一种判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法

1.本发明属于海洋农业中贝类遗传育种技术领域，具体涉及一种判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法。


背景技术：

2.牡蛎是世界上，也是中国产量最大的贝类，中国牡蛎产量约占全世界牡蛎产量的80％，2021年中国牡蛎产量约为582万吨，约占海水养殖贝类产量的38.13％，主要养殖经济种类为太平洋牡蛎、葡萄牙牡蛎和香港牡蛎，具有非常重要的经济价值。牡蛎是一种固着型贝类，从幼虫到成体过程中一般固着在一个地点，因此牡蛎育苗和养殖过程中需要用附着基来牡蛎幼虫的附着。太平洋牡蛎主要养殖在华北地区，主要附着基种类有栉孔扇贝壳、虾夷扇贝壳、牡蛎壳等，但近些年来随着扇贝养殖面积缩小和网络销售，可用的扇贝壳和牡蛎壳越来越少，成本越来越高，水泥制附着基具有成本低、抗风浪、易制作等优点，逐渐受养殖户和育苗场青睐。葡萄牙牡蛎和香港牡蛎主要养殖在广东、广西、福建、海南等华南地区，养殖海域风浪较大，需要抗风浪的附着基，因此水泥饼、水泥绳子结、水泥四方板、水泥条状柱等水泥制附着基已经开始广泛应用。
3.水泥附着基是牡蛎苗种的一种重要附着基，特别是在广东、广西、海南和福建部分海域广受欢迎，其具有成本低、抗风浪、牡蛎附着力强、牡蛎不容易掉落、后期维护成本低、成体时容易敲成单体等优点，但其同样具有水泥制品易返碱引起幼虫难附着、变态率低和附着后死亡率高、幼虫附着后生长慢且不易观察到、难判断幼虫附着密度等缺点。因此，需要对水泥附着基制品和附着程序进行优化。牡蛎苗种繁育过程中，经常遇到投放时间难判断、投放水泥附着基难附着、附着密度不均匀等问题，迫切需要一种能准确判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法。该方法的有效实施可以提高牡蛎幼虫附着效率、降低牡蛎育苗成本和价格、促进牡蛎苗种产业健康可持续发展。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种通过优化水泥制附着基的制备技术和增加浸泡时间、严格筛选眼点幼虫、蚝壳试投来准确判断附苗时间等步骤和方法，准确判断水泥附着基投放时间和显著提高牡蛎幼虫附着效率的方法。
5.本发明采取的技术方案如下：
6.一种判断水泥附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法，包括水泥制附着基制备、浸泡处理及清洗、成熟眼点幼虫筛选、蚝壳试投和投放时机判断、水泥制附着基投放的步骤，具体为：
7.a、水泥制附着基制备、浸泡处理及清洗：按照水泥、细砂、牡蛎壳粉、氧化铁黑质量分数为42.30～47.30％、37.50～45.00％、10.35～12.35％、2.35～2.85％的比例，加入适量水分制备水泥混合物，然后倒入粗糙模具中进行浇筑、风干和成型(不同水泥制附着基模
具不一样)；制备好的水泥制附着基晾干7-10天，挂入水域宽广、流动性大的海水中浸泡3个月，然后捞出放在明亮处暴晒7天，用高压水枪冲洗干净表面附着物待用；
8.b、成熟眼点幼虫筛选：显微镜下观察幼虫发育情况，在20～40％的幼虫出现眼点时，用80目标准筛绢网筛选出眼点幼虫，沥干水分后，称量重量，估计眼点幼虫数量，最后把眼点幼虫放入含新鲜海水的池中；
9.c、蚝壳试投和投放时机判断：选取已经过暴晒并清洗的牡蛎壳，穿成每吊50个壳，在步骤b的眼点幼虫池的四个角落同时分别试投1吊牡蛎壳；20～60分钟后，用手电筒观察牡蛎壳表面已附着的幼虫数量，当60～80％的牡蛎壳表面附着幼虫数量超过40个以上时，此即为投放附着基的最佳时间；
10.d、水泥制附着基投放：在步骤c达到投放最佳时间时，投放步骤a的水泥制附着基，因部分幼虫附着后会变态失败，因此需根据幼虫密度，判断水泥附着基投放数量，按照水泥饼3000～4000个幼虫/吊、水泥绳1500～1800个幼虫/吊、水泥块2000～2500个幼虫/吊、水泥四方板3500～4000个幼虫/板的标准确定投放水泥制附着基(水泥饼/水泥绳/水泥块/水泥四方板)数量。
11.优选，a中氧化铁黑的作用是降低水泥制附着基的颜色，增加附着基的颜色深度，因牡蛎幼虫更喜爱附着黑色物体；加入牡蛎壳粉会提高幼虫附着，牡蛎壳对幼虫附着有诱导作用。
12.优选，a中水泥、细砂、牡蛎壳粉、氧化铁黑的具体比例和牡蛎种类相关，香港牡蛎附着后一般养殖在近岸河口或入海口等低盐海域，而且香港牡蛎幼虫一般附着时间长，因此需提高水泥和牡蛎壳粉的占比。
13.优选，a中使用粗糙模具的原因是增加水泥制附着基的粗糙度，因为牡蛎幼虫更喜爱附着在粗糙物体表面，为了提高附着率。
14.优选，b中不同牡蛎种类筛选眼点幼虫的时机不同，香港牡蛎是低盐种，幼虫附着时间长，需要在约20％出现眼点时筛选最佳；葡萄牙牡蛎是高盐种，幼虫生长较整齐，需要在约30％出现眼点时筛选最佳；太平洋牡蛎是高盐种，幼虫生长个体间有一定差异，需要在40％出现眼点时筛选最佳。
15.优选，b中眼点幼虫筛选后沥干水分，沥干标准为十秒内没有海水滴出；眼点幼虫称重后，数量估计标准为香港牡蛎约3500万个每斤、葡萄牙牡蛎和太平洋牡蛎约3000万个每斤。
16.优选，c中因每批次眼点幼虫种类不同、成熟度不一和水质不同，附着时间有差异且最佳投放指标不同，因此蚝壳试投可能需要多次试投和调整，直至判断出投放附着基的最佳时间。
17.优选，c中选择蚝壳试投的原因是，制备的水泥制附着基颜色较为黯淡，牡蛎幼虫刚附着后很难看清楚密度，给判断幼虫附着时间和附着数量造成很大困难；而蚝壳颜色发白发亮，特别是内面较为干净，牡蛎幼虫附着后能够清晰看到且能准确判断附着密度，可以为后续的判断投放时间提供准确参考。
18.优选，d中水泥制附着基投放时，需按照池子两头同时开始投、池头附着基稀疏、池中间附着基密集的原则投放，双边投和池中间较密集投会提高附着密度均匀性。
19.优选，d中水泥制附着基投放完成后，需在池子上加盖一层黑色遮阳网，可提高附
着效率和均匀度，因眼点幼虫附着时喜爱黑暗环境。
20.经过以上环节，提高了牡蛎幼虫附着效率、准确判断了水泥制附着基的最佳投放时间，此方法缩短了眼点幼虫附着时间、增加了单位附着个数和提高了附着均匀性，具有操作方便、实用性强等的优点。
21.本发明基于牡蛎苗种繁育过程中投放水泥制附着基的时间点难判断、附着密度不均匀、附着基投放数量难判断、附着效率低等育苗产业难点和痛点，改良了水泥制附着基制备、浸泡处理及清洗方法，筛选了眼点幼虫，使用了蚝壳多次试投来确定最佳投放时间，量化了水泥制附着基投放数量和眼点幼虫数量的关系等，能够准确判断水泥制附着基投放时间且提高牡蛎幼虫附着效率。本发明颠覆了传统育苗技术人员通过经验判断投放时间和数量的方法，弥补了新技术人员难判断的缺陷，量化了水泥制附着基投放的具体参数，能够实现快速规模化繁育和附着苗种，提高附着效率，降低了育苗成本和苗种价格，助力提高良种覆盖率和种业振兴。相对于不筛选眼点、不进行蚝壳试投等的传统方法，本发明的幼虫附着完成时间提高了81.60～105.62％、平均附着数量提高了62.14～187.88％、附着均匀度提高了41.25～114.00％，不同牡蛎种类有一定差异，本发明显著提高了幼虫附着效率和附着均匀度，提供了判断投放水泥制附着基投放时间的具体参考指标。
22.本发明具有可操作性强且简便、商业化应用潜力大等优点。
具体实施方式
23.以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
24.实施例1
25.一种判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法，包括以下步骤：
26.a、水泥制附着基制备、浸泡处理及清洗：2020年9月15日，在广西省北海市烟楼制备一批水泥饼附着基，先购买一批120丝黑色胶丝绳和直径为5cm的粗糙圆型模具，绳子裁成180cm长，并把绳子和模具组合，每两个模具间绳子保留20cm，每条绳子放6个模具，绳头保留80cm；按照水泥、细砂、牡蛎壳粉、氧化铁黑质量分数分别为47.30％、37.50％、12.35％、2.85％的比例混匀，并加入适量水拌成泥状，并及时用勺子倒入模具中浇筑成型；制备出的水泥饼，在阳光出暴晒10天，使其充分晾干成型，然后20条绑成一把，搬运至船上，并垂直悬挂在浮排上3个月，浮排所在海域需水域较宽广、流动性较好，充分去除水泥饼碱性；3个月后，把水泥饼捞出放到阳光较好的地方暴晒7天，然后用高压水枪充分清洗水泥饼，然后运输至育苗场。
27.b、成熟眼点幼虫筛选：2021年6月13日，选取一批性腺发育饱满、精子活跃、卵子呈圆形或椭圆形、壳无破损、活力好、口紧的香港牡蛎亲贝，用蚝刀解剖亲贝并显微镜下鉴定雌雄，人工受精，并放入海水中孵化，24小时后筛选d型幼虫，按照常规养殖流程培育幼虫；在显微镜下观察幼虫生长状态，在幼虫约有20％出现眼点时，用200目和80目标准筛绢网收集幼虫，存留在80目上的基本为眼点幼虫；沥干水分直至没有水滴滴出为止，放在电子秤上称量重量，重量约为1斤(按照香港牡蛎眼点幼虫每斤约3500万个)，收集到的约有3500万眼点幼虫，放入装有新鲜海水的40方水泥池中，调高充气量，并适当加投微藻饵料。
28.c、蚝壳试投和投放时机判断：选取已经过暴晒并清洗的牡蛎壳，穿成每吊50个壳，
放入上述水泥池中，分别在4个角落同时投放1吊牡蛎壳，在60分钟后，用手电筒观察4吊牡蛎壳的附苗情况，如果80％的牡蛎壳上附着幼虫数量超过40个时，就已经达到了附着基投放最佳时间；如果没有达到80％，说明还不到最佳投放时间，把牡蛎壳拿出，然后在10小时后，再重新试投蚝壳，反复试投，直至观察到80％的牡蛎壳上附着幼虫数量超过40个。
29.d、水泥制附着基投放：在达到最佳投放时间后，根据步骤b估算的幼虫数量约3500万个，按照4000个幼虫/吊的比例，需投放8750吊水泥饼；投放水泥饼时，需按照水泥池两头同时投放、池中间水泥饼较密集、池头水泥饼较稀疏的原则投放，投放完成后，在池子上方覆盖一层黑色遮阳网，使幼虫尽快附着且附着均匀；附着24小时后，加投微藻饵料，附着完成后撤掉黑色遮阳网。
30.采用本实施例方法与传统方法，香港牡蛎幼虫附着情况见表1。
31.表1.本实施例方法与传统方法的香港牡蛎幼虫附着情况对比
[0032][0033]
实施例2
[0034]
一种判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法，包括以下步骤：
[0035]
a、水泥制附着基制备、浸泡处理及清洗：2020年7月23日，在广东省台山市制备一批水泥绳子结附着基，先购买一批120丝黑色胶丝绳，绳子裁成220cm长，每隔15cm打一个长条形结(每个结长度大概4到5cm)，每条绳子打7个结，绳头保留60cm；按照水泥、细砂、牡蛎壳粉、氧化铁黑质量分数分别为42.30％、45.00％、10.35％、2.35％的比例混匀，并加入适量水拌成泥状，把每个结依次浸入水泥中粘上水泥，反复浸入多次，直至结上粘满水泥；制备出的水泥绳子结，在阳光出暴晒7天，使其充分晾干成型，然后20条绑成一把，300把铁丝绑成一捆，搬运至海边，并堆积在水域较宽广、流动性较好的海域，充分去除水泥饼碱性；3个月后，把水泥绳子结捞出放到阳光较好的地方暴晒7天，然后用高压水枪充分清洗水泥饼，最后运输至育苗场。
[0036]
b、成熟眼点幼虫筛选：2021年4月27日，海上挑选一批性腺发育好、活力好、个体较大的葡萄牙牡蛎亲贝，放入育苗场海水池中促熟3天，用蚝刀解剖亲贝，显微镜下镜检性别，挤取卵子并用筛绢网洗卵，卵子在海水中浸泡至圆形或椭圆形，挑选精子活跃的雄性个体，
人工受精；筛选出d型幼虫，按照常规葡萄牙牡蛎幼虫培育技术体系培育幼虫，在显微镜下观察幼虫生长，在幼虫约有30％出现眼点时，用150目和80目标准筛绢网收集幼虫，80目上的基本为眼点幼虫；沥干水分直至没有水滴滴出为止，放在电子秤上称量重量，重量约为1.2斤，按照葡萄牙牡蛎眼点幼虫每斤约3000万个，所以收集的大约有3600万眼点幼虫，放入装有新鲜海水的40方水泥池中，调高充气量，并适当加投微藻饵料。
[0037]
c、蚝壳试投和投放时机判断：选取已经过暴晒并清洗的牡蛎壳，穿成每吊50个壳，水泥池4个角落同时分别放入1吊牡蛎壳，在20分钟后，用手电筒观察4吊牡蛎壳附苗情况，如果60％的牡蛎壳上附着幼虫数量超过40个时，就已经达到了水泥结附着基投放最佳时间；如果没有达到60％，说明还不到最佳投放时间，把牡蛎壳拿出，在8小时后，再重新试投蚝壳，反复试投，直至观察到60％的牡蛎壳上附着幼虫数量超过40个。
[0038]
d、水泥制附着基投放：在确定好最佳投放时间后，根据步骤b估算的幼虫数量约3600万个，按照1800个幼虫/吊的比例，需投放20000吊水泥绳子结；投放水泥绳子结时，需按照水泥池两头同时开始投放、池中间较密集、池头较稀疏的原则投放，投放完成后，在池子上方覆盖一层黑色遮阳网，使幼虫尽快附着且附着均匀。
[0039]
表2.本实施例方法与传统方法的葡萄牙牡蛎幼虫附着情况对比
[0040][0041][0042]
实施例3
[0043]
一种判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法，包括以下步骤：
[0044]
a、水泥制附着基制备、浸泡处理及清洗：2019年9月14日，在广东省台山市制备一批水泥板附着基，先购买一批白色胶丝和9
×
9粗糙四方模板，胶丝裁成150cm长，两个板之间间距20cm，每条胶丝串7个板，绳头保留50cm；按照水泥、细砂、牡蛎壳粉、氧化铁黑质量分数分别为43.50％、42.65％、11.30％、2.55％的比例混匀，并加入适量水拌成泥状，把水泥倒入粗糙四方模板，浇筑成直径9
×
9cm、厚度约1.5cm的四方水泥板；制备出的四方水泥板，在阳光出暴晒10天，使其充分晾干成型，然后10条绑成一把，300把绑成一捆，搬运至船上，并垂直悬挂在浮排上，浮排需在水域较宽广、流动性较好的海域，充分去除水泥板碱性；3个月后，把水泥板捞出放到阳光较好的地方暴晒7天，然后用高压水枪充分清洗水泥饼，最后运输至育苗场。
[0045]
b、成熟眼点幼虫筛选：2020年3月23日，挑选一批温度梯度法促熟的亲本，亲本需要壳紧、性腺饱满、活力较好，用蚝刀解剖亲本并显微镜检查性别，挑出雌雄同体的个体并
丢弃，挤取卵子并用500目筛绢网洗卵、放入海水中水合卵子直至卵子在海水中浸泡至圆形或椭圆形，挑选出精子较为活跃的雄性个体，进行人工受精；第二天用300目筛绢网筛选出正常d型幼虫，按照常规太平洋牡蛎幼虫培育技术体系培育幼虫；显微镜下观察幼虫生长，在幼虫约有40％出现眼点时，用150目和80目标准筛绢网收集幼虫，80目上的基本为眼点幼虫；沥干水分直至没有水滴滴出为止，放在电子秤上称量重量，重量约为1.4斤，按照太平洋牡蛎眼点幼虫每斤约3000万个，大约有4200万眼点幼虫，放入装有新鲜海水的40方水泥池中，调高充气量，并适当加投微藻饵料。
[0046]
c、蚝壳试投和投放时机判断：选取已经过暴晒并清洗的牡蛎壳，穿成每吊50个壳，在眼点幼虫的水泥池4个角落同时分别放入1吊牡蛎壳，在40分钟后，用手电筒观察4吊牡蛎壳附苗情况，如果70％的牡蛎壳上附着幼虫数量超过40个时，就已经达到了附着基投放最佳时间；如果没有达到70％，说明还不到最佳投放时间，把牡蛎壳拿出，在10小时后，再重新试投蚝壳，反复试投，直至观察到70％的牡蛎壳上附着幼虫数量超过40个。
[0047]
d、水泥制附着基投放：在确定好最佳投放时间后，根据步骤b估算的幼虫数量约4200万个，按照4000个幼虫/板的比例，需投放10500个水泥四方板；投放水泥四方板时，需按照水泥池两头同时开始投放、池中间较密集、池头较稀疏、水泥板之间尽量形成黑暗阴影的原则投放，投放完成后，在池子上方覆盖一层黑色遮阳网，使幼虫尽快附着且附着均匀。
[0048]
表3.本实施例方法与传统方法的太平洋牡蛎幼虫附着情况对比
[0049][0050][0051]
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：a、水泥制附着基制备、浸泡处理及清洗：按照水泥、细砂、牡蛎壳粉、氧化铁黑质量分数为42.30～47.30％、37.50～45.00％、10.35～12.35％、2.35～2.85％的比例，加入适量水分制备水泥混合物，然后倒入粗糙模具中进行浇筑、风干和成型；制备好的水泥制附着基晾干后，挂入水域宽广、流动性大的海水中浸泡，然后捞出放在明亮处暴晒，用高压水枪冲洗干净表面附着物待用；b、成熟眼点幼虫筛选：显微镜下观察幼虫发育情况，在20～40％的幼虫出现眼点时，筛选出眼点幼虫，沥干水分后，称量重量，估计眼点幼虫数量，最后把眼点幼虫放入含新鲜海水的池中；c、蚝壳试投和投放时机判断：在步骤b的眼点幼虫池的四个角落同时分别试投经过暴晒并清洗的牡蛎壳；20～60分钟后，用手电筒观察牡蛎壳表面已附着的幼虫数量，判断投放附着基的最佳时间；d、水泥制附着基投放：在步骤c达到投放最佳时间时，投放步骤a的水泥制附着基，根据幼虫密度确定水泥制附着基投放数量，按照水泥饼3000～4000个幼虫/吊、水泥绳1500～1800个幼虫/吊、水泥块2000～2500个幼虫/吊、水泥四方板3500～4000个幼虫/板的标准确定投放水泥制附着基数量。2.根据权利要求1所述的判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法，其特征在于，步骤a中，所述的晾干是晾干7-10天；所述的浸泡是浸泡3个月；所述的暴晒是暴晒7天。3.根据权利要求1所述的判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法，其特征在于，步骤b中，所述的筛选出眼点幼虫是用80目标准筛绢网筛选出眼点幼虫。4.根据权利要求1所述的判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法，其特征在于，步骤c中，所述的牡蛎壳在投放前穿成每吊50个壳，在眼点幼虫池的四个角落同时分别试投1吊牡蛎壳。5.根据权利要求1所述的判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法，其特征在于，步骤c中，所述的判断投放附着基的最佳时间的标准是：当60～80％的牡蛎壳表面附着幼虫数量超过40个以上时，此即为投放附着基的最佳时间。6.根据权利要求1所述的判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法，其特征在于，步骤d中，水泥制附着基投放时，需按照池子两头同时开始投、池头附着基稀疏、池中间附着基密集的原则投放。7.根据权利要求1所述的判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法，其特征在于，步骤d中，水泥制附着基投放完成后，需在池子上加盖一层黑色遮阳网。

技术总结
本发明公开了一种判断水泥制附着基投放时间和提高牡蛎幼虫附着效率的方法。该方法包括水泥制附着基制备、浸泡处理及清洗、成熟眼点幼虫筛选、蚝壳试投和投放时机判断、水泥制附着基投放的步骤。相对于传统方法，采用本发明可以显著提高幼虫附着效率和附着均匀性，并能够准确量化判断水泥制附着基投放最佳时间。能够准确量化判断水泥制附着基投放最佳时间。


技术研发人员：秦艳平 张跃环 马海涛 李军 喻子牛 石功鹏阳 万韦韬
受保护的技术使用者：中国科学院南海海洋研究所
技术研发日：2023.02.22
技术公布日：2023/7/11