组合物通常包含抗体或其抗原结合片段，其可以是抗n3pglu aβ抗体。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异性抗体或抗体片段。在一些实施方案中，抗体是igg1抗体。
[0119]
所公开的药物组合物可以包含抗n3pglu aβ抗体。在一些实施方案中，抗n3pglu aβ抗体包含重链(hc)和轻链(lc)，其中所述轻链包含轻链可变区(lcvr)并且所述重链包含重链可变区(hcvr)，其中所述lcvr包含氨基酸序列lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且所述hcvr包含氨基酸序列hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中lcdr1是kssqsllysrgktyln(seq id no：17)，lcdr2是avsklds(seq id no：18)，lcdr3是vqgthypft(seq id no：19)，hcdr1是gydftryyin(seq id no：20)，hcdr2是winpgsgntkynekfkg(seq id no：21)，开且hcdr3是egitvy(seq id no：22)。
[0120]
在所公开的药物组合物的一些实施方案中，组合物包含抗n3pglu aβ抗体，其中所述抗体包含lcvr和hcvr，其中所述lcvr是divmtqtplslsvtpgqpasisckssqsllysrgktylnwllqkpgqspqlliyavskldsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycvqgthypftfgqgtkleik(seq id no：13)，并且所述hcvr是qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgydftryyinwvrqapgqglewmgwinpgsgntkynekfkgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycaregitvywgqgttvtvss(seq id no：14)。
[0121]
在所公开的药物组合物的一些实施方案中，组合物包含抗n3pglu aβ抗体，其中所述抗n3pglu aβ抗体的lc是divmtqtplslsvtpgqpasisckssqsllysrgktylnwllqkpgqspqlliyavskldsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycvqgthypftfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seq id no：15)，并且所述抗n3pglu aβ抗体的hc是qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgydftryyinwvrqapgqglewmgwinpgsgntkynekfkgrvtitadeststaymelsslrsedtavy
ycaregitvywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seq id no：16)。
[0122]
在所公开的组合物的一些实施方案中，组合物包含多奈单抗。
[0123]
在一些实施方案中，所公开的组合物包含抗n3pglu aβ抗体，其包含重链(hc)和轻链(lc)，其中所述轻链包含轻链可变区(lcvr)并且所述重链包含重链可变区(hcvr)，其中所述lcvr包含氨基酸序列lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且所述hcvr包含氨基酸序列hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中lcdr1是rasqslgnwla(seq id no：27)，lcdr2是yqastles(seq id no：28)。lcdr3是qhykgsfwt(seq id no：29)，hcdr1是aasgftfssypms(seq id no：30)，hcdr2是aisgsggstyyadsvkg(seq id no：31)，并且hcdr3是areggsgsyyngfdy(seq id no：32)。
[0124]
在所公开的药物组合物的一些实施方案中，组合物包含抗n3pglu aβ抗体，其中所述抗体包含lcvr和hcvr，其中所述lcvr是diqmtqspstlsasvgdrvtitcrasqslgnwlawyqqkpgkapklliyqastlesgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycqhykgsfwtfgqgtkveik(seq id no：23)，并且所述hcvr是evqllesggglvqpggslrlscaasgftfssypmswvrqapgkglewvsaisgsggstyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycareggsgsyyngfdywgqgtlvtvss(seq id no：24)。
[0125]
在所公开的药物组合物的一些实施方案中，组合物包含抗n3pglu aβ抗体，其中所述抗n3pglu aβ抗体的lc是diqmtqspstlsasvgdrvtitcrasqslgnwlawyqqkpgkapklliyqastlesgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycqhykgsfwtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seq id no：25)，并且所述抗n3pglu aβ抗体的hc是evqllesggglvqpggslrlscaasgftfssypmswvrqapgkglewvsaisgsggstyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycareggsgsyyngfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seq id no：26)。
[0126]
在所公开的组合物的一些实施方案中，组合物包含如美国专利号10,647,759中提及的抗体201c。
[0127]
在所公开的包含抗n3pg抗体(其可以包括抗n3pglu抗体例如多奈单抗)的药物组合物中，药物组合物可以具有减少的宿主细胞蛋白质(hcp)的总含量。在一些实施方案中，组合物包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的hcp(例如，如通过lcms测量的)。在一些实施方案中，组合物包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的选自以下hcp及其组合的hcp：蛋白质s100-a6、蛋白质s100-a11、磷脂酶b样2蛋白、溶酶体保护蛋白、泛素40s核糖体蛋白s27a、激肽释放酶-11、丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1、补体c1r亚组分、主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1、热休克同源71kda蛋白、过氧化物还原酶-1。
[0128]
在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、
50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的蛋白质s100-a6(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的蛋白质s100-a11(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的磷脂酶b样2蛋白(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的溶酶体保护蛋白(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的泛素40s核糖体蛋白s27a(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的激肽释放酶-11(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm补体c1r亚组分(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm热休克同源71kda蛋白(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm过氧化物还原酶-1(例如，如通过lcms测量的)。
[0129]
在所公开的包含抗体(其可以包括抗n3pglu抗体例如抗体201c)的药物组合物中，药物组合物可以具有减少的宿主细胞蛋白质(hcp)的总含量。在一些实施方案中，组合物包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的hcp(例如，如通过lcms测量的)。在一些实施方案中，组合物包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的选自以下hcp及其组合的hcp：多聚泛素、溶酶体保护蛋白、谷胱甘肽s-转移酶y1、40s核糖体蛋白s28、硫氧还蛋白同种型x1、基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1、肾小管间质性肾炎抗原样蛋白、部分细胞质肌动蛋白2同种型x2、半乳糖凝集素-1、过氧化物还原酶-1和角质蛋白α。
[0130]
在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的多聚泛素(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的溶酶体保护蛋白(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的谷胱甘肽s-转移酶y1(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的谷胱甘肽s-转移酶y1，例如，(如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的40s核糖体蛋白s28(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、
20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的硫氧还蛋白同种型x1(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的肾小管间质性肾炎抗原样蛋白(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的部分细胞质肌动蛋白2同种型x2(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的半乳糖凝集素-1(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的过氧化物还原酶-1(例如，如通过lcms测量的)。在所公开的包含抗n3pg抗体的药物组合物中，组合物可以包含小于约100ppm、50ppm、20ppm、10ppm、5ppm或1ppm的角质蛋白α(例如，如通过lcms测量的)。
实施例
[0131]
通过lcms的宿主细胞蛋白质(hcp)测量：为了评价纯化对以下实施例中的宿主细胞蛋白质(hcp)水平的影响，样品通过肽图分析/lc-ms/ms hcp概况分析，经由例如与thermo scientific质谱仪联用的超高效液相层析(uplc)进行分析。用于检测hcp的方法已在本领域中得到公开。(参见例如，huang等人，
″
a novel sample preparation for shotgun proteomics characterization of hcps in antibodies，
″
anal.chem.2017，89，5436-5444.)在此分析中，使样品经受通过胰蛋白酶的消化，用二硫苏糖醇(dtt)进行还原/沉淀，随后为上清液在hplc小瓶中的转移和酸化，用于lc-ms/ms分析。lc-ms/ms数据通过proteome discoverer针对cho-k1蛋白质数据库进行分析，其中添加了抗体、刺突蛋白和对照蛋白序列。hcp浓度报告为关于总hcp含量每个样品的hcp的总百万分率(ppm)(例如，每mg产物的ng hcp)。另外，还提供了某些hcp(例如，磷脂酶b样2蛋白(plbl2)和溶酶体保护蛋白)的浓度。
[0132]
通过elisa的hcp测量：样品中的hcp浓度在随后的实施例中还通过elisa测定，使用cho-hcp kit 1(cygnus technologies，按照制造商说明书执行)进行评价。hcp结果浓度报告为关于总hcp含量每个样品的hcp的总百万分率(ppm)。
[0133]
实施例1-mab1(埃特司韦单抗)纯化过程中的hcp减少
[0134]
蛋白质捕获步骤：使消毒过的蛋白a柱(mabselect sure蛋白a培养基)平衡，并且将mab1(埃特司韦单抗)无细胞生物反应器收获物装载到蛋白a柱上，并且使用20mm tris(ph 7.0)作为最后一次洗涤，执行蛋白a柱的三次洗涤。使用5个柱体积(cv)的20mm乙酸+5mm磷酸，从柱中洗脱mab1。通过使用在正面和背面上的基于吸光度的峰切割，将主要产物级分收集到单个总体级分内。
[0135]
低ph病毒灭活步骤和中和步骤：通过添加20mm hcl将含有mab1的主要产物级分(蛋白质捕获洗脱物总体级分)的ph调整到3.30至3.60，用于低ph病毒灭活。使混合物在18℃至25℃下温育180分钟。然后使用250mm tris碱ph未调整的缓冲液，将混合物中和至ph 7.0。
[0136]
深层过滤步骤：深层过滤器(x0sp，millipore)用注射用水(wfi)进行冲洗。从低ph病毒灭活步骤和中和步骤获得的mab1混合物以1200g/m2(每m2深层滤膜面积的mab克数)的载量施加到深层过滤器。装载的深层过滤器用wfi进行冲洗。使用250mm tris碱ph未调整的缓冲液，将来自深层过滤器的滤液(任选地包括装载后的wfi冲洗液在内)中和至ph 8.0。
[0137]
阴离子交换(aex)层析步骤：消毒过的柱(q sepharose快速流动阴离子交换层析介质(q sepharose fast flow anion exchange chromatography media)，或qff)用2个cv的20mm tris(ph 8.0)进行平衡。从深层过滤步骤获得的mab1溶液以每升树脂25至100g的载量装载到柱上，并且用平衡缓冲液执行另外的洗涤。mab1通过经由未结合的级分加上另外洗涤形成的峰区域的正面和背面上的基于吸光度的峰切割进行收集。
[0138]
结果：使用所述的纯化过程，如通过lc-ms测量的总hcp水平是：
[0139]
·
在蛋白a洗脱后的23299ppm；
[0140]
·
在x0sp深层过滤后的13ppm；
[0141]
·
在aex层析后的2ppm。
[0142]
关于mab1的深层过滤器组1评价：mab1通过基本上如上所述的蛋白a、低ph病毒灭活、中和以及深层过滤步骤进行处理。四种不同的深层过滤器：emphaze
tm aex hybrid purifier、zeta plus bc25-60zb05a、zeta plus bc25-90zb05a和zeta plus bc25-90zb08a(3m)在2000g/m2的载量下进行测试，如表1中所示。表1中的结果显示了，当与蛋白a洗脱后观察到的总hcp含量相比时，对于测试的4种深层过滤器，在通过lcms和/或elisa的深层过滤后的总hcp含量的显著减少。
[0143]
表1.在深层过滤之前和之后的mab1总hcp含量
[0144][0145]
实施例2-mab2(巴尼韦单抗)纯化过程中的hcp减少
[0146]
蛋白a洗脱缓冲液比较：mab2基本上如实施例1中关于mab1描述的进行制备，伴随以下例外：1)在低ph病毒灭活后以及在深层过滤前，使用250mm tris碱ph未调整的缓冲液，将溶液中和至ph 7.25而不是7.0，2)使用表2中列出的缓冲液组合，从蛋白a捕获柱中洗脱mab2，以及3)使用poros xq树脂执行aex层析。在如表2和表3中列出的纯化单元操作后，经
由lcms评价hcp含量(总hcp水平和plbl2水平两者)。表2和表3中的结果显示了，在深层过滤步骤后，总hcp和plbl2含量对于测试的所有3种缓冲液组合都是减少的。具体而言，在深层过滤后，当与20mm乙酸+5mm柠檬酸组合相比时，20mm乙酸+5mm磷酸和20mm乙酸+5mm l-乳酸显示了小于20ppm的总hcp和plbl2的更大减少。
[0147]
表2.使用不同蛋白a洗脱缓冲液的mab2总hcp含量
[0148][0149]
表3.使用不同蛋白a洗脱缓冲液的mab2 plbl2含量
[0150][0151]
深层过滤器组2评价：mab2基本上如关于mab1描述的进行制备，伴随以下例外：1)在低ph病毒灭活后以及在深层过滤前，使用250mm tris碱ph未调整的缓冲液，将溶液的ph中和至ph 7.25而不是7.0，以及2)用表4中所示的深层过滤器执行深层过滤。表4显示了使用以1500g/m2的载量的各种深层过滤器，在深层过滤后的总hcp和plbl2含量。测试的所有3种组2深层过滤器(x0sp、c0sp、x0hc、(millipore))都显示了在深层过滤后小于20ppm的总hcp含量和plbl2含量的显著减少。
[0152]
表4.在深层过滤之前和之后的mab2 hcp总含量和plbl2含量
[0153][0154]
实施例3.mab3(贝特洛韦单抗)纯化过程中的hcp减少
[0155]
mab3使用基本上如实施例1中关于mab1所述的蛋白质捕获、低ph病毒灭活、中和以及深层过滤步骤进行制备，除了使用载量为900g/m2的x0sp深层过滤器之外。使用所述纯化过程，如通过lcms测量的总hcp水平是：
[0156]
·
在蛋白a洗脱后的179964ppm，
[0157]
·
在x0sp(millipore)深层过滤后的77ppm。
[0158]
实施例4.双特异性抗体(mab4)纯化过程中的hcp减少
[0159]
双特异性抗体mab4使用基本上如实施例1中关于mab1所述的蛋白质捕获步骤进行制备，除了使用蛋白l亲和捕获柱(cytiva)且用表5中所述的缓冲系统洗脱之外。总hcp含量通过elisa进行测量，给出约1300至约2500ppm的范围。在蛋白质捕获之后，低ph病毒灭活基本上如实施例1中关于mab1所述的执行，除了使用表5中列出的滴定剂，随后为使用500mm tris碱ph未调整的缓冲液中和至ph 7.0之外。然后，使用载量为1200g/m2的x0sp深层过滤器，如实施例1中关于mab1所述的执行深层过滤步骤。hcp含量在深层过滤后通过elisa进行测量。
[0160]
表5中的结果显示了，在深层过滤之后，关于条目1至7的总hcp含量的显著减少至小于≤50ppm，其中施加于深层过滤器的混合物的离子强度小于45mm。另外，在施加于深层过滤器的混合物的离子强度与深层过滤后的总hcp含量之间存在相关性。此外，条目2显示了，可以通过稀释缓冲液来降低离子强度，在深层过滤后提供低hcp含量，然而，来自稀释的体积增加可能对制造过程是不利的。
[0161]
表5.在蛋白l洗脱和深层过滤之后mab4制剂中的hcp水平
[0162][0163]
*在低ph病毒灭活以及用500mm tris中和至ph 7.0之后，用2份水稀释mab4溶液(mab4溶液∶h2q的1∶2比率)
[0164]
实施例5.mab5(多奈单抗)纯化过程中的hcp减少
[0165]
mab5制剂使用基本上如下所述的步骤进行制备：蛋白质捕获、低ph病毒灭活和中和、深层过滤、阴离子交换(aex)层析、阳离子交换(cex)层析、病毒过滤和切向流过滤(tff)。
[0166]
蛋白质捕获步骤：
[0167]
通过减少过程有关的杂质例如残留hcp和残留dna来捕获且纯化抗体。使消毒过的蛋白a柱(mabselect蛋白a培养基)平衡，并且将单克隆抗体(由cho细胞表达的mab5(多奈单抗))无细胞生物反应器收获物装载到蛋白a柱上，并且使用20mm tris(ph 7.0)作为最后一次洗涤，执行蛋白a柱的三次洗涤。使用5个柱体积(cv)的20mm乙酸+5mm柠檬酸，从柱中洗脱抗体。通过使用在正面和背面上的基于吸光度的峰切割，将主要产物级分收集到单个总体级分内。
[0168]
低ph病毒灭活步骤和中和步骤：
[0169]
灭活低ph敏感性病毒，减少残留hcp、残留蛋白a、残留dna和总聚集物。通过添加
20mm乙酸、5mm柠檬酸，通过将收集的含有mab的主要产物级分(蛋白质捕获洗脱物总体级分)的ph调整到3.30至3.60，来进行病毒灭活。使混合物在18℃至25℃下温育约180分钟。然后使用250mm tris碱ph未调整的缓冲液，将混合物中和至ph 5至7.0，优选ph 5.0。
[0170]
深层过滤步骤：
[0171]
对于每种测试条件(使用b1hc，ph 5)，分开的深层过滤器(b1hc，millipore)用注射用水(wfi)进行冲洗。从低ph病毒灭活步骤和中和步骤获得的mab混合物以大约500-1500g/m2(每m2深层滤膜面积的mab克数)的靶载量施加到深层过滤器。装载的深层过滤器用wfi进行冲洗。使用250mm tris碱ph未调整的缓冲液，将来自深层过滤器的滤液(任选地包括装载后的wfi冲洗液在内)中和至ph 7.25。将计算体积的20mm tris、1m nacl、ph 7.0缓冲液添加至50mm的最终nacl浓度。
[0172]
阴离子交换(aex)层析步骤：
[0173]
减少潜在的病毒污染物。消毒过的poros xq(或sartobind q或poros hq)阴离子交换(aex)柱用2个cv的20mm tris、1m nacl、ph 7.0缓冲液，随后为3个cv的平衡缓冲液20mm tris、50mm nacl，(ph 7.25)进行预平衡。来自每种深层过滤器条件的mab溶液基于深层过滤条件在不连续的运行中流过aex柱，从深层过滤步骤获得，以每升树脂大约100g-200g(例如，每升树脂大约150g)的载量装载到柱上，并且用平衡缓冲液执行另外的洗涤。mab从装载开始到洗涤结束进行收集。
[0174]
阳离子交换(cex)层析步骤：
[0175]
减少总聚集物，减少残留hcp并减少残留蛋白a。在装载到平衡的(20％流动相b或等价于20mm乙酸钠、200mm氯化钠，ph 5.0)cex层析树脂(poros
tm
hs或unosphere s)上之前，通过添加0.1n乙酸，将不同的aex中间体从大约7.25ph调整到5.0。在装载到cex柱上之时，将以ph 5.0的aex过程中间体与15％的流动相b(对应于193mm氯化钠)共混。柱载量为每升树脂大约25克mab。在装载后，用20％流动相b(等价于20mm乙酸钠、200mm氯化钠，ph 5.0)洗涤柱，以促进未结合杂质的去除。然后在10个柱体积内，用来自20％-55％流动相b的线性梯度(在20mm乙酸钠，ph 5.0缓冲液中的200至550mm氯化钠梯度)，从柱中洗脱mab。为了确保产物的完全洗脱，线性梯度随后可以为在55％流动相b(等价于20mm乙酸钠、550mm氯化钠，ph 5.0)下的等度保持。在洗脱期间，以nlt 4.8au/cm在正面上的基于uv的切割启动cex洗脱物收集并且继续通过峰顶点，直到在nlt 2.4au/cm下进行背面切割。使柱再生并且用1n氢氧化钠溶液进行消毒。柱可以贮存于0.01n氢氧化钠中。然后使用lcms分析制剂的hcp含量。
[0176]
病毒过滤：
[0177]
去除潜在的病毒污染物。病毒过滤通过viresolve pro、planova 20n或planova bioex膜执行。
[0178]
切向流过滤(tff)：
[0179]
将病毒滤液过程中间体交换到适当的基质内，用于最终原料药(ds)制备，并且将抗体浓缩到适当的范围用于最终的ds制备。tff在30kda pes或30kda再生纤维素膜上执行。
[0180]
原料药分配：
[0181]
在tff后，添加表面活性剂，以完成原料药配制，并且分配到批准的容器密闭系统内，用于在药物产品制造之前在适当的温度下的贮存和运输。
[0182]
通过lc-ms的hcp含量的测量
[0183]
如下所述通过lc-ms测量hcp含量。对于mab5分批1和mab5分批2，在蛋白质捕获步骤后、在低ph病毒灭活后、在aex后以及在cex后，测量hcp含量。对于mab5分批3-5，hcp含量在原料药分配之前进行测量。结果显示于下表6a和6b以及表7中。
[0184]
样品制备
[0185]
将含有每个样品或对照的～1mg蛋白质的等分试样加入纯水中至193ml。使溶液与5.0ml 1m tris-hcl缓冲液ph 8、四种蛋白质混合物的1.0ml等分试样混合，然后在37℃下用1ml 2.5mg/ml r-胰蛋白酶处理过夜。使每种消化物与2.0ml 50mg/ml dtt溶液混合，并且在90℃下加热15分钟。观察到沉淀。使样品剧烈涡旋2x30s。每个样品以13200rpm离心3分钟；将120ml上清液转移到hplc小瓶内。然后使hplc小瓶中的样品与5.0μl 20％tfa的h2o溶液混合，用于lc/ms分析。
[0186]
lc/ms/ms方法
[0187]
使用uplc-ms/ms分析制备的胰蛋白酶肽。将样品以50μl的体积直接注入waters acquity uplc csh c18(milford，ma，u.s.a.)(2.1
×
50mm，1.7μm粒度)内。在分析期间将柱加热至60℃。分离在waters acquity uplc系统上执行，其中流动相a由0.1％甲酸的水溶液组成，且流动相b由0.1％甲酸的乙腈溶液组成，伴随以0％流动相b以200μl/分钟平衡2分钟，以50μl/分钟的流速在23分钟内从0％线性增加到10％，在57分钟内增加到20％b，在30分钟内增加到30％，随后为以400μl/分钟的流速的多重锯齿形洗涤循环。在thermo scientific q exactive plus质谱仪(bremen，德国)上执行质谱分析。数据依赖性ms/ms如下执行：第一个事件是调查阳性质量扫描(230-1500的m/z范围)，随后为关于来自第一个事件的10种最丰富离子的10个hcd事件(28％nce)。使用鞘气流速15、辅助气体流速5、喷雾电压4kv、毛细管温度320℃和s-lens rf水平50来生成离子。分辨率对于调查扫描和ms/ms事件分别设定为35 000(5e6的agc靶标)和17 500(5e4的agc靶标)。最大离子注入时间对于调查扫描为250ms，对于其它扫描为300ms。对于单次重复计数使用60s的动态排除持续时间。
[0188]
hcp鉴定和定量
[0189]
开发了由从cho-k1_refseq_2014protein.fasta数据库(2014年8月23日从http：//www.chogenome.org下载)获得的序列构成的定制蛋白质数据库，以根据ms/ms数据预测hcp的身份。使用proteome discoverer软件包，版本1.4或2.3(thermo scientific，bremen，德国)与sequest ht搜索，针对该数据库用10ppm和0.02da的质量公差、以及严格的错误发现率(fdr)≤1％来搜索ms/ms数据。通过消除已评分为0和单一光谱命中、或单一光谱命中和≥10ppm的蛋白质和污染的人蛋白质，来执行进一步的肽/蛋白质过滤。来自关于每种hcp的前3种肽(如果可能的话)的蛋白质面积，以及关于三种掺料蛋白质r-胰蛋白酶、pcsk9和adh1的面积用于计算个别hcp浓度(ppm或ng hcp/mg mab)。
[0190]
表6a：关于mab5的分批1的过程中lc-ms hcp含量
[0191]
[0192][0193]
表6b：关于mab5的分批2的过程中lc-ms hcp含量
[0194]
[0195][0196]
表7：关于mab5的分批3、4和5的原料药lc-ms hcp含量
[0197][0198]
实施例6.mab7(美国专利号10，647,759中的201c
″
)纯化过程中的hcp减少
[0199]
mab7(美国专利号10,647,759中的抗体201c
″
)(lc是seq id no：25；hc是seq id no：26)制剂使用基本上如上文关于mab5所述的步骤进行制备，伴随以下微小差异：
[0200]
蛋白质捕获：
[0201]
蛋白a柱：mabselect sure
[0202]
装载：20-40g/l
[0203]
洗脱：20mm乙酸/5mm柠檬酸
[0204]
低ph病毒灭活和中和：
[0205]
滴定剂：20mm乙酸/5mm柠檬酸，ph 3.45
[0206]
时间：180分钟
[0207]
中和：ph 5.0，500mm tris碱
[0208]
aex层析：
[0209]
树脂：poros 50xq；
[0210]
装载：100-200g/l载量
[0211]
ph：7.0
[0212]
cex层析：
[0213]
树脂：poros 50hs
[0214]
装载：20-40g/l
[0215]
如实施例5中所述通过lc-ms测量hcp含量。对于mab7分批1和mab7分批2，在蛋白质捕获步骤后、在低ph病毒灭活后、在aex后、在cex后以及在tff后，测量hcp含量。结果显示于表8a和8b中
[0216]
表8a：关于mab7的分批1的过程中lc-ms hcp含量
[0217]
[0218][0219]
表8b：关于mab7的分批2的过程中lc-ms hcp含量
[0220]
[0221]
[0222][0223]
实施例7.深层过滤器类型和ph对深层过滤过程中的hcp减少的影响-mab5(多奈单抗)和mab6
[0224]
部分a-ph对hcp减少的影响
[0225]
两种抗体(mab5和mab6)使用基本上如实施例1中关于mab1所述的蛋白质捕获步骤进行制备，除了洗脱步骤用表9中所示的缓冲系统执行之外。总hcp含量通过elisa进行测量，给出约2800至约3200ppm的范围。在蛋白质捕获之后，低ph病毒灭活步骤基本上如实施例1中关于mab1所述的执行，随后为使用500mm tris碱ph未调整的缓冲液，在ph 5.0或ph 7.0下的中和步骤。使用载量为1000g/m2的x0sp深层过滤器，基本上如实施例1中关于mab1所述的执行深层过滤步骤。在深层过滤步骤后的hcp含量通过elisa进行测量。
[0226]
表9中的结果显示了，当施加于深层过滤器的混合物的ph为ph 7.0时，在深层过滤后，关于两种抗体的总hcp含量显著减少至小于≤50ppm。当施加于深层过滤器的混合物的ph为ph 5.0时，总hcp含量减少到较小的程度。
[0227]
表9.在蛋白a洗脱和深层过滤之后，mab5(多奈单抗)和mab6制剂中的hcp水平
[0228]
[0229]
部分b：深层过滤器和ph对mab5的hcp减少的影响
[0230]
mab5使用基本上如实施例5中所述的蛋白质捕获步骤进行制备。使洗脱物经受基本上如实施例5中所述的低ph病毒灭活和中和。对于深层过滤步骤，评估了四种不同的ph和深层过滤器设置：
[0231]
(i)b1hc过滤器+ph 5.1
[0232]
(ii)x0sp过滤器+ph 5.1
[0233]
(iii)x0sp过滤器+ph 6.2
[0234]
(iv)x0sp过滤器+ph 7.3
[0235]
(i)b1hc过滤器+ph 5.1
[0236]
mab5使用基本上如实施例5中所述的蛋白质捕获步骤进行制备。将500ml置于玻璃烧杯内，并且用特氟隆搅拌棒混合。蛋白a洗脱物的蛋白质浓度为12.5mg/ml。具有在烧杯中的500ml，总蛋白质含量为6250mg(12.5mg/ml x 500ml＝6250mg)。
[0237]
烧杯中的溶液的起始ph为3.98(温度＝18.1c)。用20mm乙酸/5mm柠檬酸将ph调整到3.45，以执行基本上如实施例5中所述的低ph病毒灭活步骤。
[0238]
在低ph病毒灭活步骤进行的同时，设置b1hc过滤器(微型pod或23sq cm，批号cp7na77798，部件mb1hc23cl3)。使用具有pendotech filter screening peristaltic泵送系统(k434694)与ohaus scout天平，k434696至k434699)的14号铂金硬化硅配管。所有过滤器都用pwtr以23ml/分钟(约600lmh)冲洗230ml/过滤器或100l/sqm。
[0239]
用0.25m tris碱(el19562-368，lb213，exp 4/15/2020)实现中和至ph 5.0。当ph达到5时溶液变得浑浊，并且最终ph测量为5.09(5.1)。浓度计算为7.27mg/ml(在ph 5下6250mg/860ml)。在搅拌ph 5溶液的同时，通过载量为997g/sqm(309m1 x 7.27mg/ml＝2.246g/0.0023sqm＝997g/sqm)的b1hc过滤器开始过滤。b1hc过滤器用45ml pwtr进行恢复冲洗。过滤器在恢复冲洗后基本上泵干。b1hc的最终体积为以5.13mg/ml的375.5ml，提供1.926g的85.8％产率。
[0240]
(ii)x0sp过滤器+ph 5.1或ph 6.3或ph 7.2
[0241]
mab5使用基本上如实施例5中所述的蛋白质捕获步骤进行制备。将500ml置于玻璃烧杯内，并且用特氟隆搅拌棒混合。蛋白a洗脱物的蛋白质浓度为15.75mg/ml。具有在烧杯中的500ml，总蛋白质含量为7875mg(15.75mg/ml x 500ml＝7875mg)。
[0242]
烧杯中的溶液的起始ph为4.05(温度＝18.1c)。用20mm乙酸/5mm柠檬酸将ph调整到3.45，以执行基本上如实施例5中所述的低ph病毒灭活步骤。
[0243]
在低ph病毒灭活步骤进行的同时，三个x0sp过滤器(微型pod或23sq cm，批次cp9aa93251，目录mx0sp23cl3)分别如上所述进行设置且冲洗。
[0244]
使用0.25m tris碱(el19562-368，lb213，exp 4/15/2020)实现中和i：
[0245]
用20ml 250mm tris碱，将第一个烧杯的ph调整到5.1。计算的浓度为9.04mg/ml。
[0246]
用27ml 250mm tris碱，将第二个烧杯的ph调整到6.3。计算的浓度为8.82mg/ml。
[0247]
用32ml 250mm tris碱，将第三个烧杯的ph调整到7.2。计算的浓度为8.67mg/ml。
[0248]
关于ph 6.3和7.2的沉淀物看起来粘稠(因为它在过滤结束时粘在玻璃的底部)，并且很可能在大小方面比ph 5.1更大。在搅拌三种溶液的同时，开始通过x0sp过滤器的过滤。
[0249]
ph 5.0x0sp在203ml的载量下达到25psi，然后切换为水恢复冲洗。载量计算为798g/sqm(9.04mg/m1 x 203ml＝1.835g/0.0023sq m＝798g/sq m)。
[0250]
过滤器用～45ml pwtr进行恢复冲洗。过滤器在恢复冲洗后基本上泵干。
[0251]
x0sp ph 5.1的最终体积＝以5.89mg/ml的278ml＝1.637g产率＝1.637g/1.835＝89.2％
[0252]
x0sp ph 6.3的最终体积＝以5.76mg/ml的365ml＝1.g产率＝2.102g/2.58＝81.5％
[0253]
x0sp ph 7.2的最终体积＝以5.52mg/ml的365ml＝2.015g/2.58＝78.1％
[0254]
(iii)aex层析
[0255]
深层过滤制剂各自经受基本上如实施例5中所述的aex。对于所有aex装料制剂，用250mm tris碱(批次el19562-368，lb213，exp 4-15-20，用于开发用途)将以ph 5的滤液和以ph 6的滤液(不是以7.2的滤液)ph调整到7.25，然后在ph 7.25下，使用以0.0526x体积的20mm tris，1mnacl，ph 7.0(el19562-862lb198，exp 9-30-2020)，添加nacl至50mm的最终浓度。所有装料制剂都在具有搅拌棒的玻璃烧杯中执行。使用600mg的每种滤液，以便以相同的量装载aex。所有aex装料ph都是7.1至7.3，并且所有电导率都是6.5+/-0.2ms。
[0256]
最终aex ms(在ph 5下)体积、mab5浓度、总mg和产率是：
[0257]
1.b1hc材料-以3.91mg/ml的155ml＝606.1mg或101％
[0258]
2.以ph 5.1的x0sp-以5.00mg/ml的120ml＝600mg或100％
[0259]
3.以ph 6.3的x0sp-以4.96mg/m1的121ml＝600.2mg或100％
[0260]
4.以ph 7.2的x0sp-以4.79mg/ml的126ml＝603.5mg或100.6％
[0261]
(iii)cex层析
[0262]
每种aex制剂经受基本上如实施例5中所述的cex层析。cex树脂上的实际载量如下：
[0263]
(i)以3.91mg/ml的b1hc制剂x装载的体积130ml x 0.85＝110.5ml＝432.1/17.28＝25.0mg/ml
[0264]
(ii)以5.00mg/ml以ph 5的x0sp装载的体积101.7ml x 0.85％＝86.4ml＝432/17.28＝25.0mg/ml
[0265]
(iii)以4.96mg/ml以ph 6.3的x0sp装载的体积＝102.5x0.85＝87.1ml＝432.0/17.28ml＝25.0mg/ml
[0266]
(iv)以4.79mg/ml以ph 7.2的x0sp装载的体积＝106.1x0.85＝90.2ml＝432.1/17.28＝25.0mg/ml
[0267]
关于每种条件的cex主流体积、浓度和产率如下：
[0268]
(i)以5.83mg/ml以ph 5.0的b1hc x ms体积＝64.1ml ms体积＝373mg/432.1mg＝86.3％
[0269]
(ii)以5.83mg/ml以ph 5的x0sp x 64.8ml ms体积＝377.8mg/432mg＝87.5％
[0270]
(iii)以5.80mg/ml以ph 6，3的x0sp＝64.8ml ms体积＝375.8mg/432.0mg＝87.0％
[0271]
(iv)以5.80mg/ml以ph 7.2的x0sp＝64.7ml ms体积＝375.3mg/432.1mg＝86.9％
[0272]
(v)通过lc-ms的hcp含量分析
[0273]
基本上如实施例5中所述的，使用lcm分析cex制剂的hcp含量。lc-ms数据在表10中提供。
[0274]
表10.在蛋白质捕获、低ph病毒灭活步骤、中和步骤和深层过滤后，mab5(多奈单抗)制剂中的宿主细胞蛋白质的含量
[0275]
[0276][0277]
表10中的数据显示了，在所有测试的ph下，在用xosp过滤器的深层过滤之后，总hcp含量的显著减少至小于≤50ppm。这与在用b1hc过滤器的深层过滤之后的hcp含量减少有利地比较。还值得注意的是，与较低的ph 5.1相比，在深层过滤步骤后的产率在ph 6.3和7.2下较低。因此，在高ph下hcp含量的减少可能被产率损失所抵消。用x0sp过滤器在ph 5.0下可见最佳性能。
[0278]
实施例8.在生物分子纯化过程中的离子强度的测定方法
[0279]
本文描述了基于在生物分子纯化单元过程中已知的缓冲液组合物用于估计离子强度的方法。溶液的离子强度(i)是该溶液中的离子浓度的量度，并且是种类浓度ci和关于所有种类的净电荷zi的函数。为了确定离子强度，使用公式i。
[0280][0281]
强电解质：对于以低浓度(例如，低于50mm)的强电解质，假定完全解离。伴随完全解离，很容易计算组成，使得离子强度计算简单明了。例如，50mm nacl的溶液解离，以给出各50mm的na
+
和cl-，具有0.5
×
[50mm
×12
+50mm
×
(-1)2]＝50mm的离子强度。作为另一个实例，50mm na2so4解离，以给出100mm的na
+
和50mm的so
42-，给出0.5
×
[100mm
×12
+50mm
×
(-2)2]＝150mm的离子强度。在没有缓冲种类的情况下，这些计算中预计接近中性的ph，使得来自水解离的离子浓度并不有意义地促成离子强度。水的解离常数被视为kw＝[h
+
][oh-]＝10-14
，其中[h
+
]＝10-ph
，其中方括号指示浓度。为了本文计算的目的，h
+
离子(例如，与水合氢离子相对)的物理解释是不必要的，并且同样地，区分h
+
浓度和活度也是不必要的。
[0282]
缓冲系统：对于缓冲系统，不能假定完全解离。必须使用缓冲液的酸解离常数来确定以酸和碱形式的缓冲液的比例。对于解离成h
+
和a-的一般酸ha，公式2涉及酸解离常数ka和种类浓度：
[0283][0284]
酸解离常数经常以pka＝-log
10
(ka)的对数形式使用。表示为pk
a，0
的热力学pka可在关于许多感兴趣的缓冲液的文献中找到。然而，由于活性系数与单位的偏差，除了在非常稀释的溶液中之外，缓冲液的有效pka与热力学值不同。对于本公开中考虑的适度稀释的溶液，使用扩展的debye h
ü
ckel方程或davies方程来解释非单位活性系数。关于文献中发现的一些常数的值可能略有不同，但给出在本公开中感兴趣的离子强度值范围内的相似结果。扩展的debye h
ü
ckel方程作为公式3提供：
[0285][0286]
davies方程作为公式4提供：
[0287][0288]
其中n＝2z-1，并且z是用于计算n的酸性缓冲液形式的净电荷(scopes，protein purification：principles and practices，2013)。
[0289]
由于pka是离子强度的函数，因此组成和离子强度不能独立地确定，而是方程组的部分。方程组包括上述关于离子强度的方程、关于每种缓冲液的酸解离常数和关于每种缓冲液的pka方程，并且还包括关于每种缓冲液的电中性条件和总种类平衡。使用这个方程组，可以估计几个值。例如，已知溶液ph可以用于估计缓冲液制剂的酸碱比率，或者相反地，酸碱比率可以用于估计溶液ph和相应的滴定体积。在这些应用的任一种中，都可以估计离子强度，以帮助指导洗脱剂和滴定剂选项的合理选择。
[0290]
为了计算与本公开中的缓冲系统有关的离子强度，例如用于深层过滤的进料材料的离子强度，需要溶液的缓冲液组成。可以基于过程中使用的缓冲液和滴定剂的体积和组
成合理地估计该组成。本领域已知的离子测量技术也可以用于估计组成。
[0291]
作为用于估计溶液组成的起点，一种可能的方法是假定亲和柱洗脱物池具有与洗脱剂相同的缓冲液组成，除了在洗脱物池的测量ph下进行缓冲之外。例如，如果用20mm乙酸、5mm乳酸从蛋白a柱中洗脱感兴趣的蛋白质，并且洗脱物池具有测量的ph 4.2，则假定洗脱物池的缓冲液组成为20mm乙酸盐、5mm乳酸盐和足够的naoh，以使ph达到4.2；这等于约～8.2mm naoh。因为仅总钠阳离子na
+
含量对于计算是重要的，所以假定洗脱物钠含量是源自乙酸钠、磷酸钠、氢氧化钠还是其任何组合并不重要，因此为了方便起见，使用将钠归于naoh的惯例。
[0292]
在使用洗脱剂组成和洗脱物ph来估计洗脱物的缓冲液组成后，然后考虑溶液滴定。例如，具有以ph 4.2的20mm乙酸盐、5mm乳酸盐、～8.2mm naoh的估计洗脱物组成，如果将ph降低到靶值3.45用于病毒灭活所需的20mm hcl体积等于起始体积的0.305倍，则根据稀释度将已知以ph 3.45的该过程中间体的组成。乙酸盐、乳酸盐和naoh将以其各自初始值的1/1.305倍存在(即～15.3mm乙酸盐、～3.8mm乳酸盐和～6.2mm naoh)，而hcl以其值的0.305/1.305存在于滴定剂中(～4.7mm hcl)。类似地，对于用250mm tris碱的中和，如果将ph升高到ph 7.0的靶标的比率是ph 3.45溶液体积的0.0743倍，则将施加1/1.0743和0.0743/1.0743的比率来发现中和溶液(～14.3mm乙酸盐、～3.6mm乳酸盐、～5.8mm naoh、～4.4mm hcl和～17.3mm tris)中的最终浓度。将所有已知值代入方程组(公式5至15)内，以计算离子强度：
[0293][0294]
[h
+
]+[na
+
]+[trish
+
]＝[oh-]+[乙酸盐-]+[乙酸盐-]+[cl-]
ꢀꢀꢀꢀ
(6)
[0295][0296][0297][0298][0299][0300][0301]
总tris＝[tris]+[trish
+
]
ꢀꢀꢀꢀ
(13)
[0302]
总乙酸盐＝[h乙酸盐]+[乙酸盐-]
ꢀꢀꢀꢀ
(14)
[0303]
总乳酸盐＝[h乳酸益]+[乳酸盐-]
ꢀꢀꢀꢀ
(15)
[0304]
其中关于tris、乙酸盐和乳酸盐的分别pk
a，o
值在22℃下视为8.15、4.76和3.86。关
于深层过滤进料材料的离子强度的最终估计值为22.1mm。
[0305]
如本文所述，蛋白质产物的缓冲能力不是直接建模的。因此，当使用强酸或强碱用于滴定时，在计算结果和经验滴定结果之间可能出现一些偏差。例如，当将蛋白a洗脱物滴定至低ph用于病毒灭活时，缓冲液计算通常低估所需的20mm hcl的经验量；所需的经验量可能比计算的估计值大50％左右。解决这种差异的一种方法是建模在较高ph下的亲和柱洗脱材料，凭经验调整该值，直到估计的滴定体积与实验值匹配。例如，在上文的实施例中，如果20mm hcl的量比最初估计的0.305比率高50％，则蛋白a洗脱物将建模为约ph 4.45而不是ph 4.2。对建模做出这种经验改变后，实施例中估计的离子强度定向减少，但仅少量：比最初的22.1mm估计值低21.9mm。相应地，得出结论任一方法都足以估计离子强度，以推导出本公开的优选实施方案。
[0306]
替代方法：离子含量测量方法可以用于确定深层过滤进料材料的缓冲液组成，以计算离子强度。这需要确认测量给出与任何已知量例如添加的滴定剂的量自我一致的结果。由于假定亲和柱洗脱物的缓冲液组成等价于洗脱剂的组成，但在不同的ph下，因此可以通过离子含量测量来确定真实组成的差异。例如，基于洗脱剂组成的量或测量值可以用于计算洗脱剂中的缓冲液组分的离子强度。
[0307]
通过引用并入
[0308]
本文引用的所有专利和出版物都在此通过引用以其整体并入。本文讨论的出版物仅因其在本技术的申请日期之前公开而提供。本文中的任何内容都不应被解释为承认本发明无权凭借在先发明而早于此类出版物。
[0309]
序列
[0310]
以下核酸和/或氨基酸序列在本公开中被提及并且在下文中提供用于参考。
[0311]
seq id no：1-巴尼韦单抗可变重链(vh)
[0312][0313]
seq id no：2-巴尼韦单抗可变轻链(vl)
[0314][0315]
seq id no：3-巴尼韦单抗重链(hc)
[0316][0317]
seq id no：4-巴尼韦单抗轻链(lc)
[0318][0319]
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[0320][0321]
seq id no：6-埃特司韦单抗可变轻链(vl)
[0322][0323]
seq id no：7-埃特司韦单抗重链(hc)
[0324]
[0325]
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[0326][0327]
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[0328][0329]
seq id no：10-贝特洛韦单抗可变轻链(vl)
[0330][0331]
seq id no：11-贝特洛韦单抗重链(hc)
[0332][0333][0334]
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[0335][0336]
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[0337]
[0338]
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[0339][0340]
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[0341][0342]
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[0343][0344][0345]
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[0369][0370]
seq id no：29-抗体201c(mab7)的lcdr3
[0371][0372]
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[0375]
[0376]
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[0377][0378]
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[0379][0380][0381]
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[0382][0383]
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[0384][0385][0386]
seq id no：36-抗体201c的hc dna序列
[0387]

技术特征：
1.一种减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，所述方法包括以下步骤：a.使蛋白质制剂经亲和层析柱处理；b.用由弱酸和强酸构成的酸的组合，从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，以获得包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物；c.将洗脱物的ph升高到高于约ph 5.0；和d.使洗脱物经深层过滤器处理，并且获得过滤的蛋白质制剂。2.权利要求1的方法，其中所述层析柱包含蛋白a、蛋白g或蛋白l亲和层析柱。3.权利要求1的方法，其中所述弱酸和强酸是至多约ph 7.3的一价酸。4.权利要求1的方法，其中所述弱酸是乙酸并且所述强酸是磷酸或乳酸。5.权利要求4的方法，其中所述乙酸的浓度为约20mm，并且其中所述强酸是磷酸，且其中所述磷酸的浓度为约5mm至约10mm。6.权利要求4的方法，其中所述乙酸的浓度为约20mm，并且其中所述强酸是乳酸，且其中所述乳酸的浓度为约5mm。7.权利要求1的方法，其进一步包括执行病毒灭活的步骤。8.权利要求1的方法，其进一步包括执行病毒灭活的步骤，其包括将来自从层析柱中洗脱蛋白质的所述步骤的洗脱物的ph调整到低于约ph 4.0，并且其中将洗脱物维持在低于约ph 4.0，持续约0分钟至约180分钟。9.权利要求8的方法，其中调整洗脱物的ph的所述步骤包括将所述洗脱物的ph调整到约ph 3.3至约ph 3.7。10.权利要求9的方法，其中将所述洗脱物的ph调整到约ph 3.5。11.权利要求8至10中任一项的方法，其中调整所述洗脱物的ph包括添加hcl、磷酸或乙酸和磷酸的组合中的任一种。12.权利要求1的方法，其中升高洗脱物的ph的所述步骤包括将所述ph升高到约ph 6.5至约ph 7.5。13.权利要求12的方法，其中将洗脱物的ph升高到约ph 7.0。14.权利要求12或13中任一项的方法，其中升高洗脱物的ph的步骤包括添加tris。15.权利要求1至14中任一项的方法，其中在将ph升高到高于约5.0的所述步骤的洗脱物具有约10mm至约45mm的离子强度。16.权利要求1至15中任一项的方法，其进一步包括使深层过滤的蛋白质制剂经受以下纯化和/或精制步骤中的一个或多个，以获得包含抗n3pglu aβ抗体的原料药制剂：病毒灭活、离子交换层析、病毒过滤、切向流过滤。17.权利要求1至16中任一项的方法，其中所述深层过滤器是基于纤维素/硅藻土的过滤器。18.权利要求17的方法，其中所述深层过滤器是b1hc过滤器、x0hc过滤器或zeta plus(zb media)过滤器。19.权利要求1至16中任一项的方法，其中所述深层过滤器是合成过滤器。20.权利要求19的方法，其中所述深层过滤器是c0sp过滤器、x0sp过滤器或emphaze aex hybrid purifier过滤器。
21.权利要求20的方法，其中所述深层过滤器是x0sp过滤器。22.权利要求17-21中任一项的方法，其中所述深层过滤器的孔径为至少约9μ至约0.1μ。23.权利要求22的方法，其中所述深层过滤器的孔径为至少约2μ至约0.1μ。24.权利要求23的方法，其中所述深层过滤器的孔径为约0.1μ。25.权利要求1-24中任一项的方法，其中所述深层过滤器上的洗脱物的ph为约5.0。26.权利要求1-24中任一项的方法，其中所述深层过滤器上的洗脱物的ph为约6.0。27.权利要求1-24中任一项的方法，其中所述深层过滤器上的洗脱物的ph为约7.0。28.权利要求1-27中任一项的方法，其中所述哺乳动物细胞是cho细胞。29.权利要求1至28中任一项的方法，其中所述蛋白质制剂包含收获的细胞培养液、捕获池或回收的蛋白质池。30.权利要求1至29中任一项的方法，其中所述抗n3pglu aβ抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异性抗体或抗体片段。31.权利要求30的方法，其中所述抗n3pglu aβ抗体是igg1抗体。32.权利要求1至31中任一项的方法，其中所述抗n3pglu aβ抗体包含重链(hc)和轻链(lc)，其中所述轻链包含轻链可变区(lcvr)并且所述重链包含重链可变区(hcvr)，其中所述lcvr包含氨基酸序列lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且所述hcvr包含氨基酸序列hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中lcdr1是kssqsllysrgktyln(seq id no：17)，lcdr2是avsklds(seq id no：18)，lcdr3是vqgthypft(seq id no：19)，hcdr1是gydftryyin(seq id no：20)，hcdr2是winpgsgntkynekfkg(seq id no：21)，并且hcdr3是egitvy(seq id no：22)。33.权利要求32的方法，其中所述抗n3pglu aβ抗体的lc包含lcvr，并且所述抗n3pglu aβ抗体的hc包含hcvr，其中所述lcvr是divmtqtplslsvtpgqpasisckssqsllysrgktylnwllqkpgqspqlliyavskldsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycvqgthypftfgqgtkleik(seq id no：13)，并且所述hcvr是qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgydftryyinwvrqapgqglewmgwinpgsgntkynekfkgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycaregitvywgqgttvtvss(seq id no：14)。34.权利要求32或权利要求33的方法，其中所述抗n3pglu aβ抗体的lc是divmtqtplslsvtpgqpasisckssqsllysrgktylnwllqkpgqspqlliyavskldsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycvqgthypftfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seq id no：15)，并且所述抗n3pglu aβ抗体的hc是qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgydftryyinwvrqapgqglewmgwinpgsgntkynekfkgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycaregitvywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seq id no：16)。35.权利要求34的方法，其中所述抗n3pglu aβ抗体是多奈单抗。36.权利要求32至35中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于100ppm(如通过lcms测量的)。
37.权利要求32-36中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：蛋白质s100-a6、蛋白质s100-a11、磷脂酶b样2蛋白、溶酶体保护蛋白、泛素40s核糖体蛋白s27a、激肽释放酶-11、丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1、补体c1r亚组分、主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1、热休克同源71kda蛋白和过氧化物还原酶-1。38.权利要求37的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的蛋白质s100-a6(如通过lcms测量的)。39.权利要求37或权利要求38的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的蛋白质s100-a11(如通过lcms测量的)。40.权利要求37-39中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约10ppm的磷脂酶b样2蛋白(如通过lcms测量的)。41.权利要求37-40中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的溶酶体保护蛋白(如通过lcms测量的)。42.权利要求37-41中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的泛素40s核糖体蛋白s27a(如通过lcms测量的)。43.权利要求37-42中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的激肽释放酶-11(如通过lcms测量的)。44.权利要求37-43中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1(如通过lcms测量的)。45.权利要求37-44中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm补体c1r亚组分(如通过lcms测量的)。46.权利要求37-45中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。47.权利要求37-46中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。48.权利要求37-47中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm热休克同源71kda蛋白(如通过lcms测量的)。49.权利要求37-48中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm过氧化物还原酶-1(如通过lcms测量的)。50.权利要求32至35中任一项的方法，其中所述原料药制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于100ppm(如通过lcms测量的)。51.权利要求32-35和50中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：蛋白质s100-a6、蛋白质s100-a11、磷脂酶b样2蛋白、溶酶体保护蛋白、泛素40s核糖体蛋白s27a、激肽释放酶-11、丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1、补体c1r亚组分、主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1、热休克同源71kda蛋白和过氧化物还原酶-1。52.权利要求51的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的蛋白质s100-a6(如通过lcms测量的)。53.权利要求51或权利要求52的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的蛋白质s100-a11(如通过lcms测量的)。54.权利要求51-53中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约10ppm的磷脂酶b
样2蛋白(如通过lcms测量的)。55.权利要求51-54中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的溶酶体保护蛋白(如通过lcms测量的)。56.权利要求51-55中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的泛素40s核糖体蛋白s27a(如通过lcms测量的)。57.权利要求51-56中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的激肽释放酶-11(如通过lcms测量的)。58.权利要求51-57中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1(如通过lcms测量的)。59.权利要求51-58中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm补体c1r亚组分(如通过lcms测量的)。60.权利要求51-59中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。61.权利要求51-60中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。62.权利要求51-61中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm热休克同源71kda蛋白(如通过lcms测量的)。63.权利要求51-62中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm过氧化物还原酶-1(如通过lcms测量的)。64.权利要求1-31中任一项的方法，其中所述抗n3pglu aβ抗体包含重链(hc)和轻链(lc)，其中所述轻链包含轻链可变区(lcvr)并且所述重链包含重链可变区(hcvr)，其中所述lcvr包含氨基酸序列lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且所述hcvr包含氨基酸序列hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中lcdr1是rasqslgnwla(seq id no：27)，lcdr2是yqastles(seq id no：28)。lcdr3是qhykgsfwt(seq id no：29)，hcdr1是aasgftfssypms(seq id no：30)，hcdr2是aisgsggstyyadsvkg(seq id no：31)，并且hcdr3是areggsgsyyngfdy(seq id no：32)。65.权利要求64的方法，其中所述抗n3pglu aβ抗体的lc包含lcvr，并且所述抗n3pglu aβ抗体的hc包含hcvr，其中所述lcvr是diqmtqspstlsasvgdrvtitcrasqslgnwlawyqqkpgkapklliyqastlesgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycqhykgsfwtfgqgtkveik(seq id no：23)，并且所述hcvr是evqllesggglvqpggslrlscaasgftfssypmswvrqapgkglewvsaisgsggstyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycareggsgsyyngfdywgqgtlvtvss(seq id no：24)。66.权利要求64或权利要求65的方法，其中所述抗n3pglu aβ抗体的lc是diqmtqspstlsasvgdrvtitcrasqslgnwlawyqqkpgkapklliyqastlesgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycqhykgsfwtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seq id no：25)，并且所述抗n3pglu aβ抗体的hc是evqllesggglvqpggslrlscaasgftfssypmswvrqapgkglewvsaisgsggstyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycareggsgsyyngfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvd
gvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seq id no：26)。67.权利要求64至66中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于10ppm(如通过lcms测量的)。68.权利要求64至67中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：多聚泛素、溶酶体保护蛋白、谷胱甘肽s-转移酶y1、40s核糖体蛋白s28、硫氧还蛋白同种型x1、基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1、肾小管间质性肾炎抗原样蛋白、部分细胞质肌动蛋白2同种型x2、半乳糖凝集素-1、过氧化物还原酶-1和角质蛋白α。69.权利要求68的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的多聚泛素(如通过lcms测量的)。70.权利要求68或69的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的溶酶体保护蛋白(如通过lcms测量的)。71.权利要求68-70中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的谷胱甘肽s-转移酶y1(如通过lcms测量的)。72.权利要求68-71中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质包含小于约1ppm的谷胱甘肽s-转移酶y1(如通过lcms测量的)。73.权利要求68-72中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的40s核糖体蛋白s28(如通过lcms测量的)。74.权利要求68-73中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的硫氧还蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。75.权利要求68-74中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。76.权利要求68-75中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的肾小管间质性肾炎抗原样蛋白(如通过lcms测量的)。77.权利要求68-76中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的部分细胞质肌动蛋白2同种型x2(如通过lcms测量的)。78.权利要求68-77中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的半乳糖凝集素-1(如通过lcms测量的)。79.权利要求68-78中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的过氧化物还原酶-1(如通过lcms测量的)。80.权利要求68-79中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的角质蛋白α(如通过lcms测量的)。81.权利要求64-66中任一项的方法，其中所述原料药制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于10ppm(如通过lcms测量的)。82.权利要求64-66和81中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：多聚泛素、溶酶体保护蛋白、谷胱甘肽s-转移酶y1、40s核糖体蛋白s28、硫氧还蛋白同种型x1、基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1、肾
小管间质性肾炎抗原样蛋白、部分细胞质肌动蛋白2同种型x2、半乳糖凝集素-1、过氧化物还原酶-1和角质蛋白α。83.权利要求82的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的多聚泛素(如通过lcms测量的)。84.权利要求82或83的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的溶酶体保护蛋白(如通过lcms测量的)。85.权利要求82-84中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的谷胱甘肽s-转移酶y1(如通过lcms测量的)。86.权利要求82-85中任一项的方法，其中所述原料药包含小于约1ppm的谷胱甘肽s-转移酶y1(如通过lcms测量的)。87.权利要求82-86中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的40s核糖体蛋白s28(如通过lcms测量的)。88.权利要求82-87中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的硫氧还蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。89.权利要求82-88中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。90.权利要求82-89中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的肾小管间质性肾炎抗原样蛋白(如通过lcms测量的)。91.权利要求82-90中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的部分细胞质肌动蛋白2同种型x2(如通过lcms测量的)。92.权利要求82-91中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的半乳糖凝集素-1(如通过lcms测量的)。93.权利要求82-92中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的过氧化物还原酶-1(如通过lcms测量的)。94.权利要求82-93中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的角质蛋白α(如通过lcms测量的)。95.一种组合物，其通过权利要求1-94中任一项的方法生产。96.一种减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗n3pglu aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，所述方法包括以下步骤：a)使蛋白质制剂经亲和层析柱处理；b)从层析柱中洗脱抗n3pglu aβ抗体，以获得包含抗n3pglu aβ抗体的洗脱物；c)必要时，将洗脱物的ph调整到ph 5.0至ph 7.5，使洗脱物经深层过滤器处理，并且获得过滤的蛋白质制剂，其中所述深层过滤器是完全合成的深层过滤器。97.权利要求96的方法，其中所述层析柱包含蛋白a、蛋白g或蛋白l亲和层析柱。98.权利要求96或97的方法，其中所述深层过滤器的孔径为至少约9μ至约0.1μ。99.权利要求98的方法，其中所述深层过滤器的孔径为至少约2μ至约0.1μ。100.权利要求99的方法，其中所述深层过滤器的孔径为约0.1μ。101.权利要求96-100中任一项的方法，其中所述深层过滤器是x0sp过滤器。102.权利要求96-101中任一项的方法，其中所述深层过滤器上的洗脱物的ph为约5.0。
a6(如通过lcms测量的)。116.权利要求114或权利要求115的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的蛋白质s100-a11(如通过lcms测量的)。117.权利要求114-116中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约10ppm的磷脂酶b样2蛋白(如通过lcms测量的)。118.权利要求114-117中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的溶酶体保护蛋白(如通过lcms测量的)。119.权利要求114-118中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的泛素40s核糖体蛋白s27a(如通过lcms测量的)。120.权利要求114-119中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的激肽释放酶-11(如通过lcms测量的)。121.权利要求114-120中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1(如通过lcms测量的)。122.权利要求114-121中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm补体c1r亚组分(如通过lcms测量的)。123.权利要求114-122中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。124.权利要求114-123中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。125.权利要求114-124中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm热休克同源71kda蛋白(如通过lcms测量的)。126.权利要求114-125中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm过氧化物还原酶-1(如通过lcms测量的)。127.权利要求109-112中任一项的方法，其中所述原料药制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于100ppm(如通过lcms测量的)。128.权利要求109-112和127中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：蛋白质s100-a6、蛋白质s100-a11、磷脂酶b样2蛋白、溶酶体保护蛋白、泛素40s核糖体蛋白s27a、激肽释放酶-11、丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1、补体c1r亚组分、主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1、热休克同源71kda蛋白、过氧化物还原酶-1。129.权利要求128的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的蛋白质s100-a6(如通过lcms测量的)。130.权利要求128或权利要求129的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的蛋白质s100-a11(如通过lcms测量的)。131.权利要求128-130中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约10ppm的磷脂酶b样2蛋白(如通过lcms测量的)。132.权利要求128-131中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的溶酶体保护蛋白(如通过lcms测量的)。133.权利要求128-132中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的泛素40s核糖体蛋白s27a(如通过lcms测量的)。
134.权利要求128-133中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的激肽释放酶-11(如通过lcms测量的)。135.权利要求128-134中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1(如通过lcms测量的)。136.权利要求128-135中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm补体c1r亚组分(如通过lcms测量的)。137.权利要求128-136中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。138.权利要求128-137中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。139.权利要求128-138中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm热休克同源71kda蛋白(如通过lcms测量的)。140.权利要求128-139中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm过氧化物还原酶-1(如通过lcms测量的)。141.权利要求96至108中任一项的方法，其中所述抗n3pglu aβ抗体包含重链(hc)和轻链(lc)，其中所述轻链包含轻链可变区(lcvr)并且所述重链包含重链可变区(hcvr)，其中所述lcvr包含氨基酸序列lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且所述hcvr包含氨基酸序列hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中lcdr1是rasqslgnwla(seq id no：27)，lcdr2是yqastles(seq id no：28)。lcdr3是qhykgsfwt(seq id no：29)，hcdr1是aasgftfssypms(seq id no：30)，hcdr2是aisgsggstyyadsvkg(seq id no：31)，并且hcdr3是areggsgsyyngfdy(seq id no：32)。142.权利要求141的方法，其中所述抗n3pglu aβ抗体的lc包含lcvr，并且所述抗n3pglu aβ抗体的hc包含hcvr，其中所述lcvr是diqmtqspstlsasvgdrvtitcrasqslgnwlawyqqkpgkapklliyqastlesgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycqhykgsfwtfgqgtkveik(seq id no：23)，并且所述hcvr是evqllesggglvqpggslrlscaasgftfssypmswvrqapgkglewvsaisgsggstyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycareggsgsyyngfdywgqgtlvtvss(seq id no：24)。143.权利要求141或权利要求142的方法，其中所述抗n3pgluaβ抗体的lc是diqmtqspstlsasvgdrvtitcrasqslgnwlawyqqkpgkapklliyqastlesgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycqhykgsfwtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seq id no：25)，并且所述抗n3pglu aβ抗体的hc是evqllesggglvqpggslrlscaasgftfssypmswvrqapgkglewvsaisgsggstyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycareggsgsyyngfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seq id no：26)。144.权利要求141-143中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于10ppm(如通过lcms测量的)。
145.权利要求141-144中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：多聚泛素、溶酶体保护蛋白、谷胱甘肽s-转移酶y1、40s核糖体蛋白s28、硫氧还蛋白同种型x1、基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1、肾小管间质性肾炎抗原样蛋白、部分细胞质肌动蛋白2同种型x2、半乳糖凝集素-1、过氧化物还原酶-1和角质蛋白α。146.权利要求145的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的多聚泛素(如通过lcms测量的)。147.权利要求145或146的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的溶酶体保护蛋白(如通过lcms测量的)。148.权利要求145-147中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的谷胱甘肽s-转移酶y1(如通过lcms测量的)。149.权利要求145-148中任一项的方法，其中所述组合物包含小于约1ppm的谷胱甘肽s-转移酶y1(如通过lcms测量的)。150.权利要求145-149中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的40s核糖体蛋白s28(如通过lcms测量的)。151.权利要求145-150中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的硫氧还蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。152.权利要求145-151中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。153.权利要求145-152中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的肾小管间质性肾炎抗原样蛋白(如通过lcms测量的)。154.权利要求145-153中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的部分细胞质肌动蛋白2同种型x2(如通过lcms测量的)。155.权利要求145-154中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的半乳糖凝集素-1(如通过lcms测量的)。156.权利要求145-155中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的过氧化物还原酶-1(如通过lcms测量的)。157.权利要求145-156中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的角质蛋白α(如通过lcms测量的)。158.权利要求141-143中任一项的方法，其中所述原料药制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于10ppm(如通过lcms测量的)。159.权利要求141-143和158中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：多聚泛素、溶酶体保护蛋白、谷胱甘肽s-转移酶y1、40s核糖体蛋白s28、硫氧还蛋白同种型x1、基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1、肾小管间质性肾炎抗原样蛋白、部分细胞质肌动蛋白2同种型x2、半乳糖凝集素-1、过氧化物还原酶-1和角质蛋白α。160.权利要求159的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的多聚泛素(如通过lcms测量的)。161.权利要求158或160的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的溶酶体保护蛋
白(如通过lcms测量的)。162.权利要求158-161中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的谷胱甘肽s-转移酶y1(如通过lcms测量的)。163.权利要求158-162中任一项的方法，其中所述原料药包含小于约1ppm的谷胱甘肽s-转移酶y1(如通过lcms测量的)。164.权利要求158-163中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的40s核糖体蛋白s28(如通过lcms测量的)。165.权利要求158-164中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的硫氧还蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。166.权利要求158-165中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。167.权利要求158-166中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的肾小管间质性肾炎抗原样蛋白(如通过lcms测量的)。168.权利要求158-167中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的部分细胞质肌动蛋白2同种型x2(如通过lcms测量的)。169.权利要求158-168中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的半乳糖凝集素-1(如通过lcms测量的)。170.权利要求158-169中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的过氧化物还原酶-1(如通过lcms测量的)。171.权利要求158-170中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的角质蛋白α(如通过lcms测量的)。172.一种组合物，其通过权利要求96-171中任一项的方法生产。173.一种药物组合物，其包含结合人n3pglu aβ的抗体(抗n3pglu aβ抗体)，其中所述抗n3pglu aβ抗体通过包括从哺乳动物宿主细胞中纯化抗n3pglu抗体的方法进行制备，并且其中所述组合物中的宿主细胞蛋白质(hcp)的总含量小于约100ppm(如通过lcms测量的)。174.根据权利要求173的药物组合物，其中所述哺乳动物细胞是cho细胞。175.根据权利要求173或权利要求174的药物组合物，其中所述抗n3pglu aβ抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异性抗体或抗体片段。176.根据权利要求175的药物组合物，其中所述抗n3pglu aβ抗体是igg1抗体。177.根据权利要求173-176中任一项的药物组合物，其中所述抗n3pglu aβ抗体包含重链(hc)和轻链(lc)，其中所述轻链包含轻链可变区(lcvr)并且所述重链包含重链可变区(hcvr)，其中所述lcvr包含氨基酸序列lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且所述hcvr包含氨基酸序列hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中lcdr1是kssqsllysrgktyln(seq id no：17)，lcdr2是avsklds(seq id no：18)，lcdr3是vqgthypft(seq id no：19)，hcdr1是gydftryyin(seq id no：20)，hcdr2是winpgsgntkynekfkg(seq id no：21)，并且hcdr3是egitvy(seq id no：22)。178.根据权利要求177的药物组合物，其中所述抗n3pglu aβ抗体的lc包含lcvr，并且所述抗n3pglu aβ抗体的hc包含hcvr，其中所述lcvr是divmtqtplslsvtpgqpasisckssqsllysrgktylnwllqkpgqspqlliyavskldsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycvqgthypftfgqg
tkleik(seq id no：13)，并且所述hcvr是qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgydftryyinwvrqapgqglewmgwinpgsgntkynekfkgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycaregitvywgqgttvtvss(seq id no：14)。179.根据权利要求177或权利要求178的药物组合物，其中所述抗n3pglu aβ抗体的lc是divmtqtplslsvtpgqpasisckssqsllysrgktylnwllqkpgqspqlliyavskldsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycvqgthypftfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seq id no：15)，并且所述抗n3pglu aβ抗体的hc是qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgydftryyinwvrqapgqglewmgwinpgsgntkynekfkgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycaregitvywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seq id no：16)。180.根据权利要求179的药物组合物，其中所述抗n3pglu aβ抗体是多奈单抗。181.根据权利要求173-180中任一项的药物组合物，其中所述组合物包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：蛋白质s100-a6、蛋白质s100-a11、磷脂酶b样2蛋白、溶酶体保护蛋白、泛素40s核糖体蛋白s27a、激肽释放酶-11、丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1、补体c1r亚组分、主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1、热休克同源71kda蛋白和过氧化物还原酶-1。182.根据权利要求181的药物组合物，其中所述组合物包含小于约5ppm的蛋白质s100-a6(如通过lcms测量的)。183.根据权利要求181或权利要求182的药物组合物，其中所述组合物包含小于约5ppm的蛋白质s100-a11(如通过lcms测量的)。184.根据权利要求181-183中任一项的药物组合物，其中所述组合物包含小于约10ppm的磷脂酶b样2蛋白(如通过lcms测量的)。185.根据权利要求181-184中任一项的药物组合物，其中所述组合物包含小于约5ppm的溶酶体保护蛋白(如通过lcms测量的)。186.根据权利要求181-185中任一项的药物组合物，其中所述组合物包含小于约5ppm的泛素40s核糖体蛋白s27a(如通过lcms测量的)。187.根据权利要求181-186中任一项的药物组合物，其中所述组合物包含小于约5ppm的激肽释放酶-11(如通过lcms测量的)。188.根据权利要求181-187中任一项的药物组合物，其中所述组合物包含小于约5ppm丝氨酸蛋白酶htra1同种型x1(如通过lcms测量的)。189.根据权利要求181-188中任一项的药物组合物，其中所述组合物包含小于约5ppm补体c1r亚组分(如通过lcms测量的)。190.根据权利要求181-189中任一项的药物组合物，其中所述组合物包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。191.根据权利要求181-190中任一项的药物组合物，其中所述组合物包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。
192.根据权利要求181-191中任一项的药物组合物，其中所述组合物包含小于约5ppm热休克同源71kda蛋白(如通过lcms测量的)。193.根据权利要求181-192中任一项的药物组合物，其中所述组合物包含小于约5ppm过氧化物还原酶-1(如通过lcms测量的)。194.根据权利要求173-176中任一项的药物组合物，其中所述抗n3pglu aβ抗体包含重链(hc)和轻链(lc)，其中所述轻链包含轻链可变区(lcvr)并且所述重链包含重链可变区(hcvr)，其中所述lcvr包含氨基酸序列lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且所述hcvr包含氨基酸序列hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中lcdr1是rasqslgnwla(seq id no：27)，lcdr2是yqastles(seq id no：28)。lcdr3是qhykgsfwt(seq id no：29)，hcdr1是aasgftfssypms(seq id no：30)，hcdr2是aisgsggstyyadsvkg(seq id no：31)，并且hcdr3是areggsgsyyngfdy(seq id no：32)。195.权利要求194的药物组合物，其中所述抗n3pglu aβ抗体的lc包含lcvr，并且所述抗n3pglu aβ抗体的hc包含hcvr，其中所述lcvr是diqmtqspstlsasvgdrvtitcrasqslgnwlawyqqkpgkapklliyqastlesgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycqhykgsfwtfgqgtkveik(seq id no：23)，并且所述hcvr是evqllesggglvqpggslrlscaasgftfssypmswvrqapgkglewvsaisgsggstyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycareggsgsyyngfdywgqgtlvtvss(seq id no：24)。196.权利要求194或权利要求195的药物组合物，其中所述抗n3pglu aβ抗体的lc是diqmtqspstlsasvgdrvtitcrasqslgnwlawyqqkpgkapklliyqastlesgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycqhykgsfwtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seq id no：25)，并且所述抗n3pglu aβ抗体的hc是evqllesggglvqpggslrlscaasgftfssypmswvrqapgkglewvsaisgsggstyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycareggsgsyyngfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seq id no：26)。197.根据权利要求194-196中任一项的药物组合物，其中所述组合物中的宿主细胞蛋白质(hcp)的总含量小于约10ppm(如通过lcms测量的)。198.根据权利要求197的药物组合物，其中所述组合物包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：多聚泛素、溶酶体保护蛋白、谷胱甘肽s-转移酶y1、40s核糖体蛋白s28、硫氧还蛋白同种型x1、基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1、肾小管间质性肾炎抗原样蛋白、部分细胞质肌动蛋白2同种型x2、半乳糖凝集素-1、过氧化物还原酶-1和角质蛋白α。199.根据权利要求198的药物组合物，其中所述组合物包含小于约1ppm的多聚泛素(如通过lcms测量的)。200.根据权利要求198或199的药物组合物，其中所述组合物包含小于约1ppm的溶酶体保护蛋白(如通过lcms测量的)。
201.根据权利要求198-200的药物组合物，其中所述组合物包含小于约1ppm的谷胱甘肽s-转移酶y1(如通过lcms测量的)。202.根据权利要求198-201的药物组合物，其中所述组合物包含小于约1ppm的谷胱甘肽s-转移酶y1(如通过lcms测量的)。203.根据权利要求198-202的药物组合物，其中所述组合物包含小于约1ppm的40s核糖体蛋白s28(如通过lcms测量的)。204.根据权利要求198-203的药物组合物，其中所述组合物包含小于约1ppm的硫氧还蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。205.根据权利要求198-204的药物组合物，其中所述组合物包含小于约1ppm的基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型x1(如通过lcms测量的)。206.根据权利要求198-205的药物组合物，其中所述组合物包含小于约1ppm的肾小管间质性肾炎抗原样蛋白(如通过lcms测量的)。207.根据权利要求198-206的药物组合物，其中所述组合物包含小于约1ppm的部分细胞质肌动蛋白2同种型x2(如通过lcms测量的)。208.根据权利要求198-207的药物组合物，其中所述组合物包含小于约1ppm的半乳糖凝集素-1(如通过lcms测量的)。209.根据权利要求198-208的药物组合物，其中所述组合物包含小于约1ppm的过氧化物还原酶-1(如通过lcms测量的)。

技术总结
本公开涉及在意图用于施用于患者的抗体的制造过程中，用于减少在宿主细胞中重组产生的抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法。可以执行所公开的方法，以便制备具有减少的宿主细胞蛋白质的治疗性抗体制剂。细胞蛋白质的治疗性抗体制剂。


技术研发人员：B
受保护的技术使用者：伊莱利利公司
技术研发日：2021.10.04
技术公布日：2023/8/5