一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法与流程

1.本发明属于水产动物经济性状选育领域，具体地涉及一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法。


背景技术：

2.在水产动物育种中，抗逆性状选育是环境适应性选育的重要方面，是环境适应性育种的一种实际体现。不仅能提高水产动物的生存率，保障水产产业的可持续发展，而且还能保证水产品质量和安全，丰富水产动物资源等。目前我国已选育出少部分抗逆性状的鱼类良种，但同时也要看到抗逆选育进展缓慢，难以满足发展的需求，其中一个很大的原因是缺乏高效率的选育表型，目前的抗逆选育所用表型基本上集中在逆境中的存活状态以及在逆境中的存活时间，一方面获取表型费时费力，获取表型后的个体也无法继续作为后备亲鱼进行培育，另一方面这两种表型都难以成为符合正态分布的连续型数量性状，严重影响了选育进展。因此，筛选适合的选育表型是抗逆选育的当务之急。大菱鲆是我国重要的海水养殖鱼类，近年来由于市场需求以及环保政策的引导，养殖区域向滩涂和内陆盐湖地区拓展，对其耐低盐的性状提出了更高的要求，培育适应低盐环境的大菱鲆良种能够更好的满足大菱鲆种业的发展需求，因此鉴定高效的大菱鲆耐低盐的选育表型成为当务之急。


技术实现要素：

3.针对上述技术问题，本发明提供一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法，所述方法简单易操作且不会对实验个体造成伤害。
4.本发明是通过如下技术方案来实现的：
5.一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法，所述方法的具体步骤如下：
6.第一步、准备好养殖池，注入淡水，调节水温、溶氧与待测群体所处环境一致；淡水池与待测群体所处养殖池相同，可最大限度的保证除了盐度以外，其他环境相同；
7.第二步、待测大菱鲆群体空腹72-96h后，置入淡水池中进行养殖，记录初始时间；
8.第三步、每隔一小时查看鱼体有眼侧体色变化，出现黑色条纹后(如附图1)，记录黑色条纹的出现时间，记录完成后立即将该实验鱼放回正常盐度环境下，鱼体体色恢复；
9.第四步、根据公式实现大菱鲆耐低盐高效选育表型的测定，所述的公式为个体耐低盐选育表型＝每条鱼出现黑色条纹的时间-初始时间，个体耐低盐选育表型值从大到小排列，选择排名靠前的个体。
10.进一步，所述第一步中，淡水池中微流水，与待测群体所处养殖池相同。
11.进一步，所述第二步中，大菱鲆个体的重量在20g以上。
12.进一步，所述第三步中，出现黑色条纹时间记录完成后，根据时间的长短对待测群体进行分类，保留时间长的群体作为候选亲本继续培育。
13.进一步，所述第三步中，若大菱鲆个体在150g以上，出现黑色条纹时间记录完成后，可以对大菱鲆个体进行标记，培育亲鱼后能够更好的进行表型对应。
14.进一步，所述第四步中，个体耐低盐选育表型的记录以小时作为单位。
15.本发明与现有技术相比的有益效果：本发明创新性的提出以体色变化作为抗逆选育表型，提供了一种高效的大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法，克服了抗逆性状中普遍使用存活状态、存活时间作为表型导致鱼体死亡或者鱼体受损的难题，同时也解决了因为测量表型受损而无法发育成亲鱼进行子代培育的问题。该方法操作简单，出现黑色条纹肉眼可见，与现有技术检查存活状态相比较，使用本发明提供的表型鉴定方法能够达到更加高效且精确的效果，且对受测个体无损伤，为后续开展该性状的遗传评估和选择育种夯实基础。
附图说明
16.图1出现黑色条纹后的大菱鲆个体；
17.图2黑色条纹出现的时间性状正态分布图。
具体实施方式
18.下面通过实施例结合附图来对本发明的技术方案做进一步解释，但本发明得保护范围不受实施例任何形式上的限制。
19.实施例1一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法，所述方法的具体步骤如下：第一步、大菱鲆待测群体的准备：大菱鲆待测群体来自山东科合海洋高技术有限公司，挑选300尾体格健壮、无损伤、活力好的幼鱼，体长11.9cm
±
0.7cm，体重27.5
±
4.6g，于室内养殖池中(12m2)暂养2周，水温17℃，盐度30ppt，溶解氧》6mg/l。
20.第二步、淡水池准备：在待测群体所处海水池一侧，选择一个养殖池，注入等量淡水，水温17℃，盐度0ppt，溶解氧》6mg/l。
21.第三步、耐低盐实验：将待测群体全部捞出，放在鱼框中，然后同时倒入淡水池中，实验开始，记录开始时间。每隔一小时查看鱼体有眼侧体色变化，当大菱鲆个体出现黑色条纹后(如附图1)，记录时间。记录完成后剪取一小块尾鳍用于进一步的分析，如gwas分析等。取样后，立即将大菱鲆个体放回30ppt养殖池，大菱鲆个体的体色逐渐恢复正常。实验期间不进行喂食操作，直到所有个体出现黑色条纹，实验结束。
22.第四步、根据公式(个体耐低盐选育表型＝每条鱼出现黑色条纹的时间-初始时间)，实现大菱鲆耐低盐高效选育表型的测定。
23.第五步、实验结束后，对所有个体的耐低盐选育表型进行统计分析，经k-s检测后发现，该性状基本符合正态分布(p》0.05为显著)，如图2所示，一方面该表型能侧面反映出耐低盐性状属于数量性状，符合数量性状正态分布的特点，另一方面使用该表型能够很好的区分个体，为进一步的选育工作奠定基础。
24.实施例2：一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法，所述方法的具体步骤如下：实施例1中耐低盐实验转移至30ppt养殖池中的大菱鲆个体，继续饲养60天，水温17℃，盐度30ppt，溶解氧》6mg/l。实验期间每天喂食2次，饱食投喂，死鱼及时捞出。实验结束后统计成活率，测量体重数据。实验结果显示，成活率为90％，体重39.66
±
7.2g，与正常状态下的养殖结果相近。因此使用本发明提供的性状测量方法，获取性状后的大菱鲆个体恢复正常，可以继续培育成亲鱼，解决了以往传统方法获取表型后的个体无法继续作为后备亲鱼进行培
育的问题。
25.实施例3：一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法，所述方法的具体步骤如下：第一步、大菱鲆家系群体的构建：大菱鲆亲鱼来自天源水产有限公司，在繁殖期从100后备亲鱼中挑选15尾雌鱼和15尾雄鱼，进行一对一配对，成功建立15个全同胞家系。经过5个月的培养，家系幼鱼长至20-40g，每个家系随机挑选100尾体格健壮、无损伤、活力好的幼鱼，单独饲养在1m3的养殖桶中水温17℃，盐度30ppt，溶解氧》6mg/l，流水养殖，养殖周期2周，使其充分适应环境。
26.第二步、淡水胁迫实验测量体色表型性状：暂养结束后，将桶内海水排干，引入水源换成淡水，使用流量计控制每个养殖桶的流水量相同，水温17℃，盐度0ppt，溶解氧》6mg/l，流水养殖，每隔一小时查看鱼体有眼侧体色变化，当大菱鲆个体出现黑色条纹后(如附图1)，记录时间。记录完成后，立即将大菱鲆个体放回30ppt养殖池，大菱鲆个体的体色逐渐恢复正常。实验期间不进行喂食操作，直到所有个体出现黑色条纹，实验结束。根据公式(个体耐低盐选育表型＝每条鱼出现黑色条纹的时间-初始时间)统计分析所有家系的体色表型性状，实现大菱鲆耐低盐高效选育表型的测定。根据结果对各家系进行排序。
27.第三步、低盐养殖实验：继续使用上述养殖桶，事先通过流量计调整淡水和海水的流速，将盐度控制为10ppt，从15个家系中根据体色表型的数据挑选极端性状各3个家系，随机挑选100尾/家系，测量体重数据后，转入养殖桶中进行饲养实验，实验期间水温17℃，溶解氧》6mg/l，流水养殖，实验周期60天，实验期间内每天喂食两次，饱食投喂，死鱼及时捞出。实验结束后统计成活率，测量体重数据。
28.第四步、家系体色表型数据与耐低盐生长、成活率表型对比分析：如表1所示，体色表型表现良好的2个家系(3、7、9)，其成活率、体长、体重都要显著优于体色表型表现差的2个家系(4、11、14)，这进一步表明本发明提供的表型以及测定方法能够达到高效且精确的效果。
29.表1家系体色表型数据与耐低盐生长、成活率表型对比
30.
技术特征：
1.一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法，其特征在于，所述方法的具体步骤如下：第一步、准备好养殖池，注入淡水，调节水温、溶氧与待测群体所处环境一致；第二步、待测大菱鲆群体空腹72-96h后，置入淡水池中进行养殖，记录初始时间；第三步、每隔一小时查看鱼体有眼侧体色变化，出现黑色条纹后，记录黑色条纹的出现时间，记录完成后立即将该实验鱼放回正常盐度环境下；第四步、根据公式进行大菱鲆耐低盐高效选育表型的测定，所述的公式为个体耐低盐选育表型＝每条鱼出现黑色条纹的时间-初始时间，个体耐低盐选育表型值从大到小排列，选择排名靠前的个体。2.根据权利要求1所述的一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法，其特征在于，所述第一步中，养殖池中微流水。3.根据权利要求1所述的一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法，其特征在于，所述第二步中，大菱鲆个体的重量在20g以上。4.根据权利要求1所述的一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法，其特征在于，出现黑色条纹时间记录完成后，根据时间的长短对待测群体进行分类，保留时间长的群体作为候选亲本继续培育。5.根据权利要求1所述的一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法，其特征在于，若大菱鲆个体在150g以上，出现黑色条纹时间记录完成后，对大菱鲆个体进行标记。6.根据权利要求1所述的一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法，其特征在于，所述第四步中，个体耐低盐选育表型的记录以小时作为单位。

技术总结
本发明公开了一种大菱鲆耐低盐选育表型的鉴定方法，属于水产动物经济性状选育领域，所述方法为准备好养殖池，注入淡水，调节水温、溶氧与待测群体所处环境一致，待测大菱鲆群体空腹72h后，置入淡水池中进行养殖，记录初始时间；每隔一小时查看鱼体有眼侧体色变化，出现黑色条纹后，记录黑色条纹的出现时间，记录完成后立即将该实验鱼放回正常盐度环境下，鱼体体色恢复；根据公式实现大菱鲆耐低盐高效选育表型的测定，个体耐低盐选育表型值从大到小排列，选择排名靠前的个体。本发明提供的表型鉴定方法能够达到更加高效且精确的效果，且对受测个体无损伤，为后续开展该性状的遗传评估和选择育种夯实基础。选择育种夯实基础。选择育种夯实基础。


技术研发人员：刘志峰 徐菲 马爱军 杨明超 赵海池 徐荣静
受保护的技术使用者：烟台开发区天源水产有限公司
技术研发日：2023.06.28
技术公布日：2023/9/20