一种固定化TwinsStrep-Tag融合蛋白的线粒体膜色谱柱、制备方法和应用

一种固定化twins strep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱柱、制备方法和应用
技术领域
1.本发明属于线粒体膜色谱柱制备技术领域，具体涉及一种基于strep-tactin(含半胱氨酸)的固定化twins strep-tag融合蛋白的亲和型线粒体膜色谱柱及其制备方法和应用。


背景技术：

2.线粒体膜色谱相对细胞膜色谱法可以更进一步靶向到亚细胞器，降低了其他亚细胞器膜对实验结果的影响，使得药物筛选目的更加明确，机理研究更加清晰，可以从复杂成分中快速筛选出靶向线粒体调节分子。然而现有的关于线粒体膜色谱法的研究较少，且存在一定的问题，主要体现在以下几个方面：第一是制备过程复杂，繁琐、耗时，需要通过复杂设备提取出纯度较高的线粒体；二是特异性较差，线粒体内外膜上存在较多的蛋白靶点，不能指示出所筛选药物具体靶向的线粒体蛋白，机理不明确，这也为后期筛选出的活性成分药理研究带来新的问题；第三是化学键合可能会破坏蛋白结构；第四是仅研究了线粒体膜受体与一些已知阳性药物的结合能力及膜上蛋白的性能，且结合能力差，靠吸附作用并不能维持膜蛋白的稳定性，还不能用于靶向线粒体膜蛋白药物的高通量筛选。
3.strep-tactin重组蛋白与twins strep-tag之间的特异性亲和作用是自然界中最强的非共价作用之一，twins strep-tag是一种由18个氨基酸组成的蛋白融合标签，其分子量小几乎不影响蛋白质天然结构，因twins strep-tag与strep-tactin特异性结合是可逆的，所以常用于重组蛋白的纯化利用。本发明将twins strep-tag用于链接线粒体膜与氨基丙基固定相，最大化保持蛋白质生物活性，也解决了线粒体膜与固定基质物理吸附的结合力弱的问题。
4.因此，基于目前尚无关于twins strep-tag与strep-tactin重组蛋白的跨膜蛋白受体固定化技术的报道，为提供高效稳定的线粒体膜色谱固定相，构建了一种基于strep-tactin(含半胱氨酸)的固定化twins strep-tag融合蛋白的亲和型线粒体膜色谱柱制备方法。


技术实现要素：

5.针对上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种基于strep-tactin(含半胱氨酸)的固定化twins strep-tag融合蛋白的亲和型线粒体膜色谱柱及其制备方法和应用，该线粒体膜色谱柱稳定性较好，特异性强，制备方法操作简单，易于实现。
6.本发明首先将4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯键合到氨基丙基硅胶上，作为strep-tactin(含半胱氨酸)键合到硅胶上的linker，接下来线粒体膜上的twins strep-tag融合受体即可特异性地与底物发生亲和结合作用，从而使得融合蛋白间接固定在硅胶表面制得线粒体膜固定相。再通过湿法装入色谱柱中，构成一种基于固定化strep-tactin融合蛋白的线粒体膜色谱柱。该固定化strep-tactin融合蛋白的线粒体膜
色谱柱稳定性高，特异性强。解决了现有的线粒体膜色谱柱存在特异性较差的问题。
7.为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
8.一方面，本发明提供了一种固定化twins strep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱固定相，所述线粒体膜色谱固定相是将包含半胱氨酸的strep-tactin蛋白键合到硅胶上，取线粒体膜上的twins strep-tag融合蛋白受体特异性结合上述包含半胱氨酸的strep-tactin蛋白，使twins strep-tag融合蛋白固定在硅胶表面，得到线粒体膜色谱固定相。
9.所述的一种固定化twins strep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱固定相，所述硅胶为氨基丙基硅胶；所述包含半胱氨酸的strep-tactin蛋白通过4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯进行化学反应键合到硅胶上。
10.第二方面，本发明提供了一种固定化twins strep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱柱，所述线粒体膜色谱柱是将权利要求1所述的基于strep-tactin的固定化融合蛋白的线粒体膜色谱固定相采用湿法装柱制得。
11.第三方面，本发明提供了一种任一项所述的固定化twins strep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱固定相的制备方法，包括以下步骤：
12.(1)称取氨基丙基硅胶，并使其活化；称取4-二甲氨基吡啶和4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯溶解在干燥的n,n-二甲基甲酰胺溶液中，获得溶液；
13.(2)将上述活化后的氨基丙基硅胶加入到上述溶液中，在室温避光下充分搅拌反应，离心后收集沉淀，清洗后干燥，制得4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰的硅胶固定相；
14.(3)称取含有半胱氨酸的strep-tactin用磷酸钾缓冲液清洗后，溶解在磷酸钾缓冲溶液中制备悬液，加入上述4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰的硅胶固定相，避光搅拌，充分反应，制得包含半胱氨酸的strep-tactin修饰的硅胶固定相；
15.(4)培养twins strep-tag融合蛋白高表达细胞系，当细胞计数不低于107个时，去除培养基，获得twins strep-tag融合蛋白细胞，分离出线粒体；
16.(5)超声破碎上述线粒体，制备线粒体膜悬液，将线粒体膜悬液加入到上述步骤(3)得到的包含半胱氨酸的strep-tactin修饰的硅胶固定相中，均匀搅拌0.5～1h后，得到以包含半胱氨酸的strep-tactin修饰的硅胶为载体的线粒体膜固定相。
17.所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述活化的条件包括：80～120℃烘箱干燥12～24h；所述4-二甲氨基吡啶、4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯与活化后的氨基丙基硅胶的加入质量比为12:25:400～12:25:100；
18.步骤(2)中所述搅拌反应的时间为12～24h。
19.所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述含有半胱氨酸的strep-tactin与4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰的硅胶固定相的质量比为1:10～2:5；所述避光搅拌的条件为：温度4℃，时间30～40h；磷酸钾缓冲溶液的ph为7.0，浓度为1.3mol/l。
20.所述的制备方法，步骤(4)中所述分离出线粒体的具体步骤包括：将获得的twins strep-tag融合蛋白细胞用低渗缓冲液混悬后，置于冰上孵育，进行破碎，在线粒体分离介质存在下通过差速离心分离出线粒体。
21.所述的制备方法，所述低渗缓冲液为10mmol/ltris base、10mmol/l氯化钠、2.5mmol/l氯化镁的混合溶液；所述线粒体分离介质为10mmol/l tris base、250mmol/l蔗糖、1mmol/ledta二钠盐。
22.所述的固定化twins strep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱固定相，或所述的固定化twins strep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱柱在筛选药物活性成分中的应用。
23.所述的固定化twins strep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱固定相，或所述的固定化twins strep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱柱在筛选靶向twins strep-tag融合蛋白的调节分子中的应用。
24.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
25.本发明公开的基于包含半胱氨酸的strep-tactin的twins strep-tag融合蛋白的亲和型线粒体膜色谱柱将strep-tactin(含半胱氨酸)共价键合到硅胶上，线粒体膜上的twins strep-tag融合受体即可特异性地与底物作用，形成稳定的亲和体系，从而使得twins strep-tag融合蛋白间接固定在硅胶表面，将线粒体膜从混合体系中富集在硅胶表面。
26.本发明一方面可以以稳定亲和结合的方式实现线粒体膜在硅胶上的固定，从而提高线粒体膜色谱柱的稳定性。另一方面，由于靶标蛋白与twins strep-tag的融合，可特异性地与底物strep-tactin作用，即线粒体膜色谱柱上只存在线粒体膜靶标受体，无其他膜受体的干扰，大大提高了其特异性。本发明线粒体膜色谱柱可靶向线粒体膜上特定蛋白，基于靶蛋白与活性效应分子间的特异性结合，从复杂成分中高通量筛选与目标蛋白具有相互作用的小分子化合物，适用于线粒体靶向膜上特定蛋白的效应分子、药物分子筛选。同时，该制备方法操作简单，易于实现。
附图说明
27.图1为基于包含半胱氨酸的strep-tactin的twins strep-tag融合蛋白的亲和型线粒体膜色谱柱制备流程图；
28.图2为氨基丙基硅胶(nh
2-sio2)，4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰硅胶(smcc-sio2)，strep-tactin(含半胱氨酸)修饰硅胶(strep-tactin-sio2)的红外谱图；
29.图3为氨基丙基修饰硅胶(nh
2-sio2)，4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰硅胶(smcc-sio2)，strep-tactin(含半胱氨酸)修饰硅胶(strep-tactin-sio2)的x射线光电子能谱图。
具体实施方式
30.为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
31.术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包
含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
32.实施例1：固定化twins strep-tag融合蛋白线粒体膜色谱柱的制备
33.本发明基于包含半胱氨酸的strep-tactin的twins strep-tag融合蛋白的亲和型线粒体膜色谱柱制备流程图如图1所示，固定化twins strep-tag融合蛋白线粒体膜色谱柱的制备方法，包括以下步骤：
34.1)氨基丙基硅胶固定相的活化
35.称取大孔氨基丙基硅胶400mg，100℃干燥24h，得到活化氨基丙基硅胶备用。
36.2)4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯键合氨基丙基硅胶固定相的制备
37.先将12mg的4-二甲氨基吡啶和25mg的4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯溶解在干燥的n,n-二甲基甲酰胺溶液中，再将400mg活化的氨基丙基硅胶逐渐加入，室温下避光搅拌24h，1000
×
g离心5min，收集沉淀，并用干燥的n,n-二甲基甲酰胺溶液洗涤5次，100℃干燥24h得4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯键合氨基丙基硅胶固定相。
38.3)strep-tactin(含半胱氨酸)键合氨基丙基硅胶固定相的制备
39.称取50mg 4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰的氨基丙基硅胶，并用ph 7.0磷酸钾缓冲液清洗三次，加入溶解在ph 7.01.3mol/l磷酸钾缓冲液的5mg strep-tactin(含半胱氨酸)溶液，4℃下避光搅拌40h得到strep-tactin修饰的氨基丙基硅胶固定相。
40.采用红外光谱，x射线光电子能谱对氨基丙基色谱固定相、4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰的硅胶固定相、strep-tactin修饰的硅胶固定相进行表征。测试结果如图2为氨基丙基硅胶(nh
2-sio2)，4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰硅胶(smcc-sio2)，strep-tactin(含半胱氨酸)修饰硅胶(strep-tactin-sio2)的红外谱图。其中，smcc-sio2红外谱图上在1760cm-1
出现了羰基的振动吸收峰，说明4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯已经成功键合到了氨基丙基硅胶色谱固定相上。strep-tactin-sio2红外谱图上2955cm-1
出现的对应strep-tactin蛋白的甲基。
41.为了进一步验证所制备的strep-tactin键合硅胶固定相，采用x射线光电子能谱仪对其进行验证，x射线光电子能谱峰可以反映所含元素含量比例。如图3为氨基丙基硅胶(nh
2-sio2)，4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰硅胶(smcc-sio2)，strep tactin(含半胱氨酸)修饰硅胶(strep-tactin-sio2)的的x射线光电子能谱图。在xps谱图中，从nh
2-sio2到smcc-sio2再到strep tactin-sio2，n含量上升，说明4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯和strep-tactin蛋白被键合在硅胶上，strep tactin-sio2的s特征信号出现，也进一步说明strep-tactin蛋白被键合在硅胶上。
42.4)线粒体膜色谱固定相的制备
43.含twins strep-tag-cpt1a基因的慢病毒的构建：使用含有twins strep-tag-cpt1a基因的慢病毒质粒颗粒对hek293细胞进行感染，收集病毒液。简言之，常规培养
hek293t细胞，在6cm培养皿内接种hek293t细胞，确保次日细胞密度达80％。此时取无菌1.5ml ep管，加入
△
8.9，vsvg，plv[exp]-puro-ef1a》twins strep-tag-hcpt1a:t2a:egfp质粒各2μg，加入36μl1mg/ml的pei溶液和500μl opti-培养基，充分混匀后静置15min，将混合液逐滴加入上述含3ml完全培养基的单层细胞培养皿中，轻轻摇动混匀后置于含5％co2的37℃温箱孵育，转染6～8h后更换培养基，加入3ml完全培养基，将细胞放置温箱继续孵育。收取48h、72h的上清液，1500rpm离心5min，收集含病毒上清。
[0044]
高表达twins strep-tag-cpt1a重组细胞的构建：取上述方法制备得到的含病毒上清对hek293细胞进行侵染，并通过puromycin筛选获得稳定的twins strep-tag-cpt1a高表达的重组细胞。简言之，在6孔板内接种hek293细胞(确保次日侵染前细胞密度约为30％～40％)，细胞贴壁后，吸去培养基，加入1.5ml完全培养基、1.5ml上述方法制备的含病毒上清液和3μl 10μg/μl polybrene。侵染24h后换新鲜培养基，侵染48～96h后在倒置荧光显微镜观察绿色荧光表达情况，估计慢病毒侵染hek293细胞的效率，在侵染效率达到60％～80％时，加入1:5000puromycin(10mg/ml)进行药物筛选，同时设立一个hek293细胞对照皿，加入1:5000puromycin(10mg/ml)，作为puromycin是否有效的对照，每隔一天换用含puromycin的培养基，以替换含大量死细胞的培养基，直到抗性群落能被识别出，对获得的具有puromycin抗性基因的阳性twins strep-tag-cpt1a-hek293细胞进行培养，进行传代培养，鉴定成功后冻存用于后续实验。
[0045]
培养上述twins strep-tag融合蛋白高表达细胞系，当细胞计数不低于107个时，吹下后1000g 4℃条件下离心5min，除去培养基取沉淀物，加入10mmol/l的pbs缓冲液重新混悬并于1000g 4℃条件下离心5min，吸取细胞表面残留的培养基，重复3次，将培养好的细胞分离出来。用2ml低渗缓冲溶液混悬细胞后置于冰上孵育10min，待细胞膨胀，然后浆细胞悬液转入dounce玻璃匀浆器内，研杵上下40次破碎细胞释放出细胞器。然后加入2.5
×
等渗缓冲液至溶液为1
×
等渗液，充分混匀，中和低渗缓冲溶液。匀浆好的样品在1300g 4℃离心10min，上清在17000g 4℃离心15min后所得沉淀用1
×
等渗缓冲液重悬，10000g 4℃离心10min，所得沉淀即为线粒体，将收集到的线粒体沉淀用10mmol/l的pbs重悬后超声破碎即得线粒体膜悬液，再将线粒体膜悬液加入到50mg strep-tactin修饰的硅胶固定相，置于磁力搅拌器上于4℃条件搅拌1h，利用twins strep-tag与其特异性结合底物strep-tactin的高特异性识别和稳定亲和作用结合使线粒体膜固定在strep-tactin修饰的硅胶固定相表面，即得线粒体色谱固定相。
[0046]
5)线粒体膜色谱柱的建立
[0047]
将得到的固定化twins strep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱固定相利用rpl-zd10装柱机湿法装入10mm(l)
×
2.0mm(i.d.)的柱芯中，即得基于固定化twins strep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱柱。
[0048]
实施例2：基于固定化twins strep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱柱的效果验证
[0049]
柱内与柱间重复性主要以cpt1a激动剂黄芩苷在线粒体膜色谱柱上的保留时间为指标，柱寿命以黄芩苷的保留时间衰减曲线半衰期为指标。制备一根cpt1a-strep tactin-tag亲和型线粒体膜色谱柱，置于液相色谱中，充分平衡后，连续进10μl 10mmol/l的黄芩苷样品5次，分别记录每次进样的保留时间。柱间差异性为按照同样的方法分别同时制备3根cpt1a-strep tactin-tag亲和型线粒体膜色谱柱，置于液相色谱仪内应用相同的色谱条件
充分平衡后，分别进10μl 10mmol/l的黄芩苷样品，分别记录每根色谱柱的保留时间。柱寿命实验使用1根cpt1a-strep tactin-tag亲和型线粒体膜色谱柱，连续每日进样记录保留时间，直至保留时间衰减殆尽。结果表明单日柱内重复性5次保留时间的rsd≤3％，柱间rsd≤4％，单根柱保留活性半衰期为7天。这些结果表明cpt1a-strep tactin-tag亲和型线粒体膜色谱柱的重复性良好，满足分析需求，生物活性保持时间较长。
[0050]
以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。

技术特征：
1.一种固定化twinsstrep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱固定相，其特征在于，所述线粒体膜色谱固定相是将包含半胱氨酸的strep-tactin蛋白键合到硅胶上，取线粒体膜上的twins strep-tag融合蛋白受体特异性结合上述包含半胱氨酸的strep-tactin蛋白，形成稳定的亲和体系，使twinsstrep-tag融合蛋白固定在硅胶表面，得到线粒体膜色谱固定相。2.如权利要求1所述的一种固定化twinsstrep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱固定相，其特征在于，所述硅胶为氨基丙基硅胶；所述包含半胱氨酸的strep-tactin蛋白通过4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯进行化学反应键合到硅胶上。3.一种固定化twinsstrep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱柱，其特征在于，所述线粒体膜色谱柱是将权利要求1所述的基于strep-tactin的固定化融合蛋白的线粒体膜色谱固定相采用湿法装柱制得。4.一种如权利要求1或2所述的固定化twinsstrep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱固定相的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)称取氨基丙基硅胶，并使其活化；称取4-二甲氨基吡啶和4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯溶解在干燥的n,n-二甲基甲酰胺溶液中，获得溶液；(2)将上述活化后的氨基丙基硅胶加入到上述溶液中，在室温避光下充分搅拌反应，离心后收集沉淀，清洗后干燥，制得4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰的硅胶固定相；(3)称取含有半胱氨酸的strep-tactin用磷酸钾缓冲液清洗后，溶解在磷酸钾缓冲溶液中制备悬液，加入上述4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰的硅胶固定相，避光搅拌，充分反应，制得包含半胱氨酸的strep-tactin修饰的硅胶固定相；(4)培养twinsstrep-tag融合蛋白高表达细胞系，当细胞计数不低于107个时，去除培养基，获得twinsstrep-tag融合蛋白细胞，分离出线粒体；(5)超声破碎上述线粒体，制备线粒体膜悬液，将线粒体膜悬液加入到上述步骤(3)得到的包含半胱氨酸的strep-tactin修饰的硅胶固定相中，均匀搅拌0.5～1h后，得到以包含半胱氨酸的strep-tactin修饰的硅胶为载体的线粒体膜固定相。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述活化的条件包括：80～120℃烘箱干燥12～24h；所述4-二甲氨基吡啶、4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯与活化后的氨基丙基硅胶的加入质量比为12:25:400～12:25:100；步骤(2)中所述搅拌反应的时间为12～24h。6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述含有半胱氨酸的strep-tactin与4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰的硅胶固定相的质量比为1:10～2:5；所述避光搅拌的条件为：温度4℃，时间30～40h；磷酸钾缓冲溶液的ph为7.0，浓度为1.3mol/l。7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述分离出线粒体的具体步骤包括：将获得的twinsstrep-tag融合蛋白细胞用低渗缓冲液混悬后，置于冰上孵育，进行破碎，在线粒体分离介质存在下通过差速离心分离出线粒体。8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述低渗缓冲液为10mmol/ltrisbase、10mmol/l氯化钠、2.5mmol/l氯化镁的混合溶液；所述线粒体分离介质为10mmol/ltrisbase、250mmol/l蔗糖、1mmol/ledta二钠盐。
9.如权利要求1或2所述的固定化twinsstrep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱固定相，或如权利要求3所述的固定化twinsstrep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱柱在筛选药物活性成分中的应用。10.如权利要求1或2所述的固定化twinsstrep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱固定相，或如权利要求3所述的固定化twinsstrep-tag融合蛋白的线粒体膜色谱柱在筛选靶向线粒体的效应分子中的应用。

技术总结
本发明一种固定化TwinsStrep-Tag融合蛋白的线粒体膜色谱柱、制备方法和应用，属于线粒体膜色谱柱制备技术领域。该方法首先将包含半胱氨酸的Strep-Tactin蛋白键合到硅胶上，取线粒体膜上的TwinsStrep-tag融合蛋白受体特异性结合上述包含半胱氨酸的Strep-Tactin蛋白，形成稳定的亲和体系，使Twins Strep-tag融合蛋白固定在硅胶表面，得到线粒体膜色谱固定相，采用湿法装柱，制得固定化TwinsStrep-Tag融合蛋白的线粒体膜色谱柱。本发明方法制备的线粒体膜色谱柱可靶向线粒体膜上特定蛋白，从复杂成分中高通量筛选与目标蛋白具有相互作用的小分子化合物。用的小分子化合物。用的小分子化合物。


技术研发人员：龙建纲 苏武 时乐 孔宇
受保护的技术使用者：西安交通大学
技术研发日：2023.04.13
技术公布日：2023/8/5