一种预防高热惊厥发作的药物组合物

1.本发明涉及一种预防高热惊厥发作的药物组合物。


背景技术：

2.高热惊厥（fs）是指体温大于或等于38℃且无中枢神经系统（central nervous system，cns）感染及其他癫痫病因的惊厥。高热惊厥是婴幼儿时期最常见的惊厥形式，多见于6个月至5岁年龄段的儿童，其中12至18个月的发病率最高。
3.高热惊厥的发作可分为单纯性高热惊厥和复杂性高热惊厥。单纯性高热惊厥通常是属于全身阵挛性发作类型，在神经运动正常的儿童中惊厥持续时间小于或等于15分钟且24小时内只发生一次。复杂性高热惊厥具有局灶性的、持久性的特点，惊厥持续时间大于15分钟且在24小时内复发。复杂性高热惊厥的一个亚型是高热惊厥持续状态（又称为长期高热惊厥），惊厥持续时间大于30分钟或小于30分钟的反复发作且在发作期间意识未能完全恢复。大多数情况下，单纯性高热惊厥是良性的，但长时间高热惊厥可持续增强海马兴奋性回路，并通过增强神经元回路的高兴奋性促进婴儿颞叶癫痫的发生。
4.mewasingh 等对成人颞叶癫痫患者的回顾性分析发现，患者在儿童早期高热惊厥持续状态的发生率高达30%~50%。此外，复杂性高热惊厥对儿童及实验动物模型的认知产生长期的不良影响。
5.目前临床上尚无有效的预防高热惊厥发作的药物，常用抗癫痫药物进行预防，常见的抗癫痫药物主要有苯巴比妥、地西泮和丙戊酸钠等。尽管抗癫痫药物疗效明显，但这些药物均会产生一定程度的副作用，例如使用地西泮后可出现呼吸抑制、头晕嗜睡、低血压以及耐受和依赖等不良反应。
6.雌马酚化学名为4’,7-异黄酮二醇，其为一类异黄酮，是大豆异黄酮在人体肠道中的最终代谢产物，属于异黄酮类雌激素，是一种多酚类化合物，常用于抗氧化作用。
7.酸枣仁皂苷b（jub）是酸枣仁皂苷类主要的活性成分，是酸枣仁中含量仅次于酸枣仁皂苷a（jua）的活性成分，并且jub是jua肠道菌群代谢的重要产物之一。但其是否具有预防高热惊厥发作预防高热惊厥发作作用未见相关报道。


技术实现要素：

8.本发明的目的是提供一种可有效预防和治疗高热惊厥发作的药物组合物。
9.本发明采用如下技术方案：一种预防高热惊厥发作预防高热惊厥发作的药物组合物，其包括雌马酚和酸枣仁皂苷b。
10.雌马酚（equol）化学名为4’,7-异黄酮二醇，其为一类异黄酮，是大豆异黄酮在人体肠道中的最终代谢产物，属于异黄酮类雌激素，是一种多酚类化合物，常用于抗氧化作用。
11.酸枣仁皂苷b（jujuboside b ，jub）是酸枣仁皂苷类主要的活性成分，是酸枣仁中
含量仅次于酸枣仁皂苷a（jua）的活性成分，并且jub是jua肠道菌群代谢的重要产物之一。
12.进一步的，所述雌马酚和酸枣仁皂苷b的质量比为1∶1~1∶5。
13.作为优选的，所述雌马酚和酸枣仁皂苷b的质量比为1∶1。
14.进一步的，所述预防高热惊厥发作预防高热惊厥发作的药物组合物通过如下方法制备：（1）雌马酚溶解于1% 无水乙醇 + 99%玉米油；（2）酸枣仁皂苷b溶于生理盐水；（3）按照雌马酚和酸枣仁皂苷b的质量比，将二者进行混合。
15.一种利用上述药物组合物制备的片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、微囊片剂、混悬剂、滴丸、口服液体、注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂。
16.本发明的有益效果在于：本发明通过行为学功能评价，确定了雌马酚和酸枣仁皂苷b预处理明显抑制了高热小鼠的惊厥发作，特别是在雌马酚和酸枣仁皂苷b联合作用下，可降低高热惊厥的发作率以及发作的严重程度，延长发作潜伏期，并减少发作次数，并且药物服用无毒害作用，安全性高，适应性强，成本可控，推广价值高。
附图说明
17.图1为不同药物对高热惊厥各级发作率的影响。
18.图2为不同药物对高热惊厥各级发作潜伏期的影响。
19.（mean
ꢀ±ꢀ
sem，**p《0.01，***p《0.001，****p《0.0001）图3为不同药物对高热惊厥各级发作次数的影响。
20.（mean
ꢀ±ꢀ
sem，*p《0.05，***p《0.001，****p《0.0001）
具体实施方式
21.下面结合实施例对本发明做进一步的说明。本发明保护范围不限于实施例，本领域技术人员在权利要求限定的范围内做出任何改动也属于本发明保护的范围。
22.一、实验药品本发明涉及的相关药品信息及配制方法如表1所示。
23.表1 实验药品信息
。
24.二、实验试剂脂多糖（lipopolysaccharides，lps），美国sigma-aldrich公司（产品编号：l3129-100mg），溶解于生理盐水。
25.地西泮（diazepam，dzp），海南制药厂有限公司制药二厂（国药准字：h41025470），溶解于生理盐水。
26.无水乙醇（ethanol），上海泰坦科技股份有限公司（产品编号：g73537x）。
27.玉米油（corn oil），试剂级，上海阿拉丁生化科技股份有限公司（产品编号：c116023-100ml）。
28.生理盐水（normal saline，ns），石家庄四药有限公司（国药准字：h13023201）。
29.三、实验动物c57bl/6j，14日龄，5.5~6.5g，共52只，河北伊维沃生物科技有限公司（实验动物许可证号：scxk（冀）2020-002）。
30.四、实验分组按体重大小随机分组，溶剂对照组12只小鼠，其余给药组每组10只小鼠，分为：1、vehicle组（1% ethanol + corn oil 6只，ns 6只），与药物注射体积相同。
31.2、dzp组，5mg/kg。
32.3、(
±
)-equol组，15mg/kg。
33.4、jub组，15mg/kg。
34.5、jub + (
±
)-equol组，两种药物均为15mg/kg。
35.五、实验方法小鼠腹腔注射（i.p.）lps（10mg/kg），1h后i.p.药物，再放置1h后放入恒温烘箱制作高热惊厥模型，在箱内固定位置放置一个1l烧杯，烧杯内部温度恒定为42℃~43℃。记录各组小鼠20min内高热惊厥各级发作率、各级发作潜伏期和各级发作次数，以及造模后24h内死亡率。
36.按改良后的racine癫痫发作量表分级：0级：无任何反应；
ⅰ
级：利须、节奏性咀嚼和面部阵挛；ⅱ级：ⅰ级基础上出现节律性点头；ⅲ级：出现后肢直立位攀爬和跳跃行为，伴体位不稳跌倒；ⅳ级：ⅲ级基础上单侧肢体阵挛、抽搐，或以一侧肢体为中心轴原地转圈；
ⅴ
级：全面性强直、双侧肢体阵挛发作，失去体位控制，意识丧失。
37.六、数据处理与统计分析所有数据均以mean
ꢀ±ꢀ
sem表示，采用prism8软件进行统计分析。两组间比较采用t检验。统计结果以*p《0.05为有显著性差异，**p《0.01，为有极显著性差异。
38.对于两组以上数据符合正态分布的数据，采用单因素方差分析和post hoc turkey’s test检验，对于多组别不符合正态分布的数据采用卡方检验。
39.七、实验结果1、药物对高热惊厥各级发作率的影响图1给出了不同药物对高热惊厥各级发作率的统计结果。
40.结果显示：ⅰ~ⅲ级发作率各组均为100% （图1a）。
[0041]ⅳ级发作率vehicle组、dzp组和(
±
)-equol组均为100%，jub组为80%，jub + (
±
)-equol组为50%（图1b）。
[0042]
ⅴ
级发作率vehicle组为92%，dzp组为70%，jub组为50%，(
±
)-equol组为30%，jub + (
±
)-equol组为0% （图1c）。
[0043]
可见，雌马酚和酸枣仁皂苷b的联合作用可以有效的降低高热小鼠的严重惊厥发作等级。
[0044]
2、药物对高热惊厥各级发作潜伏期的影响图2给出了不同药物对高热惊厥各级发作潜伏期的统计结果。
[0045]
结果显示：ⅰ级发作潜伏期dzp组（731.3
ꢀ±ꢀ
39.05 s）和jub +(
±
)-equol组（649.6
ꢀ±ꢀ
54.30 s）与vehicle组（188.6
ꢀ±ꢀ
18.41 s）相比均明显延长，均有显著性差异（p《0.0001） （图2a）。
[0046]ⅱ级发作潜伏期dzp组（781.1
ꢀ±ꢀ
45.65 s）、(
±
)-equol组（475.9
ꢀ±ꢀ
26.24 s）和jub + (
±
)-equol组（764.9
ꢀ±ꢀ
57.00 s）与vehicle组（321.3
ꢀ±ꢀ
17.34 s）相比均明显延长，(
±
)-equol组有显著性差异（p《0.001），其中dzp组和jub + (
±
)-equol组有显著性差异更明显（p《0.0001）（图2b）。
[0047]ⅲ级发作潜伏期dzp组（742.4
ꢀ±ꢀ
41.41 s）和jub + (
±
)-equol组（693.5
ꢀ±ꢀ
50.92 s）与vehicle组（393.3
ꢀ±ꢀ
32.39 s）相比均明显延长，均有显著性差异（p《0.001，p《0.0001）（图2c）。
[0048]ⅳ级发作潜伏期jub组（996.6
ꢀ±ꢀ
51.93 s）和jub + (
±
)-equol组（1087.0
ꢀ±ꢀ
51.60 s）与vehicle组（697.3
ꢀ±ꢀ
30.92 s）相比均明显延长，均有显著性差异（p《0.01，p《0.0001）（图2d）。
[0049]
ⅴ
级发作潜伏期仅jub + (
±
)-equol组与vehicle组（1064.0
ꢀ±ꢀ
24.34 s）相比有明显显著性差异（p《0.001），因jub + (
±
)-equol组无
ⅴ
级发作，所以该给药组的发作潜
伏期统一规定为1200 s（图2e）。
[0050]
可见，雌马酚和酸枣仁皂苷b的联合作用可以有效的延长高热小鼠发生惊厥的潜伏期。
[0051]
3、药物对高热惊厥各级发作次数的影响不同药物对高热惊厥各级发作次数的统计结果如图3所示。
[0052]
结果显示：ⅰ级发作次数jub + (
±
)-equol组（8.700
ꢀ±ꢀ
0.9315次）与vehicle组（15.25
ꢀ±ꢀ
0.4943次）相比减少，有显著性差异（p《0.001），dzp组发作次数明显减少（6.400
±ꢀ
0.8055次），显著性更明显（p《0.0001）（图3a）。
[0053]ⅱ级发作次数jub + (
±
)-equol组（8.200
ꢀ±ꢀ
1.6450次）与vehicle组（20.67
ꢀ±ꢀ
1.3670次）相比减少，有显著性差异（p《0.001），dzp组发作次数明显减少（5.400
±ꢀ
0.9092次），显著性更明显（p《0.0001）（图3b）。
[0054]ⅲ级发作次数各给药组与vehicle组相比均无显著性差异（图3c）。
[0055]ⅳ级发作次数dzp组（7.900
ꢀ±ꢀ
1.5380次）与vehicle组（15.75
ꢀ±ꢀ
0.7600次）相比减少，有显著性差异（p《0.05），jub组（3.300
ꢀ±ꢀ
0.7753次）和jub + (
±
)-equol组（1.300
ꢀ±ꢀ
0.5783次）发作次数明显减少，显著性更明显（p《0.0001）（图3d）。
[0056]
ⅴ
级发作次数(
±
)-equol组（0.6000
ꢀ±ꢀ
0.3399次）与vehicle组（1.750
ꢀ±ꢀ
0.2787次）相比减少，有显著性差异（p《0.05），jub + (
±
)-equol组无发作，为0次，显著性差异明显（p《0.001）（图3e）。
[0057]
可见，雌马酚和酸枣仁皂苷b的联合作用可以有效的抑制高热小鼠的惊厥发生率。
[0058]
八、实验结论通常实验性热性惊厥在不造成阵挛性或强直阵挛性惊厥发作的前提下（即无racine 4~5级发作），不引起幼鼠神经元变性或星形胶质细胞活化，不会导致脑内神经元死亡。然而，未成熟大脑经历严重程度较高的惊厥发作（racine 4~5级发作）并引发后续的癫痫持续状态（se）可造成的严重脑损伤，导致神经元死亡或丢失。所以，急性高热惊厥发作时，较低级别的发作对未成熟大脑并不构成实质性伤害，预防更高级别的惊厥发作更能有效保护大脑免受后续细胞层面的损伤。
[0059]
通过行为学功能评价，结果显示雌马酚和酸枣仁皂苷b预处理显著抑制高级别的高热小鼠的惊厥发作，且两药合用各的保护作用最为有效。

技术特征：
1.一种预防高热惊厥发作的药物组合物，其特征在于，其包括雌马酚和酸枣仁皂苷b。2.根据权利要求1所述的预防高热惊厥发作的药物组合物，其特征在于，所述雌马酚和酸枣仁皂苷b的质量比为1∶1~1∶5。3.根据权利要求1所述的预防高热惊厥发作的药物组合物，其特征在于，所述雌马酚和酸枣仁皂苷b的质量比为1∶1。4.根据权利要求1所述的预防高热惊厥发作的药物组合物，其特征在于，其通过如下方法制备：（1）雌马酚溶解于1% 无水乙醇 + 玉米油；（2）酸枣仁皂苷b溶于生理盐水；（3）按照雌马酚和酸枣仁皂苷b的质量比，将二者进行混合。5.一种利用权利要求1~4任一项所述的预防高热惊厥发作的药物组合物制备的片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、微囊片剂、混悬剂、滴丸、口服液体、注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型。

技术总结
本发明涉及一种预防高热惊厥发作的药物组合物，其包括雌马酚和酸枣仁皂苷B，其可有效降低高热惊厥的发作的严重程度、发作率、延长发作潜伏期并减少发作次数；本发明药物服用无毒害作用，安全性提高。安全性提高。安全性提高。


技术研发人员：张炜 陈思软 白晖 孔德志 秦霞 杨祖晓
受保护的技术使用者：河北医科大学
技术研发日：2023.04.03
技术公布日：2023/8/5