光动力疗法和诊断的制作方法

1.本发明涉及叶绿素蛋白(phyllochlorin)类似物及其药学上可接受的盐，以及包含叶绿素蛋白类似物及其药学上可接受的盐的组合物。叶绿素蛋白类似物及其药学上可接受的盐适合用于光动力疗法、细胞发光疗法和光动力诊断中，例如用于治疗或检测肿瘤或用于抗病毒治疗。本发明还涉及叶绿素蛋白类似物及其药学上可接受的盐在制造光治疗剂或光诊断剂中的用途，并且涉及光动力疗法、细胞发光疗法或光动力诊断的方法，例如用于治疗或检测肿瘤或用于抗病毒治疗。
[0002]“叶绿素蛋白”的结构如下所示：
[0003]


背景技术：

[0004]
卟啉及其类似物是已知的光敏性化学化合物，其可吸收可见光子并以更高的波长发射它们。此类独特的特性具有许多应用，并且pdt(光动力疗法)是其中之一。
[0005]
目前，存在pdt的两代光敏剂。第一代包括血红素卟啉(血液衍生物)，并且第二代主要是叶绿素类似物。后来的化合物被称为二氢卟吩和菌绿素。
[0006]
已显示二氢卟吩e4展示良好的光敏活性。指出二氢卟吩e4针对大鼠中吲哚美辛诱发的胃损伤和小鼠中taa或ccl4诱发的急性肝损伤具有保护作用。因此提出二氢卟吩e4可能是用于抗胃溃疡和肝损伤保护的有前景的新的药物候选物。wo 2009/040411提出在光动力疗法中使用二氢卟吩e4锌络合物，并且wo 2014/091241提出在光动力疗法中使用二氢卟吩e4二钠。
[0007][0008]
然而，持续需要更好的光敏剂。需要优选在有机和水性介质中具有高单线态氧量子产率的化合物和具有强光敏化能力的化合物。还需要具有高荧光量子产率的化合物。此外，需要具有较高光毒性、较低暗毒性、良好稳定性和/或易纯化的化合物和/或组合物。


技术实现要素：

[0009]
本发明的第一方面提供一种式(i)化合物或一种式(ii)络合物：
[0010][0011]
其中
[0012]-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3、-c(o)-n(r3)2、-c(s)-or3、-c(s)-sr3或-c(s)-n(r3)2；
[0013]-r3各自独立地选自-h、-r
α-h、-r
β
、-r
α-r
β
、-r
α-oh、-r
α-or
β
、-r
α-sh、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
、-r
α-s(o)2r
β
、-r
α-nh2、-r
α-nh(r
β
)、-r
α-n(r
β
)2、-r
α-x、-r
α-[n(r5)3]y、-r
α-[p(r5)3]y或-r
α-[r6]y；
[0014]-r
α-各自独立地选自c
1-c
12
亚烷基，其中所述亚烷基可任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基或卤基取代，并且其中所述亚烷基的主链中的一个或多个碳原子可任选地被一个或多个杂原子o或s替代；
[0015]-r
β
各自独立地是饱和或不饱和的烃基，其中所述烃基可以是直链的或支链的，或
者可以是或包括环状基团，其中所述烃基可任选地被取代，并且其中所述烃基可任选地在其碳骨架中包括一个或多个杂原子n、o、s、p或se；
[0016]-r5各自独立地选自c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、卤基、-(ch2ch2o)
n-h、-(ch2ch2o)
n-ch3、苯基或c
5-c6杂芳基，其中所述苯基或c
5-c6杂芳基可任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、-o(c
1-c4烷基)、-o(c
1-c4卤代烷基)、卤基、-o-(ch2ch2o)
n-h或-o-(ch2ch2o)
n-ch3基团取代；
[0017]-r6是任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、-o(c
1-c4烷基)、-o(c
1-c4卤代烷基)、卤基、-o-(ch2ch2o)
n-h或-o-(ch2ch2o)
n-ch3基团取代的-[nc5h5]；
[0018]
n是1、2、3或4；
[0019]
y是抗衡离子；
[0020]
x是卤基；
[0021]m2+
是金属离子；
[0022]
或其药学上可接受的盐；
[0023]
条件是所述化合物不是：
[0024]
(1)叶绿素蛋白游离酸；或
[0025]
(2)叶绿素蛋白甲酯。
[0026]
叶绿素蛋白游离酸具有以下结构：
[0027][0028]
叶绿素蛋白甲酯具有以下结构：
[0029][0030]
本发明的第二方面提供一种式(i)化合物或一种式(ii)络合物：
[0031][0032]
其中
[0033]-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3、-c(o)-n(r3)2、-c(s)-or3、-c(s)-sr3或-c(s)-n(r3)2；
[0034]-r3各自独立地选自-h、-r
α-h、-r
β
、-r
α-r
β
、-r
α-oh、-r
α-or
β
、-r
α-sh、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
、-r
α-s(o)2r
β
、-r
α-nh2、-r
α-nh(r
β
)、-r
α-n(r
β
)2、-r
α-x、-r
α-[n(r5)3]y、-r
α-[p(r5)3]y或-r
α-[r6]y；
[0035]-r
α-各自独立地选自c
1-c
12
亚烷基，其中所述亚烷基可任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基或卤基取代，并且其中所述亚烷基的主链中的一个或多个碳原子可任选地被一个或多个杂原子o或s替代；
[0036]-r
β
各自独立地是饱和或不饱和的烃基，其中所述烃基可以是直链的或支链的，或者可以是或包括环状基团，其中所述烃基可任选地被取代，并且其中所述烃基可任选地在其碳骨架中包括一个或多个杂原子n、o、s、p或se；
[0037]-r5各自独立地选自c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、卤基、-(ch2ch2o)
n-h、-(ch2ch2o)
n-ch3、苯基或c
5-c6杂芳基，其中所述苯基或c
5-c6杂芳基可任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、-o(c
1-c4烷基)、-o(c
1-c4卤代烷基)、卤基、-o-(ch2ch2o)
n-h或-o-(ch2ch2o)
n-ch3基团取代；
[0038]-r6是任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、-o(c
1-c4烷基)、-o(c
1-c4卤
代烷基)、卤基、-o-(ch2ch2o)
n-h或-o-(ch2ch2o)
n-ch3基团取代的-[nc5h5]；
[0039]
n是1、2、3或4；
[0040]
y是抗衡离子；
[0041]
x是卤基；
[0042]m2+
是金属离子；
[0043]
或其药学上可接受的盐；
[0044]
所述化合物或络合物用于医学中。
[0045]
在本发明的第二方面的一些实施方案中，所述化合物是：
[0046]
(1)叶绿素蛋白游离酸；或
[0047]
(2)叶绿素蛋白甲酯。
[0048]
在本说明书的背景下，“烃基”取代基或取代基中的烃基部分仅包括碳原子和氢原子，但除非另有说明，否则在其碳骨架中不包括任何杂原子，诸如n、o、s、p或se。烃基基团/部分可以是饱和的或不饱和的(包括芳族的)，并且可以是直链的或支链的，或者可以是或包括环状基团，其中除非另有说明，否则所述环状基团在其碳骨架中不包括任何杂原子，诸如n、o、s、p或se。烃基的实例包括烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基和芳基基团/部分以及所有这些基团/部分的组合。通常，烃基是c
1-c
60
烃基，更通常是c
1-c
40
烃基，更通常是c
1-c
20
烃基。更通常，烃基是c
1-c
12
烃基。更通常，烃基是c
1-c
10
烃基。“亚烃基”以类似方式定义为二价烃基。
[0049]“烷基”取代基或取代基中的烷基部分可以是直链(linear)(即直链(straight-chained)的)或支链的。烷基基团/部分的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基和正戊基基团/部分。除非另有说明，否则术语“烷基”不包括“环烷基”。通常，烷基是c
1-c
12
烷基。更通常，烷基是c
1-c6烷基。“亚烷基”以类似方式定义为二价烷基。
[0050]“烯基”取代基或取代基中的烯基部分是指具有一个或多个碳-碳双键的不饱和烷基基团或部分。烯基基团/部分的实例包括乙烯基、丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1-戊烯基、1-己烯基、1,3-丁二烯基、1,3-戊二烯基、1,4-戊二烯基和1,4-己二烯基基团/部分。除非另有说明，否则术语“烯基”不包括“环烯基”。通常，烯基是c
2-c
12
烯基。更通常，烯基是c
2-c6烯基。“亚烯基”以类似方式定义为二价烯基。
[0051]“炔基”取代基或取代基中的炔基部分是指具有一个或多个碳-碳三键的不饱和烷基基团或部分。炔基基团/部分的实例包括乙炔基、炔丙基、丁-1-炔基和丁-2-炔基。通常，炔基是c
2-c
12
炔基。更通常，炔基是c
2-c6炔基。“亚炔基”以类似方式定义为二价炔基。
[0052]“环状”取代基或取代基中的环状部分是指任何烃基环，其中所述烃基环可以是饱和的或不饱和的(包括芳族的)，并且可在其碳骨架中包括一个或多个杂原子，例如n、o、s、p或se。环状基团的实例包括如下文所论述的环烷基、环烯基、杂环、芳基和杂芳基。环状基团可以是单环、双环(例如桥联、稠合或螺环)或多环。通常，环状基团是3至12元环状基团，其意指它含有3至12个环原子。更通常，环状基团是3至7元单环基团，其意指它含有3至7个环原子。
[0053]“杂环”取代基或取代基中的杂环部分是指在环结构中包括一个或多个碳原子和一个或多个(诸如一个、两个、三个或四个)杂原子(例如n、o、s、p或se)的环状基团或部分。杂环基团的实例包括如下文所论述的杂芳基和非芳族杂环基团，诸如氮杂环丁烷基、氮杂
环丁烯基(azetinyl)、四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢苯硫基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、二氧戊环基、氧硫杂环戊基、噻烷基和二噁烷基。
[0054]“环烷基”取代基或取代基中的环烷基部分是指含有(例如)3至7个碳原子的饱和烃基环，其实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。除非另有说明，否则环烷基取代基或部分可包括单环、双环或多环烃基环。
[0055]“环烯基”取代基或取代基中的环烯基部分是指具有一个或多个碳-碳双键并且含有(例如)3至7个碳原子的非芳族不饱和烃基环，其实例包括环戊-1-烯-1-基、环己-1-烯-1-基和环己-1,3-二烯-1-基。除非另有说明，否则环烯基取代基或部分可包括单环、双环或多环烃基环。
[0056]“芳基”取代基或取代基中的芳基部分是指芳族烃基环。术语“芳基”包括单环芳族烃和多环稠环芳族烃，其中所有稠环系统(不包括作为任选取代基的一部分或由任选取代基形成的任何环系统)是芳族的。芳基基团/部分的实例包括苯基、萘基、蒽基和菲基。除非另有说明，否则术语“芳基”不包括“杂芳基”。
[0057]“杂芳基”取代基或取代基中的杂芳基部分是指芳族杂环基团或部分。术语“杂芳基”包括单环芳族杂环和多环稠环芳族杂环，其中所有稠环系统(不包括作为任选取代基的一部分或由任选取代基形成的任何环系统)是芳族的。杂芳基基团/部分的实例包括以下各项：
[0058][0059]
其中g＝o、s或nh。
[0060]
出于本说明书的目的，在将多个部分的组合称为一个基团时，例如芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、烷基芳基、烯基芳基或炔基芳基，最后提到的部分含有如下原子，所述基团通过所述原子连接至分子的其余部分。芳基烷基的实例是苄基。
[0061]
出于本说明书的目的，在任选取代的基团或部分(诸如-r
β
)中：
[0062]
(i)每个氢原子可任选地被独立地选自以下的单价取代基替代：卤基；-cn；-no2；-n3；-r
x
；-oh；-or
x
；-r
y-卤基；-r
y-cn；-r
y-no2；-r
y-n3；-r
y-r
x
；-r
y-oh；-r
y-or
x
；-sh；-sr
x
；-sor
x
；-so2h；-so2r
x
；-so2nh2；-so2nhr
x
；-so2n(r
x
)2；-r
y-sh；-r
y-sr
x
；-r
y-sor
x
；-r
y-so2h；-r
y-so2r
x
；-r
y-so2nh2；-r
y-so2nhr
x
；-r
y-so2n(r
x
)2；-nh2；-nhr
x
；-n(r
x
)2；-n
+
(r
x
)3；-r
y-nh2；-r
y-nhr
x
；-r
y-n(r
x
)2；-r
y-n
+
(r
x
)3；-cho；-cor
x
；-cooh；-coor
x
；-ocor
x
；-r
y-cho；-r
y-cor
x
；-r
y-cooh；-r
y-coor
x
；或-r
y-ocor
x
；和/或
[0063]
(ii)连接至同一碳原子的任何两个氢原子可任选地被独立地选自氧代基(＝o)、＝s、＝nh或＝nr
x
的π键合取代基取代；和/或
[0064]
(iii)连接至同一任选取代的基团或部分内的相同或不同原子的任何两个氢原子可任选地被独立地选自-o-、-s-、-nh-、-n(r
x
)-、-n
+
(r
x
)
2-或-r
y-的桥联取代基替代；
[0065]
其中每个-r
y-独立地选自亚烷基、亚烯基或亚炔基，其中所述亚烷基、亚烯基或亚炔基在其主链中含有1至6个原子，其中所述亚烷基、亚烯基或亚炔基的主链中的一个或多个碳原子可任选地被一个或多个杂原子n、o或s替代，并且其中所述亚烷基、亚烯基或亚炔基可任选地被一个或多个卤基和/或
‑‑rx
基团取代；并且
[0066]
其中每个-r
x
独立地选自c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基或c
2-c6环状基团，或者其中连接至同一氮原子的任何两个或三个-r
x
可与它们所连接的氮原子一起形成c
2-c7环状基团，并且其中任何-r
x
可任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、-o(c
1-c4烷基)、-o(c
1-c4卤代烷基)、卤基、-oh、-nh2、-cn或氧代基(＝o)基团取代。
[0067]
通常，经取代的基团包含1、2、3或4个取代基，更通常1、2或3个取代基，更通常1或2个取代基，并且更通常1个取代基。
[0068]
除非另有说明，否则任选取代的基团或部分的任何二价桥联取代基(例如-o-、-s-、-nh-、-n(r
x
)-、-n
+
(r
x
)
2-或-r
y-)必须仅连接至指定的基团或部分并且可能不连接至第二基团或部分，即使第二基团或部分本身可任选地被取代。
[0069]
术语“卤基”包括氟、氯、溴和碘。
[0070]
除非另有说明，否则当基团以术语“卤基”为前缀时，诸如卤代烷基或卤代甲基，应理解，所讨论的基团被一个或多个独立地选自氟、氯、溴和碘的卤基取代。通常，卤基取代基的最大数目仅受不含卤基前缀的相应基团上可用于取代的氢原子数的限制。举例来说，卤代甲基可含有一个、两个或三个卤基取代基。卤代乙基或卤代苯基可含有一个、两个、三个、四个或五个卤基取代基。类似地，除非另有说明，否则当基团以特定卤基为前缀时，应理解所讨论的基团被一个或多个特定卤基取代。举例来说，术语“氟甲基”是指被一个、两个或三个氟基取代的甲基。
[0071]
除非另有说明，否则当称基团为“卤基取代的”时，应理解，所讨论的基团被一个或多个独立地选自氟、氯、溴和碘的卤基取代。通常，卤基取代基的最大数目仅受被称为卤基取代的基团上可用于取代的氢原子数的限制。举例来说，卤基取代的甲基可含有一个、两个或三个卤基取代基。卤基取代的乙基或卤基取代的苯基可含有一个、两个、三个、四个或五个卤基取代基。
[0072]
除非另有说明，否则任何对元素的提及应被视为对所述元素的所有同位素的提及。因此，例如，除非另有说明，否则任何对氢的提及应被视为涵盖氢的所有同位素，包括氘和氚。
[0073]
除非另有说明，否则任何对化合物或基团的提及应被视为对所述化合物或基团的所有互变异构体的提及。
[0074]
当提及在其碳骨架中包括一个或多个杂原子n、o、s、p或se的烃基或其它基团时，或者当提及烃基或其它基团的碳原子被n、o、s、p或se原子替代时，其意图是：
[0075]
被替代；
[0076]-ch
2-被-nh-、-ph-、-o-、-s-或-se-替代；
[0077]-ch3被-nh2、-ph2、-oh、-sh或-seh替代；
[0078]-ch＝被-n＝或-p＝替代；
[0079]
ch2＝被nh＝、ph＝、o＝、s＝或se＝替代；或
[0080]
ch≡被n≡或p≡替代；
[0081]
条件是所得基团包含至少一个碳原子。例如，甲氧基、二甲基氨基和氨基乙基被认为是在其碳骨架中包括一个或多个杂原子n、o、s、p或se的烃基。
[0082]
在本说明书的背景下，除非另有说明，否则c
x-cy基团被定义为含有x至y个碳原子的基团。举例来说，c
1-c4烷基被定义为含有1至4个碳原子的烷基。在计算被任选的取代基取代和/或含有任选的部分的母体基团中的碳原子总数时，不将任选的取代基和部分考虑在内。为避免疑义，在计算c
x-cy基团中的碳原子数时，不将替代杂原子(例如n、o、s、p或se)计数为碳原子。举例来说，吗啉基被认为是c6杂环基团而非c4杂环基团
[0083]
二氢卟吩环的π电子是离域的，并且因此二氢卟吩环可由多于一个共振结构描绘。共振结构是绘制同一化合物的不同方式。二氢卟吩环的两个共振结构直接在下文描绘：
[0084][0085]
通常，络合物包含称为配位中心的中心金属原子或离子和称为配体的结合分子或离子。在本说明书中，配位中心与配体之间的键被描绘为在左下方的络合物中所示(其中阴离子配体与中心金属阳离子之间的吸引力由四条虚线表示)，但等效地它可如右下方的络合物中所示描绘(其中配体分子与中心金属原子之间的吸引力由两个共价键和两条虚线表示)：
[0086][0087]
在本说明书的上下文中，术语“叶绿素蛋白类似物”涵盖本发明的化合物，其包括本发明的第二方面中的叶绿素蛋白游离酸。
[0088]
如本文所用，-[nc5h5]y是指：
[0089][0090]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，y是选自卤化物(例如氟化物、氯化物、溴化物或碘化物)或其它无机阴离子(例如硝酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐或磷酸盐)或有机阴离子(例如丙酸盐、丁酸盐、羟乙酸盐、乳酸盐、扁桃酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、半乳糖二酸盐、葡糖酸盐、泛酸盐、双羟萘酸盐、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯-对-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、樟脑磺酸盐、鸟氨酸盐、谷氨酸盐或天冬氨酸盐)。在一个实施方案中，y是氟化物、氯化物、溴化物或碘化物。在一个实施方案中，y是氯化物或溴化物。
[0091]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，x是选自氟、氯、溴或碘的卤基。在一个实施方案中，x是氯或溴。
[0092]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，m
2+
是选自zn
2+
、cu
2+
、fe
2+
、pd
2+
或pt
2+
的金属离子。在一个实施方案中，m
2+
是zn
2+
。
[0093]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，提供了一种式(i)化合物。
[0094]-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3、-c(o)-n(r3)2、-c(s)-or3、-c(s)-sr3或-c(s)-n(r3)2。在一个实施方案中，-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3、-c(o)-n(r3)2或-c(s)-n(r3)2。在一个实施方案中，-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3或-c(o)-n(r3)2。
[0095]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3、-c(o)-n(r3)2、-c(s)-or3、-c(s)-sr3或-c(s)-n(r3)2，并且每个-r3选自-r
α-or
β
、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
或-r
α-s(o)2r
β
，并且-r
β
是糖基(saccharidyl)。在一个实施方案中，-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3或-c(o)-n(r3)2，并且每个-r3选自-r
α-or
β
、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
或-r
α-s(o)2r
β
，并且-r
β
是糖基。在一个实施方案中，-r1选自-c(o)-or3或-c(o)-sr3，并且-r3选自-r
α-or
β
或-r
α-sr
β
，并且-r
β
是糖基。通常在这些实施方案中，-r
α-是c
1-c
12
亚烷基(优选c
1-c8亚烷基，或c
1-c6亚烷基)、-(ch2ch2o)
m-基团或-(ch2ch2s)
m-基团，全部任选地被取代，其中m是1、2、3或4。
[0096]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3、-c(o)-n(r3)(r3’
)或-c(s)-n(r3)(r3’
)，其中-r3选自-r
α-or
β
、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
或-r
α-s(o)2r
β
，并且-r
β
是糖基，并且-r3’
是h或c
1-c4烷基(优选甲基)。在一个实施方案中，-r1是-c(o)-n(r3)(r3’
)，其中-r3选自-r
α-or
β
、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
或-r
α-s(o)2r
β
，并且-r
β
是糖基，并且-r3’
是h或c
1-c4烷基(优选甲基)。在一个实施方案中，-r1是-c(o)-n(r3)(r3’
)，其中-r3选自-r
α-or
β
或-r
α-sr
β
，并且-r
β
是糖基，并且-r3’
是h或c
1-c4烷基(优选甲基)。通常在这些实施方案中，-r
α-是c
1-c
12
亚烷基(优选c
1-c8亚烷基，或c
1-c6亚烷基)、-(ch2ch2o)
m-基团或-(ch2ch2s)
m-基团，全部任选地被取代，其中m是1、2、3或4。
[0097]-r3'基团是指与另一个-r3基团连接至同一原子的-r3基团。-r3和-r3’
可相同或不同。优选地，-r3和-r3’
不同。
[0098]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3、-c
(o)-n(r3)(r3’
)或-c(s)-n(r3)(r3’
)，其中-r3选自-r
α-r
β
或-r
β
，并且-r
β
是糖基，并且-r3’
是h或c
1-c4烷基(优选甲基)。在一个实施方案中，-r1是-c(o)-n(r3)(r3’
)，其中-r3选自-r
α-r
β
或-r
β
，并且-r
β
是糖基，并且-r3’
是h或c
1-c4烷基(优选甲基)。通常在这些实施方案中，-r
α-是c
1-c
12
亚烷基(优选c
1-c8亚烷基，或c
1-c6亚烷基)、-(ch2ch2o)
m-基团或-(ch2ch2s)
m-基团，全部任选地被取代，其中m是1、2、3或4。
[0099]
在四个前述段落中的任何实施方案中，糖基可任选地被取代，例如，被诸如乙酰基的保护基团或诸如缬氨酸的天然氨基酸取代。氨基酸可例如通过在氨基酸的羧酸基团与糖基的羟基之间形成酯而连接至糖基。
[0100]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3、-c(o)-n(r3)(r3’
)或-c(s)-n(r3)(r3’
)，其中-r3选自-r
α-r
β
或-r
β
，并且-r
β
是任选地被一个或多个(诸如一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个)羟基取代的c
1-c8亚烷基，并且-r3’
是h或c
1-c4烷基(优选甲基)。在一个实施方案中，-r1是-c(o)-n(r3)(r3’
)，其中-r3选自-r
α-r
β
或-r
β
，并且-r
β
是任选地被一个或多个(诸如一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个)羟基取代的c
1-c8亚烷基，并且-r3’
是h或c
1-c4烷基(优选甲基)。通常在这些实施方案中，-r
α-是未取代的c
1-c6亚烷基、或未取代的c
1-c4亚烷基、或未取代的c
1-c2亚烷基。
[0101]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3、-c(o)-n(r3)(r3’
)或-c(s)-n(r3)(r3’
)；其中-r3选自-r
α-h或-r
α-oh；-r
α-选自c
1-c
12
亚烷基，其中所述亚烷基可任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基或卤基取代，并且其中所述亚烷基的主链中的一个或多个碳原子可任选地被一个或多个杂原子o或s替代；并且-r3’
是h或c
1-c4烷基(优选甲基)。在一个实施方案中，-r1是-c(o)-n(r3)(r3’
)；其中-r3选自-r
α-h或-r
α-oh；-r
α-选自c
1-c
12
亚烷基，其中所述亚烷基的主链中的一个或多个碳原子可任选地被一个或多个杂原子o或s替代；并且-r3’
是h或c
1-c4烷基(优选甲基)。
[0102]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3、-c(o)-n(r3)(r3’
)或-c(s)-n(r3)(r3’
)；其中-r3是-r
β
；-r
β
是任选地被一个或多个(诸如一个、两个、三个、四个或五个)独立地选自卤基、-cn、-no2、-n3、-oh、-or
x
、-sh、-sr
x
、-sor
x
、-so2h、-so2r
x
、-so2nh2、-so2nhr
x
、-so2n(r
x
)2、-nh2、-nhr
x
、-n(r
x
)2、-n
+
(r
x
)3、-cho、-cor
x
、-cooh、-coor
x
、-ocor
x
或-nh-co-cr
z-nh2的取代基取代的c
1-c
12
烷基；每个-r
x
独立地选自c
1-c4烷基；-rz是天然氨基酸的侧链；并且-r3'是h或c
1-c4烷基(优选甲基)。在一个实施方案中，-r1是-c(o)-n(r3)(r3’
)；其中-r3是-r
β
；-r
β
是任选地被一个或多个(诸如一个、两个或三个)独立地选自卤基、-cn、-no2、-n3、-oh、-or
x
、-sh、-sr
x
、-sor
x
、-so2h、-so2r
x
、-so2nh2、-so2nhr
x
、-so2n(r
x
)2、-nh2、-nhr
x
、-n(r
x
)2、-n
+
(r
x
)3、-cho、-cor
x
、-cooh、-coor
x
、-ocor
x
或-nh-co-cr
z-nh2的取代基取代的c
1-c8烷基；每个-r
x
独立地选自c
1-c4烷基；-rz是天然氨基酸的侧链；并且-r3'是h或c
1-c4烷基(优选甲基)。
[0103]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3、-c(o)-n(r3)(r3’
)或-c(s)-n(r3)(r3’
)；其中-r3是-r
α-[p(r5)3]y；每个-r5独立地选自苯基或c
5-c6杂芳基，其中所述苯基或c
5-c6杂芳基可任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、-o(c
1-c4烷基)、-o(c
1-c4卤代烷基)、卤基、-o-(ch2ch2o)
n-h或-o-(ch2ch2o)
n-ch3基团取代；n是1、2、3或4；y是氟化物、氯化物、溴化物或碘化物；并且-r3'是h或c
1-c4烷基(优选甲基)。在一个实施方案中，-r1是-c(o)-n(r3)(r3’
)；其中-r3是-r
α-[p(r5)3]y；每个-r5独立地
选自苯基或c
5-c6杂芳基，其中所述苯基或c
5-c6杂芳基可任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、-o(c
1-c4烷基)、-o(c
1-c4卤代烷基)、卤基、-o-(ch2ch2o)
n-h或-o-(ch2ch2o)
n-ch3基团取代；n是1、2、3或4；y是氟化物、氯化物、溴化物或碘化物；并且-r3'是h或c
1-c4烷基(优选甲基)。通常在这些实施方案中，-r
α-是c
1-c
12
亚烷基(优选c
1-c8亚烷基，或c
1-c6亚烷基)、-(ch2ch2o)
m-基团或-(ch2ch2s)
m-基团，全部任选地被取代，其中m是1、2、3或4。
[0104]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，-r1是-c(o)-or3，其中-r3选自c
1-c4烷基(优选甲基)或阳离子(诸如锂、钠、钾、镁、钙、铵、胺(诸如胆碱或葡甲胺)或氨基酸(诸如精氨酸)阳离子)。
[0105]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，-r1是-c(o)-n(r3)2。在一个实施方案中，-r1是-c(o)-n(c
1-c4烷基)(r3)或-c(o)-nhr3。在一个实施方案中，-r1是-c(o)-n(ch3)(r3)或-c(o)-nhr3。在一个实施方案中，-r1是-c(o)-n(c
1-c4烷基)(r3)。在一个实施方案中，-r1是-c(o)-n(ch3)(r3)。
[0106]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，每个-r
α-独立地是c
1-c
12
亚烷基、-(ch2ch2o)
m-基团或-(ch2ch2s)
m-基团，全部任选地被取代，其中m是1、2、3或4。在一个实施方案中，每个-r
α-独立地是c
1-c
12
亚烷基或-(ch2ch2o)
m-基团，两者均任选地被取代，其中m是1、2、3或4。在一个实施方案中，每个-r
α-独立地是任选取代的-(ch2ch2o)
m-基团，其中m是1、2、3或4。
[0107]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，每个-r
α-独立地是c
1-c8亚烷基、或c
1-c6亚烷基、或c
2-c4亚烷基，全部任选地被取代。
[0108]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，每个-r
α-独立地未被取代或被一个或多个独立地选自卤基、c
1-c4烷基或c
1-c4卤代烷基的取代基取代。在一个实施方案中，每个-r
α-独立地未被取代或被一个或两个独立地选自卤基、c
1-c4烷基或c
1-c4卤代烷基的取代基取代。在一个实施方案中，每个-r
α-未被取代。
[0109]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，每个-r
β
独立地是饱和或不饱和的烃基，其中所述烃基可以是直链的或支链的，或者可以是或包括环状基团，其中所述烃基可任选地被取代，并且其中所述烃基可任选地在其碳骨架中包括一个或多个杂原子n、o或s。
[0110]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，至少一个-r
β
独立地是c
1-c6烷基、或c
1-c4烷基、或甲基，全部任选地被取代。在一个实施方案中，每个-r
β
独立地是c
1-c6烷基、或c
1-c4烷基、或甲基，全部任选地被取代。
[0111]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，至少一个-r
β
独立地是糖基。在一个实施方案中，每个-r
β
独立地是糖基。
[0112]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，每个-r
β
独立地未被取代或被一个或多个独立地选自卤基、c
1-c4烷基或c
1-c4卤代烷基的取代基取代。在一个实施方案中，每个-r
β
独立地未被取代或被一个或两个独立地选自卤基、c
1-c4烷基或c
1-c4卤代烷基的取代基取代。在一个实施方案中，每个-r
β
未被取代。
[0113]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，每个-r3独立地选自-r
α-h、-r
β
、-r
α-r
β
、-r
α-oh、-r
α-or
β
、-r
α-sh、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
、-r
α-s(o)2r
β
、-r
α-nh2、-r
α-nh(r
β
)、-r
α-n
(r
β
)2、-r
α-x、-r
α-[n(r5)3]y、-r
α-[p(r5)3]y或-r
α-[nc5h5]y。在一个实施方案中，每个-r3独立地选自-r
α-or
β
、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
或-r
α-s(o)2r
β
。在一个实施方案中，每个-r3独立地选自-r
α-or
β
、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
或-r
α-s(o)2r
β
，并且-r
β
是糖基。在一个实施方案中，每个-r3独立地选自-r
α-or
β
或-r
α-sr
β
。在一个实施方案中，每个-r3独立地选自-r
α-or
β
或-r
α-sr
β
，并且-r
β
是糖基。
[0114]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，至少一个-r3独立地选自-r
α-or
β
、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
或-r
α-s(o)2r
β
，并且-r
β
是糖基。在一个实施方案中，至少一个-r3独立地选自-r
α-or
β
或-r
α-sr
β
，并且-r
β
是糖基。
[0115]
出于本发明的目的，“糖基”是包含至少一个单糖亚基的任何基团，其中每个单糖亚基可任选地被取代和/或修饰。通常，糖基由一个或多个单糖亚基组成，其中每个单糖亚基可任选地被取代和/或修饰。
[0116]
通常，每个糖基的单个单糖亚基的碳原子直接(最通常经由单键)连接至化合物的其余部分。
[0117]
出于本说明书的目的，在陈述第一原子或基团“直接连接”至第二原子或基团的情况下，应理解，第一原子或基团共价键合至第二原子或基团，不存在一个或多个居间原子或基团。例如，对于基团-(c＝o)n(ch3)2，每个甲基的碳原子直接连接至氮原子并且羰基的碳原子直接连接至氮原子，但羰基的碳原子不直接连接至任一甲基的碳原子。
[0118]
通常，每个糖基通过用化合物的其余部分所定义的基团取代糖的羟基而衍生自相应的糖。
[0119]
单糖亚基的异头碳与取代基之间的单键被称为糖苷键。糖苷基团通过糖苷键连接至单糖亚基的异头碳。糖基与化合物的其余部分之间的键可以是糖苷键或非糖苷键。通常，糖基与化合物的其余部分之间的键是糖苷键，使得糖基(saccharidyl group)是糖基(glycosyl group)。当糖基与化合物的其余部分之间的键是糖苷键时，糖苷键可呈α或β构型。通常，这种糖苷键呈β构型。
[0120]
出于本发明的目的，当糖基“含有x个单糖亚基”时，这意味着糖基具有x个单糖亚基且不多于x个单糖亚基。。相比之下，当糖基“包含x个单糖亚基”时，这意味着糖基具有x个或更多个单糖亚基。
[0121]
每个糖基可独立地选自单糖基、二糖基、寡糖基或多糖基。如将理解的，单糖基含有单个单糖亚基。类似地，二糖基含有两个单糖亚基。如本文所用，“寡糖基”含有2至9个单糖亚基。寡糖基的实例包括三糖基、四糖基、五糖基、六糖基、七糖基、八糖基和九糖基。如本文所用，“多糖基”含有10个或更多个单糖亚基(诸如10-50、或10-30、或10-20、或10-15个单糖亚基)。
[0122]
二糖基、寡糖基或多糖基内的每个单糖亚基可相同或不同。二糖基、寡糖基或多糖基内的每个单糖亚基可经由糖苷键或非糖苷键连接至所述基团内的另一个单糖亚基。通常，二糖基、寡糖基或多糖基内的每个单糖亚基经由糖苷键连接至所述基团内的另一个单糖亚基，所述糖苷键可呈α或β构型。
[0123]
每个寡糖基或多糖基可以是直链、支链或大环寡糖基或多糖基。通常，每个寡糖基或多糖基是直链或支链寡糖基或多糖基。
[0124]
在一个实施方案中，至少一个-r
β
是单糖基或二糖基。
co-n(rb)2替代；和/或
[0135]
(b)直接连接至单糖基或单糖亚基的碳原子的一个、两个或三个氢原子各自独立地被-f、-cl、-br、-i、-cf3、-ccl3、-cbr3、-ci3、-oh、-sh、-nh2、-n3、-nh＝nh2、-cn、-no2、-cooh、-rb、-o-rb、-s-rb、-r
a-o-rb、-r
a-s-rb、-so-rb、-so
2-rb、-so
2-orb、-o-so-rb、-o-so
2-rb、-o-so
2-orb、-nr
b-so-rb、-nr
b-so
2-rb、-nr
b-so
2-orb、-r
a-so-rb、-r
a-so
2-rb、-r
a-so
2-orb、-so-n(rb)2、-so
2-n(rb)2、-o-so-n(rb)2、-o-so
2-n(rb)2、-nr
b-so-n(rb)2、-nr
b-so
2-n(rb)2、-r
a-so-n(rb)2、-r
a-so
2-n(rb)2、-n(rb)2、-n(rb)
3+
、-r
a-n(rb)2、-r
a-n(rb)
3+
、-p(rb)2、-po(rb)2、-op(rb)2、-opo(rb)2、-r
a-p(rb)2、-r
a-po(rb)2、-osi(rb)3、-r
a-si(rb)3、-co-rb、-co-orb、-co-n(rb)2、-o-co-rb、-o-co-orb、-o-co-n(rb)2、-nr
b-co-rb、-nr
b-co-orb、-nr
b-co-n(rb)2、-r
a-co-rb、-r
a-co-orb或-r
a-co-n(rb)2替代；和/或
[0136]
(c)单糖基或单糖亚基的一个或多个羟基，连同与羟基连接至同一碳原子上的氢，各自独立地被＝o、＝s、＝nrb或＝n(rb)
2+
替代；和/或
[0137]
(d)单糖基或单糖亚基的任何两个羟基一起被-or
c-、-sr
c-、-so-r
c-、-so
2-r
c-或-nr
b-r
c-替代；
[0138]
其中：
[0139]
每个-r
a-独立地是取代的或未取代的亚烷基、亚烯基或亚炔基，所述基团任选地在其碳骨架中包括一个或多个各自独立地选自o、n和s的杂原子并且优选地包含1-10个碳原子；
[0140]
每个-rb独立地是氢，或取代的或未取代的直链、支链或环状烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、烷基芳基、烯基芳基或炔基芳基，所述基团任选地在其碳骨架中包括一个或多个各自独立地选自o、n和s的杂原子并且优选地包含1-15个碳原子；并且
[0141]
每个-r
c-独立地是化学键，或取代的或未取代的亚烷基、亚烯基或亚炔基，所述基团任选地在其碳骨架中包括一个或多个各自独立地选自o、n和s的杂原子并且优选地包含1-10个碳原子；
[0142]
条件是所述单糖基或单糖亚基包含至少一个、优选至少两个或至少三个-oh、-o-rb、-o-so-rb、-o-so
2-rb、-o-so
2-orb、-o-so-n(rb)2、-o-so
2-n(rb)2、-op(rb)2、-opo(rb)2、-osi(rb)3、-o-co-rb、-o-co-orb、-o-co-n(rb)2或-o-r
c-。
[0143]
通常，在经取代的单糖基或单糖亚基中：
[0144]
(a)单糖基或单糖亚基的一个或多个羟基各自独立地被-h、-f、-cf3、-sh、-nh2、-n3、-cn、-no2、-cooh、-rb、-o-rb、-s-rb、-n(rb)2、-opo(rb)2、-osi(rb)3、-o-co-rb、-o-co-orb、-o-co-n(rb)2、-nr
b-co-rb、-nr
b-co-orb或-nr
b-co-n(rb)2替代；和/或
[0145]
(b)直接连接至单糖基或单糖亚基的碳原子的一个或两个氢原子各自独立地被-f、-cf3、-oh、-sh、-nh2、-n3、-cn、-no2、-cooh、-rb、-o-rb、-s-rb、-n(rb)2、-opo(rb)2、-osi(rb)3、-o-co-rb、-o-co-orb、-o-co-n(rb)2、-nr
b-co-rb、-nr
b-co-orb或-nr
b-co-n(rb)2替代；和/或
[0146]
(c)单糖基或单糖亚基的一个羟基，连同与羟基连接至同一碳原子上的氢，被＝o替代；和/或
[0147]
(d)单糖基或单糖亚基的任何两个羟基一起被-o-r
c-或-nr
b-r
c-替代；
[0148]
其中：
[0149]
每个-rb独立地是氢，或取代的或未取代的直链、支链或环状烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、烷基芳基、烯基芳基或炔基芳基，所述基团任选地在其碳骨架中包括一个、两个或三个各自独立地选自o和n的杂原子并且包含1-8个碳原子；并且
[0150]
每个-r
c-独立地是取代的或未取代的亚烷基、亚烯基或亚炔基，所述基团任选地在其碳骨架中包括一个、两个或三个各自独立地选自o和n的杂原子并且包含1-8个碳原子；
[0151]
条件是单糖基或单糖亚基包含至少两个、优选至少三个-oh、-o-rb、-opo(rb)2、-osi(rb)3、-o-co-rb、-o-co-orb、-o-co-n(rb)2或-o-r
c-。
[0152]
在一个实施方案中，-r
β
是糖基并且糖基的一个或多个羟基各自独立地被-o-co-rb替代，其中每个-rb独立地是c
1-c4烷基，优选甲基。在一个实施方案中，-r
β
是糖基并且糖基的所有羟基各自独立地被-o-co-rb替代，其中每个-rb独立地是c
1-c4烷基，优选甲基。
[0153]
在经修饰的单糖基或单糖亚基中：
[0154]
(a)经修饰的单糖基或单糖亚基的环或经修饰的单糖基或单糖亚基的闭环形式中的环是部分不饱和的；和/或
[0155]
(b)经修饰的单糖基或单糖亚基的环氧或经修饰的单糖基或单糖亚基的闭环形式中的环氧被-s-或-nr
d-替代，其中-rd独立地是氢，或取代的或未取代的直链、支链或环状烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、烷基芳基、烯基芳基或炔基芳基，所述基团任选地在其碳骨架中包括一个或多个各自独立地选自o、n和s的杂原子并且优选地包含1-15个碳原子。
[0156]
或者，在经修饰的单糖亚基形成二糖基、寡糖基或多糖基的一部分的情况下，-rd可以是形成二糖基、寡糖基或多糖基的一部分的另外的一个或多个单糖亚基，其中任何这样的另外的一个或多个单糖亚基可任选地被替代和/或修饰。
[0157]
通常，在经修饰的单糖基或单糖亚基中：
[0158]
(a)经修饰的单糖基或单糖亚基的环或经修饰的单糖基或单糖亚基的闭环形式中的环含有单个c＝c；和/或
[0159]
(b)经修饰的单糖基或单糖亚基的环氧或经修饰的单糖基或单糖亚基的闭环形式中的环氧被-nr
d-替代，其中-rd独立地是氢，或取代的或未取代的直链、支链或环状烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、烷基芳基、烯基芳基或炔基芳基，所述基团任选地在其碳骨架中包括一个、两个或三个各自独立地选自o和n的杂原子并且包含1-8个碳原子。
[0160]
经取代的和/或经修饰的单糖亚基的典型实例包括对应于以下的那些：
[0161]
(i)脱氧糖，诸如脱氧核糖、岩藻糖、墨角藻糖和鼠李糖，其中单糖基或单糖亚基的羟基已被-h替代；
[0162]
(ii)氨基糖，诸如葡糖胺和半乳糖胺，其中单糖基或单糖亚基的羟基已被-nh2替代，最通常在2-位置；以及
[0163]
(iii)含有-cooh基团的糖酸，诸如醛糖酸(例如葡糖酸)、酮糖酸、糖醛酸(例如葡糖醛酸)和醛糖二酸(例如葡萄糖二酸(gularic)或半乳糖二酸)。
[0164]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，至少一个-r
β
是选自以下的单糖基。
[0165][0166]
优选地，在根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物中，至少一个-r
β
是：
[0167][0168]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，至少一个-r3独立地选自-r
α-or
β
、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
或-r
α-s(o)2r
β
(优选地选自-r
α-or
β
或-r
α-sr
β
)，并且-r
β
选自：
[0169]
[0170][0171]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，至少一个-r3独立地选自-r
α-[n(r5)3]y、-r
α-[p(r5)3]y或-r
α-[r6]y。在一个实施方案中，至少一个-r3独立地选自：
[0172][0173]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，每个-r5独立地未被取代或被一个或两个取代基取代。在一个实施方案中，每个-r5未被取代。
[0174]
在本发明的第一或第二方面的一个实施方案中，-r6未被取代或被一个或两个取代基取代。在一个实施方案中，-r6未被取代。
[0175]
在一个实施方案中，-r6在吡啶环的4-位置未被卤基取代。在一个实施方案中，-r6在吡啶环的4-位置未被取代。在一个实施方案中，-r6未被取代。
[0176]
优选地，在根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物中，所述化合物或络合物是：
[0177][0178]
其中y是抗衡离子，并且q是0、1、2、3或4(优选地q是1)；
[0179]
或其络合物或药学上可接受的盐。
[0180]
优选地，在根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物中，所述化合物或络合物是：
[0181]
[0182]
[0183]
[0184]
[0185]
[0186]
[0187]
[0188]
[0189]
[0190][0191]
或其络合物或药学上可接受的盐。
[0192]
在一个实施方案中，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物呈药学上可接受的盐的形式。在一个实施方案中，化合物或络合物呈无机盐，诸如锂盐、钠盐、钾盐、镁盐、钙盐或铵盐的形式。在一个实施方案中，化合物或络合物呈钠盐或钾盐的形式。在一个实施方案中，化合物或络合物呈钠盐的形式。在另一个实施方案中，化合物或络合物呈有机盐，诸如胺盐(例如胆碱或葡甲胺盐)或氨基酸盐(例如精氨酸盐)的形式。
[0193]
在一个实施方案中，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物是呈药学上可接受的盐形式的叶绿素蛋白。在一个实施方案中，化合物或络合物是呈药学上可接受的无机盐，诸如锂盐、钠盐、钾盐、镁盐、钙盐或铵盐形式的叶绿素蛋白。在一个实施方案中，化合物或络合物是叶绿素蛋白单钠或叶绿素蛋白单钾。在一个实施方案中，化合物或络合物是叶绿素蛋白单钠。在另一个实施方案中，化合物或络合物是呈药学上可接受的有机盐，诸如胺盐(例如胆碱或葡甲胺盐)或氨基酸盐(例如精氨酸盐)形式的叶绿素蛋白。
[0194]
根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物具有至少两个手性中心。本发明的第一或第二方面的化合物或络合物优选基本上是对映异构纯的，这意味着如通过xrpd或sfc所测量，化合物包含少于10重量％、优选少于5重量％、优选少于3重量％、优选少于2重量％、优选少于1重量％、优选少于0.5重量％的其它立体异构体。
[0195]
优选地，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物具有大于97％、更优选大于98％、更优选大于99％、更优选大于99.5％、更优选大于99.8％且最优选大于99.9％的hplc纯度。如本文所用，百分比hplc纯度通过面积归一化方法来测量。
[0196]
本发明的第三方面提供一种组合物，所述组合物包含根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
[0197]
在一个实施方案中，根据本发明的第三方面的组合物还包含聚乙烯吡咯烷酮(pvp)。在一个实施方案中，组合物包含作为组合物总重量的百分比的0.01％-10％w/w pvp，优选作为组合物总重量的百分比的0.1％-5％w/w pvp，优选作为组合物总重量的百分比的0.5％-5％w/w pvp。在一个实施方案中，pvp是k30。
[0198]
在一个实施方案中，根据本发明的第三方面的组合物还包含二甲基亚砜(dmso)。在一个实施方案中，组合物包含作为组合物总重量的百分比的0.01％-99％w/w dmso，优选作为组合物总重量的百分比的40％-99％w/w dmso，优选作为组合物总重量的百分比的65％-99％w/w dmso。
[0199]
在一个实施方案中，根据本发明的第三方面的组合物还包含免疫检查点抑制剂。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是pd-1(程序性细胞死亡蛋白1)、pd-l1(程序性死亡配体1)或ctla4(细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4)的抑制剂。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂选自派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗或伊匹单抗。
[0200]
优选地，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物以及根据本发明的第三方面的药物组合物适合用于光动力疗法或细胞发光疗法中。
[0201]
优选地，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物以及根据本发明的第三方面的药物组合物适合于治疗动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌(oral or mouth cancer)；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻
咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。
[0202]
优选地，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物以及根据本发明的第三方面的药物组合物适合于治疗以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病。
[0203]
优选地，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物以及根据本发明的第三方面的药物组合物适合于治疗良性或恶性肿瘤。
[0204]
优选地，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物以及根据本发明的第三方面的药物组合物适合于治疗早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。
[0205]
优选地，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物以及根据本发明的第三方面的药物组合物适合用于光动力诊断中。
[0206]
优选地，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物以及根据本发明的第三方面的药物组合物适合于检测动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。
[0207]
优选地，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物以及根据本发明的第三方面的药物组合物适合于检测受良性或恶性细胞过度增殖或受新血管形成影响的区域。
[0208]
优选地，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物以及根据本发明的第三方面的药物组合物适合于检测良性或恶性肿瘤。
[0209]
优选地，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物以及根据本发明的第三方面的药物组合物适合于检测早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。
[0210]
优选地，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物以及根据本发明的第三方面的药物组合物适合于荧光或磷光检测上文所列的疾病，优选用于荧光或磷光检测和定
量所述疾病。
[0211]
优选地，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物以及根据本发明的第三方面的药物组合物适于在施用照射或声音同时或之前施用，优选适于在施用照射之前施用。
[0212]
如果根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物或根据本发明的第三方面的药物组合物用于光动力疗法或细胞发光疗法中，则它们优选适于在照射前5至100小时、优选在照射前6至72小时、优选在照射前24至48小时施用。
[0213]
如果根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物或根据本发明的第三方面的药物组合物用于光动力诊断中，则它们优选适于在照射前3至60小时、优选在照射前8至40小时施用。
[0214]
优选地，用于光动力疗法、细胞发光疗法或光动力诊断中的照射是波长在500nm至1000nm、优选550nm至750nm、优选600nm至700nm、优选640nm至670nm范围内的电磁辐射。可以约0.1-5w、优选以约1w施用电磁辐射持续约5-60分钟，优选持续约15-20分钟。在本发明的一个实施方案中，使用了两个电磁辐射源(例如激光和led灯)，两个源均适于提供波长在550nm至750nm、优选600nm至700nm、优选640nm至670nm范围内的照射。在本发明的另一个实施方案中，照射可由用于插入体腔中的前列腺、肛门、阴道、口和鼻装置提供。在本发明的另一个实施方案中，可通过间质光激活来提供照射，例如使用细针将光纤激光器插入肺、肝、淋巴结或乳房中。在本发明的另一个实施方案中，可通过内窥镜光激活来提供照射，例如用于将光递送至肺、胃、结肠、膀胱或颈部。
[0215]
根据本发明的第三方面的药物组合物可呈适合于口服、肠胃外(包括静脉内、皮下、肌内、皮内、气管内、腹膜内、肿瘤内、关节内、腹内、颅内和硬膜外)、经皮、气道(气雾剂)、直肠、阴道或局部(包括经颊、粘膜和舌下)施用的形式。药物组合物也可呈适合于通过灌肠剂施用或通过注射至肿瘤中施用的形式。优选地，药物组合物呈适合于口服、肠胃外(诸如静脉内、腹膜内和肿瘤内)或气道施用的形式，优选地呈适合于口服或肠胃外施用的形式，优选地呈适合于口服施用的形式。
[0216]
在一个优选的实施方案中，药物组合物呈适合于口服施用的形式。优选地，药物组合物以片剂、胶囊、硬或软明胶胶囊、囊片、糖锭剂或锭剂的形式提供，以粉末或颗粒形式提供，或以水溶液、悬浮液或分散液形式提供。更优选地，药物组合物以用于口服施用的水溶液、悬浮液或分散液的形式提供，或者可替代地以冻干粉末的形式提供，所述冻干粉末可在施用前与水混合以提供用于口服施用的水溶液、悬浮液或分散液。优选地，药物组合物呈适合于提供0.01至10mg/kg/天、优选0.1至2mg/kg/天、优选约1mg/kg/天的根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物的形式。
[0217]
在另一个优选的实施方案中，药物组合物呈适合于肠胃外施用的形式。优选地，药物组合物呈适合于静脉内施用的形式。优选地，药物组合物以用于肠胃外施用的水溶液形式提供，或者可替代地以冻干粉末的形式提供，所述冻干粉末可在施用前与水混合以提供用于肠胃外施用的水溶液。优选地，药物组合物是具有6至8.5的ph的水溶液或悬浮液。优选地，药物组合物呈适合于提供0.01至10mg/kg/天、优选0.1至2mg/kg/天、优选约1mg/kg/天的根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物的形式。
[0218]
在另一个优选的实施方案中，药物组合物呈适合于气道施用的形式。优选地，药物
组合物以用于气道施用的水溶液、悬浮液或分散液的形式提供，或者可替代地以冻干粉末的形式提供，所述冻干粉末可在施用前与水混合以提供用于气道施用的水溶液、悬浮液或分散液。优选地，药物组合物呈适合于提供0.01至10mg/kg/天、优选0.1至2mg/kg/天、优选约1mg/kg/天的根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物的形式。
[0219]
本发明的第四方面提供根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物在制造用于治疗以下疾病的药剂中的用途：动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。
[0220]
本发明的第四方面还提供根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物在制造用于光动力疗法或细胞发光疗法的光治疗剂中的用途。优选地，光治疗剂适合于治疗动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。
[0221]
优选地，本发明的第四方面的药剂或光治疗剂适合于治疗以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病。
[0222]
优选地，本发明的第四方面的药剂或光治疗剂适合于治疗良性或恶性肿瘤。
[0223]
优选地，本发明的第四方面的药剂或光治疗剂适合于治疗治疗早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。
[0224]
本发明的第四方面还提供根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物在制造用于光动力诊断的光诊断剂中的用途。
[0225]
优选地，本发明的第四方面的光诊断剂适合于检测动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。
[0226]
优选地，本发明的第四方面的光诊断剂适合于检测受良性或恶性细胞过度增殖或受新血管形成影响的区域。
[0227]
优选地，本发明的第四方面的光诊断剂适合于检测良性或恶性肿瘤。
[0228]
优选地，本发明的第四方面的光诊断剂适合于检测早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。
[0229]
优选地，本发明的第四方面的光诊断剂适合于荧光或磷光检测所述疾病，优选荧光或磷光检测和定量所述疾病。
[0230]
优选地，药剂、光治疗剂或光诊断剂适于在施用照射或声音同时或之前施用，优选地适于在施用照射之前施用。
[0231]
如果药剂或光治疗剂用于光动力疗法或细胞发光疗法中，则其优选适于在照射前5至100小时、优选在照射前6至72小时、优选在照射前24至48小时施用。
[0232]
如果光诊断剂用于光动力诊断中，则其优选适于在照射前3至60小时、优选在照射前8至40小时施用。
[0233]
优选地，用于光动力疗法、细胞发光疗法或光动力诊断中的照射是波长在500nm至1000nm、优选550nm至750nm、优选600nm至700nm、优选640nm至670nm范围内的电磁辐射。可以约0.1-5w、优选以约1w施用电磁辐射持续约5-60分钟，优选持续约15-20分钟。在本发明的一个实施方案中，使用了两个电磁辐射源(例如激光和led灯)，两个源均适于提供波长在550nm至750nm、优选600nm至700nm、优选640nm至670nm范围内的照射。在本发明的另一个实施方案中，照射可由用于插入体腔中的前列腺、肛门、阴道、口和鼻装置提供。在本发明的另一个实施方案中，可通过间质光激活来提供照射，例如使用细针将光纤激光器插入肺、肝、淋巴结或乳房中。在本发明的另一个实施方案中，可通过内窥镜光激活来提供照射，例如用于将光递送至肺、胃、结肠、膀胱或颈部。
[0234]
本发明的第五方面提供一种治疗动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾
病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌的方法；所述方法包括向有需要的人或动物施用治疗有效量的根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物。
[0235]
本发明的第五方面还提供一种人或动物疾病的光动力疗法或细胞发光疗法的方法，所述方法包括向有需要的人或动物施用治疗有效量的根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物。优选地，人或动物疾病是动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。
[0236]
优选地，本发明的第五方面的方法是治疗良性或恶性细胞过度增殖或新血管形成区域的方法。
[0237]
优选地，本发明的第五方面的方法是治疗良性或恶性肿瘤的方法。
[0238]
优选地，本发明的第五方面的方法是治疗早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌的方法。
[0239]
本发明的第五方面还提供一种人或动物疾病的光动力诊断的方法，所述方法包括向人或动物施用诊断有效量的根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物。优选地，人或动物疾病是动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或
恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。优选地，人或动物疾病以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征。优选地，人或动物疾病是良性或恶性肿瘤。优选地，人或动物疾病是早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。优选地，光动力诊断的方法适合于荧光或磷光检测所述疾病，优选适合于荧光或磷光检测和定量所述疾病。
[0240]
在本发明的第五方面的任何方法中，人或动物优选地在施用根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合同时或之后进一步经受照射或声音。优选地，在施用根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物之后对人或动物进行照射。
[0241]
如果方法是光动力疗法或细胞发光疗法的方法，则优选地在施用根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物后5至100小时、优选施用后6至72小时、优选施用后24至48小时对人或动物进行照射。
[0242]
如果方法是光动力诊断的方法，则优选地在施用根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物后3至60小时、优选施用后8至40小时对人或动物进行照射。
[0243]
优选地，照射是波长在500nm至1000nm、优选550nm至750nm、优选600nm至700nm、优选640nm至670nm范围内的电磁辐射。可以约0.1-5w、优选以约1w施用电磁辐射持续约5-60分钟，优选持续约15-20分钟。在本发明的一个实施方案中，使用了两个电磁辐射源(例如激光和led灯)，两个源均适于提供波长在550nm至750nm、优选600nm至700nm、优选640nm至670nm范围内的照射。在本发明的另一个实施方案中，照射可由用于插入体腔中的前列腺、肛门、阴道、口和鼻装置提供。在本发明的另一个实施方案中，可通过间质光激活来提供照射，例如使用细针将光纤激光器插入肺、肝、淋巴结或乳房中。在本发明的另一个实施方案中，可通过内窥镜光激活来提供照射，例如用于将光递送至肺、胃、结肠、膀胱或颈部。
[0244]
在本发明的第五方面的任何方法中，优选地人或动物是人。
[0245]
本发明的第六方面提供一种药物组合，所述药物组合包含：
[0246]
(a)根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物；以及
[0247]
(b)免疫检查点抑制剂。
[0248]
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是pd-1(程序性细胞死亡蛋白1)、pd-l1(程序性死亡配体1)或ctla4(细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4)的抑制剂。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂选自派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗或伊匹单抗。
[0249]
优选地，第六方面的组合用于治疗疾病、病症或疾患，其中所述疾病、病症或疾患对pd-1、pd-l1或ctla4抑制有反应。优选地，第六方面的组合用于治疗癌症。在一个实施方
案中，癌症是黑素瘤、肺癌(例如非小细胞肺癌)、肾癌、膀胱癌、头颈癌或霍奇金淋巴瘤。
[0250]
第六方面还提供本发明的第六方面的组合在制造用于治疗对pd-1、pd-l1或ctla4抑制有反应的疾病、病症或疾患的药剂中的用途。第六方面还提供本发明的第六方面的组合在制造用于治疗癌症的药剂中的用途。在一个实施方案中，癌症是黑素瘤、肺癌(例如非小细胞肺癌)、肾癌、膀胱癌、头颈癌或霍奇金淋巴瘤。
[0251]
本发明的第六方面还提供一种治疗对pd-1、pd-l1或ctla4抑制有反应的疾病、病症或疾患的方法，所述方法包括向有需要的人或动物施用治疗有效量的本发明的第六方面的组合。本发明的第六方面还提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的人或动物施用治疗有效量的本发明的第六方面的组合。在一个实施方案中，癌症是黑素瘤、肺癌(例如非小细胞肺癌)、肾癌、膀胱癌、头颈癌或霍奇金淋巴瘤。
[0252]
对于本发明的第六方面的组合，根据本发明的第一或第二方面的化合物或络合物和免疫检查点抑制剂可一起提供于一种药物组合物中或分别提供于两种药物组合物中。如果提供于两种药物组合物中，则这些可同时或在不同时间施用。
[0253]
优选地，第六方面的组合适于在施用照射或声音同时或之前施用，优选地适于在施用照射之前施用。在一个实施方案中，第六方面的组合适于在照射前5至100小时、优选照射前6至72小时、优选照射前24至48小时施用。
[0254]
优选地，用于光动力疗法或细胞发光疗法中的照射是波长在500nm至1000nm、优选550nm至750nm、优选600nm至700nm、优选640nm至670nm范围内的电磁辐射。可以约0.1-5w、优选以约1w施用电磁辐射持续约5-60分钟，优选持续约15-20分钟。在本发明的一个实施方案中，使用了两个电磁辐射源(例如激光和led灯)，两个源均适于提供波长在550nm至750nm、优选600nm至700nm、优选640nm至670nm范围内的照射。在本发明的另一个实施方案中，照射可由用于插入体腔中的前列腺、肛门、阴道、口和鼻装置提供。在本发明的另一个实施方案中，可通过间质光激活来提供照射，例如使用细针将光纤激光器插入肺、肝、淋巴结或乳房中。在本发明的另一个实施方案中，可通过内窥镜光激活来提供照射，例如用于将光递送至肺、胃、结肠、膀胱或颈部。
[0255]
为避免疑义，在可实践范围内，本发明的给定方面的任一实施方案可与本发明的同一方面的任何其它实施方案组合。另外，在可实践范围内应理解，本发明的任一方面的任何优选的或任选的实施方案也应视为本发明的任何其它方面的优选的或任选的实施方案。
附图说明
[0256]
图1示出叶绿素蛋白溶液的吸光度光谱。％是指dmso的体积；剩余溶剂是pbs(磷酸盐缓冲盐水)。
[0257]
图2示出在pvp存在性叶绿素蛋白溶液的吸光度光谱(作为溶液总体积的百分比的1％w/v)。％是指dmso的体积；剩余溶剂是pbs(磷酸盐缓冲盐水)。图2还示出包含叶绿素蛋白的溶液以及包含叶绿素蛋白和1％ pvp w/v(作为溶液总体积的百分比)的溶液的dmso％对最大吸光度％的图。
[0258]
图3示出不含pvp的二氢卟吩e4二钠、含1％ pvp w/v(作为溶液总体积的百分比)的二氢卟吩e4二钠、不含pvp的叶绿素蛋白和含1％ pvp w/v(作为溶液总体积的百分比)的叶绿素蛋白的细胞毒性。
[0259]
图4示出不含pvp的二氢卟吩e4二钠、含1％ pvp w/v(作为溶液总体积的百分比)的二氢卟吩e4二钠、不含pvp的叶绿素蛋白和含1％ pvp w/v(作为溶液总体积的百分比)的叶绿素蛋白的光毒性。
[0260]
图5a示出化合物1和1c在体外的摄取和保留时间。将skov3卵巢癌细胞与化合物1或1c一起孵育长达24小时。使用叶绿素蛋白的固有荧光监测随时间推移的细胞摄取和损失。每个点一式三份进行测量；在每种情况下平均值
±
sd。图5b显示，化合物1与1c之间的细胞定位没有明显差异。
[0261]
图6a示出化合物1和2在体外的摄取和保留时间。将skov3卵巢癌细胞与化合物1或2一起孵育长达24小时。使用叶绿素蛋白的固有荧光监测随时间推移的细胞摄取和损失。每个点一式三份进行测量；在每种情况下平均值
±
sd。图6b显示，化合物2在细胞中展示明显的点状分布，而化合物1在整个细胞质中弥散分布。
[0262]
图7a显示，用糖基官能化增强叶绿素蛋白类似物在体外的细胞摄取。将skov3卵巢癌细胞与化合物2、6、8或17一起孵育，并在4小时时间段内监测细胞摄取。每个点一式三份进行测量；在每种情况下平均值
±
sd。图7b显示，化合物2在细胞中展示明显的点状分布，而化合物6、8和17在整个细胞质中弥散分布。
[0263]
图8示出化合物6在肿瘤中的定位和保留。图8a详细说明口服、静脉内和鞘内(it)或腹膜内施用后化合物6的肿瘤相关荧光的定量分析。肿瘤是原发性乳腺(上图)或播散性腹膜转移(下图)。n＝3/组；平均值
±
sd。图8b示出尸检时由蓝光刺激的化合物6的红色荧光。在原发性肿瘤中，当用蓝光照射时，化合物6可视化为强烈的红色荧光。在转移性疾病中，化合物6定位于多个腹膜表面上的单独转移性结节和与转移性卵巢癌一致的连续网膜肿块中。图8c示出在原发性乳腺肿瘤中鞘内注射后与他拉泊芬钠和5-ala相比，化合物6的定位和保留。
[0264]
图9显示，使用化合物6的光动力疗法使得确立的肿瘤完全消退。用化合物6和激光(经治疗的)或单独化合物6(对照)治疗具有确立的乳腺肿瘤的小鼠(植入后第6天)。监测肿瘤大小直至终点(肿瘤大小≥100mm2)。在治疗14天内，治疗使确立的肿瘤消退至不可检测的水平。n＝2/组；平均值
±
sd。
[0265]
图10示出化合物15的1h nmr。
[0266]
合成实验细节
[0267]
合成实施例1
–
叶绿素蛋白钠盐(化合物1)的合成
[0268][0269]
向100ml梨形rbf中称入叶绿素蛋白(121mg，88.7％纯度，0.211mmol)，然后在涡旋下加入蒸馏去离子水(15ml)。使用刻度移液管，在手动涡旋下逐滴添加氢氧化钠溶液
(2.1ml，0.101m，1当量)。对材料进行超声处理(10分钟)，得到清晰的深棕色。对溶液进行冷冻干燥过夜，得到呈细黑色粉末的叶绿素蛋白钠盐(化合物1)(97mg，90％)。
[0270]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ-2.42(s,1h),-2.26(s,1h),1.62(m,1h),1.69(m,6h),2.12(m,1h),2.43(m,2h),3.32(s,3h),3.48(s,3h),3.60(s,3h),3.81(q,2h),3.98(s,3h),4.59(m,2h),6.14(dd,1h),6.40(dd,1h),8.31(dd,1h),9.02(s,1h),9.09(s,1h),9.71(s,1h),9.73(s,1h)。
[0271]
合成实施例1a
–
叶绿素蛋白钾盐(化合物1a)的合成
[0272][0273]
向100ml梨形rbf中称入叶绿素蛋白(127mg，91.5％纯度，0.230mmol)，然后在搅拌下加入蒸馏去离子水(15ml)。使用刻度移液管，在搅拌下逐滴添加氢氧化钾溶液(2.3ml，0.100m，1当量)。对材料进行超声处理(15分钟)，得到清晰的深棕色。对溶液进行冷冻干燥过夜，得到呈细黑色粉末的叶绿素蛋白钾盐(化合物1a)(127mg，93％)。
[0274]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.72(s,1h),9.71(s,1h),9.08(s,1h),9.00(s,1h),8.30(dd,1h),6.40(dd,1h),6.13(dd,1h),4.57(m,2h),3.96(s,3h),3.80(q,2h),3.60(s,3h),3.48(s,3h),3.31(s,3h),2.40(m,2h),2.10(m,1h),1.69(m,6h),1.60(m,1h),-2.27(s,1h),-2.43(s,1h)。
[0275]
合成实施例1b
–
叶绿素蛋白锂盐(化合物1b)的合成
[0276][0277]
向100ml梨形rbf中称入叶绿素蛋白(127mg，91.5％纯度，0.230mmol)，然后在搅拌下加入蒸馏去离子水(15ml)。使用刻度移液管，在搅拌下逐滴添加氢氧化锂溶液(2.3ml，0.100m，1当量)。对材料进行超声处理(15分钟)，得到清晰的深棕色。对溶液进行冷冻干燥过夜，得到呈细黑色粉末的叶绿素蛋白锂盐(化合物1b)(115mg，90％)。
[0278]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.73(s,1h),9.71(s,1h),9.10(s,1h),9.02(s,1h),8.32(dd,1h),6.43(dd,1h),6.16(dd,1h),4.59(m,2h),3.98(s,3h),3.81(q,2h),3.60(s,
3h),3.51(s,3h),3.32(s,3h),2.35(m,2h),2.00(m,1h),1.69(m,6h),1.62(m,1h),-2.26(s,1h),-2.43(s,1h)。
[0279]
合成实施例1c
–
叶绿素蛋白胆碱盐(化合物1c)的合成
[0280][0281]
向100ml梨形rbf中称入叶绿素蛋白(127mg，91.5％纯度，0.230mmol)，然后在搅拌下加入蒸馏去离子水(15ml)。在搅拌下逐滴添加氢氧化胆碱(在h2o中20％w/w，139mg，0.230mmol，1当量)。对材料进行超声处理(5分钟)，得到清晰的深棕色。对溶液进行冷冻干燥过夜，得到呈黑色粉末的叶绿素蛋白胆碱盐(化合物1c)(152mg，定量)。
[0282]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.73(s,1h),9.71(s,1h),9.10(s,1h),9.02(s,1h),8.31(dd,1h),6.41(dd,1h),6.13(dd,1h),4.58(m,2h),3.98(s,3h),3.81(m,4h),3.60(s,3h),3.51(s,3h),3.38(m,2h),3.31(s,3h),3.09(s,12h),2.38(m,2h),2.05(m,1h),1.69(m,6h),1.61(m,1h),-2.26(s,1h),-2.42(s,1h)。
[0283]
合成实施例1d
–
叶绿素蛋白精氨酸盐(化合物1d)的合成
[0284][0285]
向100ml梨形rbf中称入叶绿素蛋白(127mg，91.5％纯度，0.230mmol)，然后在搅拌下加入蒸馏去离子水(15ml)。添加精氨酸(40mg,0.230mmol，1当量)。添加另外的水(10ml)，然后将溶液在60℃下加热1小时。添加丙酮(2ml)并在环境温度下继续搅拌30分钟。在减压下除去丙酮，并对剩余溶液进行冷冻干燥过夜，得到呈黑色粉末的叶绿素蛋白精氨酸盐(化合物1d)(140mg，82％)。
[0286]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.73(s,1h),9.71(s,1h),9.10(s,1h),9.01(s,1h),8.31(dd,1h),8.20(br s,3h),6.41(dd,1h),6.13(dd,1h),4.58(m,2h),3.95(s,3h),3.80(m,2h),3.59(m,5h),3.51(s,3h),3.32(s,3h),3.08(m,2h),2.39(m,1h),2.20(m,1h),1.70(m,8h),1.58(m,2h),-2.28(s,1h),-2.44(s,1h)。
[0287]
合成实施例1e
–
叶绿素蛋白葡甲胺盐(化合物1e)的合成
[0288][0289]
向100ml梨形rbf中称入叶绿素蛋白(127mg，91.5％纯度，0.230mmol)，然后在搅拌下加入蒸馏去离子水(15ml)。添加葡甲胺(45mg,0.230mmol，1当量)。添加另外的水(10ml)，然后将溶液在60℃下加热1小时。添加丙酮(2ml)并在环境温度下继续搅拌30分钟。在减压下除去丙酮，并对剩余溶液进行冷冻干燥过夜，得到呈黑色粉末的叶绿素蛋白葡甲胺盐(化合物1e)(140mg，80％)。
[0290]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.73(s,1h),9.71(s,1h),9.10(s,1h),9.02(s,1h),8.32(dd,1h),6.42(dd,1h),6.16(dd,1h),4.60(m,3h),3.95(s,3h),3.81(m,4h),3.65(m,2h),3.60(m,6h),3.51(s,3h),3.49(m,3h),3.42-3.36(m,5h),3.31(s,3h),2.73(m,2h),2.60(m,1h),2.40(m,1h),2.37(s,3h),2.25(m,2h),1.69(m,8h),-2.28(s,1h),-2.44(s,1h)。
[0291]
合成实施例2
–
叶绿素蛋白甲酯(化合物2)的合成
[0292][0293]
向单颈100ml rbf中添加叶绿素蛋白(2.40g，4.72mmol，1当量)、碳酸钾(0.78g，5.66mmol，1.2当量)、dmf(30ml)和小型搅拌棒。将烧瓶置于n2下并以300rpm搅拌。然后添加甲基碘(382μl，6.13mmol，1.3当量)并在室温下搅拌烧瓶。2小时后和搅拌整个周末后进行hplc分析，并且确认反应完成。将溶液用dcm(30ml)稀释并通过用dcm洗涤的(1cm深度)过滤，直到不再有颜色洗脱。在减压下除去溶剂，得到约4g蓝色固体。将粗物质溶解于etoac(125ml)中并用水(2
×
100ml)洗涤，干燥(na2so4)并在减压下浓缩，得到呈深蓝色/绿色固体的粗产物(2.7g)。通过柱色谱法(二氧化硅，4
×
23cm，dcm至3％ meoh/dcm的梯度溶剂)纯化粗物质，得到呈深蓝色/绿色固体的叶绿素蛋白甲酯(化合物2)(1.60g，64.8％)。
[0294]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ-2.22(br,1h),-2.10(br,1h),1.72-1.80(m,6h),2.20-2.10(m,1h),2.10-2.00(m,1h),2.48-2.62(m,2h),3.38(s,3h),3.53(s,3h),3.58(s,3h),3.64(s,3h),3.84(q,2h),3.98(s,3h),4.50(q,1h),4.56(d,1h),6.13(dd,1h),6.37(dd,
1h),8.16(dd,1h),8.83(br s,2h),9.71(br s,2h)。
[0295]
合成实施例3-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-(3-(((2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)硫代)丙基)丙酰胺(化合物3)的合成
[0296][0297]
三乙酸(2r,3r,4s,5r,6s)-2-(乙酰氧基甲基)-6-((3-氨基丙基)硫代)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的合成
[0298][0299]
步骤1：向配备有氮气入口和橡胶隔片的2颈500ml rbf中装入1,2,3,4,6-五-o-乙酰基-β-d-葡萄糖(6.23g，15.95mol，1当量)于无水dcm(150ml)中的溶液和搅拌棒，并将混合物置于n2下。向此溶液中添加(3-巯丙基)氨基甲酸(9h-芴-9-基)甲酯(chembiochem,2010,11(6),778-781)(6.00g，19.1mmol，1.2当量)，之后在2-3分钟的过程中通过橡胶隔片逐滴添加bf3.oet2(5.9ml，47.9mmol，3当量)。将混合物在室温下在n2下搅拌(315rpm)过夜。此时的tlc分析指示仅剩余痕量起始材料。通过添加1m hcl(50ml)来淬灭反应并转移至分液漏斗中。收集有机相并用盐水(50ml)洗涤，然后干燥(mgso4)并通过旋转蒸发进行浓缩，得到呈浅色糖浆的粗糖基化产物(18g)。将残余物通过柱色谱法纯化(50％ etoac/己烷，作为洗脱液中的溶液负载，rf＝0.5)，得到在静置后固化的呈无色糖浆的n-fmoc-3
’‑
氨基-1-硫代-2,3,4,6-四-o-乙酰基-β-d-吡喃葡萄糖(5.55g，54％)。
[0300]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.76(d,j＝7.4hz,2h),7.60(d,j＝7.4hz,2h),7.39(dd,j＝7.4,7.4hz,2h),7.31(dd,j＝7.4,7.4hz,2h),5.22(dd,j＝9.4,9.4hz,1h),5.05(dd,j＝9.4,9.4hz,1h),5.02(dd,j＝9.4,9.4hz,1h),4.93(br s,1h),4.50-4.42(m,3h),4.31-4.08(m,3h),3.69(ddd,j＝10.1,4.8,2.7hz,1h),3.36-3.19(m,2h),2.74(ddd,j＝13.4,6.7,6.7hz,1h),2.64(ddd,j＝13.4,6.7,6.7hz,1h),2.05(s,3h),2.04(s,3h),2.03(s,3h),2.00(s,3h),1.87-1.70(m,2h)。
[0301]
步骤2：向含有n-fmoc-3
’‑
氨基-1-硫代-2,3,4,6-四-o-乙酰基-β-d-吡喃葡萄糖(633mg,0.983mmol，2当量)和搅拌棒的50ml烧瓶中添加20％哌啶/dmf(15ml)，并将所得溶液在环境气氛下搅拌(420rpm)10分钟。取出等分试样并浓缩用于1h nmr分析，其显示fmoc基团的裂解。将反应混合物浓缩，然后从甲苯中重构/浓缩五次(以除去所有哌啶)，得到呈胶状米色固体的三乙酸(2r,3r,4s,5r,6s)-2-(乙酰氧基甲基)-6-((3-氨基丙基)硫代)四
氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯，其无需进一步纯化即可使用。
[0302]
3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-(3-(((2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)硫代)丙基)丙酰胺(化合物3)的合成
[0303][0304]
步骤1：向配备有氮气入口的含有三乙酸(2r,3r,4s,5r,6s)-2-(乙酰氧基甲基)-6-((3-氨基丙基)硫代)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的50ml rbf中添加叶绿素蛋白(250mg，0.491mmol，1当量)、dcm(12ml)和搅拌棒。向所得深色溶液中添加pybop(307mg，0.590mmol，1.2当量)，然后添加三乙胺(204μl，1.47mmol，3当量)，并将混合物在n2下搅拌(420rpm)1小时。30分钟时的tlc分析指示仅剩余痕量起始材料，以及所需产物(5％ meoh/dcm，rf(起始材料)＝0.37，rf(产物)＝0.70)。将反应混合物转移至100ml分液漏斗中，并用1m hcl(2x20ml)洗涤(此时有机相变成深紫色)，然后用ph 7缓冲液(20ml)洗涤(有机相恢复为绿色)。将有机相干燥(na2so4)并通过旋转蒸发进行浓缩，得到呈棕色薄膜的粗酰胺(约1.10g)。将残余物通过biotage自动柱色谱法纯化，得到呈蓝黑色固体的叶绿素蛋白β-1-硫代葡萄糖丙基酰胺缀合物过乙酸酯(417mg，95％)。将粗物质不经进一步纯化即脱保护。
[0305]
步骤2：向叶绿素蛋白β-1-硫代葡萄糖丙基酰胺缀合物过乙酸酯(417mg，0.457mmol，1当量)于meoh(4ml)/dcm(4ml)中的溶液添加naome(4.6m于meoh中，0.50ml，2.286mmol，5当量)，并将混合物在n2下搅拌(420rpm)30分钟。tlc分析显示完全转化为脱乙酰产物(5％ meoh/dcm，rf(起始材料)＝0.6，rf(产物)＝0)。将反应用acoh(5滴)淬灭并通过旋转蒸发进行浓缩。将残余物通过柱色谱法(3x17cm，填充有5％ meoh/dcm并使用5％-10％meoh/dcm的梯度)纯化，得到呈深蓝色固体的化合物3(255mg，70％-经2个步骤)。
[0306]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.75(s,1h),9.73(s,1h),9.10(s,1h),9.08(s,1h),8.33(dd,1h),7.90(t,1h),6.45(d,1h),6.18(d,1h),5.10(d,1h),5.01(d,1h),4.92(d,1h),4.60(m,1h),4.50(m,2h),4.20(d,1h),3.92(s,3h),3.80(m,2h),3.61(s,3h),3.55(s,3h),3.20-3.00(m,6h),2.95(m,1h),2.70-2.50(m,2h),2.50-2.40(m,2h),2.10(m,1h),1.80-1.60(m,10h),-2.25(s,1h),-2.45(s,1h)。
[0307]
合成实施例4-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟
啉-7-基)-n-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基)-n-甲基丙酰胺(化合物4)的合成
[0308][0309]
向配备有氮气入口并含有小搅拌棒的50ml rbf中添加叶绿素蛋白(500mg，0.983mmol，1当量)、二氯甲烷(15ml)、pybop(563mg，1.1当量)、三乙胺(409μl，3当量)和2-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙氧基)乙醇(193mg，1.2当量)。将混合物在室温下搅拌1小时。通过hplc进行的分析显示反应完成。将反应混合物转移至分液漏斗中并用水(2x10ml)洗涤，并将有机层干燥(na2so4)并通过旋转蒸发进行浓缩，得到呈蓝色/棕色薄膜的粗产物(1.10g)。将粗混合物直接负载到二氧化硅柱上并用3％-7％ meoh/dcm洗脱。将通过tlc含有绿色/蓝色化合物的纯级分(在5％ meoh/dcm中r
f 0.20)合并，得到最终产物化合物4。
[0310]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.71(m,2h),8.83(m,2h),8.16(dd,1h),6.38(dd,1h),6.13(dd,1h),4.66(m,1h),4.54(m,1h),4.01(s,3h),3.84(q,2h),3.63(s,3h),3.55-3.50(m,4h),3.47-3.30(m,10h),3.04(m,1h),2.77-2.50(m,6h),2.40-2.20(m,4h),1.93-1.35(m,1h),1.30-1.22(m,6h),-2.10(br,1h),-2.24(br,1h)。
[0311]
合成实施例5-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-(3-羟丙基)-n-甲基丙酰胺(化合物5)的合成
[0312][0313]
向配备有氮气入口并含有小搅拌棒的100ml rbf中添加叶绿素蛋白(2.00g，3.93mmol，1当量)、二氯甲烷(50ml)、pybop(2.26mg，1.1当量)、三乙胺(1.64ml，3当量)和3-(甲基氨基)-丙醇(0.42g，1.2当量)。将混合物在室温下搅拌3小时。通过hplc进行的分析显示反应完成。将反应混合物转移至分液漏斗中并用水(2x30ml)洗涤。将有机层干燥(na2so4)并通过旋转蒸发进行浓缩，得到呈蓝色/棕色薄膜的粗产物(5.1g)。将粗混合物直接负载到二氧化硅柱上并用1.5％-2％meoh/dcm洗脱。将通过tlc具有r
f 0.30(5％meoh/dcm)的含有绿色/蓝色斑点的纯级分合并，得到化合物5(1.29g，57％)(hplc纯度：86.8％)。
[0314]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.75-9.70(m,2h),8.85(br s,1h),8.16(dd,1h),6.38(dd,1h),6.15(dd,1h),4.70-4.65(m,1h),4.58-4.50(m,1h),4.00(s,3h),3.89-3.82(m,3h),3.65(s,3h),3.53(s,3h),3.37(s,3h),3.31-3.15(m,4h),2.65-2.53(m,2h),2.37-2.22(m,3h),2.16(3,3h),1.80-1.70(m,7h),1.48-1.40(m,2h),-2.10(s,1h),-2.22(m,
1h)。
[0315]
合成实施例6-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-甲基-n-(3-(((2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)硫代)丙基)丙酰胺(也称为叶绿素蛋白β-d-1-硫代葡萄糖-n-甲基丙基酰胺缀合物)(化合物6)的合成
[0316][0317]
步骤1：向单颈50ml rbf中装入化合物5(1.25g，2.156mmol，1当量)、二氯乙烷(10ml)和dmf(1滴)。添加亚硫酰氯(0.23ml，3.233mmol，1.5当量)并将所得溶液在n2下在40℃下搅拌(350rpm)。2小时后，将烧瓶在60℃下再加热2小时。然后使用冰/水浴冷却反应物并添加ph＝7磷酸盐缓冲液(10ml)。将混合物用dcm(3x15ml)萃取，干燥(na2so4)并在减压下除去溶剂，得到约1.4g的粗产物。通过柱色谱法使用2％-4％ meoh/dcm纯化残余蓝色固体，并且合并含有洗脱的第一暗条带的级分，得到呈蓝色/绿色固体的叶绿素蛋白n-3-氯丙基-n-甲基丙基酰胺(0.875g，67.8％)。
[0318]
步骤2：向单颈25ml rbf中装入叶绿素蛋白n-3-氯丙基-n-甲基丙基酰胺(145mg，0.242mmol，1当量)、2-丁酮(5ml)和碘化钠(73mg)。将所得溶液在n2下在90℃下搅拌(350rpm)。3小时后的tlc指示反应完成，然后使用冰/水浴冷却烧瓶。向粗碘化物中添加硫代葡萄糖四乙酸酯(106mg，0.291mmol，1.2当量)和dipea(38mg，0.291mmol，1.2当量)并将溶液在25℃下搅拌过夜。tlc分析显示存在一些起始材料，并且将溶液在50℃下加热3小时。除去溶剂并使用2％-5％meoh/dcm通过柱色谱法纯化残余蓝色固体，并且合并含有最暗条带(rf约0.6，5％ meoh/dcm)的级分，得到呈蓝色/绿色固体的叶绿素蛋白β-1-硫代葡萄糖n-甲基丙基酰胺缀合物过乙酸酯(145mg)，其直接用于下一步骤中。
[0319]
步骤3：向叶绿素蛋白β-1-硫代葡萄糖n-甲基丙基酰胺缀合物过乙酸酯(140mg，0.1512mmol，1当量)于meoh(2ml)/dcm(2ml)中的溶液添加naome(4.6m于meoh中，0.16ml，
0.756mmol，5当量)，并将混合物在n2下搅拌(250rpm)30分钟。tlc分析显示转化为脱乙酰产物(5％ meoh/dcm，rf(起始材料)＝0.6，rf(产物)＝0)。将反应用乙酸(10滴)淬灭并通过旋转蒸发进行浓缩。将残余物通过柱色谱法(2％-8％ meoh/dcm)纯化以洗脱呈深蓝色固体的化合物6(30mg，16％-从氯化物经2个步骤)。
[0320]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.76(s,1h),9.74(s,1h),9.10(d,j＝5.7hz,1h),9.07(s,1h),8.35(dd,j＝17.8,11.6hz,1h),6.45(dd,j＝17.8,1.6hz,1h),6.18(dd,j＝11.6,1.5hz,1h),5.24-4.89(m,3h),4.66(p,j＝7.4hz,1h),4.59-4.44(m,2h),4.28(dd,j＝32.2,9.6hz,1h),3.98(d,j＝6.1hz,3h),3.83(q,j＝7.6hz,2h),3.63(d,j＝1.0hz,3h),3.55(d,j＝1.6hz,3h),3.26-3.01(m,3h),2.90(s,2h),2.81(s,1h),2.72-2.52(m,1h),2.42(dt,j＝20.1,5.8hz,1h),1.81(ddd,j＝22.3,14.6,6.9hz,1h),1.75-1.61(m,7h),-2.26(s,1h),-2.42(d,j＝2.2hz,1h)。
[0321]
合成实施例7-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-(5-羟基戊基)-n-甲基丙酰胺(也称为叶绿素蛋白n-5-羟基戊基-n-甲基丙基酰胺)(化合物7)的合成
[0322][0323]
向配备有氮气入口并含有小搅拌棒的100ml rbf中添加叶绿素蛋白(0.87g，1.71mmol，1当量)、二氯甲烷(25ml)、pybop(0.98g，1.1当量)、三乙胺(0.71ml，3当量)和5-(甲基氨基)-戊醇(0.24g，1.2当量)。将混合物在室温下搅拌90分钟。通过hplc进行的分析显示反应完成。将反应混合物转移至分液漏斗中并用水(2x30ml)洗涤。将有机层干燥(na2so4)并通过旋转蒸发进行浓缩，得到呈蓝色/绿色薄膜的粗产物(2.1g)。将粗混合物直接负载到二氧化硅柱(3
×
22cm，用1％meoh/dcm预平衡)上并用相同溶剂洗脱，直到洗脱出第一浅色条带，然后将溶剂更换为1.5％ meoh/dcm。当最强烈的蓝色/绿色条带开始洗脱时，将溶剂更换为2％ meoh/dcm。将通过tlc具有rf0.30(5％ meoh/dcm)的含有绿色/蓝色斑点的纯级分合并，得到化合物7(0.93g，89％)(hplc纯度：98.2％)。
[0324]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.72(br s,2h),8.87-8.82(m,1h),8.16(dd,1h),6.39(dd,1h),6.15(dd,1h),4.72-4.65(m,1h),4.59-4.50(m,1h),4.00(s,3h),3.88-3.80(m,2h),3.64(s,3h),3.53(m,4h),3.37(s,3h),3.19-3.08(m,1h),2.65-2.47(m,4h),2.40-2.15(m,3h),2.14-2.05(m,2h),1.80-1.70(m,6h),1.52-1.42(m,1h),1.40-1.25(m,2h),1.23-1.16(m,1h),0.58-0.50(m,1h),0.30-0.22(m,1h),0.15-0.07(m,1h),-2.10(s,1h),-2.25(m,1h)。
[0325]
合成实施例8-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-甲基-n-(5-(((2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)硫代)戊基)丙酰胺(化合物8)的合成
[0326][0327]
步骤1：向单颈50ml rbf中装入叶绿素蛋白n-5-羟基戊基-n-甲基丙基酰胺(0.90g，1.481mmol，1当量)、二氯乙烷(10ml)和dmf(1滴)。添加亚硫酰氯(0.16ml，2.221mmol，1.5当量)并将所得溶液在n2下在40℃下搅拌(300rpm)。30分钟后的tlc指示产物(r
f 0.6，5％meoh/dcm)是存在的主要化合物，并将烧瓶在55℃下再加热30分钟。然后使用冰/水浴冷却反应物并添加ph＝7磷酸盐缓冲液(10ml)。将混合物用dcm(3x10ml)萃取，干燥(na2so4)并在减压下除去溶剂，得到粗产物。使用1％-4％ meoh/dcm通过柱色谱法(3x20cm二氧化硅)纯化残余蓝色固体。当使用约3％ meoh/dcm时，首先洗脱棕色条带，然后洗脱产物(rf约0.6-0.7)。合并含有暗条带的部分，得到呈蓝色/绿色油状固体的叶绿素蛋白n-5-氯戊基-n-甲基丙基酰胺。
[0328]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.72(br s,2h),8.82(br s,2h),8.16(dd,1h),6.39(m,1h),6.13(d,1h),4.70-4.65(m,1h),4.59-4.48(m,1h),4.00(s,3h),3.88-3.80(m,2h),3.64(s,3h),3.53(m,4h),3.42(t,2h),3.36(s,3h),3.17-3.08(m,2h),2.78(t,1h),2.65-2.47(m,3h),2.35-2.20(m,4h),2.14-2.05(m,2h),1.80-1.70(m,7h),1.70-1.62(m,2h),1.28-1.22(m,2h),0.78-0.70(m,1h),0.68-0.58(m,1h),0.35-0.28(m,1h),-2.10(s,1h),-2.25(m,1h)。
[0329]
步骤2：向单颈250ml rbf中装入叶绿素蛋白n-5-氯戊基-n-甲基丙基酰胺(0.71g，1.13mmol，1当量)、2-丁酮(25ml)和碘化钠(340mg)。将所得溶液在n2下在90℃(外部温度，油浴)下搅拌(350rpm)。3小时后的tlc指示存在非常少的起始材料，然后使用冰/水浴冷却烧瓶。向粗碘化物中添加硫代葡萄糖四乙酸酯(496mg，1.36mmol，1.2当量)和dipea(176mg，1.36mmol，1.2当量)并将溶液在25℃下搅拌1小时。tlc分析显示存在一些起始材料，然后将溶液在40℃下加热1.5小时。除去溶剂并纯化粗产物。使用2％-4％ meoh/dcm通过柱色谱法
(4x21cm二氧化硅)纯化残余蓝色固体，并将含有最暗条带的级分(rf约0.5，5％ meoh/dcm)合并，得到呈蓝色/绿色固体的叶绿素蛋白β-1-硫代葡萄糖n-戊基n-甲基丙基酰胺缀合物过乙酸酯(1.20g)。
[0330]
步骤3：向叶绿素蛋白β-1-硫代葡萄糖n-戊基n-甲基丙基酰胺缀合物过乙酸酯(1.05g，1.10mmol，1当量)于meoh(15ml)/dcm(15ml)中的溶液添加naome(4.6m于meoh中，1.20ml，5.50mmol，5当量)，并将混合物在n2下搅拌(250rpm)30分钟。tlc分析显示转化为脱乙酰产物(5％ meoh/dcm，rf(起始材料)＝0.6，rf(产物)＝0)。将反应用acoh(30滴)淬灭并通过旋转蒸发进行浓缩。将残余物通过柱色谱法(4x18cm，填充有2％ meoh/dcm)纯化。负载后，使用5％ meoh/dcm(以洗脱高
rf
)、6％ meoh/dcm(以洗脱中
rf
)和8％ meoh/dcm依次洗脱柱以洗脱呈深蓝色固体的化合物8(262mg,29％-从氯化物经3个步骤)。
[0331]
合成实施例9-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-甲基-n-(3-(((2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)硫代)丙基)丙酰胺亚砜(化合物9)的合成
[0332][0333]
向单颈25ml rbf中添加叶绿素蛋白β-d-1-硫代葡萄糖-n-甲基丙基酰胺缀合物(100mg，0.132mmol，1当量)、尿素-过氧化氢(18.6mg，0.198mmol，1.5当量)和乙酸(1.5ml)。将溶液在55℃(外部温度，油浴)下搅拌2小时。在减压下(旋转蒸发器，40℃，全真空)除去乙酸，留下深绿色粘性油状物。使用10％-16％ meoh/dcm通过二氧化硅柱色谱法(3x20cm)纯化粗产物。合并含有产物(在10％meoh/dcm中r
f 0.3)的级分，得到呈深绿色/蓝色片状固体的化合物9(91mg，89％)。
[0334]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.76-9.72(m,2h),9.11-9.05(m,2h),8.35(dd,1h),6.44(dd,1h),6.18(dd,1h),5.70-5.30(m,1h),5.24-5.02(m,2h),4.80-4.60(m,2h),4.60-4.52(m,1h),4.31-4.10(m,1h),3.99-3.95(m,3h),3.81(q,2h),3.75-3.65(m,1h),3.62(s,3h),3.55(s,3h),3.51-3.39(m,3h),3.33(s,3h),3.17(m,1h),3.16-2.97(m,2h),2.90(m,2h),2.84(s,1h),2.82-2.55(m,2h),2.47-2.38(m,1h),1.99-1.75(m,2h),1.73-1.66(m,7h),-2.25(s,1h),-2.43(s,1h)。
[0335]
合成实施例10-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-(2-羟乙基)-n-甲基丙酰胺(化合物10)的合成
[0336][0337]
向配备有氮气入口并含有搅拌棒的250ml rbf中添加叶绿素蛋白(3.00g，5.90mmol，1当量)、二氯甲烷(70ml)、pybop(3.30g，1.1当量)、三乙胺(2.46ml，3当量)和2-(甲基氨基)-乙醇(0.53g，1.2当量)。将混合物在室温下搅拌3小时。通过tlc进行的分析显示反应完成。将反应混合物转移至分液漏斗中并用水(2x30ml)洗涤。将有机层干燥(na2so4)，通过过滤并通过旋转蒸发进行浓缩，得到呈蓝色/棕色薄膜的粗产物(6.0g)。将粗产物直接负载到二氧化硅柱上并用1％-3％ meoh/dcm洗脱。将通过tlc含有绿色/蓝色斑点的纯级分(在5％ meoh/dcm中r
f 0.40)合并，得到化合物10(0.62g，25％)(hplc纯度：83.8％)。
[0338]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.78-9.70(m,2h),8.85(m,2h),8.20-8.10(m,1h),6.38(d,1h),6.14(d,1h),4.70-4.65(m,1h),4.58-4.50(m,1h),4.01(m,3h),3.89-3.82(m,2h),3.65(s,3h),3.53(s,3h),3.37(m,4h),3.31-3.22(m,1h),3.14-3.08(m,2h),2.65-2.51(m,3h),2.37-2.22(m,3h),2.09(s,2h),1.88-1.70(m,8h),1.62-1.50(br s,2h),-2.05
‑‑
2.32(m,2h)。
[0339]
合成实施例11-三乙酸(2r,3r,4s,5r,6s)-2-(乙酰氧基甲基)-6-((3-(3-(7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-甲基丙酰胺基)硫代)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(化合物11)的合成
[0340][0341]
向单颈100ml rbf中添加叶绿素蛋白β-d-1-硫代葡萄糖-n-甲基丙基酰胺缀合物(2.00g，2.64mmol，1当量)、吡啶(15ml)、乙酸酐(2.5ml，26.4mmol，10当量)和dmap(10mg)。将溶液在35℃(外部温度，加热块)下搅拌90小时。通过tlc和hplc进行的分析指示反应完成。添加乙酸乙酯(40ml)和水(30ml)并将混合物剧烈搅拌10分钟。分离各层并用0.5m hcl(4x30ml)、饱和nahco3(3x30ml)洗涤乙酸乙酯层，干燥(na2so4)并浓缩，得到呈深绿色固体的粗产物(2.2g)。使用1％-3％ meoh/dcm通过柱色谱法(4x30cm二氧化硅)纯化粗产物。合
0.73(m,7h),-2.21
‑‑
2.45(m,2h)。
[0347]
步骤2：向单颈25ml rbf中添加来自步骤1的boc保护的产物(113mg，0.118mmol，1当量)、4m于二噁烷中的hcl(0.3ml，1.20mmol，10当量)、二噁烷(1ml)和dcm(5ml)。将混合物在氮气下在室温下在黑暗中搅拌过夜。在减压下除去溶剂，留下深绿色/紫色粘性油状物，使用5％-50％ mecn/0.1m hcl水溶液通过biotage自动柱色谱法(反相，sfar c18d 30g柱)将其纯化。合并含有产物(在20％meoh/dcm中r
f 0.2)的级分，得到呈深绿色/紫色固体的化合物12(41mg，39％)(hplc纯度：97.7％)。
[0348]
合成实施例13-叶绿素蛋白2-脱氧氨基葡萄糖-丙基酰胺(化合物13)的合成
[0349][0350]
向含有搅拌棒的10ml rbf中添加叶绿素蛋白(200mg，0.3952mmol，1当量)、pybop(225mg，0.4325mmol，1.1当量)、dmf(4.0ml)和三乙胺(120μl，0.8650mmol，2.2当量)。将所得混合物在氮气下在环境温度下搅拌(420rpm)5分钟，然后一次性添加d-氨基葡萄糖盐酸盐(93mg，0.4325mmol，1.1当量)。将所得混合物搅拌30分钟，此时如通过hplc所监测，反应完成。将反应混合物通过旋转蒸发进行浓缩，得到黑色残余物，将其溶解于最少量的dmso中并使用c-18柱通过biotage自动柱色谱法纯化。合并含有产物的级分，得到呈深绿色/黑色固体的化合物13(38.4mg，15％)。
[0351]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.76(s,1h),9.74(s,1h),9.13-9.06(m,2h),8.36(dd,j＝17.8,11.6hz,1h),7.74-7.66(m,1h),6.50-6.42(m,1h),6.31(dd,j＝4.5,1.2hz,1h),6.18(dd,j＝11.6,1.5hz,1h),4.92-4.84(m,2h),4.67-4.34(m,4h),3.94(d,j＝2.3hz,3h),3.83(q,j＝7.6hz,2h),3.68-3.58(m,4h),3.58-3.50(m,4h),3.50-3.39(m,2h),3.15-2.98(m,1h),2.46-2.31(m,1h),1.79-1.64(m,7h),-2.27(s,1h),-2.43(s,1h)。溶液中的产物以差向异构体的混合物形式存在，其导致处于约3:1比率的两组信号。
[0352]
合成实施例14-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-甲基-n-(2-(2-(((2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙基)丙酰胺(化合物14)的合成
[0353][0354]
步骤1：在氮气下将n-cbz-2-(2-甲基氨基-乙氧基)-乙醇(1.35g，5.33mmol，1当量)和五乙酰基葡萄糖(2.29g，1.1当量)于dcm(30ml)中的溶液在冰/水浴中冷却并通过注射器逐滴添加bf3.et2o(3.78g，3.29ml，5当量)。将溶液在0℃-5℃(外部)下搅拌(420rpm)1小时，然后在室温下搅拌过夜。通过nmr检查反应进程。反应完成后，将溶液用饱和nahco3(2x20ml)洗涤，然后将合并的水洗液用dcm(20ml)萃取。将合并的有机层干燥(mgso4)并蒸发，得到呈浅黄色油状物的cbz保护的peg葡萄糖(约4g)，通过柱色谱法(4x25cm二氧化硅)使用0.5％-3.5％ meoh/dcm的梯度洗脱将其部分纯化。所得油状物(2.85g)直接用于下一步骤中。
[0355]
步骤2：向3颈250ml rbf中添加cbz保护的peg葡萄糖(2.85g)、甲醇(100ml)和10％ pd/c(140mg，5％w/w)。将氢气球连接至烧瓶上，并将烧瓶抽真空并重新填充氮气3次。然后将烧瓶抽真空并并重新填充氢气。将溶液以325rpm搅拌过夜。将烧瓶抽真空并重新填充氮气后，将溶液过滤用甲醇(20ml)洗涤并在减压下浓缩。将浓缩的残余物溶解于dcm(25ml)中，用水(2x20ml)洗涤，干燥(mgso4)并蒸发，得到呈黄色油状物的胺peg葡萄糖(1.5g)，其无需进一步纯化即可使用。
[0356]
步骤3：向50ml rbf中添加叶绿素蛋白(1.04g，2.05mmol，1当量)、pybop(1.28g，2.46mmol，1.2当量)、dcm(15ml)和三乙胺(1.92ml，13.9mmol，6.7当量)。将所得混合物在氮气下在环境温度下搅拌(250rpm)30分钟，然后一次性添加dcm(10ml)中的胺peg葡萄糖。将所得混合物在氮气下在黑暗中搅拌过夜。将反应混合物转移至分液漏斗中并用1m hcl(2x30ml)洗涤，然后用ph 7缓冲液(1x30ml)洗涤。将有机相干燥(na2so4)并通过旋转蒸发进行浓缩，得到蓝色/黑色油状物，通过柱色谱法(4x26cm二氧化硅)使用1％
→
2.5％ meoh/dcm的梯度洗脱将其纯化。合并含有叶绿素蛋白β-d-1-葡萄糖-n-甲基乙氧基乙基酰胺缀合物四乙酸酯(在5％ meoh/dcm中rf约0.4)的级分，得到蓝色/黑色油状物(约0.7g)，使用biotage自柱色谱法将其进一步纯化。合并具有在5％ meoh/dcm中rf约0.4的级分，得到叶绿素蛋白β-d-1-葡萄糖-n-甲基乙氧基乙基酰胺缀合物四乙酸酯(0.38g)(hplc纯度：88％)，其在下一步骤中脱保护而无需进一步纯化。
[0357]
步骤4：向叶绿素蛋白β-d-1-葡萄糖-n-甲基乙氧基乙基酰胺缀合物四乙酸酯(350mg，0.372mmol，1当量)于meoh(5ml)和dcm(5ml)中的溶液添加naome(4.6m于meoh中，0.40ml，1.862mmol，5当量)，并将混合物在氮气下搅拌(420rpm)1小时。tlc分析显示转化为脱乙酰产物(10％ meoh/dcm，rf(起始材料)＝0.85，rf(产物)＝0.25)。用acoh(112mg，1.862mmol，5当量)淬灭反应并通过旋转蒸发进行浓缩，得到黑色薄膜，通过柱色谱法(3x21cm二氧化硅)使用3％-10％ meoh/dcm的梯度洗脱将其纯化，得到呈蓝色/黑色固体的化合物14(204mg，71％)(hplc纯度：91％)。
[0358]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.75(s,1h),9.73(s,1h),9.10(s,1h),9.06(s,1h),8.33(dd,1h),6.44(d,1h),6.18(d,1h),5.30-4.70(br m,3h),4.65(m,1h),4.60-4.53(m,2h),4.13(m,1h),3.98(d,3h),3.81(m,4h),3.68-3.62(m,2h),3.62(s,3h),3.54(d,3h),3.50-3.30(m,14h),3.18-3.05(m,4h),3.00-2.94(m,3h),2.88-2.78(m,2h),2.55-2.45(m,1h),2.45-2.38(m,1h),1.75-1.65(m,7h),-2.25(s,1h),-2.42(s,1h)。
[0359]
合成实施例15-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-甲基-n-(3-(((2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丙基)丙酰胺(也称为叶绿素蛋白β-d-葡糖基-n-甲基丙基酰胺缀合物)(化合物15)的合成
[0360][0361]
步骤1：在配备有内部温度计、氮气入口和橡胶隔片的250ml 3颈rbf中装入(3-羟丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(2.68g，14.17mmol，1.05当量)、搅拌棒、三氯乙酰亚氨酸2,3,4,6-四-o-苯甲酰基-α-d-吡喃葡萄糖基酯(10.00g，13.5mmol，1当量)、无水dcm(100ml)和研磨的4a分子筛(5.0g)。将所得悬浮液置于氮气气氛下并搅拌(420rpm)0.5小时，然后借助于etoh/冰/nacl浴冷却至-15℃(内部温度)。在一分钟过程内逐滴添加tmsotf溶液(0.2m于dcm中，3.3ml，0.67mmol)，并在低温下继续搅拌0.5小时，此时tlc分析指示反应完全(25％ etoac/己烷，rf(起始材料)＝0.4，rf(产物)＝0.2，通过uv可视化)。用三乙胺(8滴)淬灭反应并通过过滤，用另一部分的dcm充分洗涤。浓缩滤液，得到呈黄色糖浆的粗糖基化产物(15.4g)，将其溶解于最少量的dcm中，并使用25％-35％于己烷中的etoac的梯度溶剂通过柱色谱法(4x22cm二氧化硅)纯化溶液，得到呈无色糖浆的2,3,4,6-四-o-苯甲酰基-β-d-吡喃葡萄糖-n-boc-n-甲基丙氧基胺缀合物(7.95g，77％)(在35％于己烷中的etoac中r
f 0.4)。
[0362]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.05-7.99(m,2h),7.98-7.93(m,2h),7.92-7.88(m,2h),7.86-7.79(m,2h),7.59-7.46(m,3h),7.46-7.24(m,9h),5.90(dd,j＝9.7,9.7hz,1h),5.68(dd,j＝9.7,9.7hz,1h),5.52(dd,j＝9.7,7.8hz,1h),4.84(d,j＝7.8hz,1h),4.64(dd,j＝
12.2,3.2hz,1h),4.49(dd,j＝12.2,5.2hz,1h),4.20-4.13(m,1h),3.95(ddd,j＝9.7,5.2,3.2hz,1h),3.61-3.50(m,1h),3.24-2.99(m,2h),2.66(s,3h),1.82-1.68(m,2h),1.39(s,9h)。
[0363]
步骤2：向含有2,3,4,6-四-o-苯甲酰基-β-d-吡喃葡萄糖-n-boc-n-甲基丙氧基胺缀合物(7.95g，10.35mmol，1当量)的500ml rbf中添加dcm(50ml)和搅拌棒。将混合物短暂搅拌(250rpm)直到形成溶液，之后添加tfa(10ml)。将混合物搅拌0.5小时并通过tlc监测(30％ etoac/己烷，rf(起始材料)＝0.4，rf(产物)＝0)，通过uv可视化)。通过旋转蒸发浓缩反应物，然后从chcl3(2x30ml)中重新浓缩，得到呈浅色糖浆的2,3,4,6-四-o-苯甲酰基-β-d-吡喃葡萄糖-n-甲基丙氧基铵三氟乙酸酯缀合物(11.0g)，其无需进一步纯化即可使用。
[0364]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.69(br s,1h),8.15(br s,1h),8.08-8.02(m,2h),7.99-7.88(m,4h),7.87-7.80(m,2h),7.67(br s,1h),7.63-7.48(m,3h),7.52-7.24(m,9h),5.99(dd,j＝9.8,9.8hz,1h),5.71(dd,j＝9.8,9.8hz,1h),5.38(dd,j＝9.8,7.8hz,1h),4.82(d,j＝7.8hz,1h),4.74(dd,j＝12.3,2.8hz,1h),4.47(dd,j＝12.3,5.0hz,1h),4.22-4.06(m,2h),3.73(app.p,j＝5.1hz,1h),3.31-3.18(m,1h),3.14-3.01(m,1h),2.79(t,j＝5.3hz,3h),2.04(app.p,j＝5.4hz,2h)。
[0365]
步骤3：向500ml rbf中装入搅拌棒、叶绿素蛋白(4.05g，7.96mmol，1当量)和dcm(60ml)。将2,3,4,6-四-o-苯甲酰基-β-d-吡喃葡萄糖-n-甲基丙氧基铵三氟乙酸酯缀合物(6.91g，10.35mmol，1.3当量)溶解于dcm(20ml)中并转移至rbf中。添加三乙胺(6.62ml，47.8mmol，6当量)，然后添加pybop(4.97g，9.55mmol，1.2当量)，并将混合物搅拌0.5小时。tlc分析显示起始材料消耗且存在产物(5％meoh/dcm,rf(叶绿素)＝0.25，rf(产物)＝0.95，通过uv可视化)。将混合物转移至分液漏斗中并用1m hcl(2x75ml)洗涤，然后用ph7磷酸盐缓冲液(100ml)洗涤，之后干燥(na2so4)并通过旋转蒸发进行浓缩，得到呈绿色薄膜的粗产物(16.3g)。将粗产物通过biotage自动柱色谱法(0％-2％ meoh/dcm)纯化，得到呈绿色薄膜的叶绿素蛋白β-d-葡糖基-n-甲基丙基酰胺缀合物四苯甲酸酯(4.75g，52％)(hplc纯度：95.9％)。
[0366]
步骤4：向含有叶绿素蛋白β-d-葡糖基-n-甲基丙基酰胺缀合物四苯甲酸酯(4.65g，4.01mmol，1当量)的500ml rbf中添加dcm(50ml)、meoh(50ml)和搅拌棒。将混合物短暂搅拌(300rpm)直到形成深色溶液，随之添加naome溶液(4.6m于meoh中，0.44ml，2.01mmol，0.5当量)，并将混合物搅拌2小时。此时的tlc分析显示完全反应(10％ meoh/dcm，rf(起始材料)＝0.95，rf(产物)＝0)。将反应混合物浓缩并通过biotage自动柱色谱法(5％-12％meoh/dcm)纯化残余物，得到呈蓝色/绿色片状固体的化合物15(2.34g，79％)(hplc纯度：99.4％)。1h nmr(400mhz,cd3od)显示在图10中。
[0367]
合成实施例16-叶绿素蛋白α-d-1-硫代甘露糖-n-甲基丙基酰胺缀合物(化合物16)的合成
[0368][0369]
步骤1：向三乙酸(2r,3r,4s,5s,6r)-2-(乙酰氧基甲基)-6-((3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙基)硫代)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(250mg，0.4668mmol，1.3当量)于dcm(2.3ml)中的溶液添加tfa(0.6ml)。将所得溶液在环境温度下搅拌(420rpm)1小时，然后通过旋转蒸发进行浓缩。将残余物重新悬浮并从氯仿(2x3ml)中浓缩两次，得到呈粘性油状无的脱保护的胺，将其溶解于dcm(1ml)中用于后续偶联反应。
[0370]
步骤2：向10ml rbf中添加叶绿素蛋白(182.6mg，0.3590mmol，1当量)、pybop(242.9mg，0.46678mmol，1.3当量)、dcm(2ml)和三乙胺(0.39ml，2.5005mmol，6当量)。将所得混合物在氮气下在环境温度下搅拌(420rpm)15分钟，然后一次性添加脱保护的胺于dcm中的制备溶液。将所得混合物搅拌90分钟。将反应混合物转移至分液漏斗中并用1m hcl(2x3ml)洗涤，然后用ph 7缓冲液(1x5ml)洗涤。将有机相干燥(na2so4)并通过旋转蒸发进行浓缩，得到起泡蓝色/黑色薄膜。将粗产物通过biotage自动柱色谱法(0％-5％meoh/dcm)纯化，得到呈蓝色/黑色固体的叶绿素蛋白α-d-1-硫代甘露糖-n-甲基丙基酰胺缀合物过乙酸酯(0.16g，48％)。
[0371]
步骤3：向叶绿素蛋白α-d-1-硫代甘露糖-n-甲基丙基酰胺缀合物过乙酸酯(0.18g，0.1728mmol，1当量)于meoh(2ml)和dcm(2ml)中的溶液添加naome(4.6m于meoh中，38μl，0.1728mmol，1当量)，并将混合物在n2下搅拌(420rpm)90分钟。将反应用acoh(10.0μl，0.1728mmol，1当量)淬灭并通过旋转蒸发进行浓缩，得到黑色薄膜。通过biotage自动柱色谱法纯化粗酰胺，得到呈蓝色/黑色固体的化合物16(71.8mg，55％)。
[0372]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.75(s,1h),9.74(s,1h),9.10(d,j＝9.5hz,1h),9.06(s,1h),8.34(dd,j＝17.8,11.6hz,1h),6.44(dd,j＝17.7,1.6hz,1h),6.17(dd,j＝11.6,1.5hz,1h),5.15(dd,j＝40.4,1.4hz,1h),5.09-4.37(m,5h),3.98(d,j＝6.7hz,3h),3.82
(q,j＝7.4hz,2h),3.77-3.64(m,2h),3.64-3.59(m,4h),3.54(d,j＝2.2hz,3h),3.34-3.24(m,4h),2.96-2.91(m,1h),2.88(s,2h),2.80(s,1h),2.65-2.53(m,1h),2.48-2.33(m,1h),1.90-1.76(m,2h),1.69(t,j＝7.6hz,7h),-2.27(s,1h),-2.43(s,1h)。
[0373]
合成实施例17-叶绿素蛋白β-d-1-硫代甘露糖-n-甲基丙基酰胺缀合物(化合物17)的合成
[0374][0375]
步骤1：向三乙酸(2r,3r,4s,5s,6s)-2-(乙酰氧基甲基)-6-((3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙基)硫代)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(250mg，0.4668mmol，1.3当量)于dcm(2.3ml)中的溶液添加tfa(0.6ml)。将所得溶液在环境温度下搅拌(420rpm)1小时，然后通过旋转蒸发进行浓缩。将残余物重新悬浮并从氯仿(2x3ml)中浓缩两次，得到呈粘性油状无的脱保护的胺，将其溶解于dcm(1ml)中用于后续偶联反应。
[0376]
步骤2：向10ml rbf中添加叶绿素蛋白(182.6mg，0.3590mmol，1当量)、pybop(242.9mg，0.46678mmol，1.3当量)、dcm(2ml)和三乙胺(0.39ml，2.5005mmol，6当量)。将所得混合物在氮气下在环境温度下搅拌(420rpm)15分钟，然后一次性添加脱保护的胺于dcm中的制备溶液。将所得混合物搅拌90分钟。将反应混合物转移至分液漏斗中并用1m hcl(2x3ml)洗涤，然后用ph 7缓冲液(1x5ml)洗涤。将有机相干燥(na2so4)并通过旋转蒸发进行浓缩，得到起泡蓝色/黑色薄膜。将粗产物通过biotage自动柱色谱法(0％-5％meoh/dcm)纯化，得到呈蓝色/黑色固体的叶绿素蛋白β-d-1-硫代甘露糖-n-甲基丙基酰胺缀合物过乙酸酯(0.18g，54％)。
[0377]
步骤3：向叶绿素蛋白β-d-1-硫代甘露糖-n-甲基丙基酰胺缀合物过乙酸酯(0.18g，0.1944mmol，1当量)于meoh(2ml)和dcm(2ml)中的溶液添加naome(4.6m于meoh中，43μl，0.1944mmol，1当量)，并将混合物在n2下搅拌(420rpm)90分钟。将反应用acoh(11.1μl，0.1944mmol，1当量)淬灭并通过旋转蒸发进行浓缩，得到黑色薄膜。通过biotage自动柱色谱法纯化粗酰胺，得到呈蓝色/黑色固体的化合物17(107.9mg，73％)。
[0378]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.74(s,1h),9.73(s,1h),9.11(d,j＝16.9hz,1h),9.06(s,1h),8.33(dd,j＝17.8,11.6hz,1h),6.43(dd,j＝17.9,1.6hz,1h),6.16(dd,j＝11.6,1.5hz,1h),4.88-4.52(m,7h),4.47(dt,j＝22.0,5.8hz,1h),3.98(d,j＝5.7hz,3h),3.80(q,j＝7.8hz,2h),3.77-3.71(m,1h),3.64-3.58(m,3h),3.54(d,j＝3.8hz,3h),3.32(s,5h),2.89(s,2h),2.78(s,1h),2.55(q,j＝7.6hz,2h),2.46-2.35(m,1h),1.89-1.75(m,1h),1.75-1.64(m,7h),-2.26(s,1h),-2.42(d,j＝2.1hz,1h)。
[0379]
合成实施例18-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-n-甲基丙酰胺(也称为叶绿素蛋白n-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-n-甲基丙基酰胺)(化合物18)的合成
[0380][0381]
向配备有氮气入口并含有搅拌棒的100ml rbf中添加叶绿素蛋白(2.00g，3.93mmol，1当量)、二氯甲烷(40ml)、pybop(2.46g，4.72mmol，1.2当量)和三乙胺(0.87ml，3当量)。将混合物在室温下搅拌30分钟，然后一次性添加dcm(5ml)中的2-(2-甲基氨基乙氧基)乙醇(0.61g，1.3当量)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过hplc进行的分析显示反应完成。将反应混合物转移至分液漏斗中并用1m hcl(2x50ml)洗涤，然后用ph 7缓冲液(2x50ml)洗涤。将有机层干燥(na2so4)并通过旋转蒸发进行浓缩，得到呈蓝色/绿色薄膜的粗产物(4.2g)，通过柱色谱法(5
×
25cm二氧化硅)用1％-3％ meoh/dcm洗脱将其纯化。将根据tlc的纯级分(在5％ meoh/dcm中r
f 0.40)合并，得到化合物18(1.40g，58％)(hplc纯度：94.4％)。
[0382]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.72(m,2h),8.87-8.82(m,1h),8.16(dd,1h),6.39(dd,1h),6.15(dd,1h),4.72
–
4.65(m,1h),4.59-4.50(m,1h),4.01(s,3h),3.85(q,2h),3.65(s,3h),3.60-3.55(m,2h),3.53(s,3h),3.41-3.38(m,2h),3.37(s,3h),3.35-3.30(m,2h),2.76-2.71(m,1h),2.65-2.50(m,4h),2.50-2.40(m,1h),2.38-2.30(m,3h),2.30-2.20(m,2h),1.90-1.80(m,1h),1.80-1.73(m,7h),-2.09(br s,1h),-2.22(br s,1h)。
[0383]
合成实施例19-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-甲基-n-(3-(((2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)硫代)丙基)丙酰胺锌络合物(化合物19)的合成
[0384][0385]
向25ml单颈rbf中添加叶绿素蛋白β-d-1-硫代葡萄糖-n-甲基丙基酰胺缀合物(50mg，0.066mmol，1当量)和dcm(2ml)。添加乙酸锌(24mg，0.132mmol，2当量)于甲醇(1ml)中的溶液并将混合物在氮气下在黑暗中搅拌2小时。然后将溶液用dcm(20ml)稀释并用水(3x25ml)洗涤，干燥(na2so4)并浓缩，得到呈蓝色固体的化合物19(54mg，定量)(hplc纯度：98.5％)。
[0386]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.80-9.20(br s,2h),8.70-8.50(br s,2h),8.20-8.00(br s,1h),6.25-5.90(br m,2h),4.50-4.00(br s,2h),4.00-3.20(br m,14h),3.10(br m,2h),2.70-2.10(br m,10h),2.00-1.30(br m,28h),1.20-0.80(br m,5h)。
[0387]
合成实施例20-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-(2-(2-(((2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙基)丙酰胺(化合物20)的合成
[0388][0389]
步骤1：向3颈100ml rbf中装入三乙酸(2r,3r,4s,5r,6r)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(1.00g，2.167mmol，1当量)、10％ pd/c(25mg)、甲醇(100ml)和搅拌棒。连接氢气球并将烧瓶抽真空，然后重新填充氮气(3次)，抽真空并重新填充氢气(2次)。然后将所得溶液在氢气氛下搅拌(550rpm)1小时。将溶液通过(0.5x3cm)过滤，用dcm(约30ml)洗涤，然后在减压下除去溶剂，得到1.02g粗胺产物，其直接用于下一步骤中。
[0390]
步骤2：向50ml rbf中添加叶绿素蛋白(0.85g，1.67mmol，1当量)、pybop(1.04g，2.01mmol，1.2当量)、dcm(20ml)和三乙胺(1.39ml，10.03mmol，6当量)。将所得混合物在氮气下在环境温度下搅拌(250rpm)15分钟，然后一次性添加dcm(5ml)中的胺(1.02g)。将所得混合物在氮气下在黑暗中搅拌过夜。将反应混合物用dcm(30ml)稀释，转移至分液漏斗中并用1m hcl(2x75ml)洗涤，然后用ph 7缓冲液(1x100ml)洗涤。将有机相干燥(na2so4)并通过旋转蒸发进行浓缩，得到蓝色/黑色油状物(约2.5g)，通过柱色谱法(4x25cm二氧化硅)用1％-2.5％ meoh/dcm洗脱将其纯化。合并含有产物(在5％ meoh/dcm中rf约0.4)的级分，得到呈蓝色/黑色固体的叶绿素蛋白β-d-1-葡萄糖-n-乙氧基乙基酰胺缀合物四乙酸酯(0.65g，42％)(hplc纯度：83％)，将其脱保护而无需进一步纯化。
[0391]
步骤3：向叶绿素蛋白β-d-1-葡萄糖-n-乙氧基乙基酰胺缀合物四乙酸酯(600mg，0.648mmol，1当量)于meoh(7ml)和dcm(7ml)中的溶液添加naome(4.6m于meoh中，0.14ml，0.648mmol，1当量)，并将混合物在氮气下搅拌(300rpm)90分钟。hplc分析显示转化为脱乙
酰产物。将反应用acoh(19mg，0.5当量)淬灭并通过旋转蒸发进行浓缩，得到黑色薄膜，通过柱色谱法(4x24cm二氧化硅)用5％-12％ meoh/dcm洗脱将其纯化。合并具有在10％ meoh/dcm中r
f 0.20的级分，得到呈蓝色/黑色固体的化合物20(310mg，63％)。
[0392]
合成实施例21-3-((7s,8s)-18-乙基-2,5,8,12,17-五甲基-13-乙烯基-7h,8h-卟啉-7-基)-n-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-n-甲基丙酰胺锌络合物(化合物21)的合成
[0393][0394]
向50ml单颈rbf中添加叶绿素蛋白n-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-n-甲基丙基酰胺(200mg，0.328mmol，1当量)和dcm(10ml)。添加乙酸锌(120mg，0.656mmol，2当量)于甲醇(5ml)中的溶液并将混合物在氮气下在黑暗中搅拌2小时。然后将溶液用dcm(20ml)稀释并用水(3x25ml)洗涤，干燥(na2so4)并浓缩，得到呈蓝色固体的粗产物。使用3％ meoh/dcm溶剂混合物通过柱色谱法(3x18cm二氧化硅)纯化粗产物。合并纯级分(在5％ meoh/dcm中rf＝0.45)，得到呈蓝色片状固体的化合物21(203mg，92％)(hplc纯度：93.2％)。
[0395]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.80-9.25(br s,2h),8.80-8.50(br s,2h),8.20-8.00(br s,1h),6.30-6.15(br m,1h),6.10-5.95(br m,1h),4.80-4.10(br m,2h),4.00-3.70(br m,9h),3.70-3.20(br m,14h),2.85-2.60(br m,4h),2.50(br s,3h),2.50-2.30(br m,5h),2.25-2.20(m,5h),1.85-1.60(m,12h),1.50-1.40(m,5h),1.20-1.00(br m,2h)。
[0396]
合成实施例22-叶绿素蛋白(6-己基)三苯基氯化鏻丙基酰胺(化合物22)的合成
[0397][0398]
向25ml rbf中添加叶绿素蛋白(100mg，0.1966mmol，1当量)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉-4-鎓氯化物(dmtmm)(76mg，0.2752mmol，1.4当量)、dcm(5ml)、三乙胺(44μl，0.3145mmol，1.6当量)和(6-氨基己基)三苯基氯化鏻盐酸盐(120mg，0.2752mmol，1.4当量)。将所得混合物在氮气下在环境温度下搅拌(420rpm)30分钟。使用旋转蒸发器浓缩反应混合物，并通过柱色谱法(二氧化硅，5％-7％ meoh/dcm)纯化粗残余物，得到呈深蓝色/绿色固体的化合物22(180mg，定量)。
[0399]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.67(m,2h),8.89(s,1h),8.78(s,1h),8.14(dd,1h),7.83(t,1h),7.62(m,6h),7.48(m,9h),6.35(d,1h),6.10(d,1h),4.70(q,1h),4.51(m,1h),3.98(m,7h),3.82(q,2h),3.60(s,3h),3.49(m,5h),3.35(s,3h),3.26(m,2h),2.88(m,1h),2.61-2.48(m,2h),1.90-1.80(m,1h),1.78-1.70(m,6h),1.60-1.40(m,8h),-2.11(br s,1h),-2.24(br s,1h)。
[0400]
合成实施例23-叶绿素蛋白n-葡甲胺-丙基酰胺(化合物23)的合成
[0401][0402]
向50ml rbf中添加叶绿素蛋白(0.50g，0.983mmol，1当量)、dmtmm(0.30g，1.081mmol，1.1当量)、dcm(15ml)和葡甲胺(0.23g，1.179mmol，1.2当量)。将所得混合物在氮气下在环境温度下搅拌1小时。添加另一部分葡甲胺(0.10g，0.51mmol，0.5当量)并将溶液再搅拌3小时。将反应混合物转移至分液漏斗中，用氯仿(30ml)稀释并用0.5m hcl(50ml)洗涤。用氯仿重新萃取水层，并将合并的有机物用ph 7缓冲液洗涤。将有机相干燥(na2so4)并通过旋转蒸发进行浓缩，得到蓝色/黑色薄膜，通过柱色谱法(二氧化硅)使用5％meoh/dcm(50ml)、然后7％ meoh/dcm(100ml)、然后9％meoh/dcm(100ml)、然后10％ meoh/dcm(200ml)的梯度将其纯化，得到呈深蓝色/绿色固体的化合物23(432mg，64％)。
[0403]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.74(s,1h),9.72(s,1h),9.11(s,1h),9.07(s,1h),8.34(dd,1h),6.44(d,1h),6.17(d,1h),5.10&4.75(2x d,1h),4.65-4.40(m,5h),4.30(m,1h),4.00(m,3h),3.90(m,1h),3.80(m,2h),3.68(m,1h),3.62(s,3h),3.60-3.50(m,5h),3.50-3.40(m,2h),3.30-3.08(m,1h),3.00(s,1h),2.90(s,2h),2.86-2.60(m,1h),2.45-2.35(m,1h),1.75-1.65(m,6h),1.75-1.50(m,1h),-2.26(s,1h),-2.42(s,1h)。
[0404]
合成实施例24-叶绿素蛋白2-脱氧-d-甘露糖胺-丙基酰胺(化合物24)的合成
[0405][0406]
向含有搅拌棒的25ml rbf中添加叶绿素蛋白(250mg，0.491mmol，1当量)、dmtmm(127mg，0.541mmol，1.1当量)、dmf(3ml)、三乙胺(75μl，0.541mmol，1.1当量)和(d)-甘露糖胺盐酸盐(117mg，0.541mmol，1.1当量)。将所得混合物搅拌30分钟。添加另外的dmtmm(13mg，0.1当量)、三乙胺(7μl，0.1当量)和(d)-甘露糖胺盐酸盐(10mg，0.1当量)并将溶液再搅拌30分钟。通过旋转蒸发浓缩反应混合物，得到黑色残余物。将残余物溶解于dcm
(20ml)中，并用0.5m hcl(10ml)洗涤。收集dcm层并用ph 7磷酸盐缓冲液洗涤。将混合物用1:1dcm/meoh(3x10ml)萃取，干燥(na2so4)并浓缩，得到深色固体(约220mg)，将其进行柱色谱法(二氧化硅)。使用8％ meoh/dcm、然后12％ meoh/dcm、然后14％ meoh/dcm的梯度洗脱柱。合并含有化合物24的级分并在真空下干燥，得到深蓝色固体(105mg，32％)。
[0407]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.76(s,1h),9.74(s,1h),9.05-9.12(m,2h),8.34(dd,1h),7.54&7.18(2x d,1h),6.60-6.42(m,2h),6.17(d,1h),4.93(m,1h),4.72-4.50(m,4h),4.30-4.20(m,1h),4.01(m,1h),3.95(m,3h),3.82(q,2h),3.80-3.72(m,1h),3.65-3.60(m,4h),3.58-3.52(m,4h),3.50-3.40(m,2h),3.17-3.02(m,1h),2.68-2.57(m,1h),2.48-2.38(m,1h),2.25-2.12(m,1h),1.82-1.67(m,7h),-2.26(brs,1h),-2.43(brs,1h)。产物以差向异构体的混合物形式存在，其导致处于约3:1比率的两组信号。
[0408]
合成实施例25-叶绿素蛋白2-脱氧-d-半乳糖胺-丙基酰胺(化合物25)的合成
[0409][0410]
向含有搅拌棒的25ml rbf中添加叶绿素蛋白(250mg，0.491mmol，1当量)、dmtmm(149mg，0.541mmol，1.1当量)、dmf(3ml)、三乙胺(75μl，0.541mmol，1.1当量)和d-(+)-半乳糖胺盐酸盐(116mg，0.541mmol，1.1当量)。将所得混合物搅拌30分钟，此时hplc分析显示约4％叶绿素蛋白剩余。添加另外的dmtmm(14mg，0.1当量)、三乙胺(7μl，0.1当量)和d-(+)-半乳糖胺盐酸盐(11mg，0.1当量)并将溶液再搅拌30分钟。通过旋转蒸发浓缩反应混合物，得到黑色残余物。将残余物进行柱色谱法。使用10％ meoh/dcm(300ml)、然后15％ meoh/dcm(300ml)、然后20％ meoh/dcm的梯度洗脱柱。合并含有产物的级分并通过旋转蒸发除去溶剂。将固体在60℃下在真空下干燥，得到呈深蓝色固体的化合物25(275mg，84％)。
[0411]1h nmr(400mhz,d
6-dmso)δ9.74(d,j＝6.2hz,2h),9.13-8.95(m,2h),8.33(dd,j＝17.8,11.6hz,1h),7.66(dd,j＝36.3,8.5hz,1h),6.50-6.33(m,1h),6.27-6.07(m,2h),4.92(t,j＝3.9hz,1h),4.72-4.22(m,5h),4.00-3.90(m,3h),3.88-3.67(m,4h),3.62(d,j＝0.9hz,4h),3.55(s,4h),3.33(s,24h),2.53-2.47(m,4h),2.20-1.99(m,1h),1.84-1.62(m,8h),-2.25(s,1h),-2.41(s,1h)。产物以差向异构体的混合物形式存在，其导致处于约3:1比率的两组信号。
[0412]
生物实验细节
[0413]
实施例1-叶绿素蛋白类似物的溶解度的测定
[0414]
吸光度最大值(对于叶绿素蛋白为660
±
2nm)用作溶解度的替代量度。将相关叶绿素蛋白类似物在含有从100％至0％的递减量的dmso的pbs(磷酸盐缓冲盐水)溶液中稀释至50μm。
[0415]
由于在实验中使用了pbs缓冲液(ph 7.4)并且叶绿素蛋白中的羧酸(以及其它相关二氢卟吩中的相同羧基)估计具有小于5的pka，因此pbs缓冲液中的叶绿素蛋白将主要作为钠盐和钾盐存在，几乎没有游离酸。
[0416]
在需要时，添加聚乙烯吡咯烷酮(k30)至终浓度1％w/v。使用cytation 3多模式板阅读器(biotek)在光谱扫描模式下测量吸光度，在500-800nm之间以2nm增量捕获光谱。还测量了等效的空白溶液并相应地减去。每个光谱均归一化为具有0的最小信号和100％的在纯dmso溶液(最可溶状态)中的最大信号。
[0417]
结果-叶绿素蛋白的溶解度和吸光度最大值
[0418]
在含有dmso作为有机溶剂的溶液中评估叶绿素蛋白的溶解度。将叶绿素蛋白(50μm最终浓度)重新悬浮于100％ dmso中以完全溶解叶绿素蛋白。在叶绿素蛋白浓度保持在50μm的情况下，dmso％从100％至0％逐步降低。通过涡旋混合所有溶液，然后离心2分钟以沉淀任何不溶性物质。将150μl等分试样转移至96孔透明微孔板的单独孔中，并在500-800nm之间以2nm增量收集吸光度光谱。含有递减dmso％的等效溶液用于控制背景。
[0419]
在水性溶剂中，叶绿素蛋白展示最大值在688
±
2nm处的单个宽吸光度峰，其解析成最大值分别在688和660
±
2nm处的两个不同的峰(图1)。688nm处的吸光度峰随着dmso浓度增加而降低，并且在75％ dmso下仅观察到660
±
2nm处的单个吸光度最大值。因此，叶绿素蛋白的溶解度取决于有机溶剂浓度；并且当完全溶解于有机溶剂中时，吸光度最大值出现在660
±
2nm处。
[0420]
结果-叶绿素蛋白的溶解度通过添加pvp得到改善
[0421]
为了提高叶绿素蛋白的溶解度，测试了添加1％w/v的pvp。pvp大大增加了溶解度，并且当存在1％ pvp时，叶绿素蛋白仍可溶于水性溶剂(不含dmso)中。此外，当引入pvp时，688nm处的叶绿素蛋白吸光度峰不存在，从而证明在pvp存在下叶绿素蛋白的溶解度提高(图2)。
[0422]
结果-叶绿素蛋白类似物的溶解度和吸光度最大值
[0423]
如前所述，在1％ pvp(w/v)存在下测量了几种叶绿素蛋白类似物(化合物1-3)的吸光度光谱。所测试的大多数叶绿素蛋白类似物在660
±
2nm处具有吸光度最大值，如先前在1％ pvp(w/v)存在下所测定。
[0424]
实施例2-细胞毒性、光毒性和治疗指数
[0425]
二氢卟吩储备溶液的制备
[0426]
将光敏剂(例如叶绿素蛋白、叶绿素蛋白类似物、二氢卟吩e4二钠(由advanced molecular technologies,scoresby提供)或他拉泊芬钠(购自focus bioscience目录号hy-16477-5mg))重悬于浓度为5.5mm的100％二甲基亚砜(dmso)中。将样品在4℃下避光储存。
[0427]
细胞培养
[0428]
将人卵巢癌细胞系skov3(atcc#htb-77)保持在补充有10％v/v胎牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素的杜尔贝科氏改良的伊格尔氏培养基/营养混合物f-12(dmem/f-12)中。将单层培养物在37℃与5％ co2下在加湿孵育箱中生长。
[0429]
用于体外研究的二氢卟吩制剂
[0430]
对于体外实验，将光敏剂(100％ dmso中的5.5mm储备溶液)在补充有10％v/v胎牛血清、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素和10％w/v kollidon-12的细胞培养基(杜尔贝科氏改良的伊格尔氏培养基/营养混合物f-12)中稀释。一旦细胞达到约80％汇合，就用含光敏剂的培养基替换用过的培养基，并将细胞孵育所需的时间段以允许光敏剂摄取。
[0431]
统计分析
[0432]
使用graphpad prism v8.3.1(549)(graphpad software,ca)分析所有数据。将光谱吸光度和活力测量值在0％-100％的范围内归一化，最小值为0并且最大值由数据集确定。使用具有可变斜率的s形四点非线性回归确定剂量反应，并计算每种化合物的ic50。所有数据均显示为平均值
±
sd(在适当情况下)。
[0433]
细胞毒性
[0434]
将skov3细胞以每孔100μl培养基中5000个细胞的细胞密度接种在96孔黑壁板(greiner#655090)中。在达到约60％汇合时，将培养基吸出并用含有在dmso中0-100μm的相关叶绿素蛋白类似物的新鲜培养基替换。将细胞再孵育24小时，允许摄取叶绿素蛋白类似物。
[0435]
为了测试叶绿素蛋白类似物的固有细胞毒性(即“暗毒性”)，在24小时后用含有10％(v/v)alamarblue细胞活力试剂(thermofisher)的新鲜培养基替换培养基，并将细胞在37℃下孵育6小时。未处理的细胞用作对照。使用cytation 3多模式板阅读器(biotek)测量荧光(ex555nm/em 596nm)，并根据剩余活细胞％评估细胞毒性。所有测量一式四份进行。
[0436]
结果-与二氢卟吩e4二钠相比，叶绿素蛋白的细胞毒性
[0437]
为评估叶绿素蛋白的固有细胞毒性(即“暗毒性”)，将skov3卵巢癌细胞与浓度为0-100μm(在dmso中)的叶绿素蛋白一起孵育24小时。使用alamarblue细胞活力试剂评估细胞活力，并与未处理的对照进行比较。在存在或不存在pvp的情况下使用叶绿素蛋白进行测量。
[0438]
在不存在pvp的情况下，用高达80μm的二氢卟吩e4二钠处理的细胞在24小时后仍保持》80％活力。在添加pvp的情况下，活力在100μm下保持。在不存在pvp的情况下用叶绿素蛋白处理的细胞即使在10μm下也具有》80％活力；然而，在添加pvp的情况下，细胞在高达25μm浓度下仍保持》80％活力(图3)。因此，添加pvp降低了两种化合物的固有毒性并增加了溶解度，从而使得细胞对叶绿素蛋白的耐受性提高。
[0439]
出人意料地，添加了pvp的叶绿素蛋白比没有添加pvp的叶绿素蛋白相比具有更低的暗毒性，从而产生更好的治疗指数。
[0440]
光毒性
[0441]
将skov3细胞以每孔100μl培养基中5000个细胞的细胞密度接种在96孔黑壁板(greiner#655090)中。在达到约60％汇合时，将培养基吸出并用含有在dmso中0-100μm的相关叶绿素蛋白类似物的新鲜培养基替换。将细胞再孵育24小时，允许摄取叶绿素蛋白类似物。
[0442]
为了测试光毒性，将与叶绿素蛋白类似物(在dmso中0-10μm)一起孵育的细胞在24小时后更换培养基(如上所述)，然后暴露于激光密度为50mw/cm2的652nm激光(invion)持续5分钟(总计15j/cm2)。激活后，将细胞再培养24小时。然后用含有alamarblue的新鲜培养基替换培养基，并如上所述评估剩余的活细胞％。对照包括用叶绿素蛋白类似物处理但未通过激光激活的细胞；未经叶绿素蛋白类似物处理但用激光处理的细胞；和未处理的对照。所有测量一式四份进行。
[0443]
出于比较目的，对叶绿素蛋白类似物进行了测试，并与二氢卟吩e4二钠和他拉泊芬钠(一种临床上批准的用于肺癌的光动力治疗的光敏剂)两者进行了比较。光毒性ic90值
和暗毒性ic10值使用具有可变斜率的log[抑制剂]-对归一化反应剂量曲线，使用公式y＝100/(1+(ic90/x)^希尔斜率(光毒性ic90)或y＝100/(1+(ic10/x)^希尔斜率(暗毒性ic10)计算。
[0444]
结果-与二氢卟吩e4二钠相比，叶绿素蛋白的光毒性
[0445]
为评估光毒性，将细胞用递增浓度的叶绿素蛋白或二氢卟吩e4二钠(在dmso中0-10μm，在存在或不存在pvp的情况下制备)和随后的激光(652nm)激活进行处理。包括二氢卟吩e4二钠以评估它们的比较功效。ic50值是根据每种情况下的拟合曲线估计的。在不存在pvp的情况下，二氢卟吩e4二钠返回4.53μm的ic50；通过添加pvp，ic50其改善至1.35μm。相比之下，叶绿素蛋白的计算ic50为63.07nm；添加pvp将其降低至53.85nm(图4)。
[0446]
出人意料地，在头对头测试中在卵巢癌细胞中与二氢卟吩e4二钠盐相比，叶绿素蛋白作为光毒性剂效力强约75倍(0.06μm至4.53μm)。因此，在体外叶绿素蛋白的光毒性明显优于二氢卟吩e4二钠。
[0447]
叶绿素蛋白类似物的毒性特征
[0448]
如前所述使用skov3卵巢癌细胞评估几种叶绿素蛋白类似物的光毒性和固有细胞毒性(即“暗毒性”)。出于比较目的，将叶绿素蛋白类似物与二氢卟吩e4二钠和他拉泊芬钠(一种临床上批准的用于肺癌的光动力治疗的光敏剂)进行了比较。光毒性ic90值和暗毒性ic10值使用具有可变斜率的log[抑制剂]-对归一化反应剂量曲线，使用公式y＝100/(1+(ic90/x)^希尔斜率(光毒性ic90)或y＝100/(1+(ic10/x)^希尔斜率(暗毒性ic10)计算。结果概述于表1中。
[0449]
叶绿素蛋白和叶绿素蛋白单钠盐(化合物1)两者均展示相似的光毒性和暗毒性特征，正如在细胞培养中使用的碳酸钠缓冲系统中将游离酸转化为盐形式的情况下所预期。二氢卟吩e4二钠和他拉泊芬钠的体外光毒性明显低于所测试的所有叶绿素蛋白类似物，ic90值在μm范围内(对比叶绿素蛋白类似物的nm范围)。化合物3、5、6、7和8具有比所有其它测试的物质更大的光毒性，在每种情况下表观ic90《100nm。因此，与临床批准的光敏剂他拉泊芬钠相比，叶绿素蛋白类似物实现了光毒性的约450倍增加。
[0450]
叶绿素蛋白类似物的治疗指数
[0451]
为了评价叶绿素蛋白类似物的治疗潜力，计算了所测试的每种化合物的治疗指数(ti)。通过比较理想效果所需的药物浓度与导致不良脱靶毒性的浓度，ti提供用于描述相对药物安全性的定量测量。使用光毒性ic90对比暗毒性ic10计算每种情况下的ti。
[0452]
表1中提供了所测试的所有化合物的ti值。他拉泊芬钠具有最低计算治疗指数(ti＝0.49)，二氢卟吩e4二钠仅稍微更好(ti＝1.89)，表明其使用的潜在治疗窗口较小。本发明的叶绿素蛋白类似物具有相对改善的ti和显著更大的光毒性(表1)。
[0453]
因此，叶绿素蛋白类似物具有比临床应用的光敏剂更好的理想治疗指数。此外，叶绿素蛋白类似物的更大光毒性表明它们在体内以大大降低的剂量使用的潜力。因此，叶绿素蛋白类似物具有可接受的临床应用治疗特征谱。
[0454]
表1.叶绿素蛋白类似物的毒性特征和治疗指数：
[0455][0456]
叶绿素蛋白类似物的光谱特性
[0457]
所制备的叶绿素蛋白类似物都展示4个吸收峰，分别为在404
±
4nm处的索雷(soret)条带以及在绿色、红色和远红外中的q条带。二氢卟吩e4二钠和他拉泊芬钠具有相似的光谱特性。与zn
2+
离子络合(化合物19和21)导致光谱压缩，索雷和q1调点发生红移，并且q2和q3条带发生蓝移。
[0458]
叶绿素蛋白类似物的性能优于二氢卟吩e4二钠和临床批准的作为光敏剂的他拉泊芬钠
[0459]
将许多叶绿素蛋白类似物的单线态氧(1o2)的产生、细胞光毒性和光依赖性细胞毒性(“暗毒性”)与二氢卟吩e4二钠和他拉泊芬钠(单-l-天冬氨酰基二氢卟吩e6)(laserphyrin
tm
的活性成分)进行了比较。
[0460]
与二氢卟吩e4二钠和他拉泊芬钠相比，所有叶绿素蛋白类似物都展示相似或显著增强的1o2产生率和针对skov3癌细胞的光毒性(表1)。当zn
2+
与叶绿素蛋白类似物络合时出现这种规则的例外情况，其导致化合物19和21的ros降低。
[0461]
在一些情况下，ros产生率是任一比较物(例如化合物5)的两倍以上；并且几种化合物(例如化合物3、5、6、7和8)实现了低于100nm的细胞光毒性(表1)。在所有情况下，非特异性细胞毒性ic10与他拉泊芬钠相似或优于他拉泊芬钠，表明叶绿素蛋白类似物提供改善的治疗特征谱供使用。
[0462]
因此，叶绿素蛋白类似物的性能优于二氢卟吩e4二钠和临床批准的光敏剂他拉泊芬钠两者，具有(i)更高的单线态氧产生率；(ii)针对癌细胞的显著更高的光毒性；和(iii)类似或降低的非特异性细胞毒性，表明叶绿素蛋白类似物在治疗应用中应具有较低脱靶效应。
[0463]
金属离子改变叶绿素蛋白类似物的光谱性质和活性
[0464]
将化合物18与zn
2+
离子络合，得到化合物21，并比较它们的活性。与zn
2+
络合改变了化合物18的光谱特征，在索雷和q1条带中具有明显14-16nm红移；相比之下，q3和q4条带分别蓝移了8nm和22nm。包含zn
2+
离子还导致ros产生率的约2.5倍降低和光毒性活性的重大损失，非特异性暗毒性增加(表1)。
[0465]
因此，金属离子对叶绿素蛋白的活性和光谱特性具有显著影响，并且可用于根据需要调节活性。
[0466]
用糖基官能化增强光毒性
[0467]
将叶绿素蛋白用使用各种构型的糖基(葡萄糖或甘露糖)进行官能化，得到葡萄糖连接的物质(例如化合物6和8)和甘露糖连接的物质(例如化合物17)。虽然所有物质的1o2产生率相似，但与化合物2相比，每种糖基缀合的叶绿素蛋白类似物的细胞光毒性显著增加(表1)。特别地，化合物6和8实现了0.06μm的显著细胞光毒性ic90，与化合物2相比增加大约4倍(表1)。
[0468]
实施例3-细胞摄取和保留
[0469]
盐取代不会改变体外细胞摄取或保留
[0470]
基于化合物1c相对于化合物1增加的光毒性，评估了这种盐取代是否随时间推移改变细胞摄取或保留。
[0471]
将skov3细胞在化合物1或1c(如前所述)存在下孵育长达24小时。在规定的时间间隔(图5)，吸出培养基，用无菌pbs替换，并使用cytation 3多模式板阅读器(biotek)将细胞针对荧光成像(ex 405nm/em 660nm)。24小时后，吸出培养基，用新鲜培养基替换，并类似地监测细胞荧光的损失。然后对所有图像(每个时间点至少100个细胞)进行定量分析(gen5.0软件)并确定平均荧光/细胞/时间点。将平均荧光测量值针对每种光敏剂测量的最大平均值进行归一化，并绘制为随时间推移的总荧光百分比(平均值
±
sd)。
[0472]
化合物1和1c的相对摄取以及它们在24小时内从细胞的清除在图5中示出。两种盐形式之间的摄取或清除没有显著差异(图5a)。在任一种情况下，细胞定位也没有明显差异(图5b)，表明胆碱取代不影响细胞亲和力或叶绿素蛋白的摄取。
[0473]
因此，叶绿素蛋白中的盐取代可改变其针对癌细胞的活性；并且特别地，叶绿素蛋白胆碱盐(化合物1c)相对于其它盐具有出人意料的改进性能，尽管ros产生率或细胞摄取
没有明显变化
[0474]
化合物2表现出延长的细胞保留
[0475]
在48小时时间段内比较了skov3癌细胞中化合物1和2的摄取和保留。将skov3细胞在化合物1或2(如前所述)存在下孵育长达24小时。在规定的时间间隔(图6)，吸出培养基，用无菌pbs替换，并使用cytation 3多模式板阅读器(biotek)将细胞针对荧光成像(ex 405nm/em 660nm)。24小时后，吸出培养基，用新鲜培养基替换，并类似地监测细胞荧光的损失。然后对所有图像(每个时间点至少100个细胞)进行定量分析(gen5.0软件)并确定平均荧光/细胞/时间点。将平均荧光测量值针对每种光敏剂测量的最大平均值进行归一化，并绘制为随时间推移的总荧光百分比(平均值
±
sd)。
[0476]
化合物1和2的相对摄取以及它们在24小时内从细胞的清除在图6中示出。两种化合物之间的摄取率没有显著差异(图5a)。然而，与化合物1相比，化合物2在24小时后在细胞中的保留水平显著更高，对于化合物1，80％的荧光在4小时内损失；相比之下，在24小时后，》50％的化合物2保留在细胞内(图6)。化合物2还在细胞中展示明显的点状分布，表明其与化合物1不同的囊泡定位(图6b)。
[0477]
用糖基官能化增强细胞摄取
[0478]
将叶绿素蛋白用使用各种构型的糖基(葡萄糖或甘露糖)进行官能化，并如上所述在4小时孵育期内评估对细胞摄取率的影响。糖基缀合的叶绿素蛋白类似物的摄取率超过未缀合的化合物2(实例在图7中示出)；在2小时后，糖基缀合的叶绿素蛋白类似物(化合物6、8和17)已达到其最大摄取量的57％-68％，相比之下化合物2为37％(图7a)。到4小时时，总摄取量相似，并且葡萄糖(化合物6和8)与甘露糖(化合物17)连接的物质之间的细胞分布没有明显差异(图7b)。值得注意的是，官能化还增加了相对溶解度，导致扩散分布模式更类似于化合物1而不是化合物2(图7b)。
[0479]
实施例4-叶绿素蛋白类似物针对多种癌细胞类型具有活性
[0480]
使用化合物3和6作为实例，如上所述评估了叶绿素蛋白类似物针对多种癌细胞类型的活性。表2中报告了光毒性。化合物3和6显示出针对多种癌细胞类型的异常活性，在一些情况下光毒性ic90低至0.03μm(表2)。这些数据证明叶绿素蛋白类似物用于泛癌疗法的潜力。
[0481]
表2.化合物3和6的泛癌活性。
[0482][0483]
实施例5
–
叶绿素蛋白类似物无毒且在体内定位于肿瘤组织
[0484]
在体内探索了化合物6作为代表性叶绿素蛋白物质的潜在应用。野生型小鼠(balb/c和c57bl/6)通过静脉内或腹膜内注射接受了化合物6，剂量范围为0.5至5mg/kg。在任何剂量下均未观察到不良毒性事件，证明与体外数据一致的良好安全性特征。
[0485]
使用两种模型探索了肿瘤定位和保留。
[0486]
模型1使用了皮下植入104x4t1小鼠乳腺癌细胞的balb/c野生型小鼠。当肿瘤达到可触及的大小(直径约3-6mm)时，小鼠通过口服管饲(口服：2.5mg/kg)、静脉内注射(iv：1.0mg/kg)或肿瘤内注射(it：在50μl中1.0mg/kg)接受了化合物6。为了确立化合物6的定位，使用ivis lumina iii体内成像系统(perkin elmer)对小鼠进行成像，以在蓝色(400-460nm)光下照射时检测660nm处的荧光。
[0487]
模型2使用了腹膜内植入1x10
6 id8鼠卵巢癌细胞的c57bl/6野生型小鼠。在4周孵育后(此时建立了具有肉眼可见的肿瘤沉积物的转移性腹膜疾病)，小鼠通过口服管饲(口服：2.5mg/kg)、静脉内注射(iv：1.0mg/kg)或腹膜内注射(ip：1.0mg/kg)接受了化合物6。如上所述进行定量成像；然而，由于卵巢癌的播散性，在尸检时进行了成像，使用蓝光(400nm)照射来可视化肿瘤沉积物中与化合物6相关的红色荧光。
[0488]
在所有情况下，化合物6在施用后特异性地保留在肿瘤组织中持续至少24小时；而从健康组织中清除取决于组织类型通常在4-16小时内实现。时间和累积根据以下模型和施用途径而变化。
[0489]
口服施用：在原发性皮下肿瘤(模型1)中，化合物6的峰值水平在施用后4小时出现，并保持高于背景持续至少24小时(图8a)。在转移性腹膜肿瘤(模型2)中观察到类似的模式(图8a)。
[0490]
iv施用：在原发性皮下肿瘤(模型1)中，化合物6在注射后立即被鉴定，并在施用后1小时达到峰值(图8a)。荧光在施用后保留至少4小时，并在注射后24小时变得不可检测。在转移性腹膜肿瘤(模型2)中，肿瘤分布在注射后4小时达到峰值。化合物6在注射后保留至少24小时(图8a)。
[0491]
肿瘤内施用(仅模型1)：将化合物6直接鞘内(it)递送至肿瘤组织中，导致强烈定
位并在肿瘤组织中保留至少48小时(图8a)。
[0492]
腹膜内施用(仅模型2)：腹膜内施用导致化合物6在体内快速且高度选择性地定位至转移性结节中(图8a)。
[0493]
化合物6荧光在蓝光下也容易成像，并且肉眼可见(图8b)。在尸检时，原发性肿瘤可视化为鲜红色肿块(图8b，左)。在患有转移性疾病的小鼠中，可在腹膜表面上观察到多个沉积物，并且特别是延伸至肝、膈肌和肠，以及连续腹膜肿块，与卵巢癌一致(图8b，右)。
[0494]
在第二实验中，将化合物6在施用后24小时的定位与他拉泊芬钠和5-氨基乙酰丙酸(5-ala)的定位进行比较，所有化合物均以0.1mg/kg鞘内注射。使用ivis lumina iii仪器(如上所述)进行荧光测量。化合物6强烈定位于肿瘤，周围非肿瘤组织没有明显累及(图8c)。相比之下，他拉泊芬钠和5-ala两者无法在24小时准确检测到；在每种情况下(特别是对于5-ala而言)，弥漫性、非局部分布模式是明显的(图8c)。
[0495]
因此，化合物6特异性地定位并保留在肿瘤组织中，并且可经由多种临床相关途径施用。化合物6的定位在表面上优于已在临床使用中的可比光敏剂。此外，化合物6在蓝光照射下时的固有荧光可用于更准确地原位鉴定或定义肿瘤沉积物和癌组织边缘。
[0496]
实施例6-叶绿素蛋白类似物在体内消退确立的肿瘤沉积物
[0497]
将具有确立的4t1原位植入乳腺肿瘤的balb/c野生型小鼠通过鞘内注射施用化合物6。注射后24小时(使化合物6从非肿瘤组织中清除)，将小鼠置于透明有机玻璃笼中并在红色(660nm)光下(全身)照射20分钟的时间段。以100mw/cm2的强度连续递送光(660nm)持续20分钟，以实现120j/cm2的总光剂量。随后监测肿瘤大小和外观总共2周。
[0498]
在单独接受化合物6的小鼠中，肿瘤迅速生长并且小鼠在13天内达到终点(图9)。相比之下，在接受化合物6加激光治疗的小鼠中，肿瘤在14天后消退至不可检测的水平(图9)。即使在3周后也没有再生长的迹象(未显示)，治疗后也没有可见瘢痕形成(图9，右)。
[0499]
因此，化合物6是用于光动力疗法中的有效光敏剂，并且使得肿瘤完全消退，没有组织损伤瘢痕形成的迹象。
[0500]
实施例7-叶绿素蛋白在注射至小鼠体内时是无毒的
[0501]
为了评估急性毒性，通过腹膜内注射将叶绿素蛋白或二氢卟吩e4二钠(各自用pbs中的1％ pvp+20mm hepes制备)以5mg/kg的剂量施用于c57bl/6小鼠。
[0502]
由于在实验中使用了pbs缓冲液(ph 7.4)并且叶绿素蛋白中的羧酸(以及其它相关二氢卟吩中的相同羧基)估计具有小于5的pka，因此pbs缓冲液中的叶绿素蛋白将主要作为钠盐和钾盐存在，几乎没有游离酸。
[0503]
观察小鼠30分钟的任何急性毒性临床症状(例如眯眼、立毛、运动能力丧失、一般行为)。任一化合物施用后均未发现副作用，表明以5mg/kg的剂量递送的叶绿素蛋白可安全用于注射。
[0504]
应理解，本发明仅通过举例在上文进行了描述。所述实施例并不意图限制本发明的范围。可在不脱离本发明的范围和精神的情况下进行各种修改和实施方案，本发明的范围和精神仅由以下权利要求书限定。

技术特征：
1.一种式(i)化合物或一种式(ii)络合物：其中-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3、-c(o)-n(r3)2、-c(s)-or3、-c(s)-sr3或-c(s)-n(r3)2；-r3各自独立地选自-h、-r
α-h、-r
β
、-r
α-r
β
、-r
α-oh、-r
α-or
β
、-r
α-sh、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
、-r
α-s(o)2r
β
、-r
α-nh2、-r
α-nh(r
β
)、-r
α-n(r
β
)2、-r
α-x、-r
α-[n(r5)3]y、-r
α-[p(r5)3]y或-r
α-[r6]y；-r
α-各自独立地选自c
1-c
12
亚烷基，其中所述亚烷基可任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基或卤基取代，并且其中所述亚烷基的主链中的一个或多个碳原子可任选地被一个或多个杂原子o或s替代；-r
β
各自独立地是饱和或不饱和的烃基，其中所述烃基可以是直链的或支链的，或者可以是或包括环状基团，其中所述烃基可任选地被取代，并且其中所述烃基可任选地在其碳骨架中包括一个或多个杂原子n、o、s、p或se；-r5各自独立地选自c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、卤基、-(ch2ch2o)
n-h、-(ch2ch2o)
n-ch3、苯基或c
5-c6杂芳基，其中所述苯基或c
5-c6杂芳基可任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、-o(c
1-c4烷基)、-o(c
1-c4卤代烷基)、卤基、-o-(ch2ch2o)
n-h或-o-(ch2ch2o)
n-ch3基团取代；-r6是任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、-o(c
1-c4烷基)、-o(c
1-c4卤代烷基)、卤基、-o-(ch2ch2o)
n-h或-o-(ch2ch2o)
n-ch3基团取代的-[nc5h5]；n是1、2、3或4；y是抗衡离子；x是卤基；m
2+
是金属离子；或其药学上可接受的盐；条件是所述化合物不是：(1)叶绿素蛋白游离酸；或(2)叶绿素蛋白甲酯。2.一种式(i)化合物或一种式(ii)络合物：
其中-r1选自-c(o)-or3、-c(o)-sr3、-c(o)-n(r3)2、-c(s)-or3、-c(s)-sr3或-c(s)-n(r3)2；-r3各自独立地选自-h、-r
α-h、-r
β
、-r
α-r
β
、-r
α-oh、-r
α-or
β
、-r
α-sh、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
、-r
α-s(o)2r
β
、-r
α-nh2、-r
α-nh(r
β
)、-r
α-n(r
β
)2、-r
α-x、-r
α-[n(r5)3]y、-r
α-[p(r5)3]y或-r
α-[r6]y；-r
α-各自独立地选自c
1-c
12
亚烷基，其中所述亚烷基可任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基或卤基取代，并且其中所述亚烷基的主链中的一个或多个碳原子可任选地被一个或多个杂原子o或s替代；-r
β
各自独立地是饱和或不饱和的烃基，其中所述烃基可以是直链的或支链的，或者可以是或包括环状基团，其中所述烃基可任选地被取代，并且其中所述烃基可任选地在其碳骨架中包括一个或多个杂原子n、o、s、p或se；-r5各自独立地选自c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、卤基、-(ch2ch2o)
n-h、-(ch2ch2o)
n-ch3、苯基或c
5-c6杂芳基，其中所述苯基或c
5-c6杂芳基可任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、-o(c
1-c4烷基)、-o(c
1-c4卤代烷基)、卤基、-o-(ch2ch2o)
n-h或-o-(ch2ch2o)
n-ch3基团取代；-r6是任选地被一个或多个c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、-o(c
1-c4烷基)、-o(c
1-c4卤代烷基)、卤基、-o-(ch2ch2o)
n-h或-o-(ch2ch2o)
n-ch3基团取代的-[nc5h5]；n是1、2、3或4；y是抗衡离子；x是卤基；m
2+
是金属离子；或其药学上可接受的盐；所述化合物或络合物用于医学中。3.根据权利要求1或2所述的化合物或络合物，其中每个-r
α-独立地选自c
1-c6亚烷基。4.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或络合物，其中至少一个-r3选自-r
α-or
β
、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
或-r
α-s(o)2r
β
，并且-r
β
是糖基。5.根据权利要求4所述的化合物或络合物，其中-r
β
是选自以下的糖基：
6.根据权利要求5所述的化合物或络合物，其中所述糖基是：7.根据权利要求4所述的化合物或络合物，其中-r
β
是选自以下的糖基：其中-r7选自c
1-c4烷基。8.根据权利要求7所述的化合物或络合物，其中-r7是甲基。9.根据任一前述权利要求所述的化合物或络合物，其中-r1是-c(o)-n(r3)2。10.根据权利要求9所述的化合物或络合物，其中-r1是-c(o)-n(r3)(r3’
)，其中-r3选自-r
α-or
β
、-r
α-sr
β
、-r
α-s(o)r
β
或-r
α-s(o)2r
β
，并且-r
β
是糖基，并且-r3’
是h或c
1-c4烷基。11.根据权利要求1或2所述的化合物或络合物，其中所述化合物或络合物是：
或其络合物或药学上可接受的盐。12.根据权利要求1或2所述的化合物或络合物，其中所述化合物是呈药学上可接受的盐形式的叶绿素蛋白。13.根据权利要求12所述的化合物或络合物，其中所述化合物是叶绿素蛋白钠、钾、锂、胆碱、精氨酸或葡甲胺。14.根据权利要求2所述的化合物或络合物，其中所述化合物是：(1)叶绿素蛋白游离酸；或(2)叶绿素蛋白甲酯。15.根据任一前述权利要求所述的化合物或络合物，所述化合物或络合物用于光动力疗法或细胞发光疗法中。16.根据任一前述权利要求所述的化合物或络合物，所述化合物或络合物用于治疗动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。17.根据任一前述权利要求所述的化合物或络合物，所述化合物或络合物用于治疗以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病。18.根据任一前述权利要求所述的化合物或络合物，所述化合物或络合物用于治疗良性或恶性肿瘤。19.根据任一前述权利要求所述的化合物或络合物，所述化合物或络合物用于治疗早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。
20.根据任一前述权利要求所述的化合物或络合物，所述化合物或络合物用于光动力诊断中。21.根据任一前述权利要求所述的化合物或络合物，其中所述化合物适于在施用照射之前施用。22.根据权利要求21所述的化合物或络合物，其中所述照射是波长在500nm至1000nm范围内的电磁辐射。23.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据任一前述权利要求所述的化合物或络合物和药学上可接受的载体或稀释剂。24.根据权利要求23所述的药物组合物，所述药物组合物还包含聚乙烯吡咯烷酮。25.根据权利要求23或24所述的药物组合物，所述药物组合物还包含免疫检查点抑制剂。26.根据权利要求25所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂选自派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗或伊匹单抗。27.根据权利要求23-26中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物用于光动力疗法或细胞发光疗法中。28.根据权利要求23-27中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物用于治疗动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。29.根据权利要求23-28中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物用于治疗以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病。30.根据权利要求23-29中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物用于治疗良性或恶性肿瘤。31.根据权利要求23-30中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物用于治疗早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。32.根据权利要求23或24所述的药物组合物，所述药物组合物用于光动力诊断中。33.根据权利要求23-32中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物适于在施用照射之前施用。
34.根据权利要求33所述的药物组合物，其中所述照射是波长在500nm至1000nm范围内的电磁辐射。35.根据权利要求23-34中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物呈适合于口服、肠胃外(包括静脉内、皮下、肌内、皮内、气管内、腹膜内、肿瘤内、关节内、腹内、颅内和硬膜外)、经皮、气道(气雾剂)、直肠、阴道或局部(包括经颊、粘膜和舌下)施用的形式。36.根据权利要求35所述的药物组合物，其中所述药物组合物呈适合于口服或肠胃外施用的形式。37.根据权利要求1-22中任一项所述的化合物或络合物在制造用于治疗以下疾病的药剂中的用途：动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。38.根据权利要求1-22中任一项所述的化合物或络合物在制造用于光动力疗法或细胞发光疗法的光治疗剂中的用途。39.根据权利要求38所述的用途，其中所述光治疗剂用于治疗动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。40.根据权利要求37-39中任一项所述的用途，其中所述药剂或所述光治疗剂用于治疗以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病。41.根据权利要求37-40中任一项所述的用途，其中所述药剂或所述光治疗剂用于治疗良性或恶性肿瘤。42.根据权利要求37-41中任一项所述的用途，其中所述药剂或所述光治疗剂用于治疗早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官
癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。43.根据权利要求1-22中任一项所述的化合物或络合物在制造用于光动力诊断的光诊断剂中的用途。44.根据权利要求37-43中任一项所述的用途，其中所述药剂、所述光治疗剂或所述光诊断剂适于在施用照射之前施用。45.根据权利要求44所述的用途，其中所述照射是波长在500nm至1000nm范围内的电磁辐射。46.一种治疗动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌的方法；所述方法包括向有需要的人或动物施用治疗有效量的根据权利要求1-22中任一项所述的化合物或络合物。47.一种人或动物疾病的光动力疗法或细胞发光疗法的方法，所述方法包括向有需要的人或动物施用治疗有效量的根据权利要求1-22中任一项所述的化合物或络合物。48.根据权利要求47所述的方法，其中所述人或动物疾病是动脉粥样硬化；多发性硬化；糖尿病；糖尿病性视网膜病变；关节炎；类风湿性关节炎；真菌、病毒、衣原体、细菌、纳米细菌或寄生虫感染性疾病；hiv；艾滋病；sars病毒(优选严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2))、亚洲(鸡)流感病毒、单纯疱疹或带状疱疹感染；肝炎；病毒性肝炎；心血管疾病；冠状动脉狭窄；颈动脉狭窄；间歇性跛行；皮肤疾患；痤疮；银屑病；以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征的疾病；良性或恶性肿瘤；早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。49.根据权利要求46-48中任一项所述的方法，其中所述人或动物疾病以良性或恶性细胞过度增殖或以新血管形成区域为特征。50.根据权利要求46-49中任一项所述的方法，其中所述人或动物疾病是良性或恶性肿瘤。51.根据权利要求46-50中任一项所述的方法，其中所述人或动物疾病是早期癌症；宫颈发育不良；软组织肉瘤；生殖细胞肿瘤；视网膜母细胞瘤；年龄相关性黄斑变性；淋巴瘤；
霍奇金淋巴瘤；头颈癌；口腔或口癌；或血癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、阴道癌或其它女性附件癌、乳腺癌、鼻咽癌、气管癌、喉癌、支气管癌、细支气管癌、肺癌、中空器官癌、食道癌、胃癌、胆管癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、膀胱癌、输尿管癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、脾癌、脑癌、淋巴系统癌、骨癌、皮肤癌或胰腺癌。52.一种人或动物疾病的光动力诊断的方法，所述方法包括向人或动物施用诊断有效量的根据权利要求1-22中任一项所述的化合物或络合物。53.根据权利要求46-52中任一项所述的方法，其中在施用根据权利要求1-22中任一项所述的化合物或络合物之后对所述人或动物进行照射。54.根据权利要求53所述的方法，其中所述照射是波长在500nm至1000nm范围内的电磁辐射。55.一种药物组合，所述药物组合包含：(a)根据权利要求1-22中任一项所述的化合物或络合物；以及(b)免疫检查点抑制剂。56.根据权利要求55所述的药物组合，其中所述免疫检查点抑制剂选自派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗或伊匹单抗。

技术总结
本发明涉及叶绿素蛋白类似物及其药学上可接受的盐，以及包含叶绿素蛋白类似物及其药学上可接受的盐的组合物。叶绿素蛋白类似物及其药学上可接受的盐适合用于光动力疗法、细胞发光疗法和光动力诊断中，例如用于治疗或检测肿瘤或用于抗病毒治疗。本发明还涉及叶绿素蛋白类似物及其药学上可接受的盐在制造光治疗剂或光诊断剂中的用途，并且涉及光动力疗法、细胞发光疗法或光动力诊断的方法，例如用于治疗或检测肿瘤或用于抗病毒治疗。疗或检测肿瘤或用于抗病毒治疗。疗或检测肿瘤或用于抗病毒治疗。


技术研发人员：H
受保护的技术使用者：RMW曹氏集团有限公司
技术研发日：2021.11.26
技术公布日：2023/9/9