用于治疗冠状病毒、流感和急性呼吸窘迫综合征的方法和组合物与流程

用于治疗冠状病毒、流感和急性呼吸窘迫综合征的方法和组合物
1.本发明专利申请要求2021年8月10日提交的美国专利申请序列号17/398,156和2020年10月10日的美国临时专利申请号63/063,528的专利和优先权，所述专利申请以引用的方式并入本公开中。
技术领域
2.本发明涉及用于治疗冠状病毒诸如covid-19、其类似物、后代和变体、流感和急性呼吸窘迫综合征的方法和组合物。


背景技术：

3.目前不存在用于covid-19或未来出现的新冠状病毒的一致护理标准并且许多当前开发集中于可以停止病毒传播的想法的抗病毒活性的疫苗接种开发。在covid-19冠状病毒进程期间一个死亡原因是急性呼吸窘迫综合征(ards)，其为充当气体交换器的肺的急性衰竭。ards并非疾病，而是具有多种原因并可由败血症、创伤、手术并发症、大量输血或胃部内容物抽吸所触发的综合征。ards也由病毒感染(冠状病毒、汉他病毒、疱疹病毒和流感病毒)引起。当前covid-19冠状病毒大流行前，美国ards的发生率为每年200,000位患者，死亡率为22-33％。尚不存在完全发展的ards的有效治疗，这是当covid-19冠状病毒发展到形成ards和对除肺以外的器官的损伤时会导致死亡的原因。本发明的ards治疗由低体积机械通风和静脉内流体的保守性管理组成。避免出现ards的最好机会是预防败血症或弥漫性肺泡损伤进展成完全发展的威胁生命的ards。在许多患者中后，ards之后发生肾衰竭并且有时发生多器官衰竭。存在用于早期干预的治疗窗口，即向处于发展ards的风险下的患者施用药物，因为发展ards的中值时间为住院后的2-7天。对于covid-19冠状病毒患者，时间窗口通常为数天。感染covid-19的患者当他们患有发热、肺浸润和高c反应性蛋白(crp)水平时并且当他们患有副发病变如心血管疾病或慢性肺病时就处于风险下(25)。
4.研究表明，covid-19冠状病毒具有三个阶段，如附图的图1所示：第1阶段-早期感染，第2阶段-肺部阶段，以及第3阶段-过度炎症阶段。在早期感染期间，患者具有轻度症状，包括发热、干咳、疲劳、肌痛、头痛、呼吸困难以及(在约50％患者中)gi症状诸如恶心和呕吐或腹泻。在肺部阶段中，患者经历呼吸短促(呼吸困难)和血氧不足以及胸部图像上的异常浸润、转氨酶升高、低正常原降钙素。在过度炎症阶段中，患者经历ards、全身性炎症反应综合征(sis)和由于血栓栓塞现象的多器官功能障碍(肾脏、心脏、肝脏、cns)。在该灾难性阶段中，炎症标志物(il-1、il-6和il-8)升高，肌钙蛋白泄漏指示心肌损伤并且nt-probnp升高反映心肌机能不全。疾病进展并且严重性从第1阶段进展到第2阶段到第3阶段。在第3阶段中，许多患者死亡(25)。
5.covid-19并不总导致严重疾病。实际上，据估计，小百分比的感染病毒的患者需要住院。对于住院患者，死亡的百分比根据患者年龄和任何预先存在的病状而变化。对于进展到该疾病的第2阶段和第3阶段的那些患者，死亡概率相当高。covid-19疾病的致命性器官
临床表现为大急性肺损伤伴有或不伴有肺动脉高血压(19)，导致呼吸衰竭和心血管受累，导致心力衰竭(引用1-5)。潜在两种临床表现为由多种细胞/细胞相互作用驱动的炎症和原位血栓形成，后者为内皮细胞炎症的结果。
6.通常可接受的是，患有covid-19诱导性疾病且患有合并症的老年患者和免疫受损的患者可能发展严重疾病并且死亡是由于肺衰竭和心脏衰竭以及多器官衰竭。根据li等人(3)的研究，肺以外的大部分常见器官损伤为心脏损伤。尽管心脏损伤的精确机制并不完全清楚，但压倒性的免疫炎症反应和细胞因子风暴是最可能的原因。多达8％的严重疾病患者表现出肌钙蛋白泄漏，从而反映了心肌组织损伤。在儿童中，已经认识到了血管系统的kawasaki样炎症。虽然最初已发现ii型肺泡细胞和巨噬细胞被covid-19感染，但现在还已知内皮细胞被感染。已认识到血栓临床表现导致急性冠状动脉综合征；也已经描述了心肌炎和致命性心律失常(1,2,4)。
7.由covid-19发展的心脏衰竭和肺衰竭综合征所共有的症状为发炎内皮(内皮可以被认为是器官并且值得注意的是，身体内任何位置处的最大数目的内皮细胞是在肺中)，其变成多种细胞类型集合体的聚集地，从而堵塞血管和毛细管(不仅是巨噬细胞，而且是来自这些集合体的血小板、嗜中性粒细胞和红血球)。我们将“血管内炎症”的病理学关键性机制定义为粘附至发炎内皮细胞的多细胞聚集体的形成。
8.实验性covid-19-感染的恒河猴发展了急性肺损伤，其特征在于大血管周淋巴细胞集群和填充有巨噬细胞和嗜中性粒细胞的肺泡(6)。
9.人类研究检查了来自患有严重肺损伤的covid-19感染的患者的支气管肺灌洗液(balf)并且报告了多种炎症细胞的存在，许多这些炎症细胞是骨髓来源的，如骨髓样树突细胞、巨大细胞、浆细胞和t淋巴细胞。作者描述了高度促炎性巨噬细胞微环境以及表现nf-κb和stat 1和stat2的m1和m2巨噬细胞的存在(7)。nf-κb为负责转录许多编码炎性介质的基因的主要转录因子。
10.其他最新文章讨论了氧化剂应激的作用(8,9)。在血管内炎症的上下文中，预期产生活性氧并且了解其细胞损伤可能性。虽然本发明未解决covid-19相关性肺损伤是否是ards的特殊形式，但是毫无疑问炎症，包括血管内炎症，在引起器官损伤方面起作用，并且患者的死亡如果不与ards相同，也是与其类似的。ackermann等人(24)的最新报告说明了血管损伤和微血栓。
11.附图的图3说明了血管内炎症环境。该图3描绘了肺导管内以及可能还有冠状血管内的细胞-细胞相互作用并且可能适用于严重covid-19疾病中发生的血管内事件。存在若干途径，藉由这些途径败血症诱导对内皮的损伤。败血症上调内皮上选择素(p-选择素和e-选择素)的表达，活化的白血球(嗜中性粒细胞和单核细胞)和血小板聚集体可以粘附至所述内皮并且诱导内皮通透性增加。还包括嗜中性粒细胞胞外诱捕网(nets)和组蛋白释放的潜在作用以及嗅质蛋白4、脂质运载蛋白2和cd 24，以及嗜中性粒细胞的主要产物细胞通透性增加蛋白。血浆中的一些循环因子是两种损伤生物标志物并且还增强损伤，包括ang-2和vegf。另外，图表显示增强炎症的循环因子，诸如il-8和il-6、stnfr-2。内皮损伤的标志物还包括循环vegf受体vwf和sflt-1。图表中还标注了活性蛋白c复合物的组分，包括蛋白质c、蛋白质s、因子v和血栓调节蛋白，因为败血症扰乱了活化的蛋白质c的正常功能，从而导致促凝血环境。
12.冠状病毒感染(covid-19)可能由于炎症器官损伤而变得致命：在肺中导致弥漫性肺泡损伤(dad)和血栓性血管闭塞和ards，以及在受到攻击的另一种器官心脏中经由心肌和心肌损伤(3-5)。存在的共识是，由covid-19触发的炎症反应决定了结果。
13.流感病毒感染是导致相当大的全球死亡率的年发生率。每年开展疫苗接种以抗击新的流感病毒株。对于受到免疫抑制的患者或儿童患者没有有效治疗，因此当感染时具有高死亡率，老年人也一样。
14.了解了免疫系统作为针对炎症器官损伤的防御系统的作用。还存在的共识是，细胞因子在炎症反应的临床表现中起重要的作用；特别感兴趣的是il-1、il-6和il-8，并且其受体的治疗性阻断是在感染covid-19的患者中正在积极研究的策略。
15.这些细胞因子可以由若干炎症细胞产生，而且由内皮细胞和血管平滑肌细胞产生。在这些细胞因子以及还有tnfα的生成中重要的是转录因子nf-κb并且il-1可以活化il-6产生，从而导致细胞因子产生增强的恶性循环。
16.nf-κb的tnfα诱导的活化以及mir-125b诱导的活化是依赖于铜的并且已显示铜螯合抑制各种细胞类型中的nf-κb活化，所述细胞类型包括可能发展炎症表现的内皮细胞(其一个特征是nf-κb表达)。另外，toll样受体(tlr)活化引起若干铜转运蛋白，特别是ctr1、ctr2和atp7a的表达上调(15)。
17.目前，尚不存在covid-19治疗药物，将预防冠状病毒进展并预防为肺损伤和心脏衰竭铺平道路的血管内炎症和促凝血机制。
18.目前，尚不存在流感治疗药物，将预防流感病毒进展并预防为肺损伤和心脏衰竭铺平道路的血管内炎症和促凝血机制。


技术实现要素：

19.一般地说，本发明是基于以下知识：来自冠状病毒、流感或ards的致命性事件可以通过干扰血管内炎症的药物来预防。参见附图的图3、图6和图13。血管内事件将肺衰竭和心脏衰竭联系在一起。简言之，“病肺循环”释放大量介质，其进入下一个邻近循环：冠状循环。由病肺循环释放的“坏体液”渗透到全身性循环中并且还到达中枢神经系统中。整体概念t为，受损肺(特别是肺血管)发射细胞损伤信号；这些信号包括趋化因子，诸如趋化因子和白三烯、细胞片段和游离dna。
20.确切地说，本发明首先使基于对病肺循环的理解，由此肺微血管在covid-19肺损伤中严重受累(参见图5，参考文献24)。它经历产生介质的血管内炎症反应(由已显示被covid-19病毒颗粒感染的内皮细胞ec)并通过多种细胞-细胞相互作用进行。图4示出了此“坏肺体液”概念。肺具有人体最大的毛细管网络并因此具有最大数目的内皮细胞(ec)。感染covid-19的ec变成参与炎症细胞-细胞相互作用并产生从“病肺循环”渗透出来的损伤性介质的细胞。图5示出了空气传播途径如何导致心脏损伤和肺损伤。
21.本发明是部分基于本发明人的以下知识：具有炎症和血栓性闭塞的微血管(图6)是covid-19严重疾病和ards的显著组分，并且出于此原因，血管疾病临床表现是治疗靶标。对于酶5-脂氧合酶(5-lo)的参与(参见图11和12)。
22.本发明人采用以下策略：(1)抑制炎症细胞向肺和心脏趋化，(2)降低血管通透性和渗漏，(3)降低主要炎症介质转录因子nf-κb的活性(7,8,16,18)，(4)降低vegf产生和作
用，并且(5)抑制或延迟病毒进入细胞中。
23.特定假设在于，5-脂氧合酶抑制剂和抗氧化剂诸如乙胺嗪(dec)或齐留通连同具有抗炎性质的铜螯合剂四硫代钼酸盐(ttm)以及还有抗氧化剂和vegf产生抑制剂，抑制了为肺损伤和心脏衰竭铺平道路的血管内炎症和促凝血机制。两种药物通过不同机制起作用，5-脂氧合酶抑制剂和抗氧化剂诸如dec或齐留通通过抑制白三烯b4的形成抑制了嗜中性粒细胞和巨噬细胞向受损肺的趋化性以及还有内皮细胞损伤。ttm可以具有多效性作用，包括抑制病毒进入细胞和抑制vegf触发的血管渗漏(vegf是血管通透性增强因子)。本发明使用具有不同作用机制的两种药物的组合(5-脂氧合酶抑制剂如dec或齐留通)加上作为主要驱动物的ttm来预防疾病进展并且还治疗该疾病。由于这些药物的安全性，它们可以与其他治疗一起使用。此外，本发明人包括可以与这两种核心药物一起使用的其他药物作为一项发明，诸如抗炎性抗抑郁药(例如，选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(ssri)(诸如氟伏沙明和芹黄素)、吲哚-3-甲醇(i3c)、蟾蜍灵、黄芩苷、姜黄素、槲皮素、具有抗氧化剂性质的applied therapeutics醛糖还原酶抑制剂at-001和可以使用的抗病毒或冠状病毒抗体药物。此外，通过添加前列环素类似物诸如伊洛前列素和其pgi2受体激动剂赛乐西帕、曲前列环素和贝前列素来进一步增强疗法。
24.本发明追求以下策略目标：通过采用两种核心药物(上文)和更多实现这些目标的现有药物来保护肺和心血管系统使其免于发展器官损伤。主要两种药物为ttm以及dec或齐留通中的任一种。另外的药物可以包括ssri，诸如抗抑郁药氟伏沙明，其已显示通过刺激sigma-1受体来减少炎症，和/或伊维菌素，其已显示抑制covid-19病毒的体外复制。caly,l.等人公布的是，伊维菌素抑制sars-cov-2体外复制(抗vir res,2020年4月30日)并且还有姜黄素减少炎症。由于这些药物是安全的，此组药物可以与其他治疗诸如氧气、一氧化氮和类固醇一起使用，因为此类治疗本身不能预防为肺损伤和心脏衰竭铺平道路的血管内炎症和促凝血机制。
25.本发明认识到，冠状病毒感染(covid-19)和流感可能由于以下炎症器官损伤而变得致命：导致弥漫性肺泡损伤(dad)和血栓性血管闭塞和ards的肺，以及在受到攻击的另一种器官心脏中经由心肌和冠状综合征导致心肌损伤；未知机制，包括细胞因子依赖性机制，可以直接损害心肌(3-5)。该知识和由covid-19和流感触发的炎症反应允许本发明人决定药物特别是ttm加上dec或齐留通的组合的理解将解决关键性生物功能，从而形成导致患者戴上呼吸机、发展器官损伤并导致死亡。本发明人关于这些药物的作用机制，它们将产生的特定抑制活性的知识允许本发明还使用ttm或dec或两者添加其他共药物，诸如ssri抗炎性抗抑郁药氟伏沙明、萝卜硫素、伊维菌素和姜黄素以及其变体。这些相同药物被设计来治疗由除冠状病毒以外的病状引起的ards。(除了伊维菌素，它可能不用于ards)。
26.了解了免疫系统作为针对炎症器官损伤的防御系统的作用。还存在的共识是，细胞因子在炎症反应的临床表现中起重要的作用；特别感兴趣的是il-1和il-6，并且其受体的治疗性阻断是在感染covid-19的患者中正在积极研究的策略。两种细胞因子可以由若干炎症细胞产生，而且由内皮细胞和血管平滑肌细胞产生。在这些细胞因子以及还有tnfα的生成中重要的是转录因子nf-κb。
27.nf-κb的tnfα诱导的活化以及mir-125b诱导的活化是铜依赖性的(16,18)并且已显示铜螯合抑制各种细胞类型中的nf-κb活化，所述细胞类型包括可能发展炎症表现的内
皮细胞(其一个特征是nf-κb表达)。另外，toll样受体(tlr)活化引起若干铜转运蛋白，特别是ctr1、ctr2和atp7a的表达上调(15)。
28.hif-1α的转录活性也是铜依赖性的并且因此产生vegf，其最初命名为“血管通透性因子”。vegf在ards中作为血管通透性(渗漏)增强因子起作用。
29.总之：在covid-19和流感触发的炎症的背景下铜螯合ttm，将抑制细胞因子产生和hif-1α依赖性基因转录。后者十分重要，因为受损组织发生组织缺氧。
30.在本发明的一个实施方式中，本发明人将5-脂氧合酶抑制剂如dec或齐留通治疗患有covid-19、covid-19的突变体、与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒或流感的患者的用途与ttm作为包括抑制趋化性和抑制血管渗漏在内的作用机制的用途组合，应注意最有力的趋化介质之一是活化的5-脂氧合酶的产物白三烯b4(ltb4)。ltb4由巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞协同红细胞产生并由活化的内皮细胞产生。特定假设在此为，ltb4由于趋化性的活化和导致血管渗漏的对内皮的直接损伤而在器官衰竭中非常重要。预期dec或齐留通抑制ltb4的合成，但是另外抑制了导致血管痉挛或支气管痉挛性的肽基-白三烯ltc4的合成。
31.dec具有抗氧化剂性质并且抑制参与covid-19炎症(8,9)的抗氧化剂应激以及流感。炎症介质产生的抑制和dec可抑制nf-κb的5-脂氧合酶依赖性活化。
32.本发明人发现，使用铜螯合剂治疗的ttm治疗抑制了各种细胞类型(可能发展炎症表型的内皮细胞)中的nf-κb活化，可以通过包含ttm盐的铜螯合剂和至少一种活性剂诸如乙胺嗪的组合来进一步增强。包含ttm铵盐的铜螯合剂和至少一种活性剂可以单独施用或以组合丸剂形式一起施用。例如，包含ttm铵盐的铜螯合剂可以口服施用并且至少一种活性剂可以静脉内或口服施用。
33.在一个实施方式中，本发明还提供了一种组合物，所述组合物含有包含ttm盐的所述铜螯合剂和5-脂氧合酶抑制剂诸如dec或齐留通。除了ttm和dec或ttm和齐留通的组合之外，其他活性剂可以是已在体外研究中显示抑制covid-19冠状病毒进入细胞中的抗寄生虫剂伊维菌素、芹黄素、吲哚-3-甲醇、蟾蜍灵、黄芩苷、姜黄素(槲皮素)、醛糖还原酶抑制剂和抗炎性抗抑郁药氟伏沙明或萝卜硫素。此类组合物可以是呈静脉内形式或口服形式，诸如片剂、微型片剂或胶囊。口服剂型可以在经过胃部之后提供ttm盐的延迟释放。此种组合物可以释放例如：(1)在口服形式的ttm经过胃部之后释放ttm盐以及(2)在胃部或在其他活性剂经过胃部之后释放至少一种其他活性剂。
34.总结性作用机制ttm将实现包括抑制趋化性、抑制血管通透性、抑制炎症介质产生、抑制主要转录因子nf-κb的活化和vegf产生的降低并在一定程度上抑制病毒进入细胞中。vegf为从骨髓动员前体细胞的有力因子。ards中vegf的作用已被认为是血管通透性因子。vegf的有效性大于引起血管渗漏的组胺50倍。vegf基因的hif-1α依赖性转录也是铜依赖性的并且因此ttm降低vegf产生。
35.dec的总结性作用机制是抑制酶5-脂氧合酶、抑制氧化剂和抑制nf-κb依赖性基因转录。在聚集体中，通过此类分子机制，dec抑制趋化性并保存正常内皮细胞功能。
36.抗炎药物萝卜硫素的主要作用机制是活化转录因子nrf2。此转录因子是转换器，它转录抗氧化剂酶基因的宿主，从而导致产生抗氧化剂酶，诸如超氧化物歧化酶和过氧化氢酶。因为炎症与氧化剂应激相关，所以萝卜硫素还原炎症的氧化剂应激组分。
37.抗抑郁药和抗焦虑药氟伏沙明的主要抗炎作用机制是刺激内质网sigma-1受体，其限制了炎症介质的肌醇酶1[ire 1]依赖性活化。
[0038]
经由吸入雾化粉末向肺直接施用两种药物乙胺嗪和前列环素类似物诸如贝前列素，具有向肺递送相对高剂量的药物而不会渗透到外周全身性循环中的优势。药物的作用局限于靶标：气道和肺组织。益处为递送肺血管舒张剂和5-脂氧合酶抑制剂。两种药物协同用于抑制肺炎症而无任何毒性或副作用。
附图说明
[0039]
本发明的实施方式的优势根据示例性实施方式的以下详细描述将是清楚的。以下详细描述应结合附图来考虑，在附图中：
[0040]
图1示出了covid-19冠状病毒的三个阶段：第1阶段-早期感染，第2阶段-肺部阶段，以及第3阶段-过度炎症阶段；
[0041]
图2示出了本发明的示例性ttm盐，特别是ttm的铵盐或attm的结构；
[0042]
图3说明了血管内炎症环境。此图描绘了肺导管内以及可能还有冠状血管内的细胞-细胞相互作用并且可能适用于严重covid-19疾病中发生的血管内事件。
[0043]
图4是病肺循环和它如何影响心脏的图示。
[0044]
图5是空气传播的冠状病毒如何进入肺并然后移动到心脏并导致心脏衰竭的进展图示，如geng y-j.等人cardiovasc pathol,2020年4月17日中所引用。
[0045]
图6示出了炎症以及内皮细胞的破坏、微血栓的形成，并且在内皮细胞破坏的情况下红血球从肺泡毛细管中渗漏。具有多个纤维蛋白微血栓的轻微扩增的肺泡壁由箭头指示。
[0046]
图7示出了tnfα受体的连接和经由mrna 125b的铜作用二者如何活化nf-κb并因此活化编码参与炎症的蛋白质的nf-κb依赖性基因的转录。
[0047]
图8a示出了转录因子nf-κb和铜转运到细胞二者(15)并且在细胞内可以使用铜螯合剂ttm抑制。预期ttm减少不同感染covid-19
–
的细胞类型中的细胞因子的生成。细胞的toll样受体活化增加了编码铜转运蛋白的基因的表达，这进而促进nf-κb的铜依赖性活化，这种可能的场景发生在covi-19触发的血管内炎症中。
[0048]
图8b示出了本发明人认为巨噬细胞向促炎性m1细胞类型的表位偏移是铜依赖性的另一种因素。可以假设，在患病的感染covid-19的患者中在临床上观察到的所谓的细胞因子风暴是由于多个专业炎症细胞和活化的结构细胞的相互作用。受感染肺中细胞-细胞相互作用非常重要。直到关注白三烯的产生，研究已显示红血球可以将酶赠送给嗜中性粒细胞并且这导致增强的白三烯b4产生。这种
‘
跨细胞代谢’概念已得到广泛接受。
[0049]
图9显示dec治疗显著抑制了嗜中性粒细胞浸润。该图从ribeiro等人重现(23)。作者表明在小鼠急性肺损伤模型中dec预处理预防了嗜中性粒细胞向肺中流入，使用嗜中性粒细胞和巨噬细胞标志物髓讨氧化物酶。
[0050]
图10示出了dec对肺中角叉菜胶诱导的tnf-α和一氧化氮产生的作用。该图从ribeiro等人重现(23)。(a)显示tnf-α水平在car组中与假组相比在角叉菜胶施用后4小时显著升高。与car组相比，dec显著减少tnf-α水平，但indo并不减少tnf-α水平。(b)显示稳定的no代谢物亚硝酸盐和硝酸盐水平与假组相比在胸膜渗出物中在角叉菜胶施用后4小时显
著增加，并且dec和indo在渗出物中显著减少亚硝酸盐和硝酸盐水平。数据表示为来自每组n＝8只小鼠的平均值+/-s.e.m.，*p《0.05，对比角叉菜胶。此预处理抑制了肺炎症，如由tnf-α和一氧化氮产生减少所示。
[0051]
图11示出了dec对5-脂氧合酶的抑制(20)。除了合成炎症白三烯的5-lo酶的标准作用之外，还存在5-lo在核中增加nf-κb依赖性基因转录的其他性质。可以假定在covid-19触发的血管内炎症中发生5-lo酶的极大增强的表达和活化。
[0052]
图12示出了5-lo依赖性表达特征，并且5-lo可充当转录因子il-1β、il-6、bcl2、et、β连环蛋白、cmyc。il-1和il-6参与covid-19感染和器官损伤。
[0053]
图13示出了填充受损肺血管的细胞聚集体的实例。这是显示在肺损伤发展期间肺血管中的内容物的电子显微图。细胞聚集体(包括红血球)也起作用，因为它们可以参与形成炎症介质，如白三烯。
[0054]
图14示出了ctr1和atp7a对于病毒复制如何重要[rupp jc等人,virol.j,2017]。该论文标题为“host cell copper transporters ctr1and atp7a are important for influenza a virus replication”，教导了螯合铜导致病毒生长的中度缺陷。高亲和铜输入蛋白ctr1的rnai敲低导致显著病毒生长缺陷(在感染后24小时效价减小7.3倍，p＝0.04)。在微基因组测定中ctr1或跨高尔基体铜转运蛋白atp7a的敲低显著减小了聚合酶活性。该图还示出了流感病毒生命周期的铜介导的调节。细胞外铜[cu
2+
]与结合至宿主细胞的病毒体共享拓扑空间以及核内体内的病毒进入步骤。ctr1将细胞外铜输入到细胞质中。细胞内铜[cu
1+
]与atox1伴侣蛋白和其他金属蛋白相关。由此，通过atp7a将铜主动转运到分泌途径中。atp7a起作用，决定了胞液和er、高尔基体和其他膜结合隔室中的铜浓度，在所述隔室中病毒糖蛋白ha和na(o)被合成并成熟。在核中合成新病毒rna，其中atox1可以转运细胞内[cu
1+
]。在与基质蛋白质(m1和m2)的复合物中，从核中输出基因组病毒rna后代，以与m1、m2、ha、na和其他蛋白质缔合，以拓扑地处于胞液中的位点即浆膜处组装发育期病毒体。
[0055]
图15示出了铜蛋白质组。宿主细胞铜转运蛋白ctr1和atp7a对于流感a病毒复制十分重要并且可能对于covid 19也十分重要。[the copper proteome；blockhuys s.等人,2017]。蛋白质atox1是将铜从ctr1转运到atp7a和atp7b的铜伴侣蛋白。atox1也控制细胞增殖。铜螯合抑制了此细胞内转运，并且因此铜水平在发炎组织中升高，所以ttm也具有抗炎作用。
[0056]
图16显示在bm-epc中在缺氧期间蛋白质组vegf-a信号传导途径数据表明对标准vegf-a信号传导、氧化还原稳态的调节、细胞生长、细胞迁移和炎症的重要作用。
具体实施方式
[0057]
在以下针对本发明的具体实施方式的描述中公开了本发明的方面。本领域技术人员将认识到，替代性实施方式可以修订而不背离权利要求的精神或范围。另外，本发明的实施方式的熟知要素将不会详细描述或将省略，以便不会遮掩本发明的相关详情。此外，为了便于理解本文所用的若干术语的描述讨论，如下。
[0058]
如本文所用，单词“示例性”意指“充当实例、例子或说明”。本文所述的实施方式不是限制性的，而是仅示例性的。应理解，所描述的实施方式不一定被理解为相对于其他实施方式优选的或优势的。此外，术语“本发明的实施方式”、“实施方式”、或“发明”不需要本发
明的所有实施方式都包括所讨论的特征、优势或操作模式。
[0059]
由于其范顿化学(fenton chemistry)，铜充当参与生理学和病理学过程的许多蛋白质和酶的重要辅因子。蛋白质是细胞内或跨膜分泌的。在细胞的各种隔室(膜、细胞质、细胞核和线粒体)中存在超过50种铜结合蛋白，它们用作铜转运蛋白、伴侣蛋白和酶。理论上，所有这些铜结合蛋白可以通过铜螯合剂ttm影响到各种程度。
[0060]
本发明是基于以下发现：高水平的细胞外和细胞内铜在血管内炎症中，特别是经由抑制血管通透性因子vegf并抑制nf-κb依赖性基因转录来起到特别重要的作用。
[0061]
本发明人理解的是，为了预防感染有冠状病毒诸如covid-19、covid-19的突变体、与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒或ards的患者进展到需要通过使用呼吸机进行治疗以及可能的死亡，必需选择施用抑制趋化性和血管渗漏以及内皮细胞损伤并预防进展到过度炎症和ards的药物。此类药物必需干预早期咳嗽以预防疾病进展并且还治疗此疾病并保护肺和心血管系统免于发展器官损伤。为此，他们意识到必需提供的这些药物的作用机制如下：
[0062]
(i)抑制炎症细胞向肺和心脏的趋化性。
[0063]
(ii)降低vegf产生和作用。
[0064]
(iii)降低血管通透性和渗漏。
[0065]
(iv)降低各种细胞类型中的主要炎症介质转录因子nf-κb活化的活性，所述细胞类型包括可能发展炎症表型的内皮细胞(它的一种特征是nf-κb表达)。
[0066]
(v)抑制或延迟病毒进入细胞中。
[0067]
(vi)提供具有抗炎性质的治疗以及还有抗氧化剂和vegf产生抑制剂，以抑制为肺损伤和心脏衰竭铺平道路的血管内炎症和促凝血机制。
[0068]
(vii)解决ltb4，因为它由于活化趋化性并直接损伤内皮从而导致血管渗漏而在发展器官衰竭方面十分重要，并且除了ltc4的合成，还解决导致血管痉挛或支气管痉挛性的肽基-白三烯。
[0069]
(viii)抑制白三烯b4形成，然后抑制嗜中性粒细胞和巨噬细胞向受损肺的趋化性以及还有内皮细胞损伤。
[0070]
(ix)解决在炎症反应的临床表现中起重要作用的细胞因子；特别感兴趣的是il-1、il-6和il-8。
[0071]
(x)抑制重要的缺氧诱导的转录因子hif-1α和hif-2α。
[0072]
(xi)刺激减弱炎症的内质网[er]sigma-1受体。
[0073]
因此在用包含ttm盐的铜螯合剂治疗covid-19患者以及患有covid-19的突变体或与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒的患者期间将提供一些需要的作用机制。
[0074]
在covid-19患者以及患有covid-19的突变体或与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒的患者中所提出的包含ttm盐的铜螯合剂的作用机制是数倍的：减少血管炎症并减少炎症细胞的趋化性以及从骨髓到肺的转运。vegf是从可参与损伤和修复过程的骨髓中动员前体细胞的有力因子。通过抑制vegf基因转录，ttm将降低vegf依赖性血管通透性增加和血管生成改变，这是血管内炎症的后遗症。图16。
[0075]
基于使用ttm的其他指示的此研究和试验，本发明人假设使用包含ttm盐的所述铜螯合剂的治疗将提供所需作用机制并且5-脂氧合酶抑制剂和抗氧化剂诸如乙胺嗪(dec)或
齐留通将提供其他所需作用机制。此外，本发明人已确定可以施用其他药物以帮助形成所需和所要作用机制。
[0076]
铜螯合也已在受感染肺细胞的培养研究中显示显著减小病毒复制速率。ttm具有螯合来自体内的铜的特征。流感病毒不仅在气道中复制，而且它们也破坏这些细胞并且在严重情况下引起肺炎和急性肺损伤[ards]。降低并显著抑制这种炎症反应是使用抗生素或类固醇药物不能实现并且使用ttm实现的治疗目的。
[0077]
肺血管和毛细管参与此炎症，所述炎症由流感引起，最终导致血管渗漏和水肿，修复肺的气体交换功能。虽然ttm抑制流感a病毒复制，药物乙胺嗪[dec]抑制炎症细胞(嗜中性粒细胞、巨噬细胞和免疫细胞)向肺血管的趋化性，主要经由抑制白三烯的合成[ltc4，它引起支气管收缩和血管收缩，以及ltb4，它引起肺内皮细胞损伤。
[0078]
ttm有效于治疗流感，因为它还抑制负责活化编码许多细胞因子(例如il-1和il-6)和炎症介质如tnα的基因的主要转录因子nf-κb的作用。ttm还抑制负责转录vegf基因的转录因子hif-1α，vegf是已知在ards中起到特殊作用的强效血管通透性增强子。
[0079]
总之：ttm+dec的组合具有抗病毒作用机制并在若干细胞和分子水平上抑制肺血管内炎症。因此，预期ttm+dec具有作为流感a疾病的有效治疗的作用，其益处为病毒株独立的。
[0080]
而且，本发明人确定铜水平影响血管炎症。该发现是基于四种铜依赖性机制的鉴定。
[0081]
首先，铜参与稳定泛素转录因子蛋白质缺氧诱导因子1-α(或hif-1-α)。hif-1-α负责转录超过100种基因，其中有编码血管生成性血管内皮生长因子(vegf)及其激酶插入结构域受体(kdr)的基因。hif-1-α诱导骨髓衍生性血管调节细胞的募集以调节肿瘤血管生成和侵入性。hoffmann br.等人physiol genomics,2013(27)
[0082]
vegf及其受体两者在引起血管通透性增加中起重要作用。
[0083]
其次，铜在炎症中起作用。早已了解的是，ipah的肺血管病变被炎症和免疫细胞浸润(tuder等人,am j pathol,1994年2月；144(2):275-85)。这些细胞分泌炎症介质，即所谓的细胞因子，特别是白介素il-1和il-6(humbert等人,am j respir crit care med.,1995年5月；151(5):1628-31)。在若干种细胞和器官系统中，已表明特定铜螯合剂(ttm盐)减少了细胞因子的分泌，因为ttm铵盐具有抗炎作用以及抗血管生成作用。
[0084]
第三，铜在细胞色素p450的基因的改变中起作用。肺以及具体地肺血管内皮细胞(ec)参与药物代谢和有毒物质处理。已知香烟烟雾毒素高度上调特定药物代谢基因，即细胞色素p450超家族的基因的表达。存在56种已知的编码56种同工酶的细胞色素p450基因。这些酶代谢75％使用中的所有药物，包括所有通常用于pah治疗的血管舒张剂药物。这些酶还参与细胞生长和分化、胆固醇和雌激素代谢，并且许多年来，已检查了这些酶在癌症发病机制中的作用(特别是前列腺癌、乳腺癌和肺癌)(kwapiszewska g等人,circulation research,2019年提交)。然而，铜已显示引起归因于细胞色素p450酶活性改变的肝损伤和肾损伤，并且铜螯合已表明通过抑制细胞色素p450基因改变来预防肝损伤和肾损伤。
[0085]
第四，铜在血管生成中起作用，所述血管生成可能是血管内炎症的后遗症。与在癌症中一样，血管细胞可以经历表型转换，它可以是铜依赖性的。因此，铜螯合剂将提供抗血管生成作用并保存正常血管细胞表型。
[0086]
本发明人之一norbert f.voelkel确定参与细胞生长和分化、血管生成和炎症的这四种铜依赖性机制易于通过用包含ttm盐的铜螯合剂进行治疗来修改。由于存在修改任何或每一种这些造成疾病的机制的可能性，norbert f.voelkel提出使用铜螯合剂来治疗血管内炎症。
[0087]
在本专利申请的上下文中，由异常生长的细胞进行的“异常铜处理”意指并包括错误处理铜存在潜在多种不同原因。在编码铜转运蛋白或铜结合蛋白的基因中存在遗传性或获得性突变或者存在编码细胞色素p450酶的一种或若干种基因的突变，从而引起异常铜处理和异常细胞代谢。
[0088]
铜螯合剂包含ttm的盐，它是高度有效的用于本发明目的的铜螯合剂。所述盐可以是根据式i：
[0089]
x(mos4)
[0090]
x为(2li)
+2
、(2k)
+2
、(2na)
+2
、mg
+2
、ca
+2
或{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}；
[0091]
r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地为h或选自由以下组成的组的任选地取代的基团：烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、烷基芳烷基、杂芳烷基、环烷基烷基和杂环烷基烷基；并且
[0092]
r4和r8是不存在的或独立地为h或选自由以下组成的组的任选地取代的基团烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、烷基芳烷基、杂芳烷基、环烷基烷基和杂环烷基烷基；
[0093]
其中当r4是不存在的时，r1和r2连同n形成任选地取代的5元或6元芳环，其中在环中多至2个碳原子可以被选自由o、n和s组成的组的杂原子置换；
[0094]
其中当r8是不存在的时，r5和r6连同n形成任选地取代的5元或6元芳环，其中在环中多至2个碳原子可以被选自由o、nh和s组成的组的杂原子置换；
[0095]
其中r1和r2、r2和r3或r3和r4连同n一起任选地形成任选地取代的环状结构；
[0096]
其中r5和r6、r6和r7或r7和r8连同n一起任选地形成任选地取代的环状结构；
[0097]
其中r4和r8可以通过共价键连接；
[0098]
其中r1、r2、r3、r5、r6和r7各自独立地任选地被一个或多个oh、氧代、烷基、烯基、炔基、nh2、nhr9、n(r9)2、-c＝n(oh)或opo3h2取代，其中r9各自独立地是烷基或
–
c(＝o)(o)-烷基；
[0099]
其中r4和r8各自独立地任选地被一个或多个oh、氧代、烷基、烯基、炔基、nh2、nhr9、n(r9)2、-c＝n(oh)或-+
(r
10
)3取代，其中r
10
各自独立地是任选地取代的烷基；并且
[0100]
其中r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7和r8中的一个或多个-ch
2-基团可以被选自由o、nh、s、s(o)和s(o)2组成的组的部分置换。
[0101]
在一个示例性实施方式中，x是根据式(ii)的{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}：
[0102][0103]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)]和[n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]是相同或不同的。
[0104]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地是h或c
1-c
10
烷基。在另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地是h、c
1-c3烷基或c
1-c6烷基。在另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r4和r8独立地是h或c
1-c6烷基。
[0105]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地是h、甲基、乙基或丙基。在另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7和r8各自是丙基并且化合物是四丙基铵四硫代钼酸盐。在又另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7和r8各自是甲基并且化合物是四甲基铵四硫代钼酸盐。在甚至另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7和r8各自是乙基并且化合物是四乙基铵四硫代钼酸盐。
[0106]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2和r3独立地是h、甲基或乙基并且r4是h或任选地取代的烷基、烯基、环烷基烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂芳基。在另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r5、r6和r7独立地是h、甲基或乙基并且r8是h或任选地取代的烷基、烯基、环烷基烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂芳基。在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r4和/或r8的任选取代基选自由烷基、oh、nh2和氧代组成的组。在另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r4和/或r8的一个或多个-ch
2-基团被选自o、nh、s、s(o)和s(o)2的部分置换。
[0107]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地是甲基并且r4和r8各自是任选地取代的烷基。在又另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r5、r6和r7各自独立地是甲基并且r4和r8各自是任选地取代的乙基。在另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地是甲基并且r4和r8各自是取代的乙基，其中取代基是羟基。在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r5、r6和r7各自独立地是甲基并且r4和r8各自是-ch2ch
2-oh。
[0108]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地是甲基；r4和r8各自是任选地取代的烷基；并且化合物是四甲基铵四硫代钼酸盐。在另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，各自r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地是甲基；r4和r8各自是任选地取代的乙基；并且化合物是四甲基
铵四硫代钼酸盐。在另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}、r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地是甲基；r4和r8各自是取代的乙基，其中取代基是羟基；并且化合物是四甲基铵四硫代钼酸盐。在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}、r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地是甲基；r4和r8各自是-ch2ch
2-oh；并且化合物是四甲基铵四硫代钼酸盐。
[0109]
在一个示例性实施方式中，螯合剂化合物是双胆碱四硫代钼酸盐。
[0110]
在一个实施方式中，根据式(i)的铜螯合剂化合物是：
[0111][0112]
表1提供了非限制性实施方式，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}
[0113]
表1
[0114]
r1r2r3r4r5r6r7r81hhhhhhhh2ch3ch3ch3ch3ch3ch3ch3ch33乙基乙基乙基乙基乙基乙基乙基乙基4丙基丙基丙基丙基丙基丙基丙基丙基5丁基丁基丁基丁基丁基丁基丁基丁基6戊基戊基戊基戊基戊基戊基戊基戊基7hhhhch3ch3ch3ch38hhhh乙基乙基乙基乙基9hhhh丙基丙基丙基丙基10hhhh丁基丁基丁基丁基11ch3ch3ch3ch3乙基乙基乙基乙基12ch3ch3ch3ch3丙基丙基丙基丙基13ch3ch3ch3ch2ch2ohch3ch3ch3ch2ch2oh
[0115]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)]和[n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]各自独立地是：
[0116][0117][0118]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)]和[n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]中的至少一者是：
[0119][0120]
在另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)]和[n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]两者是：
[0121][0122]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3和r4各自独立地是h或烷基。在另一个实施方式中，r5、r6、r7和r8各自独立地是h或烷基。
[0123]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r4和r8通过共价键连接。例如，如果r4和r8两者是甲基，则当r4和r8通过共价键连接时，它可以在如下所示的两个氮原子之间形成乙烯键：
[0124][0125]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r4和r8两者是通过共价键连接的任选地取代的烷基。
[0126]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地是h、甲基、乙基或丙基并且r4和r8通过共价键连接。在一个实施方式中，r4和r8各自独立地是任选地取代的烷基。在一个实施方式中，r4和r8的任选取代基是n
+
(r
10
)3。
在另一个实施方式中，r4和r8的一个或多个-ch
2-基团被选自由o、nh、s、s(o)和s(o)2组成的组的部分置换。
[0127]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，x是以下之一：
[0128][0129]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1和r2各自独立地是h、甲基或乙基并且r3和r4各自独立地是任选地取代的烷基、芳基或芳烷基。在另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r5和r6各自独立地是h、甲基、乙基或丙基并且r7和r8各自独立地是任选地取代的烷基、芳基或芳烷基。在一个实施方式中，r3、r4、r7和r8的任选取代基是oh。
[0130]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)]和/或[n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]独立地是：
[0131][0132]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1和r4各自独立地是h、甲基、乙基或丙基并且r2和r3连同n一起可形成任选地取代的环状结构。
[0133]
在另一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r5和r8各自独立地是h、甲基、乙基或丙基并且r6和r7连同n一起可形成任选地取代的环状结构。在一个实施方式中，r2、r3、r6和r7中的一个或多个-ch
2-基团可以被选自由o、nh、s、s(o)和s(o)2组成的组的部分置换。
[0134]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)]和/或[n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]独立地是：
[0135][0136]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r4和/或r8是不存在的，并且r1和r2和/或r5和r6连同n一起形成任选地取代的5元或6元芳环，其中环中多至2个碳原子可以被选自由o、n和s组成的组的杂原子置换。
[0137]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)]和/或[n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}独立地是：
[0138][0139]
在一个实施方式中，其中x是{[n
+
(r1)(r2)(r3)(r4)][n
+
(r5)(r6)(r7)(r8)]}，其中r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7和r8各自是h。
[0140]
在一个示例性实施方式中，螯合剂化合物是四硫代钼酸铵[nh4]2mos4(attm)。attm可以与其他铜螯合剂化合物诸如三硫代钼酸铵[nh4]2moos3组合。
[0141]
在一些示例性实施方式中，患者中的covid-19、covid-19的突变体、与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒、另一种病毒或ards通过施用治疗有效量的包含ttm盐的铜螯合剂来治疗。在一个示例性实施方式中，铜螯合剂包含四硫代钼酸铵[nh4]2mos4(或attm)并且在一些示例性实施方式中，铜螯合剂可进一步包含三硫代钼酸铵[nh4]2moos3。所递送的ttm盐的量是个体化的。在一个示例性实施方式中，治疗有效量的铜螯合剂递送了90和180mg之间的ttm/天。ttm的量是根据血浆中的铜蓝蛋白水平调节的。当血浆铜蓝蛋白水平接近正常水平的50％；即15-17mg/dl时，达到血浆有效的铜螯合。
[0142]
铜螯合剂可以包含药学上可接受的载体和/或赋形剂的组合物施用。组合物可以静脉内形式或口服形式，诸如片剂、微型片剂或胶囊施用。在一些示例性实施方式中，铜螯合剂可呈口服形式的组合物，所述口服形式具有在经过胃部之后提供铜螯合剂的延迟释放的特定载体、包衣和/或赋形剂。确切地说，选择载体和/或赋形剂来促进铜螯合剂预防胃酸破坏并实现最佳肠道摄取和吸收。例如，组合物的口服形式可包括片剂或胶囊的肠溶包衣或保持延迟释放制剂。
[0143]
在一些示例性实施方式中，患者通过施用治疗有效量的包含ttm盐的铜螯合剂以及另一种抗病毒组合物、抗体或另一种用于冠状病毒诸如covid-19、covid-19的突变体或与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒或流感的治疗来治疗。
[0144]
在其他示例性实施方式中，除了ttm，5-脂氧合酶抑制剂(dec或齐留通)与用于covid-19、covid-19的突变体或与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒或流感的疾病预防治疗策略的ttm一起使用。dec或齐留通是5-脂氧合酶(5-lo)抑制剂，所述酶驱动炎症并且可能造成内皮损伤和肺损伤(图9和10(a)和(b))。
[0145]
因此，可能的是，包含ttm盐的所述铜螯合剂和5-lo抑制剂协同起作用来预防血管内炎症。在预期ttm盐减小血管通透性和趋化性时，预期5-lo抑制降低炎症、抑制嗜中性粒细胞趋化性和nf-κb依赖性基因转录。在活化的肺血管内皮细胞中表达的5-lo酶在肺血管疾病中作为基因表达活化剂来起作用。5-lo导致产生白三烯c4，这是首先良好建立的5-lo作用，并且白三烯c4通过在支气管气道和肺血管中收缩平滑肌细胞来增加肺血管收缩。因此，抑制5-lo也将抑制白三烯c4合成，从而将去除肺血管收缩物质。第二作用是与细胞核外壳上的5-lo活化蛋白(flap)结合的非酶促功能。fitzpatrick和lepley在1998年表明，当他们检查细胞核提取物时，5-lo与转录因子nf-κb的亚基共沉淀。nf-κb控制编码若干种ltb4炎症介质的基因的表达。因此，5-lo通过与细胞核中的nf-κb结合，可以活化控制细胞生长的许多基因和编码炎症介质诸如il-1β和il-6-以及还有vegf的基因的转录。由于5-lo抑制剂抑制剂治疗，血管炎症以及可能的干细胞再编程可能减少，导致疾病进展停止，并辅助疾病逆转。ltb4是另一种重要的趋化性白三烯，它是5-lo下游的酶白三烯a4水解酶的产物。ltb4最近已在大鼠中研究并且证实ltb4引起肺内皮细胞细胞凋亡(tian w.等人sci transl med.2013年8月28日；5(200):200ra117)。因为有效抑制5-lo也将阻断ltb4产生，所以预期治疗covid-19诱导性疾病和流感的5-lo抑制剂也将靶向ltb4依赖性病理机制。
[0146]
在一些其他示例性实施方式中，患有冠状病毒诸如covid-19、covid-19的突变体或与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒或ards或流感的患者可以通过施用治疗有效量的5-lo抑制剂诸如dec以及另一种抗病毒组合物或另一种冠状病毒治疗来治疗。
[0147]
在一些示例性实施方式中，患者的covid-19、covid-19的突变体、与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒或ards或流感可以使用治疗有效量的包含ttm盐的铜螯合剂和至少一种5-lo抑制剂的组合来治疗。具体地，通过施用治疗有效数目的5-lo抑制剂乙胺嗪或齐留通之一与治疗有效量的包含ttm盐的铜螯合剂的组合可以治疗患有严重形式的covid-19诱导的器官损伤并且可以治疗以便预防器官损伤发展。
[0148]
在一些示例性实施方式中，患者的covid-19、covid-19的突变体、与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒或ards或流感可以使用治疗有效量的包含ttm盐的铜螯合剂和至少一种5-lo抑制剂的组合来治疗并且具体地，通过施用治疗有效数目的5-lo抑制剂乙胺嗪或齐留通之一与治疗有效量的包含ttm盐的铜螯合剂的组合可以治疗患有严重形式的covid-19诱导的器官损伤并且可以治疗以便预防器官损伤发展。
[0149]
氟伏沙明是批准的抗抑郁药和抗焦虑药，它抑制炎症信号的肌醇酶1(ire 1)依赖性产生，特别是在活化toll样受体(tlr)之后。在细胞中敲除编码sigma-1受体的基因显示il-6表达增加，在添加nf-κb抑制剂后仍持续，表明氟伏沙明的抗炎作用独立于nf-κb。
[0150]
萝卜硫素活化转录因子nrf2。此转录因子是转换器，它转录抗氧化剂酶基因的宿主，从而导致产生抗氧化剂酶，诸如超氧化物歧化酶和过氧化氢酶。因为炎症与氧化剂应激相关，所以萝卜硫素还原炎症的氧化剂应激组分并且是合适的共药物。
[0151]
芹黄素还影响或者确切地说抑制nf-κb，并且因此，芹黄素也是合适的共药物。这种nf-κb抑制剂可被认为单独或与包含ttm盐的铜螯合剂或5-lo抑制剂中的任一者组合用于治疗事件严重性pah。事实上，一种nf-κb抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷已在sugen/缺氧诱导的pah的临床前大鼠模型中显示逆转建立的血管闭塞性pah(farkas d.等人ajrcmb,第15卷第3期,2014年9月1日)。这些数据显示nf-κb在肺血管建模中起作用，并且可以预测
covid-19诱导的血管内炎症的情况下nf-κb的抑制，或者流感抑制了炎症介质如il-1和_l-6和tnf-α的产生。这种作用可以预防covid-19感染进展成器官损伤。具体地，芹黄素已显示减少炎症。因此，因为5-lo和转录因子nf-κb在细胞核中相互作用，以启动炎症和细胞生长促进基因的表达，那么5-lo抑制剂诸如齐留通或dec和芹黄素的药物作用存在预期的协同作用。同样，预期芹黄素与包含ttm盐的铜螯合剂的组合提供了芹黄素的抗炎作用和包含ttm盐的铜螯合剂的抗血管生成性失巢凋亡诱导的作用。因此，关注的一些示例性实施方式通过施用治疗有效量的芹黄素和治疗有效量的包含ttm盐的铜螯合剂来治疗患有pah的患者。
[0152]
吲哚-3-甲醇(i3c)是另一种nf-κb抑制剂，并且因此被认为是合适的共药物。i3c是具有多效性作用特征的植物来源的化合物，并且已证实i3c具有抗炎和抗肿瘤生长活性。确切地说，i3c通过影响若干种受体和转录因子来干扰信号转导并控制细胞生长。它抑制炎症转换nf-κb并且还是参与药物代谢的芳基烃受体(ahr)的配体，并且最近靶向癌症疗法。最近，已显示i3c可以上调重要肿瘤抑制因子pten的活性。这些途径中的每一种可以解释i3c的抗炎性和抗肿瘤作用。已显示pten的水平在肺动脉高压动物的肺中减少并且若干种实验研究已显示肺血管重建可以pten依赖性方式调节。因此，因为炎症和不受控制的血管细胞生长是pah和癌症两者的标志。用单独的i3c或其与包含ttm盐的铜螯合剂的组合治疗pah患者可以通过抑制异常细胞生长并抑制炎症来逆转肺血管腔闭塞。这种作用机制可用于预防血管内炎症进展到covid-19触发的器官损伤。本发明的一些示例性实施方式包括通过施用治疗有效量的i3c和治疗有效量的包含ttm盐的铜螯合剂来治疗患有covid-19感染并易于发生器官损伤的患者。
[0153]
蟾蜍灵是考虑的另一种共药物，它也可以经由抑制nf-κb并抑制基质金属蛋白酶mmp2和mmp9的表达来具有抗炎性作用。蟾蜍灵也可以减少整合蛋白α2/β5的表达。显著的是，蟾蜍灵是多靶抗癌剂，它似乎对于癌症治疗是有前景的，并且在若干种研究中蟾蜍灵已显示抑制癌症中的癌症标志之一上皮间充质细胞转分化(emt)。这种emt抑制通过下调肺癌细胞中的tgfβ受体表达来发生。这被认为与pah治疗相关，因为在pah中存在同样为tgfβ信号传导依赖性的内皮间质转化(enmt)，所以预期蟾蜍灵抑制病肺血管中的enmt。具体地说，血管增生型pah中阻塞血管腔的“塞子”由表型改变的细胞(一些已经历enmt)组成，并且非常可能地这些细胞基于异常基质蛋白并且这些细胞还非常可能经历整合蛋白转换。可能的是，化合物如蟾蜍灵可通过中断tgfβ信号传导来溶解细胞塞并通过改变异常整合蛋白来诱导失巢凋亡。蟾蜍灵尚未进行临床测试。然而，蟾蜍灵的多峰作用特征使其成为covid触发疾病和流感中作为与包含ttm盐的铜螯合剂的共药物的候选物并且本发明的一些示例性实施方式包括通过施用治疗有效量的蟾蜍灵和治疗有效量的包含ttm盐的铜螯合剂来治疗患有covid触发的疾病的患者。
[0154]
其他可能的共药物包括天然存在的植物产物，具体地为黄芩苷、姜黄素和槲皮素，它们可用于治疗炎性病症。这些化合物在中国出版物中被鉴定为铜处理改性剂，这些出版物分析了如下研究：使用各种组合中的植物提取物治疗患有铜贮积wilson病(xu m-b,rong p-q等人,front in pharmacol,2019)。作者参考文献实验数据表明，姜黄素、黄芩苷和槲皮素可以改变细胞内铜处理。然而，这些化合物各自已显示具有也与治疗covid-19和流感相关性炎症和器官损伤相关的其他活性。
[0155]
在这三种化合物中，黄芩苷在近年来接受最多关注。黄芩苷是已在中国持续数世纪用于治疗许多疾病的中国草药的提取物。具体地说，存在与治疗血管内炎症最相关的三种发现。首先，发现高剂量的黄芩苷抑制血管生成。这相关是因为在ards中存在由于内皮细胞损伤的肺血栓，并且因此，黄芩苷可以抑制血管内炎症和血栓。其次，发现黄芩苷通过抑制t辅助17细胞(th 17)来减轻二氧化硅诱导的肺炎症和纤维化，或者更广泛地说，已显示它刺激treg并且具有抗炎性。这相关是因为黄芩苷因此可以抑制肺血管炎症细胞浸润。第三，发现黄芩苷通过骨形态发生蛋白信号传导途径来减轻野百合碱诱导的肺动脉高血压，从而具有抗炎作用。这相关是因为在炎症触发的内皮细胞损伤的此模型中存在有益作用。
[0156]
肺动脉高压(pah)的大鼠模型中获得的最新出版的结果表明，hif-2α的药理学抑制可以是用于治疗患有pah的患者中严重血管建模和右心衰竭的有前景的新型治疗策略。covid-19感染的患者中已描述了肺动脉高血压和右心衰竭。因此，包含ttm盐的铜螯合剂和黄芩苷二者抑制了hif-1α并且包含ttm盐的铜螯合剂也抑制了hif-2α。
[0157]
可能的是将黄芩苷添加到一个剂量的包含ttm盐的铜螯合剂中可以预防内皮细胞死亡和血管内炎症。因此，在一些示例性实施方式中，患有由covid-19、covid-19的突变体、与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒引起的感染或处于发展ards或流感的风险下的患者可以通过施用治疗有效量的包含ttm盐的所述铜螯合剂和治疗有效量的黄芩苷来治疗。
[0158]
姜黄素是从姜黄中提取的二芳基庚烷(diarylheptanoid)，它很长时间被认为具有抗癌作用，并且有大量文献描述了姜黄素在许多癌症和炎性疾病模型中的作用。然而，虽然文献集中于抗氧化剂和抗炎性质，但是姜黄素也已显示诱导肺抗高血压血红素氧化酶1并且经由tgfβ1抑制具有预防肺损伤的保护作用。它通过诱导肿瘤细胞的细胞凋亡来抑制胃癌。因此，姜黄素可抑制肺血管重建的炎性组分并且可能的是姜黄素可经由抑制信号传导子及转录激活子3(stat3)信号传导途径来抑制肺血管细胞增殖。因为炎症是严重pah中血管病的重要组成，所以姜黄素可以是包含ttm盐的铜螯合剂的无毒搭配物，治疗或预防严重covid-19诱导性疾病。实际上，已显示姜黄素衍生物是轻微磷酸二酯酶v抑制剂(作用类似于肺血管舒张剂)，并且已表明姜黄素可用于治疗pah。因此，在一些示例性实施方式中，患有covid-19、covid-19的突变体或与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒诱导的感染和/或处于发展ards或流感的风险下的患者可以通过施用治疗有效量的包含ttm盐的所述铜螯合剂和治疗有效量的姜黄素来治疗。
[0159]
槲皮素是许多植物和蔬菜如生菜和洋葱中所含有的植物类黄酮，并且其抗氧化剂活性有充分记录。然而，槲皮素也已显示抑制vegf表达和vegf受体2信号传导，并因此具有抗血管生成性。还已显示抑制乳腺癌细胞中的糖酵解(癌症标志之一)、ph啮齿动物模型中的血管重建以及内皮间质转化(enmt)。此外，已显示槲皮素通过修饰整合蛋白αv/β1来改善伤口愈合。因此，由于其抗氧化剂作用特征，槲皮素可抑制covid 19诱导性疾病的血管内疾病组分。因此，在一些示例性实施方式中，患有严重covid-19、covid-19的突变体或与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒诱导的感染和/或处于发展ards或流感的风险下的患者可以通过施用治疗有效量的包含ttm盐的所述铜螯合剂和治疗有效量的槲皮素来治疗。
[0160]
applied therapeutics醛糖还原酶抑制剂at-001被设计用于糖尿病心肌症，它具
有抗氧化剂性质并且可与两种药物(5-脂氧合酶抑制剂+ttm)串联起作用以减轻急性肺炎。
[0161]
贝前列素是稳定的前列环素类似物，它已以口服形式用于治疗严重形式的肺动脉高压。贝前列素是血管舒张剂并且具有另外的抗炎和抗纤维化活性。贝前列素保护内皮细胞并且可以有效于加强内皮细胞以用于治疗ards。
[0162]
在下表2中汇总了包含ttm盐的所述铜螯合剂(列出为“ttm”)和上文讨论的其他活性剂或共药物的已知和预期的作用。
[0163]
表2
[0164]
[0165][0166]
在施用方面，一些示例性实施方式涉及以单一剂量形式或组合物施用包含ttm盐的铜螯合剂和一种或多种共药物。在其他示例性实施方式中，包含ttm盐的所述铜螯合剂和
共药物以单独的组合物施用，所述组合物可以经由相同途径施用。可替代地，这些单独组合物可以通过不同途径施用。例如，包含ttm盐的铜螯合剂可呈口服形式或静脉内形式，并且共药物可以呈口服形式、静脉内形式或吸入形式的组合物。
[0167]
在一些示例性实施方式中，具有或不具有共药物的ttm盐以90至180mg/天施用，调节所述剂量至其正常值的50％的目标铜蓝蛋白水平；出于实践目的，此目标为15-17mg/dl血浆。
[0168]
组合物可包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。组合物可以呈静脉内形式或口服形式，诸如片剂、微型片剂或胶囊。对于含有包含ttm盐的所述铜螯合剂、具有或不具有共药物的组合物，可以添加特定载体和/或赋形剂，以在经过胃部后提供ttm盐的延迟释放。确切地说，载体和/或赋形剂被选择来便于(1)保护ttm盐免于被胃酸破坏并实现最佳肠摄取和吸收，以及(2)与可在同一种丸剂中组合的共药物的任何相互作用。例如，呈口服形式的组合物可包括片剂或胶囊的肠溶包衣或保持延迟释放制剂。此种组合物可以释放例如：(1)在口服形式的ttm经过胃部之后释放ttm盐以及(2)在胃部或在其他活性剂经过胃部之后释放至少一种其他活性剂。可替代地，如果组合物不包含肠溶包衣，可以通过共施用治疗有效量的质子泵抑制剂来延迟ttm盐在经过胃部之后的释放。质子泵抑制剂可以包含在与ttm盐相同的口服形式中或包含在单独施用的组合物中。
[0169]
在一些实施方式中，单个剂量可以施用包含ttm盐的铜螯合剂、dec或齐留通中的至少一种以及任选的质子泵抑制剂。如上文所解释的，包含ttm盐的铜螯合剂和一种或多种共药物可以单个剂量形式或组合物或者以单独组合物施用。而且，如上文所解释的，这些单独组合物可以通过不同途径施用，诸如包含ttm盐的铜螯合剂呈口服形式或静脉内形式，并且共药物可以呈口服形式、静脉内形式或吸入形式的组合物。因此，单个剂量的包含ttm盐的铜螯合剂、dec或齐留通中的至少一种以及任选的质子泵抑制剂可以多种形式施用，以通过不同途径施用，诸如：
[0170]
(a)口服施用含有包含ttm盐的所述铜螯合剂和dec或齐留通的组合口服形式，它们全部在肠溶包衣胶囊或片剂中，对于所述肠溶包衣胶囊，包含ttm盐的所述铜螯合剂与所述dec或齐留通通过包衣分开或者密封在所述胶囊的与所述dec或齐留通分开的隔室中，并且对于所述片剂，ttm和dec或齐留通通过屏障或包衣分开。
[0171]
(b)口服施用包括第一口服形式以及所需质子泵抑制剂，诸如保护所述ttm盐免于胃酸影响的此类质子泵抑制剂的第二口服形式，所述第一口服形式为包含ttm盐的所述铜螯合剂与dec或齐留通的组合口服形式，包含ttm盐的所述铜螯合剂单独密封或以其他方式与dec或齐留通分离，所述第一口服形式为没有肠溶包衣的胶囊。
[0172]
(c)口服施用包括以下任选地包装在一起的三个单独口服形式：含有包含ttm盐的所述铜螯合剂且没有肠溶包衣的第一口服形式、含有dec或齐留通的第二口服形式和含有质子泵抑制剂的第三口服形式。
[0173]
(d)口服施用包括第一口服形式和第二口服形式，所述第一口服形式含有包含ttm盐的所述铜螯合剂且没有肠溶包衣，所述第二口服形式含有dec或齐留通与质子泵抑制剂的组合。
[0174]
(e)口服施用包括第一口服形式和第二口服形式，所述第一口服形式含有包含ttm盐的所述铜螯合剂与质子泵抑制剂的组合，包含ttm盐的所述铜螯合剂和所述质子泵抑制
剂各自彼此分开密封，没有肠溶包衣，所述第二口服形式包含dec或齐留通。
[0175]
(f)施用途径的组合，其中包含ttm盐的所述铜螯合剂以具有或没有肠溶包衣的口服形式施用，并且dec或齐留通以吸入或静脉内形式施用。
[0176]
(g)施用途径的组合，其中包含ttm盐的所述铜螯合剂以静脉内形式施用，并且dec或齐留通以口服、吸入或静脉内形式施用。
[0177]
(h)施用途径的组合，其中包含ttm盐的所述铜螯合剂以静脉内形式施用，并且dec或齐留通以吸入形式通过包含贝前列素或氟伏沙明中的至少一种的吸入器施用，例如吸入形式可以包含dec与贝前列素、dec与贝前列素和氟伏沙明的组合、齐留通与贝前列素的组合、或齐留通与贝前列素和氟伏沙明的组合、或前述的组合，其中包含萝卜硫素与具有或不具有dec或齐留通的吸入贝前列素。
[0178]
(i)施用途径的组合，其中包含ttm盐的所述铜螯合剂以静脉内形式施用，并且dec或齐留通以包含氟伏沙明的吸入形式通过吸入器施用。
[0179]
ttm和dec的本发明组合物可以多种口服递送剂型施用，所述剂型包括但不限于包含活性包衣(例如，肠溶包衣)的片剂、含有丸剂与或不与肠溶包衣丸剂的组合的硬壳胶囊、多层肠溶包衣片剂、正常多组分片剂(它也可以是肠溶包衣的)、肠溶包衣胶囊、在不同位置释放每种活性剂的小肠溶包衣胶囊、微型片剂、制粒、包括肠溶胶囊与散剂、颗粒剂、丸剂和/或微型片剂的组合的硬质胶囊等，并且所有这些递送剂型都可以填充到硬质胶囊中。其他形式包括包含熔融挤出的ttm和常规处理或熔融挤出的dec的硬壳胶囊或肠溶胶囊或者通过3d打印技术生产的剂型。
[0180]
例如，在一个示例性实施方式中，剂型可以在含有ttm的片剂的肠溶包衣顶部利用活性包衣(包衣中的dec)。在此实施方式中，制成具有相应成分的ttm片剂并将其肠溶包衣。然后，将活性包衣步骤(即，dec包含在可溶性喷雾溶液中或作为散剂或通过片剂于片剂压缩)应用于片剂。因此，dec立即释放并且ttm受到保护免于酸性胃部内容物。还在此实施方式中，可添加面层以提供分离的活性包衣。
[0181]
在另一个示例性实施方式中，剂型可以是mups(多单元丸剂系统)：将肠溶包衣丸剂与ttm一起压缩在含有dec的基质中。在此实施方式中，将ttm加工成直径低于片剂直径的微型丸剂，将每个丸剂肠溶包衣，所述肠溶包衣分离ttm与dec或可添加的其他共药物。然后将ttm微型丸剂与适合填料、崩解剂和其他赋形剂的混合物压缩在一起，而且在一个丸剂中还含有dec(或其他共药物)。此类片剂可以用外观包衣包衣。
[0182]
在另一个示例性实施方式中，剂型可以是含有ttm的肠溶包衣丸剂和dec的丸剂/散剂的硬壳胶囊。在此实施方式中，将ttm加工成肠溶包衣的微型丸剂，并且然后在硬壳胶囊中连同dec一起填充。在此实施方式中，可以添加粘合剂以允许dec在硬质丸剂中粘合在一起，其中不存在用于dec的肠溶包衣并且在dec或dec和粘合剂形成的丸剂中含有ttm。
[0183]
在另一个示例性实施方式中，剂型可以是肠溶包衣的多层片剂(即，两种药物都在小肠中释放)。在一个实施方式中，制造三层丸剂，从而使dec在一个层上，中间层分离dec和ttm并且ttm包含在第三层中。将片剂整体肠溶包衣，以保护ttm。在此实施方式中ttm在此层中是肠溶的，或者此层中的ttm是肠溶包衣的ttm微型胶囊并被制造成具有粘合剂的层，其可以是或不是肠溶包衣的。此类片剂可以用外观包衣包衣。
[0184]
在另一个示例性实施方式中，剂型可以是也肠溶包衣的正常多组分片剂(用ttm和
dec两者配制)(即，两种药物都在小肠中释放)。在此实施方式中，ttm和dec用合适的压片赋形剂配制以形成单层压缩片剂，然后将其肠溶包衣以保护ttm。可能的话，将ttm或dec包衣以避免导致制剂不稳定的任何化学反应。
[0185]
在另一个示例性实施方式中，剂型可以是含有ttm和dec的肠溶包衣胶囊(即，两种药物都在小肠中释放)。在此实施方式中，ttm和dec两者以合适形式(散剂、微型片剂、丸剂、颗粒剂、珠粒)填充在肠溶包衣的胶囊中。可能的话，将ttm或dec包衣以避免导致制剂不稳定的任何化学反应。
[0186]
在另一个示例性实施方式中，剂型可以是在胶囊内部含有ttm和dec的小肠溶包衣胶囊(dec在胃中释放并且ttm在小肠中释放)。在此实施方式中，ttm填充到较小肠溶包衣胶囊中并且此ttm填充胶囊连同dec一起用于填充较大常规胶囊。常规胶囊是在酸性溶解介质中快速崩解并由赋形剂如明胶或hpmc制成的胶囊。在此实施方式中，较大胶囊将在胃中溶解，释放dec，并且较小肠溶包衣ttm胶囊将经过胃部并在小肠中释放ttm。
[0187]
在另一个示例性实施方式中，剂型可以是ttm填充到肠溶胶囊中，然后将其连同dec散剂、颗粒剂、丸剂、微型片剂等一起置于硬壳胶囊中。在此实施方式中，硬壳胶囊将在胃中溶解，释放dec，并且较小肠溶包衣ttm胶囊将经过胃部并在小肠中释放ttm。硬壳胶囊由hpmc和hpmcas(醋酸琥珀酸hpmc)或提供对酸性介质中的崩解的抗性的其他肠溶聚合物制成。
[0188]
在另一个示例性实施方式中，剂型可以是呈ttm和dec的微型片剂的组合形式或单独通过用合适赋形剂制粒或与其共混并在旋转片剂压缩机中将这些微型片剂压缩来制成。然后可以用肠溶聚合物包衣此类微型片剂。然后将这些微型片剂填充到硬壳胶囊中。在此实施方式中，ttm可以用肠溶聚合物包衣并且dec用或不用肠溶聚合物包衣。
[0189]
在另一个示例性实施方式中，剂型可以是用合适肠溶聚合物制粒的ttm和/或dec。然后将此类制粒压缩成整体或多层片剂。展示形式可包括：含有ttm肠溶颗粒和dec非肠溶颗粒以及可能的组合(即，肠溶ttm+肠溶dec、非肠溶ttm、肠溶dec、非肠溶ttm+非肠溶dec)的整体或多层片剂。在另一个实施方式中，ttm和dec颗粒层可以通过插入层分开。此类片剂可以用外观包衣包衣。
[0190]
将任何上述胶囊展示形式填充到硬壳胶囊中，然后用肠溶聚合物包衣。
[0191]
在另一个示例性实施方式中，对于剂型，ttm可以连同肠溶聚合物一起熔融挤出并且然后可以在硬壳胶囊或肠溶胶囊中填充挤出物连同类似加工的dec或常规加工的dec。可替代地，此类挤出物也可以使用熔融挤出技术模制成单个片剂。在此实施方式中，片剂首先在胃中溶解，释放dec，并且然后已用挤出肠溶聚合物配制的ttm从胃中经过以在小肠中释放。
[0192]
在另一个示例性实施方式中，对于剂型，所需释放特征以及dec和ttm之间的分隔也可以通过目前正在开发的各种3d打印技术来实现。
[0193]
在其他示例性实施方式中，两部分丸剂包含含有15至100mg的ttm与或不与填充剂的小肠溶胶囊，此类填充剂确保ttm胶囊在ttm的体积不足以填充所述胶囊时不会崩解，并且将此类胶囊插入到较大胶囊中，所述较大胶囊也填充有dec并将在胃中溶解。外部丸剂中的dec将包含50mg至350mg范围的dec。
[0194]
在其他示例性实施方式中，ttm和dec的剂型或任何口服剂型的任何上述示例性实
施方式也可以作为单个剂量的一部分、作为额外口服形式或作为口服形式之一的额外组分与以下一种或多种一起服用：选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(ssri)，诸如氟伏沙明、萝卜硫素、芹黄素、吲哚-3-甲醇(i3c)、蟾蜍灵、applied therapeutics醛糖还原酶抑制剂at-001、黄芩苷、姜黄素和槲皮素。可替代地，关于黄芩苷、姜黄素和槲皮素，在发明护理单元设置中，这些药剂可以作为浆液经由胃肠管施用，以便实现更高生物利用度。
[0195]
在另一个示例性实施方式中，单个剂量可以施用包含ttm盐的所述铜螯合剂、dec或齐留通中的至少一种，与或不与伊维菌素，以及任选的质子泵抑制剂。此单个剂量可包括例如含有dec或齐留通加上伊维菌素的第一口服形式以及含有包含ttm盐的铜螯合剂和肠溶包衣的第二口服形式。此单个剂量也可以作为额外口服形式或与第一口服形式或第二口服形式的组合与以下一种或多种一起服用：氟伏沙明、萝卜硫素、芹黄素、吲哚-3-甲醇(i3c)、蟾蜍灵、applied therapeutics醛糖还原酶抑制剂at-001、黄芩苷、姜黄素和槲皮素。可替代地，关于黄芩苷、姜黄素和槲皮素，在发明护理单元设置中，这些药剂可以作为浆液经由胃肠管施用，以便实现更高生物利用度。
[0196]
在其他示例性实施方式中，ttm和dec、ttm和齐留通与其他活性剂的任何组合通过多种形式经由不同途径施用，与或不与伊维菌素、氟伏沙明、萝卜硫素、芹黄素、吲哚-3-甲醇(i3c)、蟾蜍灵、applied therapeutics醛糖还原酶抑制剂at-001、黄芩苷、姜黄素和槲皮素一起，也可以与靶向冠状病毒诸如covid-19的当前和潜在药物经由不同作用机制诸如at-527(atea pharmceutical’s抗病毒治疗剂)、西米沙替布(silmitasertib)( senhwa biosciences)、吉尔
·
瑞德西韦(gil remdesivir)(gilead science inc.)、ilteritinib(由日本astellas pharma制造)、阿贝西利(abemaciclib)(eli lily)和那力替尼(ralimetinib)、达沙替尼(dasatinib)(bristol-meyers squibb)以及法匹拉韦(favipiravir)(或印度“fabiflu”)和阿维法韦(avifavir)(俄罗斯)(它与法匹拉韦相关并由日本fujifilm toyama chemical开发)以及提供针对covid 19的抗病毒活性的蛋白酶抑制剂pfizer抗病毒剂(称为pf-07321332)一起施用。
[0197]
在其他示例性实施方式中，ttm和dec、ttm和齐留通与其他活性剂的组合用于通过多种形式经由不同途径施用，与或不与伊维菌素、选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(ssri)、诸如氟伏沙明、萝卜硫素、芹黄素、吲哚-3-甲醇(i3c)、蟾蜍灵、applied therapeutics醛糖还原酶抑制剂at-001、黄芩苷、姜黄素和槲皮素，也可以与含有冠状病毒的药物或在不同病毒的情况下与抗体和任何其他抗病毒药物一起施用。
[0198]
在一个替代性实施方式中，有需要的患者的冠状病毒诸如covid-19、covid-19的突变体、与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒或ards或流感的治疗可以通过向患者施用治疗有效量的乙胺嗪(dec)或齐留通和治疗有效量的至少一种或两种选自由以下组成的组的其他活性剂来进行：选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(ssri)、氟伏沙明、萝卜硫素、芹黄素、吲哚-3-甲醇、黄芩苷、蟾蜍灵、槲皮素、姜黄素、营养基因组学nrf2活化剂、nf-κb抑制剂和前列环素类似物以及应用治疗剂醛糖还原酶抑制剂at-001，其中所述冠状病毒为covid-19、covid-19的突变、与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒或ards。ttm和dec、ttm和齐留通与其他活性剂的任何前述组合用于通过多种形式经由不同途径施用。
[0199]
上述描述和附图说明了本发明的原理、优选的实施方式和操作模式。然而，本发明
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my robinot,thomas vallet,benjamin e.nilsson-payant,claudia hernandez-armenta,alistair dunham,sebastian weigang,julian knerr,maya modak,diego quintero,yuan zhou,aurelien dugourd,alberto valdeolivas,trupti patil,qiongyu li,ruth h
ü
ttenhain,merve cakir,monita muralidharan,minkyu kim,gwendolyn jang,beril tutuncuoglu,joseph hiatt,jeffrey z.guo,jiewei xu,sophia bouhaddou,christopher j.p.mathy,anna gaulton,emma j.manners,eloy f
é
lix,ying shi,marissa goff,jean k.lim,timothy mcbride,michael c.o'neal,yiming cai,jason c.j.chang,david j.broadhurst,saker klippsten,emmie de wit,andrew r.leach,tanja kortemme,brian shoichet,melanie ott,julio saez-rodriguez,benjamin r.tenoever,dyche mullins,elizabeth r.fischer,georg kochs,robert grosse,adolfo garc
í
a-sastre,marco vignuzzi,jeffery r.johnson,kevan m.shokat,danielle l.swaney,pedro beltrao,nevan j.krogan pii:s0092-8674(20)30811-4 doi:https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.06.034 reference:cell 11493
[0220]
(19)hoffmann br,wagner jr,prisco ar,janiak a,greene as.vascular endothelial growth factor-a signaling in bone marrow-derived endothelial progenitor cells exposed to hypoxic stress.physiol genomics.2013 nov 1；45(21):1021-34.

技术特征：
1.一种治疗有需要的患者的冠状病毒或流感的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的包含四硫代钼酸盐的铜螯合剂和至少一种共药物，其中所述冠状病毒为covid-19、covid 19的突变体、另一种冠状病毒或与covid 19或急性呼吸窘迫综合征(ards)具有类似作用机制的变体。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述铜螯合剂包含根据以下的四硫代钼酸盐：x(mos4)，其中：x为(2li)
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(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地为h或选自由以下组成的组的任选地取代的基团：烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、烷基芳烷基、杂芳烷基、环烷基烷基和杂环烷基烷基；并且r4和r8是不存在的或独立地为h或选自由以下组成的组的任选地取代的基团：烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、烷基芳烷基、杂芳烷基、环烷基烷基和杂环烷基烷基。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述铜螯合剂包含[nh4]2mos4。4.根据权利要求1所述的方法，其中包含四硫代钼酸盐的所述铜螯合剂与所述共药物一样口服施用。5.根据权利要求4所述的方法，其中包含四硫代钼酸盐的所述铜螯合剂以延迟释放制剂口服施用，所述延迟释放制剂在所述口服形式经过胃后释放包含四硫代钼酸盐的所述铜螯合剂。6.根据权利要求1所述的方法，其中包含四硫代钼酸盐的所述铜螯合剂静脉内施用并且所述共药物口服施用或通过吸入施用。7.一种组合物，所述组合物包含：铜螯合剂，所述铜螯合剂包含四硫代钼酸盐；5-脂氧合酶抑制剂，所述5-脂氧合酶抑制剂选自乙胺嗪(dec)和齐留通；至少一种其他活性剂，所述至少一种其他活性剂可选自由以下组成的组：选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(ssri)、黄芩苷、氟伏沙明、蟾蜍灵、萝卜硫素、槲皮素、姜黄素、nf-κb抑制剂、芹黄素、吲哚-3-甲醇、营养基因组学nrf2活化剂、nf-κb抑制剂、前列环素类似物；以及用于药物递送的药学上可接受的载体。8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述铜螯合剂包含根据以下的四硫代钼酸盐：x(mos4)，其中：x为(2li)
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(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地为h或选自由以下组成的组的任选地取代的基团：烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、烷基芳烷基、杂芳烷基、环烷基烷基和杂环烷基烷基；并且r4和r8是不存在的或独立地为h或选自由以下组成的组的任选地取代的基团：烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、烷基芳烷基、杂芳烷基、环烷基烷基和杂
环烷基烷基。9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述铜螯合剂包含[nh4]2mos4。10.根据权利要求7所述的组合物，其中所述组合物呈静脉内形式或口服形式。11.根据权利要求7所述的组合物，其中所述口服形式是延迟释放制剂，所述延迟释放制剂释放所述铜螯合剂，所述铜螯合剂包含(a)在四硫代钼酸盐的所述口服形式穿过胃之后的四硫代钼酸盐和(b)在胃中或在所述其他活性剂穿过胃之后释放的至少一种其他活性剂。12.一种治疗有需要的患者的冠状病毒或流感的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的包含四硫代钼酸盐的铜螯合剂和治疗有效量的至少一种或两种选自由以下组成的组的活性剂：选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(ssri)、乙胺嗪(dec)、齐留通、氟伏沙明、萝卜硫素、芹黄素、吲哚-3-甲醇、黄芩苷、蟾蜍灵、槲皮素、姜黄素、营养基因组学nrf2活化剂、nf-κb抑制剂和前列环素类似物以及applied therapeutics醛糖还原酶抑制剂at-001，其中所述冠状病毒为covid-19、covid-19的突变体、与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒或ards。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述冠状病毒为covid-19、covid 19的突变体、与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒或ards。14.根据权利要求12所述的方法，其中所述铜螯合剂包含根据以下的四硫代钼酸盐：x(mos4)，其中：x为(2li)
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(r5)(r6)(r7)(r8)]}，r1、r2、r3、r5、r6和r7独立地为h或选自由以下组成的组的任选地取代的基团：烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、烷基芳烷基、杂芳烷基、环烷基烷基和杂环烷基烷基；并且r4和r8是不存在的或独立地为h或选自由以下组成的组的任选地取代的基团：烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、烷基芳烷基、杂芳烷基、环烷基烷基和杂环烷基烷基。15.根据权利要求12所述的方法，其中所述铜螯合剂包含[nh4]2mos4。16.根据权利要求12所述的方法，其中包含四硫代钼酸盐的所述铜螯合剂和所述至少一种其他活性剂单独施用。17.根据权利要求12所述的方法，其中包含四硫代钼酸盐的所述铜螯合剂口服施用并且所述至少一种其他活性剂静脉内施用或吸入。18.根据权利要求12所述的方法，其中包含四硫代钼酸盐(ttm)的所述铜螯合剂与dec或齐留通一起以选自由以下组成的组的方式施用：(a)口服施用包含ttm盐的所述铜螯合剂和dec或齐留通的组合口服形式，它们全部在肠溶包衣胶囊或片剂中，其中对于所述肠溶包衣胶囊，包含ttm盐的所述铜螯合剂与所述dec或齐留通通过包衣分开或者密封在所述胶囊的与所述dec或齐留通分开的隔室中，并且其中对于所述片剂，所述ttm和dec或齐留通通过屏障或包衣分开，(b)口服施用第一口服形式以及所需质子泵抑制剂，诸如保护所述ttm盐免于胃酸影响的此类质子泵抑制剂的第二口服形式，所述第一口服形式为包含ttm盐的所述铜螯合剂与
dec或齐留通的组合口服形式，包含ttm盐的所述铜螯合剂单独密封或以其他方式与dec或齐留通分离，所述第一口服形式为没有肠溶包衣的胶囊，(c)口服施用以下任选地包装在一起的三个单独口服形式：含有包含ttm盐的所述铜螯合剂且没有肠溶包衣的第一口服形式、含有dec或齐留通的第二口服形式和含有质子泵抑制剂的第三口服形式，(d)口服施用第一口服形式和第二口服形式，所述第一口服形式含有包含ttm盐的所述铜螯合剂且没有肠溶包衣，所述第二口服形式含有dec或齐留通与质子泵抑制剂的组合，(e)口服施用第一口服形式和第二口服形式，所述第一口服形式含有包含ttm盐的所述铜螯合剂与质子泵抑制剂的组合，包含ttm盐的所述铜螯合剂和所述质子泵抑制剂各自彼此分开密封，没有肠溶包衣，所述第二口服形式包含dec或齐留通，(f)施用途径的组合，其中包含ttm盐的所述铜螯合剂以具有或没有肠溶包衣的口服形式施用，并且dec或齐留通以吸入或静脉内形式施用，(g)施用途径的组合，其中包含ttm盐的所述铜螯合剂以静脉内形式施用，并且dec或齐留通以口服、吸入或静脉内形式施用，(h)施用途径的组合，其中包含ttm盐的所述铜螯合剂以静脉内形式施用，并且dec或齐留通以包含贝前列素、或氟伏沙明、或萝卜硫素中的至少一种的吸入形式施用，(i)施用途径的组合，其中包含ttm盐的所述铜螯合剂以静脉内形式施用，并且dec或齐留通以包含氟伏沙明或萝卜硫素的吸入形式通过吸入器施用。19.根据权利要求18所述的方法，其中包含四硫代钼酸盐(ttm)的所述铜螯合剂与dec或齐留通一起以一种或多种口服形式施用，并且一种或多种另外的活性剂另外以一种或多种口服形式施用或与所述一种或多种口服形式组合施用：氟伏沙明、萝卜硫素、选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(ssri)、芹黄素、吲哚-3-甲醇(i3c)、蟾蜍灵、applied therapeutics醛糖还原酶抑制剂at-001、黄芩苷、姜黄素和槲皮素、营养基因组学nrf2活化剂、nf-κb抑制剂和前列环素类似物。20.根据权利要求12所述的方法，包含四硫代钼酸盐(ttm)的所述铜螯合剂与dec或齐留通加伊维菌素一起以包含dec或齐留通加伊维菌素的第一口服形式和含有包含ttm盐的所述铜螯合剂且具有肠溶包衣的第二口服形式施用。21.根据权利要求12所述的方法，包含四硫代钼酸盐(ttm)的所述铜螯合剂与dec或齐留通或萝卜硫素加氟伏沙明或萝卜硫素以含有dec或齐留通或萝卜硫素加氟伏沙明或萝卜硫素的第一口服形式和含有包含ttm盐的所述铜螯合剂且具有肠溶包衣的第二口服形式施用。22.根据权利要求12所述的方法，所述方法进一步包括将治疗有效量的包含四硫代钼酸盐的铜螯合剂或治疗有效量的dec与另一种抗病毒组合物或抗体治疗或另一种冠状病毒治疗一起施用。23.根据权利要求12所述的方法，所述方法进一步包括将治疗有效量的包含四硫代钼酸盐的铜螯合剂和治疗有效量的至少一种其他活性剂、通过抗病毒机制靶向冠状病毒的药物、抗病毒蛋白、冠状病毒抗体或具有广谱抗病毒活性的研究核苷酸类似物一起施用，其中此类治疗靶向所述病毒。24.一种治疗有需要的患者的冠状病毒或流感的方法，所述方法包括向所述患者施用
治疗有效量的乙胺嗪(dec)或齐留通与治疗有效量的至少一种或两种选自由以下组成的组的活性剂：选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(ssri)、氟伏沙明、萝卜硫素、芹黄素、吲哚-3-甲醇、黄芩苷、蟾蜍灵、槲皮素、姜黄素、营养基因组学nrf2活化剂、nf-κb抑制剂和前列环素类似物以及applied therapeutics醛糖还原酶抑制剂at-001，其中所述冠状病毒为covid-19、covid-19的突变体、与covid-19具有类似作用机制的另一种冠状病毒或ards。

技术总结
提供了一种治疗冠状病毒例如COVID 19、流感和ARDS的方法。将包含四硫代钼酸盐的铜螯合剂与5-脂氧合酶抑制剂，例如乙胺嗪或齐留通一起施用。黄芩苷、蟾蜍灵、槲皮素、姜黄素、NF-κB抑制剂、Applied Therapeutics醛糖还原酶抑制剂AT-001、萝卜硫素或氟伏沙明可以是另外的药物。这是冠状病毒例如COVID 19的介入治疗，理想地在所述疾病的第二阶段中、在肺部阶段中，优选地在过度炎症阶段之前、作为减少对呼吸机的需要并延长住院患者的存活期的预防性疗法。双药治疗组合的目标为通过靶向血管内疾病组分来预防ARDS和由COVID 19感染引起的其他器官损伤。口服和静脉内形式的四硫代钼酸盐与静脉内或吸入形式的其他药物的组合被设计来治疗晚期形式的这些疾病。疗晚期形式的这些疾病。


技术研发人员：诺伯特
受保护的技术使用者：瑞沃斯帕有限责任公司
技术研发日：2021.08.10
技术公布日：2023/8/6