一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂及其制备方法与流程

1.本发明涉及噬菌体栓剂领域，具体来说，涉及一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂及其制备方法。


背景技术：

2.子宫内膜炎是乳业生产中常见的一种母畜生殖器官疾病，也是导致奶牛不孕的主要原因之一，引起奶牛繁殖能力降低，严重影响奶牛养殖业的经济效益，阻碍了奶牛业的发展。因此，临床上做好子宫内膜炎的预防和治疗，对促进奶业增效，奶农增收意义重大，从而保证高产奶牛良种繁育体系建立与奶业规范化生产技术研究。
3.病原性细菌在牛子宫内膜炎的发生中起着最重要的作用，其中葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌等感染最常见。此外，还有变形杆菌、假单胞菌、化脓性棒状杆菌、支原体、绿脓杆菌等。但在不同地区和不同情况下引起牛子宫内膜炎的细菌种类和各种细菌所占的比例不同。
4.目前，治疗奶牛子宫内膜炎普遍采用子宫内投放抗生素法，国内外报道都较多。当子内膜炎感染严重，全身症状较明显，或继发其他感染，全身使用抗生素效果较好，常用的抗菌药物有青霉素、土霉素、四环素、金霉素、链霉素、新霉素、卡那霉素、庆大霉素、氯霉素、磺胺类、呋喃唑酮和蒽诺沙星等。但抗生素的大量应用，不但容易使引起奶牛子宫内膜炎的细菌产生耐药性，而且会形成抗生素奶，对人类造成危害，其经济效益也值得怀疑。因此制备一种安全性好可靠性高的栓剂用以治疗奶牛子宫内膜炎显得尤为重要。
5.针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。


技术实现要素：

6.针对相关技术中的问题，本发明提出一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂及其制备方法，以克服现有相关技术所存在的上述技术问题。
7.为此，本发明采用的具体技术方案如下：
8.根据本发明的一个方面，提供了一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂，包括以下原料组分：
9.噬菌体组20-50g、甘油明胶30-50g、生物制剂10-15g、雌激素5-10g、聚维酮碘5-10g、磺胺喀啶钠5-10g、前列腺素5-10g、嗜酸乳杆菌2-6g及中药辅料10-20g。
10.进一步的，所述噬菌体组包括以下原料组分：沙门氏菌噬菌体4-10g、大肠杆菌噬菌体2-5g及金黄色葡萄球菌噬菌体1-2.5g，所述沙门氏菌噬菌体、所述大肠杆菌噬菌体及所述金黄色葡萄球菌噬菌体的组分占比为4:2:1。
11.进一步的，所述甘油明胶包括以下原料组分：水1-5g、明胶2-10g、甘油7-35g，所述甘油明胶中的所述水、所述明胶及所述甘油的组分占比为1:2:7。
12.进一步的，所述生物制剂包括微生物多糖、嗜中性白细胞提取物、高免血清和颗粒细胞中的一种或多种。
13.进一步的，所述中药辅料包括当归1-1.5g、川芎0.5-1g、桃仁0.5-1g、地丁0.5-1g、连翘1-1.5g、双花0.5-1g、黄芩0.5-1g、丹参0.5-1g、蒲黄0.5-1g、益母草0.5-1g。
14.根据本发明的另一个方面，还提供了一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：
15.s1、根据该栓剂的预设体积计算甘油明胶的需求量；
16.s2、采用水、明胶及甘油1:2:7的配比制备甘油明胶，并根据需求量称取甘油明胶；
17.s3、根据需求向称取好的甘油明胶中加入沙门氏菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体、金黄色葡萄球菌噬菌体、微生物多糖、雌激素、聚维酮碘、磺胺喀啶钠、前列腺素及嗜酸乳杆菌并加热熔化形成混合物一；
18.s4、按比例称取当归、川芎、桃仁、地丁、连翘、双花、黄芩、丹参、蒲黄及益母草，并粉碎形成混合物二；
19.s5、将上述混合物一及混合物二均匀混合并注入模具中；
20.s6、经刮平冷却后，取模制得噬菌体栓剂。
21.进一步的，s3中所述加热熔化形成混合物一可采用水浴加热或蒸汽浴加热方式。
22.进一步的，s4中所述混合物二应经过60目筛进行过滤。
23.本发明的有益效果为：
24.(1)、本发明通过将沙门氏菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体及金黄色葡萄球菌噬菌体作为主要功能成分，可以实现对引起奶牛子宫内膜炎的沙门氏菌、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌进行有效破坏，并避免细菌产生耐药性；通过添加生物制剂、雌激素、前列腺素及嗜酸乳杆菌可以实现辅助治疗的效果，从而提高药效。
25.(2)、通过添加聚维酮碘，可达到广谱抗菌、抗真菌、消炎和止痛等作用，且能改善生殖器官的增生过程，激活子宫的收缩功能，缩短病牛康复期；磺胺喀啶钠可软化子宫，并抑制病原微生物繁殖；另外，通过添加中药辅料，可实现补血生血、养阴生津、补阴虚血亏及清湿热、退虚热、清热解毒消肿并加强新陈代谢的功效。
附图说明
26.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
27.图1是根据本发明实施例的一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂制备方法的流程示意图。
具体实施方式
28.为进一步说明各实施例，本发明提供有附图，这些附图为本发明揭露内容的一部分，其主要用以说明实施例，并可配合说明书的相关描述来解释实施例的运作原理，配合参考这些内容，本领域普通技术人员应能理解其他可能的实施方式以及本发明的优点，图中的组件并未按比例绘制，而类似的组件符号通常用来表示类似的组件。
29.根据本发明的实施例，提供了一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂及其制备方
法。
30.以下实例中，所涉及菌株代号均为本公司的命名方式编号，部分菌株为市场购买获得。
31.大肠杆菌噬菌体cl1(escherichia coli phage cl1)的保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，邮编430072；保藏日期为2018年12月28日，保藏编号cctcc no：m 2018936。
32.金黄色葡萄球菌噬菌体j1p2(staphylococcus aureus phage j1p2)的保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，邮编430072；保藏日期为2016年5月26日，保藏编号cctcc no：m 2016285。
33.沙门氏菌噬菌体sg8p3(salmonella pullorum phage sg8p3)的保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，邮编430072；保藏日期为2020年06月12日，保藏编号cctcc no：m 2020205。
34.现结合附图和具体实施方式对本发明进一步说明，根据本发明实施例的治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂，包括以下原料组分：
35.噬菌体组20-50g、甘油明胶30-50g、生物制剂10-15g、雌激素5-10g、聚维酮碘5-10g、磺胺喀啶钠5-10g、前列腺素5-10g、嗜酸乳杆菌2-6g及中药辅料10-20g。
36.在一个实施例中，所述噬菌体组包括以下原料组分：沙门氏菌噬菌体4-10g、大肠杆菌噬菌体2-5g及金黄色葡萄球菌噬菌体1-2.5g，所述沙门氏菌噬菌体、所述大肠杆菌噬菌体及所述金黄色葡萄球菌噬菌体的组分占比为4:2:1。
37.具体的，临床应用中，细菌噬菌体的宿主范围一般比抗生素较窄。一种噬菌体一般只对一种特定的细菌，或一种细菌的某个特定菌株产生效力。这种有限的宿主范围对疾病治疗非常有利，原则上讲，噬菌体疗法对胃肠道菌群和体内生态的不良影响比常用的抗生素小得多，因为抗生素的使用通常会影响肠道菌群。
38.在一定的条件下，噬菌体疗法非常有效，对比抗生素具有一些独特的优势。细菌也会对噬菌体产生耐药性，但是研发新的噬菌体比研发新的抗生素要简单得多。获得新的噬菌体只需要几周，而获得新的抗生素却需要很多年。当细菌产生抗药性时，相关噬菌体也会自然与之一起发生变化。超级细菌出现时，超级噬菌体已随之进化。我们要做的只是使他们始终处于同一环境。噬菌体的局部使用具有特殊的优势，因为它们穿透力更强，能够到达所有细菌感染的部位，而抗生素的浓度会在感染表面以下迅速降低。在裂解特定的细菌目标之后，噬菌体会立刻停止繁殖。因此噬菌体不会发展出类似于抗生素的继发性耐药。随着耐药性细菌产生的问题越来越多，以及新抗生素研发的缺乏，使用噬菌体将会是应对细菌感染的选择之一。
39.在一个实施例中，所述甘油明胶包括以下原料组分：水1-5g、明胶2-10g、甘油7-35g，所述甘油明胶中的所述水、所述明胶及所述甘油的组分占比为1:2:7。
40.在一个实施例中，所述生物制剂包括微生物多糖、嗜中性白细胞提取物、高免血清和颗粒细胞中的一种或多种，颗粒细胞等。其中细菌性脂多糖是治疗奶牛子宫内膜炎主要的生物制剂，它通过调节奶牛子宫自身免疫系统，有效激活免疫细胞，产生细胞因子等清除子宫内炎症，从而达到辅助治疗目的。
41.在一个实施例中，所述中药辅料包括当归1-1.5g、川芎0.5-1g、桃仁0.5-1g、地丁
0.5-1g、连翘1-1.5g、双花0.5-1g、黄芩0.5-1g、丹参0.5-1g、蒲黄0.5-1g、益母草0.5-1g。
42.如图1所示，根据本发明的另一个实施例，还提供了一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂的制备方法，，该制备方法包括以下步骤：
43.s1、根据该栓剂的预设体积计算甘油明胶的需求量；
44.s2、采用水、明胶及甘油1:2:7的配比制备甘油明胶，并根据需求量称取甘油明胶；
45.s3、根据需求向称取好的甘油明胶中加入沙门氏菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体、金黄色葡萄球菌噬菌体、微生物多糖、雌激素、聚维酮碘、磺胺喀啶钠、前列腺素及嗜酸乳杆菌并加热熔化形成混合物一；
46.在一个实施例中，s3中所述加热熔化形成混合物一可采用水浴加热或蒸汽浴加热方式，栓剂的熔点应略高于体温，塞入腔道不能熔化。
47.s4、按比例称取当归、川芎、桃仁、地丁、连翘、双花、黄芩、丹参、蒲黄及益母草，并粉碎形成混合物二；
48.在一个实施例中，s4中所述混合物二应经过60目筛进行过滤。
49.s5、将上述混合物一及混合物二均匀混合并注入模具中；
50.s6、经刮平冷却后，取模制得噬菌体栓剂。
51.实施例一
52.沙门氏菌噬菌体4g、大肠杆菌噬菌体2g及金黄色葡萄球菌噬菌体1g、甘油明胶30g、微生物多糖10g、雌激素5g、聚维酮碘5g、磺胺喀啶钠5g、前列腺素5g、嗜酸乳杆菌2g、当归1g、川芎0.5g、桃仁0.5g、地丁0.5g、连翘1g、双花0.5g、黄芩0.5g、丹参0.5g、蒲黄0.5g、益母草0.5g。
53.s1、根据该栓剂的预设体积计算甘油明胶的需求量；
54.s2、采用水、明胶及甘油1:2:7的配比制备甘油明胶，并根据需求量称取甘油明胶30g；
55.s3、根据需求向称取好的甘油明胶中加入沙门氏菌噬菌体4g、大肠杆菌噬菌体2g、金黄色葡萄球菌噬菌体1g、微生物多糖10g、雌激素5g、聚维酮碘5g、磺胺喀啶钠5g、前列腺素5g及嗜酸乳杆菌2g并加热熔化形成混合物一；
56.s4、按比例称取当归1g、川芎0.5g、桃仁0.5g、地丁0.5g、连翘1g、双花0.5g、黄芩0.5g、丹参0.5g、蒲黄0.5g、益母草0.5g，并粉碎形成混合物二；
57.s5、将上述混合物一及混合物二均匀混合并注入模具中；
58.s6、经刮平冷却后，取模制得噬菌体栓剂。
59.实施例二
60.沙门氏菌噬菌体8g、大肠杆菌噬菌体4g及金黄色葡萄球菌噬菌体2g、甘油明胶40g、微生物多糖13g、雌激素8g、聚维酮碘8g、磺胺喀啶钠8g、前列腺素8g、嗜酸乳杆菌4g、当归1.3g、川芎0.8g、桃仁0.8g、地丁0.8g、连翘1.3g、双花0.8g、黄芩0.8g、丹参0.8g、蒲黄0.8g、益母草0.8g。
61.s1、根据该栓剂的预设体积计算甘油明胶的需求量；
62.s2、采用水、明胶及甘油1:2:7的配比制备甘油明胶，并根据需求量称取甘油明胶40g；
63.s3、根据需求向称取好的甘油明胶中加入沙门氏菌噬菌体8g、大肠杆菌噬菌体4g
及金黄色葡萄球菌噬菌体2g、微生物多糖13g、雌激素8g、聚维酮碘8g、磺胺喀啶钠8g、前列腺素8g、嗜酸乳杆菌4g并加热熔化形成混合物一；
64.s4、按比例称取当归1.3g、川芎0.8g、桃仁0.8g、地丁0.8g、连翘1.3g、双花0.8g、黄芩0.8g、丹参0.8g、蒲黄0.8g、益母草0.8g，并粉碎形成混合物二；
65.s5、将上述混合物一及混合物二均匀混合并注入模具中；
66.s6、经刮平冷却后，取模制得噬菌体栓剂。
67.实施例三
68.沙门氏菌噬菌体10g、大肠杆菌噬菌体5g及金黄色葡萄球菌噬菌体2.5g、甘油明胶50g、微生物多糖15g、雌激素10g、聚维酮碘10g、磺胺喀啶钠10g、前列腺素10g、嗜酸乳杆菌6g、当归1.5g、川芎1g、桃仁1g、地丁1g、连翘1.5g、双花1g、黄芩1g、丹参1g、蒲黄1g、益母草1g。
69.s1、根据该栓剂的预设体积计算甘油明胶的需求量；
70.s2、采用水、明胶及甘油1:2:7的配比制备甘油明胶，并根据需求量称取甘油明胶50g；
71.s3、根据需求向称取好的甘油明胶中加沙门氏菌噬菌体10g、大肠杆菌噬菌体5g及金黄色葡萄球菌噬菌体2.5g、微生物多糖15g、雌激素10g、聚维酮碘10g、磺胺喀啶钠10g、前列腺素10g、嗜酸乳杆菌6g并加热熔化形成混合物一；
72.s4、按比例称取当归1.5g、川芎1g、桃仁1g、地丁1g、连翘1.5g、双花1g、黄芩1g、丹参1g、蒲黄1g、益母草1g，并粉碎形成混合物二；
73.s5、将上述混合物一及混合物二均匀混合并注入模具中；
74.s6、经刮平冷却后，取模制得噬菌体栓剂。
75.以下对本发明中的三组实施例做具体实验：
76.选择某大型奶牛场产后的奶牛45头，以阴道排出炎性分泌物为主要特征，直肠检查，子宫颈稍粗，子宫角比正常大，壁厚，子宫弹性降低，收缩反应减弱，阴道检查，子宫颈口松弛开张，阴道及子宫粘膜充血，宫颈口附有炎性浑浊分泌物，卵巢基本正常。
77.将前40头奶牛随机分为四组，每组10头。第一组使用实施例一；第二组使用实施例二，第三组使用实施例三，第四组使用抗生素作为对照组，剩下的5头奶牛分为第五组，不做任何处理作为空白组，饲喂条件相同。
78.在治疗后的下一次发情时，当发现奶牛的发情行为后12h，通过直肠把握法应用冷冻精液进行人工授精1次，在人工授精2.5个月后，通过直肠检查法确定是否受孕，统计计算试验奶牛的妊娠率。
79.表1试验奶牛妊娠率统计表
[0080][0081]
因在不同地区和不同情况下引起牛子宫内膜炎的细菌种类和各种细菌所占的比例不同，故本实验通过设置四次实验，且四次实验的所选取的奶牛场地点均不同，根据表1试验奶牛妊娠率统计表可知，四次实验中实施例一平均妊娠率为75％，实施例二平均妊娠率为85％，实施例三平均妊娠率为97.5％，对照组平均妊娠率为50％，空白组平均妊娠率为20％，通过实验可知，本发明中的实施例三对于提高奶牛妊娠率具有显著的效果。
[0082]
综上所述，借助于本发明的上述技术方案，本发明通过将沙门氏菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体及金黄色葡萄球菌噬菌体作为主要功能成分，可以实现对引起奶牛子宫内膜炎的沙门氏菌、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌进行有效破坏，并避免细菌产生耐药性；通过添加生物制剂、雌激素、前列腺素及嗜酸乳杆菌可以实现辅助治疗的效果，从而提高药效。
[0083]
此外，通过添加聚维酮碘，可达到广谱抗菌、抗真菌、消炎和止痛等作用，且能改善生殖器官的增生过程，激活子宫的收缩功能，缩短病牛康复期；磺胺喀啶钠可软化子宫，并抑制病原微生物繁殖；另外，通过添加中药辅料，可实现补血生血、养阴生津、补阴虚血亏及清湿热、退虚热、清热解毒消肿并加强新陈代谢的功效。
[0084]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂，其特征在于，包括以下原料组分：噬菌体组20-50g、甘油明胶30-50g、生物制剂10-15g、雌激素5-10g、聚维酮碘5-10g、磺胺喀啶钠5-10g、前列腺素5-10g、嗜酸乳杆菌2-6g及中药辅料10-20g。2.根据权利要求1所述的一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂，其特征在于，所述噬菌体组包括以下原料组分：沙门氏菌噬菌体4-10g、大肠杆菌噬菌体2-5g及金黄色葡萄球菌噬菌体1-2.5g。3.根据权利要求2所述的一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂，其特征在于，所述沙门氏菌噬菌体、所述大肠杆菌噬菌体及所述金黄色葡萄球菌噬菌体的组分占比为4:2:1。4.根据权利要求3所述的一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂，其特征在于，所述甘油明胶包括以下原料组分：水1-5g、明胶2-10g、甘油7-35g。5.根据权利要求4所述的一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂，其特征在于，所述甘油明胶中的所述水、所述明胶及所述甘油的组分占比为1:2:7。6.根据权利要求5所述的一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂，其特征在于，所述生物制剂包括微生物多糖、嗜中性白细胞提取物、高免血清和颗粒细胞中的一种或多种。7.根据权利要求6所述的一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂，其特征在于，所述中药辅料包括当归1-1.5g、川芎0.5-1g、桃仁0.5-1g、地丁0.5-1g、连翘1-1.5g、双花0.5-1g、黄芩0.5-1g、丹参0.5-1g、蒲黄0.5-1g、益母草0.5-1g。8.一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂的制备方法，其特征在于，用于权利要求7所述的治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂的制备，该制备方法包括以下步骤：s1、根据该栓剂的预设体积计算甘油明胶的需求量；s2、采用水、明胶及甘油1:2:7的配比制备甘油明胶，并根据需求量称取甘油明胶；s3、根据需求向称取好的甘油明胶中加入沙门氏菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体、金黄色葡萄球菌噬菌体、微生物多糖、雌激素、聚维酮碘、磺胺喀啶钠、前列腺素及嗜酸乳杆菌并加热熔化形成混合物一；s4、按比例称取当归、川芎、桃仁、地丁、连翘、双花、黄芩、丹参、蒲黄及益母草，并粉碎形成混合物二；s5、将上述混合物一及混合物二均匀混合并注入模具中；s6、经刮平冷却后，取模制得噬菌体栓剂。9.根据权利要求8所述的一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂的制备方法，其特征在于，s3中所述加热熔化形成混合物一可采用水浴加热或蒸汽浴加热方式。10.根据权利要求8所述的一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂的制备方法，其特征在于，s4中所述混合物二应经过60目筛进行过滤。

技术总结
本发明公开了一种治疗奶牛子宫内膜炎的噬菌体栓剂及其制备方法，该噬菌体栓剂包括以下原料组分：噬菌体组20-50g、甘油明胶30-50g、生物制剂10-15g、雌激素5-10g、聚维酮碘5-10g、磺胺喀啶钠5-10g、前列腺素5-10g、嗜酸乳杆菌2-6g及中药辅料10-20g。有益效果：本发明通过将沙门氏菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体及金黄色葡萄球菌噬菌体作为主要功能成分，可以实现对引起奶牛子宫内膜炎的沙门氏菌、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌进行有效抑制，并避免细菌产生耐药性；通过添加生物制剂、雌激素、前列腺素及嗜酸乳杆菌可以实现辅助治疗的效果，从而提高药效。效。效。


技术研发人员：徐旭凌 丛郁 何四龙 乔欢 费文斌 黄杰 陈海 胡怿林 刘墨 谢晓莉 靳菊
受保护的技术使用者：菲吉乐科（南京）生物科技有限公司
技术研发日：2022.02.14
技术公布日：2023/8/23