益生元口腔护理组合物和方法

益生元口腔护理组合物和方法
1.领域
2.本领域涉及增强有益口腔细菌和减少有害口腔细菌的方法，该方法包括施用口腔护理组合物，所述口腔护理组合物包含糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖的糖；以及用于此类方法的口腔护理组合物。本领域还涉及使用益生元口腔护理组合物的方法、筛选方法和制备方法。
3.背景
4.不同类型的糖存在于指定的膳食中，并且在进食期间可能与菌斑接触。糖的分解是影响菌斑环境的重要步骤。糖代谢需要特定的酶。途径的遗传配置和表达决定哪些菌株能够在哪种类型的糖上生长。
5.高量的某些糖的出现可以为某些物种提供优于其它物种的选择优势，这仅仅是由于它们能够在代谢物上生长的事实，而且还归因于影响环境的效应，例如酸产生、细菌素和/或可被其它物种代谢的分解产物。
6.当某些可发酵碳水化合物的摄入增加时，这可能导致使用者口腔中的ph下降。酸不仅损害牙齿，而且酸性环境导致向更多耐酸和产酸细菌的转变，并且通常以相对少量发现的某些致龋细菌的数量和大小实际上可能增加。最终，这可能导致龋齿。口腔病原菌的一些物种(例如牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis)、福赛斯坦纳菌(tannerella forsythia)和伴放线放线杆菌(aggregatibacter actinomycetemcomitans))牵涉牙周病例如牙周炎、牙龈炎、坏死性牙周炎、坏死性牙龈炎和种植体周围炎的发生。口腔致病菌的某些物种与蛀牙有关(例如变形链球菌(streptococcus mutans))。解决这些问题的当前策略包括使用包含广谱抗菌剂的口腔护理产品。然而，此类产品可以抑制或杀灭细菌，而不管该细菌是有益的还是有害的。此外，病原体可能进化以发展为对抗微生物剂产生抗性。因此，需要替代的预防和治疗方法。
[0007]“益生菌”是在食用时提供健康益处的微生物。“益生元”是可摄入的成分，其允许胃肠道微生物群中的组成和/或活性的特定变化，其赋予宿主安乐和健康的益处。虽然通常已知益生元可以影响胃肠道微生物群的组成，但是使用类似的益生元策略来促进有益的口腔细菌的注意力相对较少。不是试图刺激口腔中的有益细菌，而是重点在于避免并且迅速除去促进有害口腔细菌的化合物(例如蔗糖)以及使用抗菌剂来减少口腔菌斑。
[0008]
益生元用于维持和/或恢复口腔微生物群的健康相关稳态和调节宿主响应的用途正在得到更多地研究。然而，目前需要通过潜在的益生元底物刺激有益/共生细菌，产生宿主相容性更强的生物膜，其含有较少量的病原体，显示出降低的毒力并且具有较低的炎性潜力。期望鉴定新的基质，例如，其可以在生长和/或代谢方面刺激有益/共生口腔细菌，并且因此抑制致病性口腔细菌，降低毒力基因表达并且减少暴露于基质处理的生物膜的口腔角质形成细胞的炎性响应。
[0009]
发明概述
[0010]
本发明考虑到某些体外多物种口腔生物膜可以令人惊奇地通过用潜在的益生元底物(例如糖益生元)刺激某些有益/共生细菌来调节。这种刺激可以产生更多的宿主相容
性生物膜，其包含较低量的病原体，表现出降低的毒力并且具有较低的炎性潜力，如通过某些炎性生物标志物所测量的。
[0011]
在一个方面，底物(例如，糖益生元)在生长和/或代谢方面可以刺激有益的/共生口腔细菌。在另一方面，通过刺激某些有益/共生口腔细菌还导致抑制某些致病性口腔细菌，降低毒力基因表达并且减少暴露于用这些底物处理的多物种口腔生物膜的口腔角质形成细胞的炎性响应。
[0012]
本发明人惊奇地发现，四种新的潜在益生元底物表现出一定的浓度依赖性调节作用，其导致体外多物种口腔生物膜变得与宿主更相容。本发明人能够成功地研究潜在益生元底物对体外复杂的14种口腔生物膜的组成、代谢活性、毒力基因表达和炎性潜力的影响。
[0013]
发现包含以这种方式鉴定的糖益生元(例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其组合的糖益生元)的口腔护理组合物增加口腔微生物群中某些有益/共生细菌的生长。此类有益细菌可以包括例如内氏放线菌(a.naeslundii)；粘性放线菌(a.viscosus)；戈氏链球菌(s.gordonii)；缓症链球菌(s.mitis)；口腔链球菌(s.oralis)；唾液链球菌(s.salivarius)；血链球菌(s.sanguinis)；小韦荣球菌(v.parvula)。这些选择的促进有益细菌生长的糖益生元也对某些细菌的致病菌株的生长产生负面影响。这些致病菌株可以包括例如：伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)；具核梭杆菌(f.nucleatum)；牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)；中间普氏菌(p.intermedia)；远缘链球菌(s.sobrinus)。
[0014]
本发明考虑到有益细菌的选择性刺激为口腔健康提供了有效的预防方法。不受任何理论的束缚，认为由于细菌需要某些底物才能生长，因此可以通过向个体有益的内源性菌群提供适当的底物来选择性地促进个体有益的内源性菌群的生长，从而在细菌环境中获得某些微生物学转变。例如，不受理论束缚，某些微生物优先利用选定的底物。通过选择合适的底物，能够促进某些微生物(例如有益的内源细菌菌株)的生长，同时还直接或间接抑制选择的其它微生物(内源致病细菌菌株)的生长。
[0015]
在一个方面，本发明涉及新的益生元方法，其选择性地通过使用包含益生元有效量的糖益生元(例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其组合的糖益生元)的口腔护理组合物来促进有益内源性细菌的生长但不促进有害细菌的生长。例如，这可以包括使用促进至少一种上文列出的有益细菌的生长而不同时促进任何上文列出的有害细菌的生长的组合物。
[0016]
用于本发明方法的口腔护理组合物(组合物1)是包含有效量的至少一种糖益生元的口腔护理组合物，所述糖益生元例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，所述糖益生元的量例如有效促进口腔中有益内源性细菌的生长并且抑制致病性口腔细菌(例如降低毒力基因表达并且减少口腔角质形成细胞的炎性响应)。
[0017]
例如，在多个方面，可用于本发明方法的口腔护理组合物包括：
[0018]
1.1组合物1，其中糖益生元为单糖、二糖或三糖，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物。
[0019]
1.2组合物1，其中糖益生元为单糖，例如n-乙酰基-d-葡糖胺。
[0020]
1.3组合物1，其中糖益生元为二糖，例如α-d-乳糖或d-(+)-海藻糖。
[0021]
1.4组合物1，其中糖益生元为三糖，例如d-(+)-棉子糖。
[0022]
1.5组合物1，其中糖益生元为n-乙酰基-d-葡糖胺。
[0023]
1.6组合物1，其中糖益生元为d-乳糖。
[0024]
1.7组合物1，其中糖益生元为d-(+)-海藻糖。
[0025]
1.8任一上述组合物，其中糖益生元的量为至少0.1％，例如0.1％-5％，例如约0.5％、1％或2％重量的组合物。
[0026]
1.9任一上述组合物，其中糖益生元的量为0.5μmol/l-10mmol/l、0.5μmol/l-5mmol/l、1μmol/l-5mmol/l、5μmol/l-10mmol/l、0.75μmol/l-1.5mmol/l、约0.75mmol/l、约1mmol/l、约1.5mmol/l或约1.75mmol/l。
[0027]
1.10任一上述组合物，其中糖益生元不来源于植物提取物。
[0028]
1.11任一上述组合物，其中组合物促进一种或多种有益或共生内源性细菌物种在口腔中的生长或表达，其中所述物种是选自以下的一种或多种：内氏放线菌(a.naeslundii)；粘性放线菌(a.viscosus)；戈氏链球菌(s.gordonii)；缓症链球菌(s.mitis)；口腔链球菌(s.oralis)；唾液链球菌(s.salivarius)；血链球菌(s.sanguinis)；小韦荣球菌(v.parvula)及其组合。
[0029]
1.12任一上述组合物，其中组合物负面影响一种或多种致病性细菌物种在口腔中的生长或表达，其中所述物种是选自以下的一种或多种：伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)；具核梭杆菌(f.nucleatum)；牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)；中间普氏菌(p.intermedia)；远缘链球菌(s.sobrinus)及其组合。
[0030]
1.13 1.12的组合物，其中组合物负面影响一种或多种致病性细菌物种在口腔中的生长，其中所述物种是选自以下的一种或多种：伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)；具核梭杆菌(f.nucleatum)；牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)；中间普氏菌(p.intermedia)及其组合。
[0031]
1.14任一上述组合物，其中组合物还包含至少一种对口腔健康具有有益作用的细菌物种。
[0032]
1.15组合物1.14，其中对口腔健康具有有益作用的细菌物种选自内氏放线菌(a.naeslundii)；粘性放线菌(a.viscosus)；戈氏链球菌(s.gordonii)；缓症链球菌(s.mitis)；口腔链球菌(s.oralis)；唾液链球菌(s.salivarius)；血链球菌(s.sanguinis)；小韦荣球菌(v.parvula)及其组合。
[0033]
1.16任一上述组合物，还包含抗牙结石剂。
[0034]
1.17任一上述组合物，还包含抗牙结石剂，其为多磷酸盐，例如焦磷酸盐、三聚磷酸盐或六偏磷酸盐，例如为钠盐形式。
[0035]
1.18任一上述组合物，包含至少一种表面活性剂，其选自十二烷基硫酸钠、椰油酰氨基丙基甜菜碱及其组合(例如，0.5-5％wt的组合物)。
[0036]
1.19任一上述组合物，包含阴离子表面活性剂，例如选自月桂基硫酸钠、月桂醇聚醚硫酸钠及其混合物。
[0037]
1.20任一上述组合物，包含月桂基硫酸钠，其量为0.5-5％wt的组合物。
[0038]
1.21任一上述组合物，包含至少一种保湿剂(例如1％-50％wt的组合物)。
[0039]
1.22任一上述组合物，包含至少一种选自甘油、山梨醇及其组合的保湿剂。
[0040]
1.23任一上述组合物，包含至少一种聚合物。
[0041]
1.24任一上述组合物，包含至少一种聚合物，其选自聚乙二醇、聚乙烯基甲基醚马来酸共聚物、多糖(例如纤维素衍生物，例如羧甲基纤维素，或多糖胶，例如黄原胶或角叉菜胶)及其组合。
[0042]
1.25任一上述组合物，包含一种或多种磨料，例如二氧化硅、碳酸钙或磷酸钙磨料。
[0043]
1.26任一上述组合物，包含胶条或片段。
[0044]
1.27任一上述组合物，包含矫味剂、芳香剂和/或着色剂。
[0045]
1.28通过组合任一上述组合物中所述的成分获得或可获得的任一组合物。
[0046]
1.29任一上述口腔护理组合物，其中组合物为漱口水、牙膏、牙凝胶、牙粉、非研磨性凝胶、摩丝、泡沫、口腔喷雾剂、锭剂、口腔片剂或牙科用具。
[0047]
1.30任一上述组合物，其中组合物为牙膏或漱口水。
[0048]
1.31任一上述组合物，其中组合物为牙膏，其任选还包含以下一种或多种：水、磨料、表面活性剂、发泡剂、维生素、聚合物、酶、保湿剂、增稠剂、防腐剂、矫味剂、着色剂和/或其组合。
[0049]
1.32任一上述组合物，其中组合物为牙膏，其还包含水、磨料、表面活性剂、保湿剂、增稠剂和矫味剂。
[0050]
1.33任一上述组合物，其中组合物是通过与牙膏基质混合的方法获得或可获得的牙膏，所述牙膏基质例如包含以下一种或多种：水、磨料、表面活性剂、发泡剂、维生素、聚合物、酶、保湿剂、增稠剂、抗微生物剂、防腐剂、矫味剂、着色剂和/或其组合的牙膏基质。
[0051]
1.34任一上述组合物，其用于在口腔中选择性地促进：相对于致病性口腔细菌的生长、代谢活性或定殖，对口腔健康具有有益作用的细菌的生长、代谢活性或定殖。
[0052]
1.35组合物1.34，其中对口腔健康具有有益作用的细菌选自内氏放线菌(a.naeslundii)；粘性放线菌(a.viscosus)；戈氏链球菌(s.gordonii)；缓症链球菌(s.mitis)；口腔链球菌(s.oralis)；唾液链球菌(s.salivarius)；血链球菌(s.sanguinis)；小韦荣球菌(v.parvula)及其组合。
[0053]
1.36任一组合物1.34-1.35，其中致病性口腔细菌选自伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)；具核梭杆菌(f.nucleatum)；牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)；中间普氏菌(p.intermedia)；变形链球菌(s.mutans)；远缘链球菌(s.sobrinus)及其组合。
[0054]
1.37组合物1.36，其中致病性口腔细菌选自伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)；具核梭杆菌(f.nucleatum)；牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)；中间普氏菌(p.intermedia)及其组合。
[0055]
1.38任一组合物1.33-1.37，其中相对于致病性口腔细菌的生长、代谢活性或定殖，在与对口腔健康具有有益作用的细菌和致病性口腔细菌一起温育24小时后，组合物选择性地促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生长、代谢活性或定殖。
[0056]
1.39任一组合物1.33-1.37，其中相对于致病性口腔细菌的生长、代谢活性或定殖，在与对口腔健康具有有益作用的细菌和致病性口腔细菌一起温育48小时后，组合物选择性地促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生长、代谢活性或定殖。
[0057]
1.40任一上述组合物，其用于相对于致病性口腔细菌的生物膜形成，在口腔中选择性地促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生物膜形成。
[0058]
1.41组合物1.40，其中对口腔健康具有有益作用的细菌选自内氏放线菌(a.naeslundii)；粘性放线菌(a.viscosus)；戈氏链球菌(s.gordonii)；缓症链球菌(s.mitis)；口腔链球菌(s.oralis)；唾液链球菌(s.salivarius)；血链球菌(s.sanguinis)；小韦荣球菌(v.parvula)及其组合。
[0059]
1.42任一组合物1.40或1.41，其中致病性口腔细菌选自伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)；具核梭杆菌(f.nucleatum)；牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)；中间普氏菌(p.intermedia)；变形链球菌(s.mutans)；远缘链球菌(s.sobrinus)及其组合。
[0060]
1.43组合物1.42，其中致病性细菌选自：伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)；具核梭杆菌(f.nucleatum)；牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)；中间普氏菌(p.intermedia)及其组合。
[0061]
1.44任一上述组合物，其中益生元底物可以降低伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)中以下基因中的一种或多种的毒力基因表达：flp、aae、apah、cdtb、emaa、ltxa、omp100、omp29、orf859、pga、vapa。
[0062]
1.45任一上述组合物，其中益生元底物可以降低牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)中以下基因中的一种或多种的毒力基因表达：fim a、kgp、partc、rgpa及其组合。
[0063]
1.46任一上述组合物，其中益生元底物可以降低中间普氏菌(p.intermedia)中以下基因中的一种或多种的毒力基因表达：adpc、clpb、dnak、dnaj、ecf、groes、htpg、kpsd、inpa、phg及其组合。
[0064]
1.47任一上述组合物，其中益生元底物可以降低具核梭杆菌(f.nucleatum)中以下基因中的一种或多种的毒力基因表达：丁酸-乙酰乙酸coa-转移酶、abc转运蛋白通透酶、转座酶、溶血素、氯高铁血红素受体、ompa、ef-g及其组合。
[0065]
1.48任一上述组合物，其中益生元底物可以减少选自以下的一种或多种致病菌的绝对数量(例如，通过qpcr测量)：伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)；具核梭杆菌(f.nucleatum)；牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)；中间普氏菌(p.intermedia)及其组合。
[0066]
1.49任一上述组合物，其中用糖益生元(例如，n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物)处理产生具有大于60％有益/共生细菌(例如，60％-98％有益/共生细菌(geq/ml))(例如，90％-98％有益/共生细菌(geq/ml))的口腔微生物群。
[0067]
1.50任一上述组合物，其中用糖益生元(例如，n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物)处理产生具有小于40％牙周致病菌物种(例如，1.25％-39％牙周致病菌物种(geq/ml))(例如，25％-39％牙周致病菌物种(geq/ml))(例如，1.25％-2.5％牙周致病菌物种(geq/ml))的口腔微生物群。
[0068]
1.51任一上述组合物，其中用糖益生元(例如，n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物)处理可以减少口腔角质形成细胞中的炎性响应。
[0069]
1.52 1.51的组合物，其中糖益生元可以降低口腔角质形成细胞中炎性生物标志
物的基因表达，其中生物标志物选自：il-1β、il-6、il-8、mmp-8、tnf-α及其组合。
[0070]
1.53任一上述组合物，其中糖益生元可以降低生物膜中的有机酸产生。
[0071]
1.54组合物1.53，其中有机酸选自乳酸盐、甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐及其组合。
[0072]
例如，在一个实施方案中，本发明提供了口腔护理组合物，其包含有效量的至少一种糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等，其用于相对于致病性口腔细菌的生长、代谢活性或定殖，在口腔中选择性地促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生长、代谢活性或定殖。
[0073]
例如，在另一个实施方案中，本发明提供了口腔护理组合物，其包含有效量的至少一种糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等，其用于相对于致病性口腔细菌的生物膜形成，在口腔中选择性地促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生物膜形成。
[0074]
例如，在另一个实施方案中，本发明提供了口腔护理组合物，其包含有效量的至少一种糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等，其用于维持和/或重建健康的口腔微生物群。
[0075]
例如，在另一个实施方案中，本发明提供了口腔护理组合物，其包含有效量的至少一种糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等，其用于治疗或预防牙龈炎、牙周炎、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎、坏死性牙周炎、全身性健康障碍和龋齿的一种或多种。
[0076]
还提供了用于预防或减少蛀牙、龋齿和/或龈疾病的方法，包括使口腔与组合物接触，所述组合物包含有效量的至少一种糖益生元(例如任一组合物1等)，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等，例如通过刷牙，例如定期刷牙足够长的时间期限以增强有益细菌在口腔中的生长。
[0077]
还提供了用于增加有需要的个体口腔中有益内源性细菌的量的方法，包括向个体施用口腔护理组合物，所述口腔护理组合物包含有效量的至少一种糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等，例如其中组合物中糖益生元的量促进有益内源性细菌的生长，例如其中有益内源性细菌为选自以下的一种或多种物种：内氏放线菌(a.naeslundii)；粘性放线菌(a.viscosus)；戈氏链球菌(s.gordonii)；缓症链球菌(s.mitis)；口腔链球菌(s.oralis)；唾液链球菌(s.salivarius)；血链球菌(s.sanguinis)；小韦荣球菌(v.parvula)及其组合。
[0078]
还提供了相对于致病性口腔细菌的生长、代谢活性或定殖，在个体口腔中选择性促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生长、代谢活性或定殖的方法；该方法包括使口腔与口腔护理组合物接触，所述口腔护理组合物包含有效量的至少一种糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等。
[0079]
还提供了相对于致病性口腔细菌的生物膜形成，在个体口腔中选择性促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生物膜形成；该方法包括使口腔与口腔护理组合物接触，所述
口腔护理组合物包含有效量的至少一种糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等。
[0080]
还提供了在需要的个体的口腔中降低病理内源性细菌的方法，该方法包括给个体施用口腔护理组合物，所述口腔护理组合物包含有效量的至少一种糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等，例如其中组合物中糖益生元的量抑制病理内源性细菌的生长，例如，其中病理内源性细菌是选自以下的一种或多种物种：伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)；具核梭杆菌(f.nucleatum)；牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)；中间普氏菌(p.intermedia)；远缘链球菌(s.sobrinus)及其组合。
[0081]
还提供了在个体中维持和/或重建健康口腔微生物群的方法，该方法包括使个体的口腔与口腔护理组合物接触，所述口腔护理组合物包含有效量的至少一种糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等。
[0082]
还提供了预防或减轻或治疗个体的牙龈炎、牙周炎、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎、坏死性牙周炎、全身性健康障碍和龋齿中的一种或多种的方法，该方法相对于致病性口腔细菌的生长、代谢活性或定殖，通过在个体口腔中选择性地促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生长、代谢活性或定殖，该方法包括使个体的口腔与口腔护理组合物接触，所述口腔护理组合物包含有效量的至少一种糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等。
[0083]
还提供了糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等的用途，其用于预防或减少蛀牙、龋齿和/或龈疾病，或增强口腔中有益细菌的生长，例如通过使牙齿表面与有效量的至少一种糖益生元接触，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等。
[0084]
还提供了糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元在制备用于预防或减少蛀牙、龋齿和/或龈疾病，或增强口腔中有益细菌生长的口腔护理组合物，例如任一组合物1等中的用途。
[0085]
在另一方面，本发明涉及糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元在制备口腔护理产品，例如任一组合物1等中的用途，以促进有益内源性细菌的生长，但不促进有害细菌的生长。
[0086]
还提供了糖益生元在口腔护理组合物(例如任一组合物1等)中的用途，所述糖益生元是例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，所述口腔护理组合物：
[0087]
(a)相对于致病性口腔细菌的生长、代谢活性或定殖，选择性地促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生长、代谢活性或定殖；
[0088]
(b)相对于致病性口腔细菌的生物膜形成，选择性地促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生物膜形成；
[0089]
(c)在个体中维持和/或重建健康的口腔微生物群；或
[0090]
(d)预防个体的牙龈炎、牙周炎、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性牙龈炎、坏死性牙周炎和龋齿的一种或多种。
[0091]
在另一方面，本发明涉及筛选促进有益口腔细菌生长的化合物的方法，其中筛选步骤包括：
[0092]
·
确定第一化合物(例如，测试化合物)促进有益口腔细菌生长，同时负面影响致病性口腔细菌生长的能力，例如，比较至少一种有益口腔细菌物种和至少一种致病性口腔细菌物种的生长，例如，其中第一化合物对生长的影响通过在存在和不存在第一化合物的情况下培养至少24小时后的光密度或生物膜形成来测量；
[0093]
·
任选确定第二化合物(例如对照化合物)促进有益细菌生长，同时负面影响致病性口腔细菌生长的能力；
[0094]
·
任选将第一化合物的特性与第二化合物的特性进行比较；
[0095]
·
基于其促进有益口腔细菌生长和抑制致病性口腔细菌生长的能力，例如与对照化合物相比，筛选用于进一步测试的测试化合物。
[0096]
例如，前述筛选方法中的对照化合物可以为糖益生元，例如选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物的糖益生元，例如任一组合物1等。在一些实施方案中，有益口腔细菌是选自以下的一种或多种物种：内氏放线菌(a.naeslundii)；粘性放线菌(a.viscosus)；戈氏链球菌(s.gordonii)；缓症链球菌(s.mitis)；口腔链球菌(s.oralis)；唾液链球菌(s.salivarius)；血链球菌(s.sanguinis)；小韦荣球菌(v.parvula)。在一些实施方案中，致病性口腔细菌为选自以下的一种或多种物种：伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)；具核梭杆菌(f.nucleatum)；牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)；中间普氏菌(p.intermedia)；远缘链球菌(s.sobrinus)。本发明还提供了在此类筛选方法中鉴定的化合物在任何上述方法和用途中的用途。
[0097]
详细描述
[0098]
除非另有说明，否则当与本发明的口腔护理组合物的成分结合使用时，术语“％”或“百分比”意指所示成分相对于口腔护理组合物总重的重量百分比。
[0099]
如本文所用，“清洁”通常是指去除目标表面上的污染物、污垢、杂质和/或外来物质。例如，在口腔表面的情况下，其中表面是牙釉质，清洁可以去除至少一些膜或污渍，例如牙菌斑生物膜、表膜或牙垢。
[0100]
术语“固有的”和“内源的”在本公开中可互换使用。
[0101]
如本文所用，“口腔护理组合物”是指预期用途包括口腔护理、口腔卫生和/或口腔外观的组合物，或预期使用方法包括施用于口腔的组合物，并且是指对于局部施用于口腔以及为牙齿和/或口腔提供益处而言适口且安全的组合物。因此，术语“口腔护理组合物”具体地排除了高毒性、不适口或以其它方式不适合施用于口腔的组合物。在一些实施方案中，口腔护理组合物不是有意吞咽的，而是在口腔中保留足以影响预期用途的时间。如本文公开的口腔护理组合物可用于非人哺乳动物，例如伴侣动物(例如狗和猫)，以及人。在一些实施方案中，如本文公开的口腔护理组合物由人使用。口腔护理组合物包括例如洁齿剂和漱口水。在一些实施例中，本公开提供了漱口水制剂。
[0102]
如本文所用，“口腔可接受的”是指在口腔护理制剂例如漱口水或洁齿剂中使用的
相关浓度下安全和适口的材料。如本文所用，“口腔可接受的载体”是指可用于配制本文公开的口腔护理组合物的任何媒介物。当口腔可接受的载体以本文公开的量保留在口中而不吞咽足以允许与本文所需的牙齿表面有效接触的时间期限时，其对哺乳动物无害。通常，即使无意吞咽，口腔可接受的载体也是无害的。合适的口腔可接受的载体包括例如以下的一种或多种：水、增稠剂、缓冲剂、保湿剂、表面活性剂、磨料、甜味剂、矫味剂、颜料、染料、防龋剂、抗菌剂、增白剂、脱敏剂、维生素、防腐剂、酶及其混合物。
[0103]
用于本发明的糖益生元为糖或糖衍生物，例如酰胺衍生物、氨基糖或糖醇，例如单糖、二糖或三糖(包括氨基糖和糖醇)，它们是口腔可接受的(即在口腔护理制剂中的相关浓度下无毒)，并且促进有益口腔细菌的生长，同时对致病性口腔细菌的生长产生负面影响。在特别的实施方案中，糖益生元选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物。
[0104]“n-乙酰基-d-葡糖胺”为单糖，它是单糖葡萄糖的酰胺衍生物，并且也称作n-乙酰基-d-葡糖胺、glcnac、nag和nadg。其iupac名称为β-d-(乙酰基氨基)-δ脱氧-吡喃葡萄糖。
[0105]“α-d-乳糖”为由半乳糖和葡萄糖缩合得到的二糖。其iupac名称为β-d-吡喃半乳糖基-(1
→
4)-d-葡萄糖。葡萄糖可以为α-吡喃糖形式或β-吡喃糖形式，而半乳糖只能具有β-吡喃糖形式：因此α-乳糖和β-乳糖是指单独的吡喃葡萄糖环的异头形式。“α-d-乳糖”在本文中可与“d-乳糖”互换使用。
[0106]“d-(+)-海藻糖”为由两个葡萄糖分子组成的糖。它也称作海藻糖(mycose)或海藻糖(tremalose)，并且其iupac名称为：(2r,3s,4s,5r,6r)-2-(羟基甲基)-6-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧基噁烷-3,4,5-三醇。海藻糖是由通过1-1α键连接的两个葡萄糖单元形成的非还原糖，给出其名称α-d-吡喃葡萄糖基-(1
→
1)-α-d-吡喃葡萄糖苷。“d-(+)-海藻糖”在本文中可与“d-海藻糖”互换使用。
[0107]“d-(+)-棉子糖”为由半乳糖、葡萄糖和果糖组成的三糖，其iupac名称为：(2r,3r,4s,5s,6r)-δ[(2s,3s,4s,5r)-3,4-二羟基-2,5-二(羟基甲基)氧杂戊环-2-基]氧基-6-[[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)噁烷-2-基]氧甲基]噁烷-3,4,5-三醇。“d-(+)-棉子糖”在本文中可与“d-棉子糖”互换使用。
[0108]
在一些方面，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含水。用于制备本文公开的口腔护理组合物(例如任一组合物1等)的水应当是去离子的并且不含有机杂质。水可以补足口腔护理组合物的平衡。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0-90重量％的水，例如0.1-90重量％的水，例如1-80重量％的水，例如2-70重量％的水，5-60重量％的水，例如5-50重量％的水，例如20-60重量％的水，例如10-40重量％的水。该量的水包括添加的游离水加上与口腔护理组合物的其它成分(例如山梨醇)一起引入的量。
[0109]
增稠剂提供口腔护理组合物期望的稠度和/或稳定和/或增强其性能(例如，在使用时提供期望的活性成分释放特性)。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.01-15重量％的增稠剂，0.1-15重量％的增稠剂，例如0.1-10重量％的增稠剂，例如0.1-5重量％的增稠剂，例如0.5-10重量％的增稠剂，例如0.5-5重量％的增稠剂，例如1-4重量％的增稠剂，例如2-5重量％的增稠剂，例如2-4重量％的增稠剂，例如3-4重量％的增稠剂。较高重量百分比可用于口香糖、锭剂和薄荷糖、小药囊、非磨料凝胶
和龈下凝胶。可以用于本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等的增稠剂包括例如羧乙烯基聚合物、角叉菜胶(carrageenan)(也称作角叉菜胶(carrageenan gum))、羟乙基纤维素(hec)、天然和合成粘土(例如，硅酸镁铝和硅酸镁锂)、纤维素醚的水溶性盐(例如，羧甲基纤维素钠(cmc)和羧甲基羟乙基纤维素钠)、天然胶(例如，刺梧桐胶、黄原胶、阿拉伯胶和黄蓍胶)、胶体硅酸镁铝、二氧化硅(例如，细碎二氧化硅)、交联聚(乙烯基)吡咯烷酮、碳蜡、脂肪酸及其盐(例如，硬脂酸和棕榈酸)、脂肪醇(例如，硬脂醇)及其混合物。在一些实施方案中，增稠二氧化硅和角叉菜胶的混合物用作本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等中的增稠剂。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.01-15重量％的增稠二氧化硅和角叉菜胶，0.1-15重量％的增稠二氧化硅和角叉菜胶，例如0.1-10重量％的增稠二氧化硅和角叉菜胶，例如0.1-5重量％的增稠二氧化硅和角叉菜胶，例如0.5-10重量％的增稠二氧化硅和角叉菜胶，例如0.5-5重量％的增稠二氧化硅和角叉菜胶，例如1-4重量％的增稠二氧化硅和角叉菜胶，例如2-5重量％的增稠二氧化硅和角叉菜胶，例如2-4重量％的增稠二氧化硅和角叉菜胶，例如3-4重量％的增稠二氧化硅和角叉菜胶。
[0110]
缓冲剂调节口腔护理组合物的ph，例如调节至约ph 4.0至约ph 9.5的范围。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.1-10重量％的缓冲剂，0.5-10重量％的缓冲剂，例如0.5-5重量％的缓冲剂，例如0.5-4重量％的缓冲剂，例如0.5-3重量％的缓冲剂，例如0.5-2重量％的缓冲剂，例如1-2重量％的缓冲剂。可以用于本文公开的口腔护理组合物(例如任一组合物1等)中的缓冲剂包括例如碳酸氢钠、磷酸钠{例如磷酸一钠(nah2po4)、磷酸二钠(na2hpo4)、磷酸三钠(na3po4)}、氢氧化钠、碳酸钠、酸式焦磷酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠及其混合物。在一些实施方案中，氢氧化钠用作本文公开的口腔护理组合物(例如任一组合物1等)中的缓冲剂。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.1-10重量％的氢氧化钠，例如0.5-10重量％的氢氧化钠，例如0.5-5重量％的氢氧化钠，例如0.5-4重量％的氢氧化钠，例如0.5-3重量％的氢氧化钠，例如0.5-2重量％的氢氧化钠，例如1-2重量％的氢氧化钠。
[0111]
保湿剂防止口腔护理组合物在暴露于空气时硬化。某些保湿剂还可以赋予口腔护理组合物期望的甜味或香味。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等，基于纯保湿剂，包含0-70重量％的保湿剂，例如10-70重量％的保湿剂，例如10-65重量％的保湿剂，例如10-60重量％的保湿剂，例如10-50重量％的保湿剂，例如20-50重量％的保湿剂，例如20-40重量％的保湿剂。可以用于本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等的保湿剂包括例如甘油、山梨醇、木糖醇、丁二醇、聚乙二醇、丙二醇、三甲基甘氨酸及其混合物。在一些实施方案中，甘油、山梨醇和丙二醇的混合物用作本文公开的口腔护理组合物(例如任一组合物1等)中的保湿剂。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等基于醇保湿剂包含0-70重量％的甘油、山梨醇和丙二醇，例如10-70重量％的甘油、山梨醇和丙二醇，例如10-65重量％的甘油、山梨醇和丙二醇，例如10-60重量％的甘油、山梨醇和丙二醇，例如10-50重量％的甘油、山梨醇和丙二醇，例如20-50重量％的甘油、山梨醇和丙二醇，例如20-40重量％的甘油、山梨醇和丙二醇。
[0112]
在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含表面活性剂，例如选自阴离子、阳离子、两性离子和非离子表面活性剂及其混合物。在一些实施方
案中，表面活性剂在整个宽ph范围内合理地稳定。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.01-10重量％的表面活性剂，例如0.05-5重量％的表面活性剂，例如0.1-10重量％的表面活性剂，例如0.1-5重量％的表面活性剂，例如0.1-2重量％的表面活性剂，例如0.5-2重量％的表面活性剂。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.01-10重量％的阴离子表面活性剂，例如0.05-5重量％的阴离子表面活性剂，例如0.1-10重量％的阴离子表面活性剂，例如0.1-5重量％的阴离子表面活性剂，例如0.1-2重量％的阴离子表面活性剂，例如0.5-2重量％的阴离子表面活性剂，例如1.5重量％的阴离子表面活性剂。
[0113]
可以用于本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等的阴离子表面活性剂包括例如，
[0114]
i.高级脂肪酸单甘油酯单硫酸盐的水溶性盐，例如氢化椰子油脂肪酸的单硫酸化单甘油酯的钠盐，例如n-甲基n-椰油酰基牛磺酸钠、椰油单甘油酯硫酸钠，
[0115]
ii.高级烷基硫酸盐，例如月桂基硫酸钠，
[0116]
iii.高级烷基-醚硫酸盐，例如具有式ch3(ch2)mch2(och2ch2)noso3x，其中m为6-16，例如10，n为1-6，例如2、3或4，并且x为na或k，例如月桂醇聚醚-2硫酸钠ch3(ch2)
10
ch2(och2ch2)2oso3na，
[0117]
iv.高级烷基芳基磺酸盐，例如十二烷基苯磺酸钠(月桂基苯磺酸钠)，和
[0118]
v.高级烷基磺基乙酸盐，例如月桂基磺基乙酸钠(十二烷基磺基乙酸钠)，1,2-二羟基丙磺酸的高级脂肪酸酯，磺基月桂酸盐(sulfocolaurate)(n-2-乙基月桂酸钾磺基乙酰胺)和月桂基肌氨酸钠。
[0119]
如本文所用，“高级烷基”是指c6-30烷基。
[0120]
在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如组合物1等包含阴离子表面活性剂。在一些实施方案中，阴离子表面活性剂是在烷基中具有10至18个碳原子的烷基硫酸酯的水溶性盐和具有10至18个碳原子的脂肪酸的磺化甘油单酯的水溶性盐。月桂基硫酸钠、月桂酰肌氨酸钠和椰子单甘油酯磺酸钠是该类型的阴离子表面活性剂的实例。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含月桂基硫酸钠、醚月桂基硫酸钠或其混合物。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含月桂基硫酸钠。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.01-10重量％的月桂基硫酸钠，例如0.05-5重量％的月桂基硫酸钠，例如0.1-10重量％的月桂基硫酸钠，例如0.1-5重量％，例如月桂基硫酸钠，例如0.1-2重量％的月桂基硫酸钠，例如0.5-2重量％的月桂基硫酸钠，例如1.5重量％月桂基硫酸钠。
[0121]
磨料去除碎屑和表面污渍。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含5-70重量％的磨料，例如5-60重量％的磨料，例如5-50重量％的磨料，例如5-40重量％的磨料，例如5-30重量％的磨料，例如10-30重量％的磨料，例如10-20重量％的磨料。
[0122]
可以用于本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等的磨料包括例如磷酸钙磨料，例如磷酸三钙(ca3(po4)2)、羟基磷灰石(ca
10
(po4)6(oh)2)、二水合磷酸二钙(cahpo4·
2h2o，在本文中也称作dical)、焦磷酸钙及其混合物。碳酸钙，例如沉淀碳酸钙也可用作磨料。
[0123]
可以用于本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等的其它磨料包括例如二氧化硅磨料，例如具有平均粒度至多约20微米的沉淀二氧化硅，例如由j.m.huber销售的zeodent以及偏磷酸钠、偏磷酸钾、硅酸铝、煅烧氧化铝、膨润土或其它硅质材料，或其混合物。本文所用的二氧化硅磨料以及其它磨料可以具有范围为约0.1至约30微米，例如约5至约15微米的平均粒度。二氧化硅磨料可以来自沉淀二氧化硅或硅胶，例如二氧化硅干凝胶。特别的二氧化硅干凝胶由w.r.grace&co.davison chemical division以商品名销售。沉淀二氧化硅材料包括由j.m.huber corp.以商品名销售的那些，包括携带名称为zeodent 115和119的二氧化硅。
[0124]
在一些实施方案中，可以用于本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等的磨料包括硅胶和沉淀的无定形二氧化硅，其具有的吸油值为约小于约100cc/100g二氧化硅并且范围为约45cc/100g至约70cc/100g二氧化硅。使用asta rub-out method d281测量吸油值。在一些实施方案中，二氧化硅包含具有约3微米至约12微米和约5至约10微米的平均粒度的胶体颗粒。
[0125]
在一些实施方案中，磨料包含大部分非常小的颗粒，例如具有小于约5微米的d50，例如具有约3至约4微米的d50的小颗粒二氧化硅(sps)，例如sorbosil ac(ineos)。此类小颗粒可以用于以降低超敏反应为目标的制剂中。小颗粒组分可以与第二较大颗粒磨料组合存在。
[0126]
可以用于本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等的低吸油二氧化硅磨料由davison chemical division of w.r.grace&co.,baltimore,md.21203以sylodent的商品名销售。sylodent 650一种由胶态二氧化硅颗粒组成的二氧化硅水凝胶，其水含量为约29％重量，直径平均为约7至约10微米，并且吸油值小于约70cc/100g二氧化硅，其为可以用于本文公开的口腔护理组合物(例如任一组合物1等)中的低吸油二氧化硅磨料的实例。
[0127]
在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如组合物1的任一项包含高清洁二氧化硅。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含5-70重量％的高清洁二氧化硅，例如5-60重量％的高清洁二氧化硅，例如5-50重量％的高清洁二氧化硅，例如5-40重量％的高清洁二氧化硅，例如5-30重量％的高清洁二氧化硅，例如10-30重量％的高清洁二氧化硅，例如10-20重量％的高清洁二氧化硅。
[0128]
在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含甜味剂。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.005-10重量％的甜味剂，例如0.01-10重量％的甜味剂，例如0.1-10重量％的甜味剂，例如0.1-5重量％的甜味剂，例如0.1-3重量％的甜味剂，例如0.1-1重量％的甜味剂，例如0.1-0.5重量％的甜味剂。可以用于本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等的甜味剂包括例如蔗糖、葡萄糖、糖精、三氯蔗糖、右旋糖、左旋糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、果糖、麦芽糖、木糖醇、糖精盐(例如糖精钠)、索马甜、阿斯巴甜、d-色氨酸、二氢查耳酮、乙酰舒泛、环磺酸盐及其混合物。在一些实施方案中，糖精钠用作本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等中的甜味剂。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.005-10重量％的糖精钠，例如0.01-10重量％的糖精钠，例如0.1-10重量％的糖精钠，例如0.1-5重量％的糖精钠，例如0.1-3重量％的糖精钠，例如0.1-1重量％的糖精钠，例如
0.1-0.5重量％的糖精钠。
[0129]
在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含矫味剂。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.1-5重量％的矫味剂，例如0.1-4重量％的矫味剂，例如0.1-3重量％的矫味剂，例如0.1-2重量％的矫味剂，例如0.5-2重量％的矫味剂，例如0.6-2重量％的矫味剂，例如0.7-2重量％的矫味剂，例如0.8-2重量％的矫味剂，例如0.9-2重量％的矫味剂，例如1-2重量％的矫味剂。可以用于本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等的矫味剂包括例如精油，以及多种矫味醛、酯、醇和类似材料，以及薄荷醇、香芹酮和茴香脑，以及它们的混合物。精油的实例包括留兰香、薄荷、冬青、黄樟、丁香、鼠尾草、桉树、马郁兰、肉桂、柠檬、酸橙、葡萄柚和橙的油。在一些实施方案中，薄荷油和留兰香油的混合物用作本文公开的口腔护理组合物，例如组合物1等中的矫味剂。
[0130]
在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含颜料。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.001-20重量％的颜料，例如0.01-20重量％的颜料，例如0.01-20重量％的颜料，例如0.1-20重量％的颜料，例如0.1-10重量％的颜料，例如0.1-5重量％的颜料，例如0.1-3重量％的颜料，例如0.1-1重量％的颜料。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含二氧化钛。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.001-20重量％的二氧化钛，例如0.01-20重量％的二氧化钛，例如0.01-20重量％的二氧化钛，例如0.1-20重量％的二氧化钛，例如0.1-10重量％的二氧化钛，例如0.1-5重量％的二氧化钛，例如0.1-3重量％的二氧化钛，例如0.1-1重量％的二氧化钛。
[0131]
在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等还包含防龋剂。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.005-10重量％的防龋剂，例如0.01-10重量％的防龋剂，例如0.01-5重量％的防龋剂，例如0.01-1重量％的防龋剂，例如0.01-0.3重量％的防龋剂，例如0.1-10重量％的防龋剂，例如0.1-5重量％的防龋剂，例如0.1-2重量％的防龋剂，例如0.1-1重量％的防龋剂，例如0.1-0.8重量％的防龋剂，例如0.1-0.6重量％的防龋剂，例如0.1-0.5重量％的防龋剂。在一些实施方案中，防龋剂为氟离子源。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等还包含0.005-10重量％的防龋剂，其为氟离子源，例如0.01-10重量％的防龋剂，其为氟离子源，例如0.01-5重量％的防龋剂，其为氟离子源，例如0.01-1重量％的防龋剂，其为氟离子源，例如0.01-0.3重量％的防龋剂，其为氟离子源，例如0.1-10重量％的防龋剂，其为氟离子源，例如0.1-5重量％的防龋剂，其为氟离子源，例如0.1-2重量％的防龋剂，其为氟离子源，例如0.1-1重量％的防龋剂，其为氟离子源，例如0.1-0.8重量％的防龋剂，其为氟离子源，例如0.1-0.6重量％的防龋剂，其为氟离子源，例如0.1-0.5重量％的防龋剂，其为氟离子源。可以用于本文公开的口腔组合物(例如任一组合物1等)中的氟离子源的实例可以在briner等人的美国专利号3,535,421；parran,jr.等人的美国专利号4,885,155和widder等人的美国专利号3,678,154中找到，其通过引用整体并入本文。氟离子源的其它实例包括例如氟化亚锡、氟化钠、氟化钾、单氟磷酸钠、氟硅酸钠、氟硅酸铵、氟化胺(例如n
’‑
十八烷基三亚甲基二胺-ν,ν,ν
’‑
三(2-乙醇)-二氢氟化物)、氟化铵、氟化钛、六氟硫酸盐及其组合。在某些实施方案中，氟离子源包括氟化亚锡、氟化钠和单氟磷酸钠及其混合
物。在一些实施方案中，防龋剂为氟化钠。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含0.005-10重量％的氟化钠，例如0.01-10重量％的氟化钠，例如0.01-5重量％的氟化钠，例如0.01-1重量％的氟化钠，例如0.01-0.3重量％的氟化钠，例如0.1-10重量％的氟化钠，例如0.1-5重量％的氟化钠，例如0.1-2重量％的氟化钠，例如0.1-1重量％的氟化钠，例如0.1-0.8重量％的氟化钠，例如0.1-0.6重量％的氟化钠，例如0.1-0.5重量％的氟化钠。
[0132]
在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含的防龋剂，其为氟离子源，其量足以提供25ppm-25,000ppm的氟离子，例如100-20,000ppm的氟离子，例如300-15,000ppm的氟离子，例如500-10,000ppm的氟离子，例如500-8,000ppm的氟离子，例如500-6,000ppm的氟离子，例如500-4,000ppm的氟离子，例如500-2,000ppm的氟离子，例如500-1,800ppm的氟离子，例如1000-1600ppm，例如1450ppm的氟离子。氟离子的适当水平将取决于特别的应用。在一些实施方案中，供消费者使用的牙膏包含防龋剂，所述防龋剂为氟离子源，其量足以提供1,000-1,500ppm的氟离子，其中儿科牙膏具有稍少的氟离子。在一些实施方案中，用于专业应用的洁齿剂或涂层包含防龋剂，所述防龋剂为氟离子源，其量足以提供5,000-25,000ppm的氟离子。
[0133]
增白剂使其所施用的牙齿增白。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含增白剂。在一些实施方案中，本文公开的口腔护理组合物，例如任一组合物1等包含牙齿表面增白有效量的增白剂，例如0.1-90重量％的增白剂，例如0.5-50重量％的增白剂，例如1-30重量％的增白剂，例如2-10重量％的增白剂。可以用于本文公开的口腔组合物例如任一组合物1等的增白剂的实例包括例如过氧化物、金属亚氯酸盐、过硼酸盐、过碳酸盐、过氧酸、次氯酸盐及其混合物。在一些实施方案中，增白剂为过氧化氢或过氧化氢源，例如过氧化脲或过氧化物盐或复合物(例如，过氧磷酸盐、过氧碳酸盐、过硼酸盐、过氧硅酸盐或过硫酸盐，例如过氧磷酸钙、过硼酸钠、过氧碳酸钠、过氧磷酸钠和过硫酸钾)，或过氧化氢聚合物复合物(例如，过氧化物-聚乙烯吡咯烷酮聚合物复合物)。
[0134]
以下实施例进一步示例本发明的性质，但应理解本发明不限于此。除非另有说明，否则本文和所附权利要求书中提及的所有量和比例均按重量计。
实施例
[0135]
实施例1-底物对多物种生物膜组成的作用
[0136]
使用amsterdam active adhesion模型，使生物膜在钙缺乏羟基磷灰石(cad-ha)盘(hitemco medical,old bethpage,usa)上垂直生长。在微量需氧条件(6％o2、7％co2、7％h2、80％n2)下，允许生物膜在24小时(37℃，170rpm)期间建立。在这24小时后，通过将含有盖的盘转移到含有2ml/孔的合适的底物溶液的新的24-孔板中，每天冲洗盘3次，持续3分钟(rt，250rpm)，连续3天。作为阴性对照，使用无底物补充的pbs(ph 5.7)。
[0137]
选择n-乙酰基-d-葡糖胺(nadg)、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖和d-(+)-棉子糖以确定它们对多物种生物膜组成的作用。与对照相比，用1m浓度的底物重复冲洗生物膜导致测定中测试的至少四种致病菌物种的绝对数显著减少，其结果在下表1中描述。注意，nadg减少远缘链球菌(s.sobrinus)的绝对数量。细菌物种的绝对丰度显示为每毫升基因组当量的平均值
±
sd(n＝3)对数值(log(geq/ml))。将所有底物以1m的浓度溶于pbs。将与对照(pbs)相
比具有统计学显著性差异的值用星号
‘
*’标记(p《0.05)：
[0138]
表1
[0139][0140][0141]
注：“aa”：伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)；“fn”：具核梭杆菌(f.nucleatum)；“pg”：牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)；“pi”：中间普氏菌(p.intermedia)；“an”：内氏放线菌(a.naeslundii)；“av”：粘性放线菌(a.viscosus)；s.gord.：戈氏链球菌(s.gordonii)；s.sal.：唾液链球菌(s.salivarius)；s.sang.：血链球菌(s.sanguinis)；vp：小韦荣球菌(v.parvula)；nadg：n-乙酰基-d-葡糖胺。
[0142]
这些降低(表示为每毫升基因组当量的量的对数值；log(geq/ml))约为：
[0143]
·
伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)，～1-1.4log(geq/ml)，
[0144]
·
具核梭杆菌(f.nucleatum)，～2.3-4log(geq/ml)，
[0145]
·
牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)，～2.4-2.7log(geq/ml)；和
[0146]
·
中间普氏菌(p.intermedia)，～2-3.2log(geq/ml)。
[0147]
与对照相比，致龋病原体变形链球菌(s.mutans)和远缘链球菌(s.sobrinus)的数量通常增加～0.6-1.3log(geq/ml)，在d-(+)-海藻糖和d-(+)-棉子糖的情况下变形链球菌(s.mutans)达到统计学显著性，在α-d-乳糖和d-(+)-海藻糖的情况下远缘链球菌(s.sobrinus)达到统计学显著性。然而，令人惊讶的是，nadg导致远缘链球菌(s.sobrinus)数量显著减少～3log(geq/ml)。表1表明有益/共生物种内氏放线菌(a.naeslundii)(对于所有底物)和粘性放线菌(a.viscosus)(对于d-(+)-海藻糖)的数量通常显著降低～1.9-2.5log(geq/ml)，并且对于α-d-乳糖和d-(+)-海藻糖，小韦荣球菌(v.parvula)显示出～0.7log(geq/ml)的显著降低。
[0148]
表1还表明，对于通常有益的链球菌物种，细菌数量通常增加～0.2-1.3log(geq/ml)，除血链球菌(s.sanguinis)外，其中对于戈氏链球菌(s.gordonii)(使用nadg)、口腔链
球菌(s.oralis)(使用d-(+)-棉子糖)和唾液链球菌(s.salivarius)(使用任何四种益生元底物)达到了统计学显著性。
[0149]
就相对比例(％(geq/ml))而言，对照处理产生由74.21
±
6.47％有益/共生物种、25.67
±
6.52％牙周病原体和0.13
±
0.06％致龋病原体组成的生物膜。与对照条件相比，用底物冲洗导致牙周病原体的比例显著降低(对于nadg、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖和d-(+)-棉子糖分别为1.46
±
0.97％、1.46
±
0.64％、1.80
±
1.04％和2.29
±
1.40％)。所有底物还导致有益/共生物种的比例显著更高(对于nadg、α-d-乳糖，d-(+)-海藻糖和d-(+)-棉子糖，分别为(97.86
±
1.11％、92.72
±
4.39％、88.98
±
9.12％和95.86
±
1.63％)。致龋病原体的比例在所有情况下都升高(对于nadg、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖和d-(+)-棉子糖分别为0.68
±
0.33％、5.82
±
3.94％、9.22
±
8.55％和1.85
±
0.68％)，不过，与对照相比不显著。这在表1a中详述(与对照相比的统计学显著差异值用星号
‘
*’标记(p《0.05))：
[0150]
表1a：
[0151]
％(geq/ml)有益或共生物种牙周病原体致龋病原体对照74.21(+/-6.47)25.67(+/-6.52)0.13(+/-0.06)nadg97.86(+/-1.11)*1.46(+/-0.97)*0.68(+/-0.33)d-乳糖92.72(+/-4.39)*1.46(+/-0.64)*5.82(+/-3.94)d-海藻糖88.98(+/-9.12)*1.80(+/-1.04)*9.22(+/-8.55)d-棉子糖95.86(+/-1.63)*2.29(+/-1.40)*1.85(+/-0.68)
[0152]
当用浓度为1％(w/v)的底物冲洗生物膜时，有益/共生物种、牙周病原体和致龋病原体的绝对数量通常与对照相比受到轻微影响(变化～0-0.6log(geq/ml)，不过，这没有达到统计学显著性。然而，在口腔链球菌(s.oralis)的情况下，d-(+)-棉子糖存在～0.9log(geq/ml)的显著降低。存在有益或共生物种比例更高和牙周病原体比例更低的趋势。结果在表2中详述：
[0153]
表2：
[0154][0155]
注：“aa”：伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)；“fn”：具核梭杆菌(f.nucleatum)；“pg”：牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)；“pi”：中间普氏菌(p.intermedia)；“an”：内氏放线菌(a.naeslundii)；“av”：粘性放线菌(a.viscosus)；s.gord.：戈氏链球菌(s.gordonii)；s.sal.：唾液链球菌(s.salivarius)；s.sang.：血链球菌(s.sanguinis)；vp：小韦荣球菌(v.parvula)；nadg：n-乙酰基-d-葡糖胺。
[0156]
如表2中详述，当用浓度为1％
(w/v)
的底物冲洗生物膜时，有益或共生物种、牙周病原体和致龋病原体的绝对数量与对照相比通常仅轻微受到影响(变化～0-0.6log(geq/ml)，没有达到统计学显著性，仅在口腔链球菌(s.oralis)的情况下，对于d-(+)-棉子糖，显著降低～0.9log(geq/ml)，具有有益/共生物种的比例更高和牙周病原体的比例更低的趋势，但与对照条件相比无显著性差异。
[0157]
单独的试验提供了用对照或特别的益生元糖处理后生物膜中有益/共生细菌、牙周病原体和致龋病原体的比例的确证结果。如表3中所示，致龋病原体的比例通常不变，除了在nadg条件下的那些，其导致与对照(0.16
±
0.06％)相比显著更高比例的致龋物种(0.66
±
0.27％)。这在表3中详述：
[0158]
表3：
[0159]
％(geq/ml)有益/共生物种牙周病原体致龋病原体对照59.22(+/-1.17)40.63(+/-1.13)0.16(+/-0.06)nadg60.07(+/-8.25)39.27(+/-7.98)0.66(+/-0.27*)d-乳糖64.14(+/-9.81)35.65(+/-9.88)0.21(+/-0.08)d-海藻糖73.55(+/-2.84)26.23(+/-2.88)0.21(+/-0.05)d-棉子糖64.27(+/-1.84)35.46(+/-1.82)0.27+/-0.09)
[0160]
实施例2-底物对多物种生物膜有机酸平衡的作用
[0161]
使用761compact离子色谱仪(metrhohm，switzerland)与metrosep有机酸保护柱/4.6保护柱测量多物种生物膜的过滤灭菌的上清液中有机酸的水平。分析来自底物处理的多物种生物膜的上清液，以更深入地了解底物对有机酸消耗/产生的影响。下表4表明，对于1m的底物浓度，与对照条件(消耗125
±
0mg/l)相比，在α-d-乳糖(3791
±
169mg/l)、d-(+)-海藻糖(4187
±
200mg/l)和d-(+)-棉子糖(971
±
43mg/l)的情况下，乳酸盐产生显著增加。与对照条件相比，α-d-乳糖和d-(+)-海藻糖的甲酸盐产量显著降低(84
±
9mg/l和75
±
8mg/l对比384
±
19mg/l)。与对照条件(3779
±
305mg/l)相比，α-d-乳糖(881
±
73mg/l)、d-(+)-海藻糖(1021
±
73mg/l)和d-(+)-棉子糖(2640
±
154mg/l)均导致乙酸盐产生显著更低。与对照条件(2094
±
132mg/l丙酸盐和1870
±
93mg/l丁酸盐)相比，nadg、α-d乳糖、d-(+)-海藻糖和d-(+)-棉子糖均导致丙酸盐(分别为2750
±
40mg/l、1306
±
175mg/l、1577
±
46mg/l和4178
±
105mg/l)和丁酸盐(分别为1255
±
51mg/l、0
±
0mg/l、0
±
0mg/l和154
±
26mg/l)的产生显著不同。
[0162]
如表4中所示，与对照相比，用1％
(w/v)
浓度的底物冲洗不会导致有机酸产生/消耗的显著差异：
[0163]
表4
[0164][0165][0166]
实施例3-底物对多物种生物膜毒力基因表达的作用
[0167]
通过分析33个基因的相对表达来评价底物处理的多物种生物膜的毒力，所述33个基因被认为与某种形式的毒力相关并且来自4种牙周病原体。
[0168]
如果其值上调超过1.5倍或下调超过2倍，则相对于对照生物膜，底物处理的生物
膜中显著不同的基因表达被认为是生物学相关的。仅考虑这些结果。
[0169]
通过sybr rt-qpcr分析细菌毒力基因的表达，并且对细菌管家基因表达进行校准。在用1m浓度的底物冲洗的多物种生物膜中，对于大多数底物，伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)和牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)毒力基因表达相对于对照条件显著下调。这些作用如表6a和6b中所示：
[0170]
表6a-用潜在益生元底物重复冲洗多物种生物膜对来自伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)的毒力基因表达的作用(与对照相比具有统计学显著差异的值用星号
‘
*’标记(p《0.05))：
[0171]
如通过sybr rt-qpcr**测量的毒力基因表达的倍数变化
[0172][0173][0174]
**结果列出为相对于对照条件的倍数变化(2
^-δδct
方法)，将对照的值校准为“1”。
[0175]
表6b-用潜在益生元底物重复冲洗多物种生物膜对来自牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)的毒力基因表达的作用(与对照相比具有统计学显著差异的值用星号
‘
*’标记(p《0.05))：
[0176]
如通过sybr rt-qpcr测量的毒力基因表达的倍数变化
[0177] nadg 1md-乳糖1md-海藻糖1md-棉子糖1mkgp0.07(0.04-0.13)*《lod《lod《lodfima0.79(0.44-1.39)0.06(0.00-1.08)*0.13(0.02-0.96)*0.03(0.00-0.16)*partc0.19(0.13-0.28)*0.03(0.01-0.17)*0.03(0.00-0.49)*0.02(0.00-0.12)*rgpa0.39(0.18-0.84)0.01(0.00-4.60)*0.00(0.00-0.02)*0.01(0.00-0.10)*
ꢀꢀꢀꢀꢀ
基因nadg 1％(w/v)d-乳糖1％(w/v)d-海藻糖1％(w/v)d-棉子糖1％(w/v)kgp1.81(0.44-7.50)1.95(0.45-8.59)3.24(1.63-6.44)*1.77(0.74-4.21)fima1.15(0.32-4.06)1.48(0.27-8.02)1.58(0.86-2.90)1.47(0.92-2.34)partc0.36(0.08-1.68)*0.47(0.07-3.04)0.71(0.37-1.35)0.54(0.26-1.12)rgpa1.31(1.03-1.66)1.49(0.70-3.20)1.49(0.69-3.22)1.42(1.12-1.80)
[0178]
注意，对于表6a和6b，毒力基因表达的倍数变化通过2
^-δδct
方法相对于对照条件测定，并且显示为2
^-δδct
值的几何平均值(c.i.)(n＝3)。将所有底物以1m(上部)或1％(w/v)(下部)的浓度溶于pbs。0和1之间的数值表示相对下调，数值》1表示相对上调。相对于对照(pbs)的倍数变化《0.5(大于2-倍下调)或》1.5(大于1.5-倍上调)的统计学显著差异被认为是生物学相关的，并且用
‘
*’标记(p《0.05)。nadg：n-乙酰基-d-葡糖胺；c.i.：95％置信区间。
[0179]
在伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)的情况下，这些下调的范围为2-倍至100-倍(nadg)、2.4-倍至100-倍(α-d-乳糖)、2.5-倍至100-倍(d-(+)-海藻糖)和5.9-倍至100-倍(d-(+)-棉子糖)。值得注意的是，pga的表达显著上调(nadg为11.6-倍，α-d-乳糖为4.3-倍，d-(+)-海藻糖为18.2-倍，d-(+)-棉子糖为7.3-倍)。对于牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)，下调范围为2.6-倍至14-倍(nadg)、17-倍至100-倍(α-d-乳糖)、7.7-倍至不可检测(d-(+)-海藻糖)和33-倍至100-倍(d-(+)-棉子糖)。
[0180]
相反，在1m浓度下，相对于表6c中的对照，具核梭杆菌(f.nucleatum)毒力基因表达通常被所有底物显著上调(2.5-至250-倍)。
[0181]
表6c如通过sybr rt-qpcr**测量的毒力基因表达的倍数变化
[0182][0183]
**结果以相对于对照条件的倍数变化(2
^-δδct
方法)列出，将对照的值校准为“1”。
[0184]
注意，对于表6c，毒力基因表达的倍数变化通过2
^-δδct
方法相对于对照条件测定，并且显示为2
^-δδct
值的几何平均值(c.i.)(n＝3)。将所有底物以1m(上部)或1％(w/v)(下部)的浓度溶于pbs。0和1之间的数值表示相对下调，数值》1表示相对上调。相对于对照(pbs)的倍数变化《0.5(大于2-倍的下调)或》1.5(大于1.5倍的上调)的统计学显著差异被认为是生物学相关的，并且以粗体显示并且用
‘
*’标记(p《0.05)。nadg：n-乙酰基-d-葡糖胺；c.i.：95％置信区间。
[0185]
然而，由1m的nadg诱导的上调更有限，并且仅对编码abc转运蛋白通透酶和氯高铁血红素受体的2种基因是显著的。
[0186]
对于中间普氏菌(p.intermedia)，底物对毒力基因表达的影响更多样化，并且结果显示在表6d中：
[0187]
表6d：如通过sybr rt-qpcr**测量的毒力基因表达的倍数变化
[0188]
基因nadg 1md-乳糖1md-海藻糖1md-棉子糖1m
adpc2.65(1.25-5.62)*0.30(0.23-0.39)*1.45(0.76-2.77)1.02(0.40-2.60)clpb2.03(0.94-4.41)0.38(0.08-1.75)*1.90(0.77-4.68)2.21(1.53-3.21)dnak2.34(1.23-4.43)*0.34(0.28-0.42)*8.82(6.83-11.38)*10.07(6.81-14.89)*dnaj0.64(0.35-1.16)0.25(0.05-1.25)*1.81(1.21-2.71)1.76(0.92-3.37)ecf20.32(4.81-85.88)*1.72(0.56-5.25)6.97(1.65-29.40)*6.74(1.96-23.20)*groes1.86(1.38-2.50)0.29(0.09-0.91)*11.52(2.46-53.90)*10.59(4.96-22.60)*htpg3.40(2.27-5.08)*0.19(0.12-0.31)*0.67(0.43-1.03)1.90(0.99-3.67)*kpsd1.72(0.62-4.72)0.62(0.21-1.87)0.59(0.47-0.75)1.78(0.71-4.45)inpa4.52(4.14-4.94)*0.47(0.27-0.82)*0.81(0.41-1.63)1.39(0.67-2.90)phg0.57(0.38-0.85)*0.12(0.08-0.18)*0.20(0.14-0.29)*0.33(0.21-0.50)*
ꢀꢀꢀꢀꢀ
基因nadg 1md-乳糖1md-海藻糖1md-棉子糖1madpc0.67(0.64-0.69)0.41(0.30-0.55)0.64(0.29-1.4)0.85(0.23-3.13)clpb1.06(0.58-1.96)0.85(0.23-3.13)1.30(0.44-3.83)1.13(0.86-1.48)dnak0.77(0.34-1.77)1.16(0.55-2.44)0.78(0.44-1.36)1.76(0.61-5.06)dnaj0.70(0.50-0.99)0.29(0.18-0.47)*0.62(0.08-4.67)1.56(0.59-4.12)ecf0.48(0.11-2.02)0.26(0.12-0.58)*0.69(0.53-0.91)0.96(0.56-1.64)groes0.75(0.49-1.14)0.91(0.41-2.03)1.22(0.61-2.45)0.98(0.24-4.05)htpg0.46(0.22-0.94)*0.40(0.15-1.07)*0.69(0.42-1.12)0.67(0.43-1.04)kpsd0.78(0.37-1.62)0.72(0.39-1.35)1.26(0.52-3.08)0.90(0.58-1.40)inpa0.53(0.24-1.17)*0.52(0.41-0.66)*0.56(0.31-1.01)*0.98(0.64-1.52)phg0.69(0.47-1.00)0.39(0.19-0.77)*0.86(0.82-0.89)0.73(0.33-1.63)
[0189]
**结果以相对于对照条件的倍数变化(2
^-δδct
方法)列出，将对照的值校准为“1”。
[0190]
注意，对于表6d，毒力基因表达的倍数变化相对于对照条件通过2
^-δδct
方法测定，并且显示为2
^-δδct
值的几何平均值(c.i.)(n＝3)。将所有底物以1m(上部)或1％(w/v)(下部)的浓度溶于pbs。0和1之间的数值表示相对下调，数值》1表示相对上调。相对于对照(pbs)的倍数变化《0.5(大于2-倍的下调)或》1.5(大于1.5倍的上调)的统计学显著差异被认为是生物学相关的，并且以粗体显示并且用
‘
*’标记(p《0.05)。nadg：n-乙酰基-d-葡糖胺；c.i.：95％置信区间。
[0191]
在表6d中，底物对毒力基因表达的影响更多样化。例如，α-d-乳糖显著下调多种毒力基因的表达(约2.1-至8.3-倍)，相反，nadg(约2.3-至20.3-倍上调)，d-(+)-海藻糖(7-至11.5-倍上调和5-倍下调)和d-(+)-棉子糖(1.9-至10.6-倍上调和3-倍下调)显著上调或下调它们。
[0192]
在用浓度为1％
(w/v)
的底物冲洗的多物种生物膜中，通常存在显著降低的伴放线放线杆菌(a.actinomycetemcomitans)毒力基因表达(2.3-至25-倍)，如上表6a中所示。仅对于nadg条件，一个基因(orf859)的表达显著上调(2-倍)。浓度为1％
(w/v)
的底物显然对牙龈卟啉单胞菌(p.gingivalis)毒力基因表达具有有限的影响，仅d-(+)-海藻糖和nadg分别对kgp(上调约3.2-倍)和partc(下调约2.8-倍)表达具有显著影响，如上表6b中所示。对于具核梭杆菌(f.nucleatum)，并且与对于1m的底物浓度获得的结果相反，对于大多数底物，毒力基因表达显著降低(约2-至10-倍)，如上表6c中所示。对于中间普氏菌(p.intermedia)，d-(+)-海藻糖和d-(+)-棉子糖仅对毒力基因表达具有有限的影响，而nadg和α-d-乳糖通常
显著下调毒力基因表达(约2.1-至3.8-倍)，如上表6d中所示。
[0193]
实施例4-底物对多物种生物膜炎性潜力的作用
[0194]
使永生化人口腔角质形成细胞(hok-18a)的培养物生长。通过分析暴露于底物处理的生物膜的人口腔角质形成细胞(hok)中五种炎性介体基因的表达来评估底物处理的多物种生物膜的相对炎性潜力，如果它们的值上调超过1.5-倍或下调超过2-倍，则相对于暴露于对照生物膜的hok，暴露于底物处理的生物膜的hok中的基因表达的显著差异被认为是生物学相关的。仅考虑这些结果。还测定了细胞上清液中的il-8水平。rna转化为cdna，并且如上文关于细胞管家基因β-肌动蛋白所述测定炎性介体基因的相对表达。
[0195]
在暴露于底物处理的(底物浓度为1m)多物种生物膜的hok中，如通过sybr rt-qpcr所测量的，炎性介体基因表达大部分降低，其结果在表7中详述：
[0196]
表7-用潜在益生元底物重复冲洗对多物种生物膜对人口腔角质形成细胞的炎性潜力的作用。
[0197]
基因nadg 1md-乳糖1md-海藻糖1md-棉子糖1mil-1β0.75(0.55-1.02)0.5(0.38-0.65)*0.79(0.45-1.38)0.8(0.44-1.46)il-60.57(0.46-0.71)0.33(0.12-0.88)*1.27(0.11-14.86)0.54(0.17-1.72)il-80.14(0.06-0.36)*0.03(0.02-0.05)*0.22(0.15-0.34)*0.10(0.04-0.29)*mmp-81.28(0.79-2.08)0.78(0.38-1.61)0.81(0.68-0.95)0.85(0.61-1.19)tnf-α0.89(0.59-1.34)0.39(0.23-0.66)*0.66(0.41-1.06)*0.66(0.56-0.78)*
ꢀꢀꢀꢀꢀ
基因nadg 1％d-乳糖1％d-海藻糖1％d-棉子糖1％il-1β0.71(0.38-1.33)*0.89(0.54-1.45)1.06(0.55-2.06)0.93(0.56-1.55)il-60.73(0.58-0.93)*0.74(0.56-0.97)*1.00(0.46-2.17)0.70(0.44-1.13)*il-81.00(0.78-1.27)1.13(0.71-1.80)1.32(0.89-1.94)*1.08(0.73-1.59)mmp-80.52(0.17-1.6)*0.70(0.62-0.79)0.66(0.46-0.93)0.71(0.38-1.35)tnf-α0.71(0.28-1.35)*0.81(0.50-1.33)0.94(0.54-1.64)0.77(0.55-1.08)
[0198]
相对于对照，通过2
^-δδct
方法测定暴露于底物-处理的多物种生物膜的人口腔角质形成细胞(hok-18a)的炎性介体的倍数变化，并且表示为2
^-δδct
值的几何平均值(c.i.)(n＝3)。将所有底物以1m(上部)或1％(w/v)(下部)的浓度溶于pbs。0至1的数值表示相对下调，数值》1表示相对上调。相对于对照(pbs)的倍数变化《0.5(大于2-倍的下调)或》1.5(大于1.5-倍的上调)的统计学显著差异被认为是生物学相关的，并且用粗体表示并且用
‘
*’标记(p《0.05)。
[0199]
对于所有底物，il-8基因表达(pg/ml)显著下调，范围为4.5-倍至33.3-倍。tnf-α基因表达在α-d-乳糖条件下显著下调(2.5-倍)，并且il-1β基因表达(2-倍)和il-6基因表达(3-倍)也是如此。对于所有底物条件，绝对il-8水平(pg/ml)显著降低，范围为8.4-倍至不可检测。该数据显示在表8中：
[0200]
表8-用潜在益生元底物重复冲洗对多物种生物膜炎性潜力的作用
[0201][0202]
如表7中所示，在暴露于底物处理的(底物浓度为1％
(w/v)
)多物种生物膜的hok中，大多数炎性介体基因的相对表达通常不受影响。这也与上述il-8基因表达的观察结果一致，其中绝对il-8水平未受到显著影响。
[0203]
实施例5-包含糖益生元的组合物
[0204]
包含糖益生元，例如n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖的牙膏可能使用以下成分制备：
[0205][0206]
[0207]
包含糖益生元的另一种牙膏可能使用以下成分制备：
[0208]

技术特征：
1.口腔护理组合物，其包含有效量的至少一种糖益生元，所述糖益生元选自n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物，其量有效促进有益内源性细菌在口腔中的生长并且抑制致病性口腔细菌。2.权利要求1的口腔护理组合物，其中糖益生元为n-乙酰基-d-葡糖胺。3.权利要求1的口腔护理组合物，其中糖益生元为α-d-乳糖。4.权利要求1的口腔护理组合物，其中糖益生元为d-(+)-海藻糖。5.权利要求1的口腔护理组合物，其中糖益生元为d-(+)-棉子糖。6.上述权利要求任一项的口腔护理组合物，其中糖益生元的量为0.1％-5％重量的组合物。7.上述权利要求任一项的口腔护理组合物，其中糖益生元的量为0.5μmol/l-10mmol/l。8.上述权利要求任一项的口腔护理组合物，其中组合物促进一种或多种有益内源性细菌物种在口腔中的生长或表达，其中所述物种是选自以下的一种或多种：内氏放线菌；粘性放线菌；戈氏链球菌；缓症链球菌；口腔链球菌；唾液链球菌；血链球菌；小韦荣球菌。9.上述权利要求任一项的口腔护理组合物，其中组合物负面影响一种或多种病原性细菌物种在口腔中的生长或表达，其中所述物种是选自以下的一种或多种：伴放线放线杆菌；具核梭杆菌；牙龈卟啉单胞菌；中间普氏菌；变形链球菌；远缘链球菌。10.权利要求9的口腔护理组合物，其中组合物负面影响选自伴放线放线杆菌；具核梭杆菌；牙龈卟啉单胞菌；中间普氏菌的一种或多种的生长。11.上述权利要求任一项的口腔护理组合物，其中组合物还包含至少一种对口腔健康具有有益作用的细菌物种。12.权利要求11的口腔护理组合物，其中对口腔健康具有有益作用的细菌物种选自内氏放线菌；粘性放线菌；戈氏链球菌：缓症链球菌；口腔链球菌；唾液链球菌；血链球菌；小韦荣球菌及其组合。13.上述权利要求任一项的口腔护理组合物，其中组合物为选自以下的形式：漱口水、牙膏、牙凝胶、牙粉、非磨料凝胶、摩丝、泡沫、口腔喷雾剂、锭剂、口腔片剂和牙科用具。14.上述权利要求任一项的口腔护理组合物，用于相对于致病性口腔细菌的生长、代谢活性或定殖，在口腔中选择性地促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生长、代谢活性或定殖。15.上述权利要求任一项的口腔护理组合物，其中益生元底物降低选自伴放线放线杆菌中的以下基因中的一种或多种的毒力基因表达：flp、aae、apah、cdtb、emaa、ltxa、omp100、omp29、orf859、pga、vapa和vppa。16.上述权利要求任一项的口腔护理组合物，其中益生元底物降低选自牙龈卟啉单胞菌中的以下基因中的一种或多种的毒力基因表达：fim a、kgp、partc和rgpa。17.上述权利要求任一项的口腔护理组合物，其中益生元底物降低选自中间普氏菌中的以下基因中的一种或多种的毒力基因表达：adpc、clpb、dnak、dnaj、ecf、groes、htpg、kpsd、inpa和phg。18.上述权利要求任一项的口腔护理组合物，其中益生元底物降低选自具核梭杆菌中的以下基因中的一种或多种的毒力基因表达：丁酸-乙酰乙酸coa-转移酶、abc转运蛋白通
透酶、转座酶、溶血素、氯高铁血红素受体、ompa和ef-g。19.上述权利要求任一项的口腔护理组合物，其中组合物的量足以降低口腔角质形成细胞中一种或多种炎性生物标志物的基因表达。20.权利要求19的组合物，其中生物标志物选自：il-1β、il-6、mmp-8、tnf-α、il-8及其组合。21.相对于致病性口腔细菌的生长、代谢活性或定殖，在口腔中选择性促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生长、代谢活性或定殖的方法，该方法包括向口腔施用口腔护理组合物，所述口腔护理组合物包含有效量的至少一种糖益生元，所述糖益生元选自：n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物。22.相对于致病性口腔细菌的生物膜形成，在口腔中选择性促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生物膜形成的方法，该方法包括向口腔施用口腔护理组合物，所述口腔护理组合物包含有效量的至少一种糖益生元，所述糖益生元选自：n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物。23.在需要的个体中预防或减轻齿龈炎、牙周炎、种植体周围炎、种植体周围粘膜炎、坏死性齿龈炎、坏死性牙周炎和龋齿中的一种或多种的方法，该方法通过相对于致病性口腔细菌的生长、代谢活性或定殖，在个体的口腔中选择性地促进对口腔健康具有有益作用的细菌的生长、代谢活性或定殖来进行，该方法包括向口腔施用口腔护理组合物，所述口腔护理组合物包含有效量的至少一种糖益生元，所述糖益生元选自：n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物。24.权利要求21-23任一项的方法，包括使口腔与组合物接触，包括向口腔施用口腔护理组合物，所述口腔护理组合物包含有效量的至少一种糖益生元，定期历经足够长的时间期限以增强有益细菌在口腔中的生长，其中糖益生元选自：n-乙酰基-d-葡糖胺、α-d-乳糖、d-(+)-海藻糖或d-(+)-棉子糖及其混合物。25.权利要求21-24任一项的方法，其中口腔护理组合物中糖益生元的量为0.1％-5％重量的组合物。26.权利要求21-25任一项的方法，其中组合物促进一种或多种有益内源性细菌物种在口腔中的生长，其中所述物种是选自以下的一种或多种：内氏放线菌；粘性放线菌；戈氏链球菌：缓症链球菌；口腔链球菌；唾液链球菌；血链球菌；和小韦荣球菌。27.权利要求21-26任一项的方法，其中组合物负面影响一种或多种致病性细菌物种在口腔中的生长，其中所述物种是选自以下的一种或多种：伴放线放线杆菌；具核梭杆菌；牙龈卟啉单胞菌；中间普氏菌；远缘链球菌。28.权利要求21-27任一项的方法，其中上述权利要求任一项的口腔护理组合物，其中施用组合物以降低口腔角质形成细胞中一种或多种炎性生物标志物的基因表达。29.权利要求25的方法，其中生物标志物选自：il-1β、il-6、il-8、mmp-8、tnf-α及其组合。30.权利要求21-29任一项的方法，其中组合物还包含至少一种对口腔健康具有有益作用的细菌物种。31.权利要求21-30任一项的方法，其中组合物选自：漱口水、牙膏、牙凝胶、牙粉、非磨料凝胶、摩丝、泡沫、口腔喷雾剂、锭剂、口服片剂或牙科用具。
32.筛选促进有益口腔细菌生长的化合物的方法，其中筛选步骤包括：(i)确定第一化合物促进有益口腔细菌生长，同时对致病性口腔细菌生长产生负面作用的能力，和(ii)基于其促进有益口腔细菌生长和抑制致病性口腔细菌生长的能力，筛选用于进一步测试的测试化合物。33.权利要求32的方法，其中有益口腔细菌是选自以下的一种或多种物种：内氏放线菌；粘性放线菌；戈氏链球菌：缓症链球菌；口腔链球菌；唾液链球菌；血链球菌；和小韦荣球菌；并且致病性口腔细菌是选自以下的一种或多种物种：伴放线放线杆菌；具核梭杆菌；牙龈卟啉单胞菌；中间普氏菌；和远缘链球菌。34.权利要求32或33的方法，其中该方法还包括检测第一组合物降低口腔角质形成细胞中一种或多种抗炎生物标志物的基因表达的能力。

技术总结
本公开涉及增强有益口腔细菌和减少有害口腔细菌的方法，该方法包括施用口腔护理组合物，所述口腔护理组合物包含糖益生元，例如选自溶血素、N-乙酰基-D-葡糖胺、α-D-乳糖、D-(+)-海藻糖或D-(+)-棉子糖及其混合物；以及用于此类方法的口腔护理组合物。本公开还涉及使用益生元口腔护理组合物的方法、筛选方法和制备方法。备方法。


技术研发人员：W
受保护的技术使用者：鲁汶大学 国立比利时根特大学
技术研发日：2021.09.30
技术公布日：2023/7/22