甘蔗提取物在治疗或预防微生物感染和生态失调中的用途的制作方法

1.本公开属于抑制或灭活病毒以及预防或治疗动物体内的微生物感染的领域。这些提取物特别适用于对抗导致动物体内的呼吸系统疾病的病毒。
2.本公开还涉及包括多酚的源自甘蔗的提取物用于抑制或灭活微孢子虫寄生虫以及预防或治疗动物体内的微孢子虫寄生虫感染的用途。这些提取物特别适用于对抗虾肝肠胞虫(ehp)，一种在水生动物诸如对虾和虾体内引起疾病的寄生虫。
3.本公开还涉及包括多酚的源自甘蔗的提取物用于抑制或灭活原生动物以及预防或治疗动物体内的原生动物感染的用途。这些提取物特别适用于对抗球虫和疟原虫物种(疟疾的原因)。
4.本公开还涉及包括多酚的源自甘蔗的提取物用于抑制或灭活古菌以及预防或治疗动物体内的古菌感染的用途。这些提取物特别适用于治疗生态失调以及对抗反刍动物体内存在的产甲烷菌。
5.本公开还涉及包括多酚的源自甘蔗的提取物用于预防或治疗反刍动物体内的乳腺炎的用途。这些提取物特别适用于预防或治疗产奶奶牛体内的乳腺炎。
6.本公开还涉及包括多酚的源自甘蔗的提取物用于抑制或灭活真菌以及预防或治疗动物体内的真菌感染的用途，特别是对抗子囊菌门和担子菌门。
7.从机理上讲，本公开涉及包括多酚的源自甘蔗的提取物用于治疗、预防或最小化动物体内的细胞因子风暴的用途，该细胞因子风暴通常在动物的所有病原体侵袭中发现。
8.从机理上讲，本公开还涉及包括多酚的源自甘蔗的提取物用于通过调节toll样受体来治疗、预防或最小化动物体内的由获得性免疫应答引起的炎症、组织和器官损伤中的至少一者的用途。
9.本公开还涉及包括多酚的源自甘蔗的提取物单独或与诸如弗氏佐剂等已知佐剂组合作为佐剂的用途。


背景技术：

10.感染sars-cov-2的患者可能是无症状的。然而，有症状的患者可能经历由上呼吸道感染引起的发热、干咳和气促。患者也可能表现出流感样症状。当感染更严重并深入扩散到肺部时，可能会出现更严重的疾病和呼吸困难。也可能发生继发性感染和/或非肺部病症(心脏、肾脏并发症)。严重疾病通常以导致急性呼吸系统疾病综合征(ards)的肺炎为特征，ards是covid-19造成死亡的主要原因之一。
11.对于由sars-cov-2引起的ards还没有已经确定的治疗选项。相反，支持性护理和非特异性治疗方案已经用于缓解患者的症状。在缺乏有效的药物治疗的情况下，单独或与例如广谱抗病毒剂或抗菌剂或恢复期血浆的施用组合的肺通气器策略仍然是主要的可用选项。
12.此外，用于ards的药物治疗的候选者可能缺乏所需的安全性和活性。例如，通常不应当使用类固醇，因为已知它们会降低免疫应答并且可能增加病毒散发。用类固醇治疗先
前sars或mers流行病中的患者的尝试不如用已批准的抗病毒剂(利巴韦林(ribavirin)、洛匹那韦-利托那韦(lopinavir-ritonavir))和免疫调节剂的尝试有效。使用上述药剂可以观察到副作用。例如在利巴韦林的情况下会观察到贫血。
13.最近，已经在英国国家临床康复试验中对患有covid-19的住院患者测试了地塞米松(一种因其抗炎和免疫抑制作用而用于多种病症的皮质类固醇)，并发现其对危重患者有益。根据与who分享的初步发现，对于使用通气器的患者，治疗显示死亡率降低了约三分之一，并且对于仅需要氧气的患者，死亡率降低了约五分之一。
14.尽管尚无特异性抗病毒药得到批准，但是已经发现瑞德西韦(remdesivir)可以减少恢复时间。
15.虽然期望开发有效的治疗，但预防病毒感染是优选的。替代地，接种疫苗对抗感染成为可能。
16.冠状病毒感染的预防通常通过物理手段和消毒来实现。这包括有效的洗手、使用面罩和护罩、手套和其他形式的个人防护装备。用肥皂和水和洗手液简单洗手可以有效灭活冠状病毒。这样的措施防止个体将病毒从手扩散到口腔或鼻腔并从而感染呼吸系统。附加地，它还防止通过接触其他个体而传播。
17.一旦个体在呼吸系统中感染冠状病毒，口罩的使用就会使通过气溶胶途径进行的病毒传播最小化。类似地，未感染个体佩戴的口罩将降低通过吸入含有病毒的气溶胶而感染的可能性。
18.然而，洗手产品不适用于口腔或鼻腔，这通常是发生初始感染的地方。
19.因此，仍然存在对不仅在洗手时有效，而且在口腔和鼻腔中也能够安全和有效地使用的试剂的明确需要。
20.更普遍地，病毒感染是人和动物体内的严重疾病的原因。开发合适的疫苗和有效的治疗仍然是重要的优先事项，特别是当潜在病毒具有高度感染性时。
21.对人类和/或动物具有临床意义的一些病毒科如下：
22.冠状病毒科
23.·
sars-cov-1
24.·
sars-cov-2
25.·
mers
26.·
鸟冠状病毒—造成肉鸡和蛋鸡的重大经济损失。
27.·
猪流行性腹泻病毒。
28.·
牛冠状病毒—引起称为冬季痢疾的疾病，可以引起小牛严重腹泻和呼吸道感染。
29.杯状病毒科
30.·
诺如病毒—每年造成200,000例死亡，没有可用的疫苗或特异性治疗。占所有胃肠炎病例的约18％。
31.·
猫杯状病毒—在50％患有上呼吸系统感染的猫体内发现。
32.正粘病毒科
33.·
甲型、乙型、丙型、丁型流感，所有这些都可能感染人类。
34.·
甲型流感病毒株的实例
[0035]-h1n1导致了1918年的“西班牙流感”和2009的“猪流感”。
[0036]-h2n2导致了“亚洲型流感”。
[0037]-h3n2导致了“香港型流感”。
[0038]-h5n1，“鸟流感”或“禽流感”。
[0039]-h7n7具有异常的人畜共患病可能性。
[0040]-h1n2感染猪和人类。
[0041]
·
传染性鲑鱼贫血症病毒—导致贫血症和鲑鱼养殖场的损失
[0042]
副粘病毒科
[0043]
·
麻疹
[0044]
·
腮腺炎
[0045]
·
亨德拉病毒
[0046]
·
犬瘟热病毒—杀死许多幼犬，有疫苗，但针对病毒的全面保护直到16周龄才发生。
[0047]
·
新城疫病毒—家禽体内的主要疾病，有疫苗，但是滴眼剂或喷雾剂。
[0048]
肺病毒科
[0049]
·
人偏肺病毒—常见症状包括流鼻涕、充血、喉咙痛、咳嗽、头痛和发热，可以视为感冒。对于72岁以上的人，存在发生肺炎的风险。
[0050]
黄病毒科
[0051]
·
西尼罗病毒
[0052]
·
登革热病毒—每年390,000,000例感染
[0053]
·
蜱传脑炎——无特异性治疗。每年10,000至12,000例
[0054]
·
寨卡—无可用治疗，估计在2028年有疫苗
[0055]
·
丙型肝炎
[0056]
·
泰勒氏(theillers)病病毒—影响马，是马体内发生肝炎和肝衰竭的常见原因
[0057]
·
牛病毒性腹泻病毒
[0058]
·
猪瘟
[0059]
·
日本脑炎病毒—每年68,000例
[0060]
·
黄热病
[0061]
披膜病毒科
[0062]
·
若干马脑炎病毒
[0063]
动物寄生病对动物福祉造成重大负担，这与整个农业产业的经济成本相关联。一般认为有三种主要类寄生虫，包括：原生动物、蠕虫和节肢动物。
[0064]
存在多种原生动物寄生虫，已知它们会引起脊椎动物和无脊椎动物物种的疾病。这些寄生虫是疾病的致病原，疾病包括但不限于疟疾；痢疾、贾第虫、隐孢子虫、恰加斯(chaga’s)病和球虫病。
[0065]
虽然一些原生动物对一种宿主物种是特异性的，但其他原生动物能够感染一系列宿主物种。因此，抗微生物药品的未经检查的使用，特别是在整个食品供应链中的使用，正面临日益增长的限制。这是为了确保这些药品在紧急情况下有效。
[0066]
因此，需要非抗生素替代品来帮助预防疾病的发展，这是在不破坏经济可行性的
情况下改善全球卫生和福祉成果的重要手段。
[0067]
微孢子虫寄生虫在水环境中，特别是在对虾和虾的水产养殖中具有经济意义。已知虾肝肠胞虫(ehp)仅感染对虾的肝胰腺的小管上皮细胞。感染的发生是由于微孢子虫的极小管突出或生长，使其附着在对虾的肝胰腺上。
[0068]
对ehp特别敏感的一些对虾物种是斑节对虾(penaeus monodon)、凡纳滨对虾(penaeus(litopenaeus)vannamei)和南美蓝对虾(penaeus(litopenaeus)stylirostris)。
[0069]
针对诸如ehp等感染的有效预防或治疗手段将在水产养殖业中具有相当大的益处。
[0070]
微生物药剂对地球上生命的威胁不仅仅是在各种各样的活生物体内引起疾病。这是因为产甲烷古菌对农业温室气体排放的贡献最大。
[0071]
产甲烷菌与分离它们的动物的疾病状态或寄生病没有关联。然而，发酵期间诸如甲烷等气体的产生已经被鉴定为涉及温室气体排放增加和全球变暖的一个因素。因此，产甲烷菌通过其对环境的影响而损害地球，而不是通过疾病损害个体动物。
[0072]
反刍动物产生大部分农业甲烷，但对于全球食品和纺织品供应也至关重要。因此，需要能够减轻甲烷产出，同时保持或改善产率的策略。
[0073]
调节动物的微生物群系以抑制产甲烷菌的增殖，同时促进支持动物健康的微生物物种群落的饮食策略将满足这些目标。
[0074]
产奶反刍动物易患乳腺炎。乳腺炎是引起奶牛的乳房发生炎症的细菌感染。该感染由广谱病原体引起，并且在流行病学上分类为传染性乳腺炎和环境性乳腺炎。乳腺炎是全世界乳用牛中发生最普遍和造成最严重损失的疾病。
[0075]
在过去十年中，奶的电导率(ec)已经被引入作为乳腺炎的指示性状。ec由阴离子和阳离子的浓度确定。如果奶牛患有乳腺炎，则奶中na+和cl-的浓度增加，这会导致来自感染奶头的奶的电导率增加。大多数自动挤奶系统结合有用于在挤奶期间测量ec的ec传感器。
[0076]
在《乳业科学杂志(j dairy sci.)》75,606-614(1992)中可以找到对电导率测量的实用性的描述。
[0077]
在25℃下，来自健康奶牛的奶中的电导率测量值通常在4.0与5.0毫西门子(ms)之间，而感染奶头的绝对电导率值通常在5.0至9.0ms的范围内。在感染乳腺炎的奶牛的典型ec分布中，感染奶头在挤奶过程的大部分期间显示出较高的ec水平，在挤奶开始和结束时出现峰值。
[0078]
通常用乳房内抗生素诸如β-内酰胺(阿莫西林、青霉素和头孢菌素)治疗单个奶头的轻度、不复杂的乳腺炎。当超过一个奶头感染时、当乳房改变显著时或当奶牛明显患病时，使用全身性抗生素。据信使用全身性抗生素和乳房内抗生素的组合治疗提高了细菌学治愈率，并用于乳腺炎的严重病例。
[0079]
乳腺炎的经济影响的主要组成部分涉及产奶量的减少、奶的处理、用于治疗的药物的成本、与动物的治疗和屠宰相关的劳动成本。这些因素一起降低了农民获得的奶收入。据估计，因乳房健康不佳，澳大利亚奶农每年损失超过1.5亿美元。此外，由于细菌抗性的发展以及在人类食用的动物的肉和奶中可能存在不期望的抗生素残留物，现在不鼓励使用抗生素。


技术实现要素：

[0080]
在本公开的一个方面，提供了一种组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该组合物用于抑制或灭活病毒或预防或治疗受试者体内的病毒感染的用途，提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚，并且其中该用途是通过外用、肺部、呼吸、静脉内或口服途径。
[0081]
在本公开的另一方面，提供了一种抑制或灭活病毒或预防或治疗受试者体内的病毒感染的方法，该方法包括通过外用、肺部、呼吸、静脉内或口服途径向受试者施用有效量的组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0082]
在本公开的另一方面，提供了一种组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该组合物用于通过抑制或灭活微孢子虫寄生虫来预防或治疗水生动物的用途，提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚，并且其中该用途是通过将提取物包括在水生环境中。
[0083]
在本公开的另一方面，提供了一种抑制或灭活水生动物体内的微孢子虫寄生虫的方法，该方法包括经由水生环境向动物施用有效量的组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0084]
在本公开的另一方面，提供了一种组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该组合物用于通过抑制或灭活原生动物来预防或治疗动物体内的原生动物感染的用途，提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0085]
在本公开的另一方面，提供了一种抑制或灭活动物体内的原生动物的方法，该方法包括向动物施用有效量的组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0086]
在本公开的另一方面，提供了一种组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该组合物用于通过抑制或灭活古菌来预防或治疗动物体内的古菌感染的用途，提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0087]
在本公开的另一方面，提供了一种抑制或灭活动物体内的古菌的方法，该方法包括向动物施用有效量的组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0088]
在本公开的另一方面，提供了一种组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该组合物用于通过抑制或灭活产甲烷菌来治疗动物体内的生态失调的用途，提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0089]
在本公开的另一方面，提供了一种治疗动物体内的生态失调的方法，该方法包括向动物施用有效量的组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0090]
在本公开的另一方面，提供了一种组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该组合物用于通过抑制或灭活真菌来预防或治疗动物体内的真菌感染的用途，提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0091]
在本公开的另一方面，提供了一种抑制或灭活动物体内的真菌的方法，该方法包括向动物施用有效量的组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0092]
在本公开的另一方面，提供了一种抑制或灭活脊椎动物和无脊椎动物体内或它们栖息的环境中的原生动物寄生虫的生命周期的方法，该方法包括向动物施用有效量的组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0093]
在本公开的另一方面，提供了一种组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该组合物用于抑制或灭活脊椎动物和无脊椎动物体内或它们栖息的环境中的原生动物寄生虫的生命周期的用途，提取物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0094]
在本公开的另一方面，提供了一种调节动物的微生物群系的方法，该方法包括向动物施用有效量的组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0095]
在本公开的另一方面，提供了一种组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该组合物用于调节动物的微生物群系的用途，提取物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0096]
在本公开的另一方面，提供了一种通过改变与动物相关联的微生物群落的组成来减轻动物的温室气体排放的方法，该方法包括向动物施用有效量的组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0097]
在本公开的另一方面，提供了一种组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该组合物用于通过改变与动物相关联的微生物群落的组成来减轻动物的温室气体排放的用途，提取物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
mg/g的多酚。
[0107]
在本公开的另一方面，提供了一种改善疫苗的免疫应答的方法，该方法包括在疫苗组合物中包括组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
附图说明
[0108]
图1是示出如本文所述的实例3的结果的条形图。
[0109]
图2是示出如本文所述的实例5的结果的条形图。
[0110]
图3是示出如本文所述的实例6的结果的条形图。(37℃下孵育14小时后的艾美球虫子孢子的数量。针对所有结果，盐霉素与提取物之间的差异无统计学意义。针对所有结果，对照与盐霉素/提取物之间的差异具有高度统计学意义(p＜0.001)。针对所有结果，对照与提取物之间的差异具有高度统计学意义(p＜0.001)。)
[0111]
图4是示出如本文所述的实例7的结果的条形图。(上标(a，b，c)的差异表示差异具有统计学意义(p＜0.05)。)
[0112]
图5是示出如本文所述的实例8的结果的条形图。
[0113]
图6是示出如本文所述的实例14的结果的条形图。
[0114]
图7是示出如本文所述的实例13的结果的条形图。
[0115]
图8是表示实例19中针对0.5％组合物实现的结果的图。
[0116]
图9是表示实例19中针对0.5％组合物实现的结果的图。
[0117]
图10是示出如本文所述的实例20的结果的条形图。
具体实施方式
[0118]
本文中的任何实施例均应当被视为加以必要的变通以应用于任何其他实施例，除非另有明确说明。
[0119]
本公开不限于本文所述的特定实施例的范围，这些实施例仅旨在用于举例说明的目的。如本文所述，功能上等同的产品、组合物和方法显然在本公开的范围内。
[0120]
在整个本说明书中，除非另有明确说明或上下文另有要求，否则提及单个步骤、物质组合物、步骤组或物质组合物组应当被理解为涵盖这些步骤、物质组合物、步骤组或物质组合物组中的一者和多者(即一者或多者)。
[0121]
除非另有明确定义，否则本文使用的所有技术和科学术语应当被视为具有与本领域普通技术人员通常理解的相同含义(例如，化学、生物化学、细胞培养、分子生物学和药学)。此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应当包括复数含义并且复数术语应当包括单数含义。因此，如在本说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指示物，除非上下文另有清楚指示。因此，术语“受试者”意指“一个或多个受试者”，除非上下文另有清楚指示。
[0122]
如本文所用，“施用”应当被广义地解释，并且包括向受试者施用如本文所述的提取物或包括该提取物的组合物，以及向细胞提供如本文所述的提取物或包括该提取物的组合物。
[0123]
如本文所用，短语“有效量”是指足以引起组织、系统、动物或人的生物学或医学应答的量，该应答是研究人员、兽医、医生或其他临床医师所寻求的。不期望的作用(例如副作用)有时与期望的作用一起体现；因此，从业者在确定适当的“有效量”时要权衡潜在益处与潜在风险。所需的确切量因受试者而异，取决于受试者的物种、年龄和一般状况、施用模式等。因此，可能无法指定确切的“有效量”。然而，在任何个别情况下的适当的“有效量”可以由本领域普通技术人员使用常规实验来确定。“缓解”包括减轻不良症状、诱导舒适或健康状态或除去或减少疾病或病症的生物化学、生理学或临床标记。
[0124]
如本文所用，术语“治疗(treating)”、“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”、“改善(improving)”、“改善(improve)”或“改善(improvement)”包括施用有效量的本公开的提取物或包括该提取物的组合物，其足以减少或延迟特定病症的发作或进展，或减少或消除该病症的至少一种症状。如治疗微生物感染领域的技术人员所理解的，术语“治疗”包括感染被治愈，然而，它不一定意味着感染被完全治愈。
[0125]
如本文所用，术语“预防(preventing)”或“预防(prevent)”包括施用有效量的本公开的提取物或包括该提取物的组合物，其足以避免特定病症的发作，或避免该病症的至少一种症状。如预防病症领域的技术人员所理解的，术语“预防”包括病症完全预防，然而，它不一定意味着病症被完全预防。
[0126]
如本文所用，“受试者”是指动物，诸如哺乳动物(包括人)，其可以受益于本文所述的源自甘蔗的提取物、含有该提取物的组合物以及方法和用途。对可以受益于本文所述的源自甘蔗的提取物、含有该提取物的组合物以及方法和用途的动物类型没有限制。无论是人还是非人动物，受试者均可以被称为个体、受试者、动物、宿主或接受者以及患者。本公开应用于人类医学、人类化妆品和兽医学中。
[0127]
提及“用于使用的组合物”应当被理解为涵盖本公开的方法。
[0128]
如本文所用，术语"约"是指指定值的+/-5％的范围。
[0129]
如本文所用，术语“ce”或“儿茶素当量”是总多酚含量的量度，表示为mg儿茶素当量/g原材料或g儿茶素当量/l原材料。
[0130]
如本文所用，术语“甘蔗来源产品”是指甘蔗碾磨和精制过程的产品，包括但不限于糖、糖蜜、糖膏、甘蔗渣、初榨汁、磨泥、澄清的甘蔗汁、澄清的糖浆、废蜜、金色糖浆、夹杂物、甘蔗剥皮、叶子、生长锥、果肉和糖渣及其组合。糖渣是当诸如糖或糖蜜等产品发酵以产生例如乙醇时产生的残留物。甘蔗糖渣也被称为生物糖渣、釜馏物或酒糟。如本文所用，术语“糖渣”、“生物糖渣”、“釜馏物”和“酒糟”是等同的并且可互换使用。
[0131]
在整个本说明书中，本公开的各个方面和组成部分可以以范围格式呈现。包括范围格式是为了方便，而不应当被解释为对本公开范围的不灵活限制。因此，对范围的描述应当被认为具体公开了所有可能的子范围以及该范围内的单个数值，除非具体指示。例如，诸如从1至5的范围的描述应当被认为具有具体公开的子范围，诸如从1至3、从1至4、从1至5、从2至4、从2至5、从3至5等，以及所述范围内的单个数字和小数数字，例如1、2、3、4、5、5.5和6，除非上下文要求或暗示整数。不管所公开范围的宽度如何，这都适用。在需要特定值的情况下，它们将在说明书中指示。
[0132]
在整个本说明书中，词语“包括(comprise)”或其变型诸如“包括(comprises)”或“包括(comprising)”应当被理解为暗指包括所述的元素、整数或步骤，或元素、整数或步骤
的组，但不排除任何其他元素、整数或步骤，或元素、整数或步骤的组。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括至少约10ce g/l的多酚或至少约150mg ce/g的多酚。如上所述，术语“ce”或“儿茶素当量”是总多酚含量的量度，表示为儿茶素当量mg/g源自甘蔗的提取物或儿茶素当量g/l源自甘蔗的提取物。
[0133]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100ce g/l的多酚。
[0134]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、250、275、300、325、350、375、400、425、450、500、525、550、575、600、625、650、675、700、725、750、775或800mg ce/g的多酚。
[0135]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约1ce g/l至约50ce g/l的多酚或从约10ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0136]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约1ce g/l至约25ce g/l的多酚或从约10ce mg/g至约250ce mg/g的多酚。
[0137]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约1ce g/l至约10ce g/l的多酚或从约10ce mg/g至约100ce mg/g的多酚。
[0138]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约1ce g/l至约5ce g/l的多酚或从约10ce mg/g至约100ce mg/g的多酚。
[0139]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约5ce g/l至约50ce g/l的多酚或从约50ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0140]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约5ce g/l至约25ce g/l的多酚或从约50ce mg/g至约250ce mg/g的多酚。
[0141]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约5ce g/l至约10ce g/l的多酚或从约50ce mg/g至约100ce mg/g的多酚。
[0142]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约10ce g/l至约100ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约1000ce mg/g的多酚。
[0143]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约10ce g/l至约90ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约900ce mg/g的多酚。
[0144]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约10ce g/l至约80ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约800ce mg/g的多酚。
[0145]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约10ce g/l至约70ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约700ce mg/g的多酚。
[0146]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约10ce g/l至约60ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约600ce mg/g的多酚。
[0147]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约10ce g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0148]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约10ce g/l至约25ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约250ce mg/g的多酚。
[0149]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约15ce g/l至约50ce g/l的
多酚或从约150ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0150]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约15ce g/l至约25ce g/l的多酚或从约150ce mg/g至约250ce mg/g的多酚。
[0151]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约10ce g/l至约70ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约700ce mg/g的多酚。
[0152]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约10ce g/l至约60ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约600ce mg/g的多酚。
[0153]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约10ce g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0154]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约15ce g/l至约40ce g/l的多酚或从约150ce mg/g至约400ce mg/g的多酚。
[0155]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约20ce g/l至约30ce g/l的多酚或从约200ce mg/g至约300ce mg/g的多酚。
[0156]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约20ce g/l至约27g ce/l的多酚或从约200ce mg/g至约270ce mg/g的多酚。
[0157]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约27ce g/l至约35g ce/l的多酚或从约270ce mg/g至约350ce mg/g的多酚。
[0158]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约35ce g/l至约40g ce/l的多酚或从约350ce mg/g至约400ce mg/g的多酚。
[0159]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约40ce g/l至约50g ce/l的多酚或从约400ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0160]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约45ce g/l至约50g ce/l的多酚或从约450ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。
[0161]
本公开的源自甘蔗的提取物可以含有类黄酮类多酚。源自甘蔗的提取物可以含有任何量的类黄酮。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括至少约1ce g/l的类黄酮或至少约10ce mg/g的类黄酮。
[0162]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约1ce g/l至约15ce g/l的类黄酮或从约10ce mg/g至约150ce mg/g的类黄酮。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约3ce g/l至约10ce g/l的类黄酮或从约30ce mg/g至约100ce mg/g的类黄酮。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约5ce g/l至约8ce g/l的类黄酮或从约50ce mg/g至约80ce mg/g的类黄酮。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约6ce g/l至约8ce g/l的类黄酮或从约60ce mg/g至约80ce mg/g的类黄酮。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约6.5ce g/l至约7.5ce g/l的类黄酮或从约65ce mg/g至约75ce mg/g的类黄酮。
[0163]
本公开的源自甘蔗的提取物可以含有原花色素类多酚。源自甘蔗的提取物可以含有任何量的原花色素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括至少约1.5ce g/l的原花色素或至少约15ce mg/g的原花色素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括至少约1.8ce g/l的原花色素或至少约18ce mg/g的原花色素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约1.5ce g/l至约2.5ce g/l的原花色素或从约15ce mg/g至
约25ce mg/g的原花色素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括从约1.8ce g/l至约2.2ce g/l的原花色素或从约18ce mg/g至约22ce mg/g的原花色素。
[0164]
本公开的源自甘蔗的提取物的多酚包括但不限于以下各项中的一者或多者：丁香酸、绿原酸、咖啡酸、香草醛、芥子酸、对香豆酸、阿魏酸、没食子酸、香草酸、香叶木甙、香叶木素、芹菜素、牡荆素、荭草素、合模荭草素、当药黄素、小麦黄素、(+)-儿茶素、没食子酸(-)-儿茶素酯、(-)表儿茶素、槲皮素、山奈酚、杨梅酮、芦丁、夏佛塔苷、异夏佛塔苷、木犀草素、金雀花素和/或其衍生物。本公开的源自甘蔗的提取物的多酚还可以包括但不限于以下各项中的一者或多者：羟基肉桂酸、异荭草素、日当药黄素、新刺苞菊苷、异牡荆素、牡荆苷和/或其衍生物。
[0165]
源自甘蔗的提取物的多酚还包括缀合物，诸如糖苷、葡糖苷、半乳糖苷、半乳糖醛酸苷、醚、酯、阿拉伯糖苷、硫酸盐、磷酸盐、戊醛糖(木糖、阿拉伯糖)和己醛糖。
[0166]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括丁香酸、绿原酸、咖啡酸、香草醛、芥子酸、香叶木甙、香叶木素、芹菜素、牡荆素、荭草素、合模荭草素、当药黄素以及小麦黄素和/或其衍生物。
[0167]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括丁香酸、绿原酸和香叶木甙和/或其衍生物。
[0168]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括丁香酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括绿原酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括香叶木甙。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括咖啡酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括香草醛。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括芥子酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括牡荆素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括对香豆酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括阿魏酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括没食子酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括香草酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括香叶木素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括芹菜素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括荭草素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括合模荭草素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括当药黄素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括小麦黄素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括(+)-儿茶素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括没食子酸(-)-儿茶素酯。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括(-)-表儿茶素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括槲皮素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括山奈酚。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括杨梅酮。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括芦丁。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括夏佛塔苷。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括异夏佛塔苷。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括木犀草素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括金雀花素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括羟基肉桂酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括异荭草素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括日当药黄素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括新刺苞菊苷。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括异牡荆素。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗
的提取物包括牡荆苷。
[0169]
在一个实施例中，丁香酸、绿原酸和香叶木甙是本公开的源自甘蔗的提取物的三种最丰富的多酚。
[0170]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约5至20μg/g干重的丁香酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约7至15μg/g干重的丁香酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约10至12μg/g干重的丁香酸。在一个实施例中，当存在时，本公开的源自甘蔗的提取物包括约10.9μg/g干重的丁香酸。源自甘蔗的提取物可以是糖浆形式。
[0171]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约50至200μg/g干重的丁香酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约90至130μg/g干重的丁香酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约100至120μg/g干重的丁香酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约107μg/g干重的丁香酸。源自甘蔗的提取物可以是粉末形式。
[0172]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约1至15μg/g干重的绿原酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约3至10μg/g干重的绿原酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约5至8μg/g干重的绿原酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约6.53μg/g干重的绿原酸。源自甘蔗的提取物可以是糖浆形式。
[0173]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约30至150μg/g干重的绿原酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约60至90μg/g干重的绿原酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约70至80μg/g干重的绿原酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约74μg/g干重的绿原酸。源自甘蔗的提取物可以是粉末形式。
[0174]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约10至30μg/g干重的香叶木甙。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约15至25μg/g干重的香叶木甙。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约18至21μg/g干重的香叶木甙。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约19至45μg/g干重的香叶木甙。源自甘蔗的提取物可以是糖浆形式。
[0175]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约100至300μg/g干重的香叶木甙。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约190至260μg/g干重的香叶木甙。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约210至240μg/g干重的香叶木甙。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约227μg/g干重的香叶木甙。源自甘蔗的提取物可以是粉末形式。
[0176]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约7至15μg/g干重的丁香酸，和/或约4至9μg/g干重的绿原酸，和/或约0.1至0.5μg/g干重的咖啡酸、约0.05至0.3μg/g干重的香草醛，和/或约0.1至0.3μg/g干重的芥子酸，和/或约15至25μg/g干重的香叶木甙，和/或约0.1至0.4μg/g干重的荭草素，和/或约0.4至0.9μg/g干重的当药黄素，和/或约0.05至0.3μg/g干重的disomentin。源自甘蔗的提取物可以是糖浆形式。
[0177]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约10至12μg/g干重的丁香酸，和/或约5至8μg/g干重的绿原酸，和/或约0.2至0.4μg/g干重的咖啡酸，和/或约0.1至0.2μ
g/g干重的香草醛，和/或约0.1至0.25μg/g干重的芥子酸，和/或约18至21μg/g干重的香叶木甙，和/或约0.2至0.3μg/g干重的荭草素，和/或约0.5至0.8μg/g干重的当药黄素，和/或约0.1至0.2μg/g干重的disomentin。源自甘蔗的提取物可以是糖浆形式。
[0178]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约10.9μg/g干重的丁香酸，和/或约6.53μg/g干重的绿原酸，和/或约0.29μg/g干重的咖啡酸，和/或约0.153μg/g干重的香草醛，和/或约0.18μg/g干重的芥子酸，和/或约19.45μg/g干重的香叶木甙，和/或约0.245μg/g干重的荭草素，和/或约0.69μg/g干重的当药黄素，和/或约0.15μg/g干重的disomentin。源自甘蔗的提取物可以是糖浆形式。
[0179]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约90至130μg/g干重的丁香酸，和/或约60至90μg/g干重的绿原酸，和/或约4至10μg/g干重的咖啡酸，和/或约1至4μg/g干重的香草醛、约1至3μg/g干重的芥子酸，和/或约190至260μg/g干重的香叶木甙，和/或约3至7μg/g干重的荭草素，和/或3至8μg/g干重的当药黄素，和/或约0.05至0.3μg/g干重的disomentin。源自甘蔗的提取物可以是粉末形式。
[0180]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约100至120μg/g干重的丁香酸，和/或约70至80μg/g干重的绿原酸，和/或约6至8μg/g干重的咖啡酸、约2至3μg/g干重的香草醛，和/或约1.5至2.5μg/g干重的芥子酸，和/或约210至240μg/g干重的香叶木甙、约4至5μg/g干重的荭草素、4至6μg/g干重的当药黄素，和/或约0.1至0.2μg/g干重的disomentin。源自甘蔗的提取物可以是粉末形式。
[0181]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约107μg/g干重的丁香酸，和/或约74μg/g干重的绿原酸，和/或约7.5μg/g干重的咖啡酸，和/或约2μg/g干重的香草醛，和/或约1.7μg/g干重的芥子酸，和/或约227μg/g干重的香叶木甙，和/或约4.5μg/g干重的荭草素、5.2μg/g干重的当药黄素，和/或约0.16μg/g干重的disomentin。源自甘蔗的提取物可以是粉末形式。
[0182]
本公开的源自甘蔗的提取物可以含有在甘蔗中天然发现的一系列有机酸。这些有机酸可以包括但不限于乌头酸(顺式和反式)、草酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸、乙醇酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、富马酸和莽草酸。在一个实施例中，源自甘蔗的提取物含有比其他有机酸更高水平的柠檬酸和苹果酸。在另一实施例中，源自甘蔗的提取物含有低至痕量的草酸、柠檬酸、酒石酸、乙醇酸、琥珀酸和柠檬酸。在另一实施例中，源自甘蔗的提取物中两种最丰富的有机酸是反式乌头酸和顺式乌头酸。
[0183]
本公开的源自甘蔗的提取物可以含有反式乌头酸和/或顺式乌头酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约10,000至40,000mg/kg的量的反式乌头酸和/或约3,000至7,000mg/kg的量的顺式乌头酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物含有约17,000至30,000mg/kg的量的反式乌头酸和/或约4,000至6,500mg/kg的量的顺式乌头酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物可以含有约20,000至25,000mg/kg的量的反式乌头酸和/或约5,000至5,500mg/kg的量的顺式乌头酸。
[0184]
本公开的源自甘蔗的提取物可以含有氨基酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物的总氨基酸水平为约50,000至80,000μg/克，或约60,000至70,000μg/克，或约65,000μg/克。在一个实施例中，这些总氨基酸的约10至40％是必需氨基酸。在一个实施例中，这些总氨基酸的约15至30％是必需氨基酸。在一个实施例中，这些总氨基酸的约20至
25％是必需氨基酸。
[0185]
本公开的源自甘蔗的提取物可以含有游离氨基酸。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约10,000至50,000μg的游离氨基酸/克。在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物可以含有约20,000至35,000μg的游离氨基酸/克。本公开的源自甘蔗的提取物可以含有约25,000至30,000μg的游离氨基酸/克。
[0186]
如上定义，如本文所用，术语“游离氨基酸”是指这样的氨基酸，其为单一分子且在结构上不与附接到其他氨基酸的肽键附接。
[0187]
本公开的源自甘蔗的提取物可以含有亮氨酸，一种支链必需氨基酸。在一个实施例中，源自甘蔗的提取物中亮氨酸的浓度为约1至5mm，或约1.5至4mm，或约2至3mm。在一个实施例中，源自甘蔗的提取物中亮氨酸的量为约1,000至20,000μg/克，或约1,000至10,000μg/克，或约1,000至5,000μg/克，或约1,000至2,000μg/克，或约5,000至10,000μg/克，或约10,000至20,000μg/克。
[0188]
本公开的源自甘蔗的提取物可以含有矿物质。在一个实施例中，源自甘蔗的提取物含有在甘蔗中天然发现的矿物质。在一个实施例中，源自甘蔗的提取物含有一种或多种矿物质，包括但不限于钾、钠、钙、镁、铁、锌、硒和铬。
[0189]
在一个实施例中，源自甘蔗的提取物含有与多酚结合的矿物质。在一个实施例中，源自甘蔗的提取物含有与多酚结合的二价离子。在一个实施例中，源自甘蔗的提取物含有与多酚结合的钙、镁和/或铁。在一个实施例中，源自甘蔗的提取物含有与多酚结合的铁。
[0190]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约20,000至32,000mg的钾/千克，和/或约300至600mg的钠/千克，和/或约800至1,300mg的钙/千克，和/或约3,000至6,000mg的镁/千克，和/或约40至90mg的铁/千克，和/或约3至10mg的锌/千克，和/或约500至900μg的硒/千克，和/或约1,000至1,600μg的铬/千克。源自甘蔗的提取物可以是糖浆形式。
[0191]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约25,000至27,000mg的钾/千克，和/或约400至500mg的钠/千克，和/或约1,000至1,200mg的钙/千克，和/或约4,000至5,500mg的镁/千克，和/或约55至75mg的铁/千克，和/或约5.5至7.5mg的锌/千克，和/或约700至850μg的硒/千克，和/或约1,200至1,400μg的铬/千克。源自甘蔗的提取物可以是糖浆形式。
[0192]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约26,000mg的钾/千克，和/或约450mg的钠/千克，和/或约1,090mg的钙/千克，和/或约4,700mg的镁/千克，和/或约65mg的铁/千克、约6.6mg的锌/千克，和/或约786μg的硒/千克，和/或约1,300μg的铬/千克。源自甘蔗的提取物可以是糖浆形式。
[0193]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约50至350mg的钾/千克，和/或约5至70mg的钠/千克，和/或约7,000至10,000mg的钙/千克，和/或约1,000至3,000mg的镁/千克，和/或约500至1,300mg的铁/千克。源自甘蔗的提取物可以是粉末形式。
[0194]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约100至250mg的钾/千克，和/或约10至50mg的钠/千克，和/或约8,000至9,000mg的钙/千克，和/或约1,500至2,500mg的镁/千克，和/或约800至1,000mg的铁/千克。源自甘蔗的提取物可以是粉末形式。
[0195]
在一个实施例中，本公开的源自甘蔗的提取物包括约190mg的钾/千克，和/或约30mg的钠/千克，和/或约8,800mg的钙/千克，和/或约2,000mg的镁/千克，和/或约890mg的
铁/千克。源自甘蔗的提取物可以是粉末形式。
[0196]
本公开的源自甘蔗的提取物可以含有单糖、二糖、寡糖和/或多糖。这些糖的实例包括但不限于蔗糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、核糖、甘露糖、鼠李糖、果糖、麦芽糖、乳糖、麦芽三糖、吡喃木糖、棉子糖、1-蔗果三糖、theanderose、6-蔗果三糖、潘糖、新蔗果三糖、蔗果四糖、葡聚糖和木聚糖。
[0197]
在一个实施例中，组合物和方法包括从约0.00001重量％至约10重量％的提取物。
[0198]
在一个实施例中，组合物和方法包括从约0.00001重量％至约50重量％的提取物。
[0199]
在一个实施例中，组合物和方法包括从约0.00001重量％至约50重量％的提取物。
[0200]
在一个实施例中，组合物和方法包括从约5重量％至约10重量％的提取物。
[0201]
在一个实施例中，组合物和方法包括从约0.05重量％至约10重量％的提取物。
[0202]
在一个实施例中，组合物和方法包括从约0.05重量％至约5重量％的提取物。
[0203]
在一个实施例中，病毒是冠状病毒。
[0204]
在一个实施例中，病毒是流感病毒，包括h1n1、猪流感和禽流感。
[0205]
在一个实施例中，病毒是sars-cov-2。
[0206]
在一个实施例中，病毒是黄病毒，包括登革热、寨卡、西尼罗和黄热病。
[0207]
在一个实施例中，病毒是亨德拉。
[0208]
在一个实施例中，疾病由原生动物引起，诸如疟疾、痢疾、贾第虫、隐孢子虫、恰加斯病和球虫病。
[0209]
在一个实施例中，农业温室气体排放由古产甲烷菌引起。
[0210]
在一个实施例中，疾病由微孢子虫诸如虾肝肠胞虫引起。
[0211]
在一个实施例中，用于抑制和/或治疗病毒感染的用途的组合物是外用洗液，优选地为洗手液。
[0212]
在一个实施例中，用于抑制和/或治疗病毒感染的用途的组合物是口服制剂，优选地为洗口药、含漱液或饮用液体，或固体，诸如片剂、胶囊、锭剂或糖果。特别优选的是胶囊。
[0213]
在一个实施例中，用于口服施用的用途的组合物可以包括在液体、固体或半固体食品中。
[0214]
在一个实施例中，组合物可以包括在非人动物饲料中。
[0215]
在一个实施例中，用于抑制和/或治疗病毒感染的用途的组合物是用于肺部施用的气溶胶。
[0216]
在一个实施例中，用于抑制和/或治疗病毒感染的用途的组合物是鼻内喷雾剂或被配制用于经鼻施用。
[0217]
在一个实施例中，用于抑制和/或治疗病毒感染的用途的组合物被配制用于通过喷雾器施用。
[0218]
在一个实施例中，用于抑制和/或治疗病毒感染的用途的组合物被配制用于静脉内施用。
[0219]
在一个实施例中，用于抑制和/或治疗病毒感染的用途的组合物被配制用于肺部施用。
[0220]
在一个实施例中，用于抑制和/或治疗病毒感染的用途的组合物被配制用于含服或舌下施用。
[0221]
在一个实施例中，用于抑制和/或治疗病毒感染的用途的组合物被配制用于透皮递送。
[0222]
本公开的甘蔗提取物的制备已经广泛描述于wo 2019/028506中。特别地，wo 2019/028506(通过交叉引用并入本文)的第17页至第40页第22行描述了这些提取物的制备。
[0223]
类似地，在wo 2019/028506(通过交叉引用并入本文)第50页第16行至第51页第24行中，描述了甘蔗提取物的组合物。此外，在wo 2019/028506第64页至第88页第9行中，描述了甘蔗提取物的特点。
[0224]
更一般地，wo 2019/028506的公开内容通过交叉引用并入本文。
[0225]
对本公开的甘蔗提取物样品的详细分析揭示了以下组分：
[0226]
绿原酸2423ng/ml
[0227]
香草酸16088ng/ml
[0228]
咖啡酸482ng/ml
[0229]
反式咖啡酸273ng/ml
[0230]
对香豆酸14445ng/ml
[0231]
此外，发现木犀草素、反式白藜芦醇、香叶木素、当药黄素和芦丁与类黄酮一起存在，类黄酮包括芹菜素-6-c-阿拉伯糖基-8-c葡糖苷、芹菜素-6-c-葡糖基-8-c阿拉伯糖苷、芹菜素-6,8-c-二葡糖苷、芹菜素-6"-o-葡糖基-8-c葡糖苷、夏佛塔苷-2"-o-葡糖苷、芹菜素-6-c-鼠李糖基-8-c葡糖苷、芹菜素-6,8-c-二阿拉伯糖苷、甲氧基木犀草素-8-c-葡糖苷、甲氧基木犀草素-6"-o-芸香糖基-8-c-葡糖苷、甲氧基木犀草素-6"-o-葡糖基-8-c-葡糖苷、小麦黄素7-o-新橘皮糖苷、小麦黄素-7-o-鼠李糖基-葡糖苷酸和小麦黄素7-o-糖苷。
[0232]
将提取物配制成适合于人类使用的本公开的组合物可以通过配制领域中熟知的任何方法来制备。用于配制本公开的组合物的示例性技术可以在《雷明顿药物科学(remington's pharmaceutical sciences)》麦克出版公司(mack publishing co.),宾夕法尼亚州伊斯顿(easton pa.),第
22
版,2012中找到。
[0233]
在一个实施例中，本公开的提取物可以喷雾干燥并直接掺入胶囊中用于人类使用。通常，这样的组合物不需要附加载体，但可以使用诸如乳糖等载体。对于这种类型的产品，一粒胶囊可以含有10至1000mg。优选的是含有100至500mg的喷雾干燥材料的胶囊，特别优选的是250mg胶囊或500mg胶囊。
[0234]
在一个实施例中，本公开的提取物可以喷雾干燥并配制成舌下片剂用于摄取到人的口腔中。对于这种类型的产品，一个片剂可以含有10至1000mg。优选的是含有100至500mg的喷雾干燥材料的片剂，特别优选的是喷雾干燥材料的250mg片剂或500mg片剂。
[0235]
在一个实施例中，本公开的提取物可以配制成液体或半固体，诸如糖浆或凝胶，用于舌下摄取到人的口腔中。对于这种类型的产品，液体或凝胶可以含有10至30％w/w的提取物。优选的浓度为15至20％w/w或20至30％w/w。
[0236]
本公开的提取物的喷雾干燥可以通过已知方法制备。这样的方法可以包括或不包括载体诸如麦芽糖糊精。
[0237]
在一个实施例中，提取物可以以100％浓度喷雾干燥，喷雾干燥器入口温度为140至150℃，并且出口温度为90至95℃。
[0238]
在一个实施例中，提取物可以使用麦芽糖糊精载体以80％浓度喷雾干燥，喷雾干燥器入口温度为150至160℃，并且出口温度为90至95℃。
[0239]
在一个实施例中，本公开的提取物可以配制成用于在人体内经鼻或口服施用的喷雾剂。对于这种类型的产品，喷雾剂可以含有0.01至10％w/v或0.01至5.0％w/v或0.1至2.0％w/v或1.0至2.5％w/v。
[0240]
适用于非人动物的组合物已经广泛描述于wo 2019/028506中，例如在[238]至[251]和[253]至[254]中，该文献的内容通过交叉引用并入本文
[0241]
在一个实施例中，在适用于非人动物的组合物中，本公开的提取物可以以对于液体饲料为0.001％至10％w/w或w/v的浓度掺入饲料中。
[0242]
在一个实施例中，在适用于非人动物的组合物中，本公开的提取物可以以对于液体饲料为0.01％至5％w/w或w/v的浓度掺入饲料中。
[0243]
在一个实施例中，在适用于非人动物的组合物中，本公开的提取物可以以对于液体饲料为0.1％至2％w/w或w/v的浓度掺入饲料中。
[0244]
在一个实施例中，在适用于反刍动物的组合物中，本公开的提取物可以以对于液体饲料为0.001％至10％w/w，优选地为0.01％至5％，最优选地为0.1％至2％或％w/v的浓度掺入饲料中，以实现3至80％的甲烷减少。
[0245]
在一个实施例中，在适用于反刍动物的组合物中，本公开的提取物可以以对于液体饲料为0.001％至10％w/w，优选地为0.01％至5％，最优选地为0.1％至2％或w/v的浓度掺入饲料中，以实现5至70％的甲烷减少。
[0246]
在一个实施例中，在适用于反刍动物的组合物中，本公开的提取物可以以对于液体饲料为0.001％至10％w/w，优选地为0.01％至5％，最优选地为0.1％至2％或w/v的浓度掺入饲料中，以实现10至60％的甲烷减少。
[0247]
在一个实施例中，在适用于反刍动物的组合物中，本公开的提取物可以以对于液体饲料为0.001％至10％w/w，优选地为0.01％至5％，最优选地为0.1％至2％或w/v的浓度掺入饲料中，以实现5至50％的甲烷减少。
[0248]
在一个实施例中，在适用于反刍动物的组合物中，本公开的提取物可以以对于液体饲料为0.001％至10％w/w，优选地为0.01％至5％，最优选地为0.1％至2％或w/v的浓度掺入饲料中，以实现5至40％的甲烷减少。
[0249]
在一个实施例中，在适用于反刍动物的组合物中，本公开的提取物可以以对于液体饲料为0.001％至10％w/w，优选地为0.01％至5％，最优选地为0.1％至2％或w/v的浓度掺入饲料中，以实现10至30％的甲烷减少。
[0250]
在一个实施例中，在适用于反刍动物的组合物中，本公开的提取物可以以对于液体饲料为0.001％至10％w/w，优选地为0.01％至5％，最优选地为0.1％至2％或w/v的浓度掺入饲料中，以实现5至10％的甲烷减少。
[0251]
在一个实施例中，在适用于反刍动物的组合物中，本公开的提取物可以以对于液体饲料为0.001％至10％w/w，优选地为0.01％至5％，最优选地为0.1％至2％或w/v的浓度掺入饲料中，以实现将奶产量提高1至15％或2至10％或3至7％。
[0252]
在一个实施例中，在适用于非人水生动物(诸如虾和对虾)的组合物中，本公开的提取物可以以0.1至2.0％v/v的浓度掺入水生环境中。
[0253]
在一个实施例中，在适用于非人水生动物(诸如虾和对虾)的组合物中，本公开的提取物可以以0.1至1.0％v/v的浓度掺入水生环境中。
[0254]
在一个实施例中，在适用于非人水生动物(诸如虾和对虾)的组合物中，本公开的提取物可以以0.1至0.6％v/v的浓度掺入水生环境中。
[0255]
在一个实施例中，在适用于非人水生动物(诸如虾和对虾)的组合物中，本公开的提取物可以以0.3至0.6％v/v的浓度掺入水生环境中。
[0256]
现在将描述本公开的提取物的制备的实例1。该提取物被命名为polygain。
[0257]
·
酒糟在使用前储存在具有回流的槽中。
[0258]
·
将酒糟原料通过10微米筛以除去任何大颗粒。
[0259]
·
然后将原料进行高剪切混合。
[0260]
·
混合后，将其加热至55℃。
[0261]
·
将加热的材料通过0.1微米膜过滤系统过滤。
[0262]
·
过滤后，将其蒸发至60白利糖度。
[0263]
·
如果以液体形式储存，则将其加热至80℃并包装。
[0264]
·
如果需要喷雾干燥材料，则将60白利糖度产物与麦芽糖糊精共混并混合均匀。
[0265]
·
将如此形成的浆料喷雾干燥，入口温度范围为150至160℃，并且出口温度范围为90至95℃。
[0266]
如下确定polygain的多酚含量：
[0267]
多酚分子式绿原酸c
16h18
o9反式咖啡酸&咖啡酸c9h8o4丁香酸c9h
10
o5反式对香豆酸c9h8o3反式芥子酸c
11h12
o5牡荆素c
21h20o10
当药黄素c
22h22o10
合模荭草素&荭草素c
21h20o11
槲皮素c
15h10
o7芹菜素c
15h10
o5小麦黄素c
23h24o12
[0268]
现在将描述本公开的提取物的制备的实例2。该提取物被命名为virofonol。
[0269]
1.将300kg的甘蔗提取物与900l的热水(80至85℃)混合。
[0270]
2.混合均匀，并检查白利糖度为20，然后添加到具有fpx-66树脂的沉降槽中。
[0271]
3.混合20分钟，然后使树脂沉降15至20分钟。
[0272]
4.通过200微米预过滤器进入槽中。
[0273]
5.排出并处理剩余液体。
[0274]
6.用大约1000l冷水冲洗树脂。混合均匀并排出。
[0275]
7.将71至76％乙醇添加到具有树脂的沉降槽中。
[0276]
8.混合20分钟，然后使树脂沉降15至20分钟。
[0277]
9.通过200微米预过滤器进入槽中并收集液体。
[0278]
10.重复步骤7至9。
[0279]
11.收集所有液体后，将500l温水(35至40℃)添加到树脂中。
[0280]
12.混合20分钟，然后使产物沉降15至20分钟。
[0281]
13.排出并收集液体。
[0282]
14.将收集的所有液体添加到蒸发器中并浓缩至45白利糖度。
[0283]
15.喷雾干燥45白利糖度液体，入口温度范围为140至150℃，并且出口温度范围为90至95℃，过筛并包装。
[0284]
现在将描述本公开的另外的实例，如实例3。
[0285]
测试方案：评价4种溶液以确定是否有任何溶液可以直接灭活sars-cov-2。其中，溶液4是本公开的组合物，并且水用作阴性对照。
[0286]
方案1：将50μl的sars-cov-2储备液(未稀释)添加到50μl的每种溶液中。1分钟后(模拟在口中停留的时间长度)，添加500ul感染培养基以'淬灭'消毒反应。然后尽快将样品直接铺在tcid50板上(n＝4/稀释液)。与阳性对照样品相比，将记录cpe阳性的孔的百分比。
[0287]
将100μl的sars-cov-2储备液暴露于等体积(100μl)的纯净稀释溶液。1分钟后，连续稀释病毒：底物溶液并执行tcid50。将tcid50/ml的变化与阳性对照样品进行比较。
[0288]
50％组织培养感染剂量测定(tcid50)：在pc2实验室中，在测定前24小时接种板以建立约95％的vero细胞单层。在验证单层的质量/密度之后，使用感染培养基洗涤板(以除去任何细胞碎片)，然后转移到pc3实验室中。生成样品，将它们连续稀释并将已知体积移植到每个孔中。n＝4个复制/样品。孵育板以使病毒能够感染单层，然后添加mem感染培养基(含有青霉素/链霉素、谷氨酰胺、hepes，但不含fbs)+tpck胰蛋白酶(1ug/ml)。将板放回孵育箱(37℃，5％co2)并每24小时(至多72小时)用显微镜查验细胞上的细胞病变效应(cpe)。然后存在于原始样品中的感染性病毒的tcid50/ml经由reed和meunch,1938,“一种估计百分之五十终点的简单方法(a simple method of estimating fifty per cent endpoints)”《美国卫生杂志(the american journal of hygiene)》:3的方法确定。
[0289]
结果：当直接暴露于sars-cov-2时，溶液4表现出完全有效的杀病毒活性。对于淬灭和tcid50测定两者，当使用未稀释的溶液4时，没有检测到病毒诱导的cpe。相比之下，溶液1和溶液2没有显现出杀病毒作用。溶液3显现出一些杀病毒作用。结果图示于图1中。
[0290]
在另外的实例4中，在sars-cov-2病毒产量减少测定中评价本公开的组合物。使用sars-cov-2患者分离株(澳大利亚/vic01/2020)病毒，其中组合物样品以10mg/ml重悬于感染培养基(mem+abx+hepes，无血清)中。以10ug/ml、5ug/ml、2.5ug/ml、1.25ug/ml和0.625ug/ml测试样品(添加病毒后的最终浓度＝5、2.5、1.25、0.625和0.313ug/ml)。
[0291]
测试方案：在实验开始前一天在24孔板中接种vero细胞。
[0292]
·
第二天在100ul中用100tcid50感染并在37℃下孵育1小时。
[0293]
·
使用新的储备液(tcid50/ml＝10
5.59
)。
[0294]
·
对于该实验，在100ul接种物中反滴定产生943
±
233tcid
50
。
[0295]
·
将化合物以10mm(来自最初的10mg/ml储备液)重悬于dmso中，然后立即在感染培养基中稀释至上述剂量范围并在同一天使用。
[0296]
·
与病毒孵育1小时后，以100μl体积的sf培养基添加抗病毒化合物，1小时后添加
0.8ml含有1.2μg/ml的胰蛋白酶的感染培养基(孔中的总体积＝1ml)。
[0297]
·
添加培养基后立即取样125μl用于t＝0滴度。替换125ul，以保持孔中的体积为1ml。
[0298]
·
在感染后24小时和48小时，收集上清液的等分试样并执行tcid50以评估感染性病毒滴度。
[0299]
50％组织培养感染剂量测定(tcid
50
)：
[0300]
·
在pc2实验室中，在测定前24小时接种板以建立约95％的vero细胞单层。
[0301]
·
在验证单层的质量/密度之后，使用感染培养基洗涤板(以除去任何细胞碎片)，然后转移到pc3实验室中。
[0302]
·
生成样品，将它们连续稀释并将已知体积移植到每个孔中。n＝4个复制/样品。
[0303]
·
孵育板以使病毒能够感染单层，然后添加mem感染培养基(含有青霉素/链霉素、谷氨酰胺、hepes，但不含fbs)+tpck胰蛋白酶(1ug/ml)。
[0304]
·
将板放回孵育箱(37℃，5％co2)并每24小时(至多72小时)用显微镜查验细胞上的细胞病变效应(cpe)。
[0305]
·
然后存在于原始样品中的感染性病毒的tcid
50
/ml经由reed和meunch的方法确定。
[0306]
结果：感染后24小时的对数tcid
50
/ml值：
[0307][0308]
结果：感染后48小时的tcid
50
/ml值：
[0309][0310]
在另外的实例5中，用西尼罗病毒感染vero细胞两小时，并且然后用不同浓度的本公开的组合物处理。
[0311]
实例5的结果示出于图2中。
[0312]
在另外的实例6中，在1980μl的rpmi培养基中培养六种球虫原生动物。这些物种是子孢子生命阶段的分离物。这些物种包括：巨型艾美球虫、堆型艾美球虫、布氏艾美球虫、柔嫩艾美球虫、毒害艾美球虫、缓艾美球虫。然后用20μl的本公开的组合物处理这些物种。
[0313]
结果示出于图3中。
[0314]
在另外的实例7中，使用ross 308雄性肉鸡进行球虫攻击试验。将1日龄的鸡分配
至在饲料中包括不同浓度的本公开的组合物，或在饲料中包括抗生素离子载体盐霉素的实验组，或在饲料中不含添加剂的对照组。在第14天，向鸡施用20倍剂量的含有3种艾美球虫株系的活疫苗制剂。这些株系包括巨型艾美球虫、堆型艾美球虫和柔嫩艾美球虫。在施用艾美球虫攻击后7天，将来自每个处理组的鸡安乐死，并且由合格的兽医对由球虫感染在胃肠道中形成的病灶进行评分。
[0315]
结果示出于图4中。
[0316]
在另外的实例8中，对8匹纯种马的粪便微生物群系进行5天的基因测序以确定存在的基线微生物群落。每24小时施用100ml的本公开的组合物，持续28天。然后重复粪便样品的5天基因测序。然后停止施用提取物。经过另外的28天后，再次重复8匹马的粪便微生物群系。
[0317]
结果示出于图5中。
[0318]
在另外的实例9中，体外对一系列浓度的本公开的组合物(在该实例中称为“virofonol”)存在下(在细胞暴露于病毒后添加)的感染性甲型流感病毒(iav)子代的产生进行评估。定量测定用于测量感染性病毒滴度。
[0319]
使用甲型流感病毒(iav)(a/北京89毒株—h3n2亚型的代表性季节性毒株)。在用病毒感染1小时后添加的本公开的组合物(virofonol)的最终浓度为10、5和2.5μg/ml。在感染后2和24小时(hpi)评估病毒恢复。2小时时间点用于评价残留输入病毒，并且24小时时间点评价复制和病毒产生后的感染性病毒。
[0320]
使用的感染方案如下：
[0321]
·
在实验开始前一天在12孔板中接种mdck细胞。保留一个孔以在感染前对细胞计数。
[0322]
·
第二天，用感染培养基洗涤细胞2次并对细胞计数。以150ul感染，moi＝1.0，并在37℃下孵育1小时。每10分钟轻轻摇动板。
[0323]
·
将化合物以10mg/ml重悬于感染培养基中。通过0.22μm注射器过滤器过滤。
[0324]
·
在感染培养基中将化合物稀释至10、5和2.5μg/ml。
[0325]
·
孵育1小时后，除去接种物，并将所有孔用感染培养基洗涤2次。
[0326]
·
立即以每孔1ml的体积添加稀释抗病毒化合物。
[0327]
·
在感染后2和24小时(hpi)，收集上清液并在微量离心机中以13000rpm离心5分钟。(即：收获含有病毒的无细胞上清液)。
[0328]
·
将澄清的上清液以2个等分试样储存在-80℃下。
[0329]
·
执行噬菌斑测定以评估感染性病毒滴度。
[0330]
使用的噬菌斑测定方案如下：
[0331]
·
将2x l15培养基置于45℃水浴中。
[0332]
·
用胰蛋白酶worthington以4μg/ml预活化病毒样品以确保iav ha被裂解。
[0333]
·
在冷的无血清rpmi+中对病毒样品执行连续10倍稀释。
[0334]
·
从铺满mdck细胞的六孔板中吸出培养基，并用2ml的无血清rpmi+替换。重复。
[0335]
·
吸出rpmi+并将150μl的病毒稀释液添加到一式两份孔中。
[0336]
·
然后将板置于37℃/5％co2下1小时以使病毒感染。
[0337]
·
在微波中加热琼脂糖直到琼脂糖完全溶解并置于45℃的水浴中。
[0338]
·
添加由含有0.9％(w/v)琼脂糖和2μg/ml的胰蛋白酶worthington的l15培养基组成的琼脂糖覆盖层(总共3ml)。
[0339]
·
使覆盖层固化，然后将细胞放回孵育箱中3天(37℃/5％co2)，以形成病毒噬菌斑。
[0340]
·
将板举到灯光下，对噬菌斑计数。
[0341]
所得结果如下(表1)：表1
[0342][0343]
可以看出，当在感染后添加时，virofonol表现出了针对代表性季节性iav毒株的抗病毒作用，表明了细胞内作用机制。注意在2hpi没有观察到显著变化，这是在建立复制之前对输入病毒的评估。在感染后1小时添加超过5μg/ml浓度的virofonol并在感染后24小时进行分析，观察到了最大的抗病毒作用。这表明在病毒进入并启动复制后，virofonol可以在病毒生命周期的特定阶段对iav发挥抗病毒活性。
[0344]
在另外的实例10中，体外对感染期间和之后在一系列浓度的virofonol存在下的感染性iav子代的产生进行评估。tcid50测定被用作感染性病毒滴度的定量量度，因为这使用较少的样品提供了较多的技术复制，并且所有测定可以在相同的板中执行以确保更大的一致性。
[0345]
使用甲型流感病毒(iav)(a/北京89毒株—h3n2亚型的代表性季节性毒株)。添加病毒期间和之后的最终浓度＝10、5和2.5μg/ml。在感染后2和24小时(hpi)评估病毒恢复。
[0346]
使用的感染方案如下：
[0347]
·
在实验开始前一天在12孔板中接种mdck细胞。保留一个孔以在感染前对细胞计数。
[0348]
·
第二天，用感染培养基洗涤细胞2次并对细胞计数。
[0349]
·
将化合物以10mg/ml重悬于感染培养基中。通过0.22μm注射器过滤器过滤。
[0350]
·
在感染培养基中将化合物稀释至10、5和2.5μg/ml。
[0351]
·
以150ul/孔将病毒与感染培养基中的每种浓度的稀释化合物一起在37℃下孵育1小时，moi＝1.0。
[0352]
·
用化合物孵育的病毒感染细胞1小时。除去接种物。用感染培养基洗涤所有孔2次。
[0353]
·
以每孔1ml的体积再次添加对应稀释抗病毒化合物。
[0354]
·
在2和24hpi，收集上清液并在微量离心机中以13000rpm离心5分钟(收获无细胞上清液)。
[0355]
·
将澄清的上清液以2个等分试样储存在-80℃下。
[0356]
·
执行tcid50测定以评估感染性病毒滴度。
[0357]
使用的tcid50方案如下：
[0358]
·
在实验前一天在96孔板中接种mdck细胞。每个病毒稀释液制备8个孔。每个样品一个板。
[0359]
·
第二天，用感染培养基洗涤细胞2次。
[0360]
·
向感染培养基中添加胰蛋白酶worthington，最终浓度为2μg/ml。
[0361]
·
用胰蛋白酶worthington以4μg/ml预活化病毒样品以确保iav ha被裂解。
[0362]
·
在感染培养基中以1：10的比率稀释病毒，并将100μl的每种稀释液转移到6个孔中。使用第7列作为阳性对照(已知滴度病毒)，并且第8列作为阴性对照。
[0363]
·
在37℃下在5％co2中孵育3天。每天监测。
[0364]
·
根据tcid50的标准转换计算估计的pfu/ml。
[0365]
所得结果如下(表2)：
[0366]
表2
[0367][0368]
可以看出，当作为感染前和感染后处理与病毒一起孵育时，virofonol表现出了针对代表性季节性iav毒株的抗病毒活性。这些发现表明了virofonol直接针对病毒的可能杀病毒作用以及该化合物的细胞作用机制。注意在2hpi没有观察到显著变化，这是在建立复制之前对输入病毒的评估。当在24hpi定量病毒滴度时，用大于5μg/ml浓度的virofonol观察到了最大的作用。
[0369]
在另外的实例11中，体外对感染期间和之后在添加的一系列浓度的virofonol存在下的感染性zikv病毒体子代的产生进行评估。tcid50测定被用作感染性病毒滴度的定量量度，因为这使用较少的样品提供了较多的技术复制，并且所有测定可以在相同的板中执行以确保更大的一致性。使用亚洲寨卡病毒(zikv)，添加病毒期间和之后的最终浓度＝10、5和2.5μg/ml。时间点为感染后24和48小时(hpi)。
[0370]
使用的感染方案如下：
[0371]
·
在实验开始前一天在12孔板中接种vero细胞。保留一个孔以在感染前对细胞计数。
[0372]
·
第二天，用温的pbs洗涤细胞2次并对细胞计数。
[0373]
·
将化合物以10mg/ml重悬于感染培养基中。通过0.22μm注射器过滤器过滤。
[0374]
·
在感染培养基中将化合物稀释至10、5和2.5μg/ml。
[0375]
·
以300ul/孔将病毒与感染培养基中的每种浓度的稀释化合物一起在37℃下孵育1小时，moi＝1.0。
[0376]
·
用化合物孵育的病毒感染细胞1小时。除去接种物。用温的pbs洗涤所有孔2次。
[0377]
·
以每孔1ml的体积再次添加对应稀释抗病毒化合物。
[0378]
·
在24和48hpi，收集上清液并在微量离心机中以13000rpm降速离心5分钟。
[0379]
·
将澄清的上清液以2个等分试样储存在-80℃下。
[0380]
·
执行tcid50测定以评估感染性病毒滴度。
[0381]
使用的tcid50方案如下：
[0382]
·
在实验前一天在96孔板中接种vero细胞。每个病毒稀释液制备8个孔。每个样品一个板。
[0383]
·
第二天，用温的pbs洗涤细胞2次。
[0384]
·
在感染培养基(血清减少)中以1：10的比率稀释病毒，并将100μl的每种稀释液转移到6个孔中。使用第7列作为阳性对照(已知滴度病毒)，并且第8列作为阴性对照。
[0385]
·
在37℃下在5％c02中孵育5天。每天监测。
[0386]
·
根据tcid50计算估计的pfu/ml。
[0387]
所得结果如下(表3)：
[0388]
表3
[0389][0390][0391]
当作为感染前处理与病毒一起孵育并在测定期间保持在细胞培养物中时，virofonol表现出了针对zikv-亚洲的抗病毒作用。这些发现表明了virofonol的可能细胞外杀病毒作用(直接针对病毒)以及该化合物的细胞内作用机制(作用于细胞)。注意在24hpi没有观察到显著变化，这是在48hpi完全建立复制之前对输入病毒的评估。在48hpi后，用5g/ml virofonol观察到了最大的作用。这表明virofonol影响病毒颗粒本身(针对病毒起作用)和/或其在细胞内感染和复制的能力(细胞效应)。还注意到zikv比iav具有更长的复制周期，因此评估iav的2和24hpi，而评估zikv的24和48hpi。
[0392]
总之，实例9至11证明了virofonol在直接应用于病毒接种物本身时和在感染过程后对iav和zikv都显示出抗病毒活性。这些结果指示virofonol可以用作细胞外和细胞内抗病毒剂。
[0393]
在另外的实例12中，评估本公开的两种组合物(称为polynol和polygain)针对(感染性喉气管炎病毒)iltv csw1的剂量应答。
[0394]
在该实例中，将鸡(来亨鸡)肝肝癌细胞系(lmh细胞)接种到12孔板中直到90％铺满。
[0395]
·
用400ul的1
×
106pfu/ml iltv csw1病毒感染细胞1小时。
[0396]
·
1小时后，将各种浓度(polynol：0.5、1和1.5mg/ml，polygain：1、1.5和2mg/ml)添加到对应孔中。
[0397]
·
孵育48小时。孵育后，收集细胞培养基进行噬菌斑测定。
[0398]
该实例的结果如下(表4)：
[0399]
表4
[0400][0401][0402]
在另外的实例13中，评价本公开的组合物(polygain)减少不产奶的母牛甲烷排放的能力。
[0403]
给不产奶的母牛喂食3kg精饲料混合物(对照)或与100g polygain混合的精饲料。在上午11点确定并在下午1点再次确定甲烷浓度的测量值。
[0404]
图7中的结果清楚地示出，与对照组相比，polygain在前两个小时期间显著减少了甲烷排放。这些结果证明了本公开的组合物的生态失调作用。
[0405]
在另外的实例14中，体外评价本公开的组合物(polygain)减少甲烷生成的能力。在该实例中，获得瘤胃液样品并用于发酵典型饲育场饮食或盖氏虎尾草的样品。在被评价的样品中，在每个发酵中包括15％浓度的polygain。
[0406]
如下所述的结果示出，对于饲育场饮食，每克消化的干物质在24小时后甲烷生成
减少了54％。对于盖氏虎尾草饮食，每克消化的干物质在24小时后甲烷生成减少了16.5％。
[0407][0408]
在另外的实例15中，评价本公开的组合物(polygain)抑制ehp的极管突出活性的能力。
[0409]
图6所示的结果清楚地图示了polygain针对ehp的抑制活性非常有效。注意pbs是对照。因此，显然polygain将起到防止对虾被ehp感染的作用，并且实际上也防止对ehp感染敏感的其他水生物种被感染。
[0410]
在另外的实例16中，评价本公开的组合物(polygain)提高乳用牛产奶量的能力。在该实例中，给牛喂食它们的正常饮食(对照)或包括0.5％或1.0％polygain的它们的正常饮食。每天测量奶体积和精饲料，结果示出于表5中。
[0411]
表5
[0412]
天polygain浓度(％w/w)奶(升/天/奶牛)精饲料/100kg奶7033.223.970.534.922.971.035.322.741031.025.4410.532.225.7411.032.824.6
[0413]
这些结果示出，在7天时，在补充有polygain的奶牛中，日产奶量增加了2.1l/天/奶牛。这在41天时继续，其中在补充有polygain的奶牛中，产奶量增加了1.8l/天/奶牛。这指示分别增加了6.3％和5.8％。
[0414]
此外，补充有polygain的所有奶牛的蛋白质和脂肪含量都保持不变。
[0415]
最后，在补充有polygain的奶牛中需要较低水平的精饲料以获得提高的奶产量。
[0416]
在另外的实例17中，评价本公开的组合物(polygain)提高小牛生长的能力。在该试验中，或者给小牛喂食它们的正常饮食(对照)或者喂食包括10g polygain的它们的正常饮食。
[0417]
饮食由4.0kg小麦、1.0kg玉米、1.0kg菜籽粗粉,0.1kg石灰石,0.1kg盐,0.05kg磷酸二钙,0.04kg氧化镁和维生素以及痕量矿物质预混物组成。它作为粒料或松散粒状混合物喂食。
[0418]
试验结果列于表6中。这些结果示出，对照组的平均总增重为67.6kg，相比之下，包括polygain的试验饮食的平均总增重为70.5kg。对照组的平均日增重为0.82kg，相比之下，另一组为0.86kg。这相当于4.9％的差异，就每只动物的经济价值而言，这是非常显著的。
[0419]
结合与减少甲烷产生相关的实例，显然所公开的糖提取物提供了双重益处。提高了体重，同时减少了甲烷产生。
[0420]
表6：
[0421][0422][0423]
表6：续表
[0424][0425]
表6续表
[0426][0427]
表6续表
[0428][0429]
表6续表
[0430][0431]
表6续表
[0432][0433]
在另外的实例18中，评价本公开的组合物(polygain)通过预防和/或治疗乳腺炎来改善乳用牛健康的能力。在4个月时间段期间从27头奶牛的超过4000次挤奶过程中收集电导率数据，这些奶牛被分成对照组和在其饮食中包括1％w/w polygain(按总干物质计)的组。
[0434]
如前所述，奶电导率直接指示奶牛体内乳腺炎的存在。通常，电导率随着乳腺炎的发生而增加。需要注意的是，奶牛的四个奶头(乳头)都被感染是不常见的。因此，通过将最低电导率奶头与每个其他奶头进行比较得出比率，能够指示一个或多个奶头中存在乳腺炎。这样的测量通常在所谓的机器人挤奶装置中自动收集。当然，可以人工获取奶样品，并逐奶头地评价电导率。
[0435]
在该实例18中，在机器人挤奶装置中获取样品。如表7所示，不仅平均基极电导率随时间降低，而且奶头之间的平均比率也降低。这有力地指示了奶牛乳腺健康的改善，这可
能是由于预防、治疗和/或降低了乳腺炎的发病率。
[0436]
表7
[0437][0438]
在另外的实例19中，评价本公开的组合物(polygain)减少不产奶的母牛甲烷排放的能力。每个奶牛试验组的饲料中包括按干物质计0.5％或1％w/w的polygain。
[0439]
在试验开始时，在约42小时的时间段内定期捕获甲烷浓度。喂食32天后，在约42小时的时间段内再次定期捕获甲烷浓度。
[0440]
0.5％polygain下的试验结果示出于图8中，并且1％polygain下的结果示出于图9中。参考图8，定性地可以看出，0.5％测试组中的甲烷浓度记录了仅大于0.2的四个值。相比之下，在开始时，记录了超过0.2的许多值。
[0441]
参考图9，定性地可以看出，1％测试组中的甲烷浓度未超过0.2。相比之下，在开始时，记录了超过0.2的许多值。
[0442]
因此，该实例19清楚地示出了本公开的组合物的生态失调作用。
[0443]
在另外的实例20中，评价用对照饮食喂食的奶牛和用添加了100g polygain的相同饮食喂食的第二奶牛的粪便的产甲烷古菌种群。
[0444]
实例20的结果描绘于图10中。这些结果示出，对于甲烷杆菌科甲烷短杆菌，该微生物的种群减少约15％，而对于甲烷杆菌科甲烷球形菌，减少约30％。这样的结果有力支持本文公开的其他实例中的发现，即polygain的甲烷减少作用是由于反刍动物的微生物群系中
诱导的变化。特别是生成甲烷的微生物的种群。
[0445]
本领域技术人员应当理解，在不脱离本公开的宽泛范围的情况下，可以对上述实施例进行多种改变和/或修改。因此，本公开的实施例在所有方面都被认为是说明性而非限制性的。

技术特征：
1.一种组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述组合物用于抑制或灭活病毒或预防或治疗受试者体内的病毒感染的用途，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚，并且其中所述用途是通过外用、肺部、呼吸、静脉内或口服途径。2.一种抑制或灭活病毒或预防或治疗受试者体内的病毒感染的方法，所述方法包括通过外用、肺部、呼吸、静脉内或口服途径向所述受试者施用有效量的组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。3.根据权利要求1所述的组合物或根据权利要求2所述的方法，其中所述组合物包括从约0.05重量％至约10重量％的所述提取物。4.根据权利要求3所述的组合物或方法，其中所述组合物包括从约0.05重量％至约5重量％的所述提取物。5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物或方法，其中所述病毒是冠状病毒、流感病毒或黄病毒。6.根据权利要求5所述的组合物或方法，其中所述病毒是sars-cov2、h1n1、猪流感、禽流感、寨卡、登革热、黄热病、亨德拉或西尼罗。7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物或方法，其中所述组合物是外用洗液，优选地为洗手液。8.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物或方法，其中所述组合物是口服制剂，优选地为洗口药、含漱液、饮用液体、胶囊、片剂、锭剂或糖果产品。9.根据权利要求8所述的组合物或方法，其中所述组合物是胶囊。10.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物或方法，其中所述组合物是鼻内喷雾剂。11.一种组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述组合物用于通过抑制或灭活微孢子虫寄生虫来预防或治疗水生动物的用途，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚，并且其中所述用途是通过将所述提取物包括在水生环境中。12.一种抑制或灭活水生动物体内的微孢子虫寄生虫的方法，所述方法包括经由水生环境向所述动物施用有效量的组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。13.一种组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述组合物用于通过抑制或灭活产甲烷菌来治疗动物体内的生态失调的用途，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。14.一种治疗动物体内的生态失调的方法，所述方法包括向所述动物施用有效量的组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。15.一种抑制或灭活脊椎动物和无脊椎动物体内或它们栖息的环境中的原生动物寄生
虫的生命周期的方法，所述方法包括向所述动物施用有效量的组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。16.一种组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述组合物用于抑制或灭活脊椎动物和无脊椎动物体内或它们栖息的环境中的原生动物寄生虫的生命周期的用途，所述提取物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。17.一种调节动物的微生物群系的方法，所述方法包括向所述动物施用有效量的组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。18.一种组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述组合物用于调节动物的微生物群系的用途，所述提取物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。19.一种通过改变与动物相关联的微生物群落的组成来减轻所述动物的温室气体排放的方法，所述方法包括向所述动物施用有效量的组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。20.一种组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述组合物用于通过改变与动物相关联的微生物群落的组成来减轻所述动物的温室气体排放的用途，所述提取物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。21.根据权利要求19所述的方法或根据权利要求20所述的组合物，其中所述动物是反刍动物，并且所述微生物群落在瘤胃中。22.一种用于预防或治疗反刍动物体内的乳腺炎的方法，所述方法包括向所述动物施用有效量的组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。23.一种组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述组合物用于预防或治疗反刍动物体内的乳腺炎的用途，所述提取物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。24.一种组合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约50重量％的源自甘蔗的提取物，所述组合物用于单独或与第二佐剂组合作为佐剂的用途，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。25.一种改善疫苗的免疫应答的方法，所述方法包括在疫苗组合物中包括有效量的组
合物，所述组合物包括从约0.00001重量％至约50重量％的源自甘蔗的提取物，所述提取物包括从约10儿茶素当量(ce)g/l至约50ce g/l的多酚或从约100ce mg/g至约500ce mg/g的多酚。

技术总结
本文公开了用于各种治疗、预防和控制措施的用途的方法和组合物，该组合物包括从约0.00001重量％至约100重量％的源自甘蔗的提取物，治疗、预防和控制措施涉及向受试者施用提取物，该提取物包括从约10儿茶素当量(CE)g/L至约50CE g/L的多酚或从约100CE mg/g至约500CE mg/g的多酚。这些治疗和预防措施包括抗微生物活性，尤其是针对人体内呼吸系统病毒的抗微生物活性，以及治疗微孢子虫感染，诸如虾和对虾体内的EHP。控制措施包括减少反刍动物体内的甲烷生成。这些组合物在例如乳用奶牛中的用途通过使乳腺炎最小化同时提高奶产量来改善奶牛的健康。改善奶牛的健康。


技术研发人员：S
受保护的技术使用者：宝力坚私人投资有限公司
技术研发日：2021.11.23
技术公布日：2023/10/7