一种注射用交联葡聚糖凝胶及其制备方法与流程

1.本发明属于本发明涉及医疗美容技术领域，具体涉及一种注射交联葡聚糖凝胶的制备方法。


背景技术：

2.葡萄糖又称右旋糖酐，为结构单元通过糖苷键相连而形成的多糖类高分子(其中90-95％的d-葡萄糖通过a-1,6-糖苷键相连，其余5-10％通过a-1,3-糖苷键相连)，其是蔗糖经肠膜状明串珠菌-1226发酵合成的一种高分子葡萄糖聚合物，葡聚糖按照组成它的单糖-葡萄糖的单元数目，分为葡聚糖70k，葡聚糖40k，葡聚糖20k等系列聚合物。葡聚糖分子式为[c6h
10
o5]n，它难溶于水，不溶于乙醇、乙醚等有机溶剂，本身虽然抗蛋白质吸附和细胞黏附，但其结构中含有丰富的羟基官能团，使得它易于化学修饰，已经被广泛用于二维或者多孔软组织支架，药物释放，血浆代用品。葡聚糖(glucan)因具有良好的生物安全性和药物负载能力而常常被作为填充介质，它还能够增强巨噬细胞，淋巴细胞等免疫细胞的活性，提高伤口愈合速度，同时起到延缓皮肤老化的功效。用葡聚糖填充修饰透明质酸，可以保持其效力的同时，大大降低分解速度。其具有体内相容性好、较稳定、易于储存、易得、价廉、抗原性小和易于代谢等优点。
[0003]
交联葡聚糖在注射进入人体后，会被人体识别有异物入侵，巨噬细胞随即大量聚集吞噬葡聚糖，葡聚糖颗粒太大，巨噬细胞吞噬不掉，巨噬细胞对葡聚糖进行包围包裹，葡聚糖粒子表面带有正电荷，促使巨噬细胞分泌转化生长因子和白细胞介素，人体受到特定刺激后产生胶原蛋白组织，最终葡聚糖得到胶原蛋白包裹，在人体中逐渐形成胶原胶囊，葡聚糖自身会在1～2年内分解，而因有胶原胶囊的形成，胶原胶囊就起到了填充占位的效果，所以虽然原料物质分解了，但是胶原胶囊仍然使得效果能维持更长时间。尽管交联葡聚糖作为注射填充物具有以上优势，但常规工艺所制备的交联葡聚糖其交联度较低，而且呈微粒状，在皮下的填充性不够理想。
[0004]
中国专利cn114146221a中，公布了一种注射右旋糖苷水凝胶微球填充剂的制备方法，首先制备改性的右旋糖苷原料，使用大量有机溶剂dmso，毒性较大，工艺中需要用去离子水透析5-10天，每隔4-6h需要更换一次，操作周期较长，较为繁琐。然后，采用反相悬浮聚合法制备右旋糖苷水凝胶微球，使用反应助剂为有机胺类化合物，后处理操作难度大，稳定性较差，不易放大生产，工艺中需要用去离子水透析5-10天，操作周期较长。
[0005]
中国专利cn105111512b中，提到了一种化学交联型葡聚糖水凝胶的制备方法，首先对葡聚糖的进行醛基化修饰，使用高碘酸钠修饰葡聚糖，高碘酸钠为强氧化剂，使用过程中需要注意安全防护，工艺中需要用去离子水透析2-3天,生产周期长。然后，进行交联反应，使用多氨基交联剂，乙二胺有类似氨的气味，聚乙烯亚胺是一种水溶性高分子聚合物，产品中残留较大。
[0006]
中国专利cn105348548b中，公布了一种基于葡聚糖的水凝胶微球的制备方法。采用与专利cn105111512b类似的方法，首先对葡聚糖的进行醛基化修饰，然后，采用反相悬浮
聚合法制备葡聚糖水凝胶微球，操作繁琐，最后，采用硼氢化钠还原得到葡聚糖水凝胶微球，反应过程中将多余的硼氢化钠淬灭，操作繁琐，反应步骤较多。
[0007]
中国专利cn106039382b中，公布了一种葡聚糖基透明水凝胶敷料的制备方法，将葡聚糖季铵盐衍生物与丁二酸酐反应，再将所得产物与氨基化的小分子反应，采用光引发制备葡聚糖基透明水凝胶，通过粘合剂将所述的葡聚糖基透明水凝胶与载体复合，制成葡聚糖基透明水凝胶敷料，反应需要多步操作，工艺难度较大。
[0008]
中国专利cn105153440b中，公布了一种葡聚糖微球凝胶的制备方法，采用反相悬浮聚合法制备葡聚糖水凝胶微球，需要制备分散相何连续想，工艺操作要求高，难度大，操作时间长，不易放大，交联反应中使用交联剂n,n'-亚甲基双丙烯酰胺，后处理中产品残留较大，毒性较大。
[0009]
目前制备交联葡聚糖凝胶的方法主要为反相悬浮聚合法，本发明提供的制备方法，使用绿色环保低成本的水作为反应溶剂，不需要对葡聚糖溶液进行氧化处理，不使用有机溶剂，采用一步交联反应，反应步骤较短，反应条件温和，多余的交联剂在碱性溶液中容易降解，后处理操作简单，解决了交联剂残留问题，同时制备的葡聚糖凝胶颗粒粒径分布均匀，粘弹性较好，保障了葡聚糖醇凝胶的柔韧性与稳定性。
[0010]
交联葡聚糖是交联葡聚糖上糖环活性基团与交联剂在一定条件下反应，交联形成的凝胶大分子，也称为交联葡聚糖凝胶。交联反应是大分子包含空间多位点的复杂反应。交联透明葡聚糖的理化性质与交联度的大小密切相关。现有技术制备出的交联葡聚糖颗粒粒径分布不均匀，具有较低的水溶胀比，且在水相中初步交联反应时交联剂未能均匀的分散于葡聚糖分子间，存在整体交联程度不均一的问题。


技术实现要素：

[0011]
针对现有技术的不足，本发明提供一种注射用交联葡聚糖凝胶及其它的制备方法。
[0012]
本发明的技术方案如下：一种注射用交联葡聚糖凝胶，由以下方法制备：
[0013]
1)称取葡聚糖，加入纯化水，加入碱，搅拌溶解后，加入交联剂，搅拌静置后，进行交联反应；
[0014]
2)用酸调节反应溶液至微酸性，常温溶胀，过筛网，用纯化水反复洗涤三次，再进行研磨粉粹，形成凝胶颗粒；
[0015]
3)加入渗透压调节剂、ph调节剂、纯化水至凝胶颗粒中，高速搅拌，将交联葡聚糖凝胶样品装入预灌封注射器中，湿热灭菌。
[0016]
优选地，所述步骤1)中的葡聚糖的分子结构由90-95％的d-葡萄糖通过α-1,6-糖苷键相连，剩余5-10％的d-葡萄糖通过α-1,3-糖苷键相连，葡聚糖分子量的范围为100至2000kda；更优选地，所选的葡聚糖选自右旋糖苷20、右旋糖苷40或右旋糖苷70；进一步优选为右旋糖苷70。
[0017]
优选地，所述步骤1)中的催化剂选自碱性化合物，更优选地，所述催化剂选自碱金属的氢氧化物和/或碱金属的碳酸盐；进一步优选地，所述催化剂选自氢氧化钠或氢氧化钾中的至少一种。
[0018]
优选地，所述步骤1)中的交联剂选自1,4-丁二醇二缩水甘油醚、1,2,3,4-二环氧
丁烷、1,2,7,8-二环氧辛烷、三羟甲基丙烷三缩水甘油醚或季戊四醇四缩水甘油醚中至少一种；更优选地，交联剂为1,4-丁二醇二缩水甘油醚(bdde)。
[0019]
优选地，所述步骤1)中的葡聚糖在水溶液中的质量浓度为10％～60％,优选为20％～30％。
[0020]
优选地，所述步骤1)中的催化剂在水溶液中的质量浓度为0.5％～10％,优选为0.5％～1％。
[0021]
优选地，所述步骤1)中的交联剂与葡聚糖的体积质量比范围为0.1～0.3:1。
[0022]
优选地，所述步骤1)中的反应温度为18～35℃，反应时间为18～24小时。
[0023]
优选地，所述步骤2)中用盐酸调节溶液的ph至4～7，溶胀3～4h，溶胀温度为20～40℃。
[0024]
优选地，所述步骤2)中，纯化水用量与葡聚糖的质量比范围为：20～100:1，过滤凝胶时选用2～4mm的筛网。
[0025]
优选地，所述步骤2)中，研磨粉碎的齿轮转速为10000～15000rpm。研磨次数为3～5次，粉碎后凝胶粒度为10～400微米。
[0026]
优选地，所述步骤3)中的ph调节剂为磷酸缓冲盐；优选地，所述ph调节剂为磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠或磷酸氢二钾中的一种或多种，优选为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠。
[0027]
优选地，所述步骤3)中的渗透压调节剂为氯化钠或甘露醇，调节渗透压至200～400mosmol/kg。
[0028]
优选地，所述步骤3)中，灭菌温度为121℃；灭菌时间为8-30min，优选为8-15min，
[0029]
本发明提供的注射用交联葡聚糖凝胶在制备生物材料中的应用；优选地，所述生物材料用于注射至骨膜上层，填充增加组织容积。
[0030]
本发明的有益效果：本发明提供的制备注射用交联葡聚糖凝胶的方法，相比反相悬浮聚合法，采用多元环氧类化合物对聚乙烯醇进行化学交联，工艺路线更环保绿色，安全可控，赋予所得交联葡聚糖凝胶以更优异的力学性能，强度、柔韧性与稳定性更佳，更有利于满足其医疗美容应用领域应用需要。
[0031]
本发明提供的注射用交联葡聚糖凝胶的方法，采用多元环氧类化合物作为交联剂，避免了现有技术中硼、重金属等有毒元素的应用，保障了交联葡聚糖凝胶的生物安全性；多元环氧类化合物中环氧与羟基发生加成反应之后形成的醚键结构为单键且不容易断裂，为葡聚糖醇凝胶的柔韧性与稳定性提供了有力保障。
[0032]
本发明提供的注射用交联透明葡聚糖的颗粒粒径分布均匀，具有较高的水溶胀比，粘弹性较好，注射进入人体后，巨噬细胞对葡聚糖进行包围包裹，葡聚糖粒子表面带有正电荷，促使巨噬细胞分泌转化生长因子和白细胞介素，人体受到特定刺激后产生胶原蛋白组织，最终葡聚糖得到胶原蛋白包裹，在人体中逐渐形成胶原胶囊，葡聚糖自身会在1～2年内分解，而因有胶原胶囊的形成，胶原胶囊就起到了填充占位的效果。
附图说明
[0033]
图1实施例1制备获得的交联葡聚初糖凝胶的图片；
[0034]
图2实施例1制备获得的注射用交联葡聚糖凝胶成品的图片；
[0035]
图3实施例1制备获得的注射用交联葡聚糖凝胶成品的扫描电子显微镜(sem)图片；
[0036]
图4实施例1制备获得的注射用交联葡聚糖凝胶成品的粒度图谱；
[0037]
图5实施例1制备获得的注射用交联葡聚糖凝胶，在(25
±
0.2)℃，采用流变仪在剪切速率从0.1hz～100hz下，选行频率扫描绘制黏性模量g”、弹性模量g'和相位角8与频率f的坐标图；
[0038]
图6实施例1制备获得的注射用交联葡聚糖凝胶，在(25
±
0.2)℃，采用流变仪在剪切速率：0.001s-1
～1000s-1
进行蠕动扫描，分别绘制剪切应力τ、粘度η与剪切速率的坐标图；
[0039]
图7实施例1制备获得的注射用交联葡聚糖凝胶的红外光谱；
[0040]
图8实施例2制备获得的注射用交联葡聚糖凝胶成品的扫描电子显微镜(sem)图片；
[0041]
图9实施例2制备获得的的注射用交联葡聚糖凝胶成品的粒度图谱；
[0042]
图10实施例2制备获得的注射用交联葡聚糖凝胶，在(25
±
0.2)℃，采用流变仪在剪切速率从0.1hz～100hz下，选行频率扫描绘制黏性模量g”、弹性模量g'和相位角8与频率f的坐标图；
[0043]
图11实施例2制备获得的注射用交联葡聚糖凝胶，在(25
±
0.2)℃，采用流变仪在剪切速率：0.001s-1
～1000s-1
进行蠕动扫描，分别绘制剪切应力τ、粘度η与剪切速率的坐标图；
[0044]
图12实施例3制备获得的注射用交联葡聚糖凝胶成品的粒度图谱
[0045]
图13实施例3制备获得的注射用交联葡聚糖凝胶，在(25
±
0.2)℃，采用流变仪在剪切速率从0.1hz～100hz下，选行频率扫描绘制黏性模量g”、弹性模量g'和相位角8与频率f的坐标图；
[0046]
图14实施例3制备获得的注射用交联葡聚糖凝胶，在(25
±
0.2)℃，采用流变仪在剪切速率：0.001s-1
～1000s-1
进行蠕动扫描，分别绘制剪切应力τ、粘度η与剪切速率的坐标图。
具体实施方式
[0047]
下面的实施例可以使本专业的本领域技术人员更全面地理解本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
[0048]
实施例1
[0049]
一种注射用交联葡聚糖凝胶的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
[0050]
a)称取400g右旋糖苷70，加入2kg纯化水，加入10g氢氧化钠，常温条件下搅拌溶解后，加入80ml bdde，搅拌15min后，于35℃静置24h。
[0051]
b)切碎，用稀盐酸调节反应溶液至微酸性ph：6.0，常温溶胀4h，过4mm筛网，用10kg纯化水反复洗涤三次，再进行研磨粉粹，研磨粉碎的齿轮转速为10000rpm，形成凝胶颗粒；
[0052]
c)称取48g氯化钠，1.4g磷酸二氢钠-水合物，1.0g无水磷酸氢二钠，加入1kg纯化水，高速搅拌30min，将交联葡聚糖凝胶样品装入预灌封注射器中，于121℃湿热灭菌15min。
[0053]
取1.0g凝胶，按yy/t 0962-2021《整形手术用交联透明质酸钠凝胶》中6.7方法检
测，溶胀比为10。取适量凝胶，加入右旋糖苷酶水解后，采用高效气相仪器检测交联剂bdde残留，结果显示bdde：未检出(＜2.0μg/g)。
[0054]
图1示出了本实施例中制备的交联葡聚糖初凝胶的图片。
[0055]
图2示出了本实施例中制备的交联葡聚糖凝胶成品的图片。由图2可知，成品为无色、半透明凝胶颗粒，罐装在1ml预灌封注射器中，可以作为一次性无菌的植入性材料，应用注射至骨膜上层，填充增加组织容积以达美容整形的效果。
[0056]
图3示出了本实施例中制备的交联葡聚糖凝胶成品的扫描电子显微镜(sem)图片。由图3可知，通过扫描电镜观察,证实了水凝胶具有取向相互贯通的多孔结构，内部空间结构较为规整，显示出葡聚糖凝胶交联程度较高，凝胶颗粒较为均匀。
[0057]
图4出了本实施例中制备的交联葡聚糖凝胶成品的粒度图谱，由图4可知，80％的粒度粒度为80～200微米，颗粒粒度的一致性较好，制备出的交联葡聚糖颗粒粒径分布均匀，同时具有较高的水溶胀比。
[0058]
图5出了本实施例中制备的交联葡聚糖凝胶成品，在25士0.2℃，采用流变仪在剪切速率从0.1hz～100hz下，选行频率扫描绘制黏性模量g”、弹性模量g'和相位角8与频率f的坐标图。由图5可知，在剪切速率从0.1hz下，弹性模量g'：≥2000pa，黏性模量g”:≥200pa，对于强凝胶，复模量g*几乎等于弹性模量g’，凝胶抵抗变形的度量；复模量越高，凝胶的变形越小，结果显示交联葡聚糖凝胶成品具有良好的粘弹性。
[0059]
图6出了本实施例中制备的交联葡聚糖凝胶成品，在(25士0.2)℃，采用流变仪在剪切速率：0.001s-1
～1000s-1
进行蠕动扫描，分别绘制剪切应力、粘度η与剪切速率的坐标图。由图6可知，在剪切速率：0.001s-1
～1000s-1
下，剪切粘度≥50mpa。
[0060]
图7出了本实施例中制备的交联葡聚糖凝胶成品的红外光谱。由图7可知，在3600～3200(cm-1
)有较宽的吸收峰，为醇羟基伸缩振动吸收峰，交联葡聚糖分子存在大量的氢键。2928(cm-1
)有强吸收峰，为c-h伸缩振动吸收峰。
[0061]
实施例2
[0062]
一种注射用交联葡聚糖凝胶的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
[0063]
a)称取200g右旋糖苷70，加入1kg纯化水，加入10g氢氧化钾，常温条件下搅拌溶解后，加入40ml bdde，搅拌15min后，于35℃静置18h。
[0064]
b)切碎，用稀盐酸调节反应溶液至微酸性ph：5.0，常温溶胀4h，过4mm筛网，用10kg纯化水反复洗涤三次，再进行研磨粉粹，研磨粉碎的齿轮转速为10000rpm，形成凝胶颗粒；
[0065]
c)称取125g甘露醇，0.7g磷酸二氢钠-水合物，0.6g无水磷酸氢二钠，加入0.5kg纯化水，高速搅拌30min，将交联葡聚糖凝胶样品装入预灌封注射器中，于121℃湿热灭菌10min。
[0066]
取1.0g凝胶，按yy/t 0962-2021《整形手术用交联透明质酸钠凝胶》中6.7方法检测，溶胀比为11。取适量凝胶，加入右旋糖苷酶水解后，采用高效气相仪器检测交联剂bdde残留，结果显示bdde：未检出(＜2.0μg/g)。
[0067]
图8示出了本实施例中制备的交联葡聚糖凝胶成品的扫描电子显微镜(sem)图片。由图8可知，通过扫描电镜观察,证实了凝胶具有取向相互贯通的多孔结构。
[0068]
图9出了本实施例中制备的交联葡聚糖凝胶成品的粒度图谱，由图9可知，80％的粒度粒度为70～200微米，制备出的交联葡聚糖颗粒粒径分布均匀，同时具有较高的水溶胀
比。
[0069]
图10出了本实施例中制备的交联葡聚糖凝胶成品，在25士0.2)℃，采用流变仪在剪切速率从0.1hz～100hz下，选行频率扫描绘制黏性模量g”、弹性模量g'和相位角8与频率f的坐标图。由图10可知，在剪切速率从0.1hz下，弹性模量g'：≥1400pa，黏性模量g”:≥100pa。
[0070]
图11出了本实施例中制备的交联葡聚糖凝胶成品，在(25士0.2)℃，采用流变仪在剪切速率：0.001s-1
～1000s-1
进行蠕动扫描，分别绘制剪切应力、粘度η与剪切速率的坐标图。由图11可知，在剪切速率：0.001s-1
～1000s-1
下，剪切粘度≥300mpa。
[0071]
实施例3
[0072]
一种注射用交联葡聚糖凝胶的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
[0073]
a)称取200g右旋糖苷70，加入1kg纯化水，加入10g氢氧化钾，常温条件下搅拌溶解后，加入40ml bdde，搅拌15min后，于25℃静置18h。
[0074]
b)切碎，用稀盐酸调节反应溶液至微酸性ph：7.0，常温溶胀3h，过2mm筛网，用15kg纯化水反复洗涤三次，再进行研磨粉粹，研磨粉碎的齿轮转速为10000rpm，形成凝胶颗粒；
[0075]
c)称取24g氯化钠，1.0g磷酸二氢钾，0.7g无水磷酸氢二钾，加入0.4kg纯化水，高速搅拌30min，将交联葡聚糖凝胶样品装入预灌封注射器中，于121℃湿热灭菌15min。
[0076]
取1.0g凝胶，按yy/t 0962-2021《整形手术用交联透明质酸钠凝胶》中6.7方法检测，溶胀比为11。取适量凝胶，加入右旋糖苷酶水解后，采用高效气相仪器检测交联剂bdde残留，结果显示bdde：未检出(＜2.0μg/g)。
[0077]
图12出了本实施例中制备的交联葡聚糖凝胶成品的粒度图谱，由图12可知，80％的粒度粒度为100～230微米，制备出的交联葡聚糖颗粒粒径分布均匀，同时具有较高的水溶胀比。
[0078]
图13出了本实施例中制备的交联葡聚糖凝胶成品，在25士0.2)℃，采用流变仪在剪切速率从0.1hz～100hz下，选行频率扫描绘制黏性模量g”、弹性模量g'和相位角8与频率f的坐标图。由图13可知，在剪切速率从0.1hz下，弹性模量g'：≥1700pa，黏性模量g”:≥150pa。
[0079]
图14出了本实施例中制备的交联葡聚糖凝胶成品，在(25士0.2)℃，采用流变仪在剪切速率：0.001s-1
～1000s-1
进行蠕动扫描，分别绘制剪切应力、粘度η与剪切速率的坐标图。由图14可知，在剪切速率：0.001s-1
～1000s-1
下，剪切粘度≥100mpa。
[0080]
实施例4
[0081]
一种注射用交联葡聚糖凝胶的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
[0082]
a)称取200g右旋糖苷70，加入1kg纯化水，加入10g氢氧化钾，常温条件下搅拌溶解后，加入40ml 1,2,7,8-二环氧辛烷，搅拌15min后，于18℃静置24h。
[0083]
b)切碎，用稀盐酸调节反应溶液至微酸性ph：6.0，常温溶胀3h，过2mm筛网，用10kg纯化水反复洗涤三次，再进行研磨粉粹，研磨粉碎的齿轮转速为13000rpm，形成凝胶颗粒；
[0084]
c)称取24g氯化钠，1.2g磷酸二氢钾，0.6g无水磷酸氢二钾，加入0.4kg纯化水，高速搅拌30min，将交联葡聚糖凝胶样品装入预灌封注射器中，于121℃湿热灭菌15min。
[0085]
实施例5
[0086]
一种注射用交联葡聚糖凝胶的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
[0087]
a)称取200g右旋糖苷70，加入1kg纯化水，加入10g氢氧化钾，常温条件下搅拌溶解后，加入40ml三羟甲基丙烷三缩水甘油醚，搅拌15min后，于20℃静置20h。
[0088]
b)切碎，用稀盐酸调节反应溶液至微酸性ph：5.0，常温溶胀4h，过4mm筛网，用10kg纯化水反复洗涤五次，再进行研磨粉粹，研磨粉碎的齿轮转速为12000rpm，形成凝胶颗粒；
[0089]
c)称取26g氯化钠，1.4g磷酸二氢钾，0.7g无水磷酸氢二钾，加入0.5kg纯化水，高速搅拌30min，将交联葡聚糖凝胶样品装入预灌封注射器中，于121℃湿热灭菌15min。
[0090]
取1.0g凝胶，按yy/t 0962-2021中6.7方法检测，溶胀比为10。
[0091]
实施例6
[0092]
一种注射用交联葡聚糖凝胶的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
[0093]
a)称取200g右旋糖苷70，加入1kg纯化水，加入10g氢氧化钠，常温条件下搅拌溶解后，加入40ml bdde，搅拌15min后，于35℃静置24h。
[0094]
b)切碎，用稀盐酸调节反应溶液至微酸性ph：6.0，常温溶胀4h，过4mm筛网，用10kg纯化水反复洗涤四次，再进行研磨粉粹，研磨粉碎的齿轮转速为15000rpm，形成凝胶颗粒；
[0095]
c)称取25g氯化钠，1.8g磷酸二氢钠-水合物，1.6g无水磷酸氢二钠，加入1kg纯化水，高速搅拌30min，将交联葡聚糖凝胶样品装入预灌封注射器中，于121℃湿热灭菌15min。
[0096]
取1.0g凝胶，按yy/t 0962-2021中6.7方法检测，溶胀比为10。
[0097]
按照gb/t 16886.10017《医疗器械生物学评价第10部分：刺激与皮肤致敏试验》的方法要求，试验样品采用极性浸提液(0.9％氯化钠注射液)和非极性浸提液(棉籽油)浸提，所得浸提液通过皮内注射途径给予新西兰兔，对材料在试验条件下产生的刺激反应的潜能做出评定。结果显示试验样品极性浸提液皮内反应最终记分为0.00；非极性浸提液皮内反应最终记分为0.00，最终结果显示皮内反应良好。
[0098]
本试验采用gb/t 16886.10-2017《医疗器械生物学评价第10部分：刺激与皮肤致敏试验》7.5豚鼠皮肤致敏检验法中推荐的最大剂量法，对试验样品在试验条件下使豚鼠产生皮肤致敏反应的潜能做出评定。结果显示试验样品未引起皮肤致敏反应，阳性激发结果的发生率为0％。

技术特征：
1.一种注射用交联葡聚糖凝胶，由以下方法制备：1)称取葡聚糖，加入纯化水，加入碱，搅拌溶解后，加入交联剂，搅拌静置后，进行交联反应；2)用酸调节反应溶液至微酸性，常温溶胀，过筛网，用纯化水反复洗涤三次，再进行研磨粉粹，形成凝胶颗粒；3)加入渗透压调节剂、ph调节剂、纯化水至凝胶颗粒中，高速搅拌，将交联葡聚糖凝胶样品装入预灌封注射器中，湿热灭菌。2.根据权利要求1所述的注射用交联葡聚糖凝胶，其特征在于，所述步骤1)中的葡聚糖的分子结构由90-95％的d-葡萄糖通过α-1,6-糖苷键相连，剩余5-10％的d-葡萄糖通过α-1,3-糖苷键相连，葡聚糖分子量的范围为100至2000kda；更优选地，所选的葡聚糖选自右旋糖苷20、右旋糖苷40或右旋糖苷70；进一步优选为右旋糖苷70；优选地，所述步骤1)中的葡聚糖在水溶液中的质量浓度为10％～60％,优选为20％～30％。3.根据权利要求1所述的注射用交联葡聚糖凝胶，其特征在于，所述步骤1)中的催化剂选自碱性化合物，更优选地，所述催化剂选自碱金属的氢氧化物和/或碱金属的碳酸盐；进一步优选地，所述催化剂选自氢氧化钠或氢氧化钾中的至少一种；优选地，所述步骤1)中的催化剂在水溶液中的质量浓度为0.5％～10％,优选为0.5％～1％。4.根据权利要求1所述的注射用交联葡聚糖凝胶，其特征在于，所述步骤1)中的交联剂选自1,4-丁二醇二缩水甘油醚、1,2,3,4-二环氧丁烷、1,2,7,8-二环氧辛烷、三羟甲基丙烷三缩水甘油醚或季戊四醇四缩水甘油醚中至少一种；更优选地，交联剂为1,4-丁二醇二缩水甘油醚；优选地，所述步骤1)中的交联剂与葡聚糖的体积质量比范围为0.1～0.3:1。5.根据权利要求1所述的注射用交联葡聚糖凝胶，其特征在于，所述步骤1)中的反应温度为18～35℃，反应时间为18～24小时。6.根据权利要求1所述的注射用交联葡聚糖凝胶，其特征在于，所述步骤2)中用盐酸调节溶液的ph至4～7，溶胀3～4h，溶胀温度为20～40℃；优选地，所述步骤2)中，纯化水用量与葡聚糖的质量比范围为：20～100:1，过滤凝胶时选用2～4mm的筛网；优选地，研磨粉碎的齿轮转速为10000～15000rpm，研磨次数为3～5次，粉碎后凝胶粒度为10～400微米。7.根据权利要求1所述的注射用交联葡聚糖凝胶，其特征在于，优选地，所述步骤3)中的ph调节剂为磷酸缓冲盐；优选地，所述ph调节剂为磷酸二氢钠、磷酸二氢钾和、磷酸氢二钠或磷酸氢二钾中的一种或多种，优选为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠。8.根据权利要求1所述的注射用交联葡聚糖凝胶，其特征在于，所述步骤3)中的渗透压调节剂为氯化钠或甘露醇，调节渗透压至200～400mosmol/kg。9.根据权利要求1所述的注射用交联葡聚糖凝胶，其特征在于，所述步骤3)中，灭菌温度为121℃；灭菌时间为8-30min，优选为8-15min。10.权利要求1所述的注射用交联葡聚糖凝胶在制备生物材料中的应用；优选地，所述生物材料用于注射至骨膜上层，填充增加组织容积。

技术总结
本发明提供一种注射用交联葡聚糖凝胶及其它的制备方法，本方法采用多元环氧类化合物作为交联剂，避免了现有技术中硼、重金属等有毒元素的应用，保障了交联葡聚糖凝胶的生物安全性；多元环氧类化合物中环氧与羟基发生加成反应之后形成的醚键结构为单键且不容易断裂，为葡聚糖醇凝胶的柔韧性与稳定性提供了有力保障。本方法制备的注射用交联透明葡聚糖的颗粒粒径分布均匀，具有较高的水溶胀比，粘弹性较好，填充占位效果优良，本发明提供的注射用交联葡聚糖凝胶可作为生物材料用于医美领域中。中。中。


技术研发人员：薛其俊 丰祝刚
受保护的技术使用者：南京思元医疗技术有限公司
技术研发日：2023.06.08
技术公布日：2023/9/12