用于治疗小细胞肺癌的氧杂二环庚烷的制作方法

用于治疗小细胞肺癌的氧杂二环庚烷1.相关申请的交叉引用2.本技术要求于2021年1月19日提交的美国临时专利申请第63/139,047号的权益，所述美国临时专利申请的整个内容通过引用并入本文。
技术领域：
：3.本发明涉及可用于抑制有需要的受试者的磷酸酶2a(pp2a)的方法。
背景技术：
：：4.蛋白磷酸酶2a(pp2a)是普遍存在的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶，其使atm/atr依赖性和非依赖性应答通路的许多蛋白质去磷酸化(马姆比m.(mumbym.),2007)。先前已经示出，pp2a的药理学抑制通过各种信号传导蛋白，如p53、γh2ax、plk1和akt，的组成型磷酸化使癌细胞对辐射介导的dna损伤增敏，从而导致细胞周期失调、dna修复抑制和凋亡(魏,d.(wei,d.)等人,2013)。5.斑蝥素，即斑蝥提取物(斑蝥属(mylabris))的主要活性成分，是衍生自传统中药的化合物，所述化合物已经显示出是pp2a的有效抑制剂(厄佛斯,t.(efferth,t.)等人,2005)。虽然斑蝥素先前已经用于治疗肝细胞瘤并且已经显示出针对多药抗性白血病细胞系的功效(厄佛斯,t.等人,2002)，但其严重的毒性限制了其临床有用性。lb-100(即，(3-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚烷-2-羧酸])是斑蝥素的小分子衍生物，毒性明显较低。先前的临床前研究已经显示，lb-100可以增强替莫唑胺(temozolomide)、多柔比星(doxorubicin)和放射疗法针对胶质母细胞瘤(gbm)、转移性嗜铬细胞瘤和胰腺癌的细胞毒性作用(魏,d.等人,2013；陆,j.(lu,j.)等人,2009；张,c.(zhang,c.)等人,2010；马提尼瓦,l.(martiniova,l.)等人,2011)。lb-100还正在经历与多西他赛(docetaxel)组合以治疗实体瘤的1期研究(郑,v.(chung,v.),2013)。[0006]2017年，全球一百多万人死于肺癌，并且小细胞癌占所有肺癌的大约15％。即使利用双重或三重药物疗法组合，伴有“广泛疾病”的小细胞肺癌(sclc)(ed-sclc，70％的患者)的中值生存期也仅为大约9个月，并且总体5年生存期保持在5％左右。pp2a在sclc细胞中普遍表达，然而，其在sclc中的潜在相关性几乎还是未知的。蛋白磷酸酶2a(pp2a)是一种参与各种范围的癌症亚型，包含肺癌和b细胞源性白血病中的关键癌蛋白，如c-myc和bcr-abl的调节的磷酸酶。因此，仍然需要改进对患有sclc，以及具体地ed-sclc的患者的治疗。本发明涵盖承认这样的事实，即单独的lb-100或其与一或多种抗癌剂的组合可用于治疗患有sclc，例如患有ed-sclc，的患者。技术实现要素：[0007]本发明尤其提供了治疗患有小细胞肺癌(sclc)的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的以下结构的化合物，所述化合物在本文被称为lb-100(即,(3-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚烷-2-羧酸])：[0008][0009]或其药学上可接受的盐、两性离子或酯。[0010]在一些实施例中，本发明提供了一种治疗患有sclc的受试者的方法，所述方法包括施用lb-100与一或多种抗癌剂的组合，其中在一起时所述量对于治疗所述受试者是有效的。[0011]在一些实施例中，本发明提供了一种治疗患有sclc并且接受一或多种抗癌剂的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用相对于在不存在lb-100的情况下施用的所述一或多种抗癌剂有效增强治疗的量的lb-100。[0012]在一些实施例中，所述一或多种另外的抗癌剂选自卡铂(carboplatin)、依托泊苷(etoposide)和阿特朱单抗(atezolizumab)。在一些实施例中，所述一或多种另外的抗癌剂为卡铂、依托泊苷和阿特朱单抗。[0013]在一些实施例中，所述sclc是未经治疗的广泛期sclc(ed-sclc)。附图说明[0014]图1描绘了lb-100对sclc肿瘤和细胞中的pp2a-a表达的影响。(a)散点图示出了对肿瘤样品中的pp2a-a亚基的上调。使用曼-惠特尼u测试(mann-whitneyutest)以在正常样品与sclc样品之间进行比较。(b)针对pp2a的ihc在tma组织切片上进行，并且图像是使用3d-histechpannoramicscan全片扫描仪(匈牙利布达佩斯的3d海思泰克公司(3d-histech,budapest,hungary))以4x或20x捕获的。pp2a亚基a对正常肺组织和肿瘤组织的细胞质和细胞核进行阳性免疫染色，但其在肿瘤组织中是高度上调的。在正常(n＝24)核和肿瘤(n＝79)核中以0(无染色/无蛋白质表达)到3+(强染色/高蛋白质表达)的尺度对tma进行评分。(c)平均pp2a亚基染色的汇总条形图。正常核和肿瘤核的ihc染色强度。正常组织与肿瘤组织之间存在统计上显著的差异(p《0.001)。(d)为了比较pp2a亚基a和c的表达，对来自七个sclc细胞系和hbec3kt(非恶性细胞系)的细胞裂解物进行蛋白质印记。(e)pp2a活性是在暴露于斑蝥素(10μm)和lb-100(5μm)24小时之后使用丝氨酸/苏氨酸磷酸酶活性测定(密理博公司(millipore))确定的。(f)小图显示了h524细胞中的pp2a亚基aα的减少以及由于pp2a亚基aα敲低引起的对细胞增殖的抑制(p《0.5)(n＝3)。单独的lb-100或其与卡铂的组合抑制sclc细胞的增殖和集落形成。细胞计数试剂盒-8测定检测细胞h524和h69的细胞活力。(g、h)细胞用lb-100、卡铂和依托泊苷作为单一处理或组合以恒定比率进行处理。使用chou-talalay方法计算组合指数(ci)，以探索lb-100与卡铂和依托泊苷的协同性(compusyn软件：www.combosyn.com)。图描绘了细胞的活力百分比的平均值+sem(n＝3)。使用集落形成测定以对h524(i)和h69(j)细胞形成集落的能力进行计数。分别列出了针对用h524和h69进行的两个测定的药物浓度：lb-100(2.5μm；20μm)，卡铂(4μm；20μm)，依托泊苷(3μm；30μm)，lb-100/卡铂(2.5μm&4μm；20μm&20μm)以及lb-100/依托泊苷(2.5μm&3μm；20μm&30μm)。在图下面示出了4x的集落的代表性图像(n＝2)。*p《0.05；**，p《0.01；***，p《0.001；****，p《0.0001。实验一式三份进行重复，并且示出了代表性数据。[0015]图2描绘了lb-100对h446球体生长的影响。(a)第一天和第九天h446细胞的单个球体的形态。球体连续生长，并且表现出h&e染色。(b)响应于lb-100处理的球体的生长用incucyte活细胞分析系统记录。(c)lb100的细胞毒性作用是在存在lb-100和incucytecytotox试剂的情况下，用incucyte活细胞分析系统以绿色荧光记录的。lb-100、卡铂、依托泊苷和药物组合对h446球体形态和生长的影响。(d)利用lb-100、卡铂、依托泊苷和组合处理的h&e染色的h446球体的代表性图像。比例尺100μm。(e、g)使用incucyte活细胞系统监测单独的lb100和卡铂或两者的组合的作用，持续70小时。在70小时的时间点时观察到lb-100、卡铂或药物组合对球体的大小的最大显著抑制作用。(f、h)使用incucyte活细胞系统监测单独的lb-100和依托泊苷或其组合的作用，持续72小时。在时间点70小时和72小时时观察到lb-100、卡铂或药物组合对球体的大小的最大显著抑制作用(n＝3)。*，p《0.05；**，p《0.01。[0016]图3描绘了穿过huvec单层的sclc细胞侵袭。(a、b)使用电基质阻抗感测系统破坏汇合huvec单层的h524/h69细胞能力的图形表示。箭头表示添加细胞时的时间点。插图显示了药物处理20小时之后每个组的平均值和sd。处理后，使用自动t4细胞计数仪(耐细隆公司cellometer(nexcelomcellometer))对细胞活力进行计数。药物处理的组的细胞活力为90-95％(n＝2)。对于对照(未经处理的细胞)与药物组合(lb100/卡铂)，p《0.001(***)。全细胞pt积聚。对由sclc细胞进行的铂摄取的lb-100影响的图形表示。将细胞用lb-100(h524-5μm；h69-20μm)预处理过夜；然后用卡铂处理一小时或四小时(h524-10μm；h69-30μm)。使用全细胞团粒以进行铂(pt)测量。值相对于总蛋白质浓度归一化。(c、d)小图示出了每个组的pt积聚的平均值和sd。药物组合显著提高了h524细胞和h69细胞中pt浓度。对照和lb-100样品中的pt浓度低于检测限(n＝3，技术复制品)。lb-100对h524细胞和h69细胞中的pp2a表达和凋亡调节蛋白的影响。将细胞用指示浓度的lb-100、卡铂和组合处理72小时。(e)pp2a亚基在h524细胞和h69细胞中的表达的代表性蛋白质印记(wb)小图(n＝3)。(f)h524和h69细胞γ-h2ax的蛋白质磷酸化、胱天蛋白酶3和parp1切割活性在药物处理后通过wb进行分析(n＝3)。代表性wb小图显示出，在h524和h69细胞中在处理后，γ-h2ax磷酸化的显著增加以及胱天蛋白酶3和parp1切割活性的增强。使用泛肌动蛋白作为上样对照(n＝3)。[0017]图4描绘了在对h524细胞进行lb-100处理并且在进行生物表型微测定后对帕姆金公司ptk和stk(pamgeneptksandstk)的reactome公司通路分析(reactomepathwayanalysis)。(a)观察到信号转导和代谢通路的显著变化。(b)microarray分析显示，用lb100进行的20μm处理的过夜处理抑制了碳基质源的利用。表包含受lb-100影响的10个碳源(n＝3)。(c)lb-100显著抑制h69细胞对两种碳基质的利用。对于对照(未经处理的细胞)与lb-100，p《0.001(***)。(d)使用amplexred葡萄糖/氧化酶测定试剂盒以测量细胞培养基中的葡萄糖水平。来自用lb-100(20μm)处理的细胞的细胞培养基中的葡萄糖水平显著更高。检测初始培养基中的葡萄糖浓度，并且以100％计数。从初始葡萄糖培养基浓度中减去最终培养基的葡萄糖水平得到了具有细胞的培养基中的葡萄糖％(n＝3)。lb-100对met磷酸化的影响。(e)将h524细胞和h69细胞用lb-100(h524-5μm和h69-20μm)处理过夜，然后用100ng/mlhgf在10分钟内进行刺激。将细胞收集并裂解，以用于利用pmet和总met抗体进行wb分析。使用泛肌动蛋白作为上样对照(n＝3)。(f)通过蛋白质印记对h524细胞裂解物(对照、lb-100、卡铂和组合(lb-100/卡铂))进行分析，以检查met在ser985和tyr1234/1235处的磷酸化状态。使用肌动蛋白作为上样对照(n＝3)。[0018]图5描绘了lb-100对sclc细胞中的细胞能量表型的影响。(a)lb100处理(2.5μm)诱导h524细胞的代谢切换。通过使用xf细胞能量表型报告因子生成器获得细胞能量表型。空心方形表示基线能量表型，实心方框表示寡霉素/fccp注射后测得的应激能量表型。(b、c)对照(蓝色圆圈)和lb-100(橙色圆圈)h524细胞中的ocr和ecar随时间的推移进行测量。(n＝2，每个研究参与者为六个不同的孔)。(d)lb-100(10μm)对h69细胞能量表型的影响。(e、f)线粒体应激物对h69细胞中的ocr和ecar的影响。蓝色圆圈表示对照，并且橙色圆圈示出lb-100处理。(n＝2，六个技术复制品)。[0019]图6描绘了sclc细胞中的atp产生速率。(a)将h524细胞用lb100(2.5μm)、卡铂(4μm)或组合进行处理，并且atp产生速率使用安捷伦公司seahorsexf实时atp速率测定(agilentseahorsexfrealtimeatprateassay)进行测量。在不进行和进行药物处理的情况下在h524细胞中评估mitoatp(线粒体)和glycoatp(糖酵母酸)速率。所有药物处理显著降低mitoatp(上，蓝色)和glycoatp(下，红色)产生速率。(b)h524细胞的能量图。在lb-100和药物组合之后，细胞变为较少糖酵解的。(c至e)安捷伦公司seahorsexfph传感器探针测量自由质子的浓度的变化，所述变化与胞外酸化速率(ecar)相对应。实时atp速率测定包含经改进的度量，即质子外排速率(per)，所述质子外排速率检测来自所有来源的胞外酸化。lb-100在基础条件下并且两次注射氧化磷酸化的特异性抑制剂寡霉素(1.5μm)和抗霉素(0.5μm)/鱼藤酮(0.5μm)之后使per显著降低。(f)将h69细胞用lb-100(10μm)、卡铂(10μm)或lb100/卡铂的组合处理。细胞中的atp水平使用安捷伦公司seahorsexf实时atp速率测定测量。lb-100、卡铂和组合使mitoatp显著降低。(g)h69细胞的能量图。(h到j)来自基础注射液、寡霉素和抗霉素/鱼藤酮注射液的糖酵解的lb100处理后h69细胞质子外排速率。(n＝2，六个技术复制品)。[0020]图7描绘了在存在lb100和阿特朱单抗的情况下h446球体中的t细胞浸润的结果。(a)活化的t细胞对h446球体降解的影响的示意图。在时间点0时，将96孔板中的单个球体用lb-100、阿特朱单抗和t细胞进行处理。珠粒通过cd3和cd28的两个作用信号模拟体内t细胞活化。使用活细胞分析系统以进行球体成像。右侧小图呈现了用lb-100、阿特朱单抗和活化的t细胞温育48小时后的球体变性。(b、c)自动图像分析提供了度量(0小时-μm、48小时-mm)和球体面积(黄色-明场掩模)。柱状条表示球体在0小时时的平均值。处于明场掩模中的代表性图像。(d、e)在存在t细胞的情况下，lb-100和阿特朱单抗处理48小时后h446球体细胞分布的测量结果。图像表示被h446细胞覆盖的区域。(f)对照组和经处理的组中的相同h446球体的连续图像。比例尺400μm。(g)处理48小时后h446球体的h&e染色和用cd3抗体进行的免疫组化染色(ihc)。比例尺50μm。处理前，将5x103个细胞接种在圆底96孔板中，并且生长3天。[0021]图8描绘了单独的lb-100和其与卡铂针对h69细胞小鼠异种移植物的活性的结果。测量了肿瘤大小(a)和体重(b)。通过i.p.注射提供了lb-100(*p《0.05)、卡铂(***p《0.001)以及其组合(***p《0.001)之后对肿瘤生长的抑制。p值示出了相比于媒剂组的显著差异。c.来自媒剂组和药物处理的组的肿瘤图像。d.实验结束时测量肿瘤质量。相比于媒剂组，单独的lb-100或卡铂或lb-100与卡铂的组合使肿瘤质量显著减少。e.柱示出了用卡铂和lb-100/卡铂处理的小鼠肿瘤中的总铂(pt)浓度(n＝3，作为技术复制品)。pt质量相对于肿瘤总质量归一化。统计学分析利用tukey事后测试(tukeyposthoc-test)使用anova进行(*p《0.05)，卡铂(**p《0.01)。[0022]图9描绘了通过h&e染色对某些小鼠肿瘤的评估。小鼠肿瘤(a)的h&e染色显示出浓厚的有核染色和大量的有丝分裂细胞。用lb100或卡铂进行处理增加了肿瘤组织的坏死面积，并且组合处理遏制较少肿瘤细胞。用pp2aa抗体、pmet抗体、cd31(用于血管生成)抗体和ki-67(用于细胞增殖)抗体进行的ihc染色表明，在组合处理的情况下肿瘤切片的染色强度的降低。示出了每个组的肿瘤切片的代表性图像。比例尺100μm。[0023]图10为i期临床试验研究图。具体实施方式[0024]如以下和在此进一步详细描述的，在一些实施例中，本发明提供了一种治疗患有小细胞肺癌(sclc)的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的以下结构的pp2a抑制剂，所述pp2a抑制剂在本文被称为lb-100(即,(3-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚烷-2-羧酸])：[0025][0026]或其药学上可接受的盐、两性离子或酯。lb-100的制备方法可以在至少us7,998,957b2和us8,426,444b2中找到。[0027]蛋白磷酸酶2a(pp2a)是普遍存在的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶，其是参与肺癌和其它癌症类型中的癌蛋白，如c-myc和bcr-abl的关键调节的主肿瘤抑制剂。其具有广泛的细胞调节功能，如细胞存活、凋亡、有丝分裂和dna损伤应答(13)。先前的研究和更近期的i期临床试验已经显示，pp2a抑制可以潜在地使肿瘤对放射疗法和化学疗法增敏(14)。在晚期实体瘤中的lb-100的i期临床试验中，lb-100耐受性良好，并且20名患者中有10名患者实现了疾病稳定(15)。鉴于pp2a的普遍性，lb-100的抑制可能具有多种下游效应。临床前研究表明，lb-100对pp2a的抑制可以使dna损伤应答(16-18)下调，细胞周期检查点(16,19)消除，hif依赖性肿瘤血管生成增加(20)，并且通过抑制n-cor复合物的形成诱导细胞分化(16)。[0028]此外，肖(xiao)等人,2018显示出，pp2a将葡萄糖碳利用从糖酵解重定向到戊糖磷酸通路(ppp)以挽救氧化应激，这揭示了ppp在可以通过对pp2a和g6pd的小分子抑制来有效靶向的广泛范围的b细胞恶性肿瘤中的守门员功能(21)。[0029]如以上所描述的，lb-100(3-(4甲基哌嗪-羰基)-7-氧杂二环[2.2.1]庚烷-2-羧酸；nscd753810)是蛋白磷酸酶2a(pp2a)的小分子(mw268)抑制剂，并且以约80倍于蛋白磷酸酶1(pp1)的效率抑制pp2a。所述化合物在体内和体外均具有单药剂活性。通过非限制性理论，增强的机制似乎是对由非特异性dna损伤剂诱导的细胞周期和有丝分裂检查点的抑制，其允许休眠的癌细胞进入s期并且即使在急性dna损伤的情况下也继续有丝分裂(22)。此外，通过非限制性理论，lb-100似乎影响脉管系统，在高剂量下诱导瞬时可逆血管“泄漏”。由于其独特的作用机制，lb-100有可能用于治疗许多类型的癌症，并且是新类型的信号转导调节剂的首创。[0030]小细胞肺癌[0031]肺癌是全球癌症死亡的主要原因，其中每年有一百万新病例。小细胞肺癌(sclc)是一种与吸烟强烈相关的侵略形式的肿瘤。在美国，2010年，诊断出222,000个肺癌新病例，其中35,000个病例为sclc(美国癌症协会(americancancersociety))。sclc患者的中值年龄为63岁，并且超过25％的患者的年龄超过70岁(1)。与非小细胞肺癌(nsclc)相比，小细胞肺癌是一种快速生长的转移率高的肿瘤。患者是根据由退伍军人管理局肺癌研究组(veteransadministrationlungcancerstudygroup)开发的两阶段系统分阶段的，所述两阶段系统由局限期疾病(ld-sclc)或广泛期疾病(ed-sclc)组成(2)。局限期疾病sclc局限在可接受的放射场内的单一半胸区域。大约65％至70％的患有sclc的患者表现为ed-sclc，所述ed-sclc存在于半胸区域之外。未经治疗的患有ed-sclc的患者的中中值生存期为大约5周；利用化学疗法治疗的患者的中值生存期为7个月至11个月(3)。在当前管理选项的情况下，ed-sclc的2年存活率低于10％。[0032]组合化学疗法仍然是患有ed-sclc的患者的治疗重点。医学领域的技术人员将理解，由于两种或更多种药物之间的体内相互作用，与此类疗法相关的挑战通常是复杂的。任何单一药物的作用都与其吸收、分布、代谢和消除相关。在两种药物被引入到体内时，每种药物都可能影响另一种药物的吸收、分布、代谢和消除，并且因此改变另一种药物的作用。例如，一种药物可以抑制、激活或诱导参与另外一或多种药物消除的代谢通路的酶的产生。(行业指南(guidanceforindustry),1999)因此，当施用两种或更多种药物来治疗同一病状时，这种药物是否将补充另一种药物在人类受试者体内的治疗活性、对所述治疗活性不起作用或干扰所述治疗活性是不可预测的。[0033]两种或更多种药物之间的相互作用不仅会影响每种药物的预期治疗活性，而且相互作用还可能提高有毒代谢物的水平(行业指南,1999)。相互作用还可能加重或减轻每种药物的副作用。因此，在施用两种或更多种药物以治疗疾病时，每种药物的负面副作用谱会发生什么变化是不可预测的。[0034]另外，很难准确地预测两种或更多种药物之间的相互作用的影响何时会变得明显。例如，药物之间的代谢相互作用可能在初始施用第二种药物或进一步的药物时、在两种药物已经达到稳态浓度后或在药物之一停止时变得明显。(行业指南,1999)[0035]在sclc的上下文下，在20世纪70年代和80年代早期，cav(环磷酰胺、多柔比星和长春新碱)是最常用的组合方案。在20世纪80年代中期，依托泊苷被发现是sclc的活性剂，并且临床前研究表明了依托泊苷与顺铂之间的协同性。随机化临床研究证实了，此组合与cav一样有效，具有较小毒性(3)。[0036]几种其它药剂已显示出在sclc中具有活性，并且许多研究已经将3种药物方案与标准2种药物方案进行了比较，功效没有改善。挪威肺癌研究组(norwegianlungcancerstudygroup)进行的3期试验将436名患者随机化，所述患者包含214名患有ld-sclc的患者和222名患有ed-sclc的患者。患者接受依托泊苷加顺铂或环磷酰胺、表柔比星和长春新碱(cev)的组合。患有ed-sclc的患者的中值生存期在依托泊苷加顺铂小组中为8.4个月，并且在cev小组中为6.5个月(p＝.21)(4)。[0037]2005年，癌症和白血病b组(cancerandleukemiagroupb，calgb)进行的3期研究在患有ed-sclc的患者中将依托泊苷/顺铂在有或没有紫杉醇和粒细胞集落刺激因子(g-csf)的情况下的组合进行了比较(5)。总计565名患者被随机化。卡铂/依托泊苷小组的中值无进展生存时间为5.9个月，相比之下接受卡铂/依托泊苷/紫杉醇的患者为6个月，并且依托泊苷/顺铂小组的中值总生存期为9.9个月，并且紫杉醇小组的中值总生存期为10.6个月。未接受紫杉醇的患者中的2.4％发生毒性死亡，并且用紫杉醇治疗的患者中的6.5％发生毒性死亡。因此，将紫杉醇添加到依托泊苷和顺铂中并没有提高生存期，并且与患有ed-sclc的患者的不可接受的毒性相关(5)。[0038]2005年还报告了来自针对患有ed-sclc的患者进行的最大的研究之一的结果。此研究纳入了784名患者，所述患者被随机化为接受拓扑替康加顺铂或标准依托泊苷加顺铂；在总应答率(63％对69％)、至进展的中值时间(24.1周对25.1周)、中值生存期(39.3周对40.3周)和1年生存率(两个小组均为31.4％)方面同等地看到了功效(6)。[0039]更近期地，iii期impower133随机化了双盲研究，所述双盲研究评估了添加程序性死亡信号传导的检查点抑制剂(阿特朱单抗)是否可以改善患有ed-sclc的患者的化学疗法益处(7)。总计201名患者被随机地分配到铂/依托泊苷/阿特朱单抗小组，并且202名患者被分配到安慰剂小组。中值无进展生存时间在铂/依托泊苷小组中为4.3个月，相比之下铂/依托泊苷/阿特朱单抗的情况下为5.2个月。中值总生存期在铂/依托泊苷/阿特朱单抗小组中为12.3个月，并且在安慰剂组中为10.3个月。将化学疗法添加到依托泊苷和铂化学疗法中提高了总生存期和无进展生存期，并且与患有ed-sclc的患者的不可接受的毒性不相关(7)。impower133被视为是20年来首次显示出一线ed-sclc的总生存期相比于护理标准的临床意义的改善的研究。[0040]已在多种人类实体瘤(卵巢癌、头颈癌、非小细胞肺癌和小细胞肺癌)中对卡铂进行了研究，其中客观应答率介于10％与85％之间。卡铂还在与许多其它细胞毒性药剂的组合中被成功地用于治疗卵巢癌、nsclc和sclc(8-10)。1992年对用卡铂在患有sclc的患者中进行的2期和3期研究的回顾确定了卡铂为未经治疗的sclc中的活性剂(11)。[0041]基于铂的疗法(卡铂或顺铂)与依托泊苷组合是针对患有ed-sclc的患者的当前护理标准。然而，相比于顺铂，卡铂通常是优选的，因为其提供了这样的优点，如胃肠道毒性、肾脏毒性、听觉毒性和神经毒性较小并且更容易施用(12)。[0042]作为一线治疗的卡铂/依托泊苷/阿特朱单抗[0043]卡铂是顺铂的类似物，其具有更有利的毒性谱(鲁克德舍尔(ruckdeschel)1994)。其与dna相互作用，并且形成链内和链间连接。最常观察到的副作用包含血小板减少、嗜中性粒细胞减少、白细胞减少和贫血。与其它含铂化合物一样，卡铂可以诱导过敏型反应，如面部水肿、喘息、心动过速和低血压，所述过敏型反应可以在药物施用的几分钟内发生。这些反应可以用肾上腺素、皮质类固醇或抗组胺剂来控制(另外的信息参见包装插页)。[0044]依托泊苷是鬼臼毒素(podophyllotoxin)的半合成衍生物，所述鬼臼毒素通过阻止细胞进入有丝分裂或在有丝分裂前阶段破坏细胞而表现出体外细胞抑制活性。依托泊苷干扰dna的合成，并且表现出在细胞周期的s-g2期晚期阻滞人淋巴母细胞。最常观察到的副作用包含白细胞减少和血小板减少(另外的信息参见包装插页)。[0045]依托泊苷在与其它抗肿瘤药的组合中适用于治疗sclc、nsclc、恶性淋巴瘤和睾丸恶性肿瘤。批准的适应症可能根据具体国家而变化。依托泊苷在临床研究中还用于抵抗许多其它类型的癌症，包含头颈癌、脑癌、膀胱癌、宫颈癌和卵巢癌。[0046]阿特朱单抗是一种靶向程序性死亡受体1配体(pd-l1)并且抑制pd-l1和其受体，即程序性死亡受体1(pd-1)，与b7-1(也被称为cd80)之间的相互作用的人源化免疫球蛋白(ig)g1单克隆抗体，所述pd-l1和其受体以及b7-1两者均起到在t细胞上表达的抑制受体的作用。静脉内阿特朱单抗已在美国和欧洲被批准用于治疗患有晚期尿路上皮癌的未能参与或不符合基于铂的方案的成人患者。(25、26)另外，阿特朱单抗与贝伐单抗、紫杉醇和卡铂的组合已在美国被批准用于患有转移性nsclc的不具有egfr或alk基因组肿瘤异常的成年患者的一线治疗以及先前化学疗法之后的局部晚期和转移性nsclc的单一疗法。(27)最近，阿特朱单抗还在美国获得加快审批与白蛋白紫杉醇组合用于患有不可接受的局部晚期或转移性三阴性乳腺癌的其肿瘤表达pd-l1的患者。(28)最后，阿特朱单抗被批准用于在患有广泛期小细胞肺癌的成年患者中与卡铂和依托泊苷组合的一线治疗，所述一线治疗显示出提高的生存期(铂/依托泊苷/阿特朱单抗小组的中值os为12.3个月，而铂/依托泊苷/安慰剂为10.3个月)。在ed-sclc中将免疫疗法添加到依托泊苷和铂化学疗法中还提高了无进展生存期，并且与不可接受的毒性不相关。(7)使用阿特朱单抗治疗通常是耐受性良好的，但可能与免疫相关的不良事件(irae)相关(另外的信息参见包装插页)。[0047]本发明的方法[0048]如上文和在此描述的，本发明涵盖这样的惊人发现，即lb-100可用于治疗患有sclc的受试者。[0049]在一些实施例中，本发明提供了一种治疗患有sclc的受试者的方法，所述方法包括施用单独的lb-100或其与一或多种抗癌剂的组合，其中在一起时所述量对于治疗所述受试者是有效的。在一些此类实施例中，所述sclc为ed-sclc。[0050]在一些实施例中，本发明提供了一种治疗患有sclc并且接受一或多种抗癌剂的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用相对于在不存在lb-100的情况下施用的所述一或多种抗癌剂有效增强治疗的量的lb-100。在一些此类实施例中，所述sclc为ed-sclc。[0051]在一些实施例中，所述一或多种另外的抗癌剂选自卡铂、依托泊苷和阿特朱单抗。在一些实施例中，所述一或多种另外的抗癌剂为卡铂、依托泊苷和阿特朱单抗中的每一种。[0052]在一些实施例中，所述sclc是未经治疗的广泛期sclc(ed-sclc)。[0053]在一些实施例中，所述量的lb-100和所述量的所述一或多种抗癌剂各自定期地施用于所述受试者。示范性这类施用方法进一步在本文描述。[0054]在一些实施例中，所述一或多种抗癌剂与lb-100的施用同时、在所述施用之前或之后独立地施用。在一些实施例中，所述一或多种抗癌剂在lb-100的施用之后独立地施用。[0055]在一些实施例中，lb-100的所述量和所述一或多种另外的抗癌剂的所述量在一起时对于减少所述受试者的癌症的临床症状是有效的，如本文进一步描述的。[0056]在一些实施例中，lb-100的所述量对于减少所述受试者的癌症的临床症状是有效的。在一些实施例中，lb-100是以介于约0.25mg/m2与约3.10mg/m2之间的剂量施用的。在一些实施例中，lb-100是以介于约0.83mg/m2与约3.10mg/m2之间的剂量施用的。在一些实施例中，lb-100是以介于约0.83mg/m2与约2.33mg/m2之间的剂量施用的。在一些实施例中，lb-100是以介于约0.83mg/m2与约1.75mg/m2之间的剂量施用的。在一些实施例中，lb-100是以0.25mg/m2、0.5mg/m2、0.83mg/m2、1.25mg/m2、1.75mg/m2、2.33mg/m2或3.10mg/m2的剂量施用的。[0057]在一些实施例中，lb-100是以0.83mg/m2的剂量施用的。[0058]在一些实施例中，lb-100是以1.25mg/m2的剂量施用的。[0059]在一些实施例中，lb-100是以1.75mg/m2的剂量施用的。[0060]在一些实施例中，lb-100是以2.33mg/m2的剂量施用的。[0061]在一些实施例中，lb-100是以3.10mg/m2的剂量施用的。[0062]在一些实施例中，lb-100每3周施用1天、2天或3天。在一些实施例中，lb-100在21天周期的第1天和第3天施用。在一些此类实施例中，lb-100是静脉内施用的。在一些此类实施例中，lb-100是以约0.83mg/m2的剂量施用的。在一些此类实施例中，lb-100是以约1.25mg/m2的剂量施用的。在一些此类实施例中，lb-100是以约1.75mg/m2的剂量施用的。在一些此类实施例中，lb-100是以约2.33mg/m2的剂量施用的。在一些此类实施例中，lb-100是以约3.10mg/m2的剂量施用的。[0063]在一些此类实施例中，lb-100在21天周期的第1天和第3天以约0.83mg/m2的剂量施用持续至少两个周期。在一些此类实施例中，lb-100在21天周期的第1天和第3天以约0.83mg/m2的剂量施用持续至少三个周期。在一些此类实施例中，lb-100在21天周期的第1天和第3天以约0.83mg/m2的剂量施用持续至少四个周期。在一些此类实施例中，lb-100在21天周期的第1天和第3天以约0.83mg/m2的剂量施用持续至少五个周期。在一些此类实施例中，lb-100在21天周期的第1天和第3天以约0.83mg/m2的剂量施用持续患者的一生。[0064]如上文和在此进一步描述的，在一些实施例中，所述一或多种抗癌剂包括卡铂。在一些此类实施例中，所述卡铂是以对应于约auc5的剂量施用的。在一些此类实施例中，所述卡铂是以实现约auc5的剂量施用的。在一些此类实施例中，所述卡铂是以至多约750mg/天的剂量施用的。在一些实施例中，所述卡铂以根据有需要的受试者的护理标准的量施用。[0065]在一些实施例中，所述卡铂是在21天周期的第1天施用的。在一些实施例中，所述卡铂在21天周期的第1天施用至少持续4个周期。在一些此类实施例中，所述卡铂是静脉内施用的。[0066]如上文和在此进一步描述的，在一些实施例中，所述一或多种抗癌剂包括阿特朱单抗。在一些此类实施例中，所述阿特朱单抗是以约1200mg/天的剂量施用的。在一些实施例中，所述阿特朱单抗是以根据有需要的受试者的护理标准的量施用的。[0067]在一些实施例中，所述阿特朱单抗是在21天周期的第1天施用的。在一些实施例中，所述阿特朱单抗在21天周期的第1天施用持续至少4个周期。在一些此类实施例中，所述阿特朱单抗是静脉内施用的。[0068]如上文和在此进一步描述的，在一些实施例中，所述一或多种抗癌剂包括依托泊苷。在一些实施例中，所述依托泊苷以约100mg/m2/天的剂量施用。在一些实施例中，所述依托泊苷是以根据有需要的受试者的护理标准的量施用的。[0069]在一些实施例中，所述依托泊苷在21天周期的第1天、第2天和第3天施用的。在一些实施例中，所述依托泊苷在21天周期的第1天、第2天和第3天施用持续至少4个周期。在一些实施例中，所述依托泊苷是静脉内施用的。[0070]在一些实施例中，本发明提供了将lb-100与阿特朱单抗、卡铂和依托泊苷的组合以上文和在此描述的任何量和施用方案施用的方法。在一些此类实施例中，其中所述一或多种抗癌剂包括阿特朱单抗、卡铂和依托泊苷中的每一种，当在同一天以组合的形式依次施用时，施用的顺序包括施用lb-100，然后施用阿特朱单抗，然后施用卡铂，然后施用依托泊苷。在一些实施例中，施用的顺序在不施用所述抗癌剂中的一或多种抗癌剂的情况下维持不变。[0071]在一些实施例中，受试者被治疗至少一个周期、两个周期、三个周期或四个周期，所述治疗包括lb-100和一或多种抗癌剂。在一些实施例中，受试者随后进行维持治疗。例如，在一些实施例中，维持治疗包括根据上文和在此描述的任何方法施用的lb-100和阿特朱单抗。[0072]在一些实施例中，患有sclc的受试者先前未进行针对sclc的全身化学疗法、免疫疗法、生物疗法、激素疗法或研究性疗法。[0073]在一些实施例中，患有sclc的受试者尚未被诊断出患有nsclc或混合nsclc和sclc。[0074]在一些实施例中，本发明提供了一种方法，其中向受试者施用包括lb-100和至少一种药学上可接受的载体的药物组合物，以治疗受试者的癌症。[0075]在以上方法或用途中的任一种方法或用途的一些实施例中，所述受试者为人类。[0076]在以上方法或用途中的任一种方法或用途的一些实施例中，lb-100和/或一或多种另外的抗癌剂口服或肠胃外施用于所述受试者。[0077]如本文所用，“疾病的治疗”或“治疗”涵盖疾病或与所述疾病相关的症状或病状的诱导预防、抑制、消退或停滞。[0078]如本文所用，对受试者的疾病进展或疾病并发症的“抑制”意指预防或减少受试者的疾病进展和/或疾病并发症。[0079]如本文所用，“施用”药剂可以使用本领域的技术人员熟知的各种方法或递送系统中的任何一种方法或系统进行。施用可以例如口服、肠道外、腹膜内、静脉内、动脉内、经皮、舌下、肌内、直肠、经口含化、鼻内、脂质体、通过吸入、阴道、眼内、通过局部递送、皮下、脂肪内、关节内、鞘内、注入到脑室中、关节内、肿瘤内、注入到脑实质或脑实质内进行。[0080]采用许多常规使用的药物载体的以下递送系统可以使用，但仅表示预期用于施用根据本发明的组合物的许多可能的系统。[0081]可注射药物递送系统包含溶液、悬浮液、凝胶、微球和聚合物注射剂，并且可以包括如溶解度改变剂(例如，乙醇、丙二醇和蔗糖)和聚合物(例如，聚己内酯和plga)等赋形剂。[0082]其它可注射药物递送系统包含溶液、悬浮液、凝胶。口服递送系统包含片剂和胶囊。这些口服递送系统可以含有赋形剂，如粘合剂(例如，羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯酮、其它纤维素材料和淀粉)、稀释剂(例如，乳糖和其它糖、淀粉、磷酸二钙和纤维素材料)、崩解剂(例如，淀粉聚合物和纤维素材料)和润滑剂(例如，硬脂酸盐和滑石)。[0083]可植入系统包含杆和盘，并且可以含有如plga和聚己内酯等赋形剂。[0084]口服递送系统包含片剂和胶囊。这些口服递送系统可以含有赋形剂，如粘合剂(例如，羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯酮、其它纤维素材料和淀粉)、稀释剂(例如，乳糖和其它糖、淀粉、磷酸二钙和纤维素材料)、崩解剂(例如，淀粉聚合物和纤维素材料)和润滑剂(例如，硬脂酸盐和滑石)。[0085]转化粘液质递送系统包含贴剂、片剂、栓剂、阴道栓剂、凝胶和乳膏，并且可以含有赋形剂，如增溶剂和增强剂(例如，丙二醇、胆汁盐和氨基酸)和其它媒剂(例如，聚乙二醇、脂肪酸酯和衍生物、以及如羟丙基甲基纤维素和透明质酸等亲水聚合物)。[0086]皮肤递送系统包含例如水性和非水性凝胶、乳膏、多重乳剂、微乳剂、脂质体、软膏、水性和非水性溶液、洗剂、气溶胶、烃基基质和粉末，并且可以含有赋形剂(如增溶剂)、渗透增强剂(例如，脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪醇和氨基酸)和亲水聚合物(例如，聚卡波非和聚乙烯吡咯烷酮)。在一个实施例中，药学上可接受的载体为脂质体或经皮增强剂。[0087]用于可重构递送系统的溶液、悬浮液和粉末包含媒剂，如悬浮剂(例如，树胶、zanthan、纤维素和糖)、保湿剂(例如，山梨糖醇)、增溶剂(例如，乙醇、水、peg和丙二醇)、表面活性剂(例如，月桂基硫酸钠、spans、tweens和十六烷基吡啶)、防腐剂和抗氧化剂(例如，对羟基苯甲酸酯、维生素e和c以及抗坏血酸)、抗结块剂、包衣剂和螯合剂(例如，edta)。[0088]如本文所用，“药学上可接受的载体”是指适合与人和/或动物一起使用而没有与合理的益处/风险比相称的过度不良副作用(如毒性、刺激和过敏应答)的载体或赋形剂。其可以是用于向受试者递送本发明的化合物的药学上可接受的溶剂、悬浮剂或媒剂。[0089]用于本发明的方法的化合物可以呈盐的形式。如本文所用，“盐”是已经通过制备化合物的酸盐或碱盐改性的本发明化合物的盐。在用于治疗感染或疾病的化合物的情况下，盐是药学上可接受的。药学上可接受的盐的实例包含但不限于如胺等碱性残基的矿物酸盐或有机酸盐；如苯酚等酸性残基的碱盐或有机盐等。所述盐可以使用有机或无机酸来制备。此类酸盐为氯化物、溴化物、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、磺酸盐、甲酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐等。酚盐是碱土金属盐、钠、钾或锂。在这方面，术语“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的相对无毒的无机和有机酸或碱加成盐。这些盐可以在本发明的化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或通过使呈游离碱形式或呈游离酸形式的本发明的经纯化的化合物单独与核酸的有机或无机酸或碱反应并分离由此形成的盐来制备。代表性盐包含氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月硅酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐(napthylate)、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖醛酸盐、和月桂基磺酸盐等。(参见例如，贝尔热(berge)等人(1977),“药用盐(pharmaceuticalsalts)”,药物科学杂志(j.pharm.sci.)66:1-19)。[0090]本发明包含本发明方法的化合物的酯或药学上可接受的酯。术语“酯”包含但不限于含有r-co-or'基团的化合物。“r-co-o”部分可以衍生自本发明的母体化合物。“r'”部分包含但不限于烷基、烯基、炔基、杂烷基、芳基和羧基烷基。[0091]本发明包含本发明方法的化合物的药学上可接受的前药酯。本发明的化合物的药学上可接受的前药酯是酯衍生物，所述酯衍生物可通过溶剂分解或在生理学条件下转化为母体化合物的游离羧酸。前药的实例为烷基酯，所述烷基酯在体内切割以产生所关注的化合物。[0092]除非另有说明，否则当在本发明的方法中使用的化合物的结构包含不对称碳原子时，应理解所述化合物以外消旋体、外消旋混合物和分离的单一对映体的形式出现。这些化合物的所有此些异构体形式明确地包含在本发明中。除非另有说明，否则每种立体碳可以具有r或s构型。因此应理解，除非另有说明，否则由这种不对称性产生的异构体(例如，所有对映异构体和非对映异构体)都包含在本发明的范围内。此类异构体可以通过经典分离技术和立体化学控制的合成以基本上纯的形式获得，如在由j.杰奎斯(j.jacques),a.collet(a.柯莱特)和s.维纶(s.wilen),纽约的约翰威利父子出版社(pub.johnwiley&sons,ny),1981在对映体、外消旋体和分解(enantiomers,racematesandresolutions)中描述的异构体。例如，可以通过制备型色谱法在手性柱上进行分解。[0093]所述化合物或其盐、两性离子或酯任选地以药学上可接受的组合物的形式提供，所述药学上可接受的组合物包含适当的药学上可接受的载体。[0094]如本文所用，以毫克为单位测量的药剂的“量”或“剂量”是指药物产品中存在的药剂的毫克数，而与药物产品的形式无关。[0095]如本文所用，术语“治疗有效量”或“有效量”是指当以本发明的方式使用时足以产生期望治疗应答而没有与合理的益处/风险比相称的过度不良副作用(如毒性、刺激或过敏应答)的组分的量。具体的有效量将随这种因素而变化，如所治疗的特定病状、患者的身体状况、所治疗的哺乳动物的类型、治疗的持续时间、并发疗法的性质(如果有的话)以及所采用的具体调配物以及化合物或其衍生物的结构。[0096]在本说明书中给出范围的情况下，应理解的是所述范围包含所述范围内的所有整数以及其任何子范围。例如，77％至90％的范围是对77％、78％、79％、80％和81％等的公开。[0097]如本文所用，术语“约”或“大约”具有在给定值或范围的20％内的含义。在一些实施例中，术语“约”是指在给定值的20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％内。[0098]应当理解，在提供参数范围的情况下，本发明还提供所述范围内的所有整数和其十分之一。例如，“0.2-5mg/kg/天”是对0.2mg/kg/天、0.3mg/kg/天、0.4mg/kg/天、0.5mg/kg/天、0.6mg/kg/天等直至5.0mg/kg/天的公开。[0099]对于前述实施例，本文所公开的每个实施例被设想为适用于其它所公开的实施例中的每个实施例。因此，本文所描述的各种要素的所有组合都在本发明的范围内。[0100]本发明的各方面中的每个方面的所有特征在做出了必要的修正的情况下都适用于所有其它方面。[0101]为了可以更全面地理解在此描述的本发明，阐述了以下实例。应当理解，这些实例仅仅是出于说明性目的，并且不应被解释为以任何方式限制本发明。[0102]例示[0103]实例1：作为小细胞肺癌的治疗靶标的蛋白磷酸酶2a[0104]在本研究中，采用体外模型和体内模型研究了用lb100和lb100/卡铂在sclc中对pp2a进行药理学抑制的影响。此外，还检查了lb100与免疫疗法的组合对使用sclc细胞生成的3d球体的形态和完整性的影响。综上所述，结果表明，化疗药物的抗肿瘤作用可以通过lb100本身或其与化学疗法和免疫疗法的组合在sclc中阻断pp2a来增强。[0105]结果：[0106]pp2a在sclc肿瘤组织和细胞系中被上调，并且敲低pp2a显著减弱这些细胞的增殖。[0107]先前报告了pp2a以及其亚基a(pp2a-a)和c(pp2a-c)在几种sclc细胞系中过表达(5)。这通过geo(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27093186)数据集(gse60052)的生物信息学分析得到进一步证实，其中pp2a-a在sclc中比在正常肺中显著过表达(p＝0.0144)(图1a)。[0108]为了评估pp2a在sclc中的表达水平，将包含在组织微阵列(tma)中的使用对pp2a-a具有特异性的抗体进行免疫组织化学(ihc)的邻近的正常(n＝24)核和原发性sclc肿瘤(n＝79)核进行了比较(图1b)。tma中包含的每个肿瘤核和正常核由对于组织的身份为盲的病理学家独立评分(20、21)。pp2a-a蛋白在大多数正常核中不可检测到(0＝79.17％，1＝16.67％，2＝4.16％)，但在肿瘤组织中被显著上调(0＝8.86％，1＝41.77，2＝40.5，3＝8.87)(图1c)。肿瘤组织中的pp2a的平均病理学评分(1.45±0.088)显著高于(p＝0.001)正常组织中的平均病理学评分(0.333±0.13)。可公开获得的数据集和tma结果两者均显示出，pp2a-a表达在sclc肿瘤组织中显著上调(图1a至c)。已经证实了在肿瘤组织中过表达，接下来通过免疫印记确定了其在各种sclc细胞系中的表达，如前所述(22)。相比于对照hbec3kt细胞，这两个亚基在sclc细胞系中均上调，所述细胞系包含h82、h526、h524、h446、h146、h345和h69(图1d)。[0109]斑蝥素是已知抑制pp2a的lb100的母体化合物。因此，使用斑蝥素作为阳性对照以证明抑制pp2a在sclc细胞中产生观察到的影响。事实上，斑蝥素处理使pp2a活性降低了几乎90％，而lb100将磷酸酶活性显著抑制到65％。(图1e)。最后，在h524sclc细胞中使用特异性sirna敲低pp2a亚基aα。使用打乱版本(scrna)作为对照。如所预期的，敲低pp2a显著降低了这些细胞中的pp2a亚基aα水平，并且减弱了细胞增殖(图1f/小图、1f)。[0110]化学疗法与lb100组合产生协同性。[0111]为了测试lb100、卡铂和依托泊苷的细胞毒性作用，用各种浓度的每种药物对六个sclc细胞系进行了处理，持续72小时。在对顺铂敏感的四个细胞系h82、h526、h524和h446中，lb100在ic50《8μm的情况下更有效地诱导细胞死亡(表a)，相比之下，在对顺铂具有抗性的两个其它细胞系h146和h69中，在相对较高剂量的lb100(ic50约20μm)下观察到细胞死亡。[0112]表a[0113]sclc细胞系的细胞毒性ic50值[0114]细胞系lb100(μm)卡铂(μm)依托泊苷(μm)h823.5±346.5±6.822.6±6.3h5267.2±2.833.22.8±0.8h5245.3±3.28.2±2.63±2.4h4466.9±3.626.2±3.83±1.8h146r8.3±4.831.2h6922.6±5.1r30±3.3[0115]接下来，确定了用lb100与化疗药物药剂卡铂和依托泊苷的组合处理sclc细胞系的作用。任一种单独的药物在杀死对lb100敏感的h524sclc细胞时是有效的(图1g)。然而，当lb100与卡铂或依托泊苷组合使用时，在组合指数(ci)值分别为0.534和0.532的情况下，细胞死亡显著更高(图1g)。在h69sclc细胞的情况下也看到了类似的协同性。lb100/卡铂和lb100/依托泊苷在ci值分别为0.311和ci＝0.646的情况下杀死lb100抗性h69细胞(图1h)。[0116]为了确定单独的lb100以及其与卡铂和依托泊苷的组合对h524细胞和h69细胞的细胞毒性作用，还进行了集落形成测定。用单一药物(lb100、卡铂或依托泊苷)或组合(lb100/卡铂和lb100/依托泊苷)进行处理显著减少了两种细胞系的集落形成(p《0.0001；p《0.01)(图1i和j)。而在两种药物组合组(lb100/卡铂和lb100/依托泊苷)中，相比于lb100单一处理，通过h524细胞产生的集落形成明显减少。然而，在h69细胞的情况下，仅在lb100与lb100/卡铂处理的细胞之间观察到显著差异(图1j)。因此，使用更接近地类似于肿瘤微环境的3d细胞培养模型来研究lb100的作用。[0117]测试了lb100对h446球体生长的影响。[0118]进一步研究了lb100和化学疗法药物对通过sclc细胞形成的球体的影响。对三个细胞系h524、h69和h446进行了测试。h524和h69细胞在低附着96孔板中形成大的软团块。使用在不添加胞外基质组分或基质胶的情况下过夜形成致密球体的h446细胞以进行成像和组织学分析。300-500μm的球体在九天内形成(图2a)，并且在体外形成的球体的大小与转移位点中形成的肿瘤的大小相当，在所述转移位点处，细胞经历缺氧、炎症、ph水平变化以及通常营养物剥夺的状况(23)。为了测试lb100对h446球体的影响，使用incucyte活细胞分析系统以实时记录功能变化。对利用或不利用20μmlb100处理的h446球体在明场(bf)中并且使用绿色荧光在72小时内进行成像。球体的大小是使用自动软件算法测量的，所述自动软件算法掩蔽了视场中的最大bf(对于球体的无标签实时活细胞测定：incucyte明场分析)。bf分析展示了，lb100处理后球体收缩并且细胞毒性染料荧光增加(图2b和c)。对用单独的lb100、卡铂或组合处理的球体进行h&e染色。处理前，球体具有轮廓非常明确的致密圆形形状(图2d-对照)，。然而，用lb100、卡铂、依托泊苷或化疗药物与lb100的组合处理72小时显著改变了球体的形态。在lb100处理的情况下，球体的大小减小并且丧失其圆形形状。卡铂和依托泊苷处理使细胞与球体解离，从而在球体周围形成弥漫的细胞云。卡铂或依托泊苷与lb100的药物组合消除了球体生长，并且显著减少了球体的数量(图2d)。对h446球体生长的incucytebf分析表明，与对照或仅lb100处理相比，lb100与卡铂的组合减小了单个球体大小(图2e和g)。用lb100和依托泊苷获得了类似结果(图2f和h)。这些结果证实了单独的lb100和其与卡铂或依托泊苷的组合在3d球体模型中的功效，所述功效与在2d培养中的观察结果相似。[0119]药物组合抑制sclc细胞侵袭，增加卡铂摄取，并且影响pp2a、dna损伤和凋亡调节蛋白。[0120]为了了解lb100对细胞侵袭的影响，测试了sclc细胞通过内皮细胞(ec)层侵袭的能力。为此，使用如前所述的电基质阻抗感测系统(美国纽约特洛伊的应用生物物理学公司(appliedbiophysics,troy,ny,usa))测量了跨内皮单层电阻(24)。此系统随着sclc细胞附着并且开始侵袭到单层中而持续测量内皮单层电阻。电阻的降低表明通过肿瘤细胞的跨内皮外渗内皮单层屏障被破坏。未经处理的对照细胞通过huvec单层被高度侵袭。在单一药物处理(lb100或卡铂)后，h524细胞显示出跨膜迁移能力没有变化(对照变化％＝18.2+2；lb100变化％＝16.9+2；卡铂变化％＝18.2+0.4)，并且对于h69细胞来说，对应值为对照＝19.6+1.7；lb100＝12.3+0.92；卡铂＝14.9+1.24(图3a和b)。然而，与未经处理的对照细胞相比，药物组合处理显著降低了通过huvec单层的细胞跨膜迁移能力(p《0.001)。插图显示，在lb100+卡铂处理20小时后，h524(10.6+1.2％)和h69(6.6+1.2％)的huvec屏障破坏的变化百分比较低(p《0.001)。这表明利用化学疗法对pp2a的组合抑制可能潜在地破坏穿过血管的细胞运动并且阻止侵袭。[0121]由于lb100与卡铂或依托泊苷的组合显示出协同效应，因此希望了解药物通过其协同工作的机制。为此，使用电感耦合的等离子体质谱(icp-ms)测量h524细胞和h69细胞中的铂(pt)水平。将细胞用lb100预处理24小时，随后进行5μm(h524细胞)和20μm(h69细胞)卡铂处理，并持续1小时或4小时。相对于对照，用卡铂将细胞处理1小时仅略微升高两个细胞系中的pt水平(图3c和d)。相比于仅卡铂的单一治疗，用药物组合进行4小时处理显著提高了两个细胞系中的pt的水平，这表明lb100增强了sclc细胞中的pt摄取，并且由此促进了卡铂的促凋亡作用。[0122]检查了单独的lb100和其与卡铂的组合对pp2a的表达的影响。药物处理显著降低了pp2a亚基a在h524细胞中的表达(图3e，左上小图)。但在h69细胞的情况下，对照和经处理的细胞的亚基a表达是相同的(图3e，右上小图)。在对照和经处理的h524和h69细胞中，亚基c的表达也未改变(图3e，中间小图)。此外，lb100、卡铂和组合疗法显著影响组蛋白γ-h2ax的磷酸化，所述组蛋白γ-h2ax是与h524细胞和h69细胞中的dna损伤和凋亡诱导相关的标志物(图3f)。另外，在h524细胞和h69细胞中，在用lb100或卡铂单一处理以及组合处理后，胱天蛋白酶3被活化，如通过预形成物的裂解所看到(图3f)。此外，pp2a的调节异常诱导parp活性，从而导致细胞死亡。综上所述，这些数据表明，lb100与铂类药物的组合对pp2a的抑制诱导sclc细胞的凋亡信号传导。[0123]研究了lb100对h524细胞的激酶组学谱的影响。[0124]由于lb100选择性地抑制pp2a，因此使用了帕姆金公司技术以检测肽的磷酸化以作为细胞丝氨酸/苏氨酸激酶(stk)的功能读出。此分析允许探究lb100对贯穿多种细胞通路的蛋白质磷酸化的抑制作用。发现5μm和10μm浓度的lb100显著增加了某些stk的磷酸化(n＝20)。令人惊讶的是，用5μm和10μmlb100对h524细胞的处理显著减少了酪氨酸激酶肽磷酸化(n＝52)。[0125]使用reactome软件进行富集分析的生物信息学分析揭示，基于对lb100对肿瘤发生的影响的先验知识，选择了几个通路作为特别关注(27-30)。对pp2a的lb100介导的抑制强烈影响信号转导和代谢通路两者(图4a)。对信号转导通路的更紧密的分析显示，与先前的报告一致(31、32)，lb100影响hgf-met信号传导。另外，lb100还靶向sclc细胞中的代谢信号传导。[0126]探索了lb100对h69细胞中的代谢通路的影响。[0127]为了了解lb100对代谢信号传导的影响，采用biolog(加利福尼亚州海沃德(hayward,ca))表型微阵列技术检查了h69对碳源的利用。使用这种测定，检查了94种碳源和氧化还原染料四氮唑兰，以检测基质利用率。与对照(未经处理的)h69细胞相比，lb100抑制了11种碳基质的利用(图4b)，所述碳基质可以分为五组：糖(l-山梨糖、α-d-葡萄糖、d-甘露糖)、多糖(糖原、d-葡萄糖醛酸)、碳水化合物(糊精、麦芽三糖)、磷酸化的化合物(d,l-a-甘油磷酸)和胺(腺苷、肌苷)。在这些中，对于合成代谢生物合成反应来说重要的三种基质，即，α-d-葡萄糖(超过6倍)和糖原(超过2.7倍)的消耗在h69细胞中，在lb100处理后显著减少(图4c)。另外，lb100抑制这些细胞中的腺苷和肌苷基质利用，这可能对sclc中的嘌呤能信号传导具有显著影响。最后，使用葡萄糖氧化酶测定直接测量h69细胞从细胞培养基中的葡萄糖摄取，并且如所预期的，发现所述葡萄糖摄取在用lb100处理后减少。具有细胞的对照培养基中的葡萄糖水平比不具有细胞的对照的葡萄糖水平(100％)低20％。lb100处理使培养基中的葡萄糖消耗比不具有细胞的对照中的葡萄糖消耗减少了65％(图4d)。[0128]探索了lb100对h524细胞和h69细胞中的met磷酸化的影响。[0129]帕姆金公司激酶组学数据显示，残基1227与1239之间的met肽磷酸化降低。为了验证这一发现，用h524细胞提取物和h69细胞提取物进行了蛋白质印记实验，之后用lb100(分别为5μm和20μm)进行处理，并且使用特异性检测磷酸化的酪氨酸1234/1235的磷酸化met(pmet)抗体用hgf刺激10分钟。用lb100对h524细胞进行预处理几乎消除了met基础磷酸化，以及hgf激活的met磷酸化(图4e，左侧小图)。在h69细胞中，hgf磷酸化的水平显著降低(图4e，右侧小图)，这表明用lb100抑制pp2a影响负责细胞活力、增殖和运动的hgf/met信号传导。[0130]先前的研究表明met的ser985磷酸化负调节met激酶活性(33-35)。结果还显示，用lb100或其与卡铂的组合处理h524细胞诱导ser985磷酸化的增加，并且与对met酪氨酸磷酸化的抑制相关。此外，lb100降低pp2aa在lb100/卡铂样品中的表达(图4f)。这一发现与帕姆金公司激酶组学数据相关，所述数据显示lb100降低了tyr1234/1235met的磷酸化，并且可以是lb100对sclc细胞的主要影响。[0131]探索了lb100对sclc细胞的线粒体功能和糖酵解功能的影响。[0132]接下来，采用seahorsexf细胞能量表型测试确定了lb100对sclc细胞中的atp产生的影响。将h524细胞和h69细胞用一半ic50剂量的lb100(分别地，2.5μm和10μm)预处理。药物处理后，对细胞的数量进行计数，并且使用台盼蓝排阻作为读出检查细胞的活力。在seahorsexf96分析仪上确定细胞基础氧消耗速率(ocr)和胞外酸化速率(ecar)测量结果。然后用1μm寡霉素(氧化磷酸化(oxphos)的抑制剂)和1μm羰基氰化物对三氟甲氧基-苯腙(fccp)(oxphos的解联剂)的组合对h524细胞和h69细胞进行应激。由于寡霉素抑制线粒体atp产生，并且fccp通过使线粒体中的h+梯度解耦诱导最大氧消耗，因此利用这两种应激方法检查的实验条件分别反映了sclc细胞的最大糖酵解能力和oxphos能力。细胞代谢能力包含这两个事件，并且特征在于，细胞对能量需求急剧增加的限制。lb100严重影响h524细胞的能量代谢；并且其基础ocr为未经处理的细胞的基础ocr的1/4(图5a)。lb100处理还诱导对应激ocr以及基础和应激ecar的抑制(图5b和c)。这些结果表明lb100对糖酵解和oxphos通路的显著抑制作用，所述通路是这些细胞中的atp产生的主要来源。在h69细胞中还观察到基础ocr和ecar显著降低(图5d)。然而，在用lb100处理后，这些细胞中的应激ocr和ecar没有显著降低(图5e和f)。[0133]为了确定单独的lb100或其与卡铂的组合在来自线粒体呼吸和糖酵解的atp产生中的作用，进行了安捷伦公司seahorsexf-96实时atp速率测定。在h524细胞中，所有三个组中的总atp产生速率比未经处理的细胞中的atp产生速率显著降低了73.7％(lb100)、36.3％(卡铂)和63.7％(lb100/卡铂)(图6a)。线粒体和糖酵解atp产生速率在药物处理的细胞中也显著降低。重要的是，lb100和lb100/卡铂在抑制线粒体atp和糖酵解atp产生方面比单独的卡铂更有效，并且改变了h524细胞的能量表型。细胞往往变得能量和糖酵解较少(图6b)。[0134]为了阐明药物对h524细胞的糖酵解代谢的影响，分析了质子外排速率(per)。per是如下计算的：通过从总酸化或(从糖酵解和线粒体介质两者)到胞外介质的质子外排中，减去从线粒体co2产生(线粒体衍生的co2可以在胞外介质中部分水合，从而产生超出糖酵解所带来的酸化的另外的胞外酸化)中产生的酸化。per的基础值在药物处理后比未经处理的细胞的基础值降低了》50％(图6c)。在存在寡霉素，即oxphos的抑制剂和抗霉素/鱼藤酮(线粒体电子传递的抑制剂)的第二急性注射液的情况下per的测量结果显示，lb100处理的组显著降低。lb100处理还损害糖酵解并且减少代偿性糖酵解(细胞在用抗霉素/鱼藤酮进行oxphos抑制后增加糖酵解的能力)(图6d和e)。另外，h69细胞中的atp产生的测量结果。h69细胞表现出与h524细胞相同的趋势，因为总atp产生速率在lb100组中下降了54％，在卡铂组中下降了12％，并且在lb100/卡铂组中下降了57％(图6f)。此外，lb100和lb100/卡铂显著降低了h69细胞的线粒体atp产生速率，并且h69细胞的能量图显示，与未经处理的细胞相比，糖酵解atp产生速率略微下降(图6g)。为了证实lb100还影响lb100抗性细胞的糖酵解通路，测量了这些细胞的per。per的基础水平在lb100组中明显受到抑制(图6h)。另外，在存在线粒体电子传递抑制剂的情况下，lb100处理显著抑制per(图6i和j)。单独的lb100单独或其与卡铂的组合导致h69细胞中的糖酵解代谢活性受损并且氧化能力受限。综上所述，这些结果显示，单独的lb100或其与卡铂的组合有效地靶向sclc细胞的代谢功能，由此降低细胞增殖和迁移，从而使其对化学疗法敏感。[0135]lb100和阿特朱单抗增加了cd8+t细胞在3d中对肿瘤细胞的识别。[0136]由于检查点抑制剂可以诱导抗癌免疫应答，并且pp2a抑制已显示出增强几种癌症的抗癌免疫，因此评估了lb100和阿特朱单抗的组合，以及在存在t细胞的情况下在使用h446球体的3d培养系统中靶向pd-l1的人源化igg抗体。细胞毒性cd8+细胞是从健康供体的全血、血沉棕黄层中按照方法中描述的方案分离的。图7a含有显示治疗方案的示意图。将h446球体放置在具有t细胞和活化珠粒以及lb100、阿特朱单抗或lb100和阿特朱单抗的组合的圆底96孔板中，并且用延时成像使球体可视化。平均球体直径介于300μm与350μm之间，并且其在0小时时具有相同的形态(图7b和c)。监测球体存活48小时，并且从相衬图像中测量球体直径。细胞分布直径在阿特朱单抗/t细胞组和lb100/阿特朱单抗/t细胞组后比对照组的细胞分布直径显著(p《0.001)增加(图7d和e)。单独的lb100对球体变性具有中度影响(p《0.01)(图7d)。t细胞与lb100或阿特朱单抗的组合影响球体完整性。来自incucyte延时显微术的明场图像显示，从第0天开始，球体具有圆形形状和很好体现的球体结构(图7f)。lb100在没有t细胞的情况下在第1天后开始使球体崩解，并且阿特朱单抗在没有t细胞的情况下对球体没有影响。活化t细胞与lb100、阿特朱单抗和两种药物的组合诱导死亡细胞的脱落，t细胞在球体核中的积聚，并且在第2天在图像中仅观察到球体碎片(图7f)。使用cd3抗体进行的ihc显示，在肿瘤细胞之中在以下三个组中存在t细胞簇，即lb100/t细胞、阿特朱单抗/t细胞和lb100/阿特朱单抗/t细胞。组合处理诱导球体的破坏，导致活化t细胞浸润在球体中，从而导致细胞解离、球体形态丧失并且细胞毒性增加。h&e染色上的t细胞簇+珠粒与cd3染色的棕色斑点相匹配(图7g)。[0137]探索了lb100对sclc小鼠模型中的肿瘤生长的影响。[0138]已经在体外系统中证明了lb100、卡铂和其组合的效力，接下来使用sclc的异种移植小鼠模型在体内进行检查。用lb100或lb100与卡铂的组合进行的处理在统计上显著减小了肿瘤大小(图8a)。值得注意的是，这些药物没有表现出明显毒性，也没有显著影响体重(图8b)。然而，与媒剂处理的组相比，用lb100、卡铂以及其组合进行处理使肿瘤重量显著减轻(图8c)。与媒剂组相比，lb100/卡铂将原发性肿瘤生长抑制了89％。结果表明，药物组合最大限度地抑制肿瘤生长(图8d)。用卡铂和lb100/卡铂处理30天后小鼠肿瘤中的pt的测量结果显示，在组合处理后肿瘤内pt水平显著提高(图8e)。肿瘤的ihc证实，pmet、pp2aa、cd31和ki67标志物在药物组合组中染色低(图9)。[0139]讨论/结论：[0140]本研究表明单独的lb100或其与化疗药物的组合抑制sclc中的细胞增殖和集落形成。在lb100与卡铂的组合的情况下观察到对细胞增殖的最大抑制作用。此外，组合在更接近地类似于肿瘤微环境的sclc的球体模型中是有效的。此药物组合还显著抑制相比于对照未经处理的细胞，sclc细胞穿过huvec单层的侵袭。这些结果以及lb100/卡铂组合在显著减小sclc异种移植小鼠模型的肿瘤大小和重量的事实强调这种创新的治疗选项对sclc的潜力。[0141]另外，lb100处理抑制sclc细胞中的hgf诱导的met磷酸化。与结果一致，pp2a已知通过s895的去磷酸化调节met活化，所述去磷酸化引起y1234和y1235的自磷酸化，从而活化受体(34)。不希望受理论束缚，hgf诱导的met磷酸化似乎在sclc的上皮-间质转化(emt)中起重要作用(22)。此外，met/hgf轴在多种肿瘤类型，包含肺癌的化疗抗性的发展中起主要作用。在nsclc中，met受体的活化借助于通过活化pi3k-akt通路并下调凋亡诱导因子以抑制凋亡来诱导化疗抗性(37)。用met抑制剂阻断这一过程使这些细胞在体内和体外对化学疗法再增敏(38)。lb100可能破坏met的配体活化的事实表明，lb100还可以减弱化疗抗性，这是治疗sclc的主要障碍。已知c-met也参与几种癌症的代谢重新编程(39-42)。[0142]在用单独的lb100或其与卡铂的组合抑制pp2a活性时，观察到葡萄糖摄取显著减少，并且糖酵解和oxphos也显著减少。此外，这些细胞的糖酵解能力和氧化能力在这些处理后降低。不希望受理论束缚，这些结果表明，lb100和卡铂处理逆转了混合糖酵解/oxphos表型，由此使sclc细胞对化疗药物増敏。增加的atp产生与产生化疗抗性的atp结合盒(abc)转运蛋白的增加的活性相关，(45)所述化疗抗性与以下事实是一致的，即升高的atp水平直接影响abc转运蛋白的活性。不希望受理论束缚，lb100对糖酵解、oxphos和atp剥夺的抑制可以使外排泵的功能减弱，从而增加药物的毒性并且逆转药物抗性。[0143]质谱数据表明，sclc细胞和肿瘤组织中的pt浓度在lb100处理后显著增加。铜内排/外排转运蛋白已表明在癌症中的基于铂的药物摄取和抗性中起重要作用。(46)在许多癌症中观察到铜转运蛋白1(ctr1)表达减少并且abc转运蛋白、atp7a/7b外排转运蛋白和多药抗性蛋白mtb1增加(47)。不希望受理论束缚，sclc中的观察到的pt摄取增加可能是由于铜内排/外排转运蛋白中的一或多种响应于lb100的表达改变引起的。与这一观点一致，lb100和卡铂的组合协同地起作用以诱导sclc细胞中的dna损伤和凋亡。[0144]已经证明pd-l1在源自sclc的rbf/f/trp53f/f小鼠模型的神经内分泌细胞中过表达(未发布数据)，并且阿特朱单抗和lb100的组合在存在活化t细胞的情况下诱导球体的破坏，导致活化t细胞浸润在球体中从而引起细胞解离、球体形态丧失和细胞毒性增加。[0145]因此，目前的数据表明，用lb100消除pp2a通过以下方式抑制细胞增殖、肿瘤生长和转移：通过改变转运蛋白的表达由此提高化学敏感性来肯定其对致癌基因met的活性、能量产生和药物摄取的多效性作用。此外，目前的数据还表明，lb100与卡铂和依托泊苷组合可以增强lb100的这些多效性作用，并且免疫疗法与lb100处理组合使h446球体的t细胞浸润增加，从而使这些球体崩解。综上所述，来自本研究的结果表明，药理学上靶向pp2a似乎是sclc的可行策略。[0146]材料和方法[0147]组织微阵列[0148]小细胞肺癌tma来自美国比曼斯公司(usbiomaxinc.)(马里兰州罗克维尔市(rockville,md)；lc818)。在希望之城的病理学/实体肿瘤中心(thepathology/solidtumorcore,thecityofhope)，利用针对pp2aa的抗体(加利福尼亚州工业之城的cst公司(cst,cityofindustry,ca))使用先前描述的标准技术(49)进行免疫组织化学(ihc)染色。简而言之，由两名独立的病理学家以0到3的尺度对每个tma进行审查和评分：0+，无染色、无表达；1+，弱染色，低表达；2+，中度染色，中度表达；3+，强染色，高表达。[0149]细胞培养试剂[0150]sclch524、h526、h82、h446、h69和h146细胞的悬浮液是从atcc公司(弗吉尼亚州马纳萨斯(manassas,va))购买的，并且在37℃下在5％co2的情况下维持在补充有10％(v/v)胎牛血清和1％(v/v)盘尼西林/链霉素(马萨诸塞州特克斯伯里的康宁生命科学公司(corninglifescience,tweksbury,ma))和l-谷氨酰胺的rpmi1640(马萨诸塞州特克斯伯里的康宁生命科学公司)中。对细胞系的形态进行常规监测，并且用支原体检测试剂盒(加利福尼亚州圣地亚哥的英维真公司(invivogen,sandiego,ca))对细胞系的支原体进行常规测试。[0151]免疫印迹[0152]使用ripa裂解缓冲液制备全细胞裂解物，并且使用来自cst公司(加利福尼亚州工业之城)的针对pp2aa、pp2ac具有特异性的抗体、磷酸化组蛋白h2ax(s139)、met、pmet(tyr1234/1235)、切割的胱天蛋白酶3和泛肌动蛋白抗体通过免疫印迹检测蛋白质，如上所述使用切割的parp1(得克萨斯州达拉斯的圣克鲁斯生物技术公司(santacruzbiotechnology,dallas,tx))和pmet(ser985)(马萨诸塞州沃尔瑟姆的赛默飞世尔科技公司(thermofisherscientific,waltham,ma))(22)。[0153]细胞活力测定[0154]为了确定特异性细胞毒性，如前所述使用了细胞计数试剂盒-8(马里兰州罗克维尔市的同仁化学分子技术公司(dojindomoleculartechnologies,rockville,md))(50)。[0155]集落形成[0156]将于0.3％琼脂糖中的大约1x103个细胞在96孔板中接种到0.6％琼脂糖层上。使细胞在存在lb100、卡铂或lb100/卡铂的情况下生长三周，以观察集落形成。将集落固定在4％甲醛中，并且用结晶紫染色。在蔡司公司观察者7倒置显微镜(zeissobserver7invertedmicroscope)(德国奥伯科恩的卡尔蔡司公司(carlzeiss,obercohen,germany))上使用步长大小为200微米的5x物镜提取平铺明场图像的z堆叠。使用zenbluev2.5(卡尔蔡司微成像公司(carlzeissmicroimaging))，首先通过拼接参考切片对堆叠进行处理，并且然后使用具有默认设置的扩展聚焦深度模块以将z堆叠信息压缩到单个图像中。使用点工具对所产生的平铺图像进行人工计数，并且在qupath0.1.3中生成汇总测量结果(51)。[0157]pp2a磷酸酶活性测定[0158]使用pp2a免疫沉淀ser/tre磷酸酶测定试剂盒(加利福尼亚州泰梅库拉的密理博公司(millipore,temecula,ca))以按照制造商的方案测量pp2a活性。简单地说，用lb100将8x106个h524细胞处理24小时。数据以相比于对照的相对pp2a活性的百分比呈现。[0159]sipp2asubaα转染[0160]ser/thr磷酸酶2a调节亚基aα同种型sirna购自迈博赛斯公司(mybiosource)(https://www.mybiosource.com/search/ppp2r1a-sirna)。使用jetprime试剂(加利福尼亚州洛杉矶的波利普斯转染公司(polyplus-transfection,la,ca))用100nmsirna对细胞进行转染。用抗ppp2r1a抗体(加利福尼亚州圣地亚哥的迈博赛斯公司)验证sirna瞬时转染。[0161]跨内皮外渗测定[0162]sclc细胞侵袭穿过内皮细胞(ec)层的能力是利用使用电基质阻抗感测系统(纽约特洛伊的应用生物物理学公司)得到的跨内皮单层电阻测量结果定量的，如之前所描述的(24)。[0163]利用活细胞分析系统和细胞毒素试剂监测球体生长和细胞毒性[0164]将h446细胞以每孔10,000个细胞的密度铺板，并且允许形成球体(72小时)。然后用lb100、卡铂或lb100/卡铂对细胞进行处理，并且获得球体生长的动力学。球体每4小时进行成像，持续6天，并且使用incucytezoom软件对球体进行分析。[0165]icp-ms测定[0166]在伊思帕姆部门(isotoparium)(加州理工学院(californiainstituteoftechnology))使用预清洗的teflon烧杯(pfa)、最优级试剂(飞世尔化学公司)和18.2mωmilli-q水制备样品并且分析样品的pt浓度。将细胞团粒首先在500μl浓缩hno3中在160℃下消化30分钟，之后使其完全干燥。将小鼠肿瘤在1ml浓缩hno3中在120℃下利用定期脱气消化30-45分钟，之后使其完全干燥。将样品冷却至室温，置于50:50v/v浓缩hno3:h2o2中(对于细胞团粒为1ml，对于肿瘤为2ml)，以燃烧掉有机物。将细胞团粒置于160℃的热板上过夜。将肿瘤在120℃下在定期脱气的情况下加热8小时。然后使所有样品完全蒸发，并且在5ml3％v/vhno3中重构。使用钬(spex瑟提普公司assurance(spexcertiprepassurance),批次#24-80hom)作为内部标准品。对所有样品和标准稀释液使用3％v/vhno3与2ppbho的储备溶液。将细胞系的等分试样使用hno3+ho储备溶液稀释20x，同时将肿瘤等分试样使用相同的储备溶液稀释100x。每种生物复制品测量三个技术复制品以证明再现性。所有样品均使用icaprq(马萨诸塞州沃尔瑟姆的赛默飞世尔科技公司)icp-ms和sc-2dx自动取样器(内布拉斯加州奥马哈的元素科学公司(elementalscientific,omaha,ne))进行分析。将仪器调谐参数(例如，雾化器气体流量、火炬对准以及样品摄取速率、四极离子偏转器)进行优化，以在分析前通过标准性能检查。使用hno3储备溶液创建pt标准曲线(0.001ppb、0.01ppb、0.1ppb、1.0ppb，spex瑟提普公司assurance，批次#24-140ptm)，并且针对样品校准进行测量。对于每次分析，测量铂194和195以及钬165两者。每次测量使用5次扫描的5次主运行，并且每次扫描使用每个同位素50毫秒的停留时间。为了确保残留有机物不影响浓度估计，每个样品在两个独立的时期(不同天)使用两种不同的锥插入件(高基质插入件，其通常用于地质样品；和鲁棒插入件，其被推荐用于生物基质)进行测量。两个数集据在不确定度范围内是相同的(《±2％)。将铂质量相对于细胞团粒的总蛋白质质量和小鼠样品的肿瘤质量进行归一化。[0167]使用帕姆金公司的微阵列测定进行激酶活性剖析[0168]将h524细胞用lb100处理5小时，以测试药物对蛋白酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激酶活性的影响。使用pamchips以捕获来自酪氨酸激酶组(蛋白酪氨酸激酶-ptk)或丝氨酸/苏氨酸激酶组(丝氨酸/苏氨酸激酶-stk)的上游激酶的活性。两种pamchips含有144个肽，每个肽由12-15个氨基酸组成，具有一或多个磷酸化位点。ptk和stk帕姆金公司测定按照制造商的说明进行。样品由高通量筛选中心(highthroughputscreeningcore)(加利福尼亚州杜阿特的希望之城(cityofhope,duarte,ca))在12(荷兰斯海尔托亨博斯的帕姆金公司(pamgene,s-hertogenbosch,netherlands))上一式三份运行。使用evolve和bionavigator软件包(帕姆金公司)进行图像定量和数据处理。使用通路富集分析(http://reactome.org)对每个芯片上的相对于未经处理的对照，至少一种药物浓度具有显著(t测试p《0.05)对数倍变化的肽。[0169]拜乐公司(biolog)代谢测定[0170]表型微阵列(pm)使用专利氧化还原化学，采用细胞呼吸作为通用报告因子。这些测定潜在地自然契合，以支撑从代谢组学筛选中获得的数据。氧化还原测定提供了表型的扩增和精确定量两者。氧化还原染料混合物含有水溶性无毒四氮唑兰试剂，所述水溶性无毒四氮唑兰试剂可以与实质上任何类型的动物细胞系或原代细胞(52)一起使用。拜乐公司(美国加利福尼亚州海沃德)测定中使用的染料测量来自所测试的细胞中存在的各种分解代谢通路的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原形式(nadh)产量的输出。如果细胞生长在测定孔中受培养基支持，则积极代谢的细胞减少四氮唑兰染料。染料的减少引起孔中的颜色形成，并且表型被视为是“阳性”。如果代谢受到阻碍或生长不良，则表型为“弱阳性”或“阴性”，并且孔形成很少颜色或没有颜色。这种比色氧化还原测定允许检查处理对由不同基质产生的代谢速率的影响，并且由此是一种与对通过代谢组学筛选进行的代谢输出的检查组合的优秀技术。[0171]葡萄糖摄取测定[0172]葡萄糖消耗是通过使用比色葡萄糖测定(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司(invitrogen,carlsbad,ca))按照制造商的说明确定的。简单地说，将细胞以每孔2x106个细胞的密度接种到100mm板中。细胞培养48小时后，收集培养基的上清液，对上清液进行葡萄糖检测。葡萄糖的摄取是相比于细胞培养基中的初始葡萄糖浓度确定的，所述初始葡萄糖浓度被视为100％。[0173]细胞能量表型和实时atp速率[0174]使用seahorsexf96仪器(加利福尼亚州圣克拉拉的安捷伦公司(agilent,santaclara,ca))以进行细胞能量表型和实时atp测定。细胞能量表型测定测量基础水平和应激水平下的线粒体呼吸和糖酵解。实时atp测量检测由糖酵解和线粒体进行的atp产生的速率。实验前，将细胞用lb100处理18小时。处理后的当天，将细胞清洗，并且以每孔5x104的密度接种在用cell-tak处理的96孔板上。将板离心以促进细胞附着，并且在37℃下温育60分钟。两个测定按照制造商的说明进行。使用wavedesctop2.6软件(加利福尼亚州圣克拉拉的安捷伦公司)进行数据分析。[0175]球体与药物和t细胞的活成像[0176]h446如材料和方法(materialsandmethods)(使用活细胞分析系统和cytotox试剂监测球体生长和细胞毒性)中所述在与t细胞和药物一起温育后产生。使用incucyte3d多肿瘤球体测定监测lb100和阿特朱单抗在存在t细胞的情况下的影响。[0177]lb100对皮下h69细胞小鼠异种移植物中的肿瘤生长的影响[0178]动物研究根据希望之城国家医疗中心动物护理和使用委员会(cityofhopenationalmedicalcenteranimalcareandusecommittee)批准的iacuc方案进行。无胸腺裸小鼠(5-6周龄)购自nci公司(马里兰州弗雷德里克(frederick,md))。在小鼠的右侧向小鼠皮下注射悬浮(2x106)在100μlpbs和100μl基质胶(加利福尼亚州圣何塞的碧迪生物科学公司(bdbiosciences,sanjose,ca))中的h69细胞。用卡尺以两个维度测量肿瘤生长，并且当表面肿瘤可见(45-50mm2)时，将小鼠随机化为如下四组：媒剂(pbs，i.p.每周3次)、lb100(0.25mg/kg，i.p.每周3次)、卡铂(50mg/kg，i.p.每周2次)和药物组合(lb100/卡铂i.p.)持续30天。在研究结束时，将小鼠通过co2窒息以及之后的颈椎脱臼处死。将肿瘤组织切除，称重，并且随后固定在10％缓冲福尔马林中，并且包埋在石蜡中以进行组织学分析。[0179]统计分析[0180]使用graphpadprism8进行统计分析。将两个样品组通过非配对双侧学生t测试(unpaired,two-sidedstudent'sttest)进行比较。将多于两个组的数据通过单向anova进行分析，之后进行tukey多重比较测试(tukey'smultiplecomparisontest)。p《0.05的值被视为是显著性的，并且表示为：*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。图形表示平均值±平均值的标准误差。(se)。[0181]参考(实例1)[0182]1.s.雷诺特(s.reynhout),v.杰森斯(v.janssens),pp2a的生理功能：来自转经基因修饰的老鼠的教训(physiologicfunctionsofpp2a:lessonsfromgeneticallymodifiedmice.)生物化学与生物物理学报：分子细胞研究(biochimbiophysactamolcellres)1866,31-50(2019)。[0183]2.s.马兹哈尔(s.mazhar),s.e.泰勒(s.e.taylor),j.萨达卡(j.sangodkar),g.那拉(g.narla),靶向癌症中的pp2a：组合疗法(targetingpp2aincancer:combinationtherapies.)生物化学与生物物理学报：分子细胞研究1866,51-63(2019)。withlb100enhancescisplatincytotoxicityandovercomescisplatinresistanceinmedulloblastomacells.)肿瘤靶标7,12447-12463(2016)。[0198]17.w.s.候,h.王,d.马吉奥,j.s.科瓦奇,q.张,q.宋,f.m.马利克拉(f.m.marincola),j.d.海斯,m.r.吉尔伯特(m.r.gilbert),r.卢,z.庄,对蛋白磷酸酶-2a的药理学抑制在与pd-1阻断组合时实现了持久的免疫介导的抗肿瘤活性(pharmacologicinhibitionofproteinphosphatase-2aachievesdurableimmune-mediatedantitumoractivitywhencombinedwithpd-1blockade.)自然通讯(natcommun)9,2126(2018)。[0199]18.r.v.帕里(r.v.parry),j.m.开姆尼斯(j.m.chemnitz),k.a.弗拉沃斯(k.a.frauwirth),a.r.兰弗兰科(a.r.lanfranco),i.布朗斯坦(i.braunstein),s.v.小林(s.v.kobayashi),p.s.林斯利(p.s.linsley),c.b.汤普森(c.b.thompson),j.l.莱利(j.l.riley),ctla-4和pd-1受体通过不同的机制抑制t细胞活化(ctla-4andpd-1receptorsinhibitt-cellactivationbydistinctmechanisms.)分子细胞生物学(molcellbiol)25,9543-9553(2005)。[0200]19.p.周,d.r.沙佛尔(d.r.shaffer),d.a.阿尔瓦雷斯阿里亚斯(d.a.alvarezarias),y.中崎(y.nakazaki),w.珀斯(w.pos),a.j.特莱斯(a.j.torres),v.克雷马斯克(v.cremasco),s.k.杜根(s.k.dougan),g.s.考利(g.s.cowley),k.艾尔派克(k.elpek),j.布雷格登(j.brogdon),j.兰姆(j.lamb),s.j.特利(s.j.turley),h.l.普罗根(h.l.ploegh),d.e.鲁特(d.e.root),j.c.洛夫(j.c.love),g.德拉诺夫(g.dranoff),n.哈科恩(n.hacohen),h.康托尔(h.cantor),k.w.伍彻尔芬尼根(k.w.wucherpfennig),肿瘤微环境中免疫治疗靶标的体内发现(invivodiscoveryofimmunotherapytargetsinthetumourmicroenvironment.)自然(nature)506,52-57(2014)。[0201]20.i.卡万达(i.kawada),r.海斯纳(r.hasina),f.e.雷诺(f.e.lennon),v.p.宾多卡(v.p.bindokas),p.尤萨特卡(p.usatyuk),y.h.谭,s.克里希纳斯瓦米(s.krishnaswamy),q.阿里夫(q.arif),g.凯里(g.carey),r.d.许(r.d.hseu),m.罗宾逊(m.robinson),m.泰特科瓦(m.tretiakova),t.m.布兰德(t.m.brand),m.伊达(m.iida),m.k.佛格森(m.k.ferguson),d.l.惠勒(d.l.wheeler),a.n.候塞音(a.n.husain),v.纳塔拉詹(v.natarajan),e.e.沃克斯(e.e.vokes),p.a.辛格尔顿(p.a.singleton),r.萨尔加,帕罗西林突变影响局灶粘连并导致线粒体动力学改变:与肺癌相关(paxillinmutationsaffectfocaladhesionsandleadtoalteredmitochondrialdynamics:relevancetolungcancer.)癌症生物学疗法(cancerbiolther)14,679-691(2013)。[0202]21.l.福罗(l.faoro),p.a.辛格尔顿,g.m.塞万提斯(g.m.cervantes),f.e.雷诺,n.w.钟(n.w.choong),r.坎特提(r.kanteti),b.d.佛格森(b.d.ferguson),a.n.候塞音,m.s.泰特科瓦,n.拉玛内坦(n.ramnath),e.e.沃克斯(e.e.vokes),r.萨尔加,在肺鳞状细胞癌中的epha2突变促进细胞存活、细胞侵袭、局灶性粘连和雷帕霉素活化的哺乳动物靶标的增加(epha2mutationinlungsquamouscellcarcinomapromotesincreasedcellsurvival,cellinvasion,focaladhesions,andmammaliantargetofrapamycinactivation.)生物化学杂志(jbiolchem)285,18575-18585(2010)。[0203]22.r.坎特提,i.丹斯格尼(i.dhanasingh),i.卡万达,f.e.雷诺,q.阿里夫,r.布pathwayinresponsetoinsulinstimulus.)细胞生理学和生物化学(cellphysiolbiochem)50,317-331(2018)。[0212]31.r.萨尔加,c-met在癌症中的作用：重点是肺癌(roleofc-metincancer:emphasisonlungcancer.)肿瘤学研讨会(seminoncol)36,s52-58(2009)。[0213]32.m.哈代-沃尔滨(m.hardy-werbin),r.德雷·维加拉(r.delrey-vergara),m.a.格里那多-坎波斯(m.a.galindo-campos),l.莫利内罗(l.moliner),e.阿里奥拉(e.arriola),met抑制剂在小细胞肺癌中的作用：从工作台到床边(metinhibitorsinsmallcelllungcancer:fromthebenchtothebedside.)癌症(巴塞尔)(cancers(basel))11,(2019)。[0214]33.l.甘迪诺(l.gandino),p.龙甘地(p.longati),e.麦迪克(e.medico),m.普拉特(m.prat),p.m.卡莫里奥(p.m.comoglio),丝氨酸985的磷酸化负调节肝细胞生长因子受体激酶(phosphorylationofserine985negativelyregulatesthehepatocytegrowthfactorreceptorkinase.)生物化学杂志269,1815-1820(1994)。[0215]34.a.桥本浅子(a.hashigasako),m.町出(m.machide),t.中村(t.nakamura),k.松本(k.matsumoto),t.中村(t.nakamura),对c-met通过蛋白激酶c和蛋白磷酸酶2a进行的ser-985的磷酸化的双向调节涉及c-met活化和细胞对肝细胞生长因子的应答(bi-directionalregulationofser-985phosphorylationofc-metviaproteinkinasecandproteinphosphatase2ainvolvesc-metactivationandcellularresponsivenesstohepatocytegrowthfactor.)生物化学杂志279,26445-26452(2004)。[0216]35.a.r.威尔兹(a.r.virzì),a.金特尔(a.gentile),s.本韦努蒂(s.benvenuti),p.m.卡莫里奥,复活对braf(g469a)突变绕过的met的致癌上瘾(revivingoncogenicaddictiontometbypassedbybraf(g469a)mutation.)美国国家科学院院刊115,10058-10063(2018)。[0217]36.v.郑,a.s.曼斯菲得(a.s.mansfield),f.布莱特(f.braiteh),d.理查德(d.richards),h.杜瑞威格(h.durivage),r.s.昂格莱德(r.s.ungerleider),f.约翰逊,j.s.科瓦奇,lb-100，作为蛋白磷酸酶2a的抑制剂在患有复发性实体瘤的患者中的安全性、耐受性和初步活性：开放标签、剂量升级、首次人体i期试验(safety,tolerability,andpreliminaryactivityoflb-100,aninhibitorofproteinphosphatase2a,inpatientswithrelapsedsolidtumors:anopen-label,doseescalation,first-in-human,phaseitrial.)临床癌症研究23,3277-3284(2017)。[0218]37.j.t.陈,c.y.黄(c.y.huang),y.y.蒋,w.h.陈,s.h.周(s.h.chiou),c.y.陈,k.c.周(k.c.chow),hgf通过下调肺癌细胞中的aif提高顺铂抗性(hgfincreasescisplatinresistanceviadown-regulationofaifinlungcancercells.)美国呼吸系统细胞和分子生物学杂志(amjrespircellmolbiol)38,559-565(2008)。[0219]38.i.卡纳达斯(i.),f.罗霍(f.rojo),陶斯(taus),o.埃尔普(o.arpí),m.阿瑞米-乌锐阿(m.arumí‑uría),l.皮祖安(l.pijuan),s.梅嫩德斯(s.menéndez),s.扎祖纳(s.zazo),m.多米内(m.dómine),m.萨利杜(m.salido),s.莫加尔(s.mojal),a.伽西亚徳海若罗斯(a.garcíadeherreros),a.罗维拉(a.rovira),j.阿尔巴内拉(j.albanell),e.阿雷奥拉(e.arriola),用met抑制剂靶向上皮-间质转化逆转小细胞肺癌的化疗抗性(targetingepithelial-to-mesenchymaltransitionwithmetinhibitorsrevertschemoresistanceinsmallcelllungcancer.)临床癌症研究20,938-950(2014)。[0220]39.v.博斯切特(v.boschert),n.克莱恩克(n.klenk),a.阿伯特(a.abt),s.詹那凯拉曼(s.janakiraman),m.费彻尔(m.fischer),r.c.布兰德斯(r.c.brands),a.塞黑尔(a.seher),c.琳孜(c.linz),u.d.a.里切特(u.d.a.müller-richter),t.比施贝格(t.bischler),s.哈特曼(hartmann),met受体水平对头颈部鳞状细胞癌中的hgf诱导的糖酵解重编程的影响(theinfluenceofmetreceptorlevelonhgf-inducedglycolyticreprogramminginheadandnecksquamouscellcarcinoma.)国际分子科学学报(intjmolsci)21,(2020)。[0221]40.t.阮氏秋(t.thithunguyen),e.尚(e.shang),g.卡佩尔，马什乐(g.karpel-massler),m.d.西尔格林(m.d.siegelin),由于胶质母细胞瘤的可靶向脆弱性通过c-met抑制进行的代谢重编程(metabolicreprogrammingbyc-metinhibitionasatargetablevulnerabilityinglioblastoma.)肿瘤科学(oncoscience)7,14-16(2020)。[0222]41.f.蒙(f.meng),l.吴(l.wu),l.董(l.dong),a.v.米切尔(a.v.mitchell),c.詹姆斯布洛克(c.jamesblock),j.刘,h.张,q.卢,w.m.宋,b.张,w.陈,j.胡,j.王,q.杨,m.胡特曼(m.hüttemann),g.吴(g.wu),egfl9通过诱导cmet活化和代谢重编程促进乳腺癌转移(egfl9promotesbreastcancermetastasisbyinducingcmetactivationandmetabolicreprogramming.)自然通讯10,5033(2019)。[0223]42.n.金,a.毕(a.bi),x.兰(x.lan),j.许,x.王,y.刘,t.王,s.唐(s.tang),h.曾(h.zeng),z.陈,m.谭,j.艾(j.ai),h.谢,t.张,d.刘,r.黄,y.宋,e.l.梁(e.l.leung),x.姚(x.yao),j.丁(j.ding),m.耿(m.geng),s.h.林(s.h.lin),(m.黄),对受体酪氨酸激酶驱动的癌症的代谢脆弱性的鉴定(identificationofmetabolicvulnerabilitiesofreceptortyrosinekinases-drivencancer.)自然通讯10,2701(2019)。[0224]43.l.于,m.卢,d.贾(d.jia),j.马(j.ma),e.本-雅各布(e.ben-jacob),(h.levine),b.a.凯帕瑞特(b.a.kaipparettu),j.n.安努赤克(j.n.onuchic),癌症代谢的遗传调节建模：糖酵解与氧化磷酸化之间的相互作用(modelingthegeneticregulationofcancermetabolism:interplaybetweenglycolysisandoxidativephosphorylation.)癌症研究(cancerres)77,1564-1574(2017)。[0225]44.d.贾,j.h.帕克(j.h.park),k.h.荣格(k.h.jung),h.莱文(h.levine),b.a.凯帕瑞特,阐明癌症的代谢可塑性：线粒体重编程和杂交代谢状态(elucidatingthemetabolicplasticityofcancer:mitochondrialreprogrammingandhybridmetabolicstates.)细胞(cells)7,(2018)。[0226]45.l.马(l.ma),x.宗(x.zong),化疗抗性中的代谢共生：再聚焦有氧糖酵解的作用(metabolicsymbiosisinchemoresistance:refocusingtheroleofaerobicglycolysis.)肿瘤学前沿10,5(2020)。[0227]46.d.凯拉利(d.kilari),e.关希尔(e.guancial),e.s.金姆(e.s.kim),铜转运蛋白在铂电阻中的作用(roleofcoppertransportersinplatinumresistance.)世界临床肿瘤学杂志(worldjclinoncol)7,106-113(2016)。[0228]47.c.a.拉比克(c.a.rabik),m.e.杜兰(m.e.dolan),与铂化剂相关的抗性和毒性的分子机制(molecularmechanismsofresistanceandtoxicityassociatedwithplatinatingagents.)癌症治疗综述(cancertreatrev)33,9-23(2007)。[0229]48.g.l.克勒斯(g.l.coles),s.克里斯蒂亚(s.cristea),j.t.韦伯尔(j.t.webber),r.s.莱文(r.s.levin),s.m.莫斯(s.m.moss),a.何(a.he),j.桑格德卡尔(j.sangodkar),y.c.黄(y.c.hwang),j.阿安德(j.arand),a.p.杜莱纳斯(a.p.drainas),n.a.莫内(n.a.mooney),j.德迈特(j.demeter),j.n.斯普兰德林(j.n.spradlin),b.毛奇(b.mauch),v.勒(v.le),y.t.苏(y.t.shue),j.h.寇(j.h.ko),m.c.李,c.龚(c.kong),d.k.野村(d.k.nomura),m.奥尔迈尔(m.ohlmeyer),d.l.斯万内(d.l.swaney),n.j.克洛干(n.j.krogan),p.k.杰克森(p.k.jackson),g.那拉(g.narla),j.戈登(j.d.gordan),k.m.舒卡特(k.m.shokat),j.萨热(j.sage),无偏倚的蛋白质组学剖析揭示了小细胞肺癌干细胞中的可靶向的gnas/pka/pp2a轴(unbiasedproteomicprofilinguncoversatargetablegnas/pka/pp2aaxisinsmallcelllungcancerstemcells.)癌细胞(cancercell)38,129-143e127(2020)。[0230]49.p.c.马(p.c.ma),m.s.泰特科瓦,a.c.麦金农(a.c.mackinnon),n.拉曼斯(n.ramnath),c.约翰逊,s.迪特里希(s.dietrich),t.赛维特(t.seiwert),j.g.克里斯滕森(j.g.christensen),r.贾格德斯万安(r.jagadeeswaran),t.克劳兹(t.krausz),e.e.沃克斯(e.e.vokes),a.n.候塞音,r.萨尔加,met在人实体癌中的表达和突变分析(expressionandmutationalanalysisofmetinhumansolidcancers.)基因、染色体和癌症(geneschromosomescancer)47,1025-1037(2008)。[0231]50.j.王,t.买尔扎派左,y.h.卡罗尔·谭(y.h.caroltan),k.m.庞(k.m.pang),a.颇之特科威(a.pozhitkov),y.王,y.王,b.玛贝特萨维,e.王,m.w.纳色尔(m.w.nasser),s.k.巴特拉(s.k.batra),d.拉兹(d.raz),k.热克阿普(k.reckamp),p.库尔卡内(p.kulkarni),y.郑(y.zheng),r.萨尔加,抑制met信号传导与线粒体动力学和形态之间的串扰：肺癌和间皮瘤的新型治疗方法(inhibitingcrosstalkbetweenmetsignalingandmitochondrialdynamicsandmorphology:anoveltherapeuticapproachforlungcancerandmesothelioma.)癌症生物学疗法19,1023-1032(2018)。[0232]51.p班克海德(p.bankhead),m.b.洛赫雷(m.b.loughrey),j.a.费尔南德斯(j.a.fernández),y.东布罗夫斯基(y.dombrowski),d.g.马克阿特(d.g.mcart),p.d.邓恩(p.d.dunne),s.麦克奎德(s.mcquaid),r.t.格雷(r.t.gray),l.j.莫里(l.j.murray),h.g.科尔曼(h.g.coleman),j.a.詹姆斯(j.a.james),m.撒拖泰勒斯(m.salto-tellez),p.w.汉密尔顿(p.w.hamilton),qupath：用于数字病理图像分析的开源软件(qupath:opensourcesoftwarefordigitalpathologyimageanalysis.)科学报告7,16878(2017)。[0233]52.b.r.博赫纳(b.r.bochner),m.思锐(m.siri),r.h.黄,s.诺布尔(s.noble),x.h.雷(x.h.lei),p.a.克莱蒙斯(p.a.clemons),b.k.瓦格尔(b.k.wagner),哺乳动物细胞的多种能量产生通路的测定(assayofthemultipleenergy-producingpathwaysofmammaliancells.)公共科学图书馆：综合6,e18147(2011)。[0234]实例2：lb-100与卡铂/依托泊苷/阿特朱单抗的组合在未经治疗的广泛期小细胞肺癌中的ib期开放标签研究[0235]研究原理：2017年，全球一百多万人死于肺癌，并且小细胞癌占所有肺癌的大约15％。即使利用双重或三重药物疗法组合，伴有“广泛疾病”的sclc(ed-sclc，70％的患者)的中值生存期也仅为大约9个月，并且总体5年生存期保持在5％左右。pp2a在sclc细胞中普遍表达(未发布数据)，然而，其在sclc中的潜在相关性几乎还是未知的。蛋白磷酸酶2a(pp2a)是一种参与各种范围的癌症亚型，包含肺癌和b细胞源性白血病中的关键癌蛋白，如c-myc和bcr-abl的调节的磷酸酶。lb-100是pp2a的有效的且选择性的拮抗剂，所述pp2a在许多临床前模型中显示出功效。lb-100与卡铂、依托泊苷和阿特朱单抗的组合，作为ed-sclc的护理标准，将在从未接受治疗患者中进行评估，以确定推荐的ii期剂量(rp2d)。[0236]目标：这是针对患有广泛期疾病sclc的未接受过利用针对sclc的系统疗法进行的先前治疗的受试者的ib期开放标签研究。ib期研究是单小组研究，所述研究预计将招募18名可评估的患者(最多30名)，所述患者每3人一组以使用传统的3+3设计的lb-100的升级剂量进入。患者将接受用卡铂/依托泊苷/阿特朱单抗进行的诱导疗法，持续4个周期。每个周期被定义为3周(21天)。然后患者将使用lb-100和阿特朱单抗继续维持。将在疾病进展、死亡或研究关闭之前继续使用recistv1.1(附录b)指南每6-8周评估停止研究疗法而无疾病进展的患者的肿瘤应答。主要终点是确定lb-100加卡铂/依托泊苷/阿特朱单抗在患有广泛期小细胞肺癌的患者中的推荐ii期剂量(rp2d)。[0237]目的：本研究的主要目的是确定lb-100在与标准剂量的卡铂、依托泊苷和阿特朱单抗组合给予时在患有广泛期小细胞肺癌(ed-sclc)的从未接受治疗患者中的推荐ii期剂量(rp2d)。[0238]研究的次要目的是：[0239]■无进展生存期(pfs)[0240]●客观应答率(orr)[0241]●总生存期(os)[0242]●总体应答的持续时间(dor)[0243]●安全性/不良事件[0244]研究的探索性目的是：[0245]●lb-100和依托泊苷的药代动力学(pk)[0246]●与lb-100和疾病状态相关的生物标志物及其与临床结果的相关性[0247]研究设计：[0248]剂量升级：i期剂量发现将使用传统3+3来确定基于第一周期dlt的最大耐受剂量(mtd)。将探索lb-100的最大4个剂量水平。推荐ii期剂量(rp2d)的确定将基于mtd(并且将不超过mtd)，其中另外考虑了剂量修改、后续周期中的不良事件、临床活动和相关研究。[0249]扩大队列：将招募另外的患者，直到12名患者以建议的rp2d进行治疗，以帮助证实rp2d的耐受性并且获得功效的初步数据。[0250]主要终点和次要终点：[0251]主要终点：[0252]-确定使用在第一周期期间如通过ctcae5.0版评估的dlt确定组合的推荐ii期剂量(rp2d)[0253]次要终点：[0254]-通过recistv1.1确定客观应答率(orr)[0255]-通过recistv1.1确定总体应答的持续时间[0256]-通过ctcae5.0版评估的安全性和不良事件[0257]-如recistv1.1定义的无进展生存期(pfs)[0258]-总生存期，其被定义为从研究招募日期到由任何原因引起的死亡日期的时间。对于截至数据截止日期仍活着的患者来说，os时间将被限制在患者最后一次接触的日期(停止后患者的最后一次接触为死亡状态下的最后已知活着日期)。[0259]样品大小/累积持续时间/研究持续时间：[0260]样品大小：最小＝14，最大＝30，预期＝18[0261]估计累积持续时间：1-1.5年[0262]估计研究持续时间：18-24个月[0263]估计参与者持续时间：6个月[0264]简化资格标准：[0265]主要纳入标准：[0266]●根据退伍军人管理局肺研究小组(valg)分期系统在组织学上或细胞学上证实的广泛期疾病小细胞肺癌[0267]●由实体瘤反应评价标准(recist)定义的可测量疾病[0268]●无针对sclc的既往全身性化学疗法、免疫疗法、生物学疗法、激素疗法或研究性疗法[0269]●适当的血液和器官功能，包含：[0270]血液学：绝对嗜中性粒细胞(分叶型和带状)计数(anc)≥1.5x10/l，血小板≥100x10/l，并且血红蛋白≥9g/dl[0271]肝脏：可以招募胆红素≤正常上限(uln)1.5倍，并且碱性磷酸酶(ap)、丙氨酸氨基转氨酶(alt)和天冬氨酸氨基转氨酶(ast)≤uln3.0倍(如果肝脏具有肿瘤受累，则ap、ast、alt≤uln5倍是可接受的)。[0272]肾脏：基于考克罗夫特和高尔特公式(cockcroftandgaultformula)计算的肌酐清除率(crcl)≥60毫升/分钟[0273]●筛查时年龄为至少18岁[0274]●预计期望寿命为至少12周[0275]主要排除标准：[0276]●目前招募在涉及研究性产品或药物或装置的未经批准的用途的临床试验中或在最近30天内停止临床试验，或同时招募在被判断为与本研究在科上学或医学上不相容的任何其它类型的医学研究中。[0277]●nsclc或混合nsclc和sclc的诊断[0278]●除sclc、宫颈原位癌或非黑色素瘤皮肤癌外，无既往其它恶性肿瘤，但在研究进入前5年或更多年诊断出既往恶性肿瘤并且明确进行治疗，之后无复发迹象除外。即使在研究进入前不到5年诊断出，但具有低等级(格利森评分(gleasonscore)≤6＝等级，第1组)局限性前列腺癌病史的患者也将符合条件[0279]●在研究者看来将损害患者依从方案的能力的严重伴随性全身性疾病[0280]●筛查期间活动性或持续性感染，需要使用全身性抗生素[0281]●严重的心脏病状，如6个月内心肌梗死、心绞痛或纽约心脏协会iii类或iv类定义的心脏病[0282]●中枢神经系统(cns)转移或软脑膜癌病的临床迹象，但先前治疗了cns转移、无症状并且在研究药物的首次给药前1周不需要类固醇药物，并且在研究药物的首次给药前2周已完成放疗的个体除外[0283]●已知或疑似对与本试验相关的给予的任何药剂过敏[0284]●孕妇或哺乳期妇女[0285]●自身免疫性疾病史，包含不需要免疫抑制剂的轻微/轻度自身免疫性疾病(如小于体表面积10％的湿疹和需要稳定胰岛素的长期1型糖尿病)。[0286]●已知的乙型肝炎或丙型肝炎[0287]●已知人类免疫缺陷型病毒(hiv)阳性[0288]●用全身性皮质类固醇或其它免疫抑制药物进行治疗。对慢性阻塞性肺病使用吸入性皮质类固醇、对患有体位性低血压的患者使用盐皮质类固醇(例如，氟化可的松)并且对肾上腺皮质功能不全使用低剂量补充性皮质类固醇是允许的。[0289]●在研究前28天内施用活的减毒疫苗[0290]●不受控制的胸腔积液、心包积液或腹水，需要反复引流程序(每月一次或更频繁)。使用留置导管的患者是允许的。[0291]●不受控的或有症状的高钙血症(离子化钙》1.5mmol/l或钙》12mg/dl或校正血清钙》uln)。在研究进入前接受地诺单抗(denosumab)的患者必须愿意并有资格在处于研究中时停止其使用并用二膦酸盐代替。[0292]●有特发性肺纤维化、机化性肺炎(例如，闭塞性细支气管炎)、药物诱导的肺炎、特发性肺炎的病史或扫描胸部ct扫描时有活动性肺炎的迹象。放射领域的放射性肺炎(纤维化)的病史是允许的。[0293]●既往同种异体骨髓移植或实体器官移植。[0294]●3次ekg中有2次的qtcf(弗雷德里克校正公式(fridericiacorrectionformula))》470。[0295]●诊断出先天性长qt综合征[0296]●在研究药物首次给药前7天内，用已知延长qt间隔和/或与尖端扭转(torsadesdepointes)的风险相关的药物进行治疗。[0297]●在研究药物首次给药前7天内用cyp450基质进行治疗。[0298]●在研究药物首次给药前7天内用肾毒性化合物进行治疗。[0299]●在研究药物首次给药前7天内用华法林进行治疗。[0300]●在研究药物首次给药前7天内用可能增加依托泊苷清除率的抗癫痫药物(包含但不限于苯妥英(phenytoin)、苯巴比妥(phenobarbital)、卡马西平(carbamazepine)和丙戊酸)进行治疗。[0301]●在研究药物首次给药前7天内用强p-糖蛋白抑制剂进行治疗。[0302]●研究者认为可能不能够遵守研究的安全监测要求的受试者。[0303]研究产品的剂量和施用[0304]一个周期为21天。患者将接受lb-100+阿特朱单抗/卡铂/依托泊苷的4个周期的诱导，并且然后将继续使用阿特朱单抗+lb-100进行维持。[0305]lb-100：静脉内(iv)，以指定剂量(.83、1.25、1.75、2.33或3.10mg/m2)，在15分钟内，首先给予，每个周期的第1天和第3天，诱导和维持期间。其它药物应在lb-100输注结束后1小时给予。[0306]阿特朱单抗：1,200mgiv，lb-100后，每个周期第1天，诱导和维持期间。在60(±15)分钟内输注(对于首次输注，缩短至30[±10]分钟，对于后续输注，根据患者耐受性)，在lb-100后给予。[0307]卡铂：5auciv，阿特朱单抗后，30-60分钟内，每个周期的第1天，诱导期间。[0308]依托泊苷：100mg/m2iv，最后给予(在卡铂后的话，每个周期的第1天，仅其自身的话，每个周期第2天，lb-100后的话，每个周期的第3天)，诱导期间。在60分钟内输注。[0309]治疗概述：这项在50ml注射用生理盐水中稀释的lb-100的ib期研究将在门诊诊所在患有广泛期小细胞肺癌的患者中在15分钟内静脉内施用。患者将在每个21天周期的第1天和第3天以开始于剂量水平1的升级剂量(参见表5.1)在15+/-5分钟内接受在50ml生理盐水(0.9％)中稀释的lb-100的静脉内输注。lb-100应首先给予，并应在其它药物开始前一小时结束。在决定在下一个队列中进行剂量升级之前，将通过其在第21天的回访(以及在第2周期开始之前的任何延迟)评估每个剂量水平下的所有三名患者的限制性毒性的迹象。mtd被定义为最高剂量水平，在所述最高剂量水平下，≥33％的患者表现出dlt(除非要测试的最高剂量未使≥33％的患者具有dlt)，并且其中至少6名患者已进行治疗。[0310]所述研究基于标准3+3患者剂量升级设计。计划将存在3次可能的剂量升级(并且如果需要，也将存在一次可能的剂量降级)。因此，在剂量探索期间，将招募最大24名患者，在剂量升级/降级期间，预期样品大小为12(在rp2d时达到12名患者的另外的患者将跟随而来，以实现总体18名患者以及最大30名患者的预期样品大小)。[0311]dlt(剂量限制性毒性)不可评估的所有患者将被替换。未接受计划剂量的没有dlt的患者将被视为是不可评估的，如出于与毒性无关的原因进行了不充分的随访评估的患者也同样将被视为是不可评估的。患者将被招募在至多由3人组成的队列中。如果0/3例患者具有可归因于组合的dlt，则接下来的3名患者将以下一个剂量水平进行治疗。如果1/3的患者中出现dlt治疗，则3名另外的患者(总共6名)将以相同剂量水平进行治疗。如果在扩大的剂量水平下没有观察到可归因于治疗的另外的dlt(即1/6具有dlt)，则lb-100剂量将升级到下一水平。如果两名或更多名患者(即2/6)具有dlt，则将测试比所述剂量低一个水平的水平。[0312]一旦两名或更多名患者在给定剂量水平下具有dlt或测试到最高剂量水平，则剂量升级将终止。在一名患者内不会出现剂量升级。[0313]mtd被定义为所测试的最高lb-100剂量，其中在第一治疗周期期间，在至少六名患者以所述剂量进行治疗并且可针对毒性评估进行评估时，没有或只有一名患者具有dlt。mtd是比所测试的最低剂量低一个水平的剂量水平，除了最高剂量被视为是安全的之外，其中2名患者具有可归因于治疗的dlt。除这些规则外，所有剂量修改和之后的周期毒性将在升级或扩大之前进行审查，并且可以将决定修改成更加保守(例如，当标准规则状态升级时不升级，或当标准规则状态扩大剂量时降级)。[0314]无论治疗周期如何，任何需要停止疗法的严重免疫相关的事件也将促使dsmc进行审查。[0315]剂量水平：lb-100，在21天周期的第1天和第3天，以升级剂量，在标准剂量的卡铂/阿特朱单抗/依托泊苷之前[0316]表1：[0317][0318]lb-100：lb-100作为无菌溶液提供以进行静脉内施用。lb-100在-20℃(范围：-25℃至-10℃)下储存。每个小瓶含有10ml浓度为1mg/ml的lb-100。在无菌注射器中抽吸出适当剂量，并且将其添加到50ml生理盐水(0.9％)中，并且在第1天在施用阿特朱单抗之前，并且在第3天在依托泊苷之前15+/-5分钟内输注。在生理盐水中稀释后，lb-100应在4小时内施用。[0319]卡铂：卡铂是作为可以单剂量小瓶的形式获得以通过静脉内注射施用的无菌冻干粉提供的，所述单剂量小瓶含有50mg、150mg和450mg卡铂。每个小瓶含有相等重量份的卡铂和甘露醇。紧接着使用之前，必须用无菌注射用水(usp)、含5％右旋糖的水或0.9％氯化钠注射液(usp)按照以下时间表将每个小瓶的内容物进行重组(表2)：[0320]表2：[0321]小瓶长度稀释剂体积50mg5ml150mg15ml450mg45ml[0322]这些稀释液均产生浓度为10mg/ml的卡铂。卡铂可以用含5％右旋糖的水或0.9％氯化钠注射液usp(ns)进一步稀释至低至0.5mg/ml的浓度。[0323]vp-16(依托泊苷)：100mgvp-16以5ml溶液的形式在无菌多剂量瓶中提供以用于注射。黄色澄清溶液的ph为3-4。每ml含有20mgvp-16、2mg柠檬酸、30mg苯甲醇、80mg聚山梨酯80/tween80、650mg聚乙二醇300和30.5％(v/v)醇。vp-16必须在使用前用5％右旋糖注射液(usp)或0.9％氯化钠注射液(usp)稀释。然而，沉淀发生之前的时间取决于浓度，当浓度为0.2mg/ml时，在室温下稳定96小时，并且在0.4mg/ml时稳定48小时。[0324]阿特朱单抗(泰圣奇(tecentriq))：阿特朱单抗是一种用于静脉内输注用的无菌、不含防腐剂的、无色至微黄色的溶液，其以纸盒的形式供应，所述纸盒含有1200mg/20ml单剂量小瓶(ndc50242-917-01)。将小瓶在最初的纸盒中以2℃至8℃(36°f至46°f)在冷藏下储存，以避光。不要冻结。不要摇晃。[0325]研究药物时间表、剂量、途径和时间：诱导期为四个周期(周期1-4)。维持期为周期5和之后。[0326]表3：[0327][0328]疗法的计划持续时间：在研究治疗首次给药前4周内，将对每位患者进行基线肿瘤测量。在基线时：头部、胸部、腹部、骨盆的计算机断层扫描(ct)[或磁共振成像(mri)]以及骨骼和/或pet扫描。不允许将超声作为肿瘤测量的方法。必须始终使用基线时使用的同一方法以进行肿瘤评估，并且所述同一方法将每6-8周重复一次，直到疾病进展为止。对应答的确认将在第一应答迹象出现后不少于4周进行。骨骼和/或pet扫描可以根据研究者的判断重复，但如果基线时存在骨病变，则必须重复以确认完全应答(cr)。[0329]患者可以继续接受研究疗法，除非出现不可接受的毒性、疾病进展、并发疾病或5.3中列出的标准之一需要停止。[0330]出于合理的原因，研究者或赞助商均可以永久地终止本研究。终止需要书面通知。[0331]可能需要终止的条件包含但不限于以下各项：[0332]●招募在研究中的患者发现意料之外的重大或不可接受的风险。[0333]●研究者未能使患者以可接受的速度进入。[0334]●不充分遵守协议要求(未依从)。[0335]●缺乏可评估数据和/或完整数据。[0336]●决定修改药物的开发计划。[0337]●赞助商就暂停或停止药物的开发作出决定。[0338]在试验由于除了不可预见的风险之外的原因而停止的情况下，目前正在接受药物并且从治疗中得到益处的患者可能被允许继续接受治疗。[0339]终止后时间段：每位招募的患者将具有30天的安全性随访时间段，所述安全性随访时间段将在研究药物的末次给药之后30天进行。研究站点将继续根据常规临床实践监测患者。完成治疗或停止而无疾病进展的患者将每6-8周继续使用recistv1.1指南(艾森豪尔(eisenhauer)等人2009,附录b)评估肿瘤应答，直到疾病进展、死亡或研究结束为止(以先发生者为准)。首次记录的疾病进展的日期必须记录在crf上，即使在患者开始新的疗法之后发生进展也是如此。对生存期的检测还可以在进展后每个月继续。收集关于直至研究结束日期为止的疾病进展、死亡和任何停止后全身疗法、放射疗法或外科手术干预的日期的信息。[0340]退出治疗的标准：必须明确遵守招募标准。如果不符合招募标准的患者不慎被招募，则必须联系莱科特生物技术股份有限公司。此外，在以下情况下，患者将停止使用研究药物并停止研究：[0341]●招募在涉及研究性产品的任何其它临床试验中或招募在被判断为与本研究在科上学或医学上不相容的任何类型的医学研究中。[0342]●研究者/医师决定[0343]○研究者/医师决定患者应该退出研究或退出研究药物。[0344]○如果患者出于任何原因需要使用已被证明对于研究适应症的治疗有效的另一种治疗剂进行治疗，则应在引入新药剂之前停止研究药物。[0345]●患者决定[0346]○患者[或患者的指定人(例如，父母或法定监护人)]要求退出研究或研究药物。[0347]●赞助商决定[0348]○研究者、dsmb或赞助商出于医疗、安全性、监管或与适用法律、法规和良好临床实践一致的其它原因终止研究或终止患者的研究参与。[0349]●患者明显不依从研究程序和/或治疗[0350]●患者有疾病进展的迹象[0351]●不可接受的毒性[0352]●患者怀孕或未能使用充分的生育措施(针对有生育潜力的患者)。[0353]受试者随访：短期安全性随访时间段开始于研究药物的末次给药后第一天，并且持续30天。应在离研究药物的末次给药至少30天报告所有ae。长期随访期时间段在患者已完成周期4或已停止研究药物后开始，并且持续到疾病进展或死亡为止。在进展后，可以继续跟中患者的生存期。在数据截止日期和数据锁定以用于最终分析之后，研究将被视为完成。统计分析将在研究完成后进行。[0354]临床观察结果和需要进行的试验[0355]-功效：ct/pet/mri扫描[0356]-安全性：通过ctcae5.0评估的不良事件(ae)/严重不良事件(sae)、临床化学、血液学[0357]-生物分析：血液样品，用于测量血浆lb-100、茵多杀(etoposide)和依托泊苷浓度[0358]-药代动力学：lb-100和依托泊苷暴露[0359]简要统计考虑[0360]安全性：将评估接受至少一个剂量的研究药物的所有患者的安全性和毒性。安全性分析将包含以下：不良事件率(包含所有事件和研究药物相关的事件)、所有严重不良事件(sae)、研究中的死亡、研究药物末次给药30天内的死亡以及由于不良事件而停止研究药物的总结；按最大ctcae5.0级以及与研究药物的关系对实验室不良事件和非实验室不良事件进行分类的清单和频率表。[0361]扩大队列：rp2d的12名患者将有助于确认rp2d的选择。如果在扩大队列期间，超过30％处于初始rp2d的患者经历了dlt，则研究将保持累积(出于非dlt或其它安全性考虑，pi也可以自行决定是否保留累积)。在12名患者的情况下，至少一次将观察到以10％的真实频率发生的任何严重治疗相关的不良事件，其中概率为72％，并且至少一次将观察到真实频率为20％的任何此类ae，其中概率为93％。可以估计dlt率的标准误差为至多14％。[0362]禁止：在开始研究治疗之前的各个时间段，以及在直到记录疾病进展并且患者停止研究治疗为止的研究治疗期间，旨在治疗癌症的任何伴随疗法，无论是卫生当局批准的还是实验性的都是禁止的。这包含但不限于化学疗法、激素疗法、免疫疗法、放射疗法、研究药剂或草药疗法(除非另有说明)。[0363]除非另有说明，否则在研究时以下药物都是禁止的：[0364]●传统草药，因为其使用可能导致意想不到的药物-药物相互作用，这可能引起毒性或混淆对毒性的评估[0365]●地诺单抗；在招募前接受地诺单抗的患者必须愿意并且有资格在研究中接受二膦酸盐来替代[0366]●在首次研究药物之前28天内、治疗期间或阿特朱单抗末次给药后90天内任何活的减毒疫苗(例如，)[0367]●使用类固醇以对用造影剂进行ct扫描禁忌的患者(即，造影剂过敏或肾脏清除受损的患者)进行前驱用药，在此类患者中，应进行胸部的非造影ct扫描以及腹部和骨盆的非造影ct扫描或mri[0368]●已知延长qt间隔和/或与尖端扭转的风险相关的药物。[0369]●cyp450基质(参见附录f)。[0370]●肾毒性化合物。[0371]●华法林。[0372]●可能提高依托泊苷清除率的抗癫痫药物(包含但不限于苯妥英、苯巴比妥、卡马西平和丙戊酸)。[0373]●强p-糖蛋白抑制剂[0374]剂量限制性毒性(dlt)的定义：将使用nci不良事件通用术语标准(ctcae)5.0版以对毒性分等级。根据第5.5节，gcsf在周期1中是不允许的，因为其可能抑制可能以其它方式出现的毒性。如果出现方案偏差，并且患者在周期1确实接受了gcsf，则其dlt将被视为是不可评估的并且将被替换，但其在周期1经历了dlt除外。dlt被定义为在第一治疗周期中发生并且被视为可能、很可能或肯定与研究治疗相关的任何以下不良事件：[0375]●尽管进行最大限度的止吐疗法，仍出现3级或更严重的恶心/呕吐[0376]●任何4级免疫相关的不良事件(irae)[0377]●尽管进行了最大限度的止泻疗法，仍出现3级或更严重的腹泻[0378]●任何≥3级的结肠炎(应排除感染性病因，并且强烈鼓励进行内窥镜检查)[0379]●任何3级或4级非传染性肺炎，不论持续时间[0380]●任何2级肺炎，其在最大限度的支持疗法开始后3天内未消退至≤1级[0381]●任何3级irae，不包括结肠炎或肺炎，其在事件发生后3天内未降级至2级，尽管采用了包含全身性皮质类固醇在内的最佳医疗管理也是如此，或在14天内未降级至≤1级或基线[0382]●同时ast或alt升高至》3xuln并且总胆红素升高至》2xuln[0383]●ast或alt》8xuln或总胆红素》3xuln，即使在无症状的情况下也是如此，除非其与肝转移的明确进展或另一种可明确鉴定的病因有关[0384]●观察到超过5天持续时间的4级嗜中性粒细胞减少、或与任何持续时间的发热或败血症结果相关的3级嗜中性粒细胞减少或持续》7天的3级嗜中性粒细胞减少[0385]●4级血小板减少或伴随临床显著的出血的3级血小板减少或持续》7天的3级血小板减少[0386]●4级贫血[0387]●任何≥3级的ae，但以下列出的排除情况除外：[0388]○持续≤7天的3级疲劳[0389]○3级实验室异常，alt或ast除外，其被视为临床上不显著的并且在72小时内恢复到2级或更低[0390]○3级内分泌紊乱(甲状腺、垂体和/或肾上腺功能不全)，其是在利用或不利用全身性皮质类固醇疗法和/或激素替代疗法的情况下管理的，并且受试者是无症状的[0391]○归因于局部抗肿瘤应答的3级炎症反应(例如，转移性疾病、淋巴结等部位的炎症反应)[0392]○任何ae等级的并发白癜风或脱发[0393]○3级输注相关的反应(首次发生且不存在类固醇预防)，其在适当的临床管理的情况下在6小时内消退[0394]○3级或4级淋巴细胞减少[0395]不良事件的剂量延迟/修改[0396]剂量修改：预期此试验中的大多数治疗相关的毒性将是由卡铂/依托泊苷/阿特朱单抗引起的。骨髓抑制，主要是嗜中性粒细胞减少，将频繁发生；常见的非血液学毒性包含疲劳、恶心、呕吐和粘膜炎。相比之下，预期lb-100耐受性良好；i期中观察到的很少毒性与卡铂、依托泊苷和阿特朱单抗已知的毒性谱重叠。因此，以下一般剂量修改规则将用于lb-100治疗小组的患者：[0397]如果周期的启动由于卡铂/依托泊苷/阿特朱单抗毒性延迟，则lb-100也将延迟以与卡铂/依托泊苷/阿特朱单抗同时开始。[0398]如果阿特朱单抗保留，则lb-100也应该保留，因为其是潜在的免疫调节。[0399]如果毒性是卡铂/依托泊苷/阿特朱单抗的典型并且需要剂量减少，则不应减少lb-100的剂量。[0400]如果毒性具体归因于一种或两种药剂(卡铂、依托泊苷、阿特朱单抗)，则所归因的药剂将是剂量减少的；否则，所有3种药物的剂量应减少。[0401]由于毒性而需要治疗延迟超过28天的患者将停止研究。一个例外是类固醇逐渐减少。如果患者必须逐渐减少用于治疗不良事件的类固醇，则可以保留阿特朱单抗，直到类固醇停止或减少到强的松剂量(prednisonedose)(或剂量当量)≤10mg/天。[0402]卡铂/依托泊苷剂量修改：卡铂和依托泊苷允许两次剂量减少。需要剂量减少的患者不会再升级。如果2次剂量减少发生后再次出现3/4级毒性，则将停止一种或多种令人不适的药剂。如果卡铂、依托泊苷和阿特朱单抗由于毒性必须停止，则lb-100也将停止。由于毒性而需要治疗延迟超过28天的患者将停止研究。卡铂和依托泊苷的剂量减少在表4中示出。[0403]表4：卡铂和依托泊苷的剂量减少[0404]剂量水平卡铂(auc)依托泊苷(mg/m2)起始剂量5.0100x3天-14.575x3天-24.050x3天[0405]血液学毒性：剂量调整将基于在每个周期的第1天(+/-2天)测量的血液计数进行。剂量修改将不急于最低点计数。参见下表5。[0406]表5：卡铂和血液学毒性的剂量调整[0407][0408][0409]a至少每周检查计数，直到anc≥1500/μl并且血小板≥100,000/μl，然后继续第1天给药[0410]b延迟给药，直到感染得到充分治疗，并且血液计数为anc≥1500/μl并且血小板≥100,000/μl[0411]非血液学毒性：如果发生3级或4级非血液学毒性：[0412]●延迟用所有药物进行的治疗[0413]●关于哪种药物或哪些药物产生毒性进行评估[0414]●每周至少一次对患者进行重新评估，直到毒性消退至≤1级[0415]●将一种或多种令人不适的药剂的剂量减少一个剂量水平[0416]●如果毒性是不可逆的或在3周治疗延迟后仍未消退至≤1级，则应将患者从研究中移除[0417]●在任何周期开始前，肌酐清除率(考克罗夫特和高尔特公式)应≥45毫升/分钟。[0418]阿特朱单抗剂量保持：阿特朱单抗将不存在剂量减少，但如果患者经历了需要保持剂量的不良事件，则可以在末次给药后持续至多4周暂停用阿特朱单抗进行治疗。一个例外是类固醇逐渐减少。如果患者必须逐渐减少用于治疗不良事件的类固醇，则可以保留阿特朱单抗，直到类固醇停止或减少到强的松剂量(或剂量当量)≤10mg/天。[0419]阿特朱单抗特有的不良事件的管理：应使用另外的测试，如自身免疫血清学或活检，以确定可能的免疫原性病因。尽管使用免疫调节剂观察到的大多数免疫介导的不良事件是轻微的和自限性的，但这些事件应被尽早识别并及时治疗，以避免潜在的重大并发症。停止阿特朱单抗可能不会具有即时治疗作用，并且在严重的情况下，免疫介导的毒性可能需要使用局部皮质类固醇、全身性皮质类固醇或其它免疫抑制剂进行急性管理。[0420]表6：不良事件[0421][0422][0423][0424][0425][0426][0427][0428][0429]全身性免疫活化：全身性免疫活化是一种罕见病状，其特征在于过度免疫应答。鉴于阿特朱单抗的作用机制，全身性免疫活化被视为是一种潜在的风险。应将全身性免疫活化纳入在不存在替代性病因的情况下在施用阿特朱单抗后出现败血症样综合征的患者的鉴别诊断中，并且初步评估应包含以下：[0430]●cbc与外周血涂片[0431]●pt、ptt、纤维蛋白原和d-二聚体[0432]●铁蛋白[0433]●三酸甘油酯[0434]●ast、alt和总胆红素[0435]●ldh[0436]●完整神经和腹部检查(对肝脾肿大进行评估)[0437]lb-100剂量修改：允许lb-100两次剂量减少。根据研究者的裁定，允许一次再升级。lb-100延迟超过21天的患者必须停止研究疗法。如果归因于lb-100的3/4级毒性发生在2次先前的剂量减少之后，则lb-100将停止。从治疗中获益的患者可以继续使用卡铂/依托泊苷/阿特朱单抗。lb-100的剂量减少在表7中概述。[0438]表7：lb-100剂量水平[0439]剂量水平lb-100剂量-20.50mg/m2-10.83mg/m2开始1.25mg/m2+11.75+22.13+33.10[0440]血液学毒性：在lb-100的情况下可能不频繁地发生骨髓抑制。因此，如果发生3/4级骨髓抑制，则对于第一次发生，卡铂和依托泊苷的剂量将减少，但lb-100将保持不变。对于3/4级骨髓抑制的第二次出现，lb-100将减少。如果发生自身免疫性血细胞减少症，阿特朱单抗将延迟或停止。在i期试验中没有报告明显的不良事件，并且不期望剂量减少或中断。[0441]非血液学毒性：归因于lb-100的非血液学毒性应如表8中所概述的进行管理。[0442]表8：lb-100的剂量调整[0443][0444]*脱发和临床不显著的实验室异常是将被视为临床上不显著的实例[0445]药代动力学研究：根据表9中所示的样品时间表，收集所有患者的血浆以用于lb-100、其主要代谢物茵多杀的药代动力学(pk)测量。当lb-100在依托泊苷之前给与(第1天)以及在其与依托泊苷一起给与(第3天)时，采样时间表允许确定lb-100和茵多杀pk。还将评估扩大mtd队列中的患者的单独的依托泊苷(第2天)的pk以及其与lb-100的组合(第3天)的pk。为了测量lb-100和茵多杀，将5ml静脉血抽吸到寒冷的肝素收集管(钠或锂)中，并且在进行血浆分离之前保持在冰上。将血浆等分(两个等分试样)到含有0.5nnaoh的适当标记的聚丙烯管(1.8-2ml低温瓶)中。对于每1.0ml血浆，要添加等分的0.1ml0.5nnaoh。在运输之前将样品储存在-70℃下。为了测量依托泊苷，在表9中指示的时间时将另外4ml静脉血抽吸到含有edta的收集管中。将管保持在冰上，之后将等离子体分离并等分到适当标记的低温瓶中，并且储存在《-70℃下，以供后续分批分析。[0446]表9：药代动力学样品时间表[0447][0448]*用于依托泊苷pk的样品将仅在招募在扩大mtd队列中的患者中收集。[0449]药代动力学数据分析：血浆pk数据将使用非区室方法和区室方法两者进行分析，以得出相关的二级pk参数。非区室pk方法将用于确定lb-100和其主要代谢物茵多杀的参数(例如cmax、tmaxt1/2、auc0-t和cl)。将使用adapt5软件(加利福尼亚州洛杉矶的南加州大学生物医学模拟资源(uscbiomedicalsimulationsresource,losangelesca))对依托泊苷数据进行区室pk分析，并且将确定每个个体的二级pk参数(例如clsys、vd、t1/2、auc0-∞)。将总结每种药物和代谢物的单独非室区和室区pk参数，并且将评估安全性和功效两者的潜在暴露-应答关系。[0450]结果：第一研究受试者的结果如下。在第2周期后在lb-100的剂量水平1(0.83mg/celllungcancer.)肿瘤学研讨会1992；19(1suppl2):28-36.epub1992/02/01.pubmedpmid:1329220.[0464]12.拉维s(larives),邦巴龙p(bombaronp),雷欧r(riour),富尔内尔p(fournelp),佩罗尔m(perolm),莱纳h(lenah),杜普特c(dussoptc),飞利浦-乔伊特f(philip-joetf),都兰f(tourainef),兰瑟尔h(lecaerh),苏凯pj(souquetpj),70岁以的上小细胞肺癌患者中的卡铂-依托泊苷组合：ii期试验(groupelyon-saintetienned'oncologiet.carboplatin-etoposidecombinationinsmallcelllungcancerpatientsolderthan70years:aphaseiitrial.)肺癌2002；35(1):1-7.epub2001/12/26.pubmedpmid:11750705.[0465]13.佩罗蒂d,耐维尼p,蛋白磷酸酶2a：抗癌疗法的靶标(proteinphosphatase2a:atargetforanticancertherapy.)柳叶刀肿瘤学2013；14(6):e229-38.epub2013/05/04.doi:10.1016/s1470-2045(12)70558-2.pubmedpmid:23639323；pmcid:pmc3913484.[0466]14.洪cs、霍w、张c、杨c、埃尔德jb、庄z,lb100具有强大的化学和放射致敏潜能的pp2a的小分子抑制剂(lb-100,asmallmoleculeinhibitorofpp2awithpotentchemo-andradio-sensitizingpotential)癌症生物学疗法2015；16(6):821-33.epub2015/04/22.doi:10.1080/15384047.2015.1040961.pubmedpmid:25897893；pmcid:pmc4623051.[0467]15.郑v、曼斯菲德as、布莱特f、理查德d、杜瑞威格h、昂格莱德rs、约翰逊f,科瓦奇js.lb-100，作为蛋白磷酸酶2a的抑制剂在患有复发性实体瘤的患者中的安全性、耐受性和初步活性：开放标签、剂量升级、首次人体i期试验临床癌症研究2017；23(13):3277-84.epub2017/01/01.doi:10.1158/1078-0432.ccr-16-2299.pubmedpmid:28039265.[0468]16.卢j,科瓦奇js,约翰逊f,蒋j,霍德思r(hodesr),隆索r(lonserr),庄z.对丝氨酸/苏氨酸磷酸酶pp2a的抑制通过阻断dna损伤诱导的防御机制来增强癌症化学疗法(inhibitionofserine/threoninephosphatasepp2aenhancescancerchemotherapybyblockingdnadamageinduceddefensemechanisms.)美国国家科学院院刊2009；106(28):11697-702。epub2009/07/01.doi:10.1073/pnas.0905930106.pubmedpmid:19564615；pmcid:pmc2710674.[0469]17.王y(wangy),杨r(yangr),谷j(guj),尹x(yinx),金n(jinn),谢s(xies),王y(wangy),常h(changh),钱w(qianw),史j(shij),伊克巴尔k(iqbalk),龚cx(gongcx),程c(chengc),刘f(liuf.)pi3k-akt-gsk-3β与pp2a通路之间的串扰决定了tau过度磷酸化(crosstalkbetweenpi3k-akt-gsk-3betaandpp2apathwaysdeterminestauhyperphosphorylation.)衰老的神经生物学(neurobiolaging.)2015；36(1):188-200.epub2014/09/16.doi:10.1016/j.neurobiolaging.2014.07.035.pubmedpmid:25219467.[0470]18.刘gp,魏w,周x,史hr,刘xh,柴gs,姚xq,张jy,彭cx,胡j,李xc,王q,王jz通过慢病毒shrna干扰使pp2a抑制剂沉默改善tg2576小鼠的神经病变和记忆缺陷分子疗法(molther.)2013；21(12):2247-57.epub2013/08/08.doi:10.1038/mt.2013.189.pubmedpmid:23922015；pmcid:pmc3863796.[0471]19.戈登ik,卢j,格拉夫斯ca,亨顿k,弗雷齐jm,汉森rh,王x,洪cs,候w,费尔德曼mj,池后b,比什顿k,陈xs,唐德尔a,杨c,阿斯科特wt,叶d,海斯jd,隆索rr,康普豪森k,庄z,lb100抑制对蛋白磷酸酶2a的抑制增强胶质母细胞瘤中的辐射诱导的有丝分裂灾难和肿瘤生长延迟分子癌症疗法2015；14(7):1540-7.epub2015/05/06.doi:10.1158/1535-7163.mct-14-0614.pubmedpmid:25939762；pmcid:pmc4497833.[0472]20.朱xn(zhuxn),陈lp(chenlp),白q(baiq),马l(mal),李dc(lidc),张jm,高c(gaoc),雷zn(leizn),张zb,刑xm(xingxm),刘cx(liucx),何zn(hezn),李j(lij),小ym(xiaoym),张ah,曾xw(zengxw),陈w(chenw.)pp2a-ampkα-hsf1轴调节hsp的金属诱导型表达和ros清除(pp2a-ampkalpha-hsf1axisregulatesthemetal-inducibleexpressionofhspsandrosclearance.)细胞信号(cellsignal.)2014；26(4):825-32.epub2014/01/15.doi:10.1016/j.cellsig.2014.01.002.pubmedpmid:24412756.[0473]21.肖g,婵ln,克莱姆l,布拉斯d,陈z,耿h,张qc,爱格加尼热凡a,考斯戈kn,萨达尔t,李j,买尔扎派左t,萨尔加r,厄尔斯特t,霍郝森a,朱玛h,姜x,维恩斯托克dm,格力柏tg,穆尘m,葡萄糖碳利用的b细胞特异性转向揭示了b细胞恶性肿瘤的独特脆弱性细胞2018；173(2):470-84e18.epub2018/03/20.doi:10.1016/j.cell.2018.02.048.pubmedpmid:29551267；pmcid:pmc6284818.[0474]22.庄z、鲁j、隆索r、科瓦奇js,通过全面修饰丝氨酸/苏氨酸磷酸化蛋白质组同时改变细胞周期进程和dna损伤防御来增强癌症化学疗法(enhancementofcancerchemotherapybysimultaneouslyalteringcellcycleprogressionanddna-damagedefensesthroughglobalmodificationoftheserine/threoninephospho-proteome)细胞周期(cellcycle)2009；8(20):3303-6.epub2009/10/07.doi:10.4161/cc.8.20.9689.pubmedpmid:19806030.[0475]23.鲁j(luj),庄z(zhuangz),宋dk(songdk),麦赫塔gu(mehtagu),池后b,穆世林h(mushlinh),帕克dm(parkdm),隆索rr.pp2a抑制剂对胶质瘤中的核受体辅抑制因子通路的影响(theeffectofapp2ainhibitoronthenuclearreceptorcorepressorpathwayinglioma.)神经外科杂志(jneurosurg.)2010；113(2):225-33.epub2009/12/17.doi:10.3171/2009.11.jns091272.pubmedpmid:20001590.[0476]24.马蒂尼奥娃l(martinioval),卢j,蒋j,伯纳多m,隆索r,庄z,帕恰克k(pacakk.)丝氨酸/苏氨酸磷酸化的药理学调节使mpc细胞和小鼠模型中的pheo对常规化学疗法进行高度增敏公共科学图书馆：综合.2011；6(2):e14678.epub2011/02/23.doi:10.1371/journal.pone.0014678.pubmedpmid:21339823；pmcid:pmc3038858.[0477]25.罗森博格je(rosenbergje),霍夫曼-森斯蒂j(hoffman-censitsj),波乐斯t(powlest),范德海登ms(vanderheijdenms),巴拉尔av(balarav),内基a(necchia),道森n(dawsonn),奥唐奈ph(o'donnellph),巴尔曼诺凯安a(balmanoukiana),洛里奥y(lorioty),斯里尼瓦s(srinivass),锐特兹mm(retzmm),格瑞瓦斯p(grivasp),约瑟夫rw(josephrw),加拉斯基md(galskymd),佛莱明mt(flemingmt),彼得里拉克dp(petrylakdp),派利兹-格西亚jl(perez-graciajl),贝尔雷斯ha(burrisha),卡斯特拉诺d(castellanod),卡尼尔c(canilc),贝尔穆特j(bellmuntj),贝久d(bajorind),尼克尔斯d(nicklesd),布尔贡r(bourgonr),弗兰普顿gm(framptongm),崔n(cuin),马瑞尔萨斯s(mariathasans),爱贝躲耶o(abidoyeo),范恩gd(finegd),德雷尔r(dreicerr.)阿特朱单抗在患有局部晚期和转移性尿路上皮癌的在用基于铂的化学疗法治疗后已经进展的患者中：单小组、多中心2期试验(atezolizumabinpatientswithlocallyadvancedandmetastaticurothelialcarcinomawhohaveprogressedfollowingtreatmentwithplatinum-basedchemotherapy:asingle-arm,multicentre,phase2trial.)柳叶刀2016；387(10031):1909-20.epub2016/03/10.doi:10.1016/s0140-6736(16)00561-4.pubmedpmid:26952546；pmcid:pmc5480242.[0478]26.巴拉尔av,加拉斯基md,罗森博格je,波乐斯t,彼得里拉克dp,贝尔穆特j,洛里奥y,内基a,霍夫曼-森斯蒂j,派利兹-格西亚jl,道森na,范德海登ms,德雷尔r,斯里尼瓦s,锐特兹mm,约瑟夫rw,德拉卡基a(drakakia),微沙姆帕亚un(vaishampayanun),斯里达尔ss(sridharss),奎因di(quinndi),杜兰i(durani),沙佛尔dr(shafferdr),艾格勒bj(eiglbj),格瑞瓦斯pd,于ey(yuey),李s(lis),卡戴尔ee(kadelee),(3世),博伊德z(boydz),布尔贡r,海格德ps(hegdeps),马瑞尔萨斯s,托斯特伦a(thastroma),爱贝躲耶oo,范恩gd,贝久df,ims组.阿特朱单抗作为患有局部晚期和转移性尿路上皮癌的无顺铂资格的患者的一线治疗：单小组、多中心2期试验(atezolizumabasfirst-linetreatmentincisplatin-ineligiblepatientswithlocallyadvancedandmetastaticurothelialcarcinoma:asingle-arm,multicentre,phase2trial.)柳叶刀2017；389(10064):67-76.epub2016/12/13.doi:10.1016/s0140-6736(16)32455-2.pubmedpmid:27939400；pmcid:pmc5568632.[0479]27.费伦巴赫尔l(fehrenbacherl),斯派拉a(spiraa),巴林杰m(ballingerm),科万特兹m(kowanetzm),万斯特凯斯特j(vansteenkistej),马济耶尔j(mazieresj),帕克k(parkk),史密斯d(smithd),阿特尔-科尔特斯a(artal-cortesa),莱万斯基c(lewanskic),布莱特f,瓦特坎普d(waterkampd),何p(hep),邹w(zouw),陈ds(chends),易j(yij),桑德勒a,瑞特迈尔a(rittmeyera),ps组.用于患有先前治疗的非小细胞肺癌(poplar)的患者的阿特朱单抗与多西他赛：多中心、开放标签、2期随机化对照试验(atezolizumabversusdocetaxelforpatientswithpreviouslytreatednon-small-celllungcancer(poplar):amulticentre,open-label,phase2randomisedcontrolledtrial.)柳叶刀2016；387(10030):1837-46.epub2016/03/14.doi:10.1016/s0140-6736(16)00587-0.pubmedpmid:26970723.[0480]28.施密特p(schmidp),亚当斯s(adamss),鲁戈hs(rugohs),施瓦尼斯a(schneeweissa),巴里奥斯ch(barriosch),盘田h(iwatah),迪尔拉丝v(dierasv),海格r(heggr),哀姆sa(imsa),肖莱特g(shawwrightg),亨舍尔v(henschelv),莫利内罗l(molinerol),崔sy(chuisy),芬克r(funker),候塞音a,维纳ep(winerep),洛埃s(lois),埃门斯la(emensla),研究者imt.晚期三阴性乳腺癌中的阿特朱单抗和nab-紫杉醇(atezolizumabandnab-paclitaxelinadvancedtriple-negativebreastcancer.)新英格兰医学杂志2018；379(22):2108-21.epub2018/10/23.doi:10.1056/nejmoa1809615.pubmedpmid:30345906.当前第1页12当前第1页12
技术特征：
1.一种治疗患有小细胞肺癌的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的lb-100：或其药学上可接受的盐、两性离子或酯。2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用有效量的一或多种抗癌剂。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述一或多种抗癌剂是同时、单独或依次施用的。4.根据权利要求2至3中任一权利要求所述的方法，其中所述一或多种抗癌剂独立地选自由以下组成的群组：卡铂、阿特朱单抗和依托泊苷。5.根据权利要求2至3中任一权利要求所述的方法，其中所述一或多种抗癌剂为卡铂、阿特朱单抗和依托泊苷。6.根据权利要求2至5中任一权利要求所述的方法，其中所述lb-100是以约0.83mg/m2/天的剂量施用的。7.根据权利要求2至5中任一权利要求所述的方法，其中所述lb-100是以约1.25mg/m2/天的剂量施用的。8.根据权利要求2至5中任一权利要求所述的方法，其中所述lb-100是以约1.75mg/m2/天的剂量施用的。9.根据权利要求2至5中任一权利要求所述的方法，其中所述lb-100是以约2.33mg/m2/天的剂量施用的。10.根据权利要求2至5中任一权利要求所述的方法，其中所述lb-100是以约3.10mg/m2/天的剂量施用的。11.根据权利要求1至10中任一权利要求所述的方法，其中所述lb-100是在21天周期的第1天和第3天施用。12.根据权利要求1至11中任一权利要求所述的方法，其中所述lb-100是静脉内施用的。13.根据权利要求2至12中任一权利要求所述的方法，其中所述一或多种抗癌剂包括卡铂。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述卡铂是以对应于约auc 5的剂量施用的。15.根据权利要求13所述的方法，其中所述卡铂是以实现约auc 5的剂量施用的。16.根据权利要求13所述的方法，其中所述卡铂是以至多约750mg/天的剂量施用的。17.根据权利要求2至16中任一权利要求所述的方法，其中所述卡铂是在21天周期的第1天施用。
18.根据权利要求2至17中任一权利要求所述的方法，其中所述卡铂是在21天周期的第1天施用，持续至少4个周期。19.根据权利要求2至18中任一权利要求所述的方法，其中所述卡铂是静脉内施用的。20.根据权利要求2至19中任一权利要求所述的方法，其中所述卡铂是在30-60分钟内静脉内施用。21.根据权利要求2至20中任一权利要求所述的方法，其中所述一或多种抗癌剂包括阿特朱单抗。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述阿特朱单抗是以约1200mg/天的剂量施用的。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述阿特朱单抗是在21天周期的第1天施用。24.根据权利要求23所述的方法，其中所述阿特朱单抗是在21天周期的第1天施用，持续至少4个周期。25.根据权利要求24所述的方法，其中所述阿特朱单抗是静脉内施用的。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述阿特朱单抗是在30-60分钟内静脉内施用。27.根据权利要求2至26中任一权利要求所述的方法，其中所述一或多种抗癌剂包括依托泊苷。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述依托泊苷是以约100mg/m2/天的剂量施用的。29.根据权利要求28所述的方法，其中所述依托泊苷是在21天周期的第1天、第2天和第3天施用。30.根据权利要求29所述的方法，其中所述依托泊苷是在21天周期的第1天、第2天和第3天施用，持续至少4个周期。31.根据权利要求30所述的方法，其中所述依托泊苷是静脉内施用的。32.根据权利要求31所述的方法，其中所述阿特朱单抗是在60分钟内静脉内施用。33.根据权利要求2至32中任一权利要求所述的方法，其中所述一或多种抗癌剂包括阿特朱单抗、卡铂和依托泊苷中的每一种。34.根据权利要求2至33中任一权利要求所述的方法，其中所述一或多种抗癌剂包括阿特朱单抗、卡铂和依托泊苷中的每一种，并且其中当在同一天以组合的形式依次施用时，施用的顺序包括施用lb-100，然后施用阿特朱单抗，然后施用卡铂，然后施用依托泊苷。35.根据权利要求34所述的方法，其中施用的顺序在不施用所述抗癌剂中的一或多种抗癌剂的情况下维持不变。36.根据权利要求1至35中任一权利要求所述的方法，其中所述小细胞肺癌为广泛期疾病小细胞肺癌(ed-sclc)。37.根据权利要求1至36中任一权利要求所述的方法，其中患者先前未进行针对sclc的全身化学疗法、免疫疗法、生物疗法、激素疗法或研究性疗法。38.根据权利要求1至37中任一权利要求所述的方法，其中患者尚未被诊断出患有nsclc或混合nsclc和sclc。

技术总结
本发明提供了一种治疗患有SCLC的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的PP2A抑制剂以及任选地一或多种抗癌剂。的PP2A抑制剂以及任选地一或多种抗癌剂。


技术研发人员：R
受保护的技术使用者：利克斯特生物技术公司
技术研发日：2021.09.23
技术公布日：2023/9/9