用于诊断乳腺癌化疗心脏损伤的piRNA标志物、试剂盒及其应用的制作方法

用于诊断乳腺癌化疗心脏损伤的pirna标志物、试剂盒及其应用
技术领域
1.本发明涉及一种用于诊断乳腺癌化疗心肌损伤的标志物，具体地说是一种p irna标志物、试剂盒及其应用，属于医学分子诊断领域。


背景技术：

2.乳腺癌是世界范围内女性最常见的恶性肿瘤之一。据报道，乳腺癌患者在诊断和原发肿瘤治疗后可能发生转移。乳腺癌表现出向不同器官转移的倾向，包括骨、肺、肝和脑，这被称为转移性异质性，导致对治疗和患者预后的不同反应。骨转移概率约75％，肺是乳腺癌转移的第二常见部位，肝转移的发生率仅次于肺转移，但与局部区域、骨和肺复发相比，生存率较低。蒽环类药物阿霉素是最早引入的化疗药物之一，目前40～50％的乳腺癌患者仍然使用蒽环类药物进行化疗，而蒽环类药物的并发症为心肌损伤，出现的概率大概为20％，具体表现为扩张性心肌病，心力衰竭等。迄今为止，临床上还不能准确的对化疗出现的并发症做出早期的诊断。因此，探索一种新的生物标志物可及时对乳腺癌化疗造成的心肌损伤进行诊断具有重大意义。
3.pirnas(piwi-interact ion rnas)是近期在体细胞中发现的一类小非编码rnas，由24～31个核苷酸组，5’端尿苷或第10位腺苷位置偏移，缺乏明确的二级结构基序。2001年，首次在果蝇的睾丸中描述了pirna作为来自su(ste)串联重复序列的小rna，它沉默了星状转录本以维持雄性果蝇的生育能力。pirnas可与piwi蛋白结合形成pirna/piwi复合体，进而影响转座子沉默、精子发生、基因组重排、表观遗传调控、蛋白调控和生殖干细胞维护。piwi家族在多种生物中表现出高度保守的结构和功能，这使得它具有成为诊断生物标志物的潜能。此外，最近有报道称，在一些人类癌症中，pirna或piwi蛋白表达异常，一些pirna/piwi复合物参与肿瘤发生并与癌症预后相关。作为一种高度保守的新发现的小非编码rna，pirna用于血清学诊断的研究尚且较少，综上所述，探索一种pirna作为乳腺癌心损标志物有助于对其早诊断、早治疗有着巨大意义。
4.如何获得检测灵敏度高，检测方便，检测窗口期短，可为乳腺癌化疗心肌损伤诊断及此后不良性事件发生的预测提供新的依据的生物标志物，仍然是本领域技术人员研究的热点。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的首要技术问题在于提供一种新p irna标志物的应用，该标志物可以用于制备诊断、筛查、预后评估及区分乳腺癌化疗心肌损伤的物质中的新用途。
6.本发明所要解决的另一技术问题在于提供一种检测新p irna标志物的试剂盒，该试剂盒可以用于诊断、筛查、预后评估及区分乳腺癌化疗心肌损伤的检测。
7.本发明所要解决的第三个技术问题在于提供一种检测新pirna标志物的引物，该引物可以用于诊断、筛查、预后评估及区分乳腺癌化疗心肌损伤。
8.为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案：
9.根据本发明实施例的第一方面，提供一种检测pirna标志物的物质的应用，包括下述应用中的一种或多种：
10.a1)在用于制备诊断乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；
11.a2)在用于制备筛查乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；
12.a3)在用于制备评估乳腺癌化疗导致的心肌损伤风险产品中的应用；
13.a4)在用于制备乳腺癌化疗导致的心肌损伤预后评估产品中的应用；
14.a5)在用于制备鉴别区分乳腺癌化疗导致的心肌损伤与其他疾病产品中的应用；
15.所述p irna标志物为p ir-hsa-31238，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
16.上述记载的“产品”可以为通过rt-pcr、实时定量pcr、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测pir-hsa-31238表达水平以诊断乳腺癌化疗导致的心肌损伤的产品。
17.上述应用中，pir-hsa-31238在乳腺癌化疗造成的心肌损伤病人的血浆样本中表达显著上调；健康人群pir-hsa-31238表达水平显著低于心梗病人。
18.其中较优地，所述物质为用于检测pir-hsa-31238表达量，或特异性识别pir-hsa-31238的试剂，或用于检测pir-hsa-31238含量的试剂。
19.其中较优地，所述物质为用于检测pir-hsa-31238的物质，具体为下述a)、b)或c)
20.a)用于检测或特异性识别pir-hsa-31238的引物；
21.b)含有所述a)的试剂组；
22.c)含有所述a)或所述b)的试剂盒。
23.其中较优地，所述引物为seq id no.2所示的上游引物和seq idno.3所示的下游引物。
24.根据本发明实施例的第二方面，提供一种检测pirna标志物的试剂盒，所述试剂盒包括下述应用中的一种或多种：
25.a1)在用于制备诊断乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；
26.a2)在用于制备筛查乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；
27.a3)在用于制备评估乳腺癌化疗导致的心肌损伤风险产品中的应用；
28.a4)在用于制备乳腺癌化疗导致的心肌损伤预后评估产品中的应用；
29.a5)在用于制备鉴别区分乳腺癌化疗导致的心肌损伤与其他疾病产品中的应用；
30.所述p irna标志物为p ir-hsa-31238，其核苷酸序列如seq id no.1所示；所述试剂盒包括用于检测或特异性识别pir-hsa-31238的试剂，或用于检测p ir-hsa-31238表达量的试剂。
31.其中较优地，所述用于检测或特异性识别pir-hsa-31238的试剂为特异性引物，所述特异性引物为seq id no.2所示的上游引物和seq idno.3所示的下游引物。
32.利用本发明所提供的试剂盒，可以检测受检者外周血中seq id no.1所示pir-hsa-31238特征基因序列的表达情况，然后根据这些基因表达上调或下调的信息判别受检者乳腺癌化疗后心肌损伤的概率，从而实现对乳腺癌化疗导致的心肌损伤的诊断。
33.本发明所提供的试剂盒可包含适当的包装和说明书用于在本文所公开的方法中使用。本发明所提供的试剂盒为核酸检测试剂盒，包括rna提取及实时荧光定量pcr(qrt-pcr)所需试剂。该试剂盒还可以进一步包含适当的缓冲液和聚合酶，也可以包含对照引物
和/或探针。
34.根据本发明实施例的第三方面，提供一种用于检测pirna标志物的引物，所述引物包括下述应用中的一种或多种：
35.a1)在用于制备诊断乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；
36.a2)在用于制备筛查乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；
37.a3)在用于制备评估乳腺癌化疗导致的心肌损伤风险产品中的应用；
38.a4)在用于制备乳腺癌化疗导致的心肌损伤预后评估产品中的应用；
39.a5)在用于制备鉴别区分乳腺癌化疗导致的心肌损伤与其他疾病产品中的应用；
40.所述引物为检测pir-hsa-31238表达量或特异性识别pir-hsa-31238的引物；所述p irna标志物为pir-hsa-31238，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
41.其中较优地，所述引物为seq id no.2所示的上游引物和seq idno.3所示的下游引物。
42.与现有技术相比较，本发明具有以下的技术效果：
43.(1)本发明提供的pir-hsa-31238可作为乳腺癌化疗导致的心肌损伤的诊断生物标志物。临床试验显示，乳腺癌患者化疗ck-mb和血浆pir-hsa-31238表达呈正相关关系，说明pir-hsa-31238表达水平与乳腺癌化疗导致的心肌损伤呈正相关，患者dox化疗累计剂量与血浆pir-hsa-31238表达呈正相关关系，说明，dox化疗剂量接受的越多，血浆pir-hsa-31238水平越高。roc曲线图表明pir-hsa-31238具有良好的诊断效能。说明p ir-hsa-31238是一种潜在的乳腺癌化疗患者心肌损伤生物标志物。
44.(2)本发明提供的pirna p ir-hsa-31238在动物实验验证中显示，pir-hsa-31238表达水平在原位乳腺癌小鼠化疗心肌损伤较不接受化疗的乳腺癌小鼠显著升高，再次验证pir-hsa-31238与乳腺癌化疗导致心肌损伤相关。
45.(3)在体外细胞学实验中，敲低pir-hsa-31238后，化疗导致的心肌细胞损伤减弱，说明pir-hsa-31238在化疗药物损伤心肌细胞的病理生理过程中可能发挥作用；而在敲减了pir-hsa-31238心肌细胞的损伤有所逆转，提示pir-hsa-31238可能参与到了多柔比星和曲妥珠单抗所诱导的心肌细胞损伤的过程中。
46.(4)上述实验结果均表明了pir-hsa-31238具备良好的诊断能力，有望成为一种新的乳腺癌化疗心肌损伤诊断生物标志物和治疗靶点。
附图说明
47.图1为a组和b组为评价pir-hsa-31238诊断乳腺癌化疗患者中是否出现心肌损伤的roc曲线图；
48.图2为c组和d组血浆p ir-hsa-31238比较的roc曲线图；
49.图3为b组和d组血浆pir-hsa-31238比较的roc曲线图；
50.图4为乳腺癌患者dox化疗累计剂量与血浆pir-hsa-31238表达的关系图；
51.图5为乳腺癌患者化疗ck-mb和血浆p ir-hsa-31238表达的关系图；
52.图6为原位乳腺癌小鼠化疗心肌损伤和不接受化疗的乳腺癌小鼠外周血血浆中p ir-hsa-31238的表达；
53.图7为对小鼠各个脏器p ir-hsa-31238表达量检测的结果图；
54.图8a为p ir-hsa-31238小干扰rna(s irna)在ac 16转染敲降率的qrt-pcr验证图；
55.图8b为p ir-hsa-31238小干扰rna(s irna)在ac 16转染敲降率的qrt-pcr mrna相对表达水平图；
56.图9为多柔比星和曲妥珠单抗处理s irna转染ac 16细胞后cck-8检测细胞活性。
具体实施方式
57.下面结合附图和具体实施例对本发明的技术内容进行详细具体的说明。
58.需要说明的是，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
59.本发明首先收集住院化疗(化疗药物包括多柔比星或曲妥珠单抗)期间出现证据(心肌酶谱改变+心电图/心脏超声)的50名患者静脉血，使用aksomics公司的human pirna array检测乳腺癌化疗和相应正常对照者的血清中pirna表达谱的差异，并使用利用agilent gene spring软件对芯片结果进行分析，筛选表达量具有显著性差异(fold chang≥2.0，p值《0.05)的pirna，再利用qrt-pcr测定患者血浆中该pirna芯片前10位表达显著升高的pirna，筛选出第一位显著升高的pirna进行后续实验。然后在动物水平测定pirna在小鼠化疗心损模型血浆中的表达水平及与心肌损伤的关系。发明人又利用体外实验细胞水平再次验证pir-mmu-31238与多柔比星所诱导的心肌细胞损伤诊断之间的关系。具体数据如下：
60.实施例1临床试验筛选与乳腺癌化疗心肌损伤相关标志物及关系验证
61.1.临床样本：
62.收集中国人民解放军总医院2018～2021年肿瘤学部住院化疗(化疗药物包括多柔比星或曲妥珠单抗)期间出现证据(心肌酶谱改变+心电图/心脏超声)的50名患者静脉血。此外，根据化疗后心肌损伤标准，本研究将化疗后lvef在基础上降低10％、心肌酶谱升高和心电图动态改变定义为化疗后心损，而在此基础上将入组患者分为以下4个组进行后续研究：
63.a组：未进行化疗的乳腺癌患者外周血血浆。
64.b组：进行化疗出现心脏损伤的乳腺癌患者外周血血浆。
65.c组：进行化疗无心肌损伤的乳腺癌患者外周血血浆。
66.d组：乳腺癌未进行化疗但因其他原发病出现心脏损伤的患者外周血血浆。
67.2.试验方法：
68.2.1血浆提取：使用edta抗凝采血管采集人外周血，以2500g离心15min，取上层血浆至2m1无菌管，置于－80℃冰箱中冻存。
69.2.2rna提取
70.血浆样本按照trizol reagent(invi trogen)说明书提取组织rna。向血浆中加入1ml trizol reagent(invitrogen)并加入氯仿200u1，振荡20s，室温静置10min：13000rpm，
4℃离心15min。小心仔细吸取上清，加入异丙醇800u1，上下颠倒轻柔混匀，－20℃静置1h，13000rpm，4℃离心15min，弃除上清。加入1ml 75％乙醇，轻轻洗涤沉淀，4℃离心13000rpm 5min后去除上清，吹干。加入适量无酶水，65℃促溶10mi n检测rna的od值及浓度，－80℃保存备用。
71.2.3rna逆转录合成cdna
72.使用逆转录试剂盒(takara rr037a)，将500ng的rna逆转录为cdna。
73.(1)pirna的逆转录：
74.冰上操作，每个反应体系20u1，如下表：
75.表1
[0076][0077]
(2)mrna的逆转录：
[0078]
冰上操作，每个反应体系20u1，如下表：
[0079]
表2
[0080][0081][0082]
反应程序为：37℃45min，85℃5min，4℃维持。
[0083]
2.4qrt-pcr
[0084]
根据pirna引物设计原则设计pir-hsa-31238引物序列。
[0085]
将逆转录反应得到的cdna，按照1:10稀释，进行如下qrt-pcr反应
[0086]
(1)冰上操作，每个反应体系20u1，如下表：
[0087]
表3
[0088][0089]
(2)反应液混匀real-time pcr仪反应程序如下：
[0090]
stage 1:95℃2min
[0091]
stage 2:cycle 35，94℃5s，60℃1min；
[0092]
stage 3:95℃15s，60℃1min，95℃15s。
[0093]
用gapdh定量各mrna的相对水平，并以相对比率表达。
[0094]
2.5pirna表达芯片分析：
[0095]
使用aksomics公司的human pirna array检测乳腺癌化疗和相应正常对照者的血清中pirna表达谱的差异，并使用利用agilent gene spring软件对芯片结果进行分析，筛选表达量具有显著性差异(fold chang≥2.0，p值《0.05)的pirna，再利用qrt-pcr测定患者血浆中该pirna芯片前10位表达显著升高的pirna，筛选出第一位显著升高的pirna进行后续实验。
[0096]
2.6统计分析：
[0097]
对正态变量采用t检验和方差分析，对非正态变量采用mann whitney u检验和kruskal wallis检验。采用r软件(v 3.4.2)和graphpad prism软件(v 8.00)进行统计分析。生物学重复显示为单个数据点叠加在柱状图上。p《0.05认为有显著性差异。
[0098]
3.试验结果：
[0099]
如图1所示，a组和b组为评价pir-hsa-31238断乳腺癌化疗患者中是否出现心肌损伤的roc曲线图；图2为c组和d组血浆pir-hsa-31238比较的roc曲线图；图3为b组和d组血浆pir-hsa-31238比较的roc曲线图；以上结果说明，pir-hsa-31238具有良好的诊断效能。
[0100]
如图4所示，乳腺癌患者dox化疗累计剂量与血浆pir-hsa-31238表达呈正相关关系，r＝5307，p《0.0001；结果说明，dox化疗剂量接受的越多，血浆pir-hsa-31238水平越高，具有一定预后价值。
[0101]
如图5所示，乳腺癌患者化疗ck-mb和血浆pir-hsa-31238表达呈正相关关系，r＝0.4696，p＝0.0006；ck-mb是心肌细胞受损的标志性蛋白，pir-hsa-31238与ck-mb水平呈正相关。这些结果表，pir-hsa-31238在血浆中的水平可反应心肌细胞受损的严重程度。
[0102]
实施例2乳腺癌化疗心肌损伤小鼠模型中pirna标志物的验证及相关性研究
[0103]
1.小鼠原位乳腺癌模型的构建：
[0104]
1.1实验材料
[0105]
肿瘤细胞株：小鼠乳腺癌细胞4t1
[0106]
动物：小鼠
[0107]
1.2实验方法
[0108]
1.2.1细胞培养：
[0109]
乳腺癌细胞4t1在培养液中37℃、5％co2条件下培养。
[0110]
原位肿瘤：细胞培养至对数生长期时，收集细胞，将肿瘤细胞悬液接种到小鼠腋窝皮下。当皮下肿瘤生长至500mm3左右时，剥离皮下肿瘤，在培养基中分割成小的肿瘤块，将小肿瘤块移植到小鼠乳腺垫下。一周后观察模型构建情况。
[0111]
1.2.2小鼠多柔比星化疗损伤心肌模型：
[0112]
在构建成功的原位乳腺癌模型小鼠身上，选取40只乳腺癌小鼠，20只作为实验组腹腔注射dox 5mg/kg/week，20只作为对照组注射等量溶剂，连续注射4周，之后利用眼眶取血，经离心分离血浆，利用qrt-pcr的方法测定血浆中pir-hsa-31238的水平。
[0113]
2.qrt-pcr方法同实施例1。
[0114]
3.实验结果：
[0115]
图6为首先在动物水平测定由pirna芯片筛选出的pirna在小鼠化疗心损模型血浆中的pirna表达水平，结果显示在原位乳腺癌小鼠化疗心肌损伤较不接受化疗的乳腺癌小鼠外周血血浆中pir-mmu-31238的表达升高，原位乳腺癌小鼠模型接受化疗模型模仿了乳腺癌的患者带瘤接受化疗的情况，而小鼠体内的pirna升高也说明pir-mmu-31238与乳腺癌化疗导致心肌损伤相关。
[0116]
如图7所示，将乳腺癌化疗导致心肌损伤的小鼠模型中随机挑选5只，取出心、肝、脾、肺、肾和脑组织，分别将组织研磨之后提取组织内的rna，然后利用qrt-pcr的方法进行pir-mmu-31238的水平测定，结果显示，化疗时心脏组织表达的pir-mmu-31238显著升高，而其他组织水平不变，这些结果表明，pir-mmu-31238的来源很可能是心肌组织，说明了pir-mmu-31238作为生物标志物具有器官特异性。
[0117]
实施例3体外实验细胞水平验证pir-hsa-31238的表达量与乳腺癌化疗心肌损伤诊断之间的关系
[0118]
1.实验材料：
[0119]
1.1细胞培养：
[0120]
ac 16细胞购自武汉普诺塞，细胞培养在dmem/f12培养基+10％胎牛血清中，培养在37度5％二氧化碳敷箱中。
[0121]
1.2化疗药物损伤细胞模型：
[0122]
将ac16细胞培养至汇合度80％时，加入多柔比星1μm，曲妥珠单抗10μg/ml处理24h。
[0123]
1.3sirna敲减：
[0124]
sirna订购自thermo fi sher公司，根据说明书，在细胞汇合度达70％加入，诱导24h。
[0125]
2.实验方法：
[0126]
2.1rna提取及实时荧光定量pcr(qrt-pcr)：使用reassemble total rna kit(dp419，tiangen，bei j ing，china)从ac 16细胞中提取总rna。具体方法同实施例1。
[0127]
2.2细胞活力检测：
[0128]
每孔加入100微升工作液，每孔加入10微升cck-8溶液。用加了相应量细胞培养液和cck-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。在细胞培养箱内继续孵育0.5小时，在1小
时后分别用酶标仪在450nm测定吸光度。
[0129]
3.实验结果：
[0130]
图8a和图8b为pir-hsa-31238小干扰rna(s irna)在ac 16转染敲降率的qrt-pcr验证图，pir-hsa-31238表达降低，mrna表达总量不变；表明转染成功，后续实验在此基础上完成。
[0131]
图9为多柔比星和曲妥珠单抗处理s irna转染后的ac 16细胞后，cck-8检测细胞活性。如图9所示，cck8实验验证，敲低pir-hsa-31238后，化疗导致的心肌细胞损伤减弱，说明pir-hsa-31238在化疗药物损伤心肌细胞的病理生理过程中可能发挥作用；而在敲减了pir-hsa-31238，心肌细胞的损伤有所逆转，这提示了pir-hsa-31238可能参与到了多柔比星和曲妥珠单抗所诱导的心肌细胞损伤的过程中。
[0132]
上述实施例1、2和3的结果表明pir-hsa-31238在乳腺癌化疗心肌损伤病人血浆中表达上调；roc曲线显示pir-hsa-31238具备良好的诊断能力；体外实验显示pir-hsa-31238的敲减减轻了化疗药物对细胞的损伤。综上所述，pir-hsa-31238有望成为一种新的乳腺癌化疗心肌损伤诊断生物标志物和治疗靶点。
[0133]
实施例4本发明涉及到的序列、引物及试剂盒组成
[0134]
本发明所提供的乳腺癌化疗心肌损伤标志物pir-hsa-31238核苷酸序列为seq id no.1所示，
[0135]
seq id no.1：tagagcatgagactcttaatctcagggtcgtg
[0136]
其小鼠同源类似pirna为pir-mmu-31238，seq id no.4所示，
[0137]
seq id no.4：tagagcatgagactcttaatctcagggtcgtg
[0138]
本发明提供的特异性识别pir-hsa-31238的引物对，包括上游引物为seq id no.2所示，下游引物为seq id no.3所示：
[0139]
seq id no.2：ggacggtagcaagcaaagagtgtgcacgaccctga
[0140]
seq id no.3：gggattctggaagatgatgatgactagagcatgag
[0141]
本发明所提供的试剂盒组成：
[0142]
5xprimescript buffer、primescriptrt enzyme mix i、random 6mers、oligo dt primer、rnase-free h20、sybr premix ex taq ii(tlirnaseh plus)(2x)、pcr primer(f+r)(10um)、rox reference dye(50x)。

技术特征：
1.一种检测pirna标志物的物质的应用，其特征在于包括下述应用中的一种或多种：a1)在用于制备诊断乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；a2)在用于制备筛查乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；a3)在用于制备评估乳腺癌化疗导致的心肌损伤风险产品中的应用；a4)在用于制备乳腺癌化疗导致的心肌损伤预后评估产品中的应用；a5)在用于制备鉴别区分乳腺癌化疗导致的心肌损伤与其他疾病产品中的应用；所述pirna标志物为pir-hsa-31238，其核苷酸序列如seq id no.1所示。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述物质为用于检测pir-hsa-31238表达量，或特异性识别pir-hsa-31238的试剂，或用于检测pir-hsa-31238含量的试剂。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述物质为用于检测pir-hsa-31238的物质，具体为下述a)、b)或c)a)用于检测或特异性识别pir-hsa-31238的引物；b)含有所述a)的试剂组；c)含有所述a)或所述b)的试剂盒。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述引物为seq id no.2所示的上游引物和seq id no.3所示的下游引物。5.一种检测pirna标志物的试剂盒，其特征在于包括下述应用中的一种或多种：a1)在用于制备诊断乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；a2)在用于制备筛查乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；a3)在用于制备评估乳腺癌化疗导致的心肌损伤风险产品中的应用；a4)在用于制备乳腺癌化疗导致的心肌损伤预后评估产品中的应用；a5)在用于制备鉴别区分乳腺癌化疗导致的心肌损伤与其他疾病产品中的应用；所述pirna标志物为pir-hsa-31238，其核苷酸序列如seq id no.1所示；所述试剂盒包括用于检测或特异性识别pir-hsa-31238的试剂，或用于检测pir-hsa-31238表达量的试剂。6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述用于检测或特异性识别pir-hsa-31238的试剂为特异性引物，所述特异性引物为seq id no.2所示的上游引物和seq id no.3所示的下游引物。7.一种用于检测pirna标志物的引物，其特征在于包括下述应用中的一种或多种：a1)在用于制备诊断乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；a2)在用于制备筛查乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；a3)在用于制备评估乳腺癌化疗导致的心肌损伤风险产品中的应用；a4)在用于制备乳腺癌化疗导致的心肌损伤预后评估产品中的应用；a5)在用于制备鉴别区分乳腺癌化疗导致的心肌损伤与其他疾病产品中的应用；所述引物为检测pir-hsa-31238表达量或特异性识别pir-hsa-31238的引物；所述pirna标志物为pir-hsa-31238，其核苷酸序列如seq id no.1所示。8.如权利要求7所述的引物，其特征在于：所述引物为seq id no.2所示的上游引物和seq id no.3所示的下游引物。

技术总结
本发明公开了一种检测piRNA标志物的物质的应用，包括下述应用中的一种或多种：A1)在用于制备诊断乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；A2)在用于制备筛查乳腺癌化疗导致的心肌损伤产品中的应用；A3)在用于制备评估乳腺癌化疗导致的心肌损伤风险产品中的应用；A4)在用于制备乳腺癌化疗导致的心肌损伤预后评估产品中的应用；A5)在用于制备鉴别区分乳腺癌化疗导致的心肌损伤与其他疾病产品中的应用；piRNA标志物为piR-hsa-31238，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明所提供的piR-hsa-31238可作为乳腺癌化疗导致的心肌损伤的诊断标志物。诊断标志物。诊断标志物。


技术研发人员：韩东 曹丰 马焱 程芮 王亚斌 秦诚 贺晶 聂闻博 王天虎
受保护的技术使用者：中国人民解放军总医院第二医学中心
技术研发日：2023.04.29
技术公布日：2023/9/7