一种用于唾液胰岛素检测的采样和检测一体化结构的制作方法

1.本发明涉及医疗器械技术领域，尤其涉及一种用于唾液胰岛素检测的采样和检测一体化结构。


背景技术：

2.胰岛素是人体一种重要蛋白质激素，是由胰岛β细胞分泌，具有促进人体合成代谢，对糖、脂和蛋白质代谢均有重要的调节作用。临床上它有降低血糖的功效，除了作为人体体内源性激素外，胰岛素同时也作为一种降糖药物被广泛使用。因此测量人体体内的胰岛素含量对于疾病诊断治疗和药物使用都是十分有必要的。目前临床采用血液样本进行人体胰岛素水平的临床检测，从采样、检测到结果判读均在医疗机构的检验室或临床检验机构的检验室由专业人员操作完成，所采用的测定方法主要包括两大类，免疫测定方法和非免疫检测方法，其中免疫检测方法包括放射免疫法、酶联免疫法和化学发光免疫法，非免疫检测法主要包括同位素稀释法以及高效液相色谱法。免疫学检测方法是利用蛋白质的抗原抗体反应原理进行的，目前临床上最常用的是电化学发光免疫法，在临床上，通过测定患者空腹以及餐后各个时点的胰岛素分泌水平以及曲线，了解患者胰岛的功能协助判断糖尿病的临床分型。这些检测均无法向家庭和缺乏相应检测条件的医疗机构推广使用。唾液中胰岛素水平的研究已有大量的报道，并且与血液胰岛素水平均有明确的相关性，血液胰岛素的调节变化，如空腹、食物、药物等影响的血液浓度变化也直接表现在唾液中。大量的研究证明，胰岛素已经成为直接影响包括糖尿病、高血压、冠心病在内的各种代谢相关疾病及不良健康状态的蛋白质激素及重要的调节标志物，适用于各种院内和院外的疾病及健康状态检测，因此，开发可用于居家自测和缺乏相应检测条件的医疗机构检测使用，同时又具有操作简便、使用快捷、成本低廉的唾液胰岛素水平快速检测技术，利于提高医疗质量和效率，具有重要的临床意义和应用价值。


技术实现要素：

3.本发明的目的是提供一种用于唾液胰岛素检测的采样和检测一体化结构，与现有技术比较，具有检测操作方便、快速、成本低等优点，提高了检测质量。
4.针对上述目的，本发明提供的一种用于唾液胰岛素检测的采样和检测一体化结构,其特征在于：所述一体化结构包括唾液采样头、唾液检测试剂条和唾液检测外壳，相互之间为直接连接的一体化结构；所述唾液检测试剂条包括样本垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸垫；所述标记物结合垫上包被有由指示剂标记的第一抗胰岛素抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有非标记的第二抗胰岛素抗体；所述一体化结构的内部为以所述唾液采样头、样本垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸垫的顺序直接连接的条状结构；所述唾液检测外壳设置于所述唾液检测试剂条的外侧，包括检测外壳上盖和检测外壳下盖，所述唾液检测外壳上盖设有观察窗，所述唾液检测外壳的近端的前端设置有采样头开口；所述唾液采样头为采样拭子样结构，所述唾液采样头的近端部分暴露于所述唾液检测外壳的
外部，经所述采样头开口伸入至所述唾液检测外壳的内部，其远端部分通过所述样本垫与所述唾液检测试剂条直接接触连接。
5.上述一体化结构中，所述唾液采样头与所述唾液检测试剂条之间的直接接触连接选择粘贴式，所述粘贴式采用所述唾液采样头与所述唾液检测试剂条共同粘贴在同一支撑底片上，粘贴的顺序为唾液采样头、样本垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸垫，其中唾液采样头的远端部分与样本垫连接，唾液采样头的近端部分从支撑底片伸出且游离于支撑底片，所述采样头开口位于所述唾液检测外壳近端的前端，所述唾液采样头近端的游离部分经所述采样头开口伸出，形成暴露于所述唾液检测外壳外部的采样拭子样结构。
6.上述一体化结构中，所述唾液采样头与所述唾液检测试剂条之间的直接接触连接选择插入式，所述插入式采用的所述唾液检测试剂条包括样本垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸垫以及支撑底片，放置于所述唾液检测外壳内，所述采样头开口设置于所述唾液检测外壳近端的前端，所述采样头开口至所述唾液检测试剂条的样本垫之间设置有相对于样本垫的上下间距逐渐靠近的带有斜面的插入通道，所述唾液采样头经所述采样头开口插入，通过所述插入通道的挤压与样本垫形成直接接触连接，所述唾液采样头的近端形成暴露于所述唾液检测外壳外部的采样拭子样结构，直接采样。
7.上述一体化结构中，所述唾液采样头与所述唾液检测试剂条之间的直接接触连接选择挤压式，所述挤压式采用的所述唾液检测试剂条包括样本垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸垫以及支撑底片，设置于所述检测外壳下盖上侧，所述唾液采样头的远端部分设置于样本垫上，近端部分经所述采样头开口设置于唾液检测外壳的外部，所述检测外壳上盖以扣压形式设置于所述唾液采样头和唾液检测试剂条的上侧，形成所述唾液采样头的近端部分暴露于唾液检测外壳的外部，而其远端部分和唾液检测试剂条之间通过直接接触连接并设置于所述唾液检测外壳内部的一体化结构。
8.上述一体化结构中，所述唾液采样头为含有内芯的外侧包裹设置有柔性吸水材料的棒状结构。所述柔性吸水材料选择海绵类制品，例如聚氨酯海绵。
9.上述一体化结构中，所述唾液采样头为硬质吸水材料的片状结构。所述硬质吸水材料包括吸水后不变形的吸水材料和吸水后由硬质变为软质的吸水材料。吸水材料包括天然及改性高分子高吸水性树脂和人工合成吸水性树脂。吸水后不变形的吸水材料，例如聚酯纤维。所述吸水后由硬质变为软质的吸水材料选择海绵制品、聚乙烯醇制品等。聚乙烯醇（pva)吸水海绵不仅具有优良的化学稳定性、吸水功能和优质物理性能，同时具有吸水速率快、吸液倍率高、吸水后柔软等特点，在日用清洁、医疗卫生等领域广泛使用。
10.上述一体化结构中，所述唾液检测外壳的近端的唾液采样头一侧设置有帽状的保护套。
11.上述一体化结构中，所述唾液检测试剂条为胶体金免疫检测试剂条、荧光免疫检测试剂条、彩色乳胶微球免疫检测试剂条的至少一种，所述指示剂为胶体金微粒、彩色乳胶微球和荧光微球的至少一种。
12.上述一体化结构中，所述一体化结构配置有与所述指示剂颜色一致的半定量比色卡，所述比色卡上印制有3个及以上的不同颜色深度的比色条带。
13.上述一体化结构中，所述一体化结构配置有便携式的定量检测仪，包括色度定量分析仪和荧光定量分析仪的至少一种。
14.上述一体化结构中，所述一体化结构的操作使用，包括如下步骤：1）取出采样和检测一体化结构；2）手持采样和检测一体化结构，将唾液采样头一侧放入口腔内采集唾液；3）唾液样本经唾液采样头、唾液检测试剂条的样本垫，向前流经标记物结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；4）从观察窗口读取检测结果，完成检测。本发明由于采取以上技术方案，其具有以下优点：1、本发明为一种用于唾液胰岛素检测的采样和检测一体化结构，将唾液采样头、唾液检测试剂条和唾液检测外壳相互合为一体，唾液采样头和唾液检测试剂条形成直接连接的条状结构，设置于唾液检测外壳内，将唾液采样头置于口腔内，可以直接采样，进行人体唾液胰岛素水平的检测，一步法完成，不需要先采样，再进行检测，不仅使用方便，而且使用者接受度高，这样可以显著提高临床使用的可行性，提高检测效果。
15.2、本发明唾液采样头与所述唾液检测试剂条之间的直接接触连接采用粘贴式结构，使唾液采样头和唾液检测试剂条在制备的过程中就形成一体化结构，制备过程简单化，可有效提高制备效率。
16.3、本发明唾液采样头与所述唾液检测试剂条之间的直接接触连接采用插入式结构，保留了市场通用的快速检测试剂盒的制备组装特点，在完成检测试剂盒组装后，采用插入的方式加装唾液采样头，使一体化结构的制备操作过程既可控又便捷， 提高制备效率。
17.4、本发明采用唾液采样头为有内芯的外侧包裹设置有柔性吸水材料外层的棒状结构，近端为游离端用于采样，远端与唾液检测试剂条密切接触连接。当唾液采样头置于口腔部位采集唾液样本，吸水材料外层可以迅速吸收唾液样本并被浸透（泡），唾液样本沿着吸水材料外层迁移扩散至唾液检测试剂条，启动检测反应，使采样和检测的全过程一步性完成，实现了技术产品的便捷和快速的可操作性。
18.5、本发明采用唾液采样头为不设有内芯的硬质吸水材料的片状结构，近端为游离端用于采样，远端与唾液检测试剂条密切接触连接。当唾液采样头置于口腔部位采集唾液样本，吸水性的唾液采样头直接迅速吸收唾液样本并被浸透（泡），并向远端迁移扩散至唾液检测试剂条，启动检测反应，使采样和检测的全过程也是一步性完成，实现了技术产品的便捷和快速的可操作性。
19.6、本发明设置了用于半定量检测的检测条带颜色强度的比色卡，可以通过比色卡比对进行检测结果的半定量判断，适用于不需要精准定量，只需观察唾液胰岛素水平变化趋势的临床应用场景，提高了临床应用价值。
附图说明
20.图1为本发明的整体结构示意图；图2为本发明的整体结构纵切面示意图；图3为本发明的外部包裹柔性唾液采样头结构示意图；图4为本发明的硬质片状唾液采样头结构示意图；图5为本发明的粘贴式直接接触连接结构示意图；图6为本发明的粘贴式直接接触连接在一体结构中的结构示意图；
图7为本发明的插入式直接接触连接结构示意图；图8为本发明的插入式直接接触连接在一体结构中的结构示意图；图9为本发明的挤压式直接接触连接结构示意图；图10为本发明的挤压式直接接触连接在一体结构中的结构示意图；图11为本发明的唾液采样头保护套结构示意图；图12为本发明的整体结构的外观结构示意图；图13为本发明的半定量比色结构示意图。图中标记如下：唾液采样头1；唾液检测试剂条2；唾液检测外壳3；检测外壳上盖4；检测外壳下盖5；观察窗6；唾液采样头近端7；唾液采样头远端8；样本垫9；标记物结合垫10；硝酸纤维素膜11；吸水垫12；支撑底片13；检测线14；质控线15；采样头开口16；包裹式采样头近端17；包裹式采样头远端18；采样头内芯19；硬质采样头近端20；硬质采样头远端21；粘贴式检测外壳上盖23；粘贴式检测外壳下盖24；粘贴式采样头开口25；粘贴式唾液采样头近端27；粘贴式唾液采样头远端28；插入式检测外壳上盖31；插入式检测外壳下盖32；插入式采样头开口33；插入式插入面34；插入式上挤压斜面36；插入式插入通道38；插入式唾液采样头近端39；插入式唾液采样头远端40；挤压式唾液采样头近端50；挤压式唾液采样头远端51；挤压式采样头开口52；挤压式检测外壳上盖54；挤压式检测外壳下盖55；保护套60；保护套体61；保护套开口62；保护套内腔63；半定量比色卡70。
实施方式
21.为更进一步阐述本发明为达成预定目的所采取的技术手段及功效，以下所述实施例结合附图对本发明进行进一步说明，但本发明并不局限于以下说明。
22.如图1、图2所示，本发明整体结构为一种一体化结构，包括唾液采样头1、唾液检测试剂条2和唾液检测外壳3。唾液采样头1位于一体化结构的近端部位包括唾液采样头近端7和唾液采样头远端8，外侧为唾液检测外壳3，包括检测外壳上盖4和检测外壳下盖5，检测外壳上盖4设置有观察检测结果的观察窗6，检测外壳下盖5设置有唾液检测试剂条2，检测外壳前端设有采样头开口16。唾液检测试剂条2包括样本垫9、标记物结合垫10、硝酸纤维素膜11和吸水垫12，依次排列设置于支撑底片13上，标记物结合垫10上喷置包被有由指示剂标记的第一抗胰岛素抗体作为检测指示剂，指示剂常用胶体金颗粒、彩色乳胶微球和荧光微球，硝酸纤维素膜11上包被有非标记的第二抗胰岛素抗体作为检测线14，同时还包被有非标记的非胰岛素特异性结合的抗体，如羊抗鼠igg，作为质控线15。唾液采样头近端7位于唾液检测外壳3的前端外部，唾液采样头远端8位于唾液检测外壳3的前端内部，并与样本垫9叠加接触连接，形成以唾液采样头近端7为唾液采样拭子头样游离结构的一体化唾液检测结构。
23.使用时，将唾液采样头1的唾液采样头近端7放入口腔内，唾液样本经唾液采样头近端7、唾液采样头远端8和样本垫9，流经标记物结合垫10，样本中的胰岛素与指示剂标记的第一抗胰岛素抗体结合，形成指示剂标记第一抗胰岛素抗体与胰岛素结合的第一复合物，流经硝酸纤维素膜11，被包被于硝酸纤维素膜11上的非标记的第二抗胰岛素抗体所捕获，形成指示剂标记第一抗胰岛素抗体、胰岛素以及第二抗胰岛素抗体结合的第二复合物，
被固定聚集于硝酸纤维素膜11上并显色，形成显色或荧光显色的检测线14；未被结合的第一复合物，向前流经非标记的羊抗鼠igg所捕获，形成指示剂标记第一抗胰岛素抗体与羊抗鼠igg结合物，被固定聚集于硝酸纤维素膜11上并显色，形成显色或荧光显色的质控线15，通过观察窗6观察检测结果，此时检测线14的显色深度与样本中的胰岛素含量成正比，进而完成唾液胰岛素水平检测。
24.如图3、图4所示，本发明一体化结构中唾液采样头含有有内芯的外侧包裹设置有柔性吸水材料的棒状结构和没有内芯的完全为硬质吸水材料的片状结构。柔性吸水材料的棒状结构由组成包裹式采样头近端17、包裹式采样头远端18和采样头内芯19。硬质吸水材料的片状结构由硬质采样头近端20和硬质采样头远端21组成。
25.如图5、图6所示，本发明一体化结构中唾液采样头与样本垫的连接结构为粘贴式结构（下述部件名称省略粘贴式），其中的唾液采样头1和唾液检测试剂条2的样本垫9、标记物结合垫10、硝酸纤维素膜11和吸水垫12，均依次排列粘贴于支撑底片13上，制备形成包含有唾液采样头的检测试剂条整合结构。唾液检测外壳3包括检测外壳上盖23和检测外壳下盖24，在前端设置有采样头开口25。组装时，将唾液检测试剂条整合结构整体放置于检测外壳下盖24上，再加盖检测外壳上盖23，此时唾液采样头近端27位于唾液检测外壳3的前端外部，唾液采样头远端28位于唾液检测外壳3的前端内部，并与样本垫9叠加接触连接，形成以唾液采样头近端27为唾液采样拭子头样游离结构的一体化唾液检测结构。使用时，手持唾液检测外壳3，将唾液采样头1的唾液采样头近端27放入口腔内，唾液样本经唾液采样头近端27、唾液采样头远端28，流经样本垫9，启动检测反应并完成检测过程。
26.如图7、图8所示，本发明一体化结构中唾液采样头与样本垫的连接结构为插入式结构（下述部件名称省略插入式），其中的唾液采样头1与唾液检测外壳3为相互插入式结构，所述插入式结构采用的唾液检测试剂条2包括样本垫9、标记物结合垫10、硝酸纤维素膜11和吸水垫12，均依次排列粘贴于支撑底片13上，放置于唾液检测外壳3内；唾液采样头1包括唾液采样头近端39和唾液采样头远端40，唾液检测外壳3包括检测外壳上盖31和检测外壳下盖32，组装完成后，唾液采样头远端40经采样头开口33处插入，制成一体化结构。采样头开口33设置于唾液检测外壳3近端的前端，采样头开口33至唾液检测试剂条2的样本垫9之间设置有上下间距逐渐缩小的带有斜面，即插入斜面34，的插入通道38，唾液采样头远端40经采样头开口33和插入斜面34插入，通过插入通道38的挤压与样本垫9形成直接接触连接，唾液采样头的游离端，即唾液采样头近端39，形成暴露于唾液检测外壳3外部的采样拭子样结构，直接采样。使用时，手持唾液检测外壳3，将唾液采样头1的唾液采样头近端39放入口腔内，唾液样本经唾液采样头近端39、唾液采样头远端40，流经样本垫9，启动检测反应并完成检测过程。
27.如图9、图10所示，本发明一体化结构中唾液采样头与样本垫的连接结构为挤压式结构（下述部件名称省略挤压式），其中唾液采样头1包括唾液采样头近端50和唾液采样头远端51，唾液检测试剂条2的样本垫9、标记物结合垫10、硝酸纤维素膜11和吸水垫12，均依次排列设置于支撑底片13上，然后放置于唾液检测外壳3的检测外壳上盖54上；唾液采样头1以唾液采样头近端50在外侧和唾液采样头远端51在内侧的方向，向样本垫9以叠加直接接触安置，然后安置检测外壳下盖55，此时唾液采样头近端50位于唾液检测外壳3的前端外部，唾液采样头远端51位于唾液检测外壳3的前端内部，并与样本垫9叠加接触连接，形成以
唾液采样头近端50为唾液采样拭子头样游离结构的一体化唾液检测结构。使用时，手持唾液检测外壳3，将唾液采样头1的唾液采样头近端50放入口腔内，唾液样本经唾液采样头近端50、唾液采样头远端51，流经样本垫9，启动检测反应并完成检测过程。
28.如图11所示，本发明一体化结构的保护套结构，底部密封，呈一端开口的腔状结构，包括保护套体61、保护套开口62和保护套内腔63，插盖至唾液检测外壳的唾液采样头一端，保护唾液采样头。
29.如图12所示，本发明一体化结构的整体结构的外观结构，包括保护套60、唾液采样头1、采样头开口16、唾液检测外壳3、观察窗6、唾液检测试剂条2和检测外壳上盖4及检测外壳下盖5，其中保护套60可以盖上或摘开。
30.如图13所示，本发明的半定量比色卡为采用唾液样本配制的不同浓度的胰岛素溶液，直接滴加不同浓度的胰岛素溶液至层析检测结构加样窗，观察检测线的颜色深度，拍照，依此拍照结果设计并打印对应相应浓度的半定量比色卡，作为后续唾液样本半定量检测结果判读的对比依据。举例如下：在使用时，采用新鲜唾液配置1、5、10、15、20、25、30 uiu/ml的胰岛素溶液。取不同浓度胰岛素溶液，直接滴加至层析检测结构加样窗，静置，观察检测线的颜色深度，拍照，依此拍照结果设计并打印半定量比色卡70，作为后续唾液样本半定量检测结果判读的对比依据。
31.这样在实际操作时，当本发明一体化结构为胶体金免疫检测结构时，唾液检测试剂条用胶体金法制备，在支撑底片上依次粘贴有样本垫、包被有胶体金标记第一抗胰岛素抗体的胶体金结合垫、包被有非标记第二抗胰岛素抗体的硝酸纤维素膜和吸水垫；当本发明一体化结构为彩色乳胶微球免疫检测结构时，唾液检测试剂条用彩色乳胶微球免疫法制备，在支撑底片上依次粘贴有样本垫、包被有彩色乳胶微球标记物的乳彩色胶微球结合垫、包被有非标记捕获试剂的硝酸纤维素膜和吸水垫；当本发明一体化结构为荧光免疫检测结构时，唾液检测试剂条用荧光免疫法以荧光微球或荧光素为指示剂进行制备，在支撑底片上依次粘贴有样本垫、包被有荧光标记物的荧光标记物结合垫、包被有非标记捕获试剂的硝酸纤维素膜和吸水垫。
32.半定量检测具体操作包括如下步骤：1）取出采样和检测一体化结构；2）手持一体化结构，将唾液采样头一侧放入口腔内采集唾液；3）唾液样本经唾液采样头、唾液检测试剂条的样本垫，向前流经标记物结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；4）从观察窗口读取检测结果，与半定量比色卡比对检测线的颜色深度，读取半定量范围值，完成检测。
33.定量检测具体操作包括如下步骤：1）取出采样和检测一体化结构；2）手持采样和检测一体化结构，将唾液采样头一侧放入口腔内采集唾液；3）唾液样本经唾液采样头、唾液检测试剂条的样本垫，向前流经标记物结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；4）将层析检测结构置于定量检测仪，读取检测结果，定量计算测定值，完成检测。
34.本发明的实验研究：下述实验说明本发明的检测方法及其效果，但不是对本发明的限定。下述实验中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
35.实验一：免疫胶体金法唾液胰岛素快速检测实验：一、唾液检测试剂条制备：采用常规免疫胶体金检测技术双抗体夹心法制备唾液检测试剂条，采用本发明一
体化结构制备检测试剂盒进行胰岛素检测实验，其中唾液检测试剂条的检测线t的胶体金标记指示剂的抗体为10ug/ml的第一抗胰岛素单克隆抗体，胶体金溶液的胶体金颗粒粒径在50nm左右，标记后的胶体金溶液包被在玻璃纤维素膜胶体金结合垫上；唾液检测试剂条的检测线t的捕获抗体为配对的非标记的第二抗胰岛素单克隆抗体，包被浓度为1.0mg/ml，包被在硝酸纤维素膜上；唾液检测试剂条的质控线c的捕获抗体为1.0mg/ml的羊抗鼠igg多克隆抗体，包被在硝酸纤维素膜上，用于捕获未被特异性捕获的胶体金标记的第一抗胰岛素单克隆抗体。在硝酸纤维素膜印膜两端分别粘贴吸水垫及胶体金标记结合垫，在胶体金标记结合垫一侧粘贴样本垫。置粘贴好的检测片于切条机上，切成 3.5mm的唾液检测试剂条。
36.二、本发明一体化结构制备：采用solidworks设计本发明的唾液检测外壳的上盖和底座并用3d打印样品，采用粘贴式连接制备唾液胰岛素采样检测一体化结构用于实验检测。印制不同颜色深度的红色比色卡。
37.三、实验方法及结果：实验时取上述制备的唾液检测试剂条和唾液检测结构外壳，装配成一体化结构，将装配好的一体化结构放入有干燥剂的铝箔密封袋内，在封口机上封口，加贴标签。用10mm的磷酸缓冲盐溶液配置5、10、20、40、80 uiu/ml的长秀霖重组甘精胰岛素注射液（100 iu/ml）。取配置好的长秀霖重组甘精胰岛素溶液120ul，直接放置一体化结构唾液采样头至不同浓度的胰岛素溶液中，待液相出现在观察窗，放平静置15分钟，经观察窗查看检测线的颜色深度，拍照，印制5个不同颜色深度的紫红色比色卡，为半定量比色卡。
38.用制备的一体化结构样品分别检测10例健康捐献者的空腹和餐后1小时唾液样本，静置15分钟，经观察窗查看检测线的颜色深度，与半定量比色卡比色，判断比色结果的浓度范围，结果空腹在5-20uu/ml左右，餐后1小时在20-40uu/ml左右，符合正常人检测范围。实验二：彩色乳胶微球免疫层析法胰岛素快速检测实验：一、唾液检测试剂条制备：采用常规彩色乳胶微球免疫层析技术双抗体夹心法制备唾液检测试剂条，采用本发明一体化结构制备检测试剂盒进行胰岛素检测实验，其中彩色乳胶微球采用度生物300nm红色微球，唾液检测试剂条的检测线t的乳胶微球标记指示抗体为50ug/ml的第一抗胰岛素单克隆抗体，标记后的乳胶微球标记液包被在玻璃纤维素膜结合垫上；唾液检测试剂条的检测线t的捕获抗体为配对的非标记第二抗胰岛素单克隆抗体，包被浓度为1.0mg/ml包被在硝酸纤维素膜上；唾液检测试剂条的质控线c的捕获抗体为1.0mg/ml的羊抗鼠igg多克隆抗体，包被在硝酸纤维素膜上，用于捕获未被特异性捕获的彩色乳胶微球标记抗胰岛素单克隆抗体。在硝酸纤维素膜印膜两端分别粘贴吸水垫及乳胶微球标记结合垫，在乳胶微球标记结合垫的另一侧粘贴样本垫。置粘贴好的检测片于切条机上，切成 3.5mm的唾液检测试剂条。
39.二、本发明一体化结构制备：同实验一“二”制备。
40.三、实验方法及结果：
实验时取上述制备的唾液检测试剂条和唾液检测外壳，装配成一体化的检测结构，将装配好的检测结构放入有干燥剂的铝箔密封袋内，在封口机上封口，加贴标签。用10mm的磷酸缓冲盐溶液配置5、10、20、40、80 uiu/ml的长秀霖重组甘精胰岛素注射液（100 iu/ml）。取配置好的长秀霖重组甘精胰岛素溶液120ul，直接放置一体化结构唾液采样头至不同浓度的胰岛素溶液中，待液相出现在观察窗，放平静置15分钟，经观察窗查看检测线的颜色深度，拍照，印制7个不同颜色深度的红色比色卡，为半定量比色卡。
41.用制备的一体化结构样品分别检测10例健康捐献者的空腹和餐后1小时唾液样本，静置15分钟，经观察窗查看检测线的颜色深度，与半定量比色卡比色，判断比色结果的浓度范围，结果空腹在5-20uu/ml左右，餐后1小时在10-80uu/ml左右，符合正常人检测范围。实验三：免疫荧光法胰岛素快速检测实验：一、唾液检测试剂条制备：采用常规免疫荧光检测技术双抗体夹心法制备唾液检测试剂条，采用本发明一体化结构制备检测试剂盒进行胰岛素检测实验，其中唾液检测试剂条的荧光微球标记抗体采用30ug/ml的第一抗胰岛素单克隆抗体，荧光微球采用度生物公司粒径300nm荧光微球，标记抗体荧光微球液包被在玻璃纤维素膜标记物结合垫上；唾液检测试剂条的捕获抗体为1.0mg/ml的配对的非标记的第二抗胰岛素单克隆抗体，包被在硝酸纤维素膜上；唾液检测试剂条的质控线c的捕获抗体为1.0mg/ml的羊抗鼠igg多克隆抗体，包被在硝酸纤维素膜上，用于捕获未被特异性捕获的荧光微球标记第一抗胰岛素单克隆抗体。在硝酸纤维素膜印膜两端分别粘贴吸水纸膜垫及荧光微球标记结合膜垫，在结合膜垫的另一侧粘贴样品垫。置粘贴好的检测片于切条机上，切成 3.5mm试纸条。
42.二、本发明一体化结构制备：同实验一“二”制备。
43.三、荧光检测器：采用市售的蓝勃afs-100荧光检测仪。
44.四、实验方法及结果：实验时取上述制备的唾液检测试剂条和唾液检测外壳，装配成一体化的检测试剂盒，将装配的检测试剂盒放入有干燥剂的铝珀密封袋内，在封口机上封口，加贴标签。同前，用10mm的磷酸缓冲盐溶液配置5、10、20、40、80 uiu/ml的长秀霖重组甘精胰岛素注射液（100 iu/ml），用制备的检测试剂盒和荧光定量分析仪建立长秀霖重组甘精胰岛素浓度与荧光反应的标准曲线。用制备的一体化的检测试剂盒分别检测10例健康捐献者的空腹和餐后1小时唾液样本，静置15分钟，置于荧光定量分析仪检测荧光值并经标准曲线计算唾液样本胰岛素浓度，结果空腹在12.67
ꢀ±ꢀ
3.19uiu/ml，餐后1小时在38.22
ꢀ±ꢀ
7.83uiu/ml，符合正常人检测范围。

技术特征：
1.一种用于唾液胰岛素检测的采样和检测一体化结构,其特征在于：所述一体化结构包括唾液采样头、唾液检测试剂条和唾液检测外壳，相互之间为直接连接的一体化结构；所述唾液检测试剂条包括样本垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸垫；所述标记物结合垫上包被有由指示剂标记的第一抗胰岛素抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有非标记的第二抗胰岛素抗体；所述一体化结构的内部为以所述唾液采样头、样本垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸垫的顺序直接连接的条状结构；所述唾液检测外壳设置于所述唾液检测试剂条的外侧，包括检测外壳上盖和检测外壳下盖，所述唾液检测外壳上盖设有观察窗，所述唾液检测外壳的近端的前端设置有采样头开口；所述唾液采样头为采样拭子样结构，所述唾液采样头的近端部分暴露于所述唾液检测外壳的外部，经所述采样头开口伸入至所述唾液检测外壳的内部，其远端部分通过所述样本垫与所述唾液检测试剂条直接接触连接。2.如权利要求1所述一体化结构，其特征在于，所述唾液采样头与所述唾液检测试剂条之间的直接接触连接选择粘贴式，所述粘贴式采用所述唾液采样头与所述唾液检测试剂条共同粘贴在同一支撑底片上，粘贴的顺序为唾液采样头、样本垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸垫，其中唾液采样头的远端部分与样本垫连接，唾液采样头的近端部分从支撑底片伸出且游离于支撑底片，所述采样头开口位于所述唾液检测外壳近端的前端，所述唾液采样头近端的游离部分经所述采样头开口伸出，形成暴露于所述唾液检测外壳外部的采样拭子样结构。3.如权利要求1所述一体化结构，其特征在于，所述唾液采样头与所述唾液检测试剂条之间的直接接触连接选择插入式，所述插入式采用的所述唾液检测试剂条包括样本垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸垫以及支撑底片，放置于所述唾液检测外壳内，所述采样头开口设置于所述唾液检测外壳近端的前端，所述采样头开口至所述唾液检测试剂条的样本垫之间设置有相对于样本垫的上下间距逐渐靠近的带有斜面的插入通道，所述唾液采样头经所述采样头开口插入，通过所述插入通道的挤压与样本垫形成直接接触连接，所述唾液采样头的近端形成暴露于所述唾液检测外壳外部的采样拭子样结构，直接采样。4.如权利要求1所述一体化结构，其特征在于，所述唾液采样头与所述唾液检测试剂条之间的直接接触连接选择挤压式，所述挤压式采用的所述唾液检测试剂条包括样本垫、标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸垫以及支撑底片，设置于所述检测外壳下盖上侧，所述唾液采样头的远端部分设置于样本垫上，近端部分经所述采样头开口设置于唾液检测外壳的外部，所述检测外壳上盖以扣压形式设置于所述唾液采样头和唾液检测试剂条的上侧，形成所述唾液采样头的近端部分暴露于唾液检测外壳的外部，而其远端部分和唾液检测试剂条之间通过直接接触连接并设置于所述唾液检测外壳内部的一体化结构。5.如权利要求1所述一体化结构，其特征在于，所述唾液采样头为含有内芯的外侧包裹设置有柔性吸水材料的棒状结构。6.如权利要求1所述一体化结构，其特征在于，所述唾液采样头为硬质吸水材料的片状结构。7.如权利要求1所述一体化结构，其特征在于，所述唾液检测外壳的近端的唾液采样头一侧设置有帽状的保护套。8.如权利要求1所述一体化结构，其特征在于，所述唾液检测试剂条为胶体金免疫检测试剂条、荧光免疫检测试剂条、彩色乳胶微球免疫检测试剂条的至少一种，所述指示剂为胶
体金微粒、彩色乳胶微球和荧光微球的至少一种。9.如权利要求1所述一体化结构，其特征在于，所述一体化结构配置有与所述指示剂颜色一致的半定量比色卡，所述比色卡上印制有3个及以上的不同颜色深度的比色条带。10.如权利要求1所述一体化结构，其特征在于，所述一体化结构配置有便携式的定量检测仪，包括色度定量分析仪和荧光定量分析仪的至少一种。

技术总结
本发明公开了一种用于唾液胰岛素检测的采样和检测一体化结构，包括唾液采样头、唾液检测试剂条和唾液检测外壳，相互之间为直接连接的一体化结构，所述唾液检测试剂条上包被有由指示剂标记的第一抗胰岛素抗体和非标记的第二抗胰岛素抗体，所述唾液采样头为采样拭子样结构，其近端部分暴露于所述唾液检测外壳的外部，经所述采样头开口伸入至所述唾液检测外壳的内部，其远端部分通过唾液检测试剂条的样本垫与唾液检测试剂条直接接触连接，适用于唾液样本的胰岛素水平的测定，提高了检测效率、便捷性和准确性，具有重要的临床意义。具有重要的临床意义。具有重要的临床意义。


技术研发人员：刘默文
受保护的技术使用者：嘉兴康源科泰科技发展有限公司
技术研发日：2023.05.28
技术公布日：2023/7/21