沙棘饼水解产物的美容用途的制作方法

1.本发明涉及沙棘饼水解产物的新颖的美容用途。


背景技术：

2.皮肤附件如头发、睫毛和眉毛的护理涉及整体处理，即直接处理头发纤维或角蛋白纤维，而且还有相应的皮肤区域，包括毛囊。就头发而言，这些毛囊分布在整个头皮上并且负责头发生长。这些毛囊在毛囊下部部分在毛球处含有增殖上皮来源的细胞。
3.此外，对头发纤维的直接护理涉及对其构成蛋白质的处理。例如，角蛋白对城市生活方式、化学卫生产品的使用频率、造型习惯以及还有环境条件即阳光、污染、盐、风、气候条件的变化、一般生活方式以及还有年龄造成的损伤特别敏感。这些蛋白质变性并使皮肤附件、特别是头发不太具有抵抗力，不太柔软，脆弱，而且还更无光泽且具有更多分叉发梢。这些附件失去了其生物力学和表面特性。
4.一种解决方案是提供外源蛋白质来补偿对头发蛋白质的损伤。
5.然而，水解(化学、热或酶促)是必要的过程，以便将蛋白质分解为低分子量，促进其在水中的溶解度并在这种情况下促进其渗透到头发纤维中，使其可用于化妆品配制品。只有低分子量的分子能渗透纤维，特别是受损的头发纤维。这些水解蛋白质有助于改善头发纤维的保湿性、弹性并使头发纤维更柔软、光泽、蓬松和浓密。它们有助于从内部强化头发纤维。
6.由于离子电荷和极性位点(范德华力的相互作用)，高性能水解蛋白质对头发纤维具有实质性特性(与头发角蛋白的弱结合)。它们还可以在头发纤维的表面上形成保护膜。
7.化妆品市场上存在基于水解蛋白质的产品。这些蛋白质是植物或动物来源的。最常见的是来自小麦、蚕丝、角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白、奶和杏仁的水解蛋白质。然而，持续需要在此领域中有效的替代成分。
8.完全出乎意料地，诸位发明人发现沙棘饼的水解产物具有渗透角蛋白纤维、增加其力学特性、以及还有其质构和表面特性的能力。此水解产物已示出能够增加皮肤附件、特别是头发的生长，对抗其损失，增加其抵抗力并减少其断裂，使其更有光泽、更明亮且具有丰盈度。此外，沙棘饼水解产物具有皮肤附件修复特性，如将在以下描述中示出的。
9.根据本发明的水解产物的一个优点是，它是衍生自工业提取残留物的产物，该产物通常不升级，因此该产物的开发属于对生态负责的方法。另一个优点是，它是提供全面护理的成分，因为它对角蛋白纤维，特别是头发，而且还对头皮和毛囊具有影响。此外，根据本发明的水解产物可以容易地在工业规模上生产。最后，酶促水解使能够分馏饼中的蛋白质以回收低分子量肽，正是这些肽能够渗透角蛋白纤维以提供本文所述的美容作用。
10.根据本发明的水解产物来自沙棘植物的饼。此植物(也被称为海鼠李)因其历史用途而已知。因此，在古希腊，它的叶子被用作动物饲料，特别是用于马，以增加它们的皮毛的光泽。希腊人还在治疗上使用浆果来减少疼痛和胃痛，以及用于治疗坏血病。叶提取物还被用于治疗哮喘、胃溃疡、皮肤问题(疤痕、烧伤)和肺部问题。在中国，沙棘的果实用于止咳化
痰、健胃消食、活血化瘀。在中亚，当地人使用海鼠李治疗高血压、以及消化和皮肤疾病。从浆果中提取的油因其抗炎特性而被使用并用于治疗胃溃疡。干燥果实的汤剂用于皮肤问题。
11.此外，化妆品市场上已经存在沙棘提取物。因此，从沙棘籽的超临界co2提取得到的副产物的水性提取物因其对皮肤和黏膜的抗老化特性由本技术人以名称rnage
tm
销售并在专利申请wo 2019/069007中进行了描述。然而，根据本发明的提取物不同于后者，因为它是从籽的超临界co2提取得到的副产物的水解产物。此外，本发明中所述的美容作用是不同的。
12.专利申请cn 105063139和cn 108065411披露了来自沙棘籽的超临界co2提取的残留物的肽水解产物。这些是通过酶促水解获得的水解产物。然而，这两项专利申请都没有披露形成本发明的主题的美容或皮肤病学应用。
13.专利申请cn 108354862描述了组合物，该组合物尤其包含沙棘的油，用于去头屑和舒缓作用。然而，首先这是油而不是水解产物，以及其次本发明中所述的美容作用与所述专利申请的去头屑作用不同。
14.专利申请fr 3031455描述了若干种分子，其可以从沙棘中提取并且旨在尤其是作为修复剂掺入化妆品组合物中，尤其是用于头发。然而，没有提及本发明中所述的确切作用的披露或建议。此外，披露了植物沙棘的提取物而没有进一步描述提取物的类型。
15.专利申请fr 2943255描述了通过超临界co2提取获得的沙棘油的提取物用于刺激α-5-还原酶的活性以便改善头发光泽的损失的用途。然而，这是超临界co2提取产物，不是其副产物，更不用说其水解产物。此外，既没有披露也没有建议本专利申请中所述的美容作用。
16.专利申请wo 2009/125071描述了从超临界co2提取副产物获得的若干种植物提取物，然后使这些副产物经受水-醇提取或尤其是用水和丁二醇的混合物的提取。披露了沙棘果实的提取物。然而，本发明的提取物是不同的，因为它是沙棘副产物的水解产物。所述专利申请也完全没有描述本发明中所述的美容作用并且特别是没有描述对皮肤附件的任何作用。
17.因此，据本技术人所知，没有现有技术披露根据本发明的水解产物的美容或药物用途。所述用途也没有单独或组合地在任何文件中建议。


技术实现要素：

18.因此，第一主题涉及沙棘饼的水解产物用于以下的非治疗性美容用途：用于增加皮肤附件、有利地头发的生长和/或减少其损失；和/或用于保持和/或增加皮肤附件、有利地头发的生物力学特性和/或表面和/或质构特性；和/或用于修复受损的皮肤附件、有利地头发。
19.第二主题涉及水解产物在化妆品组合物中的非治疗性美容用途。
20.第三主题涉及一种非治疗性美容护理方法，该方法包括局部施用根据本发明的水解产物或包含其的化妆品组合物。
21.第四主题涉及一种美容处理方法并且最后的主题涉及用于其皮肤病学或药物用途的根据本发明的水解产物。
22.因此，第一主题涉及沙棘饼的水解产物用于以下的非治疗性美容用途：用于增加皮肤附件、有利地头发的生长和/或减少其损失；和/或用于保持和/或增加皮肤附件、有利地头发的生物力学特性和/或表面和/或质构特性；和/或用于修复受损的皮肤附件、有利地头发。
23.术语“美容用途”意指既不是治疗性的，也不是药物或皮肤病学的用途，即不需要治疗性治疗并且旨在用于健康的皮肤和/或皮肤附件和/或黏膜的用途。术语“健康”是指被该领域的专家、皮肤科医生描述为非病理性的皮肤或皮肤附件或黏膜，即其没有表现出任何感染、炎症、疤痕、皮肤疾病或皮肤病症(如念珠菌病、脓疱病、牛皮癣、湿疹、痤疮或皮炎，尤其是脂溢性皮炎、头皮屑)、或伤口或损伤和/或其他皮肤病和/或脱发和/或秃顶。因此，出于本发明的目的，“受损的”皮肤附件是被该领域的专家认定为非病理性的附件。特别地，受损的皮肤附件是尤其失去其柔软性和/或弹性和/或变形性并因此脱水的附件。“受损的”皮肤附件失去其结构和/或视觉和/或生物力学特性。因此，它们变得无光泽和粗糙，不太具有抵抗力，变得易碎、脆弱、分叉和/或卷曲并且因此具有分叉发梢。此外，它们是粗糙的并且因此不太柔软，难以造型和成型。这种头发表面质量的损失是可见的且难看的。头发也较少反射光线并且因此明显不太有光泽并且不太光亮。头发也更细并且不太浓密。
24.术语“皮肤附件”在本文中意指头发、睫毛、眉毛、体毛(尤其是胡须)和/或指甲。根据本发明，胡须包括小胡子。优选地，相关的皮肤附件是头发。根据本发明的水解产物是局部可接受的成分。术语“局部可接受的”意指适用于局部施用的成分，其对皮肤、特别是头皮或黏膜或皮肤附件是无毒、无刺激的，不会引起过敏或炎症反应，并且不是化学上不稳定的。
25.水解产物可以口服或局部使用。有利地，将其局部使用。术语“局部”意指将成分直接局部施用和/或喷涂到皮肤和/或黏膜和/或皮肤附件、特别是皮肤附件的表面上。根据非常有利的模式，局部途径不包括施用于皮肤，包括头皮和/或黏膜。
26.水解产物可以局部施用于选自以下的身体和/或面部的全部或部分皮肤：头皮、腿、大腿、手臂、上腹部、颈线、颈部、全部或部分面部、前额、颏、唇部、唇部周边、眼睛周边、面部的“t”区域、并且有利地头皮，和/或施用于全部或部分皮肤附件、有利地指甲、头发、体毛(尤其是胡须、睫毛和/或眉毛)，甚至更有利地头发，更优选地头发。
27.因此，术语“皮肤”也意指头皮。
28.因此，本发明的主题涉及沙棘饼的水解产物用于以下的非治疗性美容用途：用于增加皮肤附件、有利地头发的生长和/或减少其损失；和/或用于保持和/或增加皮肤附件、有利地头发的生物力学特性和/或表面和/或质构特性；和/或用于修复受损的皮肤附件、有利地头发。
29.出于本发明的目的，术语“保持和/或增加皮肤附件的生物力学特性”意指保持和/或增加它们的抵抗力和/或弹性和/或变形性、和/或强度、和/或塑性特性(即它们的脆性，特别是它们对拉伸的响应)、和/或它们的柔软性。这些特性可以通过测量它们对拉力的抵抗力来进行体外评估。这些生物力学参数，尤其是头发的生物力学参数，可以响应于拉伸进行评估并且可以例如通过拉力测试(戴亚斯特隆公司(dia stron))测量。测量的参数可以是弹性模量(pa)、断裂伸长率(％)、断裂强度(gmf)、屈服后塑性区域的梯度(gmf/％伸长率)，并且相对于皮肤附件的直径进行归一化。这最后一个参数(梯度)允许就在断裂前测量
研究材料的塑性。该技术使能够获得作为所研究材料的特征伸长率的函数的应力(或力)曲线。已知的是，在皮层结构域中二硫键断裂成自由基后，在被氧化、还原或紫外线照射损伤的头发纤维(皮肤附件)上可以观察到断裂伸长率的增加和屈服后梯度的降低。
30.在本发明的一个实施例中，“保持和/或增加皮肤附件的生物力学特性”意指减少糖基化产物(晚期糖基化终产物或age)，这些产物尤其在时间诱导或光诱导的老化过程中出现，但也响应于环境条件，与氧化性化学或物理试剂接触而每天出现。这些糖基化产物降低了附件的生物力学特性。因此，在一个实施例中，根据本发明的水解产物是处于对于“保持和/或增加皮肤附件的生物力学特性”有效的量，此时在作为催化剂的铁和作为氧化剂的过氧化氢的存在下，并且在根据本发明的水解产物的存在下，在作为标记蛋白的白蛋白氧化后测量的糖基化产物的百分比相对于在相同条件下但在没有提取物的情况下检测到的糖基化产物的百分比降低了至少20％、有利地降低了至少25％并且更有利地降低了至少50％。有利地，皮肤附件是头发。更有利地，这是在如根据实例1a)制备的水解产物的存在下和在实例3a)中所述的条件下检测到的糖基化产物的减少(表3)。
31.在本发明的一个替代实施例中，“保持和/或增加皮肤附件的生物力学特性”意指由于在作为氧化催化剂的过氧化氢和铁的存在下白蛋白氧化，在根据本发明的水解产物的存在下测量的色氨酸的降解相对于在不存在根据本发明的水解产物的情况下测量的色氨酸降解的百分比减少了至少30％、有利地减少了至少40％并且更有利地减少了至少95％。有利地，皮肤附件是头发。更有利地，它是如在实例3b)中所述的条件下，根据实例1a)制备的水解产物(表4)。
32.在本发明的另一个替代实施例中，“保持和/或增加皮肤附件的生物力学特性”意指在根据本发明的水解产物的存在下，在白蛋白氧化后，在铁和过氧化氢的存在下检测到的二酪氨酸的形成减少了至少35％、优选减少了至少55％。在有利的实施例中，皮肤附件是头发。更有利地，水解产物是如在实例3c)中所述的条件下，根据实例1a)制备的水解产物(表5)。
33.在本发明的又另一个替代实施例中，“保持和/或增加皮肤附件的生物力学特性”意指在根据本发明的水解产物的存在下，在过氧化氢的存在下在白蛋白氧化后，在铁的存在下检测到的戊糖素的形成减少了至少35％、优选减少了至少60％。在有利的实施例中，皮肤附件是头发。更有利地，水解产物是如在实例3d)中所述的条件下，根据实例1a)制备的水解产物(表6)。
34.在本发明的又另一个实施例中，“保持和/或增加皮肤附件的生物力学特性”意指在根据本发明的水解产物的存在下，在铜和脂蛋白的存在下，席夫碱(糖基化中间体)的形成与在没有水解产物的相同条件下测量的所述希夫碱的量相比减少了至少11％、有利地减少了至少18％、非常有利地减少了至少93％。在有利的实施例中，皮肤附件是头发。更有利地，水解产物是如在实例3d)中所述的条件下，根据实例1a)制备的水解产物(表7)。
35.因此，根据本发明的水解产物是有效的并且可以用于增加皮肤附件的抵抗力、弹性、柔软性、强度和/或塑性，并且优选地头发的那些，并且因此能够减少它们的断裂。
36.术语“保持和/或增加皮肤附件、有利地头发的表面和/或质构特性”还意指使所述皮肤附件更光滑和/或更柔软和/或不太粗糙并且因此在视觉上更有光泽和/或光亮并且因此易于解缠结和/或易于造型和/或易于成型。这些特性可以通过成像技术进行评估，例如
通过视频显微镜或电子显微镜，或通过对头发绺进行感官测试(由受过训练的外部志愿者进行以确定其视觉或触觉感觉)，或通过由专家(美发师)进行的评估测试或消费者问卷的自我评估。产品在其配方中的有效性是根据头发的可感知视觉或触觉质量标准进行评估的。
37.此外，术语“保持和/或增加皮肤附件的生长”意指保持和/或增加毛囊的乳头的成纤维细胞中的dna的量。在一个实施例中，这是指与在不存在水解产物的情况下在非敏化成纤维细胞上测量的dna的量相比，在根据本发明的水解产物的存在下在毛乳头的成纤维细胞中测量的至少20％、有利地至少30％并且更有利地至少40％的dna的量的增加。甚至更有利地，根据本发明的水解产物是在如实例4中所列的测量条件下，在实例1a)中所述的水解产物(表8)。
38.在本发明的一个替代实施例中，术语“保持和/或增加皮肤附件的生长”意指增加毛囊的乳头的成纤维细胞中的atp的量。在一个实施例中，这意指与在没有水解产物的情况下测量的atp的量相比，在根据本发明的水解产物的存在下在毛乳头的成纤维细胞中测量的atp的量增加了至少10％、优选地增加了至少15％并且甚至更优选地增加了至少40％。甚至更有利地，根据本发明的水解产物是在如实例4中所列的测量条件下，在实例1a)中所述的水解产物(表9)。
39.在本发明的又另一个替代实施例中，“保持和/或增加皮肤附件的生长”意指保持和/或增加所述附件的毛囊的乳头中的成纤维细胞的合成。在本发明的一个实施例中，这意指与在没有水解产物的情况下测量的成纤维细胞的数量相比，在根据本发明的水解产物的存在下，乳头中的成纤维细胞的数量增加了至少10％、优选地增加了至少20％、更优选地增加了至少25％。有利地，这是在毛囊的乳头中测量的成纤维细胞的数量的增加。更有利地，这种增加是在根据实例1a)制备的水解产物的存在下，在实例4中所述的条件下测量的(表10)。
40.水解产物对增加皮肤附件、特别是头发的生长的作用也可以在体外进行评估。因此，在本发明的又另一个替代实施例中，术语“增加皮肤附件的生长”意指在根据本发明的水解产物的存在下，有利地在使角蛋白纤维敏化并减缓其伸长的试剂的存在下，至少5％、有利地至少10％的所述纤维伸长率(与用所述试剂敏化但在没有水解产物的情况下的对照角蛋白纤维的伸长率相比)。有利地，这涉及头发。非常有利地，敏化剂是辣椒素。更有利地，沙棘饼的水解产物是如在实例5中所列的条件下，在实例1a)中所述制备的水解产物。
41.此外，术语“减少皮肤附件的损失”意指当毛囊的乳头的成纤维细胞用专用试剂敏化时，增加它们中的dna的量。因此，有利地，与在用辣椒素敏化且在没有水解产物的情况下的相同成纤维细胞中测量的dna的量相比，在用辣椒素敏化且在根据本发明的水解产物的存在下的成纤维细胞中测量的dna的量的至少25％、有利地至少50％并且非常有利地至少60％的增加。在本发明的特别有利的实施例中，这涉及毛囊的乳头中测量的dna的量的增加。更有利地，这种增加是在根据实例1a)制备的水解产物的存在下，在实例4中所述的条件下测量的(表8)。
42.在本发明的替代模式中，“减少皮肤附件的损失”意指在辣椒素和根据本发明的水解产物的存在下，用辣椒素敏化的乳头成纤维细胞的数量与用辣椒素敏化且在没有水解产物的情况下的成纤维细胞的数量相比增加了至少20％、优选地增加了至少30％、更优选地
增加了至少50％。在本发明的特别有利的实施例中，这是在毛囊的乳头中测量的成纤维细胞的数量的增加。更有利地，这种增加是在根据实例1a)制备的水解产物的存在下，在实例4中所述的条件下测量的(表10)。
43.在本发明的又另一个替代实施例中，“减少皮肤附件的损失”意指优选地当毛囊的乳头的成纤维细胞用辣椒素敏化时，增加它们中的atp的量。在有利的实施例中，这意指与在没有水解产物的情况下用辣椒素敏化的相同成纤维细胞中测量的atp的量相比，在用辣椒素敏化且在根据本发明的水解产物的存在下的成纤维细胞中测量的至少100％、优选地至少130％的在根据本发明的水解产物的存在下，在有利地经受用辣椒素敏化的毛乳头的成纤维细胞中测量的atp的量的增加。在本发明的特别有利的实施例中，这涉及毛囊的乳头中测量的atp的量的增加。更有利地，这种增加是在根据实例1a)制备的水解产物的存在下，在实例4中所述的条件下测量的(表9)。
44.根据本发明的水解产物的增加皮肤附件、特别是头发的生长，以及还有增加生物力学和/或表面和/或质构特性的特性使其成为用于改善皮肤附件、并且特别是头发的丰盈度、颜色、光泽和亮度的活性成分。
45.此外，根据本发明的水解产物对皮肤附件、特别是头发的生物力学特性的有效性可以通过各种测试来证明，包括对头发的抗拉强度测试(戴亚斯特隆公司)、疲劳测试、或反复造型测试，使能够评估其断裂。还可以量化具有分叉发梢的头发纤维。此外，这些生物力学特性可以通过测量干发或湿发所需的造型力进行评估。
46.此外，可以通过直接测量水解产物在皮肤附件中的分布来评估水解产物的渗透。有利地，通过各种成像和显微镜法技术研究水解产物在头发上的分布。更有利地，可以使用傅立叶变换红外光谱法(ftir)。因此，在本发明的有利的实施例中，在将根据本发明的水解产物施用于被氧化剂损伤的头发之后，在已经横向切割之后，通过ftir对头发进行研究，与在没有施用水解产物的情况下被相同的氧化剂损伤的相同头发或未损伤的头发相比。然后将水解产物的振动曲线与切口的振动曲线进行比较以评估产物在头发中的分布。更有利地，氧化剂是过氧化氢。
47.此外，术语“修复受损的皮肤附件”意指根据本发明的水解产物对因以下受到损伤的皮肤附件的修复作用：营养缺乏、选自被称为pm2.5和pm10的细颗粒物的污染物、金属例如铜或铁、重金属、气候和/或环境条件如风、雨、温度和湿度的突然变化、冷、热、uv、海盐、来自游泳池的氯和其他物理或化学试剂(包括过氧化氢，特别是存在于某些洗发剂、化妆品产品、染发剂、漂白和烫发产品、指甲油、溶剂和家用产品中)、力学侵蚀如刷洗、来自吹风机和直发器的热量，例如，而且还有内在和/或时间诱导的老化。后者确实也是造成皮肤附件的结构和/或功能质量损失的原因，包括水分损失，特别是退化的睫毛、眉毛和头发的损失。
48.出于本发明的目的，术语“修复皮肤附件”意指至少部分地改善皮肤附件、优选地头发的结构和/或视觉特性和/或生物力学特性。当皮肤附件暴露于环境、化学、生物和/或力学应力时，优选地评估这种修复。
49.环境应力尤其包括烟雾、污染物、温度(尤其是热和冷及其突然变化)、水含量(尤其是湿度或干燥度)、太阳辐射(尤其是可见光谱、uv和/或伽马射线)、雨、风、灰尘和海盐。
50.化学应力包括刺激性家用产品、来自游泳池的氯、刺激性化妆品产品如着色和漂白产品、指甲油和/或卸妆剂、溶剂和化妆品。
51.对头发的化学应力特别包括侵蚀性洗发剂和头发护理和/或处理产品，尤其是用于造型或成型如拉直和/或烫发，和/或用于染色和/或漂白。
52.力学应力尤其包括摩擦如刷洗和/或磨擦织物(耳朵、衣服)和/或颗粒物如灰尘和/或沙子，用吹风机和直发器加热，和/或造型，尤其是暴露于拉力、拉伸力和/或扭转力。
53.根据本发明的水解产物作为皮肤附件、有利地头发，和/或皮肤、有利地头皮，和/或黏膜的抗老化成分、通过减少老化的负面影响也是有效的。
54.因此，在本发明的一个实施例中，恢复作用可以根据本领域中的现有技术进行评估。用于测量修复作用的常规方法使能够测量被评估的产品恢复受损的皮肤附件、优选地受损的头发的视觉、结构和/或功能状态的能力，该状态与未受损的皮肤附件、优选地未受损的头发的状态可比较。它们被施用于受损的皮肤附件、优选地受损的头发，并且修复作用是通过与未受损的皮肤附件、优选地未受损的头发进行比较测量的。有利地，修复作用是对在体外被氧化剂(其诱导附件的蛋白质变性)损伤的皮肤附件的修复作用。有利地，它是水解产物对头发的修复作用并且氧化剂更优选地是过氧化氢。更有利地，这种蛋白质变性通过在实例6中所述的条件下使用差示焓分析仪(dsc q100，ta仪器公司)通过差示扫描量热法(wortmann和deutz,appl.polym.sci.[应用聚合物科学],48,137-150(1993))测量蛋白质变性温度(℃)进行评估。因此，根据本发明的水解产物是处于对于修复皮肤附件、优选地头发有效的量，此时受损的附件的修复指数相对于“健康的”附件(即尚未经受用过氧化氢诱导的氧化应力的附件)为至少20％、优选地至少30％。有利地，这涉及在如根据实例1a)制备的水解产物的存在下，在实例6中所述的条件下测量修复指数。
[0055]
为了在体内评估这种对皮肤附件、有利地头发的修复作用，可以使用选自视频显微镜法、共聚焦显微镜法、ftir或拉曼显微镜法、x射线和电子显微镜法的若干种方法，其目的尤其是观察角质层(皮肤附件的角蛋白纤维的保护包膜)的状态和/或质量，通过将分离的鳞片作为表面损伤的标志可视化和量化。可以实施用于评估皮肤附件、特别是头发的形态的物理表面量化方法，如原子力显微镜法或白光干涉轮廓测定法，用于评估化学(xps)、电荷(流动电势)或能量(反相气相色谱法)。
[0056]
为了评估根据本发明的水解产物对皮肤附件、特别是头发的内部特性的修复作用，可以使用量热法(dsc)。
[0057]
根据本发明的水解产物是通过酶促或化学水解从沙棘籽的超临界co2提取得到的副产物，即来自油的副产物，或在压榨所述籽后获得的副产物获得的水解产物。出于本发明的目的，籽对应于沙棘的不含果肉部分(也称为果皮)的浆果(或果实)。超临界二氧化碳提取是本领域技术人员熟悉的技术，该技术允许分离要提取的化合物的油性级分，所以其可以用于各种应用中。出于本发明的目的，这种提取的残留物称为“副产物”并且含有未通过所述技术提取的所有化合物。因此，术语“副产物”意指在油的提取后获得的残留物，也称为饼。术语“饼”将在以下描述中使用。有利地，因此，它是沙棘籽的脱脂部分。优选地，它是从沙棘籽的超临界co2提取得到的副产物的酶促或化学水解产物，更优选其酶促水解产物。更优选地，副产物不含任何油。
[0058]
酶促水解可以在本领域技术人员已知的任何蛋白酶的存在下，并且有利地在动物来源的酶(选自胃蛋白酶、胰腺来源的酶如胰蛋白酶或糜蛋白酶，并且优选胰蛋白酶)、植物来源的酶(选自木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶或猕猴桃蛋白酶，优选木瓜蛋白
酶)、或细菌来源的酶(选自来自以名称销售的地衣芽孢杆菌菌株或来自菌株枯草芽孢杆菌的酶，优选)的存在下进行。在本发明的特别有利的实施例中，所使用的酶是
[0059]
水解可以在3与9之间的ph下、并且有利地在4与8.5之间的ph下、非常有利地在8.5的ph下进行，取决于酶的最佳ph。水解可以在从40℃至65℃的温度下、有利地从50℃至60℃并且非常有利地在55℃下进行。它在1小时至3小时的时间段内并且优选地在2小时的时间段内进行。
[0060]
然后通过有利地在从80℃至100℃的温度下并且非常有利地在90℃的温度下加热持续从5分钟至30分钟的时间段、优选地持续10分钟的时间段使所使用的酶失活。酶的失活在5与8之间的ph下，优选地在ph 6.5下发生。
[0061]
然后将获得的水解产物离心并通过连续过滤至孔隙率为0.22μm纯化。
[0062]
有利地，在酶促水解步骤之前，首先从饼中提取蛋白质。在这种情况下，它们在7.5与10之间的ph下、有利地在8与9之间的ph下，非常有利地在9.0的ph下提取30分钟至2小时的时间段，优选地提取1小时的时间段。
[0063]
用于蛋白质提取和水解的饼的重量的量是相对于溶剂和饼的总重量按重量计在5％与20％之间，有利地在5％与15％之间，更有利地其是10％。
[0064]
用于蛋白质提取的溶剂选自水、如专利申请fr 3061416中所述的作为溶剂的椰子水、或如专利申请fr 3069450中所述的包含相对于溶剂的总重量按重量计至少50％的至少一种c
6-c
16
二烷基碳酸酯(包括c
7-c
10
、有利地c8二烷基碳酸酯，例如碳酸二辛酯或碳酸二乙基己酯)的溶剂。有利地，所使用的溶剂是作为唯一溶剂的水。
[0065]
所述蛋白质提取可以在从4℃至300℃、有利地从4℃至100℃、更有利地从15℃至80℃、非常有利地从15℃至30℃的温度下(包括室温，即在20℃的温度下)进行。在本发明的特别有利的实施例中，蛋白质提取在室温下进行。
[0066]
在替代实施例中，提取在亚临界条件下进行。
[0067]
术语“在亚临界条件下提取”意指在水的存在下、在高于100℃的温度条件和低于22.1mpa(221巴)的压力条件下提取，使得水依然呈液态，但具有的粘度和表面张力低于在室温下水的粘度和表面张力，增加水的介电常数。因此，提取压力将在10mpa(100巴)与25mpa(250巴)之间、优选在15与22.1mpa(150与221巴)之间。
[0068]
因此，在亚临界条件下，提取在范围为从100℃至300℃、有利地从120℃至250℃、更有利地在140℃与200℃之间的温度下在水中进行。提取可以在单一给定温度下或在连续升高的温度下进行。在本发明的一个有利的实施例中，提取将在160℃的单一温度下进行。在替代实施例中，它将根据在100℃与200℃之间三个升高的温度的梯度(如120℃、140℃然后160℃，或110℃、130℃然后150℃或另外120℃、145℃然后170℃)进行。
[0069]
在本发明的特别有利的实施例中，水解产物通过酶促消化如下获得：在室温下，在ph 12下，从相对于饼和作为溶剂的水的总重量按重量计10％的量的饼中，在一小时的时间段内提取蛋白质。使如此提取的蛋白质在55℃的温度和ph 8.5下，在相对于和蛋白质的总体积5％体积浓度的的存在下经受水解持续2小时的时间段。通过在90℃的温度和ph 6.5下加热20分钟的时间段使酶失活。然后将混合物在如实例1a)中所
述的条件下冷却、离心并过滤(0.22μm)。
[0070]
可替代地，在室温下，即在20℃的温度下，在ph 8.5下，使用相对于饼和作为溶剂的水的总重量按重量计10％的量的饼，在一小时的时间段内提取饼的蛋白质。使如此提取的蛋白质在55℃的温度和ph 8.5下，在相对于和蛋白质的总体积5％体积浓度的的存在下经受水解持续2小时的时间段。通过在90℃的温度和ph 6.5下加热20分钟的时间段使酶失活。然后将混合物在实例1b)中所述的条件下冷却、离心并过滤(0.22μm)。
[0071]
此外可替代地，在室温下，即在20℃的温度下，在ph 12下，使用相对于饼和作为溶剂的水的总重量按重量计10％的量的饼，在一小时的时间段内提取饼的蛋白质。使如此提取的蛋白质在55℃的温度和ph 8.5下，在相对于木瓜蛋白酶和蛋白质的总体积5％体积浓度的木瓜蛋白酶的存在下在2小时的时间段内经受水解。通过在90℃的温度和ph 6.5下加热20分钟的时间段使木瓜蛋白酶失活。然后将混合物在如实例1c)中所述的条件下冷却、离心并过滤(0.22μm)。
[0072]
因此，根据本发明的水解产物包含按重量计1％至20％、有利地按重量计2％至10％(包括5％)的干物质含量，15g/l至35g/l水解产物、有利地18.8g/l水解产物的总蛋白质含量，以及还有在15％与40％之间、有利地18.25％的百分比的分子量为从5千道尔顿(da)至30kda的肽，在40％与85％之间、有利地72.6％的百分比的分子量小于5kda的肽(实例2)。有利地，水解产物包含按重量计至少3％、特别是按重量计至少3.5％、更特别是按重量计3.44％、非常有利地按重量计3.84％的干物质含量。在甚至更有利的模式中，水解产物包含按重量计5％的干物质含量。
[0073]
非常有利地，水解产物包含18.25％的百分比的分子量为从5kda至30kda的肽和72.6％的百分比的分子量小于5kda的肽。
[0074]
此外非常有利地，根据本发明的水解产物不含没食子酸或任何可水解为没食子酸的聚合物、或六羟基联苯甲酸或任何可水解为六羟基联苯甲酸的聚合物、或鞣花酸或任何可水解为鞣花酸的聚合物、或没食子鞣质或鞣花鞣质。更有利地，水解产物也不含任何提及的化合物的衍生物或其任何盐，特别是如专利申请fr 031455中所述的。
[0075]
在另一个有利的实施例中，根据本发明的水解产物不含l-白雀木醇，也不含如wo 2009/125071中所述的其他甲基肌醇和/或肌醇。特别地，根据本发明的水解产物不含杨梅素、槲皮素、山柰素或异鼠李素。
[0076]
因此，水解产物，特别是如实例1a)至1c)中制备的水解产物呈液体形式。任选地，水解产物然后可以例如通过冷冻干燥或通过在麦芽糊精的存在下喷雾进行干燥。水解产物然后呈粉末形式。
[0077]
在这种情况下，根据本发明的水解产物，特别是在实例1a)至1c)中所述的条件下获得的水解产物在相对于所获得的粉末的总重量在20％与90％之间、优选地在40％与80％之间、更优选地从70％至80％的重量浓度的麦芽糊精的存在下雾化。
[0078]
根据本发明的水解产物可以单独使用或包含在化妆品组合物中。
[0079]
当其以化妆品或皮肤病学成分的形式单独使用时，将其优选溶解在含有甘油的水溶液中，有利地以相对于包含水解产物的水溶液的总重量按重量计从60％至90％、更有利地从70％至85％的浓度、非常有利地以80％的浓度存在。
[0080]
在本发明的一个替代实施例中，水解产物将溶解和/或稀释在溶剂、尤其是极性溶剂(如水、醇、多元醇、二醇(如戊二醇和/或丁二醇和/或丙二醇和/或己二醇和/或辛二醇)、或其混合物(优选水-二醇混合物，更优选含有选自己二醇、丙二醇、辛二醇及其任何混合物的二醇))中。有利地，将所获得的水解产物稀释和/或溶解在水溶液中，该水溶液含有己二醇，特别是含有相对于化妆品成分的总重量按重量计在0.1％与10％之间的己二醇、优选地按重量计在0.5％与5％之间的己二醇。有利地，将所获得的水解产物稀释和/或溶解在水溶液中，该水溶液含有辛二醇，特别是含有相对于包含水解产物的水溶液的总重量按重量计在0.01％与5％之间的辛二醇、优选地按重量计在0.1％与1％之间的辛二醇。可替代地，根据本发明的水解产物溶解在其中的溶液包含丙二醇和辛二醇。
[0081]
特别地，根据本发明的水解产物溶解在其中的水溶液包含黄原胶，特别是相对于水溶液的总重量按重量计在0.01％与5％之间的黄原胶，更特别是相对于包含水解产物的水溶液的总重量按重量计在0.1％与1％之间的黄原胶。
[0082]
有利地，根据本发明的水解产物溶解在其中的溶液包含己二醇、辛二醇和黄原胶。
[0083]
在本发明的替代实施例中，将提取物溶解在以名称geogard
tm
销售的包含苯甲酸钠和葡萄糖酸内酯的混合物的溶液中。
[0084]
水解产物可以掺入包含至少一种化妆品上可接受的赋形剂的化妆品组合物中。出于本发明的目的，术语“化妆品上可接受的”赋形剂意指局部可接受的化合物和/或溶剂，也就是说在与皮肤、尤其是头皮接触时不引起过度的炎症和过敏反应、无毒、不是不稳定的化合物和/或溶剂，或其等同物。
[0085]
出于本发明的目的，术语“化妆品组合物”意指非治疗性组合物，也就是说旨在用于预防和/或护理被皮肤科医生称为“正常的”(也就是说非病理性的)皮肤、尤其是头皮和/或皮肤附件的组合物。术语“正常的”皮肤或头皮或皮肤附件在本文中旨在意指如先前定义的健康的皮肤或头皮或皮肤附件。
[0086]
在本发明的优选的实施例中，根据本发明的水解产物以相对于组合物的总重量按重量计在1
×
10-4
％至10％之间、优选地按重量计从1
×
10-4
％至5％、更有利地按重量计从1
×
10-3
％至3％、更优选地按重量计从0.001％至0.1％的含量存在于化妆品组合物中。
[0087]
因此，组合物可用于增加皮肤附件、有利地头发的生长和/或减少其损失；和/或用于保持和/或增加皮肤附件、有利地头发的生物力学特性和/或表面和/或质构特性；和/或用于修复受损的皮肤附件、有利地头发。
[0088]
根据本发明的化妆品组合物可以呈常规用于局部施用于皮肤或头皮和/或皮肤附件、优选地头皮和/或皮肤附件的呈现形式，如液体或固体形式，或者甚至呈加压液体的形式。它们可以以水性或油性溶液、乳膏或水性凝胶或油性凝胶的形式配制，尤其是在罐或管中，尤其是沐浴露、洗发剂、护发素、乳剂、油、乳液、水凝胶、微乳液或纳米乳液(尤其是水包油或油包水或多重或基于硅酮的乳液)、精华液、洗剂(尤其是在玻璃或塑料瓶或量瓶或气雾器或喷雾器、小瓶中)、液体皂、糊剂、皮肤病学棒、软膏、泡沫、面膜、喷发定型剂、贴剂、指甲油、无水产品(其优选地是液体、糊状或固体，例如呈棍形式，尤其是呈棒形式，或呈粉末形式)。它可以是特别用于睫毛或眉毛的化妆品产品如睫毛膏或笔或卸妆产品。特别地，化妆品组合物选自由以下组成的组：精华液、洗剂、乳膏、洗发剂、护发素、油、乳剂、软膏、糊剂、泡沫、乳液、水凝胶、沐浴露、面膜、喷发定型剂、喷剂、蜡、睫毛膏、化妆笔或指甲油，有利
地呈洗发剂、护发素或洗剂的形式。
[0089]
优选地，水解产物适合于配制“中性和温和的”组合物，该组合物不破坏角蛋白纤维，尤其是头发纤维，以及皮肤，尤其是头皮。水解产物也适合用于具有表面活性剂的阳离子配制品。
[0090]
根据本发明的组合物可以含有任何合适的溶剂和/或任何合适的媒介物和/或任何合适的赋形剂，任选地与其他关注的化合物组合。它们可以尤其含有化妆品上可接受的赋形剂，其选自表面活性剂、防腐剂、缓冲剂、溶胀剂、螯合剂、杀生物剂、变性剂、遮光剂、ph调节剂、还原剂、稳定剂、乳化剂、增稠剂、胶凝剂、成膜聚合物、溶剂、填充剂、杀细菌剂、气味吸收剂、去除油光剂、调理剂、质构剂、光泽剂、颜料、着色剂、香料、化学或矿物防晒剂、微量元素和精油。本发明也涵盖这些组合。ctfa cosmetic ingredient handbook[化妆品成分手册]，第二版(1992)中描述了在化妆品行业常用的多种化妆品成分，其特别适合于在头皮上局部使用。
[0091]
化妆品组合物可以含有具有与根据本发明的水解产物的特性相同的特性并且诱导与所述水解产物可能协同或可能不协同的作用的其他化妆品试剂，或者可以含有具有互补作用的化妆品试剂。作为抗脱发活性剂，将提及以下项的组合：磺基肽，氨基酸，氨基糖，b族维生素，锌和由本技术人以名称trichogen
tm
ls 8960销售的人参和五月牛蒡(artium majus)的提取物，或头发保护剂，如由本技术人以名称litchiderm
tm
销售的荔枝果皮的提取物，或舒缓和止痒活性剂，如由本技术人以名称phytosoothe
tm
ls9766销售的油菜籽植物甾醇。
[0092]
其他活性剂可以存在于组合物中，如尤其是用于头发护理的作为抗氧化活性剂的以名称dn-age
tm
销售的翅荚决明叶提取物、作为去糖化剂的以名称collrepair
tm
销售的丹参提取物和烟酰胺的组合，或提升皮肤以及因此头皮的紧致的活性剂，如以名称dermican
tm
销售的合成四肽、以名称linefactor
tm
销售的黄葵提取物、以名称proteasyl
tm
销售的纯化豌豆提取物、以名称elestan
tm
销售的多脉铁线子(manilkara multinervis)提取物、以名称collalift
tm
18销售的非洲楝提取物、由本技术人以名称argassential
tm
销售的摩洛哥坚果果肉提取物、以名称sqisandryl
tm
销售的五味子提取物、以名称eperuline
tm
销售的镰型木荚苏木提取物、或由本技术人销售的以名称mat-xs
tm
bright销售的猫须草(orthosiphon staminus)提取物。这些活性剂的组合尤其能够增强毛囊并且减少脱发。本发明的水解产物也可以与由本技术人以名称rambuvital
tm
销售的植物红毛丹的籽提取物组合，用于其头发保护特性，尤其是针对污染物。
[0093]
本发明的第三主题涉及一种非治疗性美容护理方法，该方法包括局部施用根据本发明的水解产物或包含其的化妆品组合物，用于增加皮肤附件、有利地头发的生长和/或减少其损失；用于保持和/或增加皮肤附件、有利地头发的生物力学特性和/或表面和/或质构特性；和/或用于修复受损的皮肤附件、有利地头发。
[0094]
在本发明的有利的实施例中，美容护理方法由以下组成：将根据本发明的水解产物或包含其的化妆品组合物局部施用于选自以下的身体和/或面部的全部或部分皮肤：头皮、腿、大腿、手臂、上腹部、颈线、颈部、全部或部分面部、前额、颏、唇部、唇部周边、眼睛周边、面部的“t”区域、并且有利地头皮，和/或全部或部分皮肤附件、有利地指甲、头发、体毛(尤其是胡须、睫毛和/或眉毛)，甚至更有利地头发，更优选地头发。
[0095]
因此，美容护理方法使能够改善皮肤附件、有利地头发的颜色和/或光泽和/或亮度和/或丰盈度。
[0096]
又另一主题涉及一种美容处理方法，该方法用于增加皮肤附件、有利地头发的生长和/或减少其损失；和/或用于保持和/或增加皮肤附件、有利地头发的生物力学和/或表面和/或质构特性；和/或用于修复受损的皮肤附件、有利地头发，并且包括以下步骤：
[0097]-确认不患有需要治疗性治疗的病理学病状、特别是皮肤病理学病状的专门人群，其希望和/或需要施用沙棘的水解产物或包含其的化妆品组合物；
[0098]-确认需要处理的身体的健康区域和/或健康皮肤，包括健康头皮和/或健康皮肤附件；
[0099]-局部施用根据本发明的水解产物或包含其的组合物，在这种情况下以相对于组合物的总重量按重量计在1
×
10-4
％与10％之间、优选地按重量计从1
×
10-4
％至5％、更有利地按重量计从1
×
10-3
％至3％、甚至更优选地按重量计从0.001％至0.1％的含量。
[0100]
最后的主题涉及单独或在皮肤病学或药物组合物(其包含至少一种皮肤病学或药学上可接受的赋形剂)中用于治疗脱发和/或秃顶的沙棘饼的水解产物。在本发明的有利的实施例中，水解产物如本发明中所述并且以相对于组合物的总重量按重量计在1
×
10-4
％至10％之间、优选地按重量计从1
×
10-4
％至5％、更有利地按重量计从1
×
10-3
％至3％、更优选地按重量计从0.001％至0.1％的含量存在于皮肤病学或药物组合物中。
[0101]
实例构成本发明的组成部分，并且从以其整体(包括实例)考虑的说明书来看，相对于现有技术显得新颖的任一特征构成本发明的组成部分。因此，每个实例具有通用范围。
[0102]
除非另有说明，否则温度以摄氏度表示并且压力为大气压。
[0103]
实例
[0104]
实例1：用于制备饼水解产物的各种方法
[0105]
实例1a)：在室温下，即在20℃的温度下，在ph 12下，使用相对于饼和作为溶剂的水的总重量按重量计10％的量的饼，在1小时的时间段内提取饼蛋白质。使如此提取的蛋白质在55℃的温度和ph 8.5下经受水解持续2小时的时间段，其中相对于碱性蛋白酶和蛋白质的总体积，呈液体形式的碱性蛋白酶的体积浓度为5％。通过在90℃的温度和ph6.5下加热20分钟的时间段使酶失活。然后将混合物冷却、离心并过滤(0.22μm)。
[0106]
实例1b)：在室温下，即在20℃的温度下，在ph 8.5下，使用相对于饼和作为溶剂的水的总重量按重量计10％的量的饼，在一小时的时间段内提取饼蛋白质。使如此提取的蛋白质在55℃的温度和ph 8.5下经受水解持续2小时的时间段，其中相对于碱性蛋白酶和蛋白质的总体积，呈液体形式的碱性蛋白酶的体积浓度为5％。通过在90℃的温度和ph6.5下加热20分钟的时间段使酶失活。然后将混合物冷却、离心并过滤(0.22μm)。
[0107]
实例1c)：在室温下，即在20℃的温度下，在ph 12下，使用相对于饼和作为溶剂的水的总重量按重量计10％的量的饼，在一小时的时间段内提取饼蛋白质。使如此提取的蛋白质在55℃的温度和ph 8.5下经受水解持续2小时的时间段，其中相对于木瓜蛋白酶和蛋白质的总体积，呈液体形式的木瓜蛋白酶的体积浓度为5％。通过在90℃的温度和ph6.5下加热20分钟的时间段使酶失活。然后将混合物冷却、离心并过滤(0.22μm)。
[0108]
实例2.根据本发明的水解产物的总蛋白质含量和肽分子量分布分析实例2a)总蛋白质测定：
[0109]
材料和方法：通过确定总氮(凯氏定氮法)并将所得值乘以因子6.25(n
×
6.25)来估计原料和提取物的蛋白质含量。
[0110]
结果：将结果整理在表1中(沙棘水解产物的蛋白质含量)。
[0111]
[表1]
[0112][0113]
结论：根据实例1a)的水解产物中的总蛋白质含量在18与32g/l蛋白质之间(表1)。总蛋白质含量在干物质的37％与65％之间。
[0114]
实例2b)肽分子量分布分析：
[0115]
材料和方法：如根据实例1a)制备的水解产物的肽的分子量分布通过柱(12 10/300gl，通用电气医疗集团生命科学部(ge healthcare life sciences))上的凝胶渗透进行分析。分子量是在用已知分子量的蛋白质分子校准柱后确定的。
[0116]
结果：将结果整理在表2中。
[0117]
[表2]
[0118][0119]
结论：如根据实例1a)制备的水解产物包含超过70％的mw小于5kda的肽。
[0120]
实例3.根据本发明的水解产物对皮肤附件的生物力学特性的体外影响
[0121]
材料和方法：将包含1.5％白蛋白、2mm铁、5mm edta和25mm h2o2过氧化氢的试剂置于存在或不存在沙棘水解产物的情况下。白蛋白在h2o2的存在下被氧化。氧化反应用铁催
化。对氧化反应的催化的监测是在不存在铁的情况下进行的。将混合物在37℃下温育1天。色氨酸、二酪氨酸、戊糖素和糖基化产物的量通过荧光测量(激发/发射波长：对于色氨酸为280nm/340nm；对于二酪氨酸为315nm/410nm；对于戊糖素为335nm/385nm；对于一般糖基化产物为370nm/440nm)。
[0122]
结果：将结果整理在表3至6中。
[0123]
实例3a)糖基化产物(age)的减少
[0124]
[表3]
[0125][0126]
结论：铁的存在催化了在过氧化氢的存在下白蛋白氧化过程并伴随着荧光糖基化产物的形成。0.01％和0.1％(w/v)的沙棘水解产物使这些糖基化产物的形成减少了至少超过28％。
[0127]
实例3b)色氨酸降解的减少
[0128]
[表4]
[0129][0130][0131]
结论：根据本发明的水解产物的添加使在白蛋白的氧化后色氨酸的降解减少了至少30％，表明其减少蛋白质的氧化并且从而保持和/或增加皮肤附件、尤其是头发的力学特性的能力。
[0132]
实例3c)二酪氨酸形成的减少
[0133]
[表5]
[0134][0135]
结论：根据本发明的水解产物的添加使在白蛋白的氧化后二酪氨酸的形成减少了至少35％，表明其减少蛋白质的氧化并且从而保持和/或增加皮肤附件、尤其是头发的力学特性的能力。
[0136]
实例3d)戊糖素形成的减少
[0137]
[表6]
[0138][0139]
结论：根据本发明的水解产物的添加使在白蛋白的氧化后二酪氨酸的形成减少了至少35％，表明其减少蛋白质的氧化并且从而保持和/或增加皮肤附件、尤其是头发的力学特性的能力。
[0140]
实例3e)糖基化中间体：席夫碱的减少
[0141]
材料和方法：将如根据实例1a)制备的水解产物(0.01％或0.1％最终(w/v))添加或不添加(对照)到包含铜(200μm)和脂蛋白(100μg/ml)的缓冲溶液(磷酸盐缓冲盐水(pbs))中。将混合物在37℃的温度下温育48小时的时间段。希夫碱的量(平均％)通过光谱法(激发波长370nm/发射波长440nm)测量。
[0142]
结果：
[0143]
[表7]
[0144][0145]
结论：根据本发明的水解产物使席夫碱的出现减少了至少11％。
[0146]
实例4.皮肤附件的生长的增加
[0147]
材料和方法：将由来自人毛囊的乳头的成纤维细胞和基础培养介质(含有0.05％v/v生长因子混合物并且存在或不存在待测试的沙棘水解产物)构成的悬浮液以200
×
g离心5分钟以形成聚集物。对照条件通过向基础培养介质中添加0.05％v/v生长因子混合物(乙醇etoh对照)和添加辣椒素(10μm)作为细胞敏化剂(辣椒素对照)产生。将聚集物在37℃
的温度下在受控气氛(5％ co2和95％相对湿度)下温育。
[0148]
将聚集物在缓冲盐水溶液(pbs)中冲洗并通过在蛋白酶(胶原酶a、胰蛋白酶)与edta的混合物中温育来分离细胞。
[0149]
将一部分悬浮细胞吸收到pbs中进行流式细胞术分析。细胞计数和自发荧光是测量的两个参数。自发荧光是易于测量的直接参数并用作细胞衰老的标志物(rattan等人，1982)。细胞计数是毛囊的生长潜力的间接参数。将另一部分细胞用于分析细胞dna含量和atp产生速率。根据供应商的说明书(cyquant nf细胞增殖检测试剂盒c35006，英杰公司(invitrogen)和生物发光检测试剂盒cls ii roche 11699695001，西格玛-奥德里奇公司(sigma-aldrich))测量这两个参数。
[0150]
结果：将结果整理在表8(沙棘水解产物对作为聚集物生长的乳头成纤维细胞中dna的量的影响)、9(沙棘水解产物对作为聚集物生长的乳头成纤维细胞的atp产生的影响)和10(沙棘水解产物对作为聚集物生长的乳头成纤维细胞的数量、其颗粒度和通过流式细胞术测量的自发荧光的影响)中。
[0151]
[表8]
[0152][0153]
结论：用浓度为10μm的辣椒素处理敏化的乳头成纤维细胞聚集物减少了细胞中dna的量。0.03％(w/v)的沙棘水解产物的共同添加减少了辣椒素的负面影响，证明了水解产物减少皮肤附件、特别是头发的损失的能力。用0.1％(w/v)的沙棘水解产物处理聚集物增加了dna的总量(相对于对照+41％)，证明了根据本发明的水解产物对增加皮肤附件的生长的作用。
[0154]
[表9]
[0155]
[0156]
结论：相对于对照(乙醇)，用浓度为10μm的辣椒素处理敏化的乳头成纤维细胞聚集物使细胞中atp的产生减少了76％。将0.03％(w/v)的沙棘水解产物与辣椒素联合添加使能够1)抵消辣椒素的负面影响，从而证明了根据本发明的水解产物减少皮肤附件、有利地头发的损失的能力，以及2)相对于非敏化对照，刺激atp的产生至少16％，表明所述水解产物对增加皮肤附件、优选地头发的生长的作用。
[0157]
[表10]
[0158][0159]
结论：相对于对照(etoh)，用辣椒素(10μm)处理敏化的乳头成纤维细胞聚集物减少了乳头成纤维细胞的数量，增加了细胞的总体颗粒度，并增加了荧光，这涉及脱发。将0.03％(w/v)的沙棘水解产物与辣椒素联合添加减少了辣椒素对三个测量参数的负面影响并使细胞计数相对于对照增加了54％，表明水解产物减少脱发的能力。此外，在水解产物的存在下测量的细胞数量也大于未用辣椒素敏化的对照的细胞数量，表明对增加成纤维细胞数量的作用以及因此对头发生长的作用。这些结果表明沙棘水解产物对早期或诱导性脱发的保护潜力并且是潜在的头发生长刺激剂。
[0160]
实例5.对生长的体外影响
[0161]
材料和方法：人毛囊在含有0.5μg/ml胰岛素的完全生长介质中体外培养，并用30μm的辣椒素处理。后一种分子被用作导致毛囊生长减慢的试剂。产生了未经辣椒素处理的对照条件。辣椒素敏化的毛囊用0.03％(w/v)沙棘水解产物处理或不用其处理。每种培养条件在至少10个单独培养的毛囊(n＝10)上进行评估。毛囊在37℃下在5％ co2的存在下温育。培养介质每周更新三次，持续大约2周。从不同日子拍摄的照片中获得培养毛囊的毛干的伸长。头发长度通过图像分析(image j)进行评估并作为平均值
±
标准误差以μm为单位呈现。
[0162]
结果：将结果整理在表11中(头发伸长值(μm))
[0163]
[表11]
[0164][0165]
结论：在含有0.5μg/ml胰岛素的介质中体外培养的毛囊继续生长，如由毛干伸长证明的(对照)。相对于对照，在培养的第6天，辣椒素(30μm)处理导致明显的伸长损失。与辣椒素处理的毛囊相比，用0.03％(w/v)沙棘水解产物处理用辣椒素敏化的毛囊早在培养的第六天就显著改善了头发伸长。
[0166]
实例6.对头发纤维的修复作用
[0167]
材料和方法：将深棕色高加索人头发绺按尺寸制作(1g；12cm)并准备用于研究。将头发绺洗涤并且然后使用过氧化氢溶液(5.6％ h2o2+13.9％(nh4)2s2o8，ph＝9.4)漂白三次，持续30分钟的时间段。健康(未漂白)的头发绺保持作为对照。在洗涤并在55℃下在空气流下干燥45分钟的时间段后，将头发绺浸入蒸馏水(作为对照)或含有1％沙棘水解产物的水溶液中持续24小时。预先将两种溶液在ph 5.5下进行缓冲。将绺冲洗并且然后在约60℃下在空气流下干燥1小时。人蛋白质的变性温度通过差示量热法(wortmann等人，1993)用2k/min的加热速率和差示焓分析仪(dsc q100，ta仪器公司)确定。
[0168]
结果：
[0169]
[表12]
[0170][0171]
结论：用过氧化氢漂白的头发比健康未漂白头发更不稳定。在受损头发与健康头发之间，头发纤维蛋白质的变性温度的差值为-8℃。用沙棘水解产物处理的过氧化头发与对照头发之间的变性温度的差值仅为-4.9℃。对受损头发的处理使头发蛋白质抵抗热变性的稳定性提高了+3.5℃。沙棘水解产物显示出对被过氧化氢损伤的头发纤维的修复作用。
[0172]
实例7：包含根据本发明的水解产物的组合物的实例
[0173]
实例7a)：洗发剂
[0174]
[表13]
[0175]
相名称量(按总重量计％)a水52.95a椰油酰胺丙基甜菜碱9.46a椰油酰基葡糖苷13.44a月桂醇聚醚磺基琥珀酸二钠16.25a二辛基醚、月桂醇0.50a聚季铵盐-71.0a苯甲酸钠0.50b水适量至3.10b根据实例1a)的水解产物0.1-2c香料0.05d聚乙二醇/ppg-120/10三羟甲基丙烷1.50e柠檬酸1.25
[0176]
洗发剂是通过本领域技术人员熟知的本领域中的通常方法，通过混合四个相并将组合物调节至5.2的ph和2200mpa.s的粘度(用博勒飞(brookfield)仪器(rvt；23℃，转子5；50rpm)测量)制备的。
[0177]
实例7b：用于头皮的水-醇溶液
[0178]
[表14]
[0179]
相名称量(按总重量计％)a水84.35
a氯苯甘醚和对羟基苯甲酸甲酯0.30a黄原胶0.10b96％乙醇10.00c水适量至3.25c根据实例1a)的水解产物1-2
[0180]
水-醇溶液是通过本领域技术人员熟知的本领域中的通常方法，通过混合三个相并将组合物调节至6.2的ph制备的。
[0181]
实例7c：用于头皮的面膜
[0182]
[表15]
[0183][0184]
面膜是通过本领域技术人员熟知的通常方法，通过混合四个相并将组合物调节至4.1的ph和26 000mpa.s的粘度(用博勒飞仪器(rvt；23℃，转子5；50rpm)测量)制备的。
[0185]
实例7d：护发精华
[0186]
[表16]
[0187][0188]

技术特征：
1.沙棘饼的水解产物用于以下的非治疗性美容用途：用于增加皮肤附件、有利地头发的生长和/或减少其损失；和/或用于保持和/或增加皮肤附件、有利地头发的生物力学特性和/或表面和/或质构特性；和/或用于修复受损的皮肤附件、有利地头发。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，该水解产物是用超临界co2提取沙棘籽得到的副产物或通过压榨所述籽获得的副产物的水解产物。3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，该水解产物是酶促水解产物。4.如权利要求1至3中任一项所述的用途，其特征在于，该水解产物是通过在碱性ph下、有利地在8.5的ph下的酶促消化获得的。5.如权利要求1至4中任一项所述的用途，其特征在于，该水解产物含有：-按重量计2％至10％的干物质含量，-从15g/l至35g/l水解产物、有利地18.8g/l水解产物的总蛋白质含量，-在15％与40％之间、有利地18.25％的百分比的分子量为从5kda至30kda的肽，-在40％与85％之间、有利地72.6％的百分比的分子量小于5kda的肽。6.如前述权利要求中任一项所述的用途，其特征在于，该用途是经由局部途径。7.如前述权利要求中任一项所述的用途，其特征在于，该饼水解产物减少该皮肤附件、有利地头发，和/或皮肤、有利地头皮，和/或黏膜的老化的负面影响。8.如前述权利要求中任一项所述的用途，其特征在于，该饼水解产物改善该皮肤附件、有利地头发的颜色和/或光泽和/或亮度和/或丰盈度。9.如前述权利要求中任一项所述的用途，其特征在于，该饼水解产物被包含在化妆品组合物中，相对于该组合物的总重量，该饼水解产物的含量为按重量计在1
×
10-4
％至10％之间、优选地按重量计从1
×
10-4
％至5％、更有利地按重量计从1
×
10-3
％至3％、更优选地按重量计从0.001％至0.1％。10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，该化妆品组合物包含至少一种化妆品上可接受的赋形剂，并且在于，该组合物选自精华液、洗剂、乳膏、洗发剂、护发素、油、乳剂、软膏、糊剂、泡沫、乳液、水凝胶、沐浴露、面膜、喷发定型剂、喷剂、蜡、睫毛膏、化妆笔或指甲油，有利地呈洗发剂、护发素或洗剂的形式。11.一种非治疗性美容护理方法，其包括局部施用沙棘饼的水解产物或包含其的化妆品组合物，用于增加皮肤附件、有利地头发的生长和/或减少其损失；和/或用于保持和/或增加皮肤附件、有利地头发的生物力学特性和/或表面和/或质构特性；和/或用于修复受损的皮肤附件、有利地头发。12.如权利要求11所述的美容护理方法，其特征在于，将该水解产物或该包含其的化妆品组合物局部施用于选自以下的身体和/或面部的全部或部分皮肤：头皮、腿、大腿、手臂、上腹部、颈线、颈部、全部或部分面部、前额、颏、唇部、唇部周边、眼睛周边、面部的“t”区域，并且有利地头皮，和/或施用于全部或部分皮肤附件、更优选地头发。13.一种沙棘饼的水解产物或包含其的皮肤病学或药物组合物，其在皮肤病学上或药学上用于治疗脱发和/或秃顶。14.如权利要求13所述的水解产物，其特征在于，该水解产物如权利要求2至5中任一项所定义。

技术总结
本发明涉及沙棘饼水解产物用于以下的美容用途：增加皮肤附件的生长和/或减少其损失；增加其生物力学特性和/或其表面和/或质构特性；和/或修复受损的皮肤附件。本发明还涉及一种美容护理方法，该方法包括局部施用该饼水解产物或含有其的化妆品组合物。本发明还涉及一种沙棘饼水解产物或包含其的皮肤病学或药物组合物，其在皮肤病学上或药学上用于治疗脱发和/或秃顶。和/或秃顶。


技术研发人员：L
受保护的技术使用者：巴斯夫美容护理法国公司
技术研发日：2021.12.13
技术公布日：2023/9/9